CN103424499B - 一种苦木中苦木碱含量的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及分析化学领域，尤其涉及苦木中苦木碱含量的检测方法。该方法为：配制苦木碱乙，苦木碱己和苦木碱丁标准品溶液并绘制标准曲线；取苦木干燥粉碎提取得待检溶液；检测色谱条件为：C18色谱柱，柱温20～40℃，检测波长205～280nm，流动相以乙腈为A相酸水为B相，流速为1mL/分钟，洗脱程序为：0～35min乙腈5%至45%；35～40min乙腈45%至80%；40～50min乙腈80%至90%；50～60min乙腈90%至95%；根据标准曲线计算三种苦木碱含量；酸水中酸为磷酸、甲酸或醋酸，其体积分数为0.1～1%。该方法可同时对三种苦木碱定量。

Description

一种苦木中苦木碱含量的检测方法

技术领域

本发明涉及分析化学领域，尤其涉及一种苦木中苦木碱含量的检测方法。

背景技术

苦木为苦木科植物苦木（Picrasma quassioides(D.Don)Benn.）的干燥枝及叶。收载于《中华人民共和国药典》2010年版一部。性寒，味苦。具有清热，祛湿，解毒之功效；用于治疗风热感冒，咽喉肿痛，腹泻下痢，湿疖，毒蛇咬伤等症，是消炎利胆片等中成药的主要药材原料。苦木主要含生物碱、苦味素、苦木内酯等。生物碱主要为苦木碱，其中，苦木碱乙，苦木碱己和苦木碱丁的含量对苦木药材的质量有着重要的影响。苦木碱乙（1-甲氧甲酰-β-咔巴啉）的结构如式I所示，苦木碱己（4-甲氧基-5-羟基-铁屎米酮）的结构如式II所示，苦木碱丁（4,5-二甲氧基-铁屎米酮）的结构如式III所示。

式I       式II

式III

《中华人民共和国药典》2010年版一部中苦木药材质量标准只有“性状”和“鉴别”项，尚无定量测定项，无法全面深入的控制药材质量。为了有效控制苦木药材质量，比较不同药用部位的差别，对苦木药材中苦木碱乙，苦木碱己和苦木碱丁的含量进行定量分析十分重要。而苦木药材质量标准尚无定量测定项，标准亟待提高，目前对苦木中苦木碱的定量分析方法无法对苦木碱乙，苦木碱己和苦木碱丁同时进行定量。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种苦木中苦木碱含量的检测方法，该方法可以同时对苦木中苦木碱乙，苦木碱己和苦木碱丁同时进行定量分析。

本发明提供了一种苦木中苦木碱含量的检测方法，包括以下步骤：

步骤1：取苦木碱乙标准品、苦木碱己标准品、苦木碱丁标准品，以醇类为溶剂，配制含有苦木碱乙标准品、苦木碱己标准品和苦木碱丁标准品的标准品溶液；取苦木干燥粉碎后与醇类水溶液混合，经回流提取、冷却定容、过滤，获得待检溶液；

步骤2：取标准品溶液经HPLC检测；

以苦木碱乙标准品的峰面积为第一纵坐标，苦木碱乙标准品的进样量为第一横坐标，绘制苦木碱乙标准品的标准曲线；

以苦木碱己标准品的峰面积为第二纵坐标，苦木碱己标准品的进样量为第二横坐标，绘制苦木碱己标准品的标准曲线；

以苦木碱丁标准品的峰面积为第三纵坐标，苦木碱丁标准品的进样量为第三横坐标，绘制苦木碱丁标准品的标准曲线；

步骤3：取待检溶液经HPLC检测，获得待检溶液的峰面积，与苦木碱乙标准品的标准曲线、苦木碱己标准品的标准曲线、苦木碱丁标准品的标准曲线比较，根据标准曲线法获得待检溶液中苦木碱乙、苦木碱己、苦木碱丁的含量；

