CN104237404A - 一种益心舒制剂中阿魏酸的含量测定方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种益心舒制剂中阿魏酸的含量测定方法，是以阿魏酸对照品为对照，以甲醇/乙腈：水/0.05％～5％磷酸水溶液/0.05％～5％冰醋酸＝15～35：85～65为流动相的高效液相色谱法。本发明提供的益心舒制剂中阿魏酸的含量测定方法，能够实现对阿魏酸含量的快速、准确、高重现性、高回收率的测定，与现有技术相比，本发明通过高效液相色谱法对益心舒制剂中阿魏酸成分的含量进行测定，本测定方法专属性强、精密度高、重复性好、回收率高、稳定性高、测量结果准确，达到了有效控制药物质量的目的，确保了产品质量的稳定以及临床用药的安全、有效。

Description

一种益心舒制剂中阿魏酸的含量测定方法

技术领域

本发明涉及一种益心舒制剂中阿魏酸的含量测定方法，属于药物成分检测领域。

背景技术

益心舒制剂由人参、麦冬、五味子、丹参、黄芪、川芎及山楂组成。益心舒制剂能够益气复脉，活血化瘀，养阴生津。用于气阴两虚，心悸脉结代，胸闷不舒、胸痛及冠心病等。常用制剂形式为片剂、胶囊剂、口服液、口含片、颗粒剂、冲剂、丸剂、膏剂、散剂、丹剂等。其中，川芎是一种中药植物，具有活血行气，祛风止痛的功效。川芎中包含多种药用成分，阿魏酸是其中重要的有效成分之一。

阿魏酸在阿魏、当归、川芎、升麻、酸枣仁等中药材中的含量较高，是这些中药的有效成分之一，已经作为中成药的质量指标之一。近几年在药理药效方面的研究发现了许多阿魏酸及衍生物的药理作用和生物活性，且毒性较低，因而在医药、保健品、化妆品原料和食品添加剂等方面有着广泛的用途。

阿魏酸常用的检测分析方法有薄层扫描法、薄层分光光度计法、高效毛细管电泳法以及高效液相色谱法。其中高效液相色谱法因其优良的分离检测效果被广泛的应用。申请号为“200910227695.6”、名称为“高效液相色谱测定解郁丸中阿魏酸含量的方法”的专利中公开了一种测定解郁丸中阿魏酸含量的方法。《高效液相色谱法测定妇康宁片中阿魏酸的含量》(陈阿丽等，《中国当代医药》，2013年第28期)公开了一种利用高效液相色谱法测定妇康宁片中阿魏酸含量的方法。但是，现有技术中关于益心舒中阿魏酸含量的检测方法，尚未见到相关科技报道。因此，为了保证药品的质量的稳定性以及用药的安全性，有必要建立益心舒中阿魏酸含量的测定方法，以对益心舒产品的质量进行有效监测。

发明内容

为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种益心舒制剂中阿魏酸的含量测定方法，能够对益心舒制剂中阿魏酸成分的含量进行快速、准确、高重现性、高回收率的测定，从而保证测定的专属性强、精密度高、重复性好、回收率高、稳定性高、测量结果准确。

为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：

一种益心舒制剂中阿魏酸的含量测定方法，是以阿魏酸对照品为对照，以甲醇/乙腈：水/0.05％～5％磷酸水溶液/0.05％～5％冰醋酸＝15～35：85～65为流动相的高效液相色谱法。

具体的含量测定方法为：照高效液相色谱法、按下述步骤进行测定：

(1)色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇/乙腈：水/0.05％～5％磷酸水溶液/0.05％～5％冰醋酸＝15～35：85～65为流动相；检测波长为300～323nm；流速为0.8～1.0mL/min；柱温为25～35℃；理论板数以阿魏酸峰计算不低于4000；

(2)对照品溶液的制备：取阿魏酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加70％甲醇制成20μg/mL的溶液，作为阿魏酸对照品溶液；

(3)供试品溶液的制备：采用下述方法①～③中任一种；

①精密称取益心舒制剂或其内容物2～8g，置100mL具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇50mL，称定重量，超声或加热回流提取30～60min，用70％甲醇补足重量；滤过，取续滤液，即得；

