CN107074809A - 作为用于治疗阿尔茨海默病的bace1抑制剂的2‑氨基‑3,5‑二氟‑3,6‑二甲基‑6‑苯基‑3,4,5,6‑四氢吡啶 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及根据化学式(I)的化合物

Description

作为用于治疗阿尔茨海默病的BACE1抑制剂的2-氨基-3,5-二 氟-3,6-二甲基-6-苯基-3,4,5,6-四氢吡啶
发明领域
本发明提供了充当BACE1抑制剂的化合物。本发明的单独方面涉及包括所述化合物的药物组合物以及这些化合物治疗神经变性和认知障碍的用途。
背景技术
痴呆是临床综合征，其特征在于无法通过正常衰老解释的多个认知区缺陷、功能显著下降和无谵妄。另外，经常存在神经精神症状和病灶性神经发现。基于病因学，将痴呆进一步分类。阿尔茨海默病(AD)是痴呆的最常见原因，其次是混合型AD和血管性痴呆、路易体痴呆(DLB)以及额颞叶痴呆。β-淀粉样沉积物和神经原纤维缠结被认为是与AD相关的主要病理性表征，AD由记忆、认知、推理、判断以及定向丧失表征。随着疾病发展，还受影响的是运动、感觉和语言能力，直到出现多种认知功能的整体损害。β-淀粉样沉积物主要是Aβ肽的凝集体，该凝集体进而作为β-成淀粉样途径的一部分是淀粉样前体蛋白(APP)蛋白水解的产物。Aβ肽产生自由一种或多种γ-分泌酶在C-末端和β-分泌酶1(BACE1)在N-末端切割APP，该β-分泌酶1还称为天冬氨酰蛋白酶2。BACE1活性与从APP生成Aβ肽直接相关。
研究表明BACE1的抑制妨碍Aβ肽的产生。此外，BACE1与其底物APP共定位于高尔基体和胞吞区室中(威廉M(Willem M)等人，细胞与发育生物学研讨会(Semin.CellDev.Biol)，2009，20，175-182)。小鼠敲除研究已经证实了不存在淀粉样蛋白肽形成，同时这些动物是健康且能育的(大野M(Ohno M)等人，疾病神经生物学(Neurobiol.Dis.)，2007，26，134-145)。过量表达APP的小鼠中BACE1遗传消除已经证实了斑块形成的不存在和认知缺陷的逆转(大野M(Ohno M)等人，神经元(Neuron)；2004，41，27-33)。在散发性AD患者的脑中BACE1水平升高了(汉佩尔(Hampel)和沈(Shen)，临床与实验室研究斯堪的纳维亚杂志(Scand.J.Clin.Lab.Invest.)2009，69，812)。
这些汇聚的发现表明，BACE1的抑制可以作为用于治疗AD以及Aβ沉积的减少对其而言有益的障碍的治疗靶标。
阿斯利康公司(AstraZeneca)于2012年10月通告了AZD3839的发现，AZD3839是一种用于治疗AD的有效的BACE1抑制剂临床候选物(杰普逊，F.(Jeppsson,F.)等人，生物化学杂志(J.Biol.Chem.)，2012，287，41245-41257)。导致发现AZD3839的努力被进一步描述于吉恩曼，T.(Ginman,T.)等人，药物化学杂志(J.Med.Chem.)，2013，56，4181-4205中。吉恩曼(Ginman)公开物描述了克服与AZD3839的发现与鉴定相联系的问题。这些问题涉及这些化合物的弱的血脑屏障穿透性和P-糖蛋白介导的外排，从而导致缺乏脑暴露。
吉恩曼(Ginman)原稿假定脑暴露中的这些差异在很大程度上归因于核心结构并且提供了结构活性关系数据，其中根据核心亚型，将报道的化合物的体外特性给出于四个表中。在表4中，描述了一系列含脒化合物，这些化合物从活性视角被认为是令人感兴趣的。然而，数据暗示含脒核心未展示出有利的血脑屏障穿透曲线。
来自豪夫迈·罗氏公司(Hoffmann-La Roche)和锡耶纳生物技术(SienaBiotech)的研究人员也报道了含脒化合物的发现(沃尔特林，T.J(Woltering,T.J.)等人，生物有机化学与医药化学通讯(Bioorg.Med.Chem.Lett.)2013，23，4239-4243)。发现这些化合物(该文章中的化合物17和18)不具有任何体内作用(野生型小鼠脑中没有Aβ40减少)。
与吉恩曼(Ginman)等人和沃尔特林，T.J(Woltering,T.J.)等人的教导相反，本发明人已经发现了一系列脒化合物，这些脒化合物是脑穿透的。因此，本发明涉及具有BACE1抑制活性的新颖化合物、涉及其制备、涉及其医学用途并且涉及包括它们的药物。
发明概述
本发明的目的是提供抑制BACE1的化合物。因此，本发明涉及具有化学式I的化合物
其中Ar选自下组，该组由以下各项组成：苯基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、噁唑基、异噁唑基，并且其中该Ar任选地被一个或多个选自卤素、CN、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6氟烷基或C1-C6烷氧基的取代基取代；并且
R1是一个或多个氢、卤素、C1-C3氟烷基或C1-C3烷基；
或其药学上可接受的盐。
在一个实施例中，本发明提供了用于在治疗中使用的具有化学式I的化合物或其药学上可接受的盐。
本发明进一步提供了一种药物组合物，其包含具有化学式I的化合物或其药学上可接受的盐、以及药学上可接受的载体。
在一个实施例中，本发明提供了具有化学式I的化合物或其药学上可接受的盐在制造用于治疗神经变性或认知障碍的药物中的用途。
在一个实施例中，本发明提供了在治疗神经变性或认知障碍的方法中使用的具有化学式I的化合物或其药学上可接受的盐。
在一个实施例中，本发明提供了一种治疗神经变性或认知障碍的方法，该方法包括向对其有需要的患者给予治疗有效量的具有化学式I的化合物或其药学上可接受的盐。
下文即提供本发明的另外的实施例：
在一个实施例中，本发明的化合物具有化学式Ia或Ib
或其药学上可接受的盐。
在一个实施例中，R1是F或H，特别地是F。
在一个实施例中，本发明的化合物具有化学式Ia，并且R1是F。
在一个实施例中，Ar任选地被一个或多个选自F、Cl、Br、CN、C1-C3烷基、C1-C3氟烷基或C1-C3烷氧基的取代基取代。
在一个实施例中，Ar是任选地经取代的苯基。
在一个实施例中，Ar是任选地经取代的吡啶基。
在一个实施例中，Ar是任选地经取代的嘧啶基。
在一个实施例中，Ar是任选地经取代的吡嗪基。
在一个实施例中，Ar是任选地经取代的咪唑基。
在一个实施例中，Ar是任选地经取代的吡唑基。
在一个实施例中，Ar是任选地经取代的噻唑基。
在一个实施例中，Ar是任选地经取代的噁唑基。
在一个实施例中，Ar是任选地经取代的异噁唑基。
在一个实施例中，该化合物选自下组，该组由以下各项组成：
N-(3-((2R,3S,5S)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-氟吡啶酰胺，
N-(3-((2R,3S,5S)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-甲氧基吡嗪-2-甲酰胺，
N-(3-((2R,3S,5S)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-甲氧基吡啶酰胺，
N-(3-((2R,3S,5R)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-氟吡啶酰胺，
N-(3-((2R,3S,5R)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-甲氧基吡嗪-2-甲酰胺，
N-(3-((2R,3S,5R)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟苯基)-2-甲基噁唑-4-甲酰胺，
N-(3-((2R,3S,5R)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-甲氧基吡啶酰胺，
N-(3-((2R,3S,5R)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-(甲氧基-d3)吡啶酰胺，
N-(3-((2R,3S,5R)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-氯吡啶酰胺，
N-(3-((2R,3S,5R)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟苯基)-1-甲基-1H-咪唑-2-甲酰胺，
N-(3-((2R,3S,5R)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-(三氟甲基)吡嗪-2-甲酰胺，
N-(3-((2R,3S,5R)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟苯基)-4-甲基噻唑-2-甲酰胺，
N-(3-((2R,3S,5R)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟苯基)-2-(二氟甲基)噁唑-4-甲酰胺，
N-(3-((2R,3S,5R)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟苯基)-1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-甲酰胺，
N-(3-((2R,3S,5R)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-(二氟甲基)吡嗪-2-甲酰胺，
N-(3-((2R,3S,5R)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟苯基)-4-氯苯甲酰胺，
N-(3-((2R,3S,5R)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-氰基吡啶酰胺，
N-(3-((2R,3S,5R)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4,5-二氟苯基)-5-(甲氧基-d3)吡啶酰胺，
N-(3-((2R,3S,5S)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-(甲氧基-d3)吡啶酰胺，
N-(3-((2R,3S,5S)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-(甲氧基-d3)吡嗪-2-甲酰胺，
N-(3-((2R,3S,5S)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-氰基-3-甲基吡啶酰胺，
N-(3-((2R,3S,5S)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4,5-二氟苯基)-5-(甲氧基-d3)吡啶酰胺，
N-(3-((2R,3R,5S)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-(甲氧基-d3)吡啶酰胺，
N-(3-((2R,3S,5S)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-溴吡啶酰胺
或其药学上可接受的盐。
一个单独实施例涉及包括来自以上列表的化合物以及药学上可接受的载体的药物组合物。
另一个实施例涉及治疗神经变性或认知障碍的方法，该方法包括向对其有需要的患者给予治疗有效量的来自以上列表的化合物。
又一个实施例涉及来自以上列表的化合物用于制造用于治疗神经变性或认知障碍的药物的用途。
在一个实施例中，本发明提供了用于在疗法中使用的、来自以上列表的化合物。
本发明的又一个实施例涉及用于在治疗神经变性或认知障碍中使用的、来自以上列表的化合物。
发明的详细说明
本发明是基于以下发现：具有化学式I的化合物是BACE1的抑制剂，并且正因为如此，可用于治疗相关障碍。下文更加详细地解释本发明的某些方面，但是本说明书不旨在是可以实施本发明的所有不同方式或可以添加到本发明中的所有特征的详细编录。因此，以下说明旨在阐明本发明的一些实施例，并不旨在完全详尽地说明其所有排列、组合以及变化。
如在此所使用，术语“C1-C6烷基”是指具有从一个至六个(包含端值)碳原子的直链或支链饱和烃。C1-C6烷基的实例包括但不限于甲基、乙基、1-丙基、2-丙基、1-丁基、2-丁基、2-甲基-2-丙基、2-甲基-1-丙基、正戊基和正己基。类似地，术语“C1-C3烷基”是指具有从一个至三个(包含端值)碳原子的直链或支链饱和烃。C1-C3的实例包括但不限于甲基、乙基和正丙基。
同样地，术语“C1-C6烷氧基”是指具有从一个至六个(包含端值)碳原子并且开放原子价在氧上的直链或支链饱和烷氧基基团。C1-C6烷氧基的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、正丁氧基、叔丁氧基和正己氧基。“C1-C6烷氧基”任选地被一个或多个氟原子取代。
如在此所使用，术语“C1-C6氟烷基”是指具有从一个至六个(包含端值)碳原子的被一个或多个氟原子取代的直链或支链饱和烃。C1-C6氟烷基的实例包括但不限于三氟甲基、五氟乙基、1-氟乙基、单氟甲基、二氟甲基、1,2-二氟乙基和3,4-二氟己基。类似地，术语“C1-C3氟烷基”是指具有从一个至三个(包含端值)碳原子、每个碳原子被一个或多个氟原子取代的直链或支链饱和烃。
术语“卤素”是指氟、氯、溴和碘。
术语“C2-C6烯基”是指具有从两个至六个碳原子和一个双键的支链或非支链烯基基团，包括但不限于乙烯基、丙烯基和丁烯基。
术语“C2-C6炔基”应意指具有从两个至六个碳原子和一个三键的支链或非支链炔基基团，包括但不限于乙炔基、丙炔基和丁炔基。
如在此所使用，当应用于本发明的化合物时，短语“有效量”旨在表示足以引起预期的生物效应的量。当应用于本发明的化合物时，短语“治疗有效量”旨在表示足以改善、减轻、稳定、逆转、减慢或延缓障碍或疾病状态的进展、或者该障碍或疾病的症状的进展的该化合物的量。在一个实施例中，本发明提供了给予化合物组合的方法。在此类情况下，“有效量”是足以引起预期的生物效应的所述组合中的化合物的量。
