CN106770850B - 关节止痛膏的标准特征图谱的构建及其质量检测方法 - Google Patents

关节止痛膏的标准特征图谱的构建及其质量检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN106770850B
CN106770850B CN201611081071.4A CN201611081071A CN106770850B CN 106770850 B CN106770850 B CN 106770850B CN 201611081071 A CN201611081071 A CN 201611081071A CN 106770850 B CN106770850 B CN 106770850B
Authority
CN
China
Prior art keywords
standard
illustrative plates
analgesic rheumatoid
rheumatoid plaster
solution
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201611081071.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN106770850A (zh
Inventor
刘道芳
刘海兵
柏金金
田湘玲
马娜
程济东
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
ANHUI ANKE YULIANGQING PHARMACEUTICAL CO LTD
Original Assignee
ANHUI ANKE YULIANGQING PHARMACEUTICAL CO LTD
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by ANHUI ANKE YULIANGQING PHARMACEUTICAL CO LTD filed Critical ANHUI ANKE YULIANGQING PHARMACEUTICAL CO LTD
Priority to CN201611081071.4A priority Critical patent/CN106770850B/zh
Publication of CN106770850A publication Critical patent/CN106770850A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN106770850B publication Critical patent/CN106770850B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02Column chromatography
    • G01N30/26Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
    • G01N30/28Control of physical parameters of the fluid carrier
    • G01N30/34Control of physical parameters of the fluid carrier of fluid composition, e.g. gradient
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02Column chromatography

Landscapes

  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)

Abstract

本发明首先公开了一种关节止痛膏的标准特征图谱的构建方法,其次是基于构建的标准特征图谱公开了一种关节止痛膏的质量检测方法,其步骤如下:按照标样溶液和参照物溶液的方法制备并测定得到待测关节止痛膏的色谱图和对照品二氢辣椒素的色谱图,将待测关节止痛膏的色谱图与构建的标准特征图谱比对,若待测关节止痛膏的色谱图中出现标准特征图谱中相同的16个特征峰,与参照物峰相应的峰为S峰,计算各特征峰与S峰的相对保留时间,各特征峰的相对保留时间与标准特征图谱中各特征峰的相对保留时间的相对标准偏差在±5%以内,则该关节止痛膏的质量合格,反之则不合格,如此可以实现快速检测判断关节止痛膏的质量。

Description

关节止痛膏的标准特征图谱的构建及其质量检测方法
技术领域
本发明涉及中成药的质量控制技术,具体涉及一种关节止痛膏的标准特征图谱的构建及其质量检测方法。
背景技术