②精密称取益心舒制剂或其内容物2～8g，置100mL具塞锥形瓶中，精密加入碱水25mL搅拌1h，滤过，滤饼再加上述碱水25mL搅拌1h，合并滤液，精密量取滤液25mL，滤液减压浓缩至原体积6％，加酸调节pH＝4，再加2倍量乙醚萃取两次，合并醚层，再用2倍量的3％碳酸钠萃取，碳酸钠萃取物再用上述酸调节pH＝4，收集不溶物，蒸干，残渣加70％甲醇溶解，并转移至25mL容量瓶中，加70％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；其中，碱水pH值为10～12，碱为氢氧化钙、氢氧化钡、氢氧化钠、氢氧化钾或氨水；酸为稀盐酸、稀硫酸、磷酸、醋酸、酒石酸或柠檬酸；

③精密称取益心舒制剂或其内容物2～8g，置100mL具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇50mL，称定重量，超声或加热回流提取30min～60min，用70％甲醇补足重量，精密量取续滤液25mL，浓缩至干，残渣加水25mL溶解，通过大孔吸附树脂柱，先用水洗脱水溶性杂质，再用乙醇洗脱，收集40％～80％的乙醇洗脱液，浓缩至干，残渣加70％甲醇溶解，并转移至25mL容量瓶中，加70％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；其中，大孔吸附树脂柱为D101、AB-8或HPD-100树脂柱；

(4)测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，测定，即得。

优选地，流动相为甲醇：0.1％磷酸水溶液＝28：72。

优选地，步骤(1)中检测波长为321nm。

益心舒制剂中阿魏酸的含量不少于0.02％。

本发明所述的益心舒制剂：川芎100～150g、山楂150～250g、黄芪150～250g和麦冬150～250g加水煎煮二次，每次2小时，第一次2.5小时，第二次1.5小时，滤过，合并滤液，浓缩至相对密度为1.10～1.15(80℃)，向浓缩液中加入一倍量的85％乙醇，混匀，静置，滤过，滤液浓缩，备用；将五味子100～150g与丹参250～300g加入85％乙醇回流提取二次，第一次3小时，第二次1.5小时，滤过，合并滤液，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.25～1.30(80℃)，得醇提浸膏，备用；将前述两种浸膏混合，加入人参细粉150～250g(或其醇提物)，混匀，干燥，粉碎，加入适量辅料制成任何一种药剂学上所说的剂型，如：片剂、胶囊剂、口服液、口含片、颗粒剂、冲剂、丸剂、膏剂、散剂、丹剂等制剂形式。

为确保本发明含量测定方法科学、合理、可行，通过进行一系列试验研究和考察，确定本发明的测定方法的各项操作条件，同时对测试结果进行监测。

一、主要仪器与试药(见表1)

表1 仪器与试剂表

二、方法与结果

1、色谱条件的选择

1.1柱温选择

为寻找最佳柱温，采用不同柱温进行实验，观察结果，结果见表2。

表2 柱温实验表

由表2可知，在25～35℃分离度良好，因而选择25～35℃作为柱温均可。

1.2流速选择

为寻找最佳流速范围，采用不同流速进行实验，记录色谱峰，结果见表3。

表3 色谱峰记录表

由表3可知，设置流速为0.8～1.0mL/min，各峰间的分辨率良好，色谱时间短，峰面积适中，效果最好。

1.3流动相选择

为寻找最佳流动相，采用不同流动相进行UV检测，记录色谱峰，结果见表4。

表4 不同流动相UV检测表

流动相	色谱峰
		乙腈：水＝15：85	峰形稍差，分离度高
乙腈：水＝35：65	峰形稍差，分离度较高
		甲醇：水＝15：85	峰形稍差，分离度较高
甲醇：水＝35：65	峰形稍差，分离度高
		甲醇：水＝28：72	峰形好，分离度高
乙腈：水＝20：80	峰形好，分离度高
		甲醇：0.1％磷酸水溶液＝30：70	产生鬼峰少，峰形较好，分离度高
乙腈：水＝70：30	峰形差，分离度低
		甲醇：0.05％磷酸水溶液＝25：75	峰形较好，分离度高
乙腈：0.05％磷酸水溶液＝18：82	峰形较好，分离度高
		甲醇：水＝75：25	峰形差，分离度低
甲醇：0.1％磷酸水溶液＝28：72	产生鬼峰少，峰形好，分离度高

由表4可知，选用甲醇：0.1％磷酸水溶液＝28：72作为流动相，其产生的鬼峰少，得到的峰形好且分离度高，为最佳条件。

2、对照品溶液的制备

取阿魏酸对照品适量，精密称定，加70％甲醇制成20μg/mL的溶液，作为阿魏酸对照品溶液；

3、供试品溶液的制备

方法一：精密称取益心舒制剂或其内容物2～8g(相当于阿魏酸1mg)，置100mL具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇50mL，称定重量，超声或加热回流提取30～60min，用70％甲醇补足重量；滤过，取续滤液，即得；

