CN106770785A - 一种建立茜草藤药材的指纹图谱的方法 - Google Patents

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    • G01N30/02—Column chromatography

Abstract

本发明属于药物分析领域，具体涉及一种建立茜草藤药材的指纹图谱的方法。该方法以茜草藤药材为检测对象，建立了茜草藤药材的指纹图谱的方法，确认了共有特征峰1号峰、2号峰、3号峰、4号峰、5号峰和6号峰芦丁，选择6号峰芦丁作为指纹图谱中的内参考峰，确定了各共有特征峰的相对保留时间，且通过结合该指纹图谱中多个色谱峰的信息，能够全面地、快速地检测茜草藤药材的质量，有利于其全面质量检测和整体质量控制，从而有助于提高该药物使用的安全性和稳定性。同时，本发明建立的茜草藤药材的指纹图谱的方法具有精密度高、重复性好、稳定性高等优点。

Description

一种建立茜草藤药材的指纹图谱的方法
技术领域
本发明属于药物分析领域，具体涉及一种建立茜草藤药材的指纹图谱的方法。
背景技术
茜草藤为茜草科茜草属植物茜草R.cordifolia L.或东南茜草R.argyi(Lévl.etVan.)Hara ex L.A.Lauener et D.K.Ferguson的干燥地上部分，茜草藤作药用最早记载于《履巉岩本草》，陕西汉中市以及河南南阳市的民间将茜草藤水煮后用于治疗小儿腹泻、并广为流传，西安医科大学第一附属医院儿科将其作为临床医院制剂使用已有十多年。
目前的茜草藤药材标准为1997年收载于安徽省药品标准中(皖Q/WS-01-97)的标准，通过鉴别和浸出物含量测定来检测其质量。近年来，国内外的研究主要是关于地下部分的茜草，对地上部分茜草藤的研究文献很少，陈战国等对茜草藤的生药学进行了一定的研究(中草药，2001，32(2)：157-159.)，研究中指出，茜草藤主要含有皂苷、多糖、黄酮类、酚类、微量元素等化学成分，但并没有明确具体成分。
从上述可知，目前茜草藤质量研究方面的相关信息有限，仅有少量性状、显微、理化薄层鉴别研究等，还有待进一步完善。一方面，由于茜草藤药材的同属植物较多、相互之间不易鉴别，产地对茜草藤药材所含的化学成分的种类和各化学成分的含量等也有一定的影响，通过现行标准控制茜草藤药材的质量过于单一、片面，不能从整体上全面反映茜草藤药材的质量，进而导致质量检测结果可能缺乏客观性和准确性，从而无法保证茜草藤药材临床用药的有效性和安全性；另一方面，通过鉴别和浸出物含量测定联合来检测茜草藤药材的质量，费时、费力，难以广泛地应用于生产实践。
因而，建立一种能够全面地、快速地检测茜草藤药材的质量的方法，对于其全面质量检测和整体质量控制具有重要意义。
发明内容
为此，本发明要解决的第一个技术问题是茜草藤药材的质量检测方法不能从整体上全面反映茜草藤药材的质量、进而导致质量检测结果可能缺乏客观性和准确性、从而无法保证茜草藤药材临床用药的安全性和有效性的问题，本发明要解决的第二个技术问题是现有的茜草藤药材的质量检测方法费时、费力，难以广泛地应用于生产实践的问题，从而提供一种建立茜草藤药材的指纹图谱的方法。
为解决上述技术问题，本发明是通过以下技术方案来实现的：
本发明提供一种建立茜草藤药材的指纹图谱的方法，该方法包括如下步骤：
(1)取待测茜草藤药材0.5～5.0重量份，精密称定，精密加入体积分数为20％～100％的甲醇水溶液25～100体积份，称定重量，超声提取15～60分钟，放冷，再称定重量，用体积分数为20％～100％的甲醇水溶液补足损失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，作为供试品溶液；
(2)精密称取芦丁对照品，加甲醇制成每1体积份含0.00005～0.00020重量份的溶液，摇匀，作为对照品溶液；
(3)色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A、以体积分数为0.05％～0.5％的磷酸水溶液为流动相B按照如下程序进行梯度洗脱：0～5min，A：B为5％：95％；5～40min，A：B为5％：95％→20％：80％；40min，A：B为20％：80％；40～55min，A：B为20％：80％→40％：60％；55min，A：B为40％：60％；55～60min，A：B为40％：60％→80％：20％；60min，A：B为80％：20％；60～70min，A：B为80％：20％；70min，A：B为80％：20％；70～75min，A：B为80％：20％→5％：95％；检测波长为218～222nm，柱温25～40℃，流速为0.5～1.5mL/min；