步骤2或步骤3中HPLC检测的色谱条件为：采用C18色谱柱，柱温20℃～40℃，检测波长为205nm～280nm，以乙腈为流动相A相、酸水为流动相B相，流动相流速为1mL/min；梯度洗脱程序为：0～35min，乙腈体积百分数由5%至45%；35min～40min，乙腈体积百分数由45%至80%；40min～50min，乙腈体积百分数由80%至90%；50min～60min，乙腈体积百分数由90%至95%；

其中，醇类为甲醇或乙醇，酸水中酸的体积分数为0.1%～1%，酸的种类为磷酸、甲酸或醋酸。

本发明提供的方法采用高效液相色谱法（HPLC），通过调整色谱条件，将苦木碱乙，苦木碱己和苦木碱丁逐一分离，从而对苦木中苦木碱乙，苦木碱己和苦木碱丁同时进行定量分析。

目前常采用的C18色谱柱可接受的pH值为2～8，流动相的pH值小于2时，会导致键合相的水解；当流动相pH值大于7时硅胶易溶解。液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的，因此要求流动相对样品具有一定的溶解能力且与样品不产生化学反应，其黏度要尽量小，以便得到好的分离效果；且流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。如使用紫外检测器，则应使用对紫外吸收较低的溶剂配制。其沸点不可以太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。因此，本发明提供的检测方法中，采用乙腈和酸水作为流动相，其中乙腈作为流动相的A相，酸水为流动相的B相。

作为优选，流动相B相采用的酸水中酸为磷酸。

作为优选，流动相B相采用的酸水中酸的体积百分数为0.2%。

优选的，流动相B相采用体积百分数为0.2%的磷酸水溶液。

作为优选，检测采用紫外检测器。

作为优选，醇类为甲醇。

结合苦木碱乙、苦木碱己和苦木碱丁的紫外吸收图谱，经比较确定检测波长的范围为205nm～280nm，在此范围内，在205nm波长下检测各生物碱成分峰面积最大，检测到的苦木碱含量最高。

对柱温的选择需考虑待分离物质本身的特性，柱温影响流动相对待测物质的溶解度也会影响柱压。一般情况下，提高柱温有利于提高分离度，但温度过高会导致柱压过低，不利于物质的分离。

作为优选，柱温为30℃。

对本发明提供的方法而言，根据苦木碱乙，苦木碱己和苦木碱丁的极性，选择C18色谱柱，市售C18色谱柱皆适用于本方法。色谱柱的尺寸会对分离结果产生影响，其内径会对流动相的流速产生影响，长度较短的色谱柱运行时间短，柱压较低；长度较长的色谱柱分辨率稿，但运行时间增长。

作为优选，色谱柱采用Agilent Eclipse Plus C18色谱柱、Kromasil C18柱、Diamonsil C18柱、Phenomenex C18柱或Waters XBridge C18柱。

作为优选，色谱图中苦木碱乙、苦木碱己、苦木碱丁的出峰时间依次为17.750min～17.830min、22.260min～22.300min、31.820min～31.860min。

对于待检测的样品需要进行前处理从而获得待检溶液。

作为优选，前处理的方法为：取苦木干燥粉碎后与醇类水溶液混合，经回流提取、冷却定容、过滤，获得待检溶液。

优选的，其中醇类水溶液中醇的体积分数为80%。

优选的，醇类为甲醇或乙醇。

优选的，以g/mL计，苦木与醇类水溶液的比例为1:50。

作为优选，提取为超声提取、回流提取或温浸提取。

优选的，提取为回流提取。

更优选的，回流提取的时间为1.5h。

本发明提供的方法中，前处理的方法具体为：取苦木干燥破碎，置具塞锥形瓶中，加入体积百分数为80%的甲醇水溶液，称定重量，回流提取1.5h，放冷，加体积百分数为80%的甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，取上清液，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，即得。

作为优选，标准品溶液中苦木碱乙、苦木碱己、苦木碱丁标准品的质量-体积浓度依次为10μg/mL、30μg/mL、20μg/mL。

作为优选，标准曲线的绘制方法具体为：分别取标准品溶液1μL、2μL、5μL、10μL、15μL、30μL，在本发明提供的检测方法步骤2中提供的检测色谱条件下，依次进样进行测定。以测得峰面积为纵坐标，进样量(μg)为横坐标绘制标准曲线。

