CN107142258A - Hpv检测中黏性样本dna提取方法 - Google Patents

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唐笑
田倩
何媛
周梅华
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Abstract

本发明提供一种HPV检测中黏性样本DNA提取方法。所述HPV检测中黏性样本DNA提取方法包括NaOH消化处理、生理盐水洗涤、悬浮沉淀、水浴加热等步骤。本发明提供的所述HPV检测中黏性样本DNA提取方法解决了现有技术的HPV检测过程中样本黏液含量过高导致DNA提取困难的技术问题。

Description

HPV检测中黏性样本DNA提取方法
技术领域
本发明涉及基因检测领域，具体涉及一种HPV检测中黏性样本DNA提取方法。
背景技术
人乳头瘤病毒（HPV）可以通过多种途径感染生殖道，从而导致尖锐湿疣以及宫颈病变，甚至可能引起宫颈癌的发生，从高危型HPV的持续感染到一般的宫颈癌前病变并最终发展为宫颈癌大约需要5~10年。因此，有针对性地进行HPV的分型检测对于宫颈癌的早期诊断和治疗具有重要意义。
目前大都常用的基因芯片技术在检测人乳头瘤病毒（HPV）时，会遇到样本中有大量宫颈黏液，对提取DNA操作时影响甚大。
在吸取样本时，如果遇到大量宫颈黏液，离心后没办法得到底部的沉淀，可能抑制扩增。同时，去上清时吸走黏液可能带走大部分宫颈脱落细胞，使结果呈假阴性。此外，如果为了破坏那些黏液加入过量细胞裂解液的话，很大可能会影响DNA模板含量，影响后续扩增、杂交。
发明内容
为解决现有技术的HPV检测过程中样本黏液含量过高导致DNA提取困难的技术问题，本发明提供一种解决上述问题的HPV检测中黏性样本DNA提取方法。
一种HPV检测中黏性样本DNA提取方法，运用所述HPV检测中黏性样本DNA提取方法需使用以下组分：
离心管、NaOH溶液、生理盐水、细胞裂解液。
所述HPV检测中黏性样本DNA提取方法包括以下步骤：
步骤一：吸取1mL黏性样本至所述离心管中；
步骤二：向所述离心管中加入100μL的所述NaOH溶液，振荡混匀后，消化处理一定时间；
步骤三：将所述离心管于13000rpm下离心10min后，去除上清液，保留细胞沉淀；
步骤四：向所述离心管中加入1mL所述生理盐水，反复吹打混匀；
步骤五：重复所述步骤三和所述步骤四；
步骤六：再次重复所述步骤三，然后向所述离心管中加入50μL细胞裂解液，悬浮所述细胞沉淀；
步骤七：将所述离心管沸水浴加热10min；
步骤八：将所述离心管于13000rpm下离心10min后，保留上清液作为检测样本。
在本发明提供的HPV检测中黏性样本DNA提取方法的一种较佳实施例中，所述NaOH溶液为1.75mol/L的NaOH溶液。
在本发明提供的HPV检测中黏性样本DNA提取方法的一种较佳实施例中，所述步骤二中消化处理10min。
相较于现有技术，本发明提供的所述HPV检测中黏性样本DNA提取方法具有以下有益效果：
一、所述HPV检测中黏性样本DNA提取方法采用NaOH溶液对宫颈黏液进行处理。宫颈黏液的主要成分是糖蛋白，一定浓度的NaOH溶液能有效的消化这部分蛋白质，使其转化为稀液，离心时上清液与底部沉淀正常分离，细胞裂解液也以正常量添加。保证了后续的扩增、杂交等操作的正常进行，以及最终检测结果的准确无误。
二、所述HPV检测中黏性样本DNA提取方法在消化处理后不使用酸性试剂中和处理，而利用生理盐水进行多次洗涤，使所述细胞沉淀处于趋向于中性的弱碱性环境。此环境中的DNA性状更为稳定，后续的检测操作也更为方便。
三、所述HPV检测中黏性样本DNA提取方法使得对黏性样本的处理具有了一套通用的处理方法，无需根据样本情况调整处理流程，提取效率得到明显改善，保证了实验结果，降低了复查率。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显 然，所描述的实施例仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施 例。
运用所述HPV检测中黏性样本DNA提取方法需使用以下组分：1.5mL的离心管、1.75mol/L的NaOH溶液、生理盐水、细胞裂解液。
所述HPV检测中黏性样本DNA提取方法包括以下步骤：
步骤一：吸取1mL黏性样本至所述离心管中；
步骤二：向所述离心管中加入100μL的所述NaOH溶液，振荡混匀后，消化处理10min；
步骤三：将所述离心管于13000rpm下离心10min后，去除上清液，保留细胞沉淀；
步骤四：向所述离心管中加入1mL所述生理盐水，反复吹打混匀；
步骤五：重复所述步骤三和所述步骤四；
步骤六：再次重复所述步骤三，然后向所述离心管中加入50μL细胞裂解液，悬浮所述细胞沉淀；
步骤七：将所述离心管沸水浴加热10min；
步骤八：将所述离心管于13000rpm下离心10min后，保留上清液作为检测样本。
相较于现有技术，本发明提供的所述HPV检测中黏性样本DNA提取方法具有以下有益效果：
一、所述HPV检测中黏性样本DNA提取方法采用NaOH溶液对宫颈黏液进行处理。宫颈黏液的主要成分是糖蛋白，一定浓度的NaOH溶液能有效的消化这部分蛋白质，使其转化为稀液，离心时上清液与底部沉淀可正常分离，细胞裂解液也以正常量添加。保证了后续的扩增、杂交等操作的正常进行，以及最终检测结果的准确无误。
二、所述HPV检测中黏性样本DNA提取方法在消化处理后不使用酸性试剂中和处理，而利用生理盐水进行多次洗涤，使所述细胞沉淀处于趋向于中性的弱碱性环境。此环境中的DNA性状更为稳定，后续的检测操作也更为方便。
三、所述HPV检测中黏性样本DNA提取方法使得对黏性样本的处理具有了一套通用的处理方法，无需根据样本情况调整处理流程，提取效率得到明显改善，保证了实验结果，降低了复查率。
以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其它相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围之内。

Claims (3)

1.一种HPV检测中黏性样本DNA提取方法，其特征在于，运用所述HPV检测中黏性样本DNA提取方法需使用以下组分：
离心管、NaOH溶液、生理盐水、细胞裂解液；
所述HPV检测中黏性样本DNA提取方法包括以下步骤：
步骤一：吸取1mL黏性样本至所述离心管中；
步骤二：向所述离心管中加入100μL的所述NaOH溶液，振荡混匀后，消化处理一定时间；
步骤三：将所述离心管于13000rpm下离心10min后，去除上清液，保留细胞沉淀；
步骤四：向所述离心管中加入1mL所述生理盐水，反复吹打混匀；
步骤五：重复所述步骤三和所述步骤四；
步骤六：再次重复所述步骤三，然后向所述离心管中加入50μL细胞裂解液，悬浮所述细胞沉淀；
步骤七：将所述离心管沸水浴加热10min；
步骤八：将所述离心管于13000rpm下离心10min后，保留上清液作为检测样本。
2.根据权利要求1所述的HPV检测中黏性样本DNA提取方法，其特征在于：所述NaOH溶液为1.75mol/L的NaOH溶液。
3.根据权利要求1所述的HPV检测中黏性样本DNA提取方法，其特征在于：所述步骤二中消化处理10min。
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