方法二：精密称取益心舒制剂或其内容物2～8g(相当于阿魏酸1mg)，置100mL具塞锥形瓶中，精密加入碱水25mL搅拌1h，滤过，滤饼同前法加碱水25mL搅拌1h，合并滤液，精密量取滤液25mL，滤液减压浓缩至原体积6％，加酸调pH＝4，再加2倍量乙醚萃取两次，合并醚层，再用2倍量的3％碳酸钠萃取，碳酸钠萃取物再用上述酸调pH＝4，收集不溶物，蒸干，残渣加70％甲醇溶解，并转移至25mL容量瓶中，加70％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。其中，碱水pH值为10～12，碱为氢氧化钙、氢氧化钡、氢氧化钠、氢氧化钾或氨水；酸为稀盐酸、稀硫酸、磷酸、醋酸、酒石酸或柠檬酸。

方法三：精密称取益心舒制剂或其内容物2～8g(相当于阿魏酸1mg)，置100mL具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇50mL，称定重量，超声或加热回流提取30min～60min，用70％甲醇补足重量，精密量取续滤液25mL，浓缩至干，残渣加水25mL使溶解，通过处理好的大孔吸附树脂柱，用水洗脱水溶性杂质，收集40％～80％的乙醇洗脱液，浓缩至干，残渣加70％甲醇溶解，并转移至25mL容量瓶中，加70％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。其中大孔吸附树脂柱为D101、AB-8或HPD-100树脂柱。

对三种供试品制备方法进行比较，结果如表5所示：

表 5

由表5可知，通过方法一准备供试品，步骤简单操作方便，提取效率高，但是纯度稍低；采用方法二和方法三准备供试品，步骤繁琐，提取效率稍低，但提取的阿魏酸纯度高，杂质残留量低，降低了测试过程中杂质的影响力，更利于保证测试结果的准确性和稳定性。

4、检测波长的选择

在300nm～323nm对阿魏酸对照品溶液进行光谱紫外扫描，其在321nm处有极大吸收波长，其它阿魏酸制剂溶液在此波长下也有较好的显示，因此本发明中阿魏酸检测波长优选为321nm。

5、标准曲线的建立

分别精密量取阿魏酸对照品溶液60μL、120μL、240μL、360μL、480μL、600μL，加70％甲醇稀释定容至1mL，各进样10μL，注入高效液相色谱仪，测定峰面积，以不同浓度的阿魏酸对照品溶液相应的峰面积对浓度绘制标准曲线，并进行线性回归，计算得回归方程为Y＝5.6321×10³X+3.2578×10³，r＝0.9999，结果表明阿魏酸在0.120～0.600μg范围内呈良好线性关系。

6、精密度实验

按照对照品溶液的制备项下方法制得对照品溶液，取对照品溶液10μL，重复进样6次，计算得阿魏酸峰面积RSD为0.27％(n＝6)，表明该方法精密度良好。

7、稳定性实验

按照供试品溶液的制备项下方法制得供试品溶液，精密吸取同一供试品溶液，室温下分别于0、2、4、8、12、24h各吸10μL，共进样6次，计算得阿魏酸峰面积的RSD为0.83％(n＝6)，表明处理后的溶液在室温下24h内稳定，稳定性良好。

8、重复性实验

按照供试品溶液的制备项下方法制得供试品溶液，取同一样品溶液6份，各进样10μL，计算得峰面积的RSD为0.42％，表明重复性良好。

9、加样回收率实验

精密称取已知含量的益心舒制剂6份，分别精密加入阿魏酸对照品，按供试品溶液的制备方法制备，并进样测定，测定结果见表6，计算其平均回收率为99.80％，RSD为1.26％，回收率高，表明本方法可行。

表6 加样回收率实验结果

10、样品含量测定

取5批益心舒制剂或其内容物适量，精密称定，分别按对照品溶液的制备项、供试品溶液的制备项下方法进行制备，按线性关系的考察项下含量测定(供试品溶液、对照品溶液分别进样10μL)，计算出阿魏酸的含量，结果见表7。

表7 样品含量测定结果(n＝5)

样品批号	平均含量(mg/g)
		20110601	0.233
20110602	0.247
		20110603	0.295
20110604	0.287
		20110605	0.254

