CN107213173A - 一种多糖含量高的灵芝的加工方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种多糖含量高的灵芝的加工方法，对灵芝进行前处理后，用乙醇回流提取加热回流提取，滤过，提取液液加水，上大孔吸附树脂，加水洗脱后，再用洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，得醇提取液，备用；药渣再加入水提取，过滤，滤液浓缩成浓缩液后，与上述醇提取液合并，浓缩成浸膏，干燥，粉碎，0‑4℃下保藏，即可。本发明对灵芝的具体加工工艺进行了改进，使得灵芝的有效成分多糖容易测出，且测出的多糖含量高，使得灵芝的药效好。

Description

一种多糖含量高的灵芝的加工方法
技术领域
本发明涉及一种灵芝的加工方法，特别是一种多糖含量高的灵芝的加工方法。
背景技术
灵芝为多孔菌科真菌赤芝或紫芝的干燥子实体。灵芝是一种珍贵的药用真菌，属于担子菌纲多孔菌科灵芝属，在我国有两千多年的药用史。灵芝首载于《神农本草经》，历代医家都认为灵芝能治疗多种疾病，是滋补强壮扶正固本的珍贵药物。
灵芝多糖是灵芝中最有效的成分之一，存在于灵芝的子实体、孢子粉和菌丝体中，具有抑制肿瘤、增强机体对自由基清除的能力，故能减少自由基对机体的损伤、有延缓衰老之功效，还可以提高免疫力、抗炎症、降血脂、降血糖等作用。如果将灵芝进行加工，更能有利于灵芝药效的发挥，现有技术中对灵芝进行加工时，通常是直接将灵芝粉碎成粉，但是发明人在研究过程中发现，采用现有技术对灵芝进行加工时，灵芝的有效成分多糖不易测出，使得灵芝的的药效还不够理想。
发明内容
本发明的目的，是提供一种多糖含量高的灵芝的加工方法，本发明对灵芝的具体加工工艺进行了改进，使得灵芝的有效成分多糖容易测出，且测出的多糖含量高，使得灵芝的药效好。
本发明是这样实现的。
一种多糖含量高的灵芝的加工方法，对灵芝进行前处理后，用乙醇回流提取加热回流提取，滤过，提取液液加水，上大孔吸附树脂，加水洗脱后，再用洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，得醇提取液，备用；药渣再加入水提取，过滤，滤液浓缩成浓缩液后，与上述醇提取液合并，浓缩成浸膏，干燥，粉碎，0-4℃下保藏，即可。
前述的多糖含量高的灵芝的加工方法中，对灵芝进行前处理后，用6-8倍量70-80％乙醇加热回流提取2-3次，每次0.5-1.5小时，滤过，药渣备用，提取液减压回收乙醇，浓缩液加水至体积每毫升与药材量每克之比为1：1，上大孔吸附树脂，加水洗脱5-7倍柱体积，再用55-65％乙醇6-8倍柱体积洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，得醇提取液，备用；药渣再加入8-10倍量水提取2-3次，每次1-3小时，过滤，合并滤液，浓缩成浓缩液后，与上述醇提取液合并，浓缩至50-60℃时相对密度为1.10-1.20的浸膏，干燥，粉碎，0-4℃下保藏，即可。
前述的多糖含量高的灵芝的加工方法，所述前处理具体包括以下步骤：
(1)组织分裂：取灵芝子实体生长点，米粒大小的小块，放入培养基中并用培养基覆盖5-8cm，塞入试管塞，置于25-28℃的恒温箱中培养5-7天，剔除带杂的试管，得零代母种；
(2)提纯：取零代母种尖端生长点，即菌丝生长最前端1-2cm米粒大小的菌丝小块，放入培养基试管中，塞入试管塞，置于25-28℃的恒温箱中进行培养5-7天，剔除带杂的试管，得母种；
