CN105911184A - 一种测定水中阿维菌素残留的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种测定水中阿维菌素残留的方法，它是将样品经0.22μm的滤膜过滤后，用含有70μL三氯甲烷的1.0mL丙酮萃取，氮气吹干，再用50.0μL甲醇溶解，取20μL进行色谱分析，采用甲醇∶水（80∶20）作为流动相，245 nm紫外检测器检测阿维菌素残留。结果表明：在10~500μg/mL之间线性良好，相关系数

Description

一种测定水中阿维菌素残留的方法

技术领域

本发明属于仪器检测技术领域，涉及作为农药，兽药的杀虫剂残留检测的方法，更具体的说是一种阿维菌素水中残留的检测方法。

背景技术

阿维菌素（Abamectin，ABA）是由日本北里大学和美国默克公司首先开发的一类十六元大环内酯类化合物，对螨类和昆虫具有胃毒和触杀作用，是一种高效、广谱的抗生素类杀虫、杀螨剂，在农作物和家畜中应用广泛。然而，阿维菌素的急性经口毒性很高, 对大鼠的致死中量值为10.6~11.3 mg/ kg , 对哺乳动物的繁殖能力具有潜在的毒性。我国农业部规定：牛肉组织中阿维菌素的最高残留限量（MRL）为50~100 μg/ kg，羊肉组织中阿维菌素的MRL为25~50 μg/kg。阿维菌素作为农药使用时，可能会被雨水冲刷入水中；作为兽药使用时，动物粪便中的药物也可以被雨水冲刷入水中，造成水污染。水中阿维菌素会造成地下水或者农作物用水的污染。因此，监测水中阿维菌素残留对保障人类健康和保护环境至关重要。

近年来，对阿维菌素在农作物及畜产品中残留的分析方法研究众多，但国内关于液相色谱微萃取提取、净化水中阿维菌素的前处理方法未见报道。以往阿维菌素残留的提取及净化方法有机试剂使用多，不仅对分析者身体健康有害，还易造成污染，试验将分散液相微萃取净化与高效液相色谱-紫（HPLC-UV）检测方法相结合，建立了一种测定水中阿维菌素残留的方法。此方法有机试剂使用少，快速、环保。

发明内容

本发明公开了一种测定水中阿维菌素残留的方法，其特征在于按如下的步骤进行：

（1）标准溶液的配制：

1）储备液：取阿维菌素100 mg，放入10 mL容量瓶，加甲醇定容，配成10 mg/mL的阿维菌素溶液；

2）工作液：用甲醇将阿维菌素储备液稀释，配制成10, 50, 100, 200, 500 μg/mL浓度的标准溶液；

（2）方法：

1）色谱条件：Eclipse plus C₁₈色谱柱3.5 μm，4.6 mm×100 mm，流动相为甲醇∶水的体积比为80∶20，流速为1.0 mL/min，检测波长为245 nm，柱温为35 ℃，进样量为20 μL，定量方法采用外标法；

2）线性试验：分别取10，50，100，200，500 μg/mL浓度的标准工作液20 μL，进行HPLC分析，每个浓度进样3 次，以阿维菌素工作液浓度为横坐标，各浓度对应的色谱峰面积的平均值为纵坐标作标准曲线，进行线性相关性统计分析。

3）水样品前处理：

水样经0.22 μm的滤膜过滤，取5.0 mL过滤水样置于15 mL带塞的锥形离心管中，将含有70.0 μL三氯甲烷的1.0 mL丙酮通过微量进样器快速注入离心试管中，然后涡旋10 s，混合液从水相被萃取到氯仿溶液中，静置10 min，分散在水相中的萃取溶剂氯仿沉积到试管底部，用微量进样器吸取萃取溶剂至10 mL离心管中，再向过滤水样中加入含有70 μL三氯甲烷的1 mL丙酮，涡旋10 s，静置10 min，取下层萃取溶剂，合并萃取溶液，氮气吹干，再用50 μL甲醇溶解，涡旋30 s，取20 μL进行色谱分析；

取6个空白水样，前处理后进行HPLC测定, 按10倍信噪比(S/ N =10) 进行计算，本方法对阿维菌素在水中的检测限为0.1 μg/mL。

本发明所述测定水中阿维菌素残留的方法，其中的水样品包括河水、自来水、井水、湖水。

本发明更加详细的步骤如下：

1 材料

1.1 仪器

高效液相色谱仪，配手动进样器和紫外检测器（型号为Agilent-1260），由安捷伦科技有限公司生产；Eclipse plus C₁₈色谱柱（3.5 μm，4.6 mm×100 mm），由安捷伦科技有限公司生产；微型旋涡混合仪（型号为WH-2），由上海沪西分析仪器厂生产；超纯水制作系统（型号为UL UPURE），由四川优普超纯科技有限公司生产。

1.2 试剂

阿维菌素标准品，由美国Sigma-Alorich公司生产；甲醇（色谱纯），由天津康巢生物医药有限公司生产；丙酮（分析纯）、三氯甲烷（分析纯），由利安隆博华医药化学有限公司（天津）生产