如在此所使用，术语“治疗(treatment)”或“治疗(treating)”意指改善或逆转疾病或障碍的进展或严重性、或者改善或逆转这样的疾病或障碍的一种或多种症状或副作用。如在此所使用，“治疗(treatment)”或“治疗(treating)”还意指抑制或阻断，如延迟、阻止、限制、阻碍或妨碍疾病或障碍的系统、病症或状态的进展。出于本发明的目的，“治疗(treatment)”或“治疗(treating)”进一步意指一种用于获得有益的或希望的临床结果的方法，其中“有益的或希望的临床结果”包括但不限于症状的缓解、障碍或疾病程度的减小、稳定的(即没有恶化的)疾病或障碍状态、疾病或障碍状态的延缓或减慢、疾病或障碍状态的改善或减轻、以及疾病或障碍的缓解，不论是部分地或全部地。
本发明是基于以下发现：具有化学式I的化合物是BACE1的抑制剂，并且正因为如此，在治疗障碍方面有用，这些障碍的病理学特征包括β-淀粉样沉积物和神经原纤维缠结，例如神经变性或认知障碍。
如上所讨论，预期本发明的化合物在治疗阿尔茨海默病中有用，这是由于它们对β-淀粉样沉积物和神经原纤维缠结的作用。这包括家族性阿尔茨海默病，其中患者的特定基因上携带突变，这些基因与Aβ肽的产生密切相关。然而，重要的是注意到，Aβ肽的凝集体不限于家族性阿尔茨海默病，而是类似地，更普遍的散发性阿尔茨海默病的一个重要的病理生理特征[分子细胞神经科学(Mol Cell Neurosci)，66，3-11，2015]。
还认为本发明的化合物在治疗早期阿尔茨海默病中有用，即生物学和结构改变已经开始，但是该疾病的临床表现还未变得明显或未很好地发展的疾病阶段。事实上，早期阿尔茨海默病可在该疾病的任何临床体征变得明显之前开始多年。早期阿尔茨海默病包括前驱阿尔茨海默病、临床前阿尔茨海默病和轻度认知损害。尽管轻度认知损害可能与阿尔茨海默病无关，但它通常是阿尔茨海默病的过渡阶段或是因阿尔茨海默病而产生的。临床前和前驱阿尔茨海默病是无症状期，并且典型地它们通过阿尔茨海默病相关的生物标记的存在而诊断出来。在此背景下，认为本发明的化合物在减缓早期阿尔茨海默病的进展(例如，轻度认知损害到阿尔茨海默病)中有用。还认为本发明的化合物在治疗记忆丧失、注意力不足以及与阿尔茨海默病相关的痴呆中有用。
除了阿尔茨海默病的连续体之外，其他疾病的特征在于β-淀粉样沉积物和神经原纤维缠结。这包括例如21三体综合症，又称为唐氏综合症。罹患唐氏综合症的患者具有一条额外的21号染色体，该染色体包含淀粉样前体蛋白(APP)的基因。这条额外的21号染色体导致APP的过度表达，由此导致增高的Aβ肽水平，最终引起发展阿尔茨海默病的风险显著增加(见于唐氏综合症患者中)[阿尔茨海默病和痴呆(Alzheimer’s&Dementia)，11，700-709，201]。大脑淀粉样血管病的特征也在于中枢神经系统血管中β-淀粉样沉积物和神经原纤维缠结[药理学报告(Pharmacol Reports)，67，195-203，2015]，并且正因为如此，预期也可用本发明的化合物进行治疗。
在一个实施例中，本发明提供了一种治疗疾病的方法，该疾病选自阿尔茨海默病(家族性或散发性)、临床前阿尔茨海默病、前驱阿尔茨海默病、轻度认知损害、唐氏综合症和大脑淀粉样血管病，该方法包括向对其有需要的患者给予治疗有效量的具有化学式I的化合物或其药学上可接受的盐。
本发明进一步提供了抑制患者的BACE1的方法，该方法包括向对其有需要的患者给予治疗有效量的具有化学式I的化合物或其药学上可接受的盐。
本发明还提供了抑制淀粉样前体蛋白的β-分泌酶介导的裂解的方法，该方法包括向对这样的治疗有需要的患者给予治疗有效量的具有化学式I的化合物或其药学上可接受的盐。
在另外的实施例中，本发明提供了具有化学式I的化合物或其药学上可接受的盐在制造用于治疗疾病的药物中的用途，该疾病选自阿尔茨海默病(家族性或散发性)、临床前阿尔茨海默病、前驱阿尔茨海默病、轻度认知损害、唐氏综合症或大脑淀粉样血管病。
本发明还提供了具有化学式I的化合物或其药学上可接受的盐在制造用于抑制BACE1的药物中的用途。本发明进一步提供了具有化学式I的化合物或其药学上可接受的盐在制造用于抑制Aβ肽的产生或积累的药物中的用途。
在一个实施例中，本发明提供了在一种治疗疾病的方法中使用的具有化学式I的化合物或其药学上可接受的盐，该疾病选自阿尔茨海默病(家族性或散发性)、临床前阿尔茨海默病、前驱阿尔茨海默病、轻度认知损害、唐氏综合症或大脑淀粉样血管病。
在一个实施例中，本发明涉及在一种抑制BACE1的方法中或在一种抑制Aβ肽的产生或积累的方法中使用的具有化学式I的化合物或其药学上可接受的盐。
在另外的实施例中，本发明提供了适于以上治疗和用途中的任一种的药物制剂。
在一个实施例中，哺乳动物是人类。
在一个实施例中，该患者是人类患者。
本发明还包括本发明化合物的盐，典型地是药学上可接受的盐。此类盐包括药学上可接受的酸加成盐。酸加成盐包括无机酸和有机酸的盐。
适合的无机酸的代表性实例包括盐酸、氢溴酸、氢碘酸、磷酸、硫酸、氨基磺酸、硝酸以及类似物。适合的有机酸的代表性实例包括甲酸、乙酸、三氯乙酸、三氟乙酸、丙酸、苯甲酸、肉桂酸、柠檬酸、反丁烯二酸、乙醇酸、衣康酸、乳酸、甲烷磺酸(methanesulfonic)、马来酸、苹果酸、丙二酸、苯乙醇酸、草酸、苦味酸、丙酮酸、水杨酸、丁二酸、甲烷磺酸(methanesulfonic)、乙烷磺酸、酒石酸、抗坏血酸、帕莫(pamoic)酸、双亚甲基水杨酸、乙烷二磺酸、葡萄糖酸、柠康酸、天冬氨酸、硬脂酸、棕榈酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、乙醇酸、对氨基苯甲酸、谷氨酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、茶碱乙酸以及8-卤代茶碱(例如8-溴茶碱以及类似物)。药学上可接受的无机酸或有机酸加成盐的另外的实例包括在S.M.贝尔热(S.M.Berge)等人，药物科学杂志(J.Pharm.Sci.)，1977，66，2中列出的药学上可接受的盐。
此外，本发明的化合物能以未溶剂化形式存在以及以与药学上可接受的溶剂如水、乙醇等的溶剂化形式存在。
本发明的化合物可以具有一个或多个不对称中心并且意图在于，作为分离的、纯的或部分纯化的光学异构体的任何光学异构体(即对映异构体或非对映异构体)及其任何混合物(包括外消旋混合物)(即立体异构体的混合物)都被包括在本发明的范围内。
在此背景下，应该理解的是，当指明对映异构体形式时，则该化合物处于对映异构体过量，例如基本处于纯的形式。因此，本发明的一个实施例涉及具有至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少96％、优选至少98％的对映异构体过量的本发明的化合物。
可以通过已知方法将外消旋形式拆分为旋光对映体，例如通过用光学活性酸分离其非对映异构盐并且通过用碱处理来离析光学活性胺化合物。可以例如通过分步结晶来实现此类非对映异构体盐的分离。适于此目的的光学活性酸可以包括但不限于d-或l-酒石酸、苯乙醇酸或樟脑磺酸。另一种用于将外消旋体拆分为旋光对映体的方法是基于在光学活性基质上的色谱。本发明的化合物还可以通过从手性衍生化试剂(例如，手性烷基化或酰基化试剂)形成并色谱分离非对映异构体衍生物，随后裂解手性助剂来拆分。以上方法中的任一种都可以应用于拆分本发明的化合物的旋光对映体自身或应用于拆分合成的中间体的旋光对映体，然后可以通过在此描述的方法将其转化为作为本发明的化合物的光学活性拆分的终产物。
可以使用本领域的普通技术人员已知的用于拆分光学异构体的另外的方法。此类方法包括由J.杰奎斯(J.Jaques)、A.科勒特(A.Collet)和S.维伦(S.Wilen)在“对映异构体、外消旋体与拆分(Enantiomers,Racemates,and Resolutions)”，约翰威利父子(JohnWiley and Sons)，纽约，1981中讨论的那些。光学活性化合物还可以从光学活性起始材料制备。
本发明进一步提供了包含治疗有效量的具有化学式I的化合物或其药学上可接受的盐、以及药学上可接受的载体的药物组合物。本发明还提供了包括治疗有效量的披露于实验部分中的具体化合物之一以及药学上可接受的载体的药物组合物。
本发明的化合物能以单剂量或多剂量形式单独给予或与药学上可接受的载体或赋形剂组合给予。根据本发明的药物组合物可以用药学上可接受的载体或稀释剂以及任何其他已知的佐剂和赋形剂根据常规技术配制，这些常规技术是例如在以下中披露的技术：雷明顿：药学科学与实践(Remington:The Science and Practice of Pharmacy)，第22版，热纳罗(Gennaro)编，马克出版公司(Mack Publishing Co.)，伊斯顿，宾夕法尼亚州，2013。
用于经口给予的药物组合物包括固体剂型，例如胶囊、片剂、糖衣丸、丸剂、锭剂、粉剂以及颗粒剂。适当时，根据本领域中熟知的方法，这些组合物可以制备为具有包衣，例如肠溶衣，或者它们可以被配制以提供活性成分的控制释放，例如持续或长久释放。用于经口给予的液体剂型包括溶液、乳液、悬浮液、糖浆以及酏剂。用于肠胃外给予的药物组合物包括无菌水性及非水性可注射溶液、分散液、悬浮液或乳液以及欲在使用之前在无菌可注射溶液或分散液中重构的无菌粉剂。其他适合的给予形式包括但不限于栓剂、喷雾剂、软膏剂、乳膏剂、凝胶剂、吸入剂、皮肤贴片以及植入物。
典型的经口剂量范围从每日约0.01mg/kg体重至约100mg/kg体重。
本发明的化合物通常以游离碱或以其药学上可接受的盐形式利用。具有化学式I的化合物的药学上可接受的盐例如以常规方式通过用一摩尔当量的药学上可接受的酸处理具有化学式I的游离碱的溶液或悬浮液来制备。适合的有机酸及无机酸的代表性实例描述于上文。
适合的药物载体包括惰性固体稀释剂或填料、无菌水溶液以及不同有机溶剂。固体载体的实例包括乳糖、石膏粉、蔗糖、环糊精、滑石、明胶、琼脂、果胶、阿拉伯胶、硬脂酸镁、硬脂酸以及纤维素的低级烷基醚。液体载体的实例包括但不限于糖浆、花生油、橄榄油、磷脂、脂肪酸、脂肪酸胺、聚氧化乙烯以及水。类似地，该载体或稀释剂可以包括单独或与蜡混合的本领域中已知的任何持续释放物质，例如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。通过组合具有化学式I的化合物或其药学上可接受的盐与药学上可接受的载体而形成的药物组合物以多种适于所披露的给予途径的剂型容易地给予。这些制剂可以方便地通过药学领域已知的方法以单位剂型呈现。
若将固体载体用于经口给予，则该制剂可以被压片、以粉剂或丸粒形式置于硬明胶胶囊中或它可呈糖锭或锭剂形式。固体载体的量将广泛变化，但将在每剂量单位从约25mg至约1g的范围。若使用液体载体，则该制剂可以呈糖浆、乳液、软明胶胶囊或无菌可注射液体(例如水性或非水性液体悬浮液或溶液)的形式。
本发明的化合物证实于BACE1的有效抑制剂的实例中，并且能够降低大鼠脑和血浆中的Aβ肽的水平，并且因此认为在治疗神经变性和认知障碍中，所述化合物是有用的，这些障碍的病理学特征包括Aβ沉积物和神经原纤维缠结，例如像阿尔茨海默病。将本发明的化合物与在治疗此类疾病例如阿尔茨海默病中有用的另一治疗范例组合会是有益的。
τ蛋白在神经元中是丰富的。τ蛋白是可溶的并且高度磷酸化不稳定的，并且结合微管蛋白，提供微管蛋白组件的调节和调制，即最终提供微管结构和稳定性。在最脱磷酸化状态中，τ蛋白可以仅关联微管蛋白，并且磷酸化/脱磷酸化充当控制微管蛋白关联的开关。磷酸化的τ构成为阿尔茨海默病的标志之一的神经原纤维缠结的重要部分。所谓的τ假设表明靶向这些病理学缠结，它的主要成分是磷酸化的τ蛋白，作为用于阿尔茨海默病的治疗范例。具体地，免疫疗法(主动的和被动的这二者)已经表明作为用来靶向τ神经原纤维缠结的方式。在主动免疫疗法中，将病原性抗原注射入患者，并且先天免疫系统引发免疫应答。这触发了B细胞的成熟，产生针对给予的抗原的高亲和力抗体。在被动免疫疗法中，通过输注针对抗原的特异性抗体来避免触发先天免疫系统。建议固有清除系统然后去除结合抗体的配体。存在对于靶向磷酸化的τ蛋白作为对阿尔茨海默病的治疗的主动和被动免疫疗法二者的功效的实质证据[阿尔茨海默病&痴呆(Alzheimer’s&Dementia)，7(4，增刊)S480-481；神经科学杂志(J Neurosci)30，16559-16556，2010；神经科学杂志(J Neurosci)，27，9115-9129，2007]。
在一个实施例中，本发明提供了用于治疗神经变性或认知障碍例如阿尔茨海默病的方法，该方法包括向对其有需要的患者给予治疗有效量的两种组分(1)具有化学式I的化合物或其药学上可接受的盐，和(2)在主动或被动τ免疫疗法中有用的化合物。在被动τ免疫疗法中有用的所述化合物可以是针对磷酸化的τ蛋白的抗体。在主动τ免疫疗法中有用的所述化合物可以是τ蛋白氨基酸序列的片段，该片段当注射进患者体内时，在所述患者体内引起抗磷酸化的τ蛋白抗体的产生。根据本发明的这一实施例所述的给予可以是同时的，或者在两种组分的给予之间可以存在时间间隔。
在一个实施例中，本发明涉及一种具有化学式I的化合物或其药学上可接受的盐和在主动或被动τ免疫疗法中有用的化合物在制造用于治疗神经变性或认知障碍，例如阿尔茨海默病的药物中的用途。
在一个实施例中，本发明提供了一种具有化学式I的化合物或其药学上可接受的盐和在主动或被动τ免疫疗法中有用的化合物，其在治疗神经变性或认知障碍，例如阿尔茨海默病中的方法中使用。
在一个实施例中，本发明提供了一种药物组合物，该药物组合物包括具有化学式I的化合物或其药学上可接受的盐和在主动或被动τ免疫疗法中有用的化合物以及药学上可接受的载体。
用来治疗神经变性或认知障碍，例如阿尔茨海默病的另一范例是靶向Aβ肽。已经表明，可以通过靶向Aβ肽的被动或主动免疫疗法实现这一点[神经科学杂志(J Neurosci)，34，11621-11630，2014；神经科学杂志(J Neurosci)33，4923-4934，2013]。与本发明的化合物组合，这将尝试经由两个不同途径靶向相同病理学机制。抗Aβ抗体(直接注射进患者体内，抑或作为主动免疫疗法的结果在患者体内产生)清除在脑中的Aβ沉积物，同时Aβ肽的积累被本发明的化合物阻断或减少。