关节止痛膏是一种上市多年的中成药,现行执行标准是国家药品标准WS3-B-1832-94-2016。关节止痛膏由辣椒流浸膏、颠茄流浸膏、薄荷素油、水杨酸甲酯、樟脑、盐酸苯海拉明等六味药制成,其活血散瘀,温经镇痛,可用于治疗寒湿瘀阻经络所致风湿关节痛及关节扭伤。
目前,对关节止痛膏的质量控制方法主要是鉴别硫酸阿托品、盐酸苯海拉明,以及对关节止痛膏中樟脑、薄荷素油、水杨酸甲酯和盐酸苯海拉明的含量测定,但对其中的主药辣椒没有质量控制指标,因此无法全面地反映其质量状况。为了弥补现有关节止痛膏的质量控制方法的缺陷,有必要构建该产品的标准特征图谱,以便于更好地进行该产品的质量控制。
经查阅资料可知,目前有关辣椒的特征图谱研究的专利和文献主要有:(1)名称为“辣椒药材及其提取物的指纹图谱测定方法”(公开号为CN102654486A)的发明专利公开了辣椒及其提取物的特征图谱的检测方法,其是以磷酸水溶液-乙腈溶液作为流动相,梯度洗脱,检测波长为210nm,共有特征峰9个;(2)名称为“辣椒风湿膏及其半成品的指纹图谱测定方法”(公开号为CN102654487A)的发明专利公开了辣椒风湿膏及其半成品指纹图谱的检测方法,其是以0.01%磷酸溶液-乙腈为流动相,梯度洗脱,检测波长为210nm,特征峰为13个。另外,申请人于2016年9月13日也提交申请了一篇名称为“舒筋活络止痛膏标准特征图谱的构建及其质量检测方法”(申请号为201610821701.0)的发明专利,该专利申请公开了将至少15批次合格的舒筋活络止痛膏分别超声提取得到各标样溶液,将藁本内酯对照品加甲醇制成参照物溶液,然后按以下色谱条件检测:甲醇为流动相A,以0.025~0.1%的磷酸溶液为流动相B,流动相按体积比为10~55:90~45的A相和B相梯度洗脱,流速0.5~1.5ml/min,检测波长333±2nm,特征峰为11个,之后将待测舒筋活络止痛膏的色谱图与构建的标准特征图谱比对,进而判断待测舒筋活络止痛膏的质量。对于上述已公开和尚未公开的技术,申请人均有试验验证是否可以用于检测关节止痛膏的特征图谱,但是结果显示色谱峰较少,也即是说直接或基于上述现有或未公开的方法均难以对关节止痛膏的质量控制提供检测依据,也就是说,色谱条件以及标准谱图的构建方法对能否可靠地进行关节止痛膏的质量检测至关重要。
因此,如何建立关节止痛膏的特征图谱测定方法,进而为关节止痛膏的质量检测控制提供依据,这是目前尚需解决的技术瓶颈。
发明目的
本发明的首要目的是提供一种操作方便、重现性好、精密度高的关节止痛膏的标准特征图谱的构建方法。
为了实现上述目的,本发明采用的技术方案是:一种关节止痛膏的标准特征图谱的构建方法,其步骤如下:
a)标样溶液、参照物溶液的准备:将至少16批次合格的关节止痛膏分别加热回流提取得到各标样溶液,将二氢辣椒素对照品加甲醇制成参照物溶液;
b)高效液相色谱分析:精密吸取等量的各标样溶液、参照物溶液,分别注入高效液相色谱仪进行测定,即得各标样溶液和参照物溶液的色谱图,高效液相色谱分析的色谱条件为:色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇为流动相A,以0.05~0.2%的磷酸溶液为流动相B,流动相按体积比为20~50:80~50的A相和B相梯度洗脱;流速0.5~1.5ml/min;检测波长261±2nm;柱温30~40℃;进样液的进样量为10~20μl;按照二氢辣椒素计算,理论塔板数≥8000;
c)标准特征图谱的构建:将得到的各标样溶液的色谱图导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统,制定得到关节止痛膏的标准特征图谱,该标准特征图谱中有16个特征峰,按出现的时间顺序将所述的16个特征峰依次编号1~12、S、13~15,以参照物溶液的色谱峰的相对保留时间为1,计算得知1~15号特征峰的平均相对保留时间分别为0.405、0.441、0.480、0.521、0.564、0.622、0.654、0.664、0.769、0.825、0.851、0.880、1.062、1.228、1.563;所述的S号色谱峰是二氢辣椒素的特征峰,其平均相对保留时间为1。
本发明公开的关节止痛膏的标准特征图谱的构建方法是申请人在大量的试验中无意中研究获得,不仅能反映关节止痛膏的内在质量,而且操作简便快捷。采用本发明公开的上述方法构建的标准特征图谱中的16个特征峰的分离度高,从而为后续关节止痛膏产品的质量检测有效地提供了数据基础,进而为关节止痛膏今后的标准化生产提供一种可行的质量控制模式。具体说来,本发明是将合格的各关节止痛膏制得的标样溶液与二氢辣椒素对照品制得的参照物溶液在规定的实验条件下测定分析得到色谱图,这样将二氢辣椒素对照品的色谱图与合格的各关节止痛膏的色谱图进行比对,从而可以确定两者之间的共有特征峰,亦即找出各关节止痛膏测得的色谱图上的二氢辣椒素的特征峰,从而以二氢辣椒素特征峰的相对保留时间为1,计算出各关节止痛膏的色谱图上其他特征峰的相对保留时间,进而为后续的待测关节止痛膏产品的质量检测提供数据基础。