(4)分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液5～20μL，注入高效液相色谱仪，测定，分别得到供试品溶液和对照品溶液的液相色谱；
(5)利用国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统，对供试品溶液和对照品溶液的液相色谱分别经过数据导入、多点校正和数据匹配，即得指纹图谱；
所述重量份与所述体积份的关系为g/mL。
优选地，上述建立茜草藤药材的指纹图谱的方法，该方法包括如下步骤：
(1)取待测茜草藤药材0.5～2.0重量份，精密称定，精密加入体积分数为30％～70％的甲醇水溶液25～50体积份，称定重量，超声提取20～30分钟，放冷，再称定重量，用体积分数为30％～70％的甲醇水溶液补足损失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，作为供试品溶液；
(2)精密称取芦丁对照品，加甲醇制成每1体积份含0.00005～0.00015重量份的溶液，摇匀，作为对照品溶液；
(3)色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A、以体积分数为0.05％～0.20％的磷酸水溶液为流动相B按照如下程序进行梯度洗脱：0～5min，A：B为5％：95％；5～40min，A：B为5％：95％→20％：80％；40min，A：B为20％：80％；40～55min，A：B为20％：80％→40％：60％；55min，A：B为40％：60％；55～60min，A：B为40％：60％→80％：20％；60min，A：B为80％：20％；60～70min，A：B为80％：20％；70min，A：B为80％：20％；70～75min，A：B为80％：20％→5％：95％；检测波长为220nm，柱温为30～35℃，流速为0.8～1.2mL/min；
(4)分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液5～15μL，注入高效液相色谱仪，测定，分别得到供试品溶液和对照品溶液的液相色谱；
(5)利用国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统，对供试品溶液和对照品溶液的液相色谱分别经过数据导入、多点校正和数据匹配，即得指纹图谱。
进一步优选地，上述建立茜草藤药材的指纹图谱的方法，该方法包括如下步骤：
(1)取待测茜草藤药材1.0重量份，精密称定，精密加入体积分数为50％的甲醇水溶液25体积份，称定重量，超声提取30分钟，放冷，再称定重量，用体积分数为50％的甲醇水溶液补足损失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，作为供试品溶液；
(2)精密称取芦丁对照品，加甲醇制成每1体积份含0.00010重量份的溶液，摇匀，作为对照品溶液；
(3)色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A、以体积分数为0.1％的磷酸水溶液为流动相B按照如下程序进行梯度洗脱：0～5min，A：B为5％：95％；5～40min，A：B为5％：95％→20％：80％；40min，A：B为20％：80％；40～55min，A：B为20％：80％→40％：60％；55min，A：B为40％：60％；55～60min，A：B为40％：60％→80％：20％；60min，A：B为80％：20％；60～70min，A：B为80％：20％；70min，A：B为80％：20％；70～75min，A：B为80％：20％→5％：95％；检测波长为220nm，柱温为30℃，流速为1.0mL/min；
(4)分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液10μL，注入高效液相色谱仪，测定，分别得到供试品溶液和对照品溶液的液相色谱；
(5)利用国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统，对供试品溶液和对照品溶液的液相色谱分别经过数据导入、多点校正和数据匹配，即得指纹图谱。
进一步优选地，上述建立茜草藤药材的指纹图谱的方法，以250mm×4.6mm、5μm的Agilent HC-C18为色谱柱。
进一步优选地，上述建立茜草藤药材的指纹图谱的方法，所述茜草藤药材的指纹图谱中，共有特征峰为：1号峰、2号峰、3号峰、4号峰、5号峰和6号峰芦丁；以6号峰为内参照峰，各峰号的相对保留时间分别为：1号峰0.15±0.0075、2号峰0.30±0.015、3号峰0.45±0.0225、4号峰0.55±0.0275、5号峰0.63±0.0315和6号峰1.0。