在一个实施例中，本发明提供了用于治疗神经变性或认知障碍，例如阿尔茨海默病的方法，该方法包括给予治疗有效量的以下两种组分至对其有需要的患者：(1)具有化学式I的化合物或其药学上可接受的盐，和(2)在主动或被动Aβ肽免疫疗法中有用的化合物。在被动Aβ肽免疫疗法中有用的所述化合物可以是抗Aβ肽抗体，例如gantenerumab、茄尼醇单抗、aducanumab或克瑞珠单抗(crenezumab)。在主动Aβ肽免疫疗法中有用的所述化合物可以是当注射进患者体内时，在所述患者体内引起抗Aβ肽抗体的Aβ肽氨基酸序列的片段。根据本发明的这一实施例所述的给予可以是同时的，或在两种组分的给予之间可以存在时间间隔。
在一个实施例中，本发明涉及一种具有化学式I的化合物或其药学上可接受的盐和在主动或被动Aβ肽免疫疗法中有用的化合物在制造用于治疗神经变性或认知障碍，例如阿尔茨海默病的药物中的用途。
在一个实施例中，本发明提供了一种具有化学式I的化合物或其药学上可接受的盐和在主动或被动Aβ肽免疫疗法中有用的化合物，其用于治疗神经变性或认知障碍例如阿尔茨海默病的方法。
在一个实施例中，本发明提供了一种药物组合物，该药物组合物包括具有化学式I的化合物或其药学上可接受的盐和在主动或被动Aβ肽免疫疗法中有用的化合物以及药学上可接受的载体。
NMDA(N-甲基-D-天冬氨酸)受体拮抗剂美金刚和乙酰胆碱酯酶抑制剂多奈哌齐、卡巴拉汀和加兰他敏是用于治疗阿尔茨海默病的批准药物。
在一个实施例中，本发明提供了用于治疗神经变性或认知障碍，例如阿尔茨海默病的方法，该方法包括向对其有需要的患者给予治疗有效量的以下两种组分：(1)具有化学式I的化合物或其药学上可接受的盐，和(2)NMDA受体拮抗剂或乙酰胆碱酯酶抑制剂。根据本发明的这一实施例所述的给予可以是同时的，或在两种组分的给予之间可以存在时间间隔。
在一个实施例中，本发明涉及一种具有化学式I的化合物或其药学上可接受的盐和NMDA受体拮抗剂或乙酰胆碱酯酶抑制剂在制造用于治疗神经变性或认知障碍，例如阿尔茨海默病的药物中的用途。
在一个实施例中，本发明提供了一种具有化学式I的化合物或其药学上可接受的盐和NMDA受体拮抗剂或乙酰胆碱酯酶抑制剂，其用于治疗神经变性或认知障碍，例如阿尔茨海默病的方法。
在一个实施例中，本发明提供了一种药物组合物，该药物组合物包括具有化学式I的化合物或其药学上可接受的盐和NMDA受体拮抗剂或乙酰胆碱酯酶抑制剂以及药学上可接受的载体。
惊厥或癫痫活动还与阿尔茨海默病(包括阿尔茨海默病的早期阶段)相关联，并且争取使海马活动过度正常化的所述癫痫活动的治疗可以形成阿尔茨海默病治疗范例的一部分[JAMA神经病学(JAMA Neurol)，70，1158-1166，2013；神经科学研究杂志(J NeurosciRes)，93，454，465，2015；神经元(Neuron)，74，647-474，2012；神经精神病药物学(Neurepsychpharm)，35，1016-1025，2010；CNS神经科学和治疗学(CNS Neurosci Ther)，19，871-881，2013]。有用的抗癫痫药包括NMDA受体拮抗剂和离子通道调制剂，例如托吡酯、左乙拉西坦和拉莫三嗪。
在一个实施例中，本发明提供了用于治疗神经变性或认知障碍，例如阿尔茨海默病的方法，该方法包括向对其有需要的患者给予治疗有效量的以下两种组分：(1)具有化学式I的化合物或其药学上可接受的盐，和(2)抗癫痫药。根据本发明的这一实施例所述的给予可以是同时的，或者在两种组分的给予之间可以存在时间间隔。
在一个实施例中，本发明涉及一种具有化学式I的化合物或其药学上可接受的盐和抗癫痫药在制造用于治疗神经变性或认知障碍例如阿尔茨海默病的药物中的用途。
在一个实施例中，本发明提供了一种具有化学式I的化合物或其药学上可接受的盐和抗癫痫药，其在治疗神经变性或认知障碍例如阿尔茨海默病的方法中使用。
在一个实施例中，本发明提供了一种药物组合物，该药物组合物包括具有化学式I的化合物或其药学上可接受的盐和抗癫痫药以及药学上可接受的载体。
不断出现的证据表明，炎症在阿尔茨海默病发病机制中具有因果作用，并且神经炎症并不是由不断出现的β-淀粉样沉积物和神经原纤维缠结激活的被动系统，而是有助于发病机制自身[柳叶刀神经病学(Lancet Neurol)，14，388-405，2015；阿尔茨海默病杂志(JAlz Dis)，44，385-396，2015；神经病学(Neurol)，84，2161-2168，2015]。由此得出抗炎药例如NSAID(非甾体类抗炎药)、TNFα抑制剂例如依那西普和p38MAP激酶抑制剂例如VX-745(5-(2,6-二氯苯基)-2-((2,4-二氟苯基)硫代)-6H-嘧啶并[1,6-b]哒嗪-6-酮)可以在治疗阿尔茨海默病中有用。
在一个实施例中，本发明提供了用于治疗神经变性或认知障碍例如阿尔茨海默病的方法，该方法包括向对其有需要的患者给予治疗有效量的以下两种组分：(1)具有化学式I的化合物或其药学上可接受的盐，和(2)抗炎药。根据本发明的这一实施例所述的给予可以是同时的，或者在两种组分的给予之间可以存在时间间隔。
在一个实施例中，本发明涉及一种具有化学式I的化合物或其药学上可接受的盐和抗炎药在制造用于治疗神经变性或认知障碍例如阿尔茨海默病的药物中的用途。
在一个实施例中，本发明提供了一种具有化学式I的化合物或其药学上可接受的盐和抗炎药，其用于治疗神经变性或认知障碍例如阿尔茨海默病的方法。
在一个实施例中，本发明提供了一种药物组合物，该药物组合物包括具有化学式I的化合物或其药学上可接受的盐和抗炎药以及药学上可接受的载体。
此外，已经证明τ蛋白聚集抑制剂例如TRX-0237(也称为亚甲蓝)和SSRI(选择性羟色胺再摄取抑制剂)例如西酞普兰在治疗阿尔茨海默病中的功效[行为药理学(BehavPharmacol)，26，353-368，2015；科学转化医学(Sci Transl Med)，6(236re4)，2014]。
在一个实施例中，本发明提供了用于治疗神经变性或认知障碍，例如阿尔茨海默病的方法，该方法包括向对其有需要的患者给予治疗有效量的以下两种组分：(1)具有化学式I的化合物或其药学上可接受的盐，和(2)τ蛋白聚集抑制剂或SSRI。根据本发明的这一实施例所述的给予可以是同时的，或在两种组分的给予之间可以存在时间间隔。
在一个实施例中，本发明涉及一种具有化学式I的化合物或其药学上可接受的盐和τ蛋白聚集抑制剂或SSRI在制造用于治疗神经变性或认知障碍例如阿尔茨海默病的药物中的用途。
在一个实施例中，本发明提供了一种具有化学式I的化合物或其药学上可接受的盐和τ蛋白聚集抑制剂或SSRI药，其用于治疗神经变性或认知障碍例如阿尔茨海默病的方法。
在一个实施例中，本发明提供了一种药物组合物，该药物组合物包括具有化学式I的化合物或其药学上可接受的盐和τ蛋白聚集抑制剂或SSRI药以及药学上可接受的载体。
实验部分
可以通过以下反应方案1-7和实例中所概述的方法制备本发明的具有通式I的化合物(其中R1和Ar如上所定义)。在所描述的方法中，能够使用其本身为本领域熟练的化学家已知或对本领域的普通技术人员而言可以是显而易见的变体或修饰。此外，根据以下反应方案和实例，用于制备本发明的化合物的其他方法对本领域的普通技术人员而言将是容易显而易见的。
例如，方案2描述了在合成本发明的化合物的过程中使用选择性保护基团。本领域的普通技术人员将能够选择用于具体反应的适当保护基团。此外，在下文描述的合成方法中，对于例如氨基、酰胺基、酮基及羟基基团的取代基而言，掺入保护和脱保护策略以合成具有化学式I的化合物可能是必要的。此类基团保护和脱保护的方法在本领域是熟知的，并且可以发现于T.格林(T.Green)等人，有机合成中的保护基团(Protective Groups inOrganic Synthesis)，1991，第2版，约翰威利父子(John Wiley&Sons)，纽约中。
对于能以两种或更多种互变异构体的混合物或两种或更多种互变异构体之间的平衡状态存在的化合物而言，在方案中仅体现了一种互变异构体，尽管它可能不是最稳定的互变异构体。对于能以对映异构体、立体异构体或几何异构体形式存在的化合物而言，指明了其几何构型；否则的话，该结构表示立体异构体的混合物。
使用以下方法获得分析性LC-MS数据。
方法A：
在沃特斯(Waters)Aquity UPLC-MS上运行LC-MS，其由以下各项组成：包括柱管理器的沃特斯Aquity、二元溶剂管理器、样品组织器、PDA检测器(在254nm下操作)、ELS检测器以及配备有以正离子模式操作的APPI源的SQ-MS。
LC-条件：柱是Acquity UPLC BEH C18 1.7μm；2.1x 150mm，在60℃下操作，其中二元梯度为0.6ml/min，该二元梯度由水+0.05％三氟乙酸(A)和乙腈+5％水+0.03％三氟乙酸(B)组成。梯度：0.00min：10％B；3.00min：99.9％B；3.01min：10％B；3.60min：10％B。总运行时间：3.60min。
方法B：
在沃特斯(Waters)Acquity UPLC-MS上运行LC-MS，其由以下各项组成：包括柱管理器的沃特斯Aquity、二元溶剂管理器、样品组织器、PDA检测器(在254nM下操作)、ELS检测器以及配备有以正离子模式操作的APPI源的TQ-MS。
LC-条件：柱是Acquity UPLC BEH C18 1.7μm；2.1x 50mm，在60℃下操作，其中二元梯度为1.2ml/min，该二元梯度由水+0.05％三氟乙酸(A)和乙腈+5％水+0.05％三氟乙酸(B)组成。梯度：0.00min：10％B；1.00min：100％B；1.01min：10％B；1.15min：10％B。总运行时间：1.15min。
在Bruker Avance AV-III-600仪器上在600MHz下或在Bruker Avance AV-III-400仪器或Varian 400仪器上在400MHz下记录1H NMR波谱。以相对ppm值表示化学位移值。以下缩写用于NMR信号的多重性：s＝单峰，d＝双重峰，t＝三重峰，q＝四重峰，dd＝双二重峰，ddd＝双双二重峰，dt＝双三重峰，br＝宽峰并且m＝多重峰。
可以如在方案1中所示制备具有通式VIa和VIb的化合物。
方案1
其中R1如在化学式I下所定义，并且R2是烷基基团(例如甲基或乙基)。
具有通式IV的化合物(方案1)可以通过使具有化学式II的化合物与亚磺酰胺(例如III)在路易斯酸(Lewis acid)/干燥剂(例如四乙氧基钛)的存在下反应来制备。在Zn粉的存在下或在二乙基锌和三(三苯基膦)铑(I)氯化物的存在下，用具有通式V的化合物(例如溴氟乙酸乙酯)处理具有通式IV的化合物给出具有通式VIa和VIb的化合物，它们可以通过色谱法分离。
可以如在方案2中所示制备具有通式XIIa和XIIb的化合物。
方案2
其中R2和R3是烷基基团(例如甲基或乙基)并且R4是保护基团(例如叔丁氧基羰基)。
具有化学式VII的化合物(方案2)可以通过用还原剂(例如氢化二异丁基铝)处理具有化学式VIa的化合物来制备。在一些情况下，化合物VII可与水合物形式处于平衡。在氯化锂和碱(例如N,N-二异丙基乙胺)的存在下，用例如2-(二乙氧基磷酰基)-2-氟乙酸乙酯的条件处理具有通式VII的化合物，给出呈E或Z型或其混合物的具有通式VIII的化合物。通过在催化剂(例如钯碳)的存在下氢化具有通式VIII的化合物获得具有通式IX的化合物。通过用酸(例如在甲醇中的盐酸)处理具有通式IX的化合物，随后在碱(例如三乙胺)存在下，在较高沸点溶剂(例如甲苯或二甲苯)中加热中间体来获得具有通式X的化合物。在催化量的N,N-二甲基-4-氨基-吡啶的存在下，通过用二碳酸二叔丁酯处理具有通式X的化合物而获得具有通式XI的化合物。通过用碱(例如六甲基二硅基叠氮化锂)处理具有通式XI的化合物，随后用烷基卤化物进行烷基化来获得具有通式XIIa和XIIb的化合物。上述相同的程序还可以用于从VIb开始合成具有通式XIIc和XIId的化合物。
作为实例，并且其中R1在苯环的2-位上是氟，或者其中该苯环被2-位和3-位上的两个氟取代，具有通式XVIIa的化合物可以如方案3中所示制备。
方案3
其中R4是保护基团，例如叔丁氧基羰基。
通过用硝酸处理具有通式XIIa的化合物来获得具有通式XIIIa的化合物。这将脱保护酰胺部分和用硝酸处理在指定位置中的苯环两者。将具有通式XIIIa的化合物的硝基基团进行还原，随后保护形成的苯胺部分给出具有通式XVa的化合物。用试剂(例如劳氏试剂(Lawesson’s reagent，2,4-双(4-甲氧基苯基)-1,3,2,4-二噻二磷杂环丁烷-2,4-二硫化物))处理具有通式XVa的化合物给出具有通式XVIa的化合物。在例如在二氯甲烷中的三氟乙酸的条件下将XVIa进行脱保护给出化合物XVIIa。可替代地，可以改变反应顺序，并且具有通式XIIIa的化合物可以与一种试剂(例如劳氏试剂)反应以给出具有通式XXIa的化合物，其在硝基基团还原后还给出具有通式XVIIa的化合物(方案4)。
方案4
作为实例，并且其中R1在苯环的邻位上是氟，或者其中该苯环被2-位和3-位上的两个氟取代，可以通过如方案3和4中所示的相同程序但从具有化学式XIIb的化合物开始来制备具有通式XVIIb的化合物(方案5)。同样地，这些相同的程序可以用于分别从XIIc和XIId开始合成具有通式XVIIc和XVIId的化合物。
方案5
其中R4是保护基团，例如叔丁氧基羰基。
具有通式XIIIa的化合物还可以如方案6中所示制备。起始于具有通式IIb的硝基取代的苯乙酮，具有通式VIII的化合物可以如方案1和2中所述制备。可以通过选择性还原具有通式VIII的化合物的烯烃部分来获得具有通式IX的化合物。可以如方案2中涉及具有通式XIIa的化合物所述的来制备具有通式XIIIa的化合物。同样地，还可以如方案6中所示从具有通式IIb的硝基取代的苯乙酮开始来制备具有通式XIIIb、XIIIc和XIIId的化合物。
方案6
其中R1如在化学式I下所定义，并且R3是烷基基团(例如甲基或乙基)
具有通式I的化合物可以如方案7中所示制备。
方案7
其中R1和Ar是如在化学式I下定义的。
可以通过使用本领域的熟练化学家已知的程序，使具有通式XVII的化合物与具有通式XVIII的羧酸氯化物反应或通过与具有通式XIX的羧酸反应来制备具有通式XX的化合物(方案7)。用氨处理具有通式XX的化合物给出具有通式I的化合物。在一些情况下，添加氧化剂(例如叔丁基氢过氧化物)对于促进反应而言可能是必要的。