河水，取自天津市海河；湖水，取自天津市水上公园；自来水，取自天津农学院兽医学实验室；井水，取自天津市宝坻区郝各庄镇。所有水样在分析前先过0.22 µm滤膜，除去颗粒物。

1.3 标准溶液的配制

储备液：取阿维菌素100 mg，放入10 mL容量瓶，加甲醇定容，配成10 mg/mL的阿维菌素溶液。

工作液：用甲醇将阿维菌素储备液稀释，配制成10, 50, 100, 200, 500 μg/mL浓度的标准溶液。

2 方法

2.1 色谱条件

Eclipse plus C₁₈色谱柱（3.5 μm，4.6 mm×100 mm），流动相为甲醇∶水（80∶20），流速为1.0 mL/min，检测波长为245 nm，柱温为35 ℃，进样量为20 μL，定量方法采用外标法。

2.2 线性试验

分别取10，50，100，200，500 μg/mL浓度的标准工作液20 μL，进行HPLC分析。每个浓度进样3 次。以阿维菌素工作液浓度为横坐标，各浓度对应的色谱峰面积的平均值为纵坐标作标准曲线，进行线性相关性统计分析。

2.3 样品前处理

水样经0.22 μm的滤膜过滤，取5.0 mL过滤水样置于15 mL带塞的锥形离心管中，将含有70.0 μL三氯甲烷的1.0 mL丙酮通过微量进样器快速注入离心试管中，然后涡旋10 s，混合液从水相被萃取到氯仿溶液中，静置10 min，分散在水相中的萃取溶剂氯仿沉积到试管底部，用微量进样器吸取萃取溶剂至10 mL离心管中，再向过滤水样中加入含有70 μL三氯甲烷的1 mL丙酮，涡旋10 s，静置10 min，取下层萃取溶剂，合并萃取溶液。氮气吹干，再用50 μL甲醇溶解，涡旋30 s，取20 μL进行色谱分析。

2.4 添加回收率试验

样品处理同2.3所述，水中阿维菌素的添加浓度分别为0.1，1.0，5.0 μg/mL，同一天内重复测定5次，计算日内变异系数；连续测定3 d，计算日间变异系数。

3 结果与分析

3.1 线性试验

在10~500 μg/mL浓度范围内线性良好，线性方程为y = 1 667.0x + 127.0，线性回归系数=0.999。标准曲线见图1。

3.2 液相微萃取条件的分析

采用分散液相微萃取法对水中阿维菌素进行前处理净化，分别采用四氯化碳、三氯甲烷、二氯甲烷作为萃取剂发现，只有采用三氯甲烷作为萃取试剂回收率最高。

以三氯甲烷作为萃取剂，分别采用丙酮、甲醇、乙醇、乙腈作为分散剂发现，三氯甲烷和甲醇、乙醇不能形成乳浊液，丙酮和乙腈作为分散剂时相比较，丙酮的萃取效果最好，回收率最高。

确定丙酮与三氯甲烷作为萃取剂和分散剂后，对丙酮和三氯甲烷的比例进行了多次试验，首先确定1 mL丙酮的萃取效果最好，分别采用含有50 μL、70 μL、100 μL、200 μL三氯甲烷的1 mL丙酮作为萃取剂对标准溶液进行萃取，试验结果表明：含有50 μL三氯甲烷的1 mL丙酮对阿维菌素的萃取效果不好，回收率低；含有70 μL、100 μL、200 μL三氯甲烷的1mL丙酮对阿维菌素的萃取效果良好，而且更高含量三氯甲烷的丙酮溶液进行萃取，效果也不增加，因此确定采用含有70 μL三氯甲烷的1 mL丙酮作为萃取剂，效果良好，经济环保。

分别采用3 000 r/min离心5 min、3 000 r/min离心10 min，静置5 min、10 min、15 min以促进萃取过程，结果表明，静置5 min萃取效率低，3 000 r/min离心5 min、3 000r/min离心10 min，静置10 min、15 min的萃取效率相同，本方法采用静置10 min。

3.3 方法的灵敏度

取6个空白水样，经2.3处理后进行HPLC测定, 按10倍信噪比(S/ N =10) 进行计算,本方法对阿维菌素在水中的检测限为0.1 μg/mL，空白样品色谱见图2，0.1 μg/mL阿维菌素类药物添加样品色谱见图3。在阿维菌素的保留时间位置均无杂峰干扰。

3.4 方法的检出限、回收率和精密度

阿维菌素从低到高3个浓度的样品添加回收率和日内变异系数见表1。平均回收率范围为82.84%~95.03%，日内变异系数范围为3.78%~7.04%，日间变异系数范围为3.29%~4.29%，回收率较高，重复性较好。