(3)质配：将母种转接入酸性培养基试管的中，塞入试管塞，放入25-28℃的恒温箱中培养5-7天，剔除带杂的试管；待种块萌发、进入菌丝交集后，将交集并扭结的菌索转接入培养基中，置于25-28℃的恒温箱中进行培养5-7天，选取灵芝子实体作为灵芝种源，进行扩大生产；
(4)复壮：将灵芝种源转接入培养基试管的中，塞入试管塞，放入25-28℃的恒温箱中培养5-7天，剔除带杂的试管；待种块萌发、进入菌丝交集后，将交集并扭结的菌索转接入培养基A中，置于25-28℃的恒温箱中进行培养5-7天，即得复壮后的母种；
(5)扩繁：将已复壮后的母种转接入培养基试管的中，塞入试管塞，放入25-28℃的恒温箱中培养5-7天，将已长满菌丝的试管放入3-5℃的冰箱中保存，即得扩繁后的母种；
(6)栽种：将扩繁好的试管种经过转接得栽培种，栽培种于大棚中，下地后30-40天采收即可。
前述的多糖含量高的灵芝的加工方法中，所述培养基按重量份计算，主要由葡萄糖10-30份、酵母膏1-8份、土豆150-250份、蛋白胨1-3份、琼脂12-32份、细胞分裂素0.2-0.6份、白术1-10份、苦参1-10份和铁筷子1-10份制成。
前述的多糖含量高的灵芝的加工方法中，所述培养基按重量份计算，主要由葡萄糖15-25份、酵母膏3-5份、土豆180-220份、蛋白胨1.5-2.5份、琼脂18-26份、细胞分裂素0.3-0.5份、白术3-7份、苦参3-7份和铁筷子3-7份制成。
前述的多糖含量高的灵芝的加工方法中，所述培养基按重量份计算，主要由葡萄糖20份、酵母膏4份、土豆200份、蛋白胨2份、琼脂22份、细胞分裂素0.4份、白术5份、苦参5份和铁筷子5份制成。
前述的多糖含量高的灵芝的加工方法中，所述培养基这样制备：
(1)白术、苦参和铁筷子加6-8倍量水，煎煮2-3h，过滤，取滤渣烘干后，粉碎成细颗粒，得A品；
(2)土豆切片，加5-7倍量水煮沸20-30分钟，过滤，滤渣加5-7倍量水继续，加热至50-60℃，得B品；
(3)B品中依次加入葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、细胞分裂素、A品和琼脂，边加边搅拌，搅匀后，得C品；
(4)C品分装至180ml试管的1/5，硅胶塞密封，6-8支用报纸包好，120-122℃下灭菌20-30min后，冷却至50-60℃，倾斜5-15度放置于20-35℃的烘箱中，放置24-48小时后，取出，即得。
前述的多糖含量高的灵芝的加工方法中，所述培养基这样制备：
(1)白术、苦参和铁筷子加7倍量水，煎煮2.5h，过滤，取滤渣烘干后，粉碎成细颗粒，得A品；
(2)土豆切片，加6倍量水煮沸25分钟，过滤，滤渣加6倍量水继续，加热至50-60℃，得B品；
(3)B品中依次加入葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、细胞分裂素、A品和琼脂，边加边搅拌，搅匀后，得C品；
(4)C品分装至180ml试管的1/5，硅胶塞密封，7支用报纸包好，120-122℃下灭菌25min后，冷却至50-60℃，倾斜10度放置于20-35℃的烘箱中，放置36小时后，取出，即得。
发明人对灵芝的加工工艺进行了长期的大量的研究发现，采用本发明方法对灵芝进行加工时，使得灵芝的有效成分多糖容易测出，且测出的多糖含量高，使得灵芝的药效好。因此本发明工艺促进了灵芝中有效成分的溶出率，特别是多糖的溶出率，多糖是灵芝中重要的成分，具有很强的药理活性，多糖的溶出率提高后，可有效提高灵芝的药效。