进一步优选地，上述建立茜草藤药材的指纹图谱的方法，所述茜草藤药材的指纹图谱中，各峰号的相对保留时间分别为：1号峰0.15、2号峰0.30、3号峰0.45、4号峰0.55、5号峰0.63和6号峰1.0。
进一步优选地，上述建立茜草藤药材的指纹图谱的方法，所述茜草藤药材为茜草的地上部分或东南茜草的地上部分。
本发明还提供上述方法在茜草藤药材的质量检测和质量控制中的应用。与现有技术相比，本发明的上述技术方案具有如下优点：
(1)本发明建立茜草藤药材的指纹图谱的方法，以茜草藤药材为检测对象，建立了针对该药材的指纹图谱的方法，获得了较为全面的图谱信息，确认了共有特征峰1号峰、2号峰、3号峰、4号峰、5号峰和6号峰芦丁；选择6号峰为内参照峰，确定了茜草藤药材的共有特征峰1号峰、2号峰、3号峰、4号峰和5号峰的相对保留时间，且结合该指纹图谱中的多个色谱峰的信息，能够全面地、快速地检测茜草藤药材的质量，有利于其全面质量检测和整体质量控制，从而有助于提高该药材临床用药的有效性和安全性；
(2)本发明建立茜草藤药材的指纹图谱的方法，具有稳定性高、精密度高、重复性好等优点，通过该方法即可对茜草藤药材的质量进行检测，操作较简便，可以用于茜草藤药材的生产过程监测和质量控制中，从而可以确保茜草藤药材质量的稳定性和均一性，从而有助于提高该药材临床用药的有效性和安全性。
附图说明
为了使本发明的内容更容易被清楚的理解，下面根据本发明的具体实施例并结合附图，对本发明作进一步详细的说明，其中：
图1为本发明实验例1中芦丁对照品溶液的液相色谱图；
图2为本发明实验例1中茜草藤药材的供试品溶液(编号：QCT-01-001)的液相色谱图；
图3为本发明实验例1中19批茜草藤药材的供试品溶液导入指纹图谱相似度计算软件后导出的叠加色谱图；
图4为本发明实验例1中建立的茜草藤药材的指纹图谱。
具体实施方式
本发明以下实施例和实验例中，茜草藤药材为茜草的地上部分或东南茜草的地上部分。
实施例1
本实施例建立茜草藤药材的指纹图谱的方法，包括如下步骤：
(1)取待测茜草藤药材1.0g，精密称定，精密加入体积分数为50％的甲醇水溶液25mL，称定重量，超声提取30分钟，放冷，再称定重量，用体积分数为50％的甲醇水溶液补足损失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，作为供试品溶液；
(2)精密称取芦丁对照品，加甲醇制成每1mL含0.00010g的溶液，摇匀，作为对照品溶液；
(3)色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A、以体积分数为0.1％的磷酸水溶液为流动相B按照如下程序进行梯度洗脱：0～5min，A：B为5％：95％；5～40min，A：B为5％：95％→20％：80％；40min，A：B为20％：80％；40～55min，A：B为20％：80％→40％：60％；55min，A：B为40％：60％；55～60min，A：B为40％：60％→80％：20％；60min，A：B为80％：20％；60～70min，A：B为80％：20％；70min，A：B为80％：20％；70～75min，A：B为80％：20％→5％：95％；检测波长为220nm，柱温30℃，流速为1.0mL/min；
(4)分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液10μL，注入高效液相色谱仪，测定，分别得到供试品溶液和对照品溶液的液相色谱；
(5)利用国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统，对供试品溶液和对照品溶液的液相色谱分别经过数据导入、多点校正和数据匹配，即得指纹图谱。
实施例2
本实施例建立茜草藤药材的指纹图谱的方法，包括如下步骤：
(1)取待测茜草藤药材0.5g，精密称定，精密加入体积分数为70％的甲醇水溶液25mL，称定重量，超声提取30分钟，放冷，再称定重量，用体积分数为70％的甲醇水溶液补足损失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，作为供试品溶液；
(2)精密称取芦丁对照品，加甲醇制成每1mL含0.00005g的溶液，摇匀，作为对照品溶液；
(3)色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A、以体积分数为0.05％～0.20％的磷酸水溶液为流动相B按照如下程序进行梯度洗脱：0～5min，A：B为5％：95％；5～40min，A：B为5％：95％→20％：80％；40min，A：B为20％：80％；40～55min，A：B为20％：80％→40％：60％；55min，A：B为40％：60％；55～60min，A：B为40％：60％→80％：20％；60min，A：B为80％：20％；60～70min，A：B为80％：20％；70min，A：B为80％：20％；70～75min，A：B为80％：20％→5％：95％；检测波长为220nm，柱温35℃，流速为0.8mL/min；
(4)分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液15μL，注入高效液相色谱仪，测定，分别得到供试品溶液和对照品溶液的液相色谱；
(5)利用国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统，对供试品溶液和对照品溶液的液相色谱分别经过数据导入、多点校正和数据匹配，即得指纹图谱。
实施例3
本实施例建立茜草藤药材的指纹图谱的方法，包括如下步骤：
(1)取待测茜草藤药材2.0g，精密称定，精密加入体积分数为30％的甲醇水溶液50mL，称定重量，超声提取20分钟，放冷，再称定重量，用体积分数为30％的甲醇水溶液补足损失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，作为供试品溶液；
(2)精密称取芦丁对照品，加甲醇制成每1mL含0.00015g的溶液，摇匀，作为对照品溶液；
(3)色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A、以体积分数为0.05％～0.20％的磷酸水溶液为流动相B按照如下程序进行梯度洗脱：0～5min，A：B为5％：95％；5～40min，A：B为5％：95％→20％：80％；40min，A：B为20％：80％；40～55min，A：B为20％：80％→40％：60％；55min，A：B为40％：60％；55～60min，A：B为40％：60％→80％：20％；60min，A：B为80％：20％；60～70min，A：B为80％：20％；70min，A：B为80％：20％；70～75min，A：B为80％：20％→5％：95％；检测波长为220nm，柱温30℃，流速为1.2mL/min；
(4)分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液5μL，注入高效液相色谱仪，测定，分别得到供试品溶液和对照品溶液的液相色谱；
(5)利用国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统，对供试品溶液和对照品溶液的液相色谱分别经过数据导入、多点校正和数据匹配，即得指纹图谱。
实施例4
本实施例建立茜草藤药材的指纹图谱的方法，包括如下步骤：
(1)取待测茜草藤药材0.5g，精密称定，精密加入体积分数为100％的甲醇水溶液25mL，称定重量，超声提取60分钟，放冷，再称定重量，用体积分数为100％的甲醇水溶液补足损失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，作为供试品溶液；
(2)精密称取芦丁对照品，加甲醇制成每1mL含0.00005g的溶液，摇匀，作为对照品溶液；
(3)色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A、以体积分数为0.05％～0.5％的磷酸水溶液为流动相B按照如下程序进行梯度洗脱：0～5min，A：B为5％：95％；5～40min，A：B为5％：95％→20％：80％；40min，A：B为20％：80％；40～55min，A：B为20％：80％→40％：60％；55min，A：B为40％：60％；55～60min，A：B为40％：60％→80％：20％；60min，A：B为80％：20％；60～70min，A：B为80％：20％；70min，A：B为80％：20％；70～75min，A：B为80％：20％→5％：95％；检测波长为222nm，柱温25℃，流速为1.5mL/min；
(4)分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液5μL，注入高效液相色谱仪，测定，分别得到供试品溶液和对照品溶液的液相色谱；
(5)利用国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统，对供试品溶液和对照品溶液的液相色谱分别经过数据导入、多点校正和数据匹配，即得指纹图谱。
实施例5
本实施例建立茜草藤药材的指纹图谱的方法，包括如下步骤：
(1)取待测茜草藤药材5.0g，精密称定，精密加入体积分数为20％的甲醇水溶液100mL，称定重量，超声提取15分钟，放冷，再称定重量，用体积分数为20％的甲醇水溶液补足损失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，作为供试品溶液；