需要说明的是,所述的合格的关节止痛膏也可以理解为是标准关节止痛膏,其是质量完全符合国家相关标准的关节止痛膏。
作为进一步的优选方案,步骤b)所述的A相为色谱级甲醇;步骤b)中梯度洗脱的时间及流动相比例为:0~30min,A相20%→50%,B相80%→50%;35~50min,A相50%,B相50%;50~55min,A相50%→20%,B相50%→80%;55~60min,A相20%、B相80%。
实际在制备标样溶液和参照物溶液时,优选方案是取16批合格的关节止痛膏分别进行加热回流提取操作制得各标样溶液,具体的,步骤a)中各标样溶液的加热回流提取步骤为:取各合格的关节止痛膏2片,除去盖衬,剪成小片,置250ml圆底烧瓶中,精密加入甲醇20ml,称定重量,加热回流30分钟,放冷,称重,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液即为标样溶液;步骤a)中参照物溶液的制备步骤为:取二氢辣椒素对照品,加甲醇制成每1ml含50μg二氢辣椒素的溶液,滤过,取续滤液即为参照物溶液。按上述限定参数进行操作制取的标样溶液中各组分的分离效果最好,测得的关节止痛膏的色谱图也最为准确。
本发明的另一个目的是基于以上方法构建的关节止痛膏的标准特征图谱,提供一种关节止痛膏的质量检测方法。
为了实现上述目的,本发明采用的技术方案为,一种关节止痛膏的质量检测方法,其步骤如下:按照标样溶液和参照物溶液的方法制备并测定得到待测关节止痛膏的色谱图和对照品二氢辣椒素的色谱图,将待测关节止痛膏的色谱图与构建的标准特征图谱比对,若待测关节止痛膏的色谱图中出现标准特征图谱中相同的16个特征峰,与参照物峰相应的峰为S峰,计算各特征峰与S峰的相对保留时间。各特征峰的相对保留时间与标准特征图谱中各特征峰的相对保留时间的相对标准偏差在±5%以内,则该关节止痛膏的质量合格,反之则不合格,如此可以实现快速、准确地检测判断关节止痛膏的质量。
附图说明
图1-6为实施例1测得的色谱图;
图7实施例2测得的二氢辣椒素的色谱图;
图8为实施例2测得的标准关节止痛膏的色谱图;
图9为实施例2测得的16批标准关节止痛膏的色谱图导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统中进行分析导出的截图;
图10为实施例2制定得到的关节止痛膏的标准特征图谱;
图11为实施例3测得的关节止痛膏样品的特征图谱;
图12为实施例4测得的关节止痛膏样品的特征图谱。
具体实施方式
以下结合实施例1-4对本发明公开的技术方案作进一步的说明:
实施例1:不同条件下关节止痛膏供试液的高效液相色谱法测定
1、仪器与药品
仪器:Waters高效液相色谱仪,2489检测器。
药品:磷酸(分析纯);甲醇(色谱级,SIGAMA);关节止痛膏,批号为20160601,由安徽安科余良卿药业有限公司提供;二氢辣椒素对照品(纯度99.7%),批号为111666-201002,由安徽安科余良卿药业有限公司提供。
2、方法与结果
2.1供试品制备取关节止痛膏2片,除去盖衬,剪成小片,置250ml圆底烧瓶中,精密加入甲醇20ml,称定重量,加热回流30分钟,放冷,称重,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液即为供试液。结果表明以甲醇作为溶媒提取的供试液色谱图较好,如图1所示。
2.2色谱条件的选择
(1)依据2015年版《中国药典》一部颠茄流浸膏项下指纹图谱检测的色谱条件,采用Sepax Bio-C18柱(尺寸250mm×4.6mm,粒径5μm),以甲醇为流动相A,0.05%磷酸溶液为流动相B,按药典中记载的条件梯度洗脱;柱温为30℃,检测波长范围200-500nm,流速为1.0ml/min。精密吸取供试液10μl,注入高效液相色谱仪中,测定。比较200-500nm波长的色谱图,结果如图1所示,在波长344nm时,有6个特征峰,而颠茄流浸膏在此波长条件下也有6个特征峰,说明采用该色谱条件不能很好的反映关节止痛膏样品的特征信息。
(2)依据名称为“RP-HPLC双波长同时测定关节止痛膏中硫酸阿托品、盐酸苯海拉明、辣椒碱和二氢辣椒碱的含量”(作者贾晓斌等)的文献资料公开的色谱条件,采用SepaxBio-C18柱(尺寸250mm×4.6mm,粒径5μm)、以乙腈为流动相A,0.1%磷酸溶液为流动相B,按该文献中公开的条件梯度洗脱;柱温为30℃,检测波长范围200-500nm,流速为1.0ml/min。精密吸取供试液10μl,注入高效液相色谱仪中,测定。比较200-500nm波长的色谱图,结果如图2所示,在波长为280nm时,色谱峰相对较好,但只有1个较大的色谱峰,说明采用该色谱条件不能很好的反映关节止痛膏样品的特征信息。