此外，申请人还对灵芝的培养基进行了研究，培养基是灵芝赖以生存的条件，不同的培养原料和配方可对灵芝的菌丝生长、产量和活性成分等产生重要的影响。现有技术中灵芝用的培养基中常以棉籽壳、木屑等为原料，这些原料常占总量的50％-80％，是主要原料，麸皮等原料所占比例较少，通常在10％-20％，但是这些原料本身营养成分少，不利于产出灵芝的品质保证。特别是不能保证灵芝中多糖的含量，使得最终得到的多糖含量低。因此，申请人对培养基的原料和制作工艺进行了研究，申请人发现，采用本发明中的培养基对灵芝进行培养时，也可以促进多糖的溶出，从而使得灵芝的药效更好。
申请人灵芝加工方法进行了大量的研究，部分实验如下：
实验例多糖含量测定
1测定项目：
1.1灵芝1：按实施例1加工得到的灵芝粉。
1.2灵芝2：加工方法同实施例1，但培养基中不含白术、苦参和铁筷子。
1.3灵芝3：将灵芝烘干后，直接粉碎得到的灵芝粉。
2方法
2.1苯酚溶液的配制
精确称量分析纯苯酚晶体5g于250m L，加入蒸馏水60m L，放入50℃水浴中使其溶解，再于100mL容量瓶中定容，即得5％苯酚溶液。苯酚可以被空气氧化，所以苯酚溶液现配现用。
2.2样品多糖提取方法
2.2.1灵芝1样品溶液：取灵芝1，0.5g于500mL烧杯中，加入15mL95％乙醇，于60℃恒温水浴槽中加热30分钟，过滤。重复以上操作两次，以除去单糖、双糖以及低聚糖等干扰性成分。经过滤后的样品于100℃沸水中提取一段时间，过滤后取滤液加蒸馏水定容至500mL。
2.2.2灵芝2样品溶液：取灵芝2，0.5g于500mL烧杯中，加入15mL95％乙醇，于60℃恒温水浴槽中加热30分钟，过滤。重复以上操作两次，以除去单糖、双糖以及低聚糖等干扰性成分。经过滤后的样品于100℃沸水中提取一段时间，过滤后取滤液加蒸馏水定容至500mL。
2.2.3灵芝3样品溶液：取灵芝3，0.5g于500mL烧杯中，加入15mL95％乙醇，于60℃恒温水浴槽中加热30分钟，过滤。重复以上操作两次，以除去单糖、双糖以及低聚糖等干扰性成分。经过滤后的样品于100℃沸水中提取一段时间，过滤后取滤液加蒸馏水定容至500mL。
2.3分光光度法测定多糖含量
2.3.1标准曲线的绘制。精确称量充分干燥过的分析纯葡萄糖50mg，加水定容至500mL容量瓶中，得到0.1mg/mL葡萄糖标准溶液。取50m L洗净的容量瓶6只。分别用移液管准确加入葡萄糖标准溶液5mL、10mL、15mL、20mL、25mL、30mL，加入蒸馏水定容，即得到浓度分别为0.01mg/mL、0.02mg/mL、0.03mg/mL、0.04mg/mL、0.05mg/mL、0.06mg/mL的葡萄糖标准溶液。测定时取1mL各浓度葡萄糖标准溶液加入到20mL具塞比色管中，迅速入5％苯酚溶液以及98％浓硫酸适量，摇匀后放置于室温下显色20min。另取lmL蒸馏水，同上加入苯酚溶液和浓硫酸，做空白参比溶液。在指定波长处测定吸光度值，绘制标准曲线，计算标准曲线方程和相关系数R。
2.3.2灵芝1多糖含量测定：取lm L灵芝1样品溶液加入到20mL具塞比色管中，采用与标准液显色相同方法依次加入苯酚溶液和浓硫酸，于特定波长处测定吸光度，将吸光度带入标准曲线方程，计算得出样品液浓度C。按下式计算出所取多糖含量，多糖含量(％)＝CV/m，C为样品液浓度，V为样品液体积，m为取样的质量。
2.3.3灵芝2多糖含量测定：取lm L灵芝2样品溶液加入到20mL具塞比色管中，采用与标准液显色相同方法依次加入苯酚溶液和浓硫酸，于特定波长处测定吸光度，将吸光度带入标准曲线方程，计算得出样品液浓度C。按下式计算出所取多糖含量，多糖含量(％)＝CV/m，C为样品液浓度，V为样品液体积，m为取样的质量。
2.3.4灵芝3多糖含量测定：取lm L灵芝3样品溶液加入到20mL具塞比色管中，采用与标准液显色相同方法依次加入苯酚溶液和浓硫酸，于特定波长处测定吸光度，将吸光度带入标准曲线方程，计算得出样品液浓度C。按下式计算出所取多糖含量，多糖含量(％)＝CV/m，C为样品液浓度，V为样品液体积，m为取样的质量。
