CN102520107B - 烟叶中苦参碱农药残留量的测定方法 - Google Patents
烟叶中苦参碱农药残留量的测定方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种烟叶中苦参碱农药残留量的测定方法，包括以下步骤：称取研磨的烟叶于离心管中用乙酸水溶液提取，用水相滤膜过滤，得到滤液；滤液用强阳离子交换固相萃取柱净化，用气相色谱测定新鲜烟叶中苦参碱农药残留量的方法，本发明的方法具有前处理简单和避免使用了毒性较大的有机溶剂，本方法还具有快速、准确且干扰较少的优点。
Description
技术领域
本发明属于农药残留的理化检测技术领域，具体涉及一种烟叶中苦参碱农药残留量的测定方法。
背景技术
苦参碱是一种从苦参植株中提取出的生物碱，它作为一种天然植物源农药，具有植物源农药低毒、高效的特点。烟草中使用该农药的量不断加大，以防治烟草中的蚜虫、烟蓟马、烟粉虱等害虫。但是，高剂量的苦参碱对小白鼠具较强的神经急性毒性，且还具有一定的遗传毒性。因此，苦参碱在烟草中的大量使用必将存在一定的安全隐患，进而影响到烟草的质量安全。现有技术中，对苦参碱的前处理方法常常采用碱性溶液将苦参碱转化为分子形态，再用三氯甲烷等有机溶剂进行萃取或直接用极性较大的乙醇、乙腈进行提取，再对提取液进行一定的净化，上述二种方法提取的色素等杂质较多，需要较为复杂的净化步骤。此外，二种方法都要使用较多量的毒性较大的有机溶剂，这些缺点都不符合对苦参碱的常规残留检测要求，本发明提供了一种烟叶中苦参碱农药残留量的测定方法，具有良好的检测效果。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种用乙酸水溶液提取，强阳离子交换固相萃取柱净化后用气相色谱-氮化学发光检测器，直接测定烟叶中苦参碱农药残留量的方法，以克服现有的方法前处理复杂和要使用毒性较大的有机溶剂的缺点，本方法还具有快速、准确且干扰较少的优点。
本发明的技术方案：本发明的烟叶中苦参碱农药残留量的测定方法，包括以下步骤：
（1）称取研磨的烟叶于离心管中用乙酸水溶液提取，用水相滤膜过滤，得到滤液；
（2）滤液用强阳离子交换固相萃取柱净化；
（3）用气相色谱测定新鲜烟叶中苦参碱农药残留量的方法。
所述的烟叶中苦参碱农药残留量的测定方法，所述的乙酸水溶液的pH为3.0~4.0。
所述的烟叶中苦参碱农药残留量的测定方法，所述的水相滤膜的孔径为0.45 μm。
所述的烟叶中苦参碱农药残留量的测定方法，所述的滤液用强阳离子交换固相萃取柱净化为：先用HCl调节滤液的pH至1.5~2.5，依次用甲醇、水预淋洗活化Bond Elut-SCX柱，将滤液转移至Bond Elut-SCX柱中，用HCl将残余物清洗一次过柱，然后依次用HCl、甲醇淋洗萃取柱，弃去淋出液并将Bond Elut-SCX柱抽干，用氨水甲醇混合溶液洗脱萃取柱，收集洗脱液于试管中，氮气吹干，用甲醇溶解分析物，过0.45 μm微孔有机滤膜，将其转移至微量玻璃平底内插管，待进样。
所述的一种烟叶中苦参碱农药残留量的测定方法，所述的氨水甲醇混合溶液：其组成体积比为：氨水：甲醇=5:95。
所述的一种烟叶中苦参碱农药残留量的测定方法，所述气相色谱的检测器为：氮化学发光检测器。
所述的一种烟叶中苦参碱农药残留量的测定方法，所述气相色谱的分析条件为：气相色谱为：Agilent 7890A气相色谱，氮化学发光检测器为Agilent 255氮化学发光检测器组成，色谱柱：石英毛细管柱DB-17；He为载气，流量为1 mL/min；进样口温度：250??C；基座温度：250??C；进样模式：不分流 进样量：2 ??L；程序升温：初温110??C，保持1 min，以8??C/min升至230??C，保持5 min，以10??C/min升至260??C，保持4 min；检测器：氢气流量4.0 mL/min；氧气流量10 mL/min，裂解温度为950 ??C，采集数据频率为20Hz。
本发明达到的有益效果：
（1）环保及前处理简单
相对于现有技术中使用较多量的毒性较大的有机溶剂，且前处理复杂，本发明采用用乙酸水溶液提取，滤液用强阳离子交换固相萃取柱净化，具有环保及前处理简单的优点。
（2）检测限低，线性关系好
将不同浓度的苦参碱农药标准工作溶液注入GC-NCD，以3倍信噪比（S/N=3）计算检测限（LOD），检测限为0.03 mg/kg；
将浓度梯度为0.15 ug/mL，0.3 ug/mL，0.9 ug/mL，1.8 ug/mL和3 ug/mL注入GC-NCD，以浓度为横坐标，峰面积响应值为纵坐标，进行线性回归，苦参碱的的回归方程为Y=68.85X+0.507，r2=0.9998，表明线性关系较好。
（3）回收率高，精密度好
苦参碱在新鲜烟叶中的回收率在89.5%-91.6%之间，变异系数（CV）为2.73%-3.62%，说明该方法回收率高，精密度好。
具体实施方式
实施例1
