CN107300589A - 一种二氟泼尼酯的色谱纯度测定方法 - Google Patents

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周胜安
覃宇东
邓琦
李金霞
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Abstract

本发明公开一种二氟泼尼酯的色谱纯度测定方法，包括如下步骤：步骤一：准备步骤：色谱条件：采用紫外可见光检测器及ultimate XB‑C18色谱柱，检测波长240nm，柱温35℃，流速0.9ml/min，流动相为甲醇‑水比为68∶32，进样量15μL；供试品溶液的配制：取二氟泼尼酯适量，加流动相配置成5mg/ml的溶液，作为供试品溶液；步骤二：纯度测定：取供试品溶液注入色谱仪，记录色谱图至二氟泼尼酯主峰的2倍保留时间，通过调整适当仪器积分参数，面积归一化法计算得出色谱纯度。与现有技术相比，本发明的二氟泼尼酯的色谱纯度测定方法，简单准确，灵敏度高，可有效的对二氟泼尼酯的纯度进行检测。

Description

一种二氟泼尼酯的色谱纯度测定方法
技术领域
本发明涉及物质纯度测定领域，确切地说是一种二氟泼尼酯的色谱纯度测定方法。
背景技术
二氟泼尼酯亦称二氟孕甾丁酯或地氟孕甾丁酯，其眼用乳剂商品名为“Durezol”，是由Sirion Therapeutics公司研究开发，于2008年6月23日通过优先审批程序获得FDA批准。该药为局部使用的眼科专科用药，可用于治疗眼科手术后出现的炎症和疼痛。二氟泼尼酯属肾上腺皮质激素类药物，是泼尼松龙的二氟衍生物，具有较强的抗炎镇痛作用，能够抑制与炎症相关的水肿、纤维素沉积、毛细血管扩张、白细胞迁移、毛细血管增生、成纤维细胞增生、胶原蛋白沉积以及疤痕形成等。其化学名为6α，9α-氟-11β-羟基-4-烯-孕甾-3， 20-二酮-17-丁酸酯-20-乙酸酯，分子式：C27H34F2O7，分子量：508.56。二氟泼尼酯在合成和储藏的过程中可能会有原料残留或其他杂质，再或者其他降解产物；此检测方法采用C18色谱柱有效的检测二氟泼尼酯的纯度，对合成和制剂的质量控制方面有重要意义。
有关二氟泼尼酯的测定，有如下几种：
期刊《中国药房》2013年第24卷第25期中提到用Shimadzu VP-ODS(250mm×4.6mm，5μm)的色谱柱，50∶50的甲醇水做流动相，1.0ml/min 的流速，检测波长240nm；进样量15μL，作为二氟泼尼酯的检测方法。缺点：这种方法主峰出峰较晚，分离效果不理想
期刊《食品与药品》2012年第14卷第11期中采用SHIMADZU VP-ODS C18(150mm×4.6mm，5μm)色谱柱，流动相为甲醇-水(52∶48)，检测波长240nm，流速1.0ml/min，柱温35℃。缺点：这种方法出峰峰形较差，理论塔板数较低。
国内已有专利CN103364502A采用醋酸钠缓冲液(用醋酸调节pH至3.5) -甲醇-乙腈(60∶30∶10)做流动相，1.0ml/min的流速。缺点：此方法流动相配制复杂，耗费时间长。
现在的二氟泼尼酯的色谱纯度测定方法，都存在不足，需要改进。
发明内容
针对上述缺陷，本发明解决的技术问题在于提供一种二氟泼尼酯的色谱纯度测定方法，简单准确，灵敏度高，可有效的对二氟泼尼酯的纯度进行检测。
为了解决以上的技术问题，本发明的二氟泼尼酯的色谱纯度测定方法，包括如下步骤：
步骤一：准备步骤
色谱条件：采用紫外可见光检测器及ultimate XB-C18色谱柱，检测波长 240nm，柱温35℃，流速0.9ml/min，流动相为甲醇-水比为68∶32，进样量15μL；
供试品溶液的配制：取二氟泼尼酯适量，加流动相配置成5mg/ml的溶液，作为供试品溶液；
步骤二：纯度测定
取供试品溶液注入色谱仪，记录色谱图至二氟泼尼酯主峰的2倍保留时间，通过调整适当仪器积分参数，面积归一化法计算得出色谱纯度。
优选地，在步骤一中，所述ultimate XB-C18色谱柱的规格为 250mm×4.6mm，5μm。
优选地，在步骤一中，色谱柱采用纯水作为流动相的无机相。
与现有技术相比，本发明的二氟泼尼酯的色谱纯度测定方法，简单准确，灵敏度高，可有效的对二氟泼尼酯的纯度进行检测。本发明的二氟泼尼酯的色谱纯度测定方法的具体优点如下：主峰出峰适宜，分离效果较理想；出峰峰形较好，理论塔板数较高；流动相配制简单，耗费时间短。
附图说明
图1为采用甲醇-水比为68∶32作流动相，0.9ml/min的流速，检测波长240nm的检测图谱；
图2为图1的峰表结果；
图3为甲醇-水(50∶50)作流动相的图谱；
图4为采用C18的色谱柱，柱温35℃，甲醇-水比为68∶32作流动相，1.0ml/min的流速，检测波长240nm的色谱图；
图5为图4的峰表结果；
图6为采用C18的色谱柱，柱温35℃，甲醇-水(60∶40)作流动相，1.0ml/min的流速，检测波长240nm的分离色谱图；
图7为图6的峰表结果；