中间体的制备
中间体：(R)-N-[1-(2-氟苯基)亚乙基]-2-甲基-丙烷-2-亚磺酰胺
向1-(2-氟苯基)乙酮(100g，723.9mmol)和(R)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(105.28g，868.68mmol)在THF(2.00L)中的溶液中添加四乙氧基钛(330.26g，1.45mol)。将溶液加温至80℃并搅拌18小时。将该反应用水(500mL)淬灭，然后用乙酸乙酯(500mL，4次)萃取。将合并的有机相用盐水(500mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，并在真空中浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(柱高：250mm，直径：100mm，100-200目硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝10/1、5/1)进行纯化以给出(R)-N-[1-(2-氟苯基)亚乙基]-2-甲基-丙烷-2-亚磺酰胺(150g，86％产率)。
中间体：(2R,3R)-3-[[(R)-叔丁基亚磺酰基]氨基]-2-氟-3-(2-氟苯基)丁酸乙酯和(2S,3R)-3-[[(R)-叔丁基亚磺酰基]氨基]-2-氟-3-(2-氟苯基)丁酸乙酯
在0℃下，在氩气下，经10分钟的时间段，向(R)-N-[1-(2-氟苯基)亚乙基]-2-甲基-丙烷-2-亚磺酰胺(20.g，82.9mmol)、2-溴-2-氟-乙酸乙酯(30.66g，165.8mmol)和Rh(PPh3)3Cl(2.30g，2.49mmol)在无水THF(400mL)中的悬浮液中滴加Et2Zn(1M在THF中，249mL)，在此期间将温度保持低于5℃。将该反应混合物加温至30℃，并且在30℃下搅拌18小时。将该反应用水(150mL)淬灭，过滤，然后用乙酸乙酯(3×500mL)萃取。将合并的有机相用饱和盐水(40mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，并在真空中浓缩。将残余物通过硅胶快速色谱法(石油醚:乙酸乙酯＝100:1至3:1)进行纯化，以给出(2R,3R)-3-[[(R)-叔丁基亚磺酰基]氨基]-2-氟-3-(2-氟苯基)丁酸乙酯(11.2g，39％产率)和含有(2S,3R)-3-[[(R)-叔丁基亚磺酰基]氨基]-2-氟-3-(2-氟苯基)丁酸酯的不纯的级分。在后一级分的制备型HPLC纯化后，分离出(2S,3R)-3-[[(R)-叔丁基亚磺酰基]氨基]-2-氟-3-(2-氟苯基)丁酸酯(0.8g，3％产率)。
以类似的方法，从(R)-N-[1-(2,3-二氟苯基)亚乙基]-2-甲基-丙烷-2-亚磺酰胺开始制备(2R,3R)-3-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-3-(2,3-二氟苯基)-2-氟丁酸乙酯。
中间体：(4S,5R)-5-[[(R)-叔丁基亚磺酰基]氨基]-2,4-二氟-5-(2-氟苯基)己-2-烯酸乙酯
在-78℃下，经30分钟的时间段，在N2下，向(2R,3R)-3-[[(R)-叔丁基亚磺酰基]氨基]-2-氟-3-(2-氟苯基)丁酸乙酯(10.0g，28.8mmol)在THF(200mL)中的溶液中滴加DIBAL-H(氢化二异丁基铝)(1M在THF中，143.9mL)。将该黄色反应溶液在-78℃下搅拌3.5小时。将该反应用水(200mL)淬灭，过滤并用乙酸乙酯(200mL，4次)萃取。将合并的有机相用饱和盐水(200mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩，以给出粗产物(R)-N-((2R,3R)-3-氟-2-(2-氟苯基)-4-氧代丁烷-2-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(8.0g，粗品)。在0℃下，经10分钟的时间段，在N2下，向2-二乙氧基磷酰基-2-氟-乙酸乙酯(5.13g，21.2mmol)、DIPEA(N,N-二异丙基乙胺)(1.18g，9.1mmol)和LiCl(386mg，9.1mmol)在乙腈(150mL)中的悬浮液中滴加(R)-N-((2R,3R)-3-氟-2-(2-氟苯基)-4-氧代丁烷-2-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(2.30g，7.58mmol)在乙腈(20mL)中的溶液。将该悬浮液加温至25℃，搅拌18小时。将该反应在真空中浓缩，将残余物用乙酸乙酯(100mL，3次)萃取。将合并的有机相用饱和盐水(100mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，并在真空中浓缩。将残余物通过硅胶快速色谱法(石油醚/乙酸乙酯＝5:1、1:1)进行纯化，以给出(4S,5R)-5-[[(R)-叔丁基亚磺酰基]氨基]-2,4-二氟-5-(2-氟苯基)己-2-烯酸乙酯(3.44g，8.79mmol，49.8％产率)。
以类似的方法，从(2S,3R)-3-[[(R)-叔丁基亚磺酰基]氨基]-2-氟-3-(2-氟苯基)丁酸酯开始制备(4R,5R)-5-[[(R)-叔丁基亚磺酰基]氨基]-2,4-二氟-5-(2-氟苯基)己-2-烯酸乙酯。
以类似的方法，从(2R,3R)-3-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-3-(2,3-二氟苯基)-2-氟丁酸乙酯开始制备(4S,5R)-5-[[(R)-叔丁基亚磺酰基]氨基]-2,4-二氟-5-(2,3-二氟苯基)己-2-烯酸乙酯。
中间体：(4S,5R)-5-[[(R)-叔丁基亚磺酰基]氨基]-2,4-二氟-5-(2-氟苯基)己酸乙酯
向(4S,5R)-5-[[(R)-叔丁基亚磺酰基]氨基]-2,4-二氟-5-(2-氟苯基)己-2-烯酸乙酯(13.77g，35.18mmol)在乙酸乙酯(500mL)中的溶液中添加Pd/C(10％，2.00g，湿)。将黑色悬浮液在真空下脱气并用H2吹扫若干次。将混合物在H2(50psi)下在30℃下搅拌18小时。将悬浮液过滤并且将过滤器浓缩，以给出产物(4S,5R)-5-[[(R)-叔丁基亚磺酰基]氨基]-2,4-二氟-5-(2-氟苯基)己酸乙酯(10.5g，75.9％产率)。
以类似的方法，从(4R,5R)-5-[[(R)-叔丁基亚磺酰基]氨基]-2,4-二氟-5-(2-氟苯基)己-2-烯酸乙酯开始制备(4R,5R)-5-[[(R)-叔丁基亚磺酰基]氨基]-2,4-二氟-5-(2-氟苯基)己酸乙酯。
以类似的方法，从(4S,5R)-5-[[(R)-叔丁基亚磺酰基]氨基]-2,4-二氟-5-(2,3-二氟苯基)己-2-烯酸乙酯开始制备(4S,5R)-5-[[(R)-叔丁基亚磺酰基]氨基]-2,4-二氟-5-(2,3-二氟苯基)己酸乙酯。
中间体：(5S,6R)-3,5-二氟-6-(2-氟苯基)-6-甲基哌啶-2-酮
在30℃下，在N2下，向(4S,5R)-5-[[(R)-叔丁基亚磺酰基]氨基]-2,4-二氟-5-(2-氟苯基)己酸乙酯(10.50g，26.69mmol)在MeOH(100mL)中的溶液中一次性添加HCl/MeOH(4M，50mL)。将该无色溶液在30℃下搅拌2小时。将该溶液在真空中浓缩，以给出粗的(4S,5S)-5-氨基-2,4-二氟-5-(2-氟苯基)己酸乙酯(6.50g，21.35mmol，80％产率)，将其溶解于甲苯(100mL)中，并且添加三乙胺(2.19g，21.64mmol)。将该无色溶液在110℃下搅拌18小时。将该反应在真空中浓缩，将残余物通过硅胶快速色谱法(石油醚:乙酸乙酯＝3:1至1:1)进行纯化，以给出(5S,6R)-3,5-二氟-6-(2-氟苯基)-6-甲基-哌啶-2-酮(4.50g，17.6mmol，78.2％产率)。
以类似的方法，从(4R,5R)-5-[[(R)-叔丁基亚磺酰基]氨基]-2,4-二氟-5-(2-氟苯基)己酸酯开始制备(5R,6R)-3,5-二氟-6-(2-氟苯基)-6-甲基哌啶-2-酮。
以类似的方法，从(4S,5R)-5-[[(R)-叔丁基亚磺酰基]氨基]-2,4-二氟-5-(2,3-二氟苯基)己酸酯开始制备(5S,6R)-3,5-二氟-6-(2,3-二氟苯基)-6-甲基哌啶-2-酮
中间体：(2R,3S)-3,5-二氟-2-(2-氟苯基)-2-甲基-6-氧代-哌啶-1-甲酸叔丁酯
在25℃下，在N2下，向(5S,6R)-3,5-二氟-6-(2-氟苯基)-6-甲基-哌啶-2-酮(4.50g，18.50mmol)和二碳酸二叔丁酯(8.08g，37.0mmol)在THF(100mL)中的溶液中一次性添加N,N-二甲基吡啶-4-胺(113mg，925μmol)。将该无色溶液在25℃下搅拌48小时。将该溶液用水(100mL)淬灭并用乙酸乙酯(100mL，3次)萃取。将合并的有机相用饱和盐水(50mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩。将残余物通过硅胶快速色谱法(石油醚/乙酸乙酯＝20/1、5/1)进行纯化，以给出(2R,3S)-3,5-二氟-2-(2-氟苯基)-2-甲基-6-氧代-哌啶-1-甲酸叔丁酯(4.70g，13.0mmol，70.3％产率)。
以类似的方法，从(5R,6R)-3,5-二氟-6-(2-氟苯基)-6-甲基哌啶-2-酮开始制备(2R,3R)-3,5-二氟-2-(2-氟苯基)-2-甲基-6-氧代-哌啶-1-甲酸叔丁酯。
以类似的方法，从(5S,6R)-3,5-二氟-6-(2,3-二氟苯基)-6-甲基哌啶-2-酮开始制备(2R,3S)-3,5-二氟-2-(2,3-二氟苯基)-2-甲基-6-氧代-哌啶-1-甲酸叔丁酯
中间体：(2R,3S,5R)-3,5-二氟-2-(2-氟苯基)-2,5-二甲基-6-氧代-哌啶-1-甲酸叔丁酯和(2R,3S,5S)-3,5-二氟-2-(2-氟苯基)-2,5-二甲基-6-氧代-哌啶-1-甲酸叔丁酯
在-78℃下，经10分钟的时间段，在N2下，向(2R,3S)-3,5-二氟-2-(2-氟苯基)-2-甲基-6-氧代-哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.50g，4.37mmol)在THF(30mL)中的溶液中滴加LiHMDS(双(三甲基甲硅烷基)酰胺锂)(1M，8.74mL)。将溶液在-78℃下搅拌1小时，然后向溶液中添加碘甲烷(3.10g，21.9mmol)。将该反应溶液在-78℃下搅拌另外的45分钟。然后允许将该溶液加温至25℃并搅拌18小时。将该反应通过冰缓慢淬灭，并且然后用乙酸乙酯(30mL，3次)萃取。将合并的有机相用饱和盐水(30mL，两次)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，并在真空中浓缩。将残余物通过硅胶快速色谱法(石油醚:乙酸乙酯＝15:1、10:1)进行纯化，以给出产物(2R,3S,5R)-3,5-二氟-2-(2-氟苯基)-2,5-二甲基-6-氧代-哌啶-1-甲酸叔丁酯(550mg，1.54mmol，35.2％产率)和(2R,3S,5S)-3,5-二氟-2-(2-氟苯基)-2,5-二甲基-6-氧代-哌啶-1-甲酸叔丁酯(600mg，1.68mmol，38.4％产率)。
以类似的方法，从(2R,3R)-3,5-二氟-2-(2-氟苯基)-2-甲基-6-氧代-哌啶-1-甲酸叔丁酯开始制备(2R,3R,5S)-3,5-二氟-2-(2-氟苯基)-2,5-二甲基-6-氧代-哌啶-1-甲酸叔丁酯
以类似的方法，从(2R,3S)-3,5-二氟-2-(2,3-二氟苯基)-2-甲基-6-氧代-哌啶-1-甲酸叔丁酯开始制备(2R,3S,5R)-3,5-二氟-2-(2,3-二氟苯基)-2,5-二甲基-6-氧代-哌啶-1-甲酸叔丁酯和(2R,3S,5S)-3,5-二氟-2-(2,3-二氟苯基)-2,5-二甲基-6-氧代-哌啶-1-甲酸叔丁酯
中间体：(3R,5S,6R)-3,5-二氟-6-(2-氟-5-硝基-苯基)-3,6-二甲基-哌啶-2-酮
向在三氟乙酸(5.69mL，73.9mmol)中的(2R,3S,5R)-3,5-二氟-2-(2-氟苯基)-2,5-二甲基-6-氧代-哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.20g，3.36mmol)中添加H2SO4(1.27mL，25.9mmol)，然后向溶液中添加HNO3(1.16mL，16.8mmol)，将该溶液在0℃下搅拌30分钟，然后将该溶液在50℃下搅拌18小时，LCMS显示无起始原料，将该溶液倒入冰水(w/w＝1/1)(50mL)中，并使用5N NaOH水溶液碱化至pH>11。将水相用乙酸乙酯(50mL，3次)萃取。将合并的有机相用饱和盐水(100mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩。将残余物通过硅胶快速色谱法(石油醚/乙酸乙酯＝10/1、2/1)进行纯化，以给出(3R,5S,6R)-3,5-二氟-6-(2-氟-5-硝基-苯基)-3,6-二甲基-哌啶-2-酮(1.0g，99％产率)。
以类似的方法，从(2R,3S,5S)-3,5-二氟-2-(2-氟苯基)-2,5-二甲基-6-氧代-哌啶-1-甲酸叔丁酯开始制备(3S,5S,6R)-3,5-二氟-6-(2-氟-5-硝基苯基)-3,6-二甲基哌啶-2-酮。
以类似的方法，从(2R,3R,5S)-3,5-二氟-2-(2-氟苯基)-2,5-二甲基-6-氧代-哌啶-1-甲酸叔丁酯开始制备(3S,5R,6R)-3,5-二氟-6-(2-氟-5-硝基苯基)-3,6-二甲基哌啶-2-酮。
以类似的方法，从(2R,3S,5R)-3,5-二氟-2-(2,3-二氟苯基)-2,5-二甲基-6-氧代-哌啶-1-甲酸叔丁酯开始制备(3R,5S,6R)-3,5-二氟-6-(2,3-二氟-5-硝基苯基)-3,6-二甲基哌啶-2-酮。
以类似的方法，从(2R,3S,5S)-3,5-二氟-2-(2,3-二氟苯基)-2,5-二甲基-6-氧代-哌啶-1-甲酸叔丁酯开始制备(3S,5S,6R)-3,5-二氟-6-(2,3-二氟-5-硝基苯基)-3,6-二甲基哌啶-2-酮。
中间体：(3R,5S,6R)-6-(5-氨基-2-氟-苯基)-3,5-二氟-3,6-二甲基-哌啶-2-酮
在N2下，向(3R,5S,6R)-3,5-二氟-6-(2-氟-5-硝基-苯基)-3,6-二甲基-哌啶-2-酮(1.10g，3.64mmol)在乙酸乙酯(100mL)中的溶液中添加Pd/C(10％，湿的，0.5g)。将悬浮液在真空下脱气并用H2吹扫若干次。将混合物在H2(15psi)下在25℃下搅拌18小时。将该反应混合物过滤并且将滤液浓缩，以给出(3R,5S,6R)-6-(5-氨基-2-氟-苯基)-3,5-二氟-3,6-二甲基-哌啶-2-酮(950mg，3.49mmol，96％产率)。
以类似的方法，从(3S,5S,6R)-3,5-二氟-6-(2-氟-5-硝基苯基)-3,6-二甲基哌啶-2-酮开始制备(3S,5S,6R)-6-(5-氨基-2-氟苯基)-3,5-二氟-3,6-二甲基哌啶-2-酮。
中间体：N-[3-[(2R,3S,5R)-3,5-二氟-2,5-二甲基-6-氧代-2-哌啶基]-4-氟-苯基]氨基甲酸叔丁酯
在25℃下，在N2下，向(3R,5S,6R)-6-(5-氨基-2-氟-苯基)-3,5-二氟-3,6-二甲基-哌啶-2-酮(750mg，2.75mmol)在NaHCO3水溶液(5mL)和二氯甲烷(20mL)中的混合物中一次性添加二碳酸二叔丁酯(1.80g，8.26mmol)。将该无色混合物在25℃下搅拌18小时。将该混合物用水(20mL)淬灭并用乙酸乙酯(50mL，3次)萃取。将合并的有机相用饱和盐水(50mL，两次)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩。将残余物通过硅胶快速色谱法(石油醚/乙酸乙酯＝10/1、1/1)进行纯化，以给出N-[3-[(2R,3S,5R)-3,5-二氟-2,5-二甲基-6-氧代-2-哌啶基]-4-氟-苯基]氨基甲酸叔丁酯(850mg，83％产率)。
以类似的方法，从(3S,5S,6R)-6-(5-氨基-2-氟-苯基)-3,5-二氟-3,6-二甲基-哌啶-2-酮开始制备N-[3-[(2R,3S,5S)-3,5-二氟-2,5-二甲基-6-氧代-2-哌啶基]-4-氟-苯基]氨基甲酸叔丁酯。
中间体：N-[3-[(2R,3S,5R)-3,5-二氟-2,5-二甲基-6-硫代-2-哌啶基]-4-氟-苯基]氨基甲酸叔丁酯
在90℃下，在N2下，向N-[3-[(2R,3S,5R)-3,5-二氟-2,5-二甲基-6-氧代-2-哌啶基]-4-氟-苯基]氨基甲酸叔丁酯(250mg，671μmol)在甲苯(10mL)中的悬浮液中一次性添加劳氏试剂(2,4-双(4-甲氧基苯基)-1,3,2,4-二噻二磷杂环丁烷-2,4-二硫化物)(149mg，369μmol)。将该混合物在90℃下搅拌1小时。将该混合物在减压下浓缩。将残余物通过硅胶快速色谱法(石油醚/乙酸乙酯＝10/1、1/1)进行纯化，以给出N-[3-[(2R,3S,5R)-3,5-二氟-2,5-二甲基-6-硫代-2-哌啶基]-4-氟-苯基]氨基甲酸叔丁酯(230mg，88％产率)。
以类似的方法，从N-[3-[(2R,3S,5S)-3,5-二氟-2,5-二甲基-6-氧代-2-哌啶基]-4-氟-苯基]氨基甲酸叔丁酯开始制备N-[3-[(2R,3S,5S)-3,5-二氟-2,5-二甲基-6-硫代-2-哌啶基]-4-氟-苯基]氨基甲酸叔丁酯。
中间体：(3R,5S,6R)-6-(5-氨基-2-氟-苯基)-3,5-二氟-3,6-二甲基-哌啶-2-硫酮
在25℃下，在N2下，向N-[3-[(2R,3S,5R)-3,5-二氟-2,5-二甲基-6-硫代-2-哌啶基]-4-氟-苯基]氨基甲酸叔丁酯(500mg，1.29mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液中一次性添加HCl/MeOH(10mL)。将该混合物在25℃下搅拌18小时。将该混合物在减压下浓缩。将残余物溶解于水(10mL)中，使用饱和NaHCO3水溶液将该溶液的pH碱化至pH＝7-8，将水相用乙酸乙酯(20mL，3次)萃取。将合并的有机相用饱和盐水(20mL，两次)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩。将残余物通过硅胶快速色谱法(石油醚/乙酸乙酯＝10/1、1/1)进行纯化，以给出(3R,5S,6R)-6-(5-氨基-2-氟-苯基)-3,5-二氟-3,6-二甲基-哌啶-2-硫酮(318mg，85.5％产率)。
以类似的方法，从N-[3-[(2R,3S,5S)-3,5-二氟-2,5-二甲基-6-硫代-2-哌啶基]-4-氟-苯基]氨基甲酸叔丁酯开始制备(3S,5S,6R)-6-(5-氨基-2-氟-苯基)-3,5-二氟-3,6-二甲基-哌啶-2-硫酮。
中间体：(3S,5S,6R)-3,5-二氟-6-(2-氟-5-硝基苯基)-3,6-二甲基哌啶-2-硫酮
在90℃下，在N2下，向(3S,5S,6R)-3,5-二氟-6-(2-氟-5-硝基苯基)-3,6-二甲基哌啶-2-酮(4.50g，14.89mmol)在甲苯(100mL)中的悬浮液中一次性添加劳氏试剂(3.31g，8.19mol)。将该混合物在90℃下搅拌2小时。将该混合物在真空中浓缩。将残余物通过硅胶快速色谱法(石油醚/乙酸乙酯)进行纯化，以给出(3S,5S,6R)-3,5-二氟-6-(2-氟-5-硝基苯基)-3,6-二甲基哌啶-2-硫酮(4.0g，84％产率)。
以类似的方法，从(3S,5R,6R)-3,5-二氟-6-(2-氟-5-硝基苯基)-3,6-二甲基哌啶-2-酮开始制备(3S,5R,6R)-3,5-二氟-6-(2-氟-5-硝基苯基)-3,6-二甲基哌啶-2-硫酮。
以类似的方法，从(3S,5S,6R)-6-(2,3-二氟-5-硝基苯基)-3,5-二氟-3,6-二甲基哌啶-2-酮开始制备(3S,5S,6R)-6-(2,3-二氟-5-硝基苯基)-3,5-二氟-3,6-二甲基哌啶-2-硫酮。
以类似的方法，从(3R,5S,6R)-6-(2,3-二氟-5-硝基苯基)-3,5-二氟-3,6-二甲基哌啶-2-酮开始制备(3R,5S,6R)-6-(2,3-二氟-5-硝基苯基)-3,5-二氟-3,6-二甲基哌啶-2-硫酮。
中间体：(3S,5S,6R)-6-(5-氨基-2-氟苯基)-3,5-二氟-3,6-二甲基哌啶-2-硫酮
在25℃下，在N2下，向(3S,5S,6R)-3,5-二氟-6-(2-氟-5-硝基苯基)-3,6-二甲基哌啶-2-硫酮(4.50g，14.14mmol)和NH4Cl(3.78g，70.70mmol)在乙醇(80mL)和水(20mL)中的溶液中一次性添加铁粉(3.95g，70.70mmol)。将该黑色悬浮液在25℃下搅拌18小时。将该混合物过滤，并将滤液在减压中浓缩。将残余物用乙酸乙酯(100mL×3)萃取。将合并的有机相用饱和盐水(100mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤，并在真空中浓缩。将残余物通过硅胶快速色谱法(石油醚/乙酸乙酯)进行纯化，以给出(3S,5S,6R)-6-(5-氨基-2-氟苯基)-3,5-二氟-3,6-二甲基哌啶-2-硫酮(2.59g，61％产率)。1H NMR(CDCl3 400MHz TMS):δ8.33(s,1H),6.93-6.87(m,1H),6.62-6.60(m,1H),6.45-6.44(m,1H),5.38-5.26(m,1H),3.73(s,2H),2.65-2.58(m,1H),2.00-1.86(m,1H),1.80(s,3H),1.68(d,J＝20.8Hz,3H)。[α]20 ,D＝-58°(c＝0.1g/100mL,MeOH)。
以类似的方法，从(3S,5R,6R)-3,5-二氟-6-(2-氟-5-硝基苯基)-3,6-二甲基哌啶-2-硫酮开始制备(3S,5R,6R)-6-(5-氨基-2-氟-苯基)-3,5-二氟-3,6-二甲基-哌啶-2-硫酮。
以类似的方法，从(3S,5S,6R)-3,5-二氟-6-(2,3-二氟-5-硝基苯基)-3,6-二甲基哌啶-2-硫酮开始制备(3S,5S,6R)-6-(5-氨基-2,3-二氟-苯基)-3,5-二氟-3,6-二甲基-哌啶-2-硫酮。
以类似的方法，从(3R,5S,6R)-3,5-二氟-6-(2,3-二氟-5-硝基苯基)-3,6-二甲基哌啶-2-硫酮开始制备(3R,5S,6R)-6-(5-氨基-2,3-二氟-苯基)-3,5-二氟-3,6-二甲基-哌啶-2-硫酮。
中间体：甲基-d3-5-(甲氧基-d3)吡嗪-2-甲酸酯
将钠(0.094g，4.10mmol)小部分地添加至甲醇-d4(2.94ml)，并将反应混合物进行搅拌直到所有钠已经反应。将该溶液添加至甲基-5-氯吡嗪-2-甲酸酯(0.6g，3.48mmol)在甲醇-d4(0.98ml)中的另一溶液中。将反应混合物在室温下搅拌1.5小时。将反应混合物在真空中浓缩。添加2ml的水。将混合物用乙酸乙酯萃取。将有机相用盐水洗涤，经MgSO4干燥，并在真空中浓缩，以给出甲基-d3-5-(甲氧基-d3)吡嗪-2-甲酸酯。
中间体：5-(甲氧基-d3)吡嗪-2-甲酸
将甲基-d3-5-(甲氧基-d3)吡嗪-2-甲酸酯(424mg，2.43mmol)溶解于水(3ml)和1,4-二噁烷(3ml)中。添加氢氧化锂(146mg，6.09mmol)，并且将反应混合物搅拌1小时。将该反应混合物蒸发至约2ml，并且用二乙醚萃取。将有机相用1M NaOH萃取，并且用6N HCl(水溶液)将合并的水相酸化至pH 2。将该混合物在冰浴上冷却并收集固体化合物，以给出5-(甲氧基-d3)吡嗪-2-甲酸。
中间体：5-(甲氧基-d3)吡啶甲酸甲酯
在氩气下，将5-羟基吡啶甲酸甲酯(2.88g，18.81mmol)溶解于二甲基甲酰胺(108mL)中。添加碳酸钾(7.20g，52.1mmol)并将橙色悬浮液在室温下搅拌45分钟。添加碘甲烷-d3(1.41ml，22.6mmol)。将该反应混合物搅拌2小时。添加水。将混合物用乙酸乙酯萃取。将有机相用盐水洗涤，经MgSO4干燥，并在真空中浓缩，并通过硅胶柱色谱法(庚烷:乙酸乙酯)进行纯化，以给出5-(甲氧基-d3)吡啶甲酸甲酯。
中间体：5-(甲氧基-d3)吡啶甲酸
将5-(甲氧基-d3)吡啶甲酸甲酯(200mg，1.175mmol)溶解于水(1.5ml)和1,4-二噁烷(3ml)中。添加氢氧化锂(70.4mg，2.94mmol)，并且将反应混合物搅拌1小时。将该反应混合物蒸发至约2ml，并且用二乙醚萃取。将有机相用1M NaOH萃取，并且用6N HCl(水溶液)将合并的水相酸化至pH 2。在冰浴上冷却混合物，并且形成沉淀物。收集沉淀物，以给出5-(甲氧基-d3)吡啶甲酸。
本发明的化合物的制备
实例1N-(3-((2R,3S,5S)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-氟吡啶酰胺(化合物1)
向5-氟吡啶甲酸(0.019g，0.14mmol)在DMF(1mL)中的溶液中添加HATU(1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶3-氧化物六氟磷酸酯)(0.046g，0.12mmol)，将溶液搅拌5分钟。然后添加(3S,5S,6R)-6-(5-氨基-2-氟-苯基)-3,5-二氟-3,6-二甲基-哌啶-2-硫酮(0.025g，0.092mmol)和DIPEA(N,N-二异丙基乙胺)(0.08mL，0.46mmol)。将混合物在室温下搅拌1小时。添加饱和NH4Cl水溶液，并且将混合物用乙酸乙酯萃取。将有机相用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物溶解于在甲醇(2mL)中的7M氨。将混合物在65℃下搅拌过夜，在减压下浓缩，并通过硅胶柱色谱法(庚烷:乙酸乙酯)进行纯化。将所获得的油状物溶解于乙酸乙酯中，并用饱和NaHCO3水溶液/水(1/1)洗涤5次。将有机相在减压下浓缩以得到N-(3-((2R,3S,5S)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-氟吡啶酰胺(0.019mmol，21％产率)。1H NMR(600MHz,DMSO)δ10.64(s,1H),8.74(d,J＝2.8Hz,1H),8.23(dd,J＝8.7,4.6Hz,1H),7.98(td,J＝8.7,2.9Hz,1H),7.89-7.75(m,2H),7.16(dd,J＝11.8,8.6Hz,1H),6.11(s,2H),5.23-5.03(m,1H),2.37-2.26(m,1H),2.01-1.84(m,1H),1.62(d,J＝23.9Hz,3H),1.52(d,J＝1.1Hz,3H)。
LC-MS(m/z)395.4(MH+)；tR＝0.47分钟(方法B)
以类似于实例1的方式制备以下化合物：
实例2N-(3-((2R,3S,5S)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-甲氧基吡嗪-2-甲酰胺(化合物2)
从(3S,5S,6R)-6-(5-氨基-2-氟-苯基)-3,5-二氟-3,6-二甲基-哌啶-2-硫酮和5-甲氧基吡嗪-2-甲酸制备。
1H NMR(600MHz,DMSO)δ10.53(s,1H),8.88(d,J＝1.3Hz,1H),8.41(d,J＝1.3Hz,1H),7.82(m,1H),7.16(dd,J＝11.9,8.7Hz,1H),6.10(broad s,2H),5.18-5.07(m,1H),4.03(s,3H),2.37-2.26(m,1H),1.99-1.83(m,1H),1.53(d,J＝23.9Hz,3H),1.52(s,3H)。LC-MS(m/z)408.4(MH+)；tR＝0.47分钟(方法B)
实例3N-(3-((2R,3S,5S)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-甲氧基吡啶酰胺(化合物3)
从(3S,5S,6R)-6-(5-氨基-2-氟-苯基)-3,5-二氟-3,6-二甲基-哌啶-2-硫酮和5-甲氧基吡啶甲酸制备。
