CN103364502A

CN103364502A - 一种二氟泼尼酯中有关物质的hplc测定方法

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Publication number: CN103364502A
Application number: CN2013102788999A
Authority: CN
Inventors: 冯光玲; 冯爱国; 丁文娟; 孔祥雨; 刘宪华
Original assignee: MEDICINE INDUSTRY INST SHANDONG PROV
Current assignee: MEDICINE INDUSTRY INST SHANDONG PROV
Priority date: 2013-07-04
Filing date: 2013-07-04
Publication date: 2013-10-23
Anticipated expiration: 2033-07-04
Also published as: CN103364502B

Abstract

本发明公开了一种二氟泼尼酯的检测方法，具体是采用二极管阵列检测器，以醋酸盐缓冲液（用醋酸调节pH值为3.5）-乙腈-甲醇溶液为流动相。取二氟泼尼酯及含二氟泼尼酯的相关制剂适量，加流动相配制成每1ml中含二氟泼尼酯0.5mg的溶液，作为供试品溶液。并用流动相稀释成每1ml中约含5μg的溶液，作为对照溶液。分别进样，供试品溶液色谱图中各杂质峰面积的和不得大于对照溶液的主峰面积。本发明二氟泼尼酯及含二氟泼尼酯的相关制剂的有关物质检测方法，可快速准确的检测出二氟泼尼酯的杂质及降解产物情况。操作简捷，灵敏度高，可较好地控制产品质量。

Description

一种二氟泼尼酯中有关物质的HPLC测定方法

技术领域

本发明涉及一种二氟泼尼酯及含二氟泼尼酯的相关制剂的有关物质检测方法，属于药物分析检测领域。

背景技术

二氟泼尼酯为一种眼科用消炎药，主要用于治疗眼科术后局部炎症和疼痛，化学名为6α,9difluoro-11β,17,21-trihydroxypregna-1,4-diene-3,20-dione 21-acetate 17butyrate。结构式如下：

分子式为：C₂₇H₃₄F₂O₇，分子量：508.5515，由于二氟泼尼酯在合成过程中有可能引入残留原料及其它有关物质，在储藏过程中还有可能产生降解产物，本法有效的对解离后的二氟泼尼酯进行纯度分析，本试验采用普通的色谱柱（C₁₈色谱柱）快速准确的实现了二氟泼尼酯有关物质的测定，保证了二氟泼尼酯的质量可控，在合成和制剂过程的质量控制方面具有重要的现实意义。目前尚未检索到

二氟泼尼酯有关物质的HPLC的测定方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种采用二极管阵列检测器对二氟泼尼酯及含二氟泼尼酯的相关制剂进行有关物质检查的测定方法。

本发明有关物质检查方法的实现包括以下步骤：

（1）色谱条件：检测器采用二极管阵列检测器，柱温30℃～40℃，流速1.0ml/min。色谱条件的流动相由醋酸钠缓冲液（用醋酸调节pH值为3.5）-乙腈-甲醇组成，其配比为60:30:10。理论塔板数按二氟泼尼酯峰计算不低于3000。

（2）供试品溶液的制备：

取二氟泼尼酯或含二氟泼尼酯的相关制剂适量，加流动相配制成0.5mg/ml的溶液，作为供试品溶液。

（3）对照溶液的制备：

量取上述（2）供试品溶液适量，加流动相稀释成每1ml中约含5μg的溶液，作为对照溶液。

（4）测定方法：

取对照溶液10μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰高约为满量程的10%，再取供试品溶液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图至二氟泼尼酯主峰保留时间的2倍，供试品溶液色谱图中如有杂质峰，量取各杂质峰面积的和，不得大于对照溶液中主峰的峰面积（见附图1、附图2）。

本发明二氟泼尼酯及含二氟泼尼酯的相关制剂的有关物质检测方法，上述（2）中供试品溶液的制备：为满足供试品溶液检测浓度的需要，取二氟泼尼酯适量，用流动相配制成浓度为每1ml含0.5mg的溶液，作为供试品溶液。再分别用流动相稀释成一系列不同浓度的溶液，分别进样10μl，使之产生主峰为基线噪音三倍的信号。经试验，最小检知量为0.5ng（S/N≥3），若以有关物质检查时的浓度0.5mg/ml计算，其检出限度为0.1%。

本发明二氟泼尼酯及含二氟泼尼酯的相关制剂的有关物质检测方法，上述（3）中对照溶液的制备：精密量取上述供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，作为对照溶液。当该对照溶液浓度范围在1～10μg/ml内时，峰面积与浓度呈良好的线性关系，其线性相关系数为0.9999（见附图3）。