3结果
3.1最大吸收波长的确定
取lmL 0.05m g/mL葡萄糖标准溶液，加入苯酚溶液和浓硫酸后反应一段时间后。在450-520nm波长区间进行光谱扫描，确定其最大吸收波长，发现在488nm波长处，所得吸光度值最大，无其他杂峰，则最佳测定波长选用488nm。
3.2苯酚溶液用量的确定
取相同浓度的葡萄糖标准液1mL于6支20mL具塞比色管中，分别加入0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL、1.2mL、1.4mL的5％苯酚溶液，再依次加入5mL 98％浓硫酸，混合摇匀。放置于20℃温度下显色30分钟，在488nm波长处测定吸光度值。当加入苯酚溶液1.0mL时，吸光度值最大，加入苯酚溶液过多反而会引起吸光度降低，所以实验中5％苯酚溶液的最佳加入量应当为1mL。
3.3浓硫酸用量的确定
取相同浓度的葡萄糖标准溶液lmL加入到五支编号的具塞比色管中，各加入5％苯酚溶液lmL，依次滴加浓硫酸4.0mL、4.5mL、5.0mL、5.5m、6.0mL。于488nm波长处测定其吸光度，发现硫酸加入量为5m L时所测得的吸光度值达到最大，加入硫酸过少则反应不够完全。加入硫酸过多可能导致其他副反应，导致测定结果降低，所以最佳硫酸加入量为5mL。
3.4显色温度的确定
分别取一定浓度葡萄糖标准液lmL加入到五支编号的具塞比色管中，各向其中加入5％苯酚溶液lmL，迅速滴加98％浓硫酸5mL，分别放于20℃、30℃、40℃、50℃、60℃温度下显色30min，在489nm波长处测定其吸光度。在各温度下，测得的吸光度基本不变，所以温度对反应吸光度基本无影响，在室温下就能够完全反应。
3.5显色时间的确定
分别取一定浓度葡萄糖标准液lmL加入到五支编号的具塞比色管中，各向其中加入5％苯酚溶液lmL，迅速滴加98％浓硫酸5mL，分别于室温下显色10min、20min、30min、40min、50min，在488nm波长处测定其吸光度。发现，反应10分钟吸光度值较小，显色时间从20到50分钟，样品溶液的吸光度基本不变，所以反应时间控制在20分钟以上就基本能够反应完全。所以反应时间控制在20分钟以上就能达到最佳效果。
综合以上测定结果，得出苯酚硫酸法最佳测定条件参数：1m样品液，5％苯酚溶液加入量为1m L，98％浓硫,酸加入量为5mL，显色温度室温即可，显色时间为20分钟以上，最大吸收波长为488nm。
3.6标准曲线的绘制
精确称量充分干燥过的分析纯葡萄糖50mg，加水定容至500mL容量瓶中，得到0.1mg/mL葡萄糖标准溶液。取50mL洗净的容量瓶6只，分别用移液管准确加入葡萄糖标准溶液5mL、10mL、15mL、20mL、25mL、30mL。加入蒸馏水定容，即得到浓度分别为0.01mg/m L、0.02mg/mL、0.03mg/mL、00.04mg/mL、0.05mg/mL、0.06mg/mL的葡萄糖标准溶液。测定时取1mL各浓度葡萄糖标准溶液加入到20mL具塞比色管中，迅速加入5％苯酚溶液以及98％浓硫酸适量，摇匀后放置于室温下显色20min。另取lmL蒸馏水，同上加入苯酚溶液和浓硫酸，做空白参比溶液。在指定波长处测定吸光度值，绘制标准曲线，计算标准曲线方程和相关系数R。准确称量葡萄糖0.0520g。标准曲线方程为y＝9.0803x-0.0385，相关系数R值为0.9984，线性较好，线性范围10.5-63.0ug/mL。
3.7重复性试验
采用苯酚硫酸法平行取样品溶液测定5次，得到RSD＝1.18％，说明精密度较高，能满足定量分析的要求。
3.8加标回收率