1H NMR(600MHz,DMSO)δ10.46(s,1H),8.43-8.34(m,1H),8.16-8.06(m,1H),7.85(ddd,J＝8.7,4.1,2.8Hz,1H),7.79(dd,J＝7.3,2.8Hz,1H),7.61(dd,J＝8.7,2.8Hz,1H),7.15(dd,J＝11.9,8.8Hz,1H),6.46-5.73(m,2H),5.20-5.06(m,1H),3.93(s,3H),2.37-2.22(m,1H),2.02-1.84(m,1H),1.62(d,J＝23.9Hz,3H),1.52(m,3H)。LC-MS(m/z)407.4(MH+)；tR＝0.48分钟(方法B)
实例4N-(3-((2R,3S,5R)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-氟吡啶酰胺(化合物4)
从(3R,5S,6R)-6-(5-氨基-2-氟-苯基)-3,5-二氟-3,6-二甲基-哌啶-2-硫酮和5-氟吡啶甲酸制备。
1H NMR(600MHz,DMSO)δ10.77(s,1H),8.73(d,J＝2.8Hz,1H),8.22(dd,J＝8.7,4.6Hz,1H),7.97(td,J＝8.7,2.8Hz,1H),7.82-7.73(m,1H),7.71(dd,J＝7.2,2.6Hz,1H),7.17(dd,J＝11.7,8.8Hz,1H),6.25(s,2H),5.12(dd,J＝48.0,2.5Hz,1H),2.45-2.25(m,1H),1.76-1.58(m,1H),1.56(s,3H),1.53(d,J＝22.1Hz,3H)。LC-MS(m/z)395.1(MH+)；tR＝0.46分钟(方法A)
实例5N-(3-((2R,3S,5R)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-甲氧基吡嗪-2-甲酰胺(化合物5)
从(3R,5S,6R)-6-(5-氨基-2-氟-苯基)-3,5-二氟-3,6-二甲基-哌啶-2-硫酮和5-甲氧基吡嗪-2-甲酸制备。
1H NMR(600MHz,DMSO)δ10.67(s,1H),8.67(s,1H),8.41(d,J＝1.3Hz,1H),7.76(m,1H),7.71(dd,J＝7.2,2.6Hz,1H),7.17(dd,J＝11.7,8.8Hz,1H),6.30(broad s,2H),5.12(dd,J＝47.9,2.5Hz,1H),4.02(s,3H),2.38-2.28(m,1H),1.73-1.58(m,1H),1.56(s,3H),1.53(d,J＝22.1Hz,3H)。LC-MS(m/z)408.2(MH+)；tR＝0.48分钟(方法A)
实例6N-(3-((2R,3S,5R)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟苯基)-2-甲基噁唑-4-甲酰胺(化合物6)
从(3R,5S,6R)-6-(5-氨基-2-氟-苯基)-3,5-二氟-3,6-二甲基-哌啶-2-硫酮和2-甲基噁唑-4-甲酸制备。
1H NMR(600MHz,DMSO)δ10.37(s,1H),8.65(s,1H),7.78-7.72(m,1H),7.71-7.66(m,1H),7.18(dd,J＝11.6,8.9Hz,1H),5.22-5.09(m,1H),2.50(s,3H),2.43-2.33(m,1H),1.75-1.62(m,1H),1.60(s,3H),1.56(d,J＝22.1Hz,3H)。LC-MS(m/z)381.1(MH+)；tR＝0.43分钟(方法A)
实例7N-(3-((2R,3S,5R)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-甲氧基吡啶酰胺(化合物7)
从(3R,5S,6R)-6-(5-氨基-2-氟-苯基)-3,5-二氟-3,6-二甲基-哌啶-2-硫酮和5-甲氧基吡啶甲酸制备。
1H NMR(600MHz,DMSO)δ10.61(s,1H),8.41-8.30(m,1H),8.14-8.07(m,1H),7.80-7.74(m,1H),7.71(dd,J＝7.3,2.8Hz,1H),7.60(dd,J＝8.8,2.8Hz,1H),7.15(dd,J＝11.8,8.8Hz,1H),6.27(s,2H),5.19-5.05(m,1H),3.93(s,3H),2.45-2.27(m,1H),1.76-1.59(m,1H),1.56(s,3H),1.53(d,J＝22.1Hz,3H)。LC-MS(m/z)407.1(MH+)；tR＝0.5分钟(方法A)
实例8N-(3-((2R,3S,5R)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-(甲氧基-d3)吡啶酰胺(化合物8)
从(3R,5S,6R)-6-(5-氨基-2-氟-苯基)-3,5-二氟-3,6-二甲基-哌啶-2-硫酮和5-(甲氧基-d3)吡啶甲酸制备。1H NMR(600MHz,DMSO)δ10.72(s,1H),8.39(d,J＝2.8Hz,1H),8.12(d,J＝8.7Hz,1H),7.90(s,1H),7.80-7.75(m,1H),7.60(dd,J＝8.7,2.9Hz,1H),7.21(dd,J＝11.6,9.0Hz,1H),5.21(d,J＝47.5Hz,1H),2.46-2.38(m,1H),1.82-1.66(m,1H),1.64(s,3H),1.61(d,J＝22.1Hz,3H)。LC-MS(m/z)410(MH+)；tR＝0.49(方法A)
实例9N-3-((2R,3S,5R)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-氯吡啶酰胺(化合物9)
从(3R,5S,6R)-6-(5-氨基-2-氟-苯基)-3,5-二氟-3,6-二甲基-哌啶-2-硫酮和4-氯苯甲酸制备。1H NMR(600MHz,DMSO)δ10.83(s,1H),8.78(dd,J＝2.4,0.7Hz,1H),8.18(dd,J＝8.4,2.4Hz,1H),8.15(dd,J＝8.4,0.7Hz,1H),7.78(ddd,J＝8.7,4.1,2.8Hz,1H),7.71(dd,J＝7.3,2.7Hz,1H),7.17(dd,J＝11.7,8.8Hz,1H),6.21(s,2H),5.11(ddd,J＝48.2,4.7,2.1Hz,1H),2.34(dddd,J＝20.7,15.6,8.9,4.8Hz,1H),1.72-1.57(m,1H),1.56(s,3H),1.53(d,J＝22.1Hz,3H)。LC-MS(m/z)411.1(MH+)；tR＝0.53(方法A)
实例10N-(3-((2R,3S,5R)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟苯基)-1-甲基-1H-咪唑-2-甲酰胺(化合物10)
从(3R,5S,6R)-6-(5-氨基-2-氟-苯基)-3,5-二氟-3,6-二甲基-哌啶-2-硫酮和1-甲基-1H-咪唑-2-甲酸制备。1H NMR(600MHz,DMSO)δ10.53(s,1H),7.72(ddd,J＝8.7,4.2,2.8Hz,1H),7.61(dd,J＝7.3,2.7Hz,1H),7.43(d,J＝0.7Hz,1H),7.12(dd,J＝11.8,8.8Hz,1H),7.07(d,J＝1.0Hz,1H),6.16(s,2H),5.15-5.04(m,1H),3.97(s,3H),2.32(dddd,J＝20.8,15.5,8.9,4.9Hz,1H),1.71-1.56(m,1H),1.54(s,3H),1.51(d,J＝22.1Hz,3H)。LC-MS(m/z)380.1(MH+)；tR＝0.42(方法A)
实例11N-(3-((2R,3S,5R)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-(三氟甲基)吡嗪-2-甲酰胺(化合物11)
从(3R,5S,6R)-6-(5-氨基-2-氟-苯基)-3,5-二氟-3,6-二甲基-哌啶-2-硫酮和5-(三氟甲基)吡嗪-2-甲酸制备。1H NMR(600MHz,DMSO)δ11.13(s,1H),9.44(d,J＝1.0Hz,1H),9.30(d,J＝1.0Hz,1H),7.81(ddd,J＝8.7,4.1,2.8Hz,1H),7.74(dd,J＝7.2,2.7Hz,1H),7.20(dd,J＝11.7,8.8Hz,1H),6.23(s,2H),5.18-5.06(m,1H),2.34(dddd,J＝20.7,15.6,9.0,4.8Hz,1H),1.71-1.58(m,1H),1.56(s,3H),1.53(d,J＝22.0Hz,3H)。LC-MS(m/z)446.1(MH+)；tR＝0.53(方法A)
实例12N-(3-((2R,3S,5R)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟苯基)-4-甲基噻唑-2-甲酰胺(化合物12)
从(3R,5S,6R)-6-(5-氨基-2-氟-苯基)-3,5-二氟-3,6-二甲基-哌啶-2-硫酮和4-甲基噻唑-2-甲酸制备。1H NMR(600MHz,DMSO)δ10.91(s,1H),7.78-7.72(m,1H),7.71-7.67(m,2H),7.16(dd,J＝11.7,8.8Hz,1H),6.21(s,2H),5.16-5.05(m,1H),2.50(t,J＝2.0Hz,3H),2.38-2.27(m,1H),1.70-1.56(m,1H),1.55(s,3H),1.52(d,J＝22.0Hz,3H)。LC-MS(m/z)397.1(MH+)；tR＝0.5(方法A)
实例13N-(3-((2R,3S,5R)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟苯基)-2-(二氟甲基)噁唑-4-甲酰胺(化合物13)
从(3R,5S,6R)-6-(5-氨基-2-氟-苯基)-3,5-二氟-3,6-二甲基-哌啶-2-硫酮和1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-甲酸制备。1H NMR(600MHz,DMSO)δ10.54(s,1H),9.04(s,1H),7.67(ddd,J＝8.7,4.2,2.8Hz,1H),7.62(dd,J＝7.2,2.7Hz,1H),7.33(t,J＝51.9Hz,1H),7.15(dd,J＝11.7,8.8Hz,1H),6.17(s,2H),5.10(ddd,J＝48.2,4.5,2.1Hz,1H),2.38-2.27(m,1H),1.69-1.56(m,1H),1.55(s,3H),1.51(d,J＝22.0Hz,3H)。LC-MS(m/z)417.1(MH+)；tR＝0.47(方法A)
实例14N-(3-((2R,3S,5R)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟苯基)-1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-甲酰胺(化合物14)
从(3R,5S,6R)-6-(5-氨基-2-氟-苯基)-3,5-二氟-3,6-二甲基-哌啶-2-硫酮和5-(甲氧基-d3)吡嗪-2-甲酸制备。1H NMR(600MHz,DMSO)δ10.52(s,1H),8.41(d,J＝2.7Hz,1H),7.92(t,J＝58.7Hz,1H),7.69(ddd,J＝8.7,4.1,2.8Hz,1H),7.63(dd,J＝7.3,2.7Hz,1H),7.15(dd,J＝11.8,8.8Hz,1H),7.01(d,J＝2.7Hz,1H),6.19(s,2H),5.11(ddd,J＝48.2,4.5,2.1Hz,1H),2.39-2.26(m,1H),1.73-1.56(m,1H),1.55(s,3H),1.51(d,J＝22.0Hz,3H)。LC-MS(m/z)416.1(MH+)；tR＝0.46(方法A)
实例15N-(3-((2R,3S,5R)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-(二氟甲基)吡嗪-2-甲酰胺(化合物15)
从(3R,5S,6R)-6-(5-氨基-2-氟-苯基)-3,5-二氟-3,6-二甲基-哌啶-2-硫酮和5-氰基-3-甲基吡啶甲酸制备。1H NMR(600MHz,DMSO)δ11.06(s,1H),9.38(d,J＝1.4Hz,1H),9.09(d,J＝0.9Hz,1H),7.81(ddd,J＝8.7,4.1,2.8Hz,1H),7.74(dd,J＝7.2,2.7Hz,1H),7.26(t,J＝54.0Hz,1H),7.20(dd,J＝11.7,8.8Hz,1H),6.22(s,2H),5.12(ddd,J＝48.2,4.6,2.1Hz,1H),2.41-2.28(m,1H),1.72-1.58(m,1H),1.56(s,3H),1.53(d,J＝22.0Hz,3H)。LC-MS(m/z)428.1(MH+)；tR＝0.48(方法A)
实例16N-3-((2R,3S,5R)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟苯基)-4-氯苯甲酰胺(化合物16)
从(3R,5S,6R)-6-(5-氨基-2-氟-苯基)-3,5-二氟-3,6-二甲基-哌啶-2-硫酮和5-(甲氧基-d3)吡啶甲酸制备。1H NMR(600MHz,DMSO)δ10.45(s,1H),7.96-7.92(m,2H),7.70(ddd,J＝8.7,4.1,2.8Hz,1H),7.62-7.58(m,2H),7.54(dt,J＝7.2,3.6Hz,1H),7.16(dd,J＝11.8,8.8Hz,1H),6.17(s,2H),5.11(ddd,J＝48.2,4.6,2.1Hz,1H),2.38-2.28(m,1H),1.71-1.57(m,1H),1.56(s,3H),1.50(d,J＝22.0Hz,3H)。LC-MS(m/z)410.1(MH+)；tR＝0.54(方法A)