本发明的有益效果：本发明提供的益心舒制剂中阿魏酸的含量测定方法，能够实现对阿魏酸含量的快速、准确、高重现性、高回收率的测定，与现有技术相比，本发明通过高效液相色谱法对益心舒制剂中阿魏酸成分的含量进行测定，本测定方法专属性强、精密度高、重复性好、回收率高、稳定性高、测量结果准确，达到了有效控制药物质量的目的，确保了产品质量的稳定以及临床用药的安全、有效。

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明作进一步的介绍。

实施例1益心舒制剂中阿魏酸的含量测定方法，按照以下步骤测定：

(1)色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇：水＝15：85为流动相；检测波长为310nm；流速为0.8mL/min；柱温为25℃；理论板数以阿魏酸峰计算不低于4000；

(2)对照品溶液的制备：取阿魏酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加70％甲醇制成20μg/mL的溶液，作为阿魏酸对照品溶液；

(3)供试品溶液的制备：精密称取益心舒制剂或其内容物2g，置100mL具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇50mL，称定重量，超声提取30min，用70％甲醇补足重量；滤过，取续滤液，即得；

(4)测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，测定，即得。

实施例2益心舒制剂中阿魏酸的含量测定方法，按照以下步骤测定：

(1)色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇：0.1％磷酸水溶液＝35：65为流动相；检测波长为323nm；流速为1.0mL/min；柱温为30℃；理论板数以阿魏酸峰计算不低于4000；

(2)对照品溶液的制备：取阿魏酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加70％甲醇制成20μg/mL的溶液，作为阿魏酸对照品溶液；

(3)供试品溶液的制备：精密称取益心舒制剂或其内容物8g，置100mL具塞锥形瓶中，精密加入pH值为10的氢氧化钠水溶液25mL搅拌1h，滤过，滤饼再加上述pH值为10的氢氧化钠水溶液25mL搅拌1h，合并滤液，精密量取滤液25mL，滤液减压浓缩至原体积6％，加稀盐酸调节pH＝4，再加2倍量乙醚萃取两次，合并醚层，再用2倍量的3％碳酸钠萃取，碳酸钠萃取物再用上述稀盐酸调节pH＝4，收集不溶物，蒸干，残渣加70％甲醇溶解，并转移至25mL容量瓶中，加70％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

(4)测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，测定，即得。

实施例3益心舒制剂中阿魏酸的含量测定方法，按照以下步骤测定：

(1)色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇：1％冰醋酸＝30：70为流动相；检测波长为320nm；流速为0.9mL/min；柱温为35℃；理论板数以阿魏酸峰计算不低于4000；

(2)对照品溶液的制备：取阿魏酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加70％甲醇制成20μg/mL的溶液，作为阿魏酸对照品溶液；

(3)供试品溶液的制备：精密称取益心舒制剂或其内容物5g，置100mL具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇50mL，称定重量，超声提取40min，用70％甲醇补足重量，精密量取续滤液25mL，浓缩至干，残渣加水25mL溶解，通过D101型大孔吸附树脂柱，先用水洗脱水溶性杂质，再用乙醇洗脱，收集40％～80％的乙醇洗脱液，浓缩至干，残渣加70％甲醇溶解，并转移至25mL容量瓶中，加70％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

(4)测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，测定，即得。

实施例4益心舒制剂中阿魏酸的含量测定方法，按照以下步骤测定：

(1)色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈：水＝20：80为流动相；检测波长为300nm；流速为0.8mL/min；柱温为32℃；理论板数以阿魏酸峰计算不低于4000；

(2)对照品溶液的制备：取阿魏酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加70％甲醇制成20μg/mL的溶液，作为阿魏酸对照品溶液；

(3)供试品溶液的制备：精密称取益心舒制剂或其内容物7g，置100mL具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇50mL，称定重量，加热回流提取45min，用70％甲醇补足重量；滤过，取续滤液，即得；

(4)测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，测定，即得。

实施例5益心舒制剂中阿魏酸的含量测定方法，按照以下步骤测定：

(1)色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈：0.05％磷酸水溶液＝25：75为流动相；检测波长为305nm；流速为0.9mL/min；柱温为28℃；理论板数以阿魏酸峰计算不低于4000；

(2)对照品溶液的制备：取阿魏酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加70％甲醇制成20μg/mL的溶液，作为阿魏酸对照品溶液；

