CN112946093B - 一种分离测定长春西汀及其手性异构体的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于药物分析领域,是一种采用高效液相色谱对长春西汀及其手性异构体进行分离测定的方法。其中包括分离测定时使用高效液相色谱的色谱条件及其耐用性的描述。长春西汀化学结构式:

Description

一种分离测定长春西汀及其手性异构体的方法
技术领域
本发明涉及药物分析领域,具体涉及长春西汀及其手性异构体的分离测定方法。
背景技术
长春西汀是从夹竹桃科植物小蔓长春花中提取的一种天然药物,属于吲哚类生物碱,长春胺的衍生物为脑循环代谢改善剂,能够改善大脑的血液循环,促进大脑的能量代谢。临床上长春西汀注射液主要用于脑梗死、脑卒中等脑血管疾病的治疗。
长春西汀于自70年代应用于临床,现广泛应用于德、英、法、美等国家,并作为神经科治疗性药物收入欧洲药典。
国内长春西汀注射液首研商品名为润坦,于2001年6月在我国率先上市,以安全、有效被专家、医患认可,全国在用医院近3000家。
化学名称:乙基(13as,13bs)-13a-乙基-2,3,5,6-13a,13b六氢-1H-吲哚[3,2,1-de]吡啶[3,2,1-ij][1,5]-二氮杂萘-12-羧酸。
化学结构式:
Figure GSB0000200699030000011
由上述长春西汀的结构式可知,长春西汀的结构中存在两个手性中心,因此会有一个对映异构体(异构体A)及两个非对映异构体(异构体B、异构体C)存在。
异构体A:
Figure GSB0000200699030000012
异构体B:
Figure GSB0000200699030000013
异构体C:
Figure GSB0000200699030000021
所以为了严格控制长春西汀注射液中异构体的含量,保证其使用到临床的安全性,需要对其手性异构体进行分离测定。
发明内容
本发明提供了一种采用高效液相色谱对长春西汀手性异构体进行分离测定的方法,能够有效分离长春西汀及其3个手性异构体,从而实现长春西汀中手性杂质的质量控制。该方法在一个色谱条件下即可分离测定长春西汀及其手性异构体,其精密度和耐用性优良。
长春西汀及其手性异构体的色谱分析法,采用如下的条件进行分离分析:
1)色谱条件:
色谱柱:大赛璐CHIRALPAK OD-3柱或大赛璐CHIRALPAK AD柱或大赛璐CHIRALPAKAD-H柱;
流动相:正己烷、有机溶剂B和二乙胺组成的三元流动相,正己烷、有机溶剂B和二乙胺的体积比为96-99∶0.1-4∶0.01-0.2,所述有机溶剂B为异丙醇、乙醇或其组合;
流动相的流速为:0.4-0.6mL/min;
柱温:20-30℃;
检测波长:270nm-280nm;
2)样品溶液配制:取待测样品采用色谱柱条件中所述流动相溶解并稀释,配置成样品溶液;
3)分离分析:取步骤2)的样品溶液5-10μL注入液相色谱仪,完成长春西汀及其异构体的分离和分析。
优选地,所述色谱柱为大赛璐CHIRALPAK OD-3柱、大赛璐CHIRALPAK AD柱或者大赛璐CHIRALPAK AD-H柱,均为多糖衍生物涂敷型手性色谱柱。
优选地,所述大赛璐CHIRALPAK OD-3柱的规格为4.6mm×150mm,3μm。
优选地,所述大赛璐CHIRALPAK AD柱和大赛璐CHIRALPAK AD-H柱的规格为4.6mm×250mm,5μm。
优选地,所述流动相为正己烷、异丙醇、二乙胺组成的三元流动相,正己烷、异丙醇、二乙胺的体积比为96∶4∶0.1。
优选地,所述流动相的流速为0.5mL/min。
优选地,用于色谱条件的检测波长为275nm。
本发明通过多次试验尝试,通过筛选不同的流动相组成和比例、不同填料的手性色谱柱、柱温、流速等,确定了一种有效分离长春西汀及其手性异构体的检测方法。
本发明曾尝试使用0.2mol/L乙酸铵的甲醇溶液作为流动相,并使用不同的色谱柱,调节柱温和流速等,结果显示均无法分离长春西汀及其3个异构体。于是改用了正己烷、乙醇或异丙醇和二乙胺组成的混合流动相,使得各组分出峰的分离度均在1.8以上,有效完成了长春西汀和其手性异构体的分离测定。
本发明提供的分离测定方法还有具有很好的耐用性,在色谱条件上都具有一定的变化幅度。可以在一个简单、准确的条件下将长春西汀及其三个异构体进行很好的分离,有效控制杂质含量,提高药品质量,广泛适用于生产当中。
附图说明
图1为实施例1的检测结果;
图2为实施例2的检测结果;
图3为实施例3的检测结果;
图4为实施例4的检测结果。
具体实施方式
实施例1
检测条件:
仪器:岛津LC-20A高效液相色谱仪;
色谱柱:大赛璐CHIRALPAK AD-H柱(4.6mm×250mm,5μm);
流动相:正己烷-乙醇-二乙胺(99∶1∶0.1);
稀释剂:正己烷-乙醇-二乙胺(99∶1∶0.1);
流速:0.5mL/min;
进样量:10μL;
检测波长:275nm;
柱温:25℃。
取待测样品采用色谱柱条件中所述流动相溶解并稀释,配置成样品溶液,精密量取样品溶液10μL,注入液相色谱仪,记录色谱图。检测结果如图1,各组分出峰顺序依次为异构体C、异构体B、异构体A和长春西汀,出峰的时间依次为12.002min、14.035min、21.683min和23.803min。各组分间的分离度依次为4.16、9.98和2.34,各色谱参数均符合要求。
实施例2
检测条件:
仪器:岛津LC-20A高效液相色谱仪;
色谱柱:大赛璐CHIRALPAK AD-H柱(4.6mm×250mm,5μm);
流动相:正己烷-异丙醇-二乙胺(96∶4∶0.01);
稀释剂:正己烷-异丙醇-二乙胺(96∶4∶0.01);
流速:0.6mL/min;
进样量:5μL;
检测波长:280nm;
柱温:30℃。
取待测样品采用色谱柱条件中所述流动相溶解并稀释,配置成样品溶液,精密量取样品溶液10μL,注入液相色谱仪,记录色谱图。检测结果如图2,各组分出峰顺序依次为异构体C、异构体B、异构体A和长春西汀,出峰的时间依次为11.523min、13.227min、21.828min和23.485min。
实施例3
检测条件:
仪器:岛津LC-20A高效液相色谱仪;
色谱柱:大赛璐CHIRALPAK OD-3柱(4.6mm×150mm,3μm);
流动相:正己烷-异丙醇-二乙胺(96∶4∶0.01);
稀释剂:正己烷-异丙醇-二乙胺(96∶4∶0.01);
流速:0.5mL/min;
进样量:10μL;
检测波长:275nm;
柱温:30℃。
取待测样品采用色谱柱条件中所述流动相溶解并稀释,配置成样品溶液,精密量取样品溶液10μL,注入液相色谱仪,记录色谱图。检测结果如图3,各组分出峰顺序依次为异构体C、异构体B、异构体A和长春西汀,出峰的时间依次为11.800min、13.838min、18.220min和21.418min。各组分间的分离度依次为3.91、2.00和2.15,各色谱参数均符合要求。
实施例4
检测条件:
仪器:岛津LC-20A高效液相色谱仪;
色谱柱:大赛璐CHIRALPAKAD柱(4.6mm×250mm,5μm);
流动相:正己烷-乙醇-二乙胺(96∶4∶0.01);
稀释剂:正己烷-乙醇-二乙胺(96∶4∶0.01);
流速:0.5mL/min;
进样量:10μL;
检测波长:270nm;
柱温:25℃。
取待测样品采用色谱柱条件中所述流动相溶解并稀释,配置成样品溶液,精密量取样品溶液10μL,注入液相色谱仪,记录色谱图。检测结果如图4,各组分出峰顺序依次为异构体C、异构体B、异构体A和长春西汀,出峰的时间依次为11.658min、12.635min、18.625min和22.275min。各组分间的分离度依次为1.94、8.85和4.13,各色谱参数均符合要求。

