CN106770876A - 黄芪健胃制剂的特征图谱建立和检测方法 - Google Patents

黄芪健胃制剂的特征图谱建立和检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种黄芪健胃制剂的特征图谱建立及检测方法。所述特征图谱建立方法包括如下步骤：参照物溶液的制备；供试品溶液的制备：精密称定黄芪健胃制剂，精密加入体积浓度为70‑90％的甲醇水溶液进行提取，滤过，取续滤液；特征图谱建立：分别精密吸取所述供试品溶液和参照物溶液，注入高效液相色谱仪；其中，所述高效液相色谱仪采用的流动相为：以乙腈为流动相A，以体积浓度为0.1％的磷酸水溶液为流动相B，采用梯度洗脱方式。该方法根据黄芪健胃制剂处方组成，合理控制高效液相色谱的流动相条件，构建得到黄芪健胃制剂的特征图谱，能够全面反映黄芪健胃制剂的质量水平。同时也建立了一种简单、可靠、实用的黄芪健胃制剂的检测方法。

Description

黄芪健胃制剂的特征图谱建立和检测方法
技术领域
本发明涉及中药制剂质量控制，特别是涉及黄芪健胃制剂的特征图谱建立和检测方法。
背景技术
黄芪健胃制剂是由我国经典方“小建中汤方”演变而来，经现代工艺制备而成，由黄芪、白芍、桂枝、生姜、大枣和甘草6味中药组成，具有补气温中，缓急止痛的功效，主要用于脾胃虚寒所致的胃痛，症见胃痛拘急、胃寒肢冷、喜温喜按、心悸自汗，胃、十二指肠溃疡见上证候者。
由于黄芪健胃制剂为6味中药制成的复方制剂，其药效为多种活性成分协同作用的结果。因此，黄芪健胃制剂的多种活性成分含量是否达标是其质量的重要因素。而目前，2015年《中国药典》收载的黄芪健胃膏，仅采用薄层色谱法对处方中的黄芪、白芍和甘草3种药味进行定性鉴别和采用高效液相色谱法测定单一指标成分芍药苷的含量从而进行质量控制，其检测过程较繁琐，检测工作量大，且存在一定的局限性，无法较全面反映黄芪健胃制剂的质量水平。
发明内容
基于此，有必要提供一种方法简单、能够全面反映黄芪健胃制剂的质量水平的黄芪健胃制剂的特征图谱建立方法。
一种黄芪健胃制剂的特征图谱建立方法，所述特征图谱建立方法包括如下步骤：
参照物溶液的制备：分别精密称定没食子酸、芍药内酯苷、芍药苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芹糖甘草苷、甘草苷、肉桂酸对照品，混合后加甲醇溶解，即得所述参照物溶液；
供试品溶液的制备：精密称定黄芪健胃制剂，精密加入体积浓度为70-90％的甲醇水溶液进行提取，滤过，取续滤液，即得所述供试品溶液；
特征图谱建立：分别精密吸取所述供试品溶液和参照物溶液，注入高效液相色谱仪，测定，即得由10个共有特征峰构成的所述特征图谱；
其中，所述高效液相色谱仪采用的流动相为：以乙腈为流动相A，以体积浓度为0.1％的磷酸水溶液为流动相B，采用梯度洗脱方式。
在其中一个实施例中，所述梯度洗脱方式为：0-25min，流动相A的体积百分数由8％变化至30％，流动相B的体积百分数由92％变化至70％；25-40min，流动相A的体积百分数由30％变化至45％，流动相B的体积百分数由70％变化至55％。
在其中一个实施例中，所述高效液相色谱仪的检测波长采用双波长切换测定法，切换方式为：0-27min，检测波长为230nm，27-40min，检测波长切换为290nm。
在其中一个实施例中，所述高效液相色谱仪的条件为：色谱柱：以十八烷基键合硅胶为填充剂；柱温25-35℃，流速为0.8-1.2mL·min-1。
在其中一个实施例中，所述柱温25℃，流速为1mL·min-1。
在其中一个实施例中，每1mL所述参照物溶液含没食子酸25-35μg、芍药内酯苷40-60μg、芍药苷110-130μg、毛蕊异黄酮葡萄糖苷1-10μg、芹糖甘草苷15-25μg、甘草苷15-25μg、肉桂酸1-10μg。
在其中一个实施例中，所述供试品溶液的制备中，精密加入体积浓度为70-90％的甲醇水溶液进行提取，对所得混合液进行振摇或超声，然后再滤过，所得续滤液即为供试品溶液。
