CN105548378A - 一种卡格列净α、β异构体的分离方法 - Google Patents
一种卡格列净α、β异构体的分离方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种卡格列净α、β异构体的分离方法,采用高效液相色谱仪,以C18柱为色谱柱,以乙腈与水组成的混合液为流动相,控制流动相的流速为0.80~1.20mL/min;色谱柱温度为20~40℃;进样量为10μL;检测波长为210nm?的条件下进行色谱分离;所述流动相按体积比计算,乙腈∶水为38~47∶53~62,先出峰的化合物为卡格列净β异构体,后出峰的化合物为卡格列净α异构体。本发明有效的实现了卡格列净α、β异构体的分离和测定,其分离度可达1.35~3.95。
Description
技术领域
本发明属于药物化学领域,涉及一种卡格列净α、β异构体,具体来说是一种卡格列净α、β异构体的分离方法。
背景技术
卡格列净又名坎格列净(Canagliflozin,结构式如下式所示),商品名为Invokana。化学名为(2S,3R,4R,5S,6R)-2-(3-((5-(4-氟苯基)噻吩-2-基)甲基)-4-甲基-苯基)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三醇,化学分子式为C24H25FO5S。卡格列净是是由强生旗下杨森制药公司开发的一种SGLT2抑制剂药物,能将葡萄糖分解后通过肾脏排出体外的方式来降低血糖水平,临床研究显示卡格列净单独治疗II型糖尿病时具有服用安全,耐受性好、有明显的减肥效果及良好的血糖控制。
卡格列净异构体分为α构型和β构型,但只有β构型卡格列净具有药理活性。经合成得到卡格列净产品中可能存在α构型杂质,影响药品的品质。因此控制α构型含量对于提高抗糖尿病类药物质量,保证广大用药者的安全性具有重要的意义。
发明内容
针对现有技术中的上述技术问题,本发明提供了一种卡格列净α、β异构体的分离方法,所述的这种卡格列净α、β异构体的分离方法解决了现有技术中的卡格列净产品中存在α构型杂质,影响药品的品质的技术问题。
本发明提供了一种卡格列净α、β异构体的分离方法,采用高效液相色谱仪,
以C18柱为色谱柱,以乙腈和水组成的混合液为流动相,采用如下的色谱分
离条件进行分离:
流动相流速为0.80~1.20mL/min;
色谱柱温度为20~40℃;
进样量为8~12μL;
检测波长为200~254nm;
所述流动相按体积比计算,乙腈:水为38~47:53~62。
进一步的,上述的一种卡格列净α、β异构体的分离方法的具体步骤为:称取卡格列净样品,在一个容器中加入乙腈和水组成的流动相,所述流动相按体积比计算,乙腈∶水为43∶57,所述的样品和流动相的质量体积比为20mg∶10mL,采用高效液相色谱仪,色谱分离条件为:流动相流速为1.00mL/min;色谱柱温度为25℃;进样量为10μL;检测波长为210nm;先出峰的化合物为卡格列净β异构体,后出峰的化合物为卡格列净α异构体。
进一步的,所述的色谱柱为PhenomenexLuna5μC18(2)100A柱。
具体的,色谱柱为PhenomonexLuna5μC18(2)100A250×4.6mm柱、PhenomonexGemini5μC18110A150×4.6mm柱、DIKMADiamonsil5μC18(2)250×4.6mm柱、AgilentZORBAX300SB-C183.5μm150×4.6mm柱,优选为PhenomonexLuna5μC18(2)100A250×4.6mm柱。
进一步的,所述的流动相流速为1.00mL/min。
进一步的,色谱柱温度为30℃。
进一步的,检测波长为210nm。
进一步的,所述的进样量为10μL。
进一步的,所述流动相按体积比计算,乙腈∶水=43∶57。
进一步的,所用的高效液相色谱仪为戴安UltiMate3000。
本发明由于采用了高效液相色谱法对卡格列净α、β构型进行分离,能够有效的将α、β构型在色谱图中完全分离,其分离度可达1.35~3.95,并准确的测出了其光学异构体的含量,解决了其质量控制问题,确保了最终产品卡格列净的质量,为工业化大生产带来了巨大的社会意义,具有很强的实用性。
本发明和已有技术相比,其技术进步是显著的。本发明的方法灵敏度高,分离度良好,结果准确可靠,适用于卡格列净的光学质量控制。
附图说明