本发明二氟泼尼酯及含二氟泼尼酯的相关制剂的有关物质检测方法，其有关物质检测高效液相色谱图中，如有杂质峰出现，量取各杂质峰面积的和，应不得大于对照溶液的主峰面积（1%）。

本发明二氟泼尼酯及含二氟泼尼酯的相关制剂的有关物质检测方法，适用于各种需要进行有关物质检测的二氟泼尼酯及含二氟泼尼酯的相关制剂，如眼用乳液以及各种含二氟泼尼酯的复方制剂。

本发明的积极效果在于：

1、本发明使用二极管阵列检测器对本品进行有关物质检测，建立了一种快速直观的评价色谱峰纯度的有效方法: 可直观的判断色谱峰的纯度, 并判断存在干扰峰的位置, 能够获得“在流”的全部光谱信息, 快速得到色谱组分的吸收光谱, 二极管阵列检测器较一般的紫外-可见检测器, 优点在于不仅能依靠色谱的保留时间进行定性, 而且能够根据其提供的光谱信息进行定性, 大大提高了定性的可信度。

2、本发明适用于各种剂型的二氟泼尼酯及含二氟泼尼酯的相关制剂，如眼用乳液以及各种含二氟泼尼酯的复方制剂。

3、本发明检测方法准确，操作简捷，重现性好，灵敏度高，可以充分满足有关物质检查与分解产物测定的要求，较好地控制样品中的特殊杂质，保证产品质量，在工作中实用性强。

具体实施方式

实施例一：

1、色谱条件与系统适用性试验：

1.1、色谱条件的选择：

仪器：岛津:LC-20AT,SPD-M20A,SIL-20A，DGU-20A5，其最佳柱温35℃，流速1.0ml/min。液相色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（250mm×4.6mm，5μm），参照相关文献并结合试验具体情况，先后选用甲醇-水、乙腈-水、甲醇-水-冰醋酸、甲醇-乙腈-醋酸钠缓冲液溶液等多种条件，最终确定流动相由醋酸盐缓冲液（用醋酸调节pH值为3.5）-乙腈-甲醇组成，其最佳配比为（60∶30∶10）。进样量10μl。

在该色谱条件下，二氟泼尼酯主峰保留时间适中，峰形较好。

1.2、灵敏度测定取二氟泼尼酯对照品适量，用流动相配制成浓度为每1ml含0.5mg的溶液，再分别用流动相稀释成一系列不同浓度的溶液，分别进样10μl，使之产生主峰为基线噪音三倍的信号。经试验，最小检知量为0.5ng（S/N≥3），若以有关物质检查时的浓度0.5mg/ml计算，其检出限度为0.1%。结果证明，该方法灵敏度高，可以充分满足有关物质检查测定的要求。

1.3、溶液稳定性取同一份供试品溶液，分别于0、2、4、8、10小时分别进样测定，其主峰峰面积及有关物质测定结果在10小时内基本稳定。

以上试验结果表明，此方法简便灵敏，重现性好，可较好地对样品中二氟泼尼酯的质量进行较好地检测。

2、供试品溶液的制备：

3、对照溶液的制备：

4、二氟泼尼酯及含二氟泼尼酯的相关制剂有关物质的检测：

取对照溶液10μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰高约为满量程的10%，再取供试品溶液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图至二氟泼尼酯主峰保留时间的2倍，供试品溶液色谱图中如有杂质峰，量取各杂质峰面积的和，不得大于对照溶液中主峰的峰面积。

实施例二、二氟泼尼酯眼用乳液有关物质的测定

取本品内容物适量，精密量取（约相当于二氟泼尼酯5mg），加流动相配制成每1ml中含0.5mg的溶液，滤过，取滤液作为供试品溶液。精密量取适量，加流动相稀释成每1ml中约含5μg的溶液，作为对照溶液。在下列选定的色谱条件下：二极管阵列检测器（岛津:LC-20AT, SPD-M20A, SIL-20A，DGU-20A5），用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以醋酸盐缓冲液（用醋酸调节pH值为3.5）-乙腈-甲醇（60∶30∶10）为流动相，色谱柱温度为35℃，流速1.0ml/min。理论塔板数按二氟泼尼酯峰计算应不低于3000.取对照溶液10μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使对照溶液主峰高约为满量程的10%，再取供试品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。供试品溶液色谱图中如有杂质峰，量取各杂质峰面积的和，不得大于对照溶液的主峰面积。