(3)依据名称为“辣椒药材及其提取物的指纹图谱测定方法”(公开号为CN102654486A)的发明专利公开的色谱条件,采用Sepax Bio-C18柱(尺寸250mm×4.6mm,粒径5μm),以乙腈为流动相A,0.05%磷酸溶液为流动相B,按该专利文件中公开的条件梯度洗脱;柱温为30℃,检测波长范围200-500nm,流速为1.0ml/min。精密吸取供试液10μl,注入高效液相色谱仪中,测定。比较200-500nm波长的色谱图,结果如图3所示,在波长为210nm时,其色谱峰只有6个,且分离度不好,说明采用该色谱条件不能很好的反映关节止痛膏样品的特征信息。
(4)依据名称为“辣椒风湿膏及其半成品的指纹图谱测定方法”(公开号为CN102654487A)的发明专利公开的色谱条件,采用Sepax Bio-C18柱(尺寸250mm×4.6mm,粒径5μm)、以乙腈为流动相A,0.1%甲酸溶液为流动相B,按该专利文件中公开的条件梯度洗脱;柱温为30℃,检测波长范围200-500nm,流速为1.0ml/min。精密吸取供试液10μl,注入高效液相色谱仪中,测定。比较200-500nm波长的色谱图,结果如图4所示,在波长为210nm时,虽然色谱峰较多,但只有1个主峰,其它峰面积很小,说明采用该色谱条件不能很好的反映关节止痛膏样品的特征信息;
(5)依据名称为“舒筋活络止痛膏标准特征图谱的构建及其质量检测方法”(申请号为201610821701.0)的发明专利记载的色谱条件,采用C18柱(尺寸250mm×4.6mm,粒径5μm)、以甲醇为流动相A,0.05%磷酸溶液为流动相B,按该发明专利中记载的条件梯度洗脱;柱温为30℃,检测波长为333nm,流速为1.0ml/min。精密吸取供试液10μl,注入高效液相色谱仪中,测定。结果如图5所示,在波长为333nm时,只有3个主峰,其它峰面积很小,说明采用该色谱条件不能很好的反映关节止痛膏样品的特征信息;
从上述实验(1)-(5)可以看出,按照以上现有文献或者未公开资料的特征图谱或指纹图谱色谱条件方法测定所得的关节止痛膏样品的HPLC图谱峰要么较少,要么分离度低,不能准确地反映关节止痛膏在质量的特征信息。需要说明的是,附图1-5主要是说明了采用现有的条件测定得到的图谱存在缺陷,这些图并不对本发明需要保护的技术内容产生影响,故此处不再对附图的具体数据做出说明。
(6)依据本发明公开的色谱条件,采用C18柱(尺寸250mm×4.6mm,粒径5μm),以甲醇为流动相A,0.1%磷酸溶液为流动相B,按表1中的规定进行梯度洗脱;柱温为30℃,PDA检测波长范围200-500nm,流速为1.0ml/min。精密吸取供试液10μl,注入高效液相色谱仪中,测定。结果如图6所示,在波长为261nm时,色谱峰较多,且分离度高,说明采用该色谱条件能够很好的反映关节止痛膏样品的特征信息。
表1流动相梯度表
实施例2:关节止痛膏的标准特征图谱的构建
1、仪器与药品
仪器:Waters高效液相色谱仪,2489检测器。
药品:磷酸(分析纯);甲醇(色谱级,SIGAMA);16批标准关节止痛膏,批号分别为20160601、20160501、20160302、20160301、20160101、20151201、20151001、20150801、20150601、20150502、20150501、200150301、20150102、20150101、20141202、20141201,由安徽安科余良卿药业有限公司提供,上述16批标准关节止痛膏依次编号为S1~S16;二氢辣椒素对照品(纯度99.7%),批号为111666-20100,由安徽安科余良卿药业有限公司提供2。
2、色谱条件
色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长为250mm,内径为4.6mm,粒径5μm);以甲醇为流动相A,以0.2%的磷酸溶液为流动相B,流动相按体积比为20~50:80~50的A相和B相梯度洗脱;流速1.0ml/min;检测波长261nm;柱温30℃;进样液的进样量为10μl;按照二氢辣椒素计算,理论塔板数≥8000。
3、标准特征图谱的特征峰的测定
3.1标准特征图谱的构建
(1)标样溶液的制备:取16批上述合格的关节止痛膏分别进行加热回流提取操作,各关节止痛膏的回流提取步骤为:取合格的关节止痛膏2片,除去盖衬,剪成小片,置250ml圆底烧瓶中,精密加入甲醇20ml,称定重量,加热回流20分钟,放冷,称重,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液即得标样溶液。