图1为实施例1中卡格列净消旋体样品的色谱分离图,保留时间为15.038min的为β构型,保留时间为16.733min的为其对应的α构型,两者的分离度为3.62。
图2为实施例2、3、4中卡格列净消旋体样品的色谱分离图,保留时间为14.808min的为β构型,保留时间为16.568min的为其对应的α构型,两者的分离度为3.77。
图3为实施例5中卡格列净单构型的色谱分离图,保留时间为14.773min的为β构型。
具体实施方式
下面通过具体实施例子并结合附图对本发明进一步阐述,但并不限制本发明。
实施例所用到的仪器的型号及生产厂家的信息如下:
戴安(DIONEX)UltiMate3000,含UltiMate3000Pump,UltiMate3000Autosampler,UltiMate3000ColumnCompartment,UltiMate3000PhotodiodeArrarydetector,Chromeleon工作站,美国戴安公司;
UltraSonicCleanerUSKType超声波清洗器;
色谱柱:Luna5μC18(2)100A250×4.6mm,广州费罗门科学仪器有限公司;Gemini5μC18(2)100A250×4.6mm,广州费罗门科学仪器有限公司;ZORBAX300SB-C183.5μm150×4.6mm,美国安捷伦有限公司;DIKMADiamonsil5μC18(2)250×4.6mm,北京迪马科技有限公司。
实施例1
一种卡格列净α、β异构体的高效液相色谱分离方法,其步骤如下:取卡格列净消旋体标准样品约20mg,置于10mL的容量瓶中,加乙腈-水溶解定容至刻度,作为待测样品溶液;即采用高效液相色谱仪,以乙腈和水组成的混合液为流动相,采用如下的色谱柱和分离条件进行分离:
色谱柱分别为PhenomonexLuna5μC18(2)100A250×4.6mm柱、PhenomonexGemini5μC18110A150×4.6mm柱、DIKMADiamonsil5μC18(2)250×4.6mm柱、AgilentZORBAX300SB-C183.5μm150×4.6mm柱;
流动相流速为1.0mL/min;
色谱柱温度为30℃;
进样量为10μL;
检测波长为210nm;
流动相乙腈∶水为43%∶57%。
色谱分离结果如表所示:
表中t1为β构型的保留时间,t2为α构型保留时间。
从上表的结果可以看出,本实施例中色谱柱的型号和生产厂家的不同对色谱峰分离度有影响。综合保留时间和分离度,选择PhenomonexLuna5μC18(2)100A250×4.6mm柱为卡格列净α、β异构体高效液相色谱分离的最佳色谱柱;分离结果见图1。
实施例2
分离色谱柱,采用如下分离条件进行分离:
流动相乙腈∶水为38~47%∶53~62(V∶V)
流动相流速为1.0mL/min;
色谱柱温度为25℃;
进样量为10μL;
检测波长为210nm;
色谱分离结果如表所示:
从上表的结果可以看出,本实施例中研究的一系列流动相比例对色谱峰分离度有影响。随着乙腈含量的增加,虽在乙腈∶水=41∶59有较大的分离度,但保留时间较长。综合保留时间和分离度两方面的因素,最后选择相对较好的流动相比例为乙腈∶水=43∶57;分离结果见图2。
实施例3
一种卡格列净α、β异构体的高效液相色谱分离方法,其步骤如下:取卡格列净消旋体标准样品约20mg,置于10mL的容量瓶中,加乙腈-水溶解定容至刻度,作为待测样品溶液,以PhenomonexLuna5μC18(2)100A250×4.6mm柱为分离色谱柱,采用如下分离条件进行分离:
色谱柱温度为20~40℃;
流动相流速为1.0mL/min;
进样量为10μL;
检测波长为210nm;
流动相乙腈∶水为43%∶57%(V∶V)。
色谱分离结果如表所示:
温度/℃ | t1/min | t2/min | R |
20 | 14.293 | 16.125 | 3.95 |
25 | 14.808 | 16.568 | 3.77 |
30 | 15.038 | 16.733 | 3.62 |
35 | 14.972 | 16.592 | 3.63 |
从上表的结果可以看出,本实施例中研究的一系列温度对色谱峰分离度有影响。随着乙腈含量的增加,虽在乙腈∶水=41∶59有较大的分离度,但是保留时间较长。综合保留时间和分离度两方面的因素,最后选择相对较好的流动相比例为乙腈∶水=43∶57;分离结果见图2。