作为优选，检测采用的仪器为Agilent1100高效液相色谱仪。

作为优选，待检溶液的进样量为10μL。

作为优选，待检溶液中苦木碱乙、苦木碱己、苦木碱丁的含量的计算方法为：计算待检溶液中苦木碱乙、苦木碱己、苦木碱丁在检测所得色谱图中的峰面积，根据相应标准曲线的纵坐标，读取横坐标即为该苦木碱的含量。

本发明提供的苦木中苦木碱含量的检测方法，包括：取苦木碱乙标准品、苦木碱己标准品、苦木碱丁标准品，以醇类为溶剂，配制含有苦木碱乙标准品、苦木碱己标准品和苦木碱丁标准品的标准品溶液；取苦木干燥粉碎后与醇类水溶液混合，经回流提取、冷却定容、过滤，获得待检溶液；取标准品溶液经HPLC检测；以苦木碱乙标准品的峰面积为第一纵坐标，苦木碱乙标准品的进样量为第一横坐标，绘制苦木碱乙标准品的标准曲线；以苦木碱己标准品的峰面积为第二纵坐标，苦木碱己标准品的进样量为第二横坐标，绘制苦木碱己标准品的标准曲线；以苦木碱丁标准品的峰面积为第三纵坐标，苦木碱丁标准品的进样量为第三横坐标，绘制苦木碱丁标准品的标准曲线；步骤3：取待检溶液经HPLC检测，获得待检溶液的峰面积，与苦木碱乙标准品的标准曲线、苦木碱己标准品的标准曲线、苦木碱丁标准品的标准曲线比较，根据标准曲线法获得待检溶液中苦木碱乙、苦木碱己、苦木碱丁的含量；步骤2或步骤3中HPLC检测的色谱条件为：采用C18色谱柱，柱温20℃～40℃，检测波长为205nm～280nm，以乙腈为流动相A相、酸水为流动相B相，流动相流速为1mL/min；梯度洗脱程序为：0～35min，乙腈体积百分数由5%至45%；35min～40min，乙腈体积百分数由45%至80%；40min～50min，乙腈体积百分数由80%至90%；50min～60min，乙腈体积百分数由90%至95%；其中，醇类为甲醇或乙醇，酸水中酸的体积分数为0.1%～1%，酸的种类为磷酸、甲酸或醋酸。本发明提供的方法采用高效液相色谱法（HPLC），通过调整色谱条件，将苦木碱乙，苦木碱己和苦木碱丁逐一分离，从而对苦木中苦木碱乙，苦木碱己和苦木碱丁同时进行定量分析。实验表明，取同一待检溶液，连续进样6次，误差最低可达0.14%，表明该方法精密度好；取同一待检溶液，分别于配制后的0h，3h，6h，9h，12h，24h进样，每次10μL，苦木碱乙、苦木碱己、苦木碱丁的峰面积积分值误差最低可达0.45%，表明处理后的样品在1天内稳定。加标回收后计算苦木碱乙、苦木碱己、苦木碱丁的平均回收率，平均回收率可达99%以上，表明该方法准确度好。

附图说明

图1示采用实施例1中提供的色谱条件对标准品溶液和待检溶液进行分析所得色谱图；图1（a）示标准品溶液色谱图，其中，峰1示苦木碱乙色谱峰，峰2示苦木碱己色谱峰，峰3示苦木碱丁色谱峰；图1（b）示待检溶液色谱图，其中，峰1示苦木碱乙色谱峰，峰2示苦木碱己色谱峰，峰3示苦木碱丁色谱峰；