分别准确移取灵芝1样品溶液、灵芝2样品溶液和灵芝3样品溶液各0.5mL于20mL具塞比色管中，分别准确移取0.005mg/mL、0.010mg/mL、0.015mg/mL的标准溶液，0.5mL加入样液中，测定多糖含量计算平均回收率。平均回收率为97.64％，97.50％，97.61％。RSD为1.2％，1.1％，1.3％。回收率高，说明此法结果准确率高。
4含量测定结果
分别取灵芝1、灵芝2和灵芝3，平行分成6份，制成灵芝1样品溶液、灵芝2样品溶液和灵芝3样品溶液，按上述方法进行测定，记录数据，结果取平均值。得到结果见表1。
表1灵芝多糖含量测定结果
由表可知，本发明工艺得到的灵芝中多糖的含量较高。灵芝品质好。
与现有技术相比，本发明对灵芝的具体加工工艺进行了改进，使得灵芝的有效成分多糖容易测出，且测出的多糖含量高，使得灵芝的药效好。
具体实施方式
实施例1。
对灵芝进行前处理后，用7倍量75％乙醇加热回流提取3次，每次1小时，滤过，药渣备用，提取液减压回收乙醇，浓缩液加水至体积每毫升与药材量每克之比为1：1，上大孔吸附树脂，加水洗脱6倍柱体积，再用60％乙醇7倍柱体积洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，得醇提取液，备用；药渣再加入9倍量水提取2次，每次2小时，过滤，合并滤液，浓缩成浓缩液后，与上述醇提取液合并，浓缩至50-60℃时相对密度为1.10-1.20的浸膏，干燥，粉碎，0-4℃下保藏，即可。
所述前处理具体包括以下步骤：
1、组织分裂：取灵芝子实体生长点，米粒大小的小块，放入培养基中并用培养基覆盖5-8cm，塞入试管塞，置于25-28℃的恒温箱中培养6天，剔除带杂的试管，得零代母种；
2、提纯：取零代母种尖端生长点，即菌丝生长最前端1-2cm米粒大小的菌丝小块，放入培养基试管中，塞入试管塞，置于25-28℃的恒温箱中进行培养6天，剔除带杂的试管，得母种；
3、质配：将母种转接入酸性培养基试管的中，塞入试管塞，放入25-28℃的恒温箱中培养6天，剔除带杂的试管；待种块萌发、进入菌丝交集后，将交集并扭结的菌索转接入培养基中，置于25-28℃的恒温箱中进行培养6天，选取灵芝子实体作为灵芝种源，进行扩大生产；
4、复壮：将灵芝种源转接入培养基试管的中，塞入试管塞，放入25-28℃的恒温箱中培养6天，剔除带杂的试管；待种块萌发、进入菌丝交集后，将交集并扭结的菌索转接入培养基A中，置于25-28℃的恒温箱中进行培养6天，即得复壮后的母种；
5、扩繁：将已复壮后的母种转接入培养基试管的中，塞入试管塞，放入25-28℃的恒温箱中培养6天，将已长满菌丝的试管放入3-5℃的冰箱中保存，即得扩繁后的母种；
6、栽种：将扩繁好的试管种经过转接得栽培种，栽培种于大棚中，下地后30-40天采收即可。
上述培养基原料配比：葡萄糖200kg、酵母膏40kg、土豆2000kg、蛋白胨20kg、琼脂220kg、细胞分裂素4kg、白术50kg、苦参50kg和铁筷子50kg。
培养基制作方法，包括以下步骤：
(1)白术、苦参和铁筷子加7倍量水，煎煮2.5h，过滤，取滤渣烘干后，粉碎成细颗粒，得A品；
(2)土豆切片，加6倍量水煮沸25分钟，过滤，滤渣加6倍量水继续，加热至50-60℃，得B品；
(3)B品中依次加入葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、细胞分裂素、A品和琼脂，边加边搅拌，搅匀后，得C品；
(4)C品分装至180ml试管的1/5，硅胶塞密封，7支用报纸包好，120-122℃下灭菌25min后，冷却至50-60℃，倾斜10度放置于20-35℃的烘箱中，放置36小时后，取出，即得。
实施例2.
对灵芝进行前处理后，用8倍量80％乙醇加热回流提取3次，每次1.5小时，滤过，药渣备用，提取液减压回收乙醇，浓缩液加水至体积每毫升与药材量每克之比为1：1，上大孔吸附树脂，加水洗脱7倍柱体积，再用65％乙醇8倍柱体积洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，得醇提取液，备用；药渣再加入10倍量水提取3次，每次3小时，过滤，合并滤液，浓缩成浓缩液后，与上述醇提取液合并，浓缩至50-60℃时相对密度为1.10-1.20的浸膏，干燥，粉碎，0-4℃下保藏，即可。
所述前处理具体包括以下步骤：
1、组织分裂：取灵芝子实体生长点，米粒大小的小块，放入培养基中并用培养基覆盖5-8cm，塞入试管塞，置于25-28℃的恒温箱中培养7天，剔除带杂的试管，得零代母种；
2、提纯：取零代母种尖端生长点，即菌丝生长最前端1-2cm米粒大小的菌丝小块，放入培养基试管中，塞入试管塞，置于25-28℃的恒温箱中进行培养7天，剔除带杂的试管，得母种；
3、质配：将母种转接入酸性培养基试管的中，塞入试管塞，放入25-28℃的恒温箱中培养7天，剔除带杂的试管；待种块萌发、进入菌丝交集后，将交集并扭结的菌索转接入培养基中，置于25-28℃的恒温箱中进行培养7天，选取灵芝子实体作为灵芝种源，进行扩大生产；
4、复壮：将灵芝种源转接入培养基试管的中，塞入试管塞，放入25-28℃的恒温箱中培养7天，剔除带杂的试管；待种块萌发、进入菌丝交集后，将交集并扭结的菌索转接入培养基A中，置于25-28℃的恒温箱中进行培养7天，即得复壮后的母种；
5、扩繁：将已复壮后的母种转接入培养基试管的中，塞入试管塞，放入25-28℃的恒温箱中培养7天，将已长满菌丝的试管放入3-5℃的冰箱中保存，即得扩繁后的母种；
6、栽种：将扩繁好的试管种经过转接得栽培种，栽培种于大棚中，下地后40天采收即可。
上述培养基原料配比：葡萄糖300kg、酵母膏80kg、土豆2500kg、蛋白胨30kg、琼脂320kg、细胞分裂素6kg、白术100kg、苦参100kg和铁筷子100kg。
制作方法：具体包括以下步骤：
(1)白术、苦参和铁筷子加8倍量水，煎煮3h，过滤，取滤渣烘干后，粉碎成细颗粒，得A品；
(2)土豆切片，加7倍量水煮沸30分钟，过滤，滤渣加7倍量水继续，加热至50-60℃，得B品；
(3)B品中依次加入葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、细胞分裂素、A品和琼脂，边加边搅拌，搅匀后，得C品；
(4)C品分装至180ml试管的1/5，硅胶塞密封，6-8支用报纸包好，120-122℃下灭菌30min后，冷却至50-60℃，倾斜15度放置于20-35℃的烘箱中，放置48小时后，取出，即得。
实施例3.
对灵芝进行前处理后，用6倍量70％乙醇加热回流提取2次，每次0.5小时，滤过，药渣备用，提取液减压回收乙醇，浓缩液加水至体积每毫升与药材量每克之比为1：1，上大孔吸附树脂，加水洗脱5倍柱体积，再用55％乙醇6倍柱体积洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，得醇提取液，备用；药渣再加入8-10倍量水提取2次，每次1小时，过滤，合并滤液，浓缩成浓缩液后，与上述醇提取液合并，浓缩至50-60℃时相对密度为1.10-1.20的浸膏，干燥，粉碎，0-4℃下保藏，即可。
所述前处理具体包括以下步骤：
1、组织分裂：取灵芝子实体生长点，米粒大小的小块，放入培养基中并用培养基覆盖5-8cm，塞入试管塞，置于25-28℃的恒温箱中培养5-7天，剔除带杂的试管，得零代母种；
2、提纯：取零代母种尖端生长点，即菌丝生长最前端1-2cm米粒大小的菌丝小块，放入培养基试管中，塞入试管塞，置于25-28℃的恒温箱中进行培养5天，剔除带杂的试管，得母种；
3、质配：将母种转接入酸性培养基试管的中，塞入试管塞，放入25-28℃的恒温箱中培养5天，剔除带杂的试管；待种块萌发、进入菌丝交集后，将交集并扭结的菌索转接入培养基中，置于25-28℃的恒温箱中进行培养5天，选取灵芝子实体作为灵芝种源，进行扩大生产；
4、复壮：将灵芝种源转接入培养基试管的中，塞入试管塞，放入25-28℃的恒温箱中培养5天，剔除带杂的试管；待种块萌发、进入菌丝交集后，将交集并扭结的菌索转接入培养基A中，置于25-28℃的恒温箱中进行培养5天，即得复壮后的母种；
5、扩繁：将已复壮后的母种转接入培养基试管的中，塞入试管塞，放入25-28℃的恒温箱中培养5天，将已长满菌丝的试管放入3-5℃的冰箱中保存，即得扩繁后的母种；
6、栽种：将扩繁好的试管种经过转接得栽培种，栽培种于大棚中，下地后30天采收即可。
上述培养基原料配比：葡萄糖100kg、酵母膏10kg、土豆1500kg、蛋白胨10kg、琼脂120kg、细胞分裂素2kg、白术10kg、苦参10kg和铁筷子10kg。
制作方法：具体包括以下步骤：
(1)白术、苦参和铁筷子加6倍量水，煎煮2h，过滤，取滤渣烘干后，粉碎成细颗粒，得A品；
(2)土豆切片，加5倍量水煮沸20分钟，过滤，滤渣加5倍量水继续，加热至50-60℃，得B品；
(3)B品中依次加入葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、细胞分裂素、A品和琼脂，边加边搅拌，搅匀后，得C品；
(4)C品分装至180ml试管的1/5，硅胶塞密封，6-8支用报纸包好，120-122℃下灭菌20min后，冷却至50-60℃，倾斜5度放置于20-35℃的烘箱中，放置24小时后，取出，即得培养基。

Claims (8)

1.一种多糖含量高的灵芝的加工方法，其特征在于：对灵芝进行前处理后，用乙醇回流提取加热回流提取，滤过，提取液液加水，上大孔吸附树脂，加水洗脱后，再用洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，得醇提取液，备用；药渣再加入水提取，过滤，滤液浓缩成浓缩液后，与上述醇提取液合并，浓缩成浸膏，干燥，粉碎，0-4℃下保藏，即可。
2.如权利要求1所述的多糖含量高的灵芝的加工方法，其特征在于：对灵芝进行前处理后，用6-8倍量70-80％乙醇加热回流提取2-3次，每次0.5-1.5小时，滤过，药渣备用，提取液减压回收乙醇，浓缩液加水至体积每毫升与药材量每克之比为1：1，上大孔吸附树脂，加水洗脱5-7倍柱体积，再用55-65%乙醇6-8倍柱体积洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，得醇提取液，备用；药渣再加入8-10倍量水提取2-3次，每次1-3小时，过滤，合并滤液，浓缩成浓缩液后，与上述醇提取液合并，浓缩至50-60℃时相对密度为1.10-1.20的浸膏，干燥，粉碎，0-4℃下保藏，即可。