(2)参照物溶液的制备:取二氢辣椒素对照品,置100ml量瓶中,加甲醇制成每1ml含40μg二氢辣椒素的溶液,摇匀,滤过,取续滤液作为参照物溶液。
(3)高效液相色谱分析:精密吸取参照物溶液和标样溶液各10μl,分别注入高效液相色谱仪中进行测定,记录60分钟的图谱,即得二氢辣椒素对照品的色谱图(见图7)和标准关节止痛膏的色谱图(见图8,为批号为20160601的关节止痛膏的色谱图)。
(4)标准特征图谱的构建
将检测得到的16批标准关节止痛膏的色谱图导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统,相应操作后得到如图9所示的标准关节止痛膏的特征图谱,系统生成的对照图谱R,导出即得如图10所示的标准关节止痛膏的标准特征图谱。
3.2标准特征图谱中特征峰的确定
经比较16批标准关节止痛膏色谱图和二氢辣椒素的色谱图,确定关节止痛膏的色谱图中有16个特征峰,按出现的时间顺序将这16个特征峰依次编号1~13、S、14~15,其中S号色谱峰为二氢辣椒素的特征峰,设定S号峰的相对保留时间为1,计算其他15个峰的相对保留时间,结果如下表2所示。经计算,1~15号峰的平均相对保留时间分别为:0.405、0.441、0.480、0.521、0.564、0.622、0.654、0.664、0.769、0.825、0.851、0.880、1.062、1.228、1.563,相对标准差均不超过1.04%。
3.3标准特征图谱的精密度试验
取关节止痛膏(批号为20150101),按照3.1中步骤(1)公开的方法制备成标样溶液,连续进样6次,得到6个色谱图,均出现16个特征峰,设定二氢辣椒素的特征峰的相对保留时间为1,计算6个色谱图中其它15个特征峰的相对保留时间。经计算,6个色谱图中15个特征峰的相对保留时间的相对标准偏差RSD≤0.75%。
3.4标准特征图谱的重复性试验
取关节止痛膏(批号为20150101)6份,按照3.1中步骤(1)公开的方法分别制备成标样溶液,分别检测得到6个色谱图,均出现16个特征峰,设定二氢辣椒素的特征峰的相对保留时间为1,计算6个色谱图中15个特征峰的相对保留时间。经计算,6个色谱图中15个特征峰的相对保留时间的相对标准偏差RSD≤1.06%。
3.5标准特征图谱的稳定性试验
取关节止痛膏(批号为20160601),按照3.1中步骤(1)公开的方法制备成标样溶液,精密吸取6份标样溶液,每份10μl,按上述色谱条件分别在0h、1h、2h、4h、8h和12h进样,检测得到6个色谱图,均出现16个特征峰,设定二氢辣椒素的特征峰的相对保留时间为1,计算6个色谱图中15个特征峰的相对保留时间。经计算,6个色谱图中15个特征峰的相对保留时间的相对标准偏差RSD≤0.98%。
以上试验结果表明,采用本发明公开的方法构建得到的关节止痛膏的标准特征图谱精密度高,重复性好,结果准确可靠,稳定性强,其能全面的反映关节止痛膏的化学信息,进而确保该产品的质量与疗效。
实施例3:关节止痛膏的质量检测
1、仪器与试药
仪器:Waters高效液相色谱仪,2489检测器。
药品:磷酸(分析纯);甲醇(色谱级,SIGAMA);关节止痛膏,批号为20160301,由安徽安科余良卿药业有限公司提供;二氢辣椒素对照品(纯度99.7%),批号为111666-201002,由安徽安科余良卿药业有限公司提供。
2、色谱条件
色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长为250mm,内径为4.6mm,粒径5μm);以甲醇为流动相A,以0.05%的磷酸溶液为流动相B,流动相按体积比为20~50:80~50的A相和B相梯度洗脱,梯度洗脱的时间及流动相比例为:0~30min,A相20%→50%,B相80%→50%;35~50min,A相50%,B相50%;50~55min,A相50%→20%,B相50%→80%;55~60min,A相20%、B相80%,流速1.5ml/min;检测波长261nm;柱温30℃;进样液的进样量为10μl;按照二氢辣椒素峰计算,理论塔板数≥8000。
3、特征图谱中的特征峰的测定
(1)待测溶液的制备:取待测关节止痛膏2片,除去盖衬,剪成小片,置250ml圆底烧瓶中,精密加入甲醇20ml,称定重量,加热回流15分钟,放冷,称重,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液即得待测溶液。
(2)参照物溶液的制备:取二氢辣椒素对照品,置100ml量瓶中,加甲醇制成每1ml含30μg二氢辣椒素的溶液,摇匀,滤过,取续滤液作为参照物溶液。。