图2示采用实施例4中提供的色谱条件对待检溶液进行分析所得色谱图；其中，峰1示苦木碱乙色谱峰，峰2示苦木碱己色谱峰，峰3示苦木碱丁色谱峰；

图3示采用实施例5中提供的色谱条件对待检溶液进行分析所得色谱图；其中，峰1示苦木碱乙色谱峰，峰2示苦木碱己色谱峰，峰3示苦木碱丁色谱峰。

具体实施方式

本发明提供了一种苦木中苦木碱含量的检测方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

本发明采用的试剂皆为普通市售品，皆可于市场购得。

其中，Agilent1100高效液相色谱仪；

BT214D电子分析天平购自瑞士沙多利斯Sartorius公司；

CP225D电子分析天平购自瑞士沙多利斯Sartorius公司；

SB25-12DTD超声波清洗机购自宁波新芝生物科技股份有限公司；

苦木碱乙标准品为采用归一化法自制，HPLC检测纯度：99.26%，；

苦木碱己标准品为采用归一化法自制，HPLC检测纯度：98.45%；

苦木碱丁标准品为采用归一化法自制，HPLC检测纯度：99.13%；

苦木药材采收于广西、福建和河南，经鉴定为苦木科植物苦木Picrasmaquassioides(D.Don)Benn.的干燥枝及叶；

乙腈为色谱纯，水为蒸馏水，其他试剂均为分析纯。

下面结合实施例，进一步阐述本发明：

实施例1～5采用不同色谱条件对苦木碱进行检测

分别取苦木碱乙、苦木碱己、苦木碱丁3种标准品适量，精密称定，置50mL量瓶中，加甲醇制成每1mL含苦木碱乙10μg、苦木碱己30μg，苦木碱丁20μg的溶液，作为标准品溶液。4℃冰箱中保存，备用。

苦木药材干燥粉碎后粗粉约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80%甲醇50mL，称定重量，回流提取1.5h，放冷，加80%甲醇补足减失的重量，摇匀，取上清液，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，作为待检溶液。

梯度洗脱程序：0min～35min，A相体积分数由5%至45%；

35min～40min，A相体积分数由45%至80%；

40min～50min，A相体积分数由80%至90%；

50min～60min，A相体积分数由90%至95%；

流速：1mL/min；

进样量：10μL；

其他色谱条件选择如表1所示：

表1本发明实施例1～5的色谱条件

实施例序号	色谱柱	流动相A相	流动相B相	检测波长	柱温
						1	Agilent Eclipse Plus C18柱	乙腈	0.2%磷酸	210nm	30℃
2	Kromasil C18柱	乙腈	0.2%甲酸	205nm	20℃
						3	Diamonsil C18柱	乙腈	0.2%醋酸	280nm	40℃
4	Phenomenex C18柱	乙腈	1%磷酸	205nm	30℃
						5	Waters XBridge C18柱	乙腈	0.1%磷酸	210nm	30℃

按照表1所示色谱条件，采用本发明提供的梯度洗脱程序，分别对标准品溶液和待检溶液进行色谱分析。其中，采用实施例1中提供的色谱条件对标准品溶液和待检溶液进行分析所得色谱图如图1所示，图1（a）示标准品溶液色谱图，其中，峰1示苦木碱乙色谱峰，峰2示苦木碱己色谱峰，峰3示苦木碱丁色谱峰；图1（b）示待检溶液色谱图，其中，峰1示苦木碱乙色谱峰，峰2示苦木碱己色谱峰，峰3示苦木碱丁色谱峰。采用其他实施例提供的色谱条件对标准品溶液和待检溶液进行分析的色谱图与此相似。

实施例6本发明提供方法的线性范围考察

分别取苦木碱乙、苦木碱己、苦木碱丁3种标准品适量，精密称定，置50mL量瓶中，加甲醇制成每1mL含苦木碱乙10μg、苦木碱己30μg，苦木碱丁20μg的溶液，作为标准品溶液。4℃冰箱中保存，备用。

分别取标准品溶液1μL、2μL、5μL、10μL、15μL、30μL，按照本发明实施例1提供的方法，依次进样进行测定。以测得峰面积为纵坐标，进样量(μg)为横坐标绘制标准曲线。其结果如表2所示