实例17N-3-((2R,3S,5R)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-氰基吡啶酰胺(化合物17)
从(3R,5S,6R)-6-(5-氨基-2-氟-苯基)-3,5-二氟-3,6-二甲基-哌啶-2-硫酮和5-氰基吡啶甲酸制备。1H NMR(600MHz,DMSO)δ10.99(s,1H),9.19(dd,J＝2.1,0.9Hz,1H),8.57(dd,J＝8.2,2.1Hz,1H),8.28(dd,J＝8.2,0.9Hz,1H),7.79(ddd,J＝8.7,4.1,2.9Hz,1H),7.72(dd,J＝7.2,2.7Hz,1H),7.18(dd,J＝11.7,8.8Hz,1H),6.20(s,2H),5.17-5.05(m,1H),2.41-2.26(m,1H),1.69-1.56(m,1H),1.55(s,3H),1.52(d,J＝22.1Hz,3H)。LC-MS(m/z)402.1(MH+)；tR＝0.47(方法A)
实例18N-(3-((2R,3S,5R)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4,5-二氟苯基)-5-(甲氧基-d3)吡啶酰胺(化合物18)
从(3R,5S,6R)-6-(5-氨基-2,3-二氟-苯基)-3,5-二氟-3,6-二甲基-哌啶-2-硫酮和2-(二氟甲基)噁唑-4-甲酸制备。1H NMR(600MHz,DMSO)δ10.89(s,1H),8.38(d,J＝2.8Hz,1H),8.12(d,J＝8.7Hz,1H),8.08-8.01(m,1H),7.63-7.58(m,2H),5.22-5.09(m,1H),2.47-2.35(m,1H),1.85-1.69(m,1H),1.62(s,3H),1.58(d,J＝22.1Hz,3H)。LC-MS(m/z)428.1(MH+)；tR＝0.54(方法A)
实例19N-(3-((2R,3S,5S)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-(甲氧基-d3)吡啶酰胺(化合物19)
从(3S,5S,6R)-6-(5-氨基-2-氟-苯基)-3,5-二氟-3,6-二甲基-哌啶-2-硫酮和5-(甲氧基-d3)吡啶甲酸制备。1H NMR(600MHz,DMSO)δ10.46(s,1H),8.39(dd,J＝2.9,0.5Hz,1H),8.12(dd,J＝8.7,0.5Hz,1H),7.86-7.80(m,1H),7.78(dd,J＝7.3,2.7Hz,1H),7.61(dd,J＝8.7,2.9Hz,1H),7.15(dd,J＝11.8,8.8Hz,1H),6.07(s,2H),5.12(dd,J＝48.5,6.1Hz,1H),2.35-2.27(m,1H),1.98-1.84(m,1H),1.61(d,J＝23.9Hz,3H),1.51(s,3H)。LC-MS(m/z)410(MH+)；tR＝0.49(方法A)
实例20N-(3-((2R,3S,5S)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-(甲氧基-d3)吡嗪-2-甲酰胺(化合物20)
从(3S,5S,6R)-6-(5-氨基-2-氟-苯基)-3,5-二氟-3,6-二甲基-哌啶-2-硫酮和5-(甲氧基-d3)吡啶甲酸制备。1H NMR(600MHz,DMSO)δ10.52(s,1H),8.88(s,1H),8.40(s,1H),7.86-7.78(m,2H),7.16(dd,J＝11.6,8.9Hz,1H),6.13(s,2H),5.12(dd,J＝48.6,5.3Hz,1H),2.35-2.28(m,1H),2.01-1.84(m,1H),1.62(d,J＝23.9Hz,3H),1.52(s,3H)。LC-MS(m/z)411.2(MH+)；tR＝0.48(方法A)
实例21N-(3-((2R,3S,5S)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-氰基-3-甲基吡啶酰胺(化合物21)
从(3S,5S,6R)-6-(5-氨基-2-氟-苯基)-3,5-二氟-3,6-二甲基-哌啶-2-硫酮和5-氯吡啶甲酸制备。1H NMR(600MHz,DMSO)δ10.77(s,1H),8.98(s,1H),8.39(s,1H),7.89-7.82(m,1H),7.64(d,J＝5.1Hz,1H),7.17(dd,J＝11.5,9.1Hz,1H),6.20(s,2H),5.18-5.06(m,1H),2.50(s,3H),2.37-2.28(m,1H),1.97-1.83(m,1H),1.62(d,J＝23.9Hz,3H),1.52(s,3H)。LC-MS(m/z)416(MH+)；tR＝0.51(方法B)
实例22N-(3-((2R,3S,5S)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4,5-二氟苯基)-5-(甲氧基-d3)吡啶酰胺(化合物22)
从(3S,5S,6R)-6-(5-氨基-2,3-二氟-苯基)-3,5-二氟-3,6-二甲基-哌啶-2-硫酮和5-(二氟甲基)吡嗪-2-甲酸制备。1H NMR(600MHz,DMSO)δ10.68(s,1H),8.39(d,J＝2.8Hz,1H),8.12(d,J＝8.7Hz,1H),8.04-7.98(m,1H),7.68(d,J＝5.1Hz,1H),7.62(dd,J＝8.7,2.9Hz,1H),6.36(s,2H),5.10(dd,J＝48.6,6.2Hz,1H),2.38-2.29(m,1H),2.08-1.91(m,1H),1.63(d,J＝23.7Hz,3H),1.53(s,3H)。LC-MS(m/z)428.2(MH+)；tR＝0.54(方法A)
实例23N-(3-((2R,3R,5S)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-(甲氧基-d3)吡啶酰胺(化合物23)
从(3S,5R,6R)-6-(5-氨基-2-氟-苯基)-3,5-二氟-3,6-二甲基-哌啶-2-硫酮和5-(甲氧基-d3)吡啶甲酸制备。1H NMR(600MHz,DMSO)δ10.27(s,1H),8.39(dd,J＝2.9,0.4Hz,1H),8.14-8.11(m,1H),8.08(dd,J＝7.3,2.8Hz,1H),7.87-7.82(m,1H),7.62(dd,J＝8.7,2.9Hz,1H),7.13(dd,J＝12.0,8.8Hz,1H),6.00(s,2H),5.23-5.13(m,1H),2.46-2.33(m,2H),1.62(d,J＝22.0Hz,3H),1.36(s,3H)。LC-MS(m/z)410.1(MH+)；tR＝0.52(方法B)
实例24N-(3-((2R,3S,5S)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-溴吡啶酰胺(化合物24)
从(3S,5S,6R)-6-(5-氨基-2-氟-苯基)-3,5-二氟-3,6-二甲基-哌啶-2-硫酮和5-溴吡啶甲酸制备。
1H NMR(600MHz,DMSO)δ10.70(s,1H),8.86(dd,J＝2.3,0.7Hz,1H),8.32(dd,J＝8.4,2.3Hz,1H),8.08(dd,J＝8.4,0.6Hz,1H),7.92-7.76(m,2H),7.17(dd,J＝11.8,8.7Hz,1H),6.17(s,2H),5.19-5.07(m,1H),2.39-2.25(m,1H),2.03-1.83(m,1H),1.62(d,J＝23.9Hz,3H),1.53(s,3H)。LC-MS(m/z)455.1(MH+)；tR＝0.54(方法B)
立体化学
通过5-溴-N-(3-((2R,3S,5S)-3,5-二氟-2,5-二甲基-6-硫代哌啶-2-基)-4-氟苯基)吡啶酰胺从庚烷和乙酸乙酯的混合物中的重结晶来获得晶体。通过所述晶体的X射线结晶学阐明了5-溴-N-(3-((2R,3S,5S)-3,5-二氟-2,5-二甲基-6-硫代哌啶-2-基)-4-氟苯基)吡啶酰胺的结构。该结构显示了5-溴-N-(3-((2R,3S,5S)-3,5-二氟-2,5-二甲基-6-硫代哌啶-2-基)-4-氟苯基)吡啶酰胺的绝对和相对构型。如实例1所述从(3S,5S,6R)-6-(5-氨基-2-氟苯基)-3,5-二氟-3,6-二甲基哌啶-2-硫酮和5-溴吡啶甲酸开始制备5-溴-N-(3-((2R,3S,5S)-3,5-二氟-2,5-二甲基-6-硫代哌啶-2-基)-4-氟苯基)吡啶酰胺。
图1：5-溴-N-(3-((2R,3S,5S)-3,5-二氟-2,5-二甲基-6-硫代哌啶-2-基)-4-氟苯基)吡啶酰胺的X-射线结构
可以由此合理化本发明的示例化合物的绝对构型。从(3S,5S,6R)-6-(5-氨基-2-氟苯基)-3,5-二氟-3,6-二甲基哌啶-2-硫酮(其由XIIa(R4＝叔丁氧基羰基)如方案7所示制备)制备5-溴-N-(3-((2R,3S,5S)-3,5-二氟-2,5-二甲基-6-硫代哌啶-2-基)-4-氟苯基)吡啶酰胺，从而证实了XIIa的绝对构型。作为其结果，也证实了XIIb(R4＝叔丁氧基羰基)的绝对构型。
方案8.用于指定示例化合物的绝对与相对立体化学的原理。R4＝叔丁氧基羰基
药理学测试
BACE1结合测定
基于SPA的测定，使用从自由式HEK293细胞(Freestyle HEK293cell)重组表达并且随后纯化的、生物素化形式的人类BACE1进行结合测定。在白色透明底384板(康宁公司(Corning)#3653)中于50mM乙酸钠缓冲液(pH 4.5)中运行结合测定，该缓冲液包含50mMNaCl和0.03％Tween-20。将10nM(终浓度)放射性配体([3H]-N-((1S,2R)-1-苄基-3-环丙基氨基-2-羟基-丙基)-5-(甲烷磺酰基-甲基-氨基)-N-((R)-1-苯基-乙基)-异酞酰胺)(购自GE医疗基团(GE Healthcare)的TRQ11569)与给定浓度的测试化合物、6nM(终浓度)人类BACE1和25μg链霉亲和素涂布的PVT核SPA珠粒(RPNQ0007，GE医疗集团生命科学部(GEHealthcare Life Sciences))混合，总体积为40μl。在测定中测试每种测试化合物的若干个浓度，用于确定IC50。将板在室温下孵育一小时并且在Wallac Trilux计数器中计数。分别使用缓冲液和1μM(终浓度)的高亲和力BACE1参比抑制剂(S)-6-[3-氯-5-(5-丙-1-炔基-吡啶-3-基)-噻吩-2-基]-2-亚氨基-3,6-二甲基-四氢-嘧啶-4-酮确定总的和非特异性的结合。对于每种测试化合物，IC50值(介导放射性配体的特异性结合的50％抑制的浓度)从浓度-反应曲线确定并用于从等式Ki＝IC50/(1+L/Kd)计算Ki，其中L和Kd分别是用于测定的放射性配体的终浓度和放射性配体的解离常数。放射性配体的Kd从饱和结合实验中确定。
表1：所选化合物的结合亲和力
BACE1有效性测定
如基于FRET的测定使用可商购的BACE1试剂盒(美国生命技术公司(LifeTechnologies)，P2985)进行有效性测定。将2μl的10μM(终浓度)测试化合物和来自试剂盒的15μl BACE1酶(终浓度3nM)在室温下预孵育15分钟，之后添加来自该试剂盒的15μl底物(250nM终浓度)，并且在室温下再孵育90分钟。随后在Pherastar(Ex540/Em590)中对测定板进行读数。将在测试化合物存在下观察到的酶活性标准化为在缓冲液和10μM(终浓度)的高亲和力的BACE1参比抑制剂(S)-6-[3-氯-5(5-丙-1-炔基-吡啶-3-基)-噻吩-2-基]-2-亚氨基-3,6-二甲基-四氢嘧啶-4-酮分别存在下观察到的酶活性。在10μM(终浓度)下评估测试化合物的有效性并且使用等式％抑制＝100％-以百分比计的标准化酶活性，将该有效性定义为酶活性的百分比抑制。
表2：所选化合物的BACE1活性
BACE1抑制后，评价大鼠脑和血浆中的Aβ水平。
动物。
根据丹麦议会，所有大鼠护理和实验程序都被灵北(Lundbeck)兽医人员批准。将大鼠以12/12-h光暗循环养护在屏障设施中并且任意给予食物和水。
首试大鼠的处理。
大约250g重的年轻成年雄性斯普拉-道来(Sprague Dawley)大鼠购自查尔斯河公司(Charles River)并且仅通过口服强饲(p.o)接受0-30mg/kg的运载体(10％HPβCD+1MMeSO4，pH 2.5)或测试化合物(溶解于运载体中)。以5ml/kg的体积给予化合物。对于每种处理条件，建立5-10只动物的组群。
由兽医人员密切监测经历处理的动物的任何中毒体征。监测参数包括体重、体态、皮毛(coat)外观的变化、无端行为的出现以及对外界刺激的迟钝或夸大反应。
组织收集。
在初次给药后T＝180分钟时，将动物打昏并用铡除刀断头。在将动物断头后，将躯干血取样于EDTA涂覆的管中。将血液在4℃下以2200G离心15分钟并收集血浆并且将其冷冻在-80℃下。将血液等分用于AβELISA和DMPK分析。处死后立即取出脑并将其分为两等份。将右半脑在干冰上快速冷冻并储存在-80℃下。将左半部分解剖；其中额前脑用于进行AβELISA并且剩余部分用于进行DMPK分析。也将这些样品在干冰上快速冷冻并储存在-80℃下，直到分析使用。
组织加工。
在将皮层样品用速度设定为5的小容量分散仪(T10基础(basic)ULTRA-)均质化大约5-7sec之前，将其在湿冰上稍微解冻。将组织在其重量的10倍体积的缓冲液中处理，例如将100mg的组织在1000μL的均质化缓冲液中均质化。均质化缓冲液：50ml Milli Q水+50nM NaCl+0.2％二乙胺(DEA)+1片完全蛋白酶(Complete Protease)抑制剂混合物+1nM 4-(2-氨基乙基)苯磺酰氟盐酸化物不可逆丝氨酸蛋白酶抑制剂(AEBSF)。