(3)高效液相色谱分析:精密吸取参照物溶液和待测溶液各10μl,分别注入液相色谱仪中进行测定,记录60分钟的图谱,即得二氢辣椒素对照品的色谱图和待测关节止痛膏的色谱图。如图11所示,待测关节止痛膏(批号为20160301)的色谱图中共有16个特征峰,以二氢辣椒素的特征峰的相对保留时间为1,其1-15号峰的相对保留时间分别为:0.406、0.448、0.479、0.519、0.567、0.632、0.649、0.667、0.771、0.827、0.851、0.876、1.064、1.228、1.564。经计算,待测关节止痛膏的色谱图中的1-15号峰的相对保留时间与标准特征图谱中相应特征峰的相对保留时间的相对标准偏差在±5%以内,即在规定范围内,说明该关节止痛膏(批号为20160301)的质量合格。
实施例4:关节止痛膏的质量检测
1、仪器与试药
仪器:Waters高效液相色谱仪,2489检测器。
药品:磷酸(分析纯);甲醇(色谱级,SIGAMA);关节止痛膏,批号为20150301,由安徽安科余良卿药业有限公司提供;二氢辣椒素对照品(纯度99.7%),批号为111666-201002,由安徽安科余良卿药业有限公司提供。
2、色谱条件
色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长为250mm,内径为4.6mm,粒径5μm);以甲醇为流动相A,以0.3%的磷酸溶液为流动相B,流动相按体积比为20~50:80~50的A相和B相梯度洗脱,梯度洗脱的时间及流动相比例为:0~30min,A相20%→50%,B相80%→50%;35~50min,A相50%,B相50%;50~55min,A相50%→20%,B相50%→80%;55~60min,A相20%、B相80%,流速1.5ml/min;检测波长262nm;柱温30℃;进样液的进样量为10μl;按照二氢辣椒素峰计算,理论塔板数≥8000。
3、特征图谱中的特征峰的测定
(1)待测溶液的制备:取待测关节止痛膏2片,除去盖衬,剪成小片,置250ml圆底烧瓶中,精密加入甲醇20ml,称定重量,加热回流30分钟,放冷,称重,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液即得待测溶液。
(2)参照物溶液的制备:取二氢辣椒素对照品,置100ml量瓶中,加甲醇制成每1ml含50μg二氢辣椒素的溶液,摇匀,滤过,取续滤液作为参照物溶液。。
(3)高效液相色谱分析:精密吸取参照物溶液和待测溶液各10μl,分别注入液相色谱仪中进行测定,记录60分钟的图谱,即得二氢辣椒素对照品的色谱图和待测关节止痛膏的色谱图。如图12所示,待测关节止痛膏(批号为20150301)的色谱图中共有16个特征峰,以二氢辣椒素的特征峰的相对保留时间为1,其1-15号峰的相对保留时间分别为:0.408、0.441、0.488、0.519、0.569、0.626、0.653、0.669、0.774、0.833、0.845、0.874、1.062、1.225、1.557。经计算,待测关节止痛膏的色谱图中的1-15号峰的相对保留时间与标准特征图谱中相应特征峰的相对保留时间的相对标准偏差在±5%以内,即在规定范围内,说明该关节止痛膏(批号为20150301)的质量合格。
需要说明的是,参照图10即可明确知道图11、12中16个特征峰的对应位置,故省略图11、12中的16个特征峰的编号编写。

Claims (5)

1.一种关节止痛膏的标准特征图谱的构建方法,其步骤如下:
a)标样溶液、参照物溶液的准备:将至少16批次合格的关节止痛膏分别加热回流提取得到各标样溶液,将二氢辣椒素对照品加甲醇制成参照物溶液;
b)高效液相色谱分析:精密吸取等量的各标样溶液、参照物溶液,分别注入高效液相色谱仪进行测定,即得各标样溶液和参照物溶液的色谱图,高效液相色谱分析的色谱条件为:色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以甲醇为流动相A,以0.03~0.3%的磷酸溶液为流动相B,流动相按体积比为20~50:80~50的A相和B相梯度洗脱,流速0.5~1.5ml/min,检测波长261±2nm,柱温30~40℃,进样液的进样量为10~20μl,按照二氢辣椒素计算,理论塔板数≥8000;
c)标准特征图谱的构建:将得到的各标样溶液的色谱图导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统,制定得到关节止痛膏的标准特征图谱,该标准特征图谱中有16个特征峰,按出现的时间顺序将所述的16个特征峰依次编号1~12、S、13~15,以参照物溶液的色谱峰的相对保留时间为1,计算得知1~15号特征峰的平均相对保留时间分别为0.405、0.441、0.480、0.521、0.564、0.622、0.654、0.664、0.769、0.825、0.851、0.880、1.062、1.228、1.563;所述的S号色谱峰是二氢辣椒素的特征峰,其平均相对保留时间为1;