(2)精密称取芦丁对照品，加甲醇制成每1mL含0.00020g的溶液，摇匀，作为对照品溶液；
(3)色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A、以体积分数为0.05％～0.5％的磷酸水溶液为流动相B按照如下程序进行梯度洗脱：0～5min，A：B为5％：95％；5～40min，A：B为5％：95％→20％：80％；40min，A：B为20％：80％；40～55min，A：B为20％：80％→40％：60％；55min，A：B为40％：60％；55～60min，A：B为40％：60％→80％：20％；60min，A：B为80％：20％；60～70min，A：B为80％：20％；70min，A：B为80％：20％；70～75min，A：B为80％：20％→5％：95％；检测波长为218nm，柱温40℃，流速为0.5mL/min；
(4)分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液20μL，注入高效液相色谱仪，测定，分别得到供试品溶液和对照品溶液的液相色谱；
(5)利用国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统，对供试品溶液和对照品溶液的液相色谱分别经过数据导入、多点校正和数据匹配，即得指纹图谱。
实验例1
1、仪器与试药
仪器包括：高效液相色谱仪：戴安UItiMate3000高效液相色谱仪；色谱柱：AgilentHC-C18(250mm×4.6mm，5μm)色谱柱；紫外检测器；万分之一天平(Sartorius BS224S)，十万分之一天平(Precisa XR205SM DR)；超声波发生器：(昆山超声KQ-700DE 40KHz 280W)；
试药包括：磷酸(上海中试化工有限公司)，色谱甲醇(瑞典欧森巴克环境化学公司)，色谱乙腈(瑞典欧森巴克环境化学公司)，水为超纯水(电阻率18.2mΩ.cm)，其他试剂均为分析纯。
19批茜草藤的样品信息如下表1所示：
表1 19批茜草藤的样品信息表
2、流动相的梯度洗脱程序
表2流动相的梯度洗脱程序
3、茜草藤药材指纹图谱的建立
按如下方法建立茜草藤药材的指纹图谱：
取芦丁对照品和取19个批次经现行标准检测合格的茜草藤样品(如表1所示)的地上部分粉碎，过2号筛，分别制备对照品溶液和供试品溶液，按照实施例1的方法建立茜草藤药材的指纹图谱。
芦丁对照品溶液的液相色谱图、编号为QCT-01-001的茜草藤药材供试品溶液的液相色谱图、19批茜草藤药材供试品溶液导入指纹图谱相似度计算软件后导出的叠加色谱图和建立的茜草藤药材的指纹图谱分别如图1-4所示。
采用药典委员会编制的指纹图谱相似度评价软件中“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004版”，生成对照特征图谱。
由图4可知，茜草藤药材的指纹图谱中有6个共有特征峰，依次标号为1、2、3、4、5、6，经过对照品溶液比对，其中6号峰为芦丁，选取6号峰芦丁作为内参照峰(S峰)，以参照峰的相对保留时间为1，计算其他各峰的相对保留时间，结果见表3。
表3 19批茜草藤药材共有峰相对保留时间
由表3可知，1～6号峰的平均相对保留时间为：0.15、0.30、0.45、0.55、0.63、1，相对标准偏差均≤0.105。
4、方法学验证
4.1精密度考察
取同一重复性项下的茜草藤药材(编号为QCT-01-001)，按实施例1的供试品溶液制备方法制备供试品溶液，连续进样6次，得到6个色谱图，以参照物芦丁保留时间为1计算其他特征峰的相对保留时间，记录各共有色谱峰的相对保留时间，经计算各共有色谱峰的相对保留时间的相对标准偏差RSD≤0.05％，说明该方法的精密度良好。
4.2重复性考察
取同一编号的供试品(编号为QCT-01-001)6份，分别按实施例1的供试品溶液制备方法制备供试品溶液，并进行高效液相色谱测定，记录各共有色谱峰的相对保留时间，经计算各共有色谱峰的相对保留时间的相对标准偏差RSD≤0.04％，说明该方法的重复性较好。
4.3稳定性考察
取重复性项下的同一供试品溶液(编号为QCT-01-001)，按实施例1的方法分别在0h、2h、4h、8h、12h、24h进行检测，记录各共有色谱峰的相对保留时间，经计算各共有色谱峰的相对保留时间的相对标准偏差RSD≤0.25％，说明该方法的稳定性较好。
综上，采用本发明的方法建立的茜草藤药材的指纹图谱的精密度、重复性和稳定性均较好，结果准确可靠，能较全面的反映茜草藤药材的质量。
5、茜草藤药材的质量检测
(1)检测样品：茜草藤，2016年8月采集于亳州