实施例4
一种卡格列净α、β异构体的高效液相色谱分离方法,其步骤如下:取卡格列净消旋体标准样品约20mg,置于10mL的容量瓶中,加乙腈-水溶解定容至刻度,作为待测样品溶液,以PhenomonexLuna5μC18(2)100A250×4.6mm柱为分离色谱柱,采用如下分离条件进行分离:
流动相流速为0.8~1.2mL/min;
色谱柱温度为25℃;
进样量为10μL;
检测波长为210nm;
流动相乙腈∶水为43%∶57%(V/V)。
色谱分离结果如表所示:
流速mL/min | t1/min | t2/min | R |
0.8 | 18.125 | 20.302 | 3.80 |
0.9 | 16.187 | 18.133 | 3.62 |
1.0 | 14.808 | 16.568 | 3.77 |
1.1 | 13.297 | 14.892 | 3.51 |
1.2 | 12.180 | 13.633 | 3.46 |
从上表的结果可以看出,本实施例中研究的一系列的流速对色谱峰分离度有影响。随着流速的增加而增加,在1.0mL/min的流速下而达到最大后随着流速的增大而减小。综合保留时间和分离度两方面的因素,最后选择1.0mL/min为最佳流速;分离结果见图2。
实施例5
一种卡格列净α、β异构体的高效液相色谱分离方法中β构型出峰位置的标定,其步骤如下:
取标准品β构型卡格列净约20mg,置于10mL的容量瓶中,加乙腈-水溶解定容至刻度,作为待测样品溶液;
按照色谱条件:色谱柱:Luna,流动相:乙腈∶水(43∶57),流速1.00mL/min,柱温:25℃,紫外检测器波长210nm,进样量10μL,进行高效液相色谱法分析;色谱图分离结果见图3所示。
从图3中可以看出,保留时间为14.773min的为卡格列净,并与实施例1进行比较,由于实施例3与实施例1所用的液相方法相同,说明在实施例1以及其他实施例中后出峰的化合物为α构型,先出峰的化合物为β构型。
综上所述,本发明的一种卡格列净α、β异构体的高效液相色谱分离方法,可以有效的将卡格列净消旋体很好的分离,其分离度可达1.35~3.95。
以上所述仅是本发明的实施方式的举例,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明技术原理的前提下,还可以做出若干改进和变型,这些改进和变型也应视为本发明的保护范围。
Claims (9)
1.一种卡格列净α、β异构体的分离方法,其特征在于:采用高效液相色谱仪,以C18柱为色谱柱,以乙腈和水组成的混合液为流动相,采用如下的色谱分离条件进行分离:
流动相流速为0.80~1.20mL/min;
色谱柱温度为20~40℃;
进样量为8~12uL;
检测波长为200~254nm;
所述流动相按体积比计算,乙腈∶水为38~47∶53~62。
2.如权利要求1所述的一种卡格列净α、β异构体的分离方法,其特征在于:称取卡格列净样品,在一个容器中加入乙腈和水组成的流动相,所述流动相按体积比计算,乙腈:水为43∶57,所述的样品和流动相的质量体积比为20mg∶10mL,采用高效液相色谱仪,色谱分离条件为:流动相流速为1.00mL/min;色谱柱温度为25℃;进样量为10μL;检测波长为210nm;先出峰的化合物为卡格列净β异构体,后出峰的化合物为卡格列净α异构体。
3.如权利要求1所述的一种卡格列净α、β异构体的分离方法,其特征在于:所述的色谱柱为PhenomenexLuna5μC18(2)100A柱。
4.如权利要求1所述的一种卡格列净α、β异构体的分离方法,其特征在于:所述的流动相流速为1.00mL/min。
5.如权利要求1所述的一种卡格列净α、β异构体的分离方法,其特征在于:所述的色谱柱温度为30℃。
6.如权利要求1所述的一种卡格列净α、β异构体的分离方法,其特征在于:所述的进样量为10μL。
7.如权利要求1所述的一种卡格列净α、β异构体的分离方法,其特征在于:检测波长为210nm。
8.如权利要求1所述的一种卡格列净α、β异构体的分离方法,其特征在于:所述流动相按体积比计算,乙腈∶水=43∶57。
9.如权利要求1所述的一种卡格列净α、β旋光异构体的分离方法,其特征在于:所用的高效液相色谱仪为戴安UltiMate3000。
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