表2苦木碱乙、苦木碱己和苦木碱丁的回归方程、相关系数和线性范围

化合物名称	回归方程	r	线性范围/μg
				苦木碱乙	Y=92.999X+0.0818	0.9999	0.012～0.365
苦木碱己	Y=100.64X+0.1881	0.9999	0.031～0.936
				苦木碱丁	Y=101.03X+0.0661	0.9999	0.021～0.629

实施例7本发明提供方法的精密度检测

取苦木药材干燥粉碎后粗粉约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80%甲醇50mL，称定重量，回流提取1.5h，放冷，加80%甲醇补足减失的重量，摇匀，取上清液，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，作为待检溶液。

取待测溶液，按照本发明实施例1提供的方法，连续进样6次，每次10μL，记录苦木碱乙、苦木碱己、苦木碱丁的峰面积，计算相对标准偏差，结果如表3所示，结果显示，采用本发明提供的方法连续测定6次检测苦木药材中苦木碱乙、苦木碱己、苦木碱丁，其峰面积相对标准偏差不超过1%，表明本发明提供的方法具有良好的精密度。

表3连续测定6次检测苦木药材中苦木碱乙、苦木碱己、苦木碱丁的峰面积及其误差

实施例8本发明提供方法的稳定性检测

取苦木药材干燥粉碎后粗粉约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80%甲醇50mL，称定重量，回流提取1.5h，放冷，加80%甲醇补足减失的重量，摇匀，取上清液，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，作为待检溶液。取待检溶液，分别于放置0h，3h，6h，9h，12h，24h后进样，每次10μL，按照本发明实施例1提供的方法，测得苦木碱乙、苦木碱己、苦木碱丁的峰面积积分值，计算相对标准偏差，结果如表4所示，采用本发明提供的方法，连续检测放置24小时内苦木药材中苦木碱乙、苦木碱己、苦木碱丁，的峰面积相对标准偏差不足2.1%，表明本发明提供的方法具有良好的稳定性。

表4放置24小时内苦木药材中苦木碱乙、苦木碱己、苦木碱丁的峰面积及其误差

实施例9本发明提供方法的重复性检测

采用本发明提供的方法对同一苦木样品进行6次检测，从而分析该方法的重复性：精密称取苦木药材粉末（过四号筛）约1.0g共6份，分别置于具塞锥形瓶中，精密加入80%甲醇50mL，称定重量，回流提取1.5h，放冷，加80%甲醇补足减失的重量，摇匀，取上清液，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取滤液，作为待检溶液。按照本发明实施例1提供的方法，测得苦木碱乙、苦木碱己、苦木碱丁平均含量及相对标准偏差结果见表5。结果显示，采用本发明提供的方法，6次检测中苦木碱乙、苦木碱己、苦木碱丁的含量的相对标准偏差不足3%，表明本发明提供的方法具有良好的重复性。

表5  6次检测中苦木碱乙、苦木碱己、苦木碱丁的含量及相对标准偏差

实施例10本发明提供方法的准确度试验

通过加标回收的方法，对本发明提供的方法的准确度进行分析。取苦木药材粉末样品1g分两份，取其中0.5g测定其中苦木碱乙、苦木碱己、苦木碱丁的含量。取其中另外0.5g，准确加入一定量的苦木碱乙、苦木碱己、苦木碱丁，苦木碱乙、苦木碱己、苦木碱丁的加入量如表6所示。置具塞锥形瓶中，精密加入80%甲醇50mL，称定重量，回流提取1.5h，放冷，加80%甲醇补足减失的重量，摇匀，取上清液，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，作为待检溶液。按照本发明实施例1提供的方法，检测苦木碱乙、苦木碱己、苦木碱丁的平均回收率，实验设6次重复。结果见表6。结果显示，采用本发明提供的方法，对苦木药材进行加标回收，其中，对苦木碱乙的回收率为97.48%～101.08%，对苦木碱己的回收率为97.07%～101.08%，对苦木碱丁的回收率为98.21%～102.15%，相对标准偏差皆不足2%，表明本发明提供的方法具有良好的准确度。