(3)供试品溶液的制备：精密称取益心舒制剂或其内容物3g，置100mL具塞锥形瓶中，精密加入pH值为12的氢氧化钾水溶液25mL搅拌1h，滤过，滤饼再加上述pH值为12的氢氧化钾水溶液25mL搅拌1h，合并滤液，精密量取滤液25mL，滤液减压浓缩至原体积6％，加酒石酸调节pH＝4，再加2倍量乙醚萃取两次，合并醚层，再用2倍量的3％碳酸钠萃取，碳酸钠萃取物再用上述酒石酸调节pH＝4，收集不溶物，蒸干，残渣加70％甲醇溶解，并转移至25mL容量瓶中，加70％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

(4)测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，测定，即得。

实施例6益心舒制剂中阿魏酸的含量测定方法，按照以下步骤测定：

(1)色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈：5％冰醋酸＝18：82为流动相；检测波长为316nm；流速为1.0mL/min；柱温为35℃；理论板数以阿魏酸峰计算不低于4000；

(2)对照品溶液的制备：取阿魏酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加70％甲醇制成20μg/mL的溶液，作为阿魏酸对照品溶液；

(3)供试品溶液的制备：精密称取益心舒制剂或其内容物4g，置100mL具塞锥形瓶中，精密加入pH值为11的氢氧化钙水溶液25mL搅拌1h，滤过，滤饼再加上述pH值为11的氢氧化钙水溶液25mL搅拌1h，合并滤液，精密量取滤液25mL，滤液减压浓缩至原体积6％，加醋酸调节pH＝4，再加2倍量乙醚萃取两次，合并醚层，再用2倍量的3％碳酸钠萃取，碳酸钠萃取物再用上述醋酸调节pH＝4，收集不溶物，蒸干，残渣加70％甲醇溶解，并转移至25mL容量瓶中，加70％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

(4)测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，测定，即得。

实施例7益心舒制剂中阿魏酸的含量测定方法，按照以下步骤测定：

(1)色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈：2％磷酸水溶液＝32：68为流动相；检测波长为321nm；流速为1.0mL/min；柱温为30℃；理论板数以阿魏酸峰计算不低于4000；

(2)对照品溶液的制备：取阿魏酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加70％甲醇制成20μg/mL的溶液，作为阿魏酸对照品溶液；

(3)供试品溶液的制备：精密称取益心舒制剂或其内容物6g，置100mL具塞锥形瓶中，精密加入pH值为10的氨水25mL搅拌1h，滤过，滤饼再加上述pH值为10的氨水25mL搅拌1h，合并滤液，精密量取滤液25mL，滤液减压浓缩至原体积6％，加柠檬酸调节pH＝4，再加2倍量乙醚萃取两次，合并醚层，再用2倍量的3％碳酸钠萃取，碳酸钠萃取物再用上述柠檬酸调节pH＝4，收集不溶物，蒸干，残渣加70％甲醇溶解，并转移至25mL容量瓶中，加70％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

(4)测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，测定，即得。

实施例8益心舒制剂中阿魏酸的含量测定方法，按照以下步骤测定：

(1)色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇：1％冰醋酸＝30：70为流动相；检测波长为321nm；流速为0.8mL/min；柱温为25℃；理论板数以阿魏酸峰计算不低于4000；

(2)对照品溶液的制备：取阿魏酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加70％甲醇制成20μg/mL的溶液，作为阿魏酸对照品溶液；

(3)供试品溶液的制备：精密称取益心舒制剂或其内容物5g，置100mL具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇50mL，称定重量，超声提取50min，用70％甲醇补足重量；滤过，取续滤液，即得；

(4)测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，测定，即得。

实施例9益心舒制剂中阿魏酸的含量测定方法，按照以下步骤测定：

(1)色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇：0.1％磷酸水溶液＝28：72为流动相；检测波长为321nm；流速为1.0mL/min；柱温为35℃；理论板数以阿魏酸峰计算不低于4000；

(2)对照品溶液的制备：取阿魏酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加70％甲醇制成20μg/mL的溶液，作为阿魏酸对照品溶液；

(3)供试品溶液的制备：精密称取益心舒制剂或其内容物4g，置100mL具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇50mL，称定重量，加热回流提取35min，用70％甲醇补足重量，精密量取续滤液25mL，浓缩至干，残渣加水25mL溶解，通过AB-8型大孔吸附树脂柱，先用水洗脱水溶性杂质，再用乙醇洗脱，收集40％～80％的乙醇洗脱液，浓缩至干，残渣加70％甲醇溶解，并转移至25mL容量瓶中，加70％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