3.如权利要求1所述的多糖含量高的灵芝的加工方法，其特征在于：所述前处理具体包括以下步骤：
组织分裂：取灵芝子实体生长点，米粒大小的小块，放入培养基中并用培养基覆盖5-8cm，塞入试管塞，置于25-28℃的恒温箱中培养5-7天，剔除带杂的试管，得零代母种；
提纯：取零代母种尖端生长点，即菌丝生长最前端1-2cm米粒大小的菌丝小块，放入培养基试管中，塞入试管塞，置于25-28℃的恒温箱中进行培养5-7天，剔除带杂的试管，得母种；
质配：将母种转接入酸性培养基试管的中，塞入试管塞，放入25-28℃的恒温箱中培养5-7天，剔除带杂的试管；待种块萌发、进入菌丝交集后，将交集并扭结的菌索转接入培养基中，置于25-28℃的恒温箱中进行培养5-7天，选取灵芝子实体作为灵芝种源，进行扩大生产；
复壮：将灵芝种源转接入培养基试管的中，塞入试管塞，放入25-28℃的恒温箱中培养5-7天，剔除带杂的试管；待种块萌发、进入菌丝交集后，将交集并扭结的菌索转接入培养基A中，置于25-28℃的恒温箱中进行培养5-7天，即得复壮后的母种；
扩繁：将已复壮后的母种转接入培养基试管的中，塞入试管塞，放入25-28℃的恒温箱中培养5-7天，将已长满菌丝的试管放入3-5℃的冰箱中保存，即得扩繁后的母种；
栽种：将扩繁好的试管种经过转接得栽培种，栽培种于大棚中，下地后30-40天采收即可。
4.如权利要求3所述的多糖含量高的灵芝的加工方法，其特征在于：所述培养基按重量份计算，主要由葡萄糖10-30份、酵母膏1-8份、土豆150-250份、蛋白胨1-3份、琼脂12-32份、细胞分裂素0.2-0.6份、白术1-10份、苦参1-10份和铁筷子1-10份制成。
5.如权利要求4所述的多糖含量高的灵芝的加工方法，其特征在于：所述培养基按重量份计算，主要由葡萄糖15-25份、酵母膏3-5份、土豆180-220份、蛋白胨1.5-2.5份、琼脂18-26份、细胞分裂素0.3-0.5份、白术3-7份、苦参3-7份和铁筷子3-7份制成。
6.如权利要求5所述的多糖含量高的灵芝的加工方法，其特征在于：所述培养基按重量份计算，主要由葡萄糖20份、酵母膏4份、土豆200份、蛋白胨2份、琼脂22份、细胞分裂素0.4份、白术5份、苦参5份和铁筷子5份制成。
7.如权利要求4-6中任一项所述的多糖含量高的灵芝的加工方法，其特征在于：所述培养基这样制备：
（1）白术、苦参和铁筷子加6-8倍量水，煎煮2-3h，过滤，取滤渣烘干后，粉碎成细颗粒，得A品；
（2）土豆切片，加5-7倍量水煮沸20-30分钟，过滤，滤渣加5-7倍量水继续，加热至50-60℃，得B品；
（3）B品中依次加入葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、细胞分裂素、A品和琼脂，边加边搅拌，搅匀后，得C品；
（4）C品分装至180ml试管的1/5，硅胶塞密封，6-8支用报纸包好，120-122℃下灭菌20-30min后，冷却至50-60℃，倾斜5-15度放置于20-35℃的烘箱中，放置24-48小时后，取出，即得。
8.如权利要求7所述的多糖含量高的灵芝的加工方法，其特征在于：所述培养基这样制备：
（1）白术、苦参和铁筷子加7倍量水，煎煮2.5h，过滤，取滤渣烘干后，粉碎成细颗粒，得A品；
（2）土豆切片，加6倍量水煮沸25分钟，过滤，滤渣加6倍量水继续，加热至50-60℃，得B品；
（3）B品中依次加入葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、细胞分裂素、A品和琼脂，边加边搅拌，搅匀后，得C品；
（4）C品分装至180ml试管的1/5，硅胶塞密封，7支用报纸包好，120-122℃下灭菌25min后，冷却至50-60℃，倾斜10度放置于20-35℃的烘箱中，放置36小时后，取出，即得。
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