表6苦木药材加标回收率测定结果

实施例11采用本发明提供方法对不同批次或产地的苦木药材测定

分别取5个不同批次或产地的苦木药材粉末样品约1.0g，苦木药材干燥粉碎后粗粉约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80%甲醇50mL，称定重量，回流提取1.5h，放冷，加80%甲醇补足减失的重量，摇匀，取上清液，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，作为待检溶液。采用本发明实施例1提供的方法，检测其中苦木碱乙、苦木碱己、苦木碱丁的平均含量，实验设3次重复，结果见表7。

表7不同批次产地的苦木药材中苦木碱乙、苦木碱己、苦木碱丁的平均含量

药材批号	产地	苦木碱乙mg/g	苦木碱己mg/g	苦木碱丁mg/g
					1103001	广西	0.069	1.111	0.196
1104003	广西	0.066	0.661	0.379
					20110620	广西	0.255	0.58	0.169
20110727	福建	0.012	0.008	未检出
					20100908	河南	0.076	0.138	0.124

结果显示，采用本发明提供的方法成功对广西、福建、河南三地不同批次的苦木药材中苦木碱乙、苦木碱己、苦木碱丁同时进行了定量分析，分析结果显示：不同产地的苦木药材苦木碱的成分和含量差别较大，整体而言，产自广西的苦木药材中苦木碱乙、苦木碱己、苦木碱丁的含量要显著高于福建和河南，而通常苦木中苦木碱己的含量要高于苦木碱乙和苦木碱丁。此结果与采用现有技术对苦木中三种苦木碱分别定量的结果一致，证明了本发明提供的方法具有可行性。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种苦木中苦木碱含量的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1：取苦木碱乙标准品、苦木碱己标准品、苦木碱丁标准品，以醇类为溶剂，配制含有苦木碱乙标准品、苦木碱己标准品和苦木碱丁标准品的标准品溶液；取苦木干燥粉碎后与醇类水溶液混合，经提取、冷却定容、过滤，获得待检溶液；

步骤2：取所述标准品溶液经HPLC检测；

以所述苦木碱乙标准品的峰面积为第一纵坐标，所述苦木碱乙标准品的进样量为第一横坐标，绘制苦木碱乙标准品的标准曲线；

以所述苦木碱己标准品的峰面积为第二纵坐标，所述苦木碱己标准品的进样量为第二横坐标，绘制苦木碱己标准品的标准曲线；

以所述苦木碱丁标准品的峰面积为第三纵坐标，所述苦木碱丁标准品的进样量为第三横坐标，绘制苦木碱丁标准品的标准曲线；

步骤3：取所述待检溶液经HPLC检测，获得所述待检溶液的峰面积，与所述苦木碱乙标准品的标准曲线、所述苦木碱己标准品的标准曲线、苦木碱丁标准品的标准曲线比较，根据标准曲线法获得所述待检溶液中苦木碱乙、苦木碱己、苦木碱丁的含量；

步骤2或步骤3中所述HPLC检测的色谱条件为：采用C18色谱柱，柱温20℃～40℃，检测波长为205nm～280nm，以乙腈为流动相A相、酸水为流动相B相，流动相流速为1mL/min；梯度洗脱程序为：0～35min，乙腈体积百分数由5%至45%；35min～40min，乙腈体积百分数由45%至80%；40min～50min，乙腈体积百分数由80%至90%；50min～60min，乙腈体积百分数由90%至95%；

其中，所述醇类为甲醇或乙醇，所述酸水中酸的体积分数为0.1%～1%，酸的种类为磷酸、甲酸或醋酸。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述酸水中酸为磷酸。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述酸水中酸的体积百分数为0.2%。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述醇类为甲醇。

5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述提取为超声提取、回流提取或温浸提取。

6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述提取为回流提取。

7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述检测波长为210nm。

8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述柱温为30℃。

9.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤1中所述甲醇水溶液中甲醇的体积分数为80%。

10.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述标准品溶液中苦木碱乙、苦木碱己、苦木碱丁标准品的质量-体积浓度依次为10μg/mL、30μg/mL、20μg/mL。