图8为采用C18的色谱柱，柱温35℃，甲醇-水(65∶35)作流动相，1.0ml/min的流速，检测波长240nm条件的色谱图；
图9为图8的峰表结果；
图10为采用C18的色谱柱，柱温35℃，甲醇-水(70∶30)作流动相，1.0ml/min的流速，检测波长240nm的色谱图；
图11为图10的峰表结果；
图12为流动相为甲醇-水比为68∶32的条件下所检出的色谱图。
具体实施方式
为了本领域的技术人员能够更好地理解本发明所提供的技术方案，下面结合具体实施例进行阐述。
本案将可由以下的实施例说明而得到充分了解，使得熟习本技艺之人士可以据以完成之，然本案之实施例并非可由下列而被限制其实施型态。
实施例1
仪器：Waters 2695(2487紫外可见光检测器，Empower 3色谱工作站)，精密量取15μL供试品溶液注入色谱仪，采用甲醇-水比为 68∶32作流动相，0.9ml/min的流速，检测波长240nm，记录色谱图至二氟泼尼酯主峰的2倍保留时间，通过调整适当仪器积分参数，面积归一化法计算得出色谱纯度。检测结果显示在此色谱条件下二氟泼尼酯出峰时间适中，约在25min出峰，峰形良好，参见附图1，分离度为20.56，参见附图2。而用甲醇-水(50∶50)作流动相时，在60min内没有出峰，主峰在下一个样品中出峰，且其基线不稳，时有波动，出峰时峰形较差，参见附图3。
实施例2
精密量取15μL供试品溶液注入色谱仪，选定以下色谱条件进行检测：采用C18的色谱柱，柱温35℃，甲醇-水比为68∶32作流动相， 1.0ml/min的流速，检测波长240nm，记录色谱图至二氟泼尼酯主峰的2倍保留时间，通过调整适当仪器积分参数，面积归一化法计算得出色谱纯度。检测结果显示在此色谱条件下二氟泼尼酯出峰时间适中，峰形良好，参见附图4，分离度为佳，参见附图5。
实施例3
精密量取15μL供试品溶液注入色谱仪，选定以下色谱条件进行检测：采用C18的色谱柱，柱温35℃，甲醇-水(60∶40)作流动相， 1.0ml/min的流速，检测波长240nm，记录色谱图至二氟泼尼酯主峰的2倍保留时间，通过调整适当仪器积分参数，面积归一化法计算得出色谱纯度。检测结果显示在此色谱条件下二氟泼尼酯出峰时间适中，峰形良好，参见附图6，分离度为佳，参见附图7。
实施例4
精密量取15μL供试品溶液注入色谱仪，选定以下色谱条件进行检测：采用C18的色谱柱，柱温35℃，甲醇-水(65∶35)作流动相， 1.0ml/min的流速，检测波长240nm，记录色谱图至二氟泼尼酯主峰的2倍保留时间，通过调整适当仪器积分参数，面积归一化法计算得出色谱纯度。检测结果显示在此色谱条件下二氟泼尼酯出峰时间适中，峰形良好，参见附图8，分离度为佳，参见附图9。
实施例5
精密量取15μL供试品溶液注入色谱仪，选定以下色谱条件进行检测：采用C18的色谱柱，柱温35℃，甲醇-水(70∶30)作流动相， 1.0ml/min的流速，检测波长240nm，记录色谱图至二氟泼尼酯主峰的2倍保留时间，通过调整适当仪器积分参数，面积归一化法计算得出色谱纯度。检测结果显示在此色谱条件下二氟泼尼酯出峰时间适中，峰形良好，参见附图10，分离度为佳，参见附图11。
实施例6
灵敏度测定
(1)供试品溶液的配制：取二氟泼尼酯适量，加流动相配置成 5mg/ml的溶液，作为供试品溶液。
(2)在同一台仪器同一个样品分别采用甲醇-水(50∶50)，及甲醇-水比为68∶32先后进样，检测结果显示甲醇-水(50∶50)的检出杂质个数位4个，而甲醇-水比为68∶32所检出的杂质个数为6个。证明该方法灵敏度高，能检出更多杂质。参见附图12。
以上结果均表明，本发明的二氟泼尼酯的色谱纯度测定方法，简单准确，灵敏度高，可有效的对二氟泼尼酯的纯度进行检测。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

Claims (3)

1.一种二氟泼尼酯的色谱纯度测定方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一：准备步骤
色谱条件：采用紫外可见光检测器及ultimate XB-C18色谱柱，检测波长240nm，柱温35℃，流速0.9ml/min，流动相为甲醇-水比为68∶32，进样量15μL；
供试品溶液的配制：取二氟泼尼酯适量，加流动相配置成5mg/ml的溶液，作为供试品溶液；
步骤二：纯度测定
取供试品溶液注入色谱仪，记录色谱图至二氟泼尼酯主峰的2倍保留时间，通过调整适当仪器积分参数，面积归一化法计算得出色谱纯度。
2.根据权利要求1所述的二氟泼尼酯的色谱纯度测定方法，其特征在于，在步骤一中，所述ultimate XB-C18色谱柱的规格为250mm×4.6mm，5μm。
3.根据权利要求1所述的二氟泼尼酯的色谱纯度测定方法，其特征在于，在步骤一中，色谱柱采用纯水作为流动相的无机相。
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