(4)测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，测定，即得。

实施例10益心舒制剂中阿魏酸的含量测定方法，按照以下步骤测定：

(1)色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇：0.1％磷酸水溶液＝28：72为流动相；检测波长为323nm；流速为0.9mL/min；柱温为30℃；理论板数以阿魏酸峰计算不低于4000；

(2)对照品溶液的制备：取阿魏酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加70％甲醇制成20μg/mL的溶液，作为阿魏酸对照品溶液；

(3)供试品溶液的制备：精密称取益心舒制剂或其内容物7g，置100mL具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇50mL，称定重量，超声提取55min，用70％甲醇补足重量，精密量取续滤液25mL，浓缩至干，残渣加水25mL溶解，通过HPD-100型大孔吸附树脂柱，先用水洗脱水溶性杂质，再用乙醇洗脱，收集40％～80％的乙醇洗脱液，浓缩至干，残渣加70％甲醇溶解，并转移至25mL容量瓶中，加70％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

(4)测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，测定，即得。

Claims (7)

1.一种益心舒制剂中阿魏酸的含量测定方法，其特征在于：所述方法是以阿魏酸对照品为对照，以甲醇/乙腈：水/0.05％～5％磷酸水溶液/0.05％～5％冰醋酸＝15～35：85～65为流动相的高效液相色谱法。

2.根据权利要求1所述的益心舒制剂中阿魏酸的含量测定方法，其特征在于：按照以下步骤测定：

(1)色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇/乙腈：水/0.05％～5％磷酸水溶液/0.05％～5％冰醋酸＝15～35：85～65为流动相；检测波长为300～323nm；流速为0.8～1.0mL/min；柱温为25～35℃；理论板数以阿魏酸峰计算不低于4000；

(2)对照品溶液的制备：取阿魏酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加70％甲醇制成20μg/mL的溶液，作为阿魏酸对照品溶液；

(3)供试品溶液的制备：采用下述方法①～③中任一种；

①精密称取益心舒制剂或其内容物2～8g，置100mL具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇50mL，称定重量，超声或加热回流提取30～60min，用70％甲醇补足重量；滤过，取续滤液，即得；

②精密称取益心舒制剂或其内容物2～8g，置100mL具塞锥形瓶中，精密加入碱水25mL搅拌1h，滤过，滤饼再加上述碱水25mL搅拌1h，合并滤液，精密量取滤液25mL，滤液减压浓缩至原体积6％，加酸调节pH＝4，再加2倍量乙醚萃取两次，合并醚层，再用2倍量的3％碳酸钠萃取，碳酸钠萃取物再用上述酸调节pH＝4，收集不溶物，蒸干，残渣加70％甲醇溶解，并转移至25mL容量瓶中，加70％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

③精密称取益心舒制剂或其内容物2～8g，置100mL具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇50mL，称定重量，超声或加热回流提取30min～60min，用70％甲醇补足重量，精密量取续滤液25mL，浓缩至干，残渣加水25mL溶解，通过大孔吸附树脂柱，先用水洗脱水溶性杂质，再用乙醇洗脱，收集40％～80％的乙醇洗脱液，浓缩至干，残渣加70％甲醇溶解，并转移至25mL容量瓶中，加70％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

(4)测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，测定，即得。

3.根据权利要求1或2所述的益心舒制剂中阿魏酸的含量测定方法，其特征在于：流动相为甲醇：0.1％磷酸水溶液＝28：72。

4.根据权利要求1或2所述的益心舒制剂中阿魏酸的含量测定方法，其特征在于：供试品溶液的制备方法②中碱水的pH值为10～12，所述碱为氢氧化钙、氢氧化钡、氢氧化钠、氢氧化钾或氨水；所述酸为稀盐酸、稀硫酸、磷酸、醋酸、酒石酸或柠檬酸。

5.根据权利要求1或2所述的益心舒制剂中阿魏酸的含量测定方法，其特征在于：供试品溶液的制备方法③中大孔吸附树脂柱为D101、AB-8或HPD-100树脂柱。

6.根据权利要求2所述的益心舒制剂中阿魏酸的含量测定方法，其特征在于：步骤(1)中检测波长为321nm。

7.根据权利要求2所述的益心舒制剂中阿魏酸的含量测定方法，其特征在于：益心舒制剂中阿魏酸的含量不少于0.02％。