在其中一个实施例中，所述10个共有特征峰的相对保留时间的规定值为：0.305(峰1，没食子酸)，0.397(峰2)，0.916(峰3，芍药内酯苷)，1.000(峰4，芍药苷)，1.137(峰5，毛蕊异黄酮葡萄糖苷)，1.180(峰6，芹糖甘草苷)，1.213(峰7，甘草苷)，1.514(峰8)，1.950(峰9)，2.072(峰10，肉桂酸)。各共有特征峰的实际相对保留时间应在所述规定值的±10％之内。
在其中一个实施例中，按芍药苷峰(峰4)计算，所述色谱柱的理论塔板数不低于2000。
本发明还提供一种黄芪健胃制剂的检测方法，包括如下步骤：
供试品溶液的制备：精密称定黄芪健胃制剂，精密加入体积浓度为70-90％的甲醇水溶液进行提取，滤过，取续滤液，即得所述供试品溶液；
检测：精密吸取所述供试品溶液，注入高效液相色谱仪，测定，即可；
其中，所述高效液相色谱仪采用的流动相为：以乙腈为流动相A，以体积浓度为0.1％的磷酸水溶液为流动相B，采用梯度洗脱方式。
在其中一个实施例中，所述梯度洗脱方式为：0-25min，流动相A的体积百分数由8％变化至30％，流动相B的体积百分数由92％变化至70％；25-40min，流动相A的体积百分数由30％变化至45％，流动相B的体积百分数由70％变化至55％。
在其中一个实施例中，所述高效液相色谱仪的检测波长采用双波长切换测定法，切换方式为：0-27min，检测波长为230nm，27-40min，检测波长切换为290nm。
在其中一个实施例中，所述高效液相色谱仪的条件为：色谱柱：以十八烷基键合硅胶为填充剂；柱温25-35℃，流速为0.8-1.2mL·min-1。
在其中一个实施例中，所述柱温25℃，流速为1mL·min-1。
在其中一个实施例中，所述供试品溶液的制备中，精密加入体积浓度为70-90％的甲醇水溶液进行提取，对所得混合液进行振摇或超声，然后再滤过，所得续滤液即为供试品溶液。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
(1)本发明针对黄芪健胃制剂存在的质量控制技术问题，提供一种黄芪健胃制剂的特征图谱的建立方法，该方法根据黄芪健胃制剂处方组成的特点，合理控制高效液相色谱的流动相条件，构建得到黄芪健胃制剂的特征图谱，方法简单，且能够全面反映黄芪健胃制剂的质量水平。同时也建立了一种简单、可靠、实用的黄芪健胃制剂的检测方法。
(2)本发明进一步采用双波长切换法与特定的流动相的梯度洗脱相结合，能够加强对处方中君药黄芪、臣药白芍和桂枝、佐药大枣及使药甘草5味药的专属性成分鉴别，更全面地控制其质量，且各特征峰分离效果较好，所建立的特征图谱有10个特征峰，信息量较大，且各特征峰专属性强，较好地对处方中的君药黄芪、臣药白芍和桂枝、佐药大枣及使药甘草5味药进行了控制；明确了7个指标成分，经比较，采用保留时间适中，分离度较好，峰面积较大的芍药苷参照物峰作为参照峰。
(3)本发明还进一步对其余高效液相色谱的测定条件进行了优化，能够使获得特征图谱构建和检测方法具有准确性高、精密度以及中间精密度好、稳定性高、重复性好、分析时间较短的优点。
(4)本发明提供的黄芪健胃膏特征图谱建立方法中对供试品的前处理方法简单，特征性成分保留完整，且供试品溶液稳定性良好。
附图说明
图1为本发明建立的黄芪健胃制剂的特征图谱；其中，峰1为没食子酸，峰3为芍药内酯苷，峰4为芍药苷，峰5为毛蕊异黄酮葡萄糖苷，峰6为芹糖甘草苷，峰7为甘草苷，峰10为肉桂酸；
图2为实施例1中波长的选择特征图谱；
图3为实施例1中流动相考察特征图谱；
图4为实施例1中柱温的选择特征图谱；
图5为实施例1中流速的选择特征图谱；
图6为实施例1中供试品提取溶媒考察特征图谱；
图7为实施例1中色谱峰指认特征图谱；
图8为实施例1中中间精密度-不同仪器考察特征图谱；
图9为实施例1中中间精密度-不同人员考察特征图谱；
图10为实施例1中中间精密度-不同日期考察特征图谱；
图11为实施例1中色谱柱的考察特征图谱；
