CN107356682A - 一种检测4-苄氧基苯亚甲基-4-氟苯胺中的4-苄氧基苯亚甲基苯胺的hplc方法 - Google Patents
一种检测4-苄氧基苯亚甲基-4-氟苯胺中的4-苄氧基苯亚甲基苯胺的hplc方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种检测4‑苄氧基苯亚甲基‑4‑氟苯胺中杂质4‑苄氧基苯亚甲基苯胺的HPLC方法。在该方法中采用苯基键合硅胶色谱柱；流动相由含有胺类物质的水溶液或者含有胺类物质的磷酸盐、醋酸盐或甲酸盐缓冲液和有机溶剂组成；检测波长为250～350nm。使用本发明的HPLC分析方法后，杂质4‑苄氧基苯亚甲基苯胺检测灵敏度明显提高，与主成份及其他杂质分离度很好，可有效地控制产品质量。
Description
技术领域
本发明涉及4-苄氧基苯亚甲基苯胺的HPLC分析方法。
背景技术
4-苄氧基苯亚甲基-4-氟苯胺是合成依替米贝及依折麦布等药物的原料，也是重要的医药中间体。4-苄氧基苯亚甲基-4-氟苯胺中如在合成过程中容易产生杂质4-苄氧基苯亚甲基苯胺(SCR-5014)，该杂质会富集带入原料药成品中，因此需要对其含量进行控制。4-苄氧基苯亚甲基-4-氟苯胺和4-苄氧基苯亚甲基苯胺的结构式分别如下式I和式II所示：
现有技术中尚无记载有关从4-苄氧基苯亚甲基-4-氟苯胺中检测杂质4-苄氧基苯亚甲基苯胺的具体分析方法，而选用普通C18色谱柱，杂质与主峰分离度差.总之一般的检测方法分离度差、响应低、耐用性差，而且在限度较小时难以检出。
发明内容
本发明的目的提供一种检测4-苄氧基苯亚甲基-4-氟苯胺中的杂质4-苄氧基苯亚甲基苯胺(SCR-5014)的HPLC方法。
本发明所述的HPLC分析方法，采用苯基键合硅胶色谱柱；流动相由含有胺类物质的水溶液或者含有胺类物质的磷酸盐、醋酸盐或甲酸盐缓冲液和有机溶剂组成；检测波长为250～350nm。
所述胺类物质的水溶液或者含有胺类物质的磷酸盐、醋酸盐或甲酸盐缓冲液的pH值为2.0～11.0，优选6.8。
其中每升所述胺类物质的水溶液或者含有胺类物质的磷酸盐、醋酸盐或甲酸盐缓冲液中含有2～7毫升的胺类物质，优选3～5毫升，更优选5毫升。
所述胺类物质的水溶液或者含有胺类物质的磷酸盐、醋酸盐或甲酸盐缓冲液和有机溶剂的体积比为1:1～1:6，优选为1.2:1.2～1:4，更优选为1:1.5或者1:4，优选洗脱过程中有机溶剂体积不变或增加。
所述有机溶剂选自乙腈、甲醇、乙醇中的一种或多种，所述有机溶剂可以含有胺类物质。
所述胺类物质选自二乙胺、三乙胺或氨水。
所述磷酸盐选自磷酸氢二钾、所述醋酸盐选自醋酸铵、所述甲酸盐选自甲酸铵。
所述含有胺类物质的水溶液配制如下：1000ml水中加入5ml三乙胺，磷酸调节pH；所述含有胺类物质的磷酸盐缓冲溶液配制如下：磷酸二氢钾1.36g，加水1000ml使溶解，加入三乙胺5ml，磷酸调节pH值；所述含有胺类物质的醋酸盐缓冲溶液配制如下：醋酸铵0.63g，加水1000ml使溶解，加入3ml三乙胺，醋酸调节pH值；所述含有胺类物质的甲酸盐缓冲溶液配制如下：甲酸胺0.63g，加水1000ml使溶解，加入5ml三乙胺，甲酸调节pH值。
所述方法中的柱温为15～60℃，流速为0.4～2.0ml/min。
所述方法的测试步骤如下：取4-苄氧基苯亚甲基-4-氟苯胺，采用乙腈溶解，配制成含4-苄氧基苯亚甲基-4-氟苯胺1～12mg/ml的溶液，作为供试品溶液；另取4-苄氧基苯亚甲基苯胺对照品，采用乙腈溶解，配成含4-苄氧基苯亚甲基苯胺0.2～1.2μg/ml的溶液，作为杂质对照品溶液；分别精密量取所述供试品溶液和对照溶液5～50μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。所述试步骤的溶解用的溶剂和稀释液没有特殊要求，本领域公知的4-苄氧基苯亚甲基-4-氟苯胺溶解的溶剂和稀释液均可，优选流动相、甲醇、乙醇、乙腈或水。