表1. 二氟泼尼酯眼用乳液有关物质测定结果

批号第一批第二批第三批
	有关物质（%） 0.25 0.31 0.28

实施例三：复方二氟泼尼酯滴眼液有关物质的测定

取本品内容物适量，，精密量取（约相当于二氟泼尼酯5mg），加流动相配制成每1ml中含0.5mg的溶液，滤过，取滤液作为供试品溶液。精密量取适量，加流动相稀释成每1ml中约含5μg的溶液，作为对照溶液。在下列选定的色谱条件下：二极管阵列检测器（岛津:LC-20AT, SPD-M20A, SIL-20A，DGU-20A5），用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以醋酸盐缓冲液（用醋酸调节pH值为3.5）-乙腈-甲醇（60∶30∶10）为流动相，色谱柱温度为35℃，流速1.0ml/min。理论塔板数按二氟泼尼酯峰计算应不低于3000.取对照溶液10μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使对照溶液主峰高约为满量程的10%，再取供试品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。供试品溶液色谱图中如有杂质峰，量取各杂质峰面积的和，不得大于对照溶液的主峰面积。

表2. 复方二氟泼尼酯滴眼液有关物质测定结果

批号第一批第二批第三批
	有关物质（%） 0.32 0.29 0.34

实施例三：复方二氟泼尼酯滴耳剂有关物质的测定

取本品内容物适量，，精密量取（约相当于二氟泼尼酯5mg），加流动相配制成每1ml中含0.5mg的溶液，滤过，取滤液作为供试品溶液。精密量取适量，加流动相稀释成每1ml中约含5μg的溶液，作为对照溶液。在下列选定的色谱条件下：二极管阵列检测器（岛津:LC-20AT, SPD-M20A, SIL-20A，DGU-20A5），用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以醋酸盐缓冲液（用醋酸调节pH值为3.5）-乙腈-甲醇（60∶30∶10）为流动相，色谱柱温度为35℃，流速1.0ml/min。理论塔板数按二氟泼尼酯峰计算应不低于3000。取对照溶液10μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使对照溶液主峰高约为满量程的10%，再取供试品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。供试品溶液色谱图中如有杂质峰，量取各杂质峰面积的和，不得大于对照溶液的主峰面积。

表3. 复方二氟泼尼酯滴耳剂有关物质测定结果

批号第一批第二批第三批
	有关物质（%） 0.34 0.25 0.29

附图说明：

图1为对照溶液的HPLC图谱；

图2为供试品溶液的HPLC图谱；

图3为二氟泼尼酯杂质限度线性关系图。

Claims

1.一种二氟泼尼酯及含二氟泼尼酯的相关制剂的有关物质检测方法，其特征在于检测方法包括以下步骤；

（1）色谱条件：

采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以醋酸钠缓冲液（用醋酸调节pH值为3.5）-乙腈-甲醇溶液为流动相，流速为1.0 ml/min，理论塔板数按二氟泼尼酯峰计算不低于3000；

（2）供试品溶液的制备：

取二氟泼尼酯或含二氟泼尼酯的相关制剂适量，加流动相配制成0.5mg/ml的溶液，作为供试品溶液；

（3）对照溶液的制备：

量取上述（2）供试品溶液适量，加流动相稀释成每1ml中约含5μg的溶液，作为对照溶液；

（4）测定方法：

取对照溶液10μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰高约为满量程的10%，再取供试品溶液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图至二氟泼尼酯主峰保留时间的2倍，供试品溶液色谱图中如有杂质峰，量取各杂质峰面积的和，不得大于对照溶液中主峰的峰面积（1.0%）。

2.根据权利要求1所述的二氟泼尼酯或二氟泼尼酯的相关制剂的有关物质检测方法，其特征在于，其中（1）检测器采用二极管阵列检测器，柱温30℃～40℃，流速1.0ml/min，色谱条件的流动相由醋酸钠缓冲液（用醋酸调节pH值为3.5）-乙腈-甲醇组成，其配比为60:30:10。

3.根据权利要求1所述的二氟泼尼酯或含二氟泼尼酯的相关制剂的有关物质检测方法，其特征在于：其中（3）对照溶液的制备：取二氟泼尼酯相关制剂适量，加流动相配制成0.5mg/ml的溶液，作为供试品溶液，再精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，作为对照溶液。

4.根据权利要求1、2、3中任一所述的二氟泼尼酯或含二氟泼尼酯相关制剂的有关物质的检测方法，其特征在于，二氟泼尼酯或含二氟泼尼酯相关制剂的有关物质检测色谱图中如有杂质峰，量取各杂质峰面积的和，应不得大于对照溶液的主峰面积。

5.根据权利要求1、2、3、4中任一所述的二氟泼尼酯或含二氟泼尼酯相关制剂的有关物质检测方法，其特征在于：该方法适用于各种需要进行有关物质检测的二氟泼尼酯及含二氟泼尼酯相关制剂的有关物质检测方法，其特征在于：该方法适用于各种需要进行有关物质检测的二氟泼尼酯及含二氟泼尼酯的相关制剂，如眼用乳液以及各种二氟泼尼酯的复方制剂。