均质化后，将样品的450μL等分试样收集在1.5ml埃彭道夫管(Eppendorf tube)中并放置在湿冰上，将0.5％NP-40(50ul)添加至所有样品中并且然后将其在冰上孵育30min。这之后使用具有20kHz匀声的超声匀浆器(SONOPLUS HD2070，班德林电子(BandelinElectronic))(10脉冲设定在12％-13％功率)超声处理所有样品以提取所有Aβ种类。然后，将样品在4℃下以20000G离心(Ole Dich 157MPRF微量离心机)20分钟。离心后，将285μL的上清液用移液管吸取进600μL微管中并用15μL的1M Tris-HCL缓冲液中和。
ELISA方案。
使用WAKO 294-62501人类/大鼠Aβ淀粉样蛋白(40)试剂盒进行所有ELISA分析。将如以上所描述产生的30μL血浆样品或30μL的皮层上清液置于在湿冰上的600μL微管中。向其中添加30μL的8M脲(艾普力(AppliChem)A1049，9025)，以产生2倍稀释。将血浆和皮层上清液两者都在冰上孵育30min。标准品列制备自提供于试剂盒中的标准肽储备物以及包含1.6M脲(200μL 8M脲+800μL的标准稀释物)和0.8M脲(400μL 8M脲+3600μL标准稀释物)的标准稀释物。制备从100pmol/ml至0pmol/L的Aβ40的连续2倍稀释用于进行测定。
在用脲孵育之后，通过添加5倍的来自试剂盒的标准稀释物进一步稀释所有样品。这通过将240μL标准稀释物添加至60μL样品/脲混合物中然后将其充分混合来进行。将100μL的每种稀释样品一式两份地用移液管吸取进ELISA板的指定孔中。然后将板覆盖并在4℃下孵育过夜。第二天，在使用之前将ELISA试剂盒回到室温。将孵育板用稀释于Milli Q水中的20x洗涤溶液洗涤5次。将100μL HRP-偶联物应用于每个孔中，并且将板覆盖且在4℃下孵育1hr。再次重复洗涤5次。将100μL 3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)溶液应用于每个孔中并且将板覆盖并在室温下于黑暗中孵育30分钟。接下来，将100μL终止溶液应用于每个孔中，并且在将终止溶液添加至孔中的30min内，将板在分光光度计(实验室系统酶标仪(Labsystems Multiscan Ascent))中于450nm波长下进行读数。
基于生成自包含已知浓度的合成Aβ40的标准品的标准曲线来确定样品中的Aβ浓度。本领域的普通技术人员将意识到，二乙胺(DEA)和脲萃取将分别释放可溶性Aβ和不可溶性Aβ。由于ELISA试剂盒是经过验证的且广泛使用，所以可接受的是只要对于每种测试化合物而言处理条件和测定条件相同，则测定应该针对测试的化合物产生一致的稳健数据并产生最小差异。
数据分析
为了确定样品中的Aβ40浓度，将装载在板上的样品的内插值乘以20，以将当DEA、脲和中和溶液的体积累加时产生的稀释考虑在内。将值计算为与运载体处理的动物相比的Aβ40的百分比变化。
将化合物4以10mg/kg的剂量口服强饲给予并且在给药后3小时收集脑和血浆样品并且如以上所描述测量以下暴露。
脑和血浆样品的生物分析
使用UltraPerformance色谱，随后通过串联-MS(MS/MS)检测确定血浆和脑组织匀浆中的TC。
装置：
Tecan Genesis RSP 200；Biomek NXP，贝克曼库尔特公司(Beckman Coulter)；西格玛公司(Sigma)4K15离心机；Acquity UPLC，沃特斯公司(Waters)；Sciex API4000TQ，应用生物系统公司(Applied Biosystems)；MS软件：Analyst版本1.4.1
化学品
乙腈，HPLC级，Fluka公司，No.34967N；甲醇，HPLC级，西格玛-奥德里奇公司(Sigma-Aldrich)，批次9003S；甲酸，HPLC级，Riedel-de公司，批次51660；净化水，密理博公司(Millipore)Synergy UV
样品制备
通过将脑与水1:4(v/v)：2-丙醇：DMSO(50:30:20v/v/v)搅匀，随后通过离心和收集上清液制备脑组织匀浆。使用Hamilton机器制备校准用标准品和QC样品。使用Biomek机器将在乙腈(1ng/mL ISTD)中的150μL ISTD添加至25μL的校准用标准品、QC样品和检测样品(血浆和脑组织匀浆)中。离心(6200g，4℃，20min)之后，将来自每个样品的100μL上清液转移至一个新板并使用Biomek机器(体内转移方法文件(method file InVivo transfer))将其与100μL水和0.1％甲酸混合。在快速离心(6200g，4℃，5min)之后，将这些样品置于自动取样器中。
UPLC-MS/MS分析
用在正离子电喷射离子化模式中的应用生物系统公司(Applied Biosystems)Sciex API 4000仪器完成MS/MS检测。以亲代>子代质荷比(m/z)检测TC和ISTD。使用氮气作为雾化器气体和碰撞气体。与血浆和脑分析物浓度线性相关的峰面积在1.00-1000ng/mL血浆以及5.00-5000ng/g脑的范围内(针对稀释校正的)。如果血浆/脑样品药物浓度高于1000ng/mL或5000ng/g，该样品在分析之前在空白血浆/空白脑组织匀浆中适当稀释。
色谱系统
分析柱：
沃特斯Acquity UPLC HSS C18SB(pH 2-8)1.8μm，2.1x 30mm。
流动相A：0.1％水性甲酸或0.1％水性氢氧化铵
流动相B：具有0.1％水性甲酸或0.1％水性氢氧化铵的乙腈。
弱洗剂：甲醇
强洗剂：乙腈/异丙醇/甲酸(50/50/2v/v/v)
流速：0.6mL/min
运行时间：3min。
至废料：0-0.5min
温度：40℃
梯度：
表3：化合物3的结果
表4：化合物19的结果
表5：化合物20的结果
如表3、4和5所示，本发明的化合物能够穿透血脑屏障并且显示在CNS中的有效性。
MDCK-MDR1测定
在MDCK-MDR1细胞中评估测试化合物的渗透性，将这些细胞在96转孔(transwell)板中培养至融合(4-6天)。用转运缓冲液(HBSS+1％BSA)将测试化合物稀释至0.5μM的浓度并应用于细胞单层的顶侧或基底外侧。在37℃和5％CO2下，在95％的相对湿度，经60分钟的孵育时间，对从A到B方向或B到A方向的测试化合物的渗透一式三份进行确定。基于转孔板的受体和供体孔中分析物/IS的峰面积比，通过LC-MS/MS分析来量化测试化合物。
使用以下等式计算表观渗透性系数Papp(cm/s)：
Papp＝(dCr/dt)x Vr/(A x C0)
其中dCr/dt是受体室中化合物的累积浓度作为时间的函数(μM/s)；Vr是受体室中的溶液体积(顶侧上0.05mL；基底外侧上0.25mL)；A是运输的表面面积，即单层的面积为0.0804cm2；C0是供体室中的初始浓度(μM)。
当流出比(Papp BA/Papp AB)≥2时，将化合物归类为Pgp底物。
表5：所选化合物的BACE1活性
如表5中所示，本发明大部分示例性化合物具有低于2的MDCK-MDR1流出比并且因此可能穿透血脑屏障(E克恩斯(E Kerns)，L迪(L Di)，《类药属性：概念、结构设计和方法》(Drug-like Properties:Concepts,Structure Design and Methods)(2008)爱思唯尔(Elsevier))。

Claims (17)

1.一种具有化学式I的化合物
其中Ar选自下组，该组由以下各项组成：苯基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、噁唑基、异噁唑基，并且其中该Ar任选地被一个或多个选自卤素、CN、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6氟烷基或C1-C6烷氧基的取代基取代；并且
R1是一个或多个氢、卤素、C1-C3氟烷基或C1-C3烷基；
或其药学上可接受的盐。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中该化合物具有化学式Ia或Ib
或其药学上可接受的盐。
3.根据权利要求1或2所述的化合物，其中R1是F或H。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的化合物，其中Ar任选地被一个或多个F、Cl、Br、CN、C1-C3烷基、C1-C3氟烷基或C1-C3烷氧基取代。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的化合物，其中Ar是任选地经取代的苯基。
6.根据权利要求1-4中任一项所述的化合物，其中Ar是任选地经取代的吡啶基。
7.根据权利要求1-4中任一项所述的化合物，其中Ar是任选地经取代的吡嗪基。
8.根据权利要求1-4中任一项所述的化合物，其中Ar是任选地经取代的咪唑基。
9.根据权利要求1-4中任一项所述的化合物，其中Ar是任选地经取代的吡唑基。
10.根据权利要求1-4中任一项所述的化合物，其中Ar是任选地经取代的噁唑基。
11.根据权利要求1-4中任一项所述的化合物，其中Ar是任选地经取代的噻唑基。
12.根据权利要求1所述的化合物，其中该化合物选自下组，该组由以下各项组成：
N-(3-((2R,3S,5S)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟-苯基)-5-氟吡啶酰胺，
N-(3-((2R,3S,5S)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟-苯基)-5-甲氧基吡嗪-2-甲酰胺，
N-(3-((2R,3S,5S)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟-苯基)-5-甲氧基吡啶酰胺，
N-(3-((2R,3S,5R)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟-苯基)-5-氟吡啶酰胺，
N-(3-((2R,3S,5R)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟-苯基)-5-甲氧基吡嗪-2-甲酰胺，
N-(3-((2R,3S,5R)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟-苯基)-2-甲基噁唑-4-甲酰胺，
N-(3-((2R,3S,5R)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟-苯基)-5-甲氧基吡啶酰胺，
N-(3-((2R,3S,5R)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-(甲氧基-d3)吡啶酰胺，
N-(3-((2R,3S,5R)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-氯吡啶酰胺，
N-(3-((2R,3S,5R)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟苯基)-1-甲基-1H-咪唑-2-甲酰胺，
N-(3-((2R,3S,5R)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-(三氟甲基)吡嗪-2-甲酰胺，
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N-(3-((2R,3S,5R)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟苯基)-1-(二氟甲基)-1H-吡唑-3-甲酰胺，
N-(3-((2R,3S,5R)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-(二氟甲基)吡嗪-2-甲酰胺，
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N-(3-((2R,3S,5R)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-氰基吡啶酰胺，
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N-(3-((2R,3S,5S)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-氰基-3-甲基吡啶酰胺，
N-(3-((2R,3S,5S)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4,5-二氟苯基)-5-(甲氧基-d3)吡啶酰胺，
N-(3-((2R,3R,5S)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-(甲氧基-d3)吡啶酰胺，
N-(3-((2R,3S,5S)-6-氨基-3,5-二氟-2,5-二甲基-2,3,4,5-四氢吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-溴吡啶酰胺
或其药学上可接受的盐。
13.一种药物组合物，包括根据权利要求1-12中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、以及药学上可接受的载体。
14.一种治疗疾病的方法，该疾病选自阿尔茨海默病(家族性或散发性)、临床前阿尔茨海默病、前驱阿尔茨海默病、轻度认知损害、唐氏综合症和大脑淀粉样血管病，该方法包括向对其有需要的患者给予治疗有效量的根据权利要求1-12中任一项所述的化合物。
15.根据权利要求1-12中任一项所述的化合物在制造用于治疗疾病的药物中的用途，该疾病选自阿尔茨海默病(家族性或散发性)、临床前阿尔茨海默病、前驱阿尔茨海默病、轻度认知损害、唐氏综合症和大脑淀粉样血管病。
16.根据权利要求1-12中任一项所述的化合物，用于在疗法中使用。
17.根据权利要求1-12中任一项所述的化合物，用于在用于治疗疾病的方法中使用，该疾病选自阿尔茨海默病(家族性或散发性)、临床前阿尔茨海默病、前驱阿尔茨海默病、轻度认知损害、唐氏综合症和大脑淀粉样血管病。
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