图12为实施例1中15批黄芪健胃膏特征图谱；
图13为实施例2中黄芪健胃膏特征图谱中特征峰归属图谱；
图14为实施例3中黄芪健胃膏(批号为16)特征图谱。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明的黄芪健胃制剂的特征图谱建立和检测方法作进一步详细的说明。
实施例1：黄芪健胃膏特征图谱分析方法的建立
1.材料、试剂与仪器
1.1实验仪器
Agilent 1260高效液相色谱仪(方法学考察)；
Waters 2695-2998高效液相色谱仪。
色谱柱：Agilent Zorbax Eclipse Plus C18(4.6×250mm，5μm)(方法学考察)；Luna C18(4.6×250mm，5μm)；Kromasil C18(4.6×250mm，5μm)。
1.2试剂及试药
流动相用甲醇、乙腈、磷酸、甲酸均为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。
没食子酸(中国药品生物制品鉴定所，批号：110831-201204，纯度为89.9％)，芍药内酯苷(成都曼斯特生物科技有限公司，批号：16051601，纯度为99.09％)，芍药苷(中国药品生物制品鉴定所，批号：110736-201438，纯度为96.4％)，毛蕊异黄酮葡萄糖苷(中国药品生物制品鉴定所，批号：111920-201505，纯度为99.1％)，芹糖甘草苷(成都瑞芬思生物科技有限公司，批号：G-061-151011，纯度>98％)，甘草苷(中国药品生物制品鉴定所，批号：111610-201607，纯度为93.1％)，肉桂酸(中国药品生物制品鉴定所，批号：110786-200503)。
15批黄芪健胃膏由广州市香雪制药股份有限公司提供(批号：01、02、03、04、05、06、07、08、09、10、11、12、13、14、15)。
2.参照物溶液的制备
取没食子酸、芍药内酯苷、芍药苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芹糖甘草苷、甘草苷、肉桂酸对照品适量，加甲醇制成每1mL分别含30μg、50μg、120μg、5μg、20μg、20μg、5μg的混合溶液，即得参照物溶液。
3.供试品溶液的制备
取黄芪健胃膏1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积浓度为80％的甲醇水溶液25mL，密塞，振摇或超声使其分散均匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。按该方法分别将上述15批的黄芪健胃膏制备成供本实施例检测的供试品溶液。
4.色谱条件与系统适用性试验
以十八烷基键合硅胶为填充剂(Agilent Zorbax Eclipse Plus C18(4.6×250mm，5μm))，检测波长为230nm(0～27min)，290nm(27～40min)，柱温为25℃；流速为每分钟1.0mL。理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于2000。
流动相梯度洗脱方式如下表(表1)：
表1
测定方法：分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各5μL，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得黄芪健胃膏特征图谱，图1。
5.实验结果
5.1波长选择：比较了检测波长230nm、240nm、247nm、260nm、290nm下的色谱峰，在230nm下的色谱峰数目较多且各峰之间的分离度较好，信息量大，基线平稳，白芍、黄芪和甘草药味指标性成分在此波长下均具较好吸收，而桂枝药材的成分在290nm下具有较好吸收，因此选择在色谱过程27min时进行波长切换的检测模式，从而提供更为全面的指纹信息。见图2。