步骤b)中梯度洗脱的时间及流动相比例为:0~30min,A相20%→50%,B相80%→50%;35~50min,A相50%,B相50%;50~55min,A相50%→20%,B相50%→80%;55~60min,A相20%、B相80%。
2.根据权利要求1所述的关节止痛膏的标准特征图谱的构建方法,其特征在于:步骤b)中所述的A相为色谱级甲醇。
3.根据权利要求2所述的关节止痛膏的标准特征图谱的构建方法,其特征在于:步骤a)中各标样溶液的加热回流提取步骤为:分别取合格的关节止痛膏2片,除去盖衬,剪成小片,置250ml圆底烧瓶中,精密加入甲醇20ml,称定重量,加热回流15-30分钟,放冷,称重,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液即为标样溶液。
4.根据权利要求3所述的关节止痛膏的标准特征图谱的构建方法,其特征在于:步骤a)中参照物溶液的制备步骤为:取二氢辣椒素对照品,精密称定,加甲醇制成每1ml含30-50μg对照品溶液,滤过,取续滤液即为参照物溶液。
5.一种如权利要求1-4中任一项所述关节止痛膏的标准特征图谱的构建方法在质量检测中的应用,其步骤如下:按照标样溶液和参照物溶液的方法制备并测定得到待测关节止痛膏的色谱图和二氢辣椒素对照品的色谱图,将待测关节止痛膏的色谱图与构建的标准特征图谱比对,若待测关节止痛膏的色谱图中出现标准特征图谱中相同的16个特征峰,与参照物峰相应的峰为S峰,计算各特征峰与S峰的相对保留时间,各特征峰的相对保留时间与标准特征图谱中各特征峰的相对保留时间的相对标准偏差在±5%以内,则该关节止痛膏的质量合格,反之则不合格。
CN201611081071.4A 2016-11-30 2016-11-30 关节止痛膏的标准特征图谱的构建及其质量检测方法 Active CN106770850B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201611081071.4A CN106770850B (zh) 2016-11-30 2016-11-30 关节止痛膏的标准特征图谱的构建及其质量检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201611081071.4A CN106770850B (zh) 2016-11-30 2016-11-30 关节止痛膏的标准特征图谱的构建及其质量检测方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN106770850A CN106770850A (zh) 2017-05-31
CN106770850B true CN106770850B (zh) 2018-05-25

Family

ID=58901351

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201611081071.4A Active CN106770850B (zh) 2016-11-30 2016-11-30 关节止痛膏的标准特征图谱的构建及其质量检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN106770850B (zh)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019211767A1 (en) * 2018-05-02 2019-11-07 Waters Technologies Corporation Methods for authenticating botanicals using a marker compound's related chromatographic profile and mass spectral profile jointly
CN109298091B (zh) * 2018-10-24 2021-03-16 安徽安科余良卿药业有限公司 风茄平喘膏的标准特征图谱构建方法及其质量检测方法
CN115792058B (zh) * 2022-12-15 2024-06-18 安徽安科余良卿药业有限公司 关节止痛膏的检测方法

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB0804981D0 (en) * 2008-03-18 2008-04-16 Isis Innovation Method
CN102654487A (zh) * 2012-03-22 2012-09-05 河南羚锐制药股份有限公司 辣椒风湿膏及其半成品的指纹图谱测定方法