本发明的积极进步效果在于：通过该方法，可以延长杂质SCR-5014峰在色谱系统中的保留时间，使杂质SCR-5014与主成份峰更好的分离，还可以使得其他杂质不干扰本品中SCR-5014的检测；同时提高了杂质SCR-5014的检出灵敏度，使得0.001％的杂质都可以准确检出，提高了样品的检测灵敏度和耐用性，从而可以简便、快速、稳定的检测4-苄氧基苯亚甲基-4-氟苯胺中SCR-5014的杂质，以便有效地控制产品质量。
附图说明
图1：实施例1中对照品溶液SCR-5014的HPLC检测图谱
图2：实施例1中4-苄氧基苯亚甲基-4-氟苯胺的HPLC检测图谱
图3：实施例1中检测系统适用性图谱
图4：试验1中4-苄氧基苯亚甲基-4-氟苯胺的HPLC检测图谱
图5：试验2中4-苄氧基苯亚甲基-4-氟苯胺的HPLC检测图谱
图6：试验3中4-苄氧基苯亚甲基-4-氟苯胺的HPLC检测图谱
图7：试验4中4-苄氧基苯亚甲基-4-氟苯胺的HPLC检测图谱
图8：试验5中4-苄氧基苯亚甲基-4-氟苯胺的HPLC检测图谱
图9：试验6中4-苄氧基苯亚甲基-4-氟苯胺的HPLC检测图谱
具体实施方式
下面通过实施例来进一步说明本发明。应该正确理解的是，本发明的实施例仅仅用于说明本发明而给出，而不是对本发明的限制，所以，在本发明的方法前提下对本发明的简单改进均属本发明要求保护的范围。
以下实例中检测所用4-苄氧基苯亚甲基-4-氟苯胺由上海迈瑞尔化学技术有限公司提供，批号为：39737204。SCR-5014由济南森诺沃医药科技有限公司提供，批号为：20160314。
实施例1：
1)色谱条件：
仪器：Agilent1260HPLC
色谱柱：五氟苯基柱(4.6×100mm，2.6μm)
流动相A：磷酸盐缓冲液(称取磷酸二氢钾1.36g，加水1000ml使溶解，加入三乙胺5ml，磷酸调节pH6.8)
流动相B：乙腈：甲醇—1：1
流动相：流动相A-流动相B(40：60)
柱温：35℃
流速：1.0ml/min
检测波长：320nm
进样量：5ul
分析时间：记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍
溶剂：乙腈
2)样品配制：
取4-苄氧基苯亚甲基-4-氟苯胺适量，加溶剂制成每ml含4-苄氧基苯亚甲基-4-氟苯胺3.0mg的溶液，作为供试品溶液。
取SCR-5014对照品适量，加溶剂制成每ml含SCR-5014约0.6μg/ml的溶液，作为对照品溶液。
3)测定结果：系统适用性色谱图见图3，供试品检测色谱图见图1和图2。检测结果表明SCR-5014与主峰及其他杂质分离度很好。
实施例2：
1)色谱条件：
仪器：Agilent1260HPLC
色谱柱：五氟苯基柱(4.6×100mm，2.6μm)
流动相A：磷酸盐缓冲液(称取磷酸二氢钾1.36g，加水1000ml使溶解，加入三乙胺5ml，磷酸调节pH11.0)
流动相B：乙腈：甲醇—1：1
流动相：流动相A-流动相B(40：60)
柱温：35℃
流速：1.0ml/min
检测波长：320nm
进样量：5ul
分析时间：记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍
溶剂：乙腈
2)样品配制：
取4-苄氧基苯亚甲基-4-氟苯胺适量，加溶剂制成每ml含4-苄氧基苯亚甲基-4-氟苯胺3.0mg的溶液，作为供试品溶液。
取SCR-5014对照品适量，加溶剂制成每ml含SCR-5014约0.6μg/ml的溶液，作为对照品溶液。
3)测定结果：检测结果表明SCR-5014与主峰分离度很好，与其他杂质分离度较好。
实施例3：
1)色谱条件：
仪器：Agilent1260HPLC
色谱柱：五氟苯基柱(4.6×100mm，2.6μm)
流动相A：水(1000ml水中加入5ml三乙胺，磷酸调节pH约为2.0)
流动相B：乙腈：甲醇—1：1
流动相：流动相A-流动相B(20：80)
柱温：30℃
流速：1.0ml/min
检测波长：320nm
进样量：5ul
分析时间：记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍
溶剂：流动相B
2)样品配制：
取4-苄氧基苯亚甲基-4-氟苯胺适量，加溶剂制成每ml含4-苄氧基苯亚甲基-4-氟苯胺3.0mg的溶液，作为供试品溶液。
取SCR-5014对照品适量，加溶剂制成每ml含SCR-5014约0.6μg/ml的溶液，作为对照品溶液。
3)测定结果：检测结果表明SCR-5014与主峰分离度很好，与其他杂质分离度较好。
实施例4：
1)色谱条件：
仪器：Agilent1260HPLC
色谱柱：五氟苯基柱(4.6×100mm，2.6μm)
流动相A：甲酸盐缓冲液(称取甲酸胺0.63g，加水1000ml使溶解，加入5ml三乙胺，甲酸调节pH约为3.5)
流动相B：乙腈：甲醇—1：1
流动相：流动相A-流动相B(30：70)
柱温：30℃
流速：1.0ml/min
检测波长：315nm
进样量：5ul
分析时间：记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍
溶剂：流动相B
2)样品配制：
取4-苄氧基苯亚甲基-4-氟苯胺适量，加溶剂制成每ml含4-苄氧基苯亚甲基-4-氟苯胺3.0mg的溶液，作为供试品溶液。
取SCR-5014对照品适量，加溶剂制成每ml含SCR-5014约0.6μg/ml的溶液，作为对照品溶液。
3)测定结果：检测结果表明SCR-5014与主峰分离度很好，与其他杂质分离度较好。
实施例5：
1)色谱条件：
仪器：Agilent1260HPLC
色谱柱：五氟苯基柱(4.6×100mm，2.6μm)
流动相A：醋酸盐缓冲液(称取醋酸铵0.77g，加水1000ml使溶解，加入3ml三乙胺，醋酸调节pH约为4.5)
流动相B：乙腈：甲醇—1：1
流动相：流动相A-流动相B(40：60)
柱温：30℃
流速：1.0ml/min
检测波长：315nm
进样量：5ul
分析时间：记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍
溶剂：乙腈
2)样品配制：
取4-苄氧基苯亚甲基-4-氟苯胺适量，加溶剂制成每ml含4-苄氧基苯亚甲基-4-氟苯胺3.0mg的溶液，作为供试品溶液。
取SCR-5014对照品适量，加溶剂制成每ml含SCR-5014约0.6μg/ml的溶液，作为对照品溶液。
3)测定结果：检测结果表明SCR-5014与主峰分离度很好，与其他杂质分离度较好。
实施例6：
1)色谱条件：
仪器：Agilent1260HPLC
色谱柱：五氟苯基柱(4.6×100mm，2.6μm)
流动相A：磷酸盐缓冲液(称取磷酸二氢钾1.36g，加水1000ml使溶解，加入二乙胺5ml，磷酸调节pH6.8)
流动相B：乙腈-甲醇(1：1)
流动相：流动相A-流动相B(40：60)
柱温：15℃
流速：1.0ml/min
检测波长：320nm
进样量：10ul
分析时间：记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍
溶剂：乙腈
2)样品配制：
取4-苄氧基苯亚甲基-4-氟苯胺适量，加溶剂制成每ml含4-苄氧基苯亚甲基-4-氟苯胺3.0mg的溶液，作为供试品溶液。
取SCR-5014对照品适量，加溶剂制成每ml含SCR-5014约0.6μg/ml的溶液，作为对照品溶液。
3)测定结果：检测结果表明SCR-5014与主峰分离度很好，与其他杂质分离度较好。
实施例7：
1)色谱条件：
仪器：Agilent1260HPLC
色谱柱：五氟苯基柱(4.6×100mm，2.6μm)
流动相A：磷酸盐缓冲液(称取磷酸二氢钾1.36g，加水1000ml使溶解，加入氨水5ml，磷酸调节pH6.8)
流动相B：乙腈-甲醇(1：1)
流动相：流动相A-流动相B(40：60)
柱温：35℃
流速：1.0ml/min
检测波长：320nm
进样量：10ul
分析时间：记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍
溶剂：乙腈
2)样品配制：
取4-苄氧基苯亚甲基-4-氟苯胺适量，加溶剂制成每ml含4-苄氧基苯亚甲基-4-氟苯胺3.0mg的溶液，作为供试品溶液。
取SCR-5014对照品适量，加溶剂制成每ml含SCR-5014约0.6μg/ml的溶液，作为对照品溶液。
3)测定结果：检测结果表明SCR-5014与主峰分离度很好，与其他杂质分离度较好。
实施例8：
1)色谱条件：
仪器：Agilent1260HPLC
色谱柱：五氟苯基柱(4.6×100mm，2.6μm)
流动相A：磷酸盐缓冲液(称取磷酸二氢钾1.36g，加水1000ml使溶解，加入三乙胺5ml，磷酸调节pH6.8)
流动相B：乙腈-乙醇(1：1)
流动相：流动相A-流动相B(40：60)
柱温：35℃
流速：1.0ml/min
检测波长：320nm
进样量：5ul
分析时间：记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍
溶剂：乙腈
2)样品配制：
取4-苄氧基苯亚甲基-4-氟苯胺适量，加溶剂制成每ml含4-苄氧基苯亚甲基-4-氟苯胺3.0mg的溶液，作为供试品溶液。
取SCR-5014对照品适量，加溶剂制成每ml含SCR-5014约0.6μg/ml的溶液，作为对照品溶液。
3)测定结果：检测结果表明SCR-5014与主峰分离度很好，与其他杂质分离度较好。
实施例9：
1)色谱条件：
仪器：Agilent1260HPLC
色谱柱：五氟苯基柱(4.6×100mm，2.6μm)
流动相A：磷酸盐缓冲液(称取磷酸二氢钾1.36g，加水1000ml使溶解，加入三乙胺5ml，磷酸调节pH6.8)
流动相B：甲醇-乙醇(1：1)
流动相：流动相A-流动相B(20：80)
柱温：35℃
流速：1.0ml/min
检测波长：320nm
进样量：5ul
分析时间：记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍
溶剂：甲醇
2)样品配制：
取4-苄氧基苯亚甲基-4-氟苯胺适量，加溶剂制成每ml含4-苄氧基苯亚甲基-4-氟苯胺3.0mg的溶液，作为供试品溶液。
取SCR-5014对照品适量，加溶剂制成每ml含SCR-5014约0.6μg/ml的溶液，作为对照品溶液。
3)测定结果：检测结果表明SCR-5014与主峰分离度很好，与其他杂质分离度较好。
实施例10：
1)色谱条件：
仪器：Agilent1260HPLC
色谱柱：五氟苯基柱(4.6×100mm，2.6μm)
流动相A：磷酸盐缓冲液(称取磷酸二氢钾1.36g，加水1000ml使溶解，加入三乙胺5ml，磷酸调节pH6.8)
流动相B：甲醇
流动相：流动相A-流动相B(20：80)
柱温：35℃
流速：1.0ml/min
检测波长：320nm
进样量：5ul
分析时间：记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍
溶剂：甲醇
2)样品配制：
取4-苄氧基苯亚甲基-4-氟苯胺适量，加溶剂制成每ml含4-苄氧基苯亚甲基-4-氟苯胺3.0mg的溶液，作为供试品溶液。
取SCR-5014对照品适量，加溶剂制成每ml含SCR-5014约0.6μg/ml的溶液，作为对照品溶液。
3)测定结果：检测结果表明SCR-5014与主峰分离度很好，与其他杂质分离度较好。
实施例11：
1)色谱条件：
仪器：Agilent1260HPLC
色谱柱：五氟苯基柱(4.6×100mm，2.6μm)
流动相A：磷酸盐缓冲液(称取磷酸二氢钾1.36g，加水1000ml使溶解，加入三乙胺5ml，磷酸调节pH6.8)
流动相B：乙腈
流动相：流动相A-流动相B(45：55)
柱温：35℃
流速：1.0ml/min
检测波长：250nm
进样量：30ul
分析时间：记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍
溶剂：乙腈
2)样品配制：
取4-苄氧基苯亚甲基-4-氟苯胺适量，加溶剂制成每ml含4-苄氧基苯亚甲基-4-氟苯胺3.0mg的溶液，作为供试品溶液。
取SCR-5014对照品适量，加溶剂制成每ml含SCR-5014约0.6μg/ml的溶液，作为对照品溶液。
3)测定结果：检测结果表明SCR-5014与主峰分离度很好，与其他杂质分离度较好。
实施例12：
1)色谱条件：
仪器：Agilent1260HPLC
色谱柱：五氟苯基柱(4.6×50mm，3μm)
流动相A：磷酸盐缓冲液(称取磷酸二氢钾1.36g，加水1000ml使溶解，加入三乙胺5ml，磷酸调节pH6.8)
流动相B：乙腈-甲醇(1：1)
流动相：流动相A-流动相B(40：60)
柱温：20℃
流速：0.4ml/min
检测波长：350nm
进样量：30ul
分析时间：记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍
溶剂：乙腈
2)样品配制：
取4-苄氧基苯亚甲基-4-氟苯胺适量，加溶剂制成每ml含4-苄氧基苯亚甲基-4-氟苯胺3.0mg的溶液，作为供试品溶液。
取SCR-5014对照品适量，加溶剂制成每ml含SCR-5014约0.6μg/ml的溶液，作为对照品溶液。
3)测定结果：检测结果表明SCR-5014与主峰分离度很好，与其他杂质分离度较好。
实施例13：
1)色谱条件：
仪器：Agilent1260HPLC
色谱柱：五氟苯基柱(4.6×250mm，5μm)
流动相A：磷酸盐缓冲液(称取磷酸二氢钾1.36g，加水1000ml使溶解，加入三乙胺5ml，磷酸调节pH6.2)
流动相B：乙腈
流动相：
| 时间(min) | 流动相A | 流动相B |
| 0 | 30 | 70 |
| 5 | 30 | 70 |
| 5.1 | 20 | 80 |
| 8 | 20 | 80 |
柱温：60℃
流速：2.0ml/min
检测波长：250nm
进样量：5ul
溶剂：乙腈
2)样品配制：
取4-苄氧基苯亚甲基-4-氟苯胺适量，加溶剂制成每ml含4-苄氧基苯亚甲基-4-氟苯胺12mg的溶液，作为供试品溶液。
取SCR-5014对照品适量，加溶剂制成每ml含SCR-5014约1.2μg/ml的溶液，作为对照品溶液。
3)测定结果：检测结果表明SCR-5014与主峰分离度很好，与其他杂质分离度较好。
实施例14：
1)色谱条件：
仪器：Agilent1260HPLC
色谱柱：五氟苯基柱(4.6×250mm，5μm)
流动相A：磷酸盐缓冲液(称取磷酸二氢钾1.36g，加水1000ml使溶解，磷酸调节pH3.0)
流动相B：乙腈-甲醇-三乙胺(49.8：49.8：0.4)
流动相：流动相A-流动相B(45：55)
柱温：15℃
流速：1.0ml/min
检测波长：320nm
进样量：5ul
溶剂：乙腈
2)样品配制：
取4-苄氧基苯亚甲基-4-氟苯胺适量，加溶剂制成每ml含4-苄氧基苯亚甲基-4-氟苯胺6mg的溶液，作为供试品溶液。
取SCR-5014对照品适量，加溶剂制成每ml含SCR-5014约1.2μg/ml的溶液，作为对照品溶液。
3)测定结果：检测结果表明SCR-5014与主峰分离度很好，与其他杂质分离度较好。
实施例1～实施例14的检测结果见表1。
表1 4-苄氧基苯亚甲基-4-氟苯胺中杂质SCR-5014检测结果
对比试验
试验1：
采用十八烷基硅烷键合硅胶柱，以磷酸盐缓冲液(称取磷酸二氢钾1.36g，加水1000ml使溶解，磷酸调节pH6.2)－乙腈(25：75)为流动相，检测波长为320nm。主成份4-苄氧基苯亚甲基-4-氟苯胺与杂质SCR-5014分离度差，不能很好的检测出杂质SCR-5014的含量。见附图4。
试验2：
采用十八烷基硅烷键合硅胶柱，以磷酸盐缓冲液(称取磷酸二氢钾1.36g，加水1000ml使溶解，磷酸调节pH6.2)—甲醇(25：75)为流动相，检测波长为320nm。主成份4-苄氧基苯亚甲基-4-氟苯胺与杂质SCR-5014分离度差，不能准确的检测出杂质SCR-5014的含量。见附图5。
试验3：
采用苯基键合硅胶，以磷酸盐缓冲液(称取磷酸二氢钾1.36g，加水1000ml使溶解，磷酸调节pH3.0)－乙腈(60：40)为流动相，检测波长为320nm。试验结果，杂质SCR-5014不出峰，主峰相应也低。见附图6。
试验4：
采用苯基键合硅胶，以磷酸盐缓冲液(称取磷酸二氢钾1.36g，加水1000ml使溶解，磷酸调节pH6.2)－甲醇－乙腈(40：30：30)为流动相，检测波长为320nm。试验结果，基线较差，杂质SCR-5014不出峰，主峰相应也低。见附图7。
试验5：
采用苯基键合硅胶，以醋酸盐缓冲液(称取醋酸铵0.77g，加水1000ml使溶解，加入3ml三乙胺，醋酸调节pH约为4.5)－甲醇-乙腈(40：30：30)为流动相，检测波长为320nm。试验结果，基线较差，杂质SCR-5014不出峰，主峰相应也低。见附图8。
试验6：
采用苯基键合硅胶，以甲酸盐缓冲液(称取醋酸铵0.63g，加水1000ml使溶解，加入3ml三乙胺，醋酸调节pH约为3.5)－甲醇-乙腈(40：30：30)为流动相，检测波长为320nm。试验结果，基线较差，杂质SCR-5014不出峰，主峰相应也低。见附图9。
总之，以上这些检测方法响应低、分离度差、基线较差，影响检测结果的真实性。
Claims (10)
1.一种检测4-苄氧基苯亚甲基-4-氟苯胺中的4-苄氧基苯亚甲基苯胺的HPLC方法，其特征在于：采用苯基键合硅胶色谱柱；流动相由含有胺类物质的水溶液或者含有胺类物质的磷酸盐、醋酸盐或甲酸盐缓冲液和有机溶剂组成；检测波长为250～350nm。
2.权利要求1所述的方法，其特征在于所述胺类物质的水溶液或者含有胺类物质的磷酸盐、醋酸盐或甲酸盐缓冲液的pH值为2.0～11.0，优选6.8。
3.权利要求1所述的方法，其特征在于每升所述胺类物质的水溶液或者含有胺类物质的磷酸盐、醋酸盐或甲酸盐缓冲液中含有2～7毫升的胺类物质，优选3～5毫升，更优选5毫升。
4.权利要求1所述的方法，其特征在于所述胺类物质的水溶液或者含有胺类物质的磷酸盐、醋酸盐或甲酸盐缓冲液和有机溶剂的体积比为1:1～1:6，优选为1.2:1.2～1:4，更优选为1:1.5或者1:4，优选洗脱过程中有机溶剂体积不变或增加。
5.权利要求1所述的方法，其特征在于所述有机溶剂选自乙腈、甲醇、乙醇中的一种或多种，所述有机溶剂可以含有胺类物质。
6.权利要求1或5所述的方法，其特征在于所述胺类物质选自二乙胺、三乙胺或氨水。
7.权利要求1所述的方法，其特征在于所述磷酸盐选自磷酸氢二钾、所述醋酸盐选自醋酸铵、所述甲酸盐选自甲酸铵。
8.权利要求1所述的方法，其特征在于：含有胺类物质的水溶液配制如下：1000ml水中加入5ml三乙胺，磷酸调节pH；所述含有胺类物质的磷酸盐缓冲溶液配制如下：磷酸二氢钾1.36g，加水1000ml使溶解，加入三乙胺5ml，磷酸调节pH值；所述含有胺类物质的醋酸盐缓冲溶液配制如下：醋酸铵0.63g，加水1000ml使溶解，加入3ml三乙胺，醋酸调节pH值；所述含有胺类物质的甲酸盐缓冲溶液配制如下：甲酸胺0.63g，加水1000ml使溶解，加入5ml三乙胺，甲酸调节pH值。
9.权利要求1所述的方法，其特征在于柱温为15～60℃。流速为0.4～2.0ml/min。
10.权利要求1所述的方法，其特征在于测试步骤如下：取4-苄氧基苯亚甲基-4-氟苯胺，采用乙腈溶解，配制成含4-苄氧基苯亚甲基-4-氟苯胺1～12mg/ml的溶液，作为供试品溶液；另取4-苄氧基苯亚甲基苯胺对照品，采用乙腈溶解，配成含4-苄氧基苯亚甲基苯胺0.2～1.2μg/ml的溶液，作为杂质对照品溶液；分别精密量取所述供试品溶液和对照溶液5～50μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。
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