Claims (11)

1.一种分离测定长春西汀及其手性异构体的方法,其特征在于采用高效液相色谱法分析时,采用的色谱条件是:
1)色谱条件:
色谱柱:大赛璐CHIRALPAK OD-3柱或大赛璐CHIRALPAK AD柱或大赛璐CHIRALPAK AD-H柱;
流动相:正己烷、有机溶剂B和二乙胺组成的三元流动相,正己烷、有机溶剂B和二乙胺的体积比为96-99∶0.1-4∶0.01-0.2,所述有机溶剂B为异丙醇、乙醇或其组合;
流动相的流速为:0.4-0.6mL/min;
柱温:20-30℃;
检测波长:270nm-280nm;
2)样品溶液配制:取待测样品采用色谱柱条件中所述流动相溶解并稀释,配置成样品溶液;
3)分离分析:取步骤2)的样品溶液5-10μL注入液相色谱仪,完成长春西汀及其异构体的分离和分析。
2.根据权利要求1所述的一种分离测定长春西汀及其手性异构体的方法,其特征在于:所述的色谱柱为大赛璐CHIRALPAK OD-3柱。
3.根据权利要求1所述的一种分离测定长春西汀及其手性异构体的方法,其特征在于:所述的色谱柱为大赛璐CHIRALPAK AD柱。
4.根据权利要求1所述的一种分离测定长春西汀及其手性异构体的方法,其特征在于:所述的色谱柱为大赛璐CHIRALPAK AD-H柱。
5.根据权利要求1所述的一种分离测定长春西汀及其手性异构体的方法,其特征在于:所述的色谱柱大赛璐CHIRALPAK OD-3柱,其规格为4.6mm×150mm,3μm。
6.根据权利要求1所述的一种分离测定长春西汀及其手性异构体的方法,其特征在于:所述大赛璐CHIRALPAK AD柱和大赛璐CHIRALPAK AD-H柱,其规格为4.6mm×250mm,5μm。
7.根据权利要求1所述的一种分离测定长春西汀及其手性异构体的方法,其特征在于:所述流动相为正己烷、异丙醇、二乙胺组成的三元流动相,正己烷、异丙醇、二乙胺的体积比为96∶4∶0.01。
8.根据权利要求1所述的一种分离测定长春西汀及其手性异构体的方法,其特征在于:所述流动相为正己烷、乙醇、二乙胺组成的三元流动相,正己烷、乙醇、二乙胺的体积比为99∶1∶0.1。
9.根据权利要求1所述的一种分离测定长春西汀及其手性异构体的方法,其特征在于:所述流动相的流速为0.5mL/min。
10.根据权利要求1所述的一种分离测定长春西汀及其手性异构体的方法,其特征在于:用于色谱条件的检测波长为275nm。
11.根据权利要求1所述的一种分离测定长春西汀及其手性异构体的方法,其特征在于:样品溶液的进样量为10μL。
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