CN102654486A (zh) * 2012-03-22 2012-09-05 河南羚锐制药股份有限公司 辣椒药材及其提取物的指纹图谱测定方法
CN103048408B (zh) * 2012-12-29 2014-05-07 安徽安科余良卿药业有限公司 活血止痛膏的特征图谱测定和其质量检测方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN106770850A (zh) 2017-05-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102138985B (zh) 一种白芍制剂的质量检测方法
CN104749306B (zh) 一种构建淫羊藿提取物的指纹图谱的方法
CN106770850B (zh) 关节止痛膏的标准特征图谱的构建及其质量检测方法
CN105891353A (zh) 一种痰热清胶囊指纹图谱的建立方法及其指纹图谱
Wu et al. Simultaneous quantitative determination of nine active chemical compositions in traditional Chinese medicine Glycyrrhiza by RP-HPLC with full-time five-wavelength fusion method
CN105842373A (zh) 一种建立金银花的药物制剂的指纹图谱的方法
Liu et al. Quality evaluation of Shenmaidihuang Pills based on the chromatographic fingerprints and simultaneous determination of seven bioactive constituents
CN102539607B (zh) 一种芪麝丸制剂的中药指纹图谱检测方法
CN110441413A (zh) 千柏鼻炎片hplc指纹图谱的构建方法和检测方法
CN114184704A (zh) 一种逍遥丸uplc指纹图谱的构建方法及其应用
CN104316613A (zh) 一种疏风解毒胶囊指纹图谱的建立方法
CN106802327A (zh) 一种建立儿泻停药物制剂的指纹图谱的方法
Song et al. Pharmacokinetic–pharmacodynamic evaluation of the major component astragaloside IV on the immunomodulatory effects of Yu-ping-feng prescription
Zhang et al. Chromatographic fingerprint combined with quantitative analysis of multi‐components by single‐marker for quality control of total lignans from Fructus arctii by high‐performance liquid chromatography
CN106290645B (zh) 一种拉萨大黄指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱
CN105699506A (zh) 一种中成药“二丁颗粒”hplc指纹图谱的构建方法
CN107576739A (zh) 一种龙牡壮骨颗粒的hplc指纹图谱检测方法
CN105004833A (zh) 一种治疗急性痛风性关节炎、痛风的中药制剂的检测方法
CN104849384B (zh) 建立健肝乐制剂指纹图谱的方法及其应用
CN106770785B (zh) 一种建立茜草藤药材的指纹图谱的方法
CN105548411A (zh) 一种正天丸制剂中挥发性成分的特征图谱的构建方法及正天丸制剂中挥发性成分的检测方法
CN102441058B (zh) 一种养血清脑颗粒的气相色谱指纹图谱检测方法
CN109298091B (zh) 风茄平喘膏的标准特征图谱构建方法及其质量检测方法
Bo et al. Quantitative determination of multiple components in Herba Epimedii using a single reference standard: a comparison of two methods
CN108760928A (zh) 一种温胃舒颗粒指纹图谱的构建方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant