CN106248847A - 一种同时测定酿酒物料中七种有机酸含量的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种同时测定酿酒物料中七种有机酸含量的方法，混标/样品利用高效液相色谱仪进行检测，所述高效液相色谱为安捷伦1200，检测波长为254nm，流动相为pH=2.7的磷酸二氢钾缓冲溶液，流速为0.8mL/min，柱温为30℃，色谱柱为Waters T3，5μm，4.6×250mm Column。本发明实现了米酒发酵过程发酵液或白酒酿造过程大曲及酒醅中酒石酸、苹果酸、乳酸、乙酸、柠檬酸、丁二酸、丙酸7种有机酸的同时分离检测，标准曲线线性R²>0.999，回收率介于92～101%，峰面积和保留时间相对标准偏差小于3%，满足检测要求，可以跟踪酿酒工艺过程中有机酸的变化规律。

Description

一种同时测定酿酒物料中七种有机酸含量的方法

技术领域

本发明涉及有机酸含量检测技术领域，具体涉及一种同时测定米酒发酵液或白酒酿造过程大曲或酒醅中七种有机酸含量的方法。

背景技术

在整个米酒发酵过程中、白酒酿造中大曲及酒醅中，有机酸作为其中重要组成之一，影响着酒的品质好坏，为研究酒发酵过程中有机酸的变化规律，需要建立同时检测多种有机酸的检测方法，跟踪工艺发酵过程以及微生物的变化，间接来研究影响酒品质的因素。目前有机酸的检测方法有气相色谱、气质联用仪，液相色谱、液质联用仪；其中气相和气质主要检测一些挥发性和沸点低的小分子有机酸，而对于乳酸、苹果酸等分子量大，不易挥发的有机酸，则需要液相或者液质联用仪来检测，而液质由于成本比较高很少用于有机酸的检测。且各有机酸的分别检测，耗费时间，成本高，实用性较差。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种同时测定酿酒物料中七种有机酸含量的方法，在米酒酿造过程中以及白酒大曲、酒醅发酵中有很好的应用，建立同时检测物质中多种有机酸机制，通过检测有机酸含量监控发酵过程中有机酸的变化规律，来摸清微生物与有机酸之间的联系，具有快速、灵敏、实用性以及低成本等优点。

本发明通过以下技术方案实现：

一种同时测定酿酒物料中七种有机酸含量的方法，包括以下步骤：

1）有机酸混标配制：精确配制酒石酸、苹果酸、乳酸、乙酸、柠檬酸、丁二酸、丙酸浓度以mg/100ml计分别为123.78、733.21、407.28、1945.52、122.45、123.07、196.44，作为标准溶液；标准溶液制成混标并按照倍数1：5:10:20:50:100稀释配制六个标准曲线浓度点，待测；

2）待测样品的制备：取米酒发酵液或白酒酿造过程大曲或酒醅待测样品，净化后过0.45μm水相滤膜，待测；

3）步骤1）混标和步骤2）样品分别采用安捷伦1200高效液相色谱仪按以下条件进行检测：色谱柱为Waters T3 5μm 4.6×250mm Column；流动相为pH=2.7的磷酸二氢钾缓冲溶液，检测器为紫外检测器；波长254nm；柱温为30℃；流速为0.8mL/min；进样量为10μL进入液相色谱进行检测，6个标曲作标准曲线、回收率、精密度等；

4）混标6个标曲作标准曲线、回收率、精密度，样品色谱图对照混标色谱图进行定性，得到色谱图后采用自动积分或手动积分，得到有机峰面积，带入标准曲线Y=aX+b，按以下公式进行计算：,式中W₀为样品浓度，g/kg； A₀为样品峰面积，V样品稀释体积，mL；M为样品质量，g。

本发明与现有技术相比，具有以下明显优点：

本发明利用高效液相色谱仪特定的检测条件检测有机酸含量，能够同时检测物质中酒石酸、苹果酸、乳酸、乙酸、柠檬酸、丁二酸、丙酸的含量，回收率好，精密度高，适用于米酒发酵过程中、或白酒大曲、酒醅发酵中有机酸的定性和定量检测。本发明可以被广泛开展和实施跟踪有机酸的检测，通过检测有机酸含量监控发酵过程中有机酸的变化规律，来摸清微生物与有机酸之间的联系，用以研究影响酒品的因素。本发明具有快速、灵敏、实用性以及低成本等优点。

附图说明

图1为有机酸混标色谱图。

图2为大曲样品色谱图。

具体实施方式

本发明建立了一种高效液相色谱同时检测多种有机酸含量的方法，结合以下实例来具体说明：

1）有机酸混标配制：精确配制酒石酸、苹果酸、乳酸、乙酸、柠檬酸、丁二酸、丙酸浓度（mg/100ml）分别为123.78、733.21、407.28、1945.52、122.45、123.07、196.44，作为标准溶液；标准溶液制成混标并按照倍数1：5:10:20:50:100稀释配制六个标准曲线浓度点，待测；

2）待测样品的制备：称取白酒大曲待测样品，净化后过0.45μm水相滤膜，待测；

3）步骤1）混标和步骤2）样品分别采用安捷伦1200高效液相色谱仪按以下条件进行检测：色谱柱为Waters T3 5μm 4.6×250mm Column；流动相为pH=2.7的磷酸二氢钾缓冲溶液，检测器为紫外检测器；波长254nm；柱温为30℃；流速为0.8mL/min；进样量为10μL进入液相色谱进行检测，6个标曲作标准曲线、回收率、精密度等；

4）混标6个标曲作标准曲线、回收率、精密度，样品色谱图对照混标色谱图进行定性，得到色谱图后采用自动积分或手动积分，得到有机峰面积，带入标准曲线Y=aX+b，按以下公式进行计算：,式中W₀为样品浓度，g/kg； A₀为样品峰面积，V样品稀释体积，mL；M为样品质量，g。混标的检测色谱图见图1。

大曲样品的检测色谱图见图2。

检测方法考察：

表1有机酸的标线和检出限

由表1可知，有机酸标准曲线线性R²>0.999，满足要求，符合检测。

取同一份样品，分为2份，其中一份作为空白，另一份加入标品，按照色谱条件进行检测，计算回收率；选取其中一个浓度标品重复进样6次，计算相对标准偏差，验证方法精密度。

表2回收率和精密度

表2回收率介于92～101%之间，峰面积和保留时间相对标准偏差均小于3%，满足检测要求。

Claims (1)

1.一种同时测定酿酒物料中七种有机酸含量的方法，其特征在于包括以下步骤：

1）有机酸混标配制：精确配制酒石酸、苹果酸、乳酸、乙酸、柠檬酸、丁二酸、丙酸浓度以mg/100ml计分别为123.78、733.21、407.28、1945.52、122.45、123.07、196.44，作为标准溶液；标准溶液制成混标并按照倍数1：5:10:20:50:100稀释配制六个标准曲线浓度点，待测；

2）待测样品的制备：取米酒发酵液或白酒酿造过程大曲或酒醅待测样品，净化后过0.45μm水相滤膜，待测；

3）步骤1）混标和步骤2）样品分别采用安捷伦1200高效液相色谱仪按以下条件进行检测：色谱柱为Waters T3 5μm 4.6×250mm Column；流动相为pH=2.7的磷酸二氢钾缓冲溶液，检测器为紫外检测器；波长254nm；柱温为30℃；流速为0.8mL/min；进样量为10μL进入液相色谱进行检测，6个标曲作标准曲线、回收率、精密度等；

4）混标6个标曲作标准曲线、回收率、精密度，样品色谱图对照混标色谱图进行定性，得到色谱图后采用自动积分或手动积分，得到有机峰面积，带入标准曲线Y=aX+b，按以下公式进行计算：,式中W₀为样品浓度，g/kg； A₀为样品峰面积，V样品稀释体积，mL；M为样品质量，g。