3.5 方法的可行性

为验证方法的可行性，将本方法应用于4种不同水样，即河水、自来水、井水、湖水中对目标待测物进行测定，均未测出阿维菌素的残留，结果见表1。

表1 添加回收率及精密度测定

附图说明：

图1为阿维菌素标准曲线；

图2为 空白样品色谱结果；

图3为 纯水中添加0.1 μg/mL阿维菌素的色谱结果。

具体实施方式

下面通过具体的实施方案叙述本发明。除非特别说明，本发明中所用的技术手段均为本领域技术人员所公知的方法。另外，实施方案应理解为说明性的，而非限制本发明的范围，本发明的实质和范围仅由权利要求书所限定。对于本领域技术人员而言，在不背离本发明实质和范围的前提下，对这些实施方案中的物料成分和用量进行的各种改变或改动也属于本发明的保护范围。

实施例1

（1）自来水样品前处理：

水样经0.22 μm的滤膜过滤，取5.0 mL过滤水样置于15 mL带塞的锥形离心管中，将含有70.0 μL三氯甲烷的1.0 mL丙酮通过微量进样器快速注入离心试管中，然后涡旋10 s，混合液从水相被萃取到氯仿溶液中，静置10 min，分散在水相中的萃取溶剂氯仿沉积到试管底部，用微量进样器吸取萃取溶剂至10 mL离心管中，再向过滤水样中加入含有70 μL三氯甲烷的1 mL丙酮，涡旋10 s，静置10 min，取下层萃取溶剂，合并萃取溶液，氮气吹干，再用50 μL甲醇溶解，涡旋30 s，取20 μL进行色谱分析；

（2）色谱方法：

色谱条件：Eclipse plus C₁₈色谱柱3.5 μm，4.6 mm×100 mm，流动相为甲醇∶水的体积比为80∶20，流速为1.0 mL/min，检测波长为245 nm，柱温为35 ℃，进样量为20 μL，定量方法采用外标法；

实施例2

（1）农作物用水样品前处理：

水样经0.22 μm的滤膜过滤，取5.0 mL过滤水样置于15 mL带塞的锥形离心管中，将含有70.0 μL三氯甲烷的1.0 mL丙酮通过微量进样器快速注入离心试管中，然后涡旋10 s，混合液从水相被萃取到氯仿溶液中，静置10 min，分散在水相中的萃取溶剂氯仿沉积到试管底部，用微量进样器吸取萃取溶剂至10 mL离心管中，再向过滤水样中加入含有70 μL三氯甲烷的1 mL丙酮，涡旋10 s，静置10 min，取下层萃取溶剂，合并萃取溶液，氮气吹干，再用50 μL甲醇溶解，涡旋30 s，取20 μL进行色谱分析；

（2）色谱方法：

色谱条件：Eclipse plus C₁₈色谱柱3.5 μm，4.6 mm×100 mm，流动相为甲醇∶水的体积比为80∶20，流速为1.0 mL/min，检测波长为245 nm，柱温为35 ℃，进样量为20 μL，定量方法采用外标法；

实施例3

比较试验

结论：

（1）有机试剂用量小，环境友好；最大的特点就是有机试剂用量少，而且方法和方法不同。

（2）前处理操作简单。

Claims (2)

1.一种测定水中阿维菌素残留的方法，其特征在于按如下的步骤进行：

（1）标准溶液的配制：

1）储备液：取阿维菌素100 mg，放入10 mL容量瓶，加甲醇定容，配成10 mg/mL的阿维菌素溶液；

2）工作液：用甲醇将阿维菌素储备液稀释，配制成10, 50, 100, 200, 500 μg/mL浓度的标准溶液；

（2）方法：

1）色谱条件：Eclipse plus C₁₈色谱柱3.5 μm，4.6 mm×100 mm，流动相为甲醇∶水的体积比为80∶20，流速为1.0 mL/min，检测波长为245 nm，柱温为35 ℃，进样量为20 μL，定量方法采用外标法；

2）线性试验：分别取10，50，100，200，500 μg/mL浓度的标准工作液20 μL，进行HPLC分析，每个浓度进样3 次，以阿维菌素工作液浓度为横坐标，各浓度对应的色谱峰面积的平均值为纵坐标作标准曲线，进行线性相关性统计分析；

3）水样品前处理：

水样经0.22 μm的滤膜过滤，取5.0 mL过滤水样置于15 mL带塞的锥形离心管中，将含有70.0 μL三氯甲烷的1.0 mL丙酮通过微量进样器快速注入离心试管中，然后涡旋10 s，混合液从水相被萃取到氯仿溶液中，静置10 min，分散在水相中的萃取溶剂氯仿沉积到试管底部，用微量进样器吸取萃取溶剂至10 mL离心管中，再向过滤水样中加入含有70 μL三氯甲烷的1 mL丙酮，涡旋10 s，静置10 min，取下层萃取溶剂，合并萃取溶液，氮气吹干，再用50 μL甲醇溶解，涡旋30 s，取20 μL进行色谱分析；

取6个空白水样，前处理后进行HPLC测定, 按10倍信噪比，S/ N =10进行计算，其中对阿维菌素在水中的检测限为0.1 μg/mL。

2.权利要求1所述测定水中阿维菌素残留的方法，其中的水样品包括河水、自来水、井水、农作物水、湖水。