（1）准确称取研磨的鲜烟叶2 g于50 mL塑料离心管中，加入15 mL pH=3.5的乙酸水溶液，将样品涡旋30 s后振荡提取30 min，4000 rpm离心后取上层清液，再用8 mL乙酸水溶液洗涤2次，合并滤液过0.45 μm水相滤膜，待净化；
（2）先用0.5 mol/L的HCl调节滤液至pH=2，依次用甲醇、水各5 mL预淋洗活化Bond Elut-SCX，将滤液转移至Bond Elut-SCX柱中，用5 mL0.5 mol/L的HCl将残余物清洗一次过柱，然后依次用0.5 mol/L的HCl、甲醇各5 mL淋洗萃取柱，弃去淋出液并将小柱抽干，用10 mL氨水:甲醇(5:95, V/V)溶液洗脱萃取柱，收集洗脱液于20 mL玻璃试管中，45 ??C下氮气吹干，用0.5 mL甲醇溶解分析物，过0.45 μm微孔有机滤膜，将其转移至250μL微量玻璃平底内插管，待进样；
（3）GC-NCD由Agilent 7890A气相色谱和Agilent 255氮化学发光检测器组成，色谱柱：石英毛细管柱DB-17(30 m×0.25 mm×0.25 ??m)；He为载气，流量为1 mL/min；进样口温度：250??C；基座温度：250??C；进样模式：不分流 进样量：2 ??L；程序升温：初温110??C，保持1 min，以8??C/min升至230??C，保持5 min，以10??C/min升至260??C，保持4 min；检测器：氢气流量4.0 mL/min；氧气流量10 mL/min，裂解温度为950 ??C，采集数据频率为20Hz。
实施例2
苦参碱标准物质用甲醇配制浓度为2 mg/mL的储存标准溶液。工作标准溶液用甲醇把储存标准溶液稀释为相应的浓度，即配制成不同浓度的苦参碱标准溶液，标准序列为：0.15 ug/mL，0.3 ug/mL，0.9 ug/mL，1.8 ug/mL和3 ug/mL。
将不同浓度的苦参碱农药标准工作溶液注入GC-NCD，以3倍信噪比（S/N=3）计算检测限（LOD），检测限为0.03 mg/kg
将浓度梯度为0.15 ug/mL，0.3 ug/mL，0.9 ug/mL，1.8 ug/mL和3 ug/mL注入GC-NCD，以浓度为横坐标，峰面积响应值为纵坐标，进行线性回归，苦参碱的的回归方程为Y=68.85X+0.507，r2=0.9998，表明线性关系较好。
实施例3
在新鲜烟叶中加入三个浓度梯度的苦参碱标准溶液，放入0 ??C左右冰箱中静置过夜，然后进行前处理，再用GC-NCD检测分析。并按照添加量和测定值计算其添加回收率。结果见表1，从表1可以看出，按照0.05 mg/kg，0.2 mg/kg，0.4 mg/kg进行添加时，苦参碱在新鲜烟叶中的回收率在89.5%-91.6%之间，变异系数（CV）为2.73%-3.62%，说明该方法回收率高，精密度较好。
Claims (6)
1.一种烟叶中苦参碱农药残留量的测定方法，其特征在于：包括以下步骤：
（1）称取研磨的烟叶于离心管中用乙酸水溶液提取，用水相滤膜过滤，得到滤液；
（2）滤液用强阳离子交换固相萃取柱净化；
（3）用气相色谱测定新鲜烟叶中苦参碱农药残留量；
所述的滤液用强阳离子交换固相萃取柱净化为：先用HCl调节滤液的pH至1.5~2.5，依次用甲醇、水预淋洗活化Bond Elut-SCX柱，将滤液转移至Bond Elut-SCX柱中，用HCl将残余物清洗一次过柱，然后依次用HCl、甲醇淋洗萃取柱，弃去淋出液并将Bond Elut-SCX柱抽干，用氨水甲醇混合溶液洗脱萃取柱，收集洗脱液于试管中，氮气吹干，用甲醇溶解分析物，过0.45 μm微孔有机滤膜，将其转移至微量玻璃平底内插管，待进样。
2.根据权利要求1所述的烟叶中苦参碱农药残留量的测定方法，其特征在于：所述的乙酸水溶液的pH为3.0~4.0。
3.根据权利要求1所述的烟叶中苦参碱农药残留量的测定方法，其特征在于：所述的水相滤膜的孔径为0.45 μm。
4.根据权利要求1所述的烟叶中苦参碱农药残留量的测定方法，
其特征在于：所述的氨水甲醇混合溶液：其组成体积比为：氨水：甲醇=5:95。
5.根据权利要求1所述的烟叶中苦参碱农药残留量的测定方法，其特征在于：所述气相色谱的检测器为：氮化学发光检测器。
6.根据权利要求1或5所述的烟叶中苦参碱农药残留量的测定方法，其特征在于：所述气相色谱的分析条件为：气相色谱为：Agilent 7890A气相色谱，氮化学发光检测器为Agilent 255氮化学发光检测器组成，色谱柱：石英毛细管柱DB-17；He为载气，流量为1 mL/min；进样口温度：250??C；基座温度：250??C；进样模式：不分流 进样量：2 ??L；程序升温：初温110??C，保持1 min，以8??C/min升至230??C，保持5 min，以10??C/min升至260??C，保持4 min；检测器：氢气流量4.0 mL/min；氧气流量10 mL/min，裂解温度为950 ??C，采集数据频率为20Hz。
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