5.2流动相选择：本实验考察了甲醇-水、乙腈-水、乙腈-体积浓度0.1％的甲酸水溶液、乙腈-体积浓度0.1％的磷酸水溶液4种不同流动相的分离效果，结果显示采用乙腈-体积浓度0.1％的磷酸水溶液进行洗脱，分离到的色谱峰较多，且理论板数、分离度、对称性均更好，故将乙腈-0.1％磷酸作为黄芪健胃膏特征图谱测定方法的流动相。见图3。
5.3柱温考察：比较了25℃、30℃和35℃的色谱图，结果显示3种不同柱温对色谱峰峰型、分离度影响较小，为提高色谱柱和仪器的使用寿命，故确定柱温为25℃。见图4。
5.4流速考察：比较了0.8ml·min-1、1.0ml·min-1和1.2ml·min-1的色谱图，结果显示不同的流速对各色谱峰峰型和分离度影响较小，最终采用1.0ml·min-1进行方法学考察。见图5。
5.5供试品前处理考察
5.5.1提取溶媒的考察比较了分别采用甲醇、体积浓度为80％的甲醇水溶液、稀乙醇(体积浓度为49.5-50.5％)为提取溶媒进行直接提取的色谱图，以及采用先加水提取后加入甲醇进行调节使体系为体积浓度80％的甲醇水溶液的方式进行醇沉的色谱图，结果显示采用体积浓度为80％的甲醇水溶液作为提取溶媒进行直接提取，各成分色谱峰峰面积较大，且结合黄芪健胃膏制剂剂型特点，最终确定供试品溶液制备采用体积浓度为80％的甲醇水溶液为提取溶媒直接提取。见图6。
5.5.2提取时间的考察比较了超声0h(振摇使溶解)、超声30min，结果显示，各成分色谱峰的数目和峰面积均无明显差异，因此，确定供试品溶液制备时提取方式为振摇或超声使样品达到分散均匀效果即可。
5.5.3提取溶剂量的考察比较了1:25、1:50料液比的色谱图，结果显示，此2种料液比所得色谱图中各色谱峰的数目和峰面积无明显差异，为节省溶剂，故确定供试品制备时料液比为1:25。
6.色谱峰的指认
采用没食子酸、芍药内酯苷、芍药苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芹糖甘草苷、甘草苷、肉桂酸等对照品进行定位，结果表明：峰1为没食子酸，峰3为芍药内酯苷，峰4为芍药苷，峰5为毛蕊异黄酮葡萄糖苷，峰6为芹糖甘草苷，峰7为甘草苷，峰10为肉桂酸。见图7。
7.方法学考察
7.1精密度试验
取黄芪健胃膏(批号：01)样品1份，按“3.供试品溶液的制备”项下方法制备，分别精密吸取同一供试品溶液5μL，连续进样6次，按“4.色谱条件”项下方法测定，记录色谱图，以芍药苷参照物峰为参照峰，计算各特征峰的相对保留时间和相对峰面积，结果见表2和表3。精密度试验结果显示，各特征峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD值均小于2.0％，表明仪器精密度良好。
表2精密度试验-特征峰相对保留时间比值
表3精密度试验-特征峰相对峰面积比值
7.2重复性试验
精密称取黄芪健胃膏(批号为01)样品6份，按“3.供试品溶液的制备”项下方法制备，分别精密吸取供试品溶液各5μL，连续进样6次，按“4.色谱条件”项下方法测定，记录色谱图，以芍药苷参照物峰为参照峰，计算各特征峰的相对保留时间和相对峰面积，结果见表4和表5。重复性试验结果显示，各特征峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD值均小于2.0％，表明该方法重复性良好。
表4重复性试验-特征峰相对保留时间比值
表5重复性试验-特征峰相对峰面积比值
7.3稳定性试验
取黄芪健胃膏(批号：01)样品1份，按“3.供试品溶液的制备”项下方法制备，分别于0，2，4，8，12，24，48h，按“4.色谱条件”项下方法测定，记录色谱图，以芍药苷参照物峰为参照峰，计算各特征峰的相对保留时间和相对峰面积，结果见表6和表7。稳定性试验结果显示，各特征峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD值为0.00～2.02％，表明样品在48小时内稳定。
表6稳定性试验-特征峰相对保留时间比值
表7稳定性试验-特征峰相对峰面积比值
7.4中间精密度考察
7.4.1不同仪器考察取黄芪健胃膏(批号：01)样品各2份，按“3.供试品溶液的制备”项下方法制备，分别采用Agilent 1260和Waters 2695-2998高效液相色谱仪，按“4.色谱条件”项下方法测定，记录色谱图，以芍药苷参照物峰为参照峰，计算各特征峰的相对保留时间，结果见表8。试验结果显示，各特征峰的相对保留时间的RSD值均小于2.0％，表明该方法在不同仪器间精密度良好。见图8。
表8不同仪器试验-特征峰相对保留时间比值
7.4.2不同人员考察分别由不同人员称取黄芪健胃膏(批号：01)样品各2份，分别按“3.供试品溶液的制备”项下方法制备，并按“4.色谱条件”项下方法测定，记录色谱图，以芍药苷参照物峰为参照峰，计算各特征峰的相对保留时间，结果见表9。试验结果显示，各特征峰的相对保留时间的RSD值均小于2.0％，表明该方法由不同人员进行检测可稳定重现。见图9。
表9不同人员试验-特征峰相对保留时间比值
7.4.3不同日期考察分别于不同日期称取黄芪健胃膏(批号：01)样品各2份，按“3.供试品溶液的制备”项下方法制备，并按“4.色谱条件”项下方法进行测定，记录色谱图，以芍药苷参照物峰为参照峰，计算各特征峰的相对保留时间，结果见表10。试验结果显示，各特征峰的相对保留时间的RSD值均小于2.0％，表明该方法于不同日期下进行检测可稳定重现。见图10。
表10不同日期试验-特征峰相对保留时间比值
7.5耐用性考察
取黄芪健胃膏(批号：01)样品各2份，按“3.供试品溶液的制备”项下方法制备，分别采用3根不同品牌的C18色谱柱，按“4.色谱条件”项下方法进行测定，记录色谱图，以芍药苷参照物峰为参照峰，计算各特征峰的相对保留时间，结果显示，不同色谱柱所得特征图谱中各特征峰的相对保留时间均在规定值的±10％范围内，因此，本方法规定所用色谱柱为C18色谱柱即可。见表11，见图11。
表11耐用性考察-特征峰相对保留时间比值
8.特征峰的确定及对照特征图谱的建立
采用拟定的方法对15批黄芪健胃膏样品进行特征图谱的测定，根据保留时间稳定及各批次样品均能检出且峰面积相对较高的原则，共选择了10个重复性较好且专属性较强的色谱峰作为特征峰，以芍药苷参照物峰为参照峰，计算各特征峰的相对保留时间，结果见表12，见图12。
表12 15批黄芪健胃膏图谱特征峰的相对保留时间比值
将15批图谱数据导入特征图谱相似性评价软件(中药色谱特征图谱相似度评价系统，2012.1版)，以S1批次样品图谱为参照图谱，匹配色谱峰，以中位数法生成对照图谱，即对照特征图谱(见图1)。
结合方法学考察中各变动因素对特征峰相对保留时间的影响，以与芍药苷参照峰相应的峰为S峰，计算对照特征图谱中各特征峰的相对保留时间。最终规定：供试品特征图谱中应呈现10个特征峰，以与芍药苷参照物相应的峰为S峰，计算各特征峰与峰(S)的相对保留时间，其各特征峰相对保留时间应在规定值的±10％之内。规定值：0.305(峰1，没食子酸)，0.397(峰2)，0.916(峰3，芍药内酯苷)，1.000(峰4，芍药苷)，1.137(峰5，毛蕊异黄酮葡萄糖苷)，1.180(峰6，芹糖甘草苷)，1.213(峰7，甘草苷)，1.514(峰8)，1.950(峰9)，2.072(峰10，肉桂酸)。
实施例2
本实施例进行黄芪健胃膏样品与各原料药材特征图谱相关性及各特征峰归属分析。
(1)仪器与试药
Agilent 1260高效液相色谱仪。
没食子酸(中国药品生物制品鉴定所，批号：110831-201204，纯度为89.9％)，芍药内酯苷(成都曼斯特生物科技有限公司，批号：16051601，纯度为99.09％)，芍药苷(中国药品生物制品鉴定所，批号：110736-201438，纯度为96.4％)，毛蕊异黄酮葡萄糖苷(中国药品生物制品鉴定所，批号：111920-201505，纯度为99.1％)，芹糖甘草苷(成都瑞芬思生物科技有限公司，批号：G-061-151011，纯度>98％)，甘草苷(中国药品生物制品鉴定所，批号：111610-201607，纯度为93.1％)，肉桂酸(中国药品生物制品鉴定所，批号：110786-200503)。黄芪药材(亳州沪谯药业有限公司，批号：1606240172，产地：内蒙古)，白芍药材(广州康圣药业有限公司，批号：20150901，产地：安徽)，桂枝药材(亳州沪谯药业有限公司，批号：1603240392，产地：广西)，大枣药材(安徽济顺中药饮片有限公司，批号：A，产地：河北)，生姜药材(安徽济顺中药饮片有限公司，批号：20161008，产地：山东)，甘草药材(广州康圣药业有限公司，批号：20150802，产地：甘肃)。
(2)色谱条件
色谱柱为Agilent Zorbax Eclipse Plus C18(4.6×250mm，5μm)，检测波长为230nm(0～27min)，290nm(27～40min)，柱温为25℃；流速为每分钟1.0mL。理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于2000。
流动相梯度洗脱表(同表1)：
(3)参照物溶液的制备取没食子酸、芍药内酯苷、芍药苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芹糖甘草苷、甘草苷、肉桂酸对照品适量，加甲醇制成每1mL分别含30μg、50μg、120μg、5μg、20μg、20μg、5μg的混合溶液，即得参照物溶液。
(4)供试品溶液的制备取黄芪健胃膏1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积浓度为80％的甲醇水溶液25mL，密塞，振摇或超声使其分散均匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。
(5)阴性样品溶液制备分别取除其中某味药材的其他药材，按处方制备成黄芪健胃膏阴性样品，取各阴性样品，按实施例1中“3.供试品溶液的制备”项下方法制备对应的阴性样品溶液，共6份阴性样品溶液。
(6)单味药材溶液的制备分别取各单味处方药相应的药材，按处方提取工艺制备成干膏，再按实施例1中“3.供试品溶液的制备”项下方法制备成相应的单味药材溶液，共6味药材溶液。
(7)单味药材、阴性样品、供试品特征峰归属分析。
精密吸取上述参照物溶液、供试品溶液、阴性样品溶液和单味药材溶液各5μL，分别注入高效液相色谱仪中，按实施例1中“4.色谱条件”项下方法测定，记录色谱图；依据各吸收峰的紫外吸收光谱和相对保留时间，确定各特征峰的归属，见表13和图13。
表13黄芪健胃膏各特征峰归属
上述结果显示，所述黄芪健胃膏特征图谱中的10个特征峰均可在药材中找到归属，制剂与药材之间存在良好的相关性，其中归属于黄芪的特征峰为：峰5、峰9；归属于白芍的特征峰为：峰1、峰3、峰4；归属于桂枝的特征峰为：峰10；归属于大枣的特征峰为：峰2；归属于甘草的特征峰为：峰6、峰7；归属于白芍和大枣的共有特征峰为：峰8，且峰8主要来源于白芍药材。处方中黄芪、白芍、桂枝、大枣和甘草5味药均能在黄芪健胃膏特征图谱中能体现，方中仅生姜1味药材在该色谱条件下基本检测不出特征峰。
实施例3
本实施例一种黄芪健胃膏的检测方法，包括如下步骤：
(1)供试品溶液的制备
取待测样品(批号：16的黄芪健胃膏，香雪制药股份有限公司自生产)1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积浓度为80％的甲醇水溶液25mL，密塞，振摇或超声使其分散均匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；
(2)检测
精密吸取供试品溶液，注入高效液相色谱仪中进行测定，所述高效液相色谱仪的条件同实施例1中“4.色谱条件”项。
待测样品的检测图谱如图14所示。
通过与图1比较，可知，该待测样品的检测图谱中，采用参照物和特征峰相对保留时间可定位检出10个特征峰，与对照特征图谱的相似度为1.000，可以认为该待测样品质量稳定，符合质量要求，为合格产品。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (10)

1.一种黄芪健胃制剂的特征图谱建立方法，其特征在于，包括如下步骤：
参照物溶液的制备：分别精密称定没食子酸、芍药内酯苷、芍药苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芹糖甘草苷、甘草苷、肉桂酸对照品，混合后加甲醇溶解，即得所述参照物溶液；
供试品溶液的制备：精密称定黄芪健胃制剂，精密加入体积浓度为70-90％的甲醇水溶液进行提取，滤过，取续滤液，即得所述供试品溶液；
特征图谱建立：分别精密吸取所述供试品溶液和参照物溶液，注入高效液相色谱仪，测定，即得由10个共有特征峰构成的所述特征图谱；
其中，所述高效液相色谱仪采用的流动相为：以乙腈为流动相A，以体积浓度为0.1％的磷酸水溶液为流动相B，采用梯度洗脱方式。
2.根据权利要求1所述的黄芪健胃制剂的特征图谱建立方法，其特征在于，所述梯度洗脱方式为：0-25min，流动相A的体积百分数由8％变化至30％，流动相B的体积百分数由92％变化至70％；25-40min，流动相A的体积百分数由30％变化至45％，流动相B的体积百分数由70％变化至55％。
3.根据权利要求2所述的黄芪健胃制剂的特征图谱建立方法，其特征在于，所述高效液相色谱仪的检测波长采用双波长切换测定法，切换方式为：0-27min，检测波长为230nm，27min-40min，检测波长切换为290nm。
4.根据权利要求1所述的黄芪健胃制剂的特征图谱建立方法，其特征在于，所述高效液相色谱仪的条件为：色谱柱：以十八烷基键合硅胶为填充剂；柱温25-35℃，流速为0.8-1.2mL·min-1。
5.根据权利要求4所述的黄芪健胃制剂的特征图谱建立方法，其特征在于，所述柱温25℃，流速为1mL·min-1。
6.根据权利要求1-5任一项所述的黄芪健胃制剂的特征图谱建立方法，其特征在于，每1mL所述参照物溶液含没食子酸25-35μg、芍药内酯苷40-60μg、芍药苷110-130μg、毛蕊异黄酮葡萄糖苷1-10μg、芹糖甘草苷15-25μg、甘草苷15-25μg、肉桂酸1-10μg。
7.一种黄芪健胃制剂的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
供试品溶液的制备：精密称定黄芪健胃制剂，精密加入体积浓度为70-90％的甲醇水溶液进行提取，滤过，取续滤液，即得所述供试品溶液；
检测：精密吸取所述供试品溶液，注入高效液相色谱仪，测定，即可；
其中，所述高效液相色谱仪采用的流动相为：以乙腈为流动相A，以体积浓度为0.1％的磷酸水溶液为流动相B，采用梯度洗脱方式。
8.根据权利要求7所述的黄芪健胃制剂的检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱方式为：0-25min，流动相A的体积百分数由8％变化至30％，流动相B的体积百分数由92％变化至70％；25-40min，流动相A的体积百分数由30％变化至45％，流动相B的体积百分数由70％变化至55％。
9.根据权利要求8所述的黄芪健胃制剂的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱仪的检测波长采用双波长切换测定法，切换方式为：0～27min，检测波长为230nm，27-40min，检测波长切换为290nm。
10.根据权利要求7-9任一项所述的黄芪健胃制剂的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱仪的条件为：色谱柱：以十八烷基键合硅胶为填充剂；柱温25-35℃，流速为0.8-1.2mL·min-1。
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