供试品溶液的制备：取上述茜草藤样品1.0g，精密称定，精密加入体积分数为50％的甲醇水溶液25mL，称定重量，超声提取30分钟，放冷，再称定重量，用体积分数为50％的甲醇水溶液补足损失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得供试品溶液；
对照品溶液的制备：精密称取芦丁对照品5mg至10mL容量瓶中，加甲醇超声溶解并定容至刻度，精密量取1mL芦丁溶液至5mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度摇匀，即得对照品溶液；
色谱条件：同实施例1；
高效液相分析：分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液10μL注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件记录80min，即得供试品溶液和对照品溶液的液相色谱图。在待测样品中找到与指纹图谱对应的6个特征峰，以对照品芦丁保留时间为1计算其他特征峰的相对保留时间，分别为：0.15、0.30、0.44、0.55、0.63，均在规定的相对保留时间偏差范围内，说明该批茜草藤药材的质量检测符合要求。
(2)检测样品：茜草藤，2016年7月采集于合肥
供试品溶液的制备：取上述茜草藤样品1.0g，精密称定，精密加入体积分数为50％的甲醇水溶液25mL，称定重量，超声提取30分钟，放冷，再称定重量，用体积分数为50％的甲醇水溶液补足损失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得供试品溶液；
对照品溶液的制备：精密称取芦丁对照品5mg至10mL容量瓶中，加甲醇超声溶解并定容至刻度，精密量取1mL芦丁溶液至5mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度摇匀，即得对照品溶液；
色谱条件：同实施例1；
高效液相分析：分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液10μL注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件记录80min，即得供试品溶液和对照品溶液的液相色谱图。在待测样品中仅找到与指纹图谱对应的4个特征峰，另外两个特征峰未找到，说明该批茜草藤药材质量不合格，不符合要求，不能用于制剂生产。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (7)

1.一种建立茜草藤药材的指纹图谱的方法，其特征在于，
该方法包括如下步骤：
(1)取待测茜草藤药材0.5～5.0重量份，精密称定，精密加入体积分数为20％～100％的甲醇水溶液25～100体积份，称定重量，超声提取15～60分钟，放冷，再称定重量，用体积分数为20％～100％的甲醇水溶液补足损失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，作为供试品溶液；
(2)精密称取芦丁对照品，加甲醇制成每1体积份含0.00005～0.00020重量份的溶液，摇匀，作为对照品溶液；
(3)色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A、以体积分数为0.05％～0.5％的磷酸水溶液为流动相B按照如下程序进行梯度洗脱：0～5min，A：B为5％：95％；5～40min，A：B为5％：95％→20％：80％；40min，A：B为20％：80％；40～55min，A：B为20％：80％→40％：60％；55min，A：B为40％：60％；55～60min，A：B为40％：60％→80％：20％；60min，A：B为80％：20％；60～70min，A：B为80％：20％；70min，A：B为80％：20％；70～75min，A：B为80％：20％→5％：95％；检测波长为218～222nm，柱温25～40℃，流速为0.5～1.5mL/min；
(4)分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液5～20μL，注入高效液相色谱仪，测定，分别得到供试品溶液和对照品溶液的液相色谱；
(5)利用国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统，对供试品溶液和对照品溶液的液相色谱分别经过数据导入、多点校正和数据匹配，即得指纹图谱；
所述重量份与所述体积份的关系为g/mL。
2.根据权利要求1所述的建立茜草藤药材的指纹图谱的方法，其特征在于，
该方法包括如下步骤：
(1)取待测茜草藤药材0.5～2.0重量份，精密称定，精密加入体积分数为30％～70％的甲醇水溶液25～50体积份，称定重量，超声提取20～30分钟，放冷，再称定重量，用体积分数为30％～70％的甲醇水溶液补足损失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，作为供试品溶液；
(2)精密称取芦丁对照品，加甲醇制成每1体积份含0.00005～0.00015重量份的溶液，摇匀，作为对照品溶液；
(3)色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A、以体积分数为0.05％～0.2％的磷酸水溶液为流动相B按照如下程序进行梯度洗脱：0～5min，A：B为5％：95％；5～40min，A：B为5％：95％→20％：80％；40min，A：B为20％：80％；40～55min，A：B为20％：80％→40％：60％；55min，A：B为40％：60％；55～60min，A：B为40％：60％→80％：20％；60min，A：B为80％：20％；60～70min，A：B为80％：20％；70min，A：B为80％：20％；70～75min，A：B为80％：20％→5％：95％；检测波长为220nm，柱温为30～35℃，流速为0.8～1.2mL/min；
(4)分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液5～15μL，注入高效液相色谱仪，测定，分别得到供试品溶液和对照品溶液的液相色谱；
(5)利用国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统，对供试品溶液和对照品溶液的液相色谱分别经过数据导入、多点校正和数据匹配，即得指纹图谱。
3.根据权利要求2所述的建立茜草藤药材的指纹图谱的方法，其特征在于，
该方法包括如下步骤：
(1)取待测茜草藤药材1.0重量份，精密称定，精密加入体积分数为50％的甲醇水溶液25体积份，称定重量，超声提取30分钟，放冷，再称定重量，用体积分数为50％的甲醇水溶液补足损失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，作为供试品溶液；
(2)精密称取芦丁对照品，加甲醇制成每1体积份含0.00010重量份的溶液，摇匀，作为对照品溶液；
(3)色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A、以体积分数为0.1％的磷酸水溶液为流动相B按照如下程序进行梯度洗脱：0～5min，A：B为5％：95％；5～40min，A：B为5％：95％→20％：80％；40min，A：B为20％：80％；40～55min，A：B为20％：80％→40％：60％；55min，A：B为40％：60％；55～60min，A：B为40％：60％→80％：20％；60min，A：B为80％：20％；60～70min，A：B为80％：20％；70min，A：B为80％：20％；70～75min，A：B为80％：20％→5％：95％；检测波长为220nm，柱温为30℃，流速为1.0mL/min；
(4)分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液10μL，注入高效液相色谱仪，测定，分别得到供试品溶液和对照品溶液的液相色谱；
(5)利用国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统，对供试品溶液和对照品溶液的液相色谱分别经过数据导入、多点校正和数据匹配，即得指纹图谱。
4.根据权利要求1～3任一项所述的建立茜草藤药材的指纹图谱的方法，其特征在于，以250mm×4.6mm、5μm的Agilent HC-C18为色谱柱。
5.根据权利要求1～4任一项所述的建立茜草藤药材的指纹图谱的方法，其特征在于，所述茜草藤药材的指纹图谱中，共有特征峰为：1号峰、2号峰、3号峰、4号峰、5号峰和6号峰芦丁；以6号峰为内参照峰，各峰号的相对保留时间分别为：1号峰0.15±0.0075、2号峰0.30±0.015、3号峰0.45±0.0225、4号峰0.55±0.0275、5号峰0.63±0.0315和6号峰1.0。
6.根据权利要求5所述的建立茜草藤药材的指纹图谱的方法，其特征在于，所述茜草藤药材的指纹图谱中，各峰号的相对保留时间分别为：1号峰0.15、2号峰0.30、3号峰0.45、4号峰0.55、5号峰0.63和6号峰1.0。
7.权利要求1～6任一项所述的方法在茜草藤药材的质量检测和质量控制中的应用。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109030641A (zh) * 2018-06-11 2018-12-18 合肥华润神鹿药业有限公司 一种养胃舒颗粒指纹图谱的构建方法
CN114487240A (zh) * 2021-12-27 2022-05-13 北京康仁堂药业有限公司 茜草炭及其制剂的特征图谱及其构建方法和含量测定方法

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1582983A (zh) * 2003-08-21 2005-02-23 合肥神鹿双鹤药业有限责任公司 一种儿童止泻用口服中药
CN1958003A (zh) * 2005-10-31 2007-05-09 北京奇源益德药物研究所 治疗慢性鼻炎及鼻窦炎的制剂及其制法和质控方法
CN101612246A (zh) * 2009-07-22 2009-12-30 吉林华康药业股份有限公司 一种治疗肾炎的药物组合物及制备方法和质量控制方法
US20120231095A1 (en) * 2009-11-19 2012-09-13 Laila Nutraceuticals Agents derived from holoptelea integrifolia and their compositions for the control of metabolic syndrome and associated diseases
CN104069438A (zh) * 2014-07-09 2014-10-01 顾平洋 一种治疗乳腺小叶增生的中药组合物
CN104133028A (zh) * 2014-04-01 2014-11-05 潘华峰 一种茜草配方颗粒高效液相色谱指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1582983A (zh) * 2003-08-21 2005-02-23 合肥神鹿双鹤药业有限责任公司 一种儿童止泻用口服中药
CN1958003A (zh) * 2005-10-31 2007-05-09 北京奇源益德药物研究所 治疗慢性鼻炎及鼻窦炎的制剂及其制法和质控方法
CN101612246A (zh) * 2009-07-22 2009-12-30 吉林华康药业股份有限公司 一种治疗肾炎的药物组合物及制备方法和质量控制方法
US20120231095A1 (en) * 2009-11-19 2012-09-13 Laila Nutraceuticals Agents derived from holoptelea integrifolia and their compositions for the control of metabolic syndrome and associated diseases
CN104133028A (zh) * 2014-04-01 2014-11-05 潘华峰 一种茜草配方颗粒高效液相色谱指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱
CN104069438A (zh) * 2014-07-09 2014-10-01 顾平洋 一种治疗乳腺小叶增生的中药组合物

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
WAI-PUI TSE ET AL: "Induction of apoptosis underlies the Radix Rubiae-mediated anti-proliferative action on human epidermal keratinocytes: Implications for psoriasis treatment", 《INTERNATIONAL JOURNAL OF MOLECULAR MEDICINE》 *
乔玄 等: "陕西不同产地茜草HPLC指纹图谱研究", 《现代中医药》 *
纪宝玉 等: "茜草药材的HPLC指纹图谱研究", 《中国实验方剂学杂志》 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109030641A (zh) * 2018-06-11 2018-12-18 合肥华润神鹿药业有限公司 一种养胃舒颗粒指纹图谱的构建方法
CN109030641B (zh) * 2018-06-11 2021-04-06 合肥华润神鹿药业有限公司 一种养胃舒颗粒指纹图谱的构建方法
CN114487240A (zh) * 2021-12-27 2022-05-13 北京康仁堂药业有限公司 茜草炭及其制剂的特征图谱及其构建方法和含量测定方法
CN114487240B (zh) * 2021-12-27 2023-08-25 北京康仁堂药业有限公司 茜草炭及其制剂的特征图谱及其构建方法和含量测定方法

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