CN109298091B - 风茄平喘膏的标准特征图谱构建方法及其质量检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于中成药的质量控制技术领域,具体涉及一种风茄平喘膏标准特征图谱的构建方法,其具体步骤为:a)标样溶液、参照物溶液的准备;b)高效液相色谱分析;c)标准特征图谱的构建。该方法不仅能反映风茄平喘膏的内在质量,而且操作简便快捷。基于上述方法构建的风茄平喘膏的标准特征图谱,本发明还公开了一种风茄平喘膏的质量检测方法,将待测风茄平喘膏的色谱图与构建的标准特征图谱比对,各特征峰的相对保留时间与标准特征图谱中各特征峰的相对保留时间的相对标准偏差在±5%以内,则该风茄平喘膏的质量合格,反之则不合格。与现有技术相比,上述风茄平喘膏的质量检测方法可以实现快速、准确地检测判断风茄平喘膏的质量。

Description

风茄平喘膏的标准特征图谱构建方法及其质量检测方法
技术领域
本发明属于中成药的质量控制技术领域,具体涉及一种风茄平喘膏标准特征图谱的构建方法及其质量检测方法。
背景技术
风茄平喘膏是一种上市多年的中成药,现行执行标准是国家药品标准WS3-B-0228-90。风茄平喘膏由洋金花、吴茱萸、干姜、白芥子、生川乌、生半夏、花椒、麻黄、丁香、樟脑、冰片、桂皮醛、二甲基亚砜等十三味药制成,具有止咳、祛痰、平喘之功效,用于防止单纯性、喘息型慢性气管炎和支气管哮喘。
目前,对风茄平喘膏的质量控制方法只有性状和含膏量指标,没有定性与定量指标,因此无法全面地反映其质量状况。为了弥补现有风茄平喘膏的质量控制方法的缺陷,有必要构建该产品的标准特征图谱,以便于更好地进行该产品的质量控制。
经查阅资料可知,目前有关该处方药物的特征图谱研究的专利和文献主要有:(1)名称为干姜HPLC指纹图谱研究(郭琪,赵晓红,韩海建等.中国药师,2015,18(3);397-399)公开了干姜药材指纹图谱的检测方法,其是以乙腈为流动相A,水为流动相B,梯度洗脱,检测波长为240nm,共有特征峰10个;(2)名称为吴茱萸脂溶性成分指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱(专利号ZL 200610200917.1)专利公开了吴茱萸指纹图谱的检测方法,其是以水为流动相A,乙腈为流动相B,梯度洗脱,检测波长为220nm,共有特征峰31个;(3)名称为半夏水溶性指纹图谱的建立及其标准指纹图谱(专利号ZL 200610200920.3)专利公开了半夏水溶性指纹图谱的检测方法,其是以0.01%醋酸为流动相A,甲醇为流动相B,梯度洗脱,检测波长为254nm,286nm、296nm,共有特征峰11个;(4)名称为北洋金花非生物碱成分的HPLC指纹图谱研究(刘高峰、张艳海、杨炳文等.中医药学报,2010.38(5):85-87)报道了洋金花指纹图谱的检测方法,其是以乙腈为流动相A,水为流动相B,梯度洗脱,检测波长为345nm,共有特征峰14个;(5)名称为麻黄药材HPLC指纹图谱研究(符继红、张丽静.中成药,2008.30(2):163-166)公开了麻黄指纹图谱的检测方法,其是以乙腈为流动相A,0.1%磷酸为流动相B,梯度洗脱,检测波长为215nm,共有特征峰17个;(6)名称为川乌HPLC指纹图谱研究(林华,邓广海.中国实验方剂学杂志,2011.17(3):73-76)公开了川乌指纹图谱的检测方法,其是以乙腈为流动相A,0.2%乙酸(浓氨水调Ph10.0)为流动相B,梯度洗脱,检测波长为235nm,共有特征峰12个;(7)名称为白芥子炒制前后HPLC指纹图谱的比较分析(张村、李丽、肖永庆等.中国中药杂志,2010.35(21):2842-2845)公开了白芥子指纹图谱的检测方法,其是以乙腈为流动相A,0.1%磷酸为流动相B,梯度洗脱,检测波长为254nm,共有特征峰5个。
另外,申请人曾提交名称为“舒筋活络止痛膏标准特征图谱的构建及其质量检测方法”(申请号为201617821071.0)、“关节止痛膏的标准特征图谱的构建及其质量检测方法”(专利号为ZL 2016 1 0589643.5)、“活血止痛膏的特征图谱测定和其质量检测方法”(专利号为ZL 2012 1 108107.4)的发明专利,公开了特征图谱的检测方法。申请人均有试验验证是否可以用于检测风茄平喘膏的特征图谱,但是结果显示色谱峰较少,也即是说直接或基于上述现有或未公开的方法均难以对风茄平喘膏的质量控制提供检测依据,也就是说,色谱条件以及标准谱图的构建方法对能否可靠地进行风茄平喘膏的质量检测至关重要。
因此,如何建立风茄平喘膏的特征图谱构建方法,进而为风茄平喘膏的质量检测控制提供依据,这是目前尚需解决的技术瓶颈。
发明内容
本发明的首要目的是提供一种操作方便、重现性好、精密度高的风茄平喘膏标准特征图谱的构建方法。
为了实现上述目的,本发明采用的技术方案是:一种风茄平喘膏的标准特征图谱的构建方法,其步骤如下:
a)标样溶液、参照物溶液的准备:将至少15批次合格的风茄平喘膏分别加热回流提取得到各标样溶液,将丁香酚对照品加甲醇制成参照物溶液;
b)高效液相色谱分析:精密吸取等量的各标样溶液、参照物溶液,分别注入高效液相色谱仪进行测定,即得各标样溶液和参照物溶液的色谱图,高效液相色谱分析的色谱条件为:色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇为流动相A,以0.05~0.5%的磷酸溶液为流动相B,流动相按体积比为45~85∶55~15的A相和B相梯度洗脱;流速0.5~1.5ml/min;检测波长240±2nm;柱温30~40℃;进样液的进样量为10~20μl;按照丁香酚计算,理论塔板数≥8000;
c)标准特征图谱的构建:将得到的各标样溶液的色谱图导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统,制定得到风茄平喘膏的标准特征图谱,该标准特征图谱中有13个特征峰,按出现的时间顺序将所述的13个特征峰依次编号1~2、S、3~12,以参照物溶液的色谱峰的相对保留时间为1,计算得知1~12号特征峰的平均相对保留时间分别为0.634、0.922、1.100、1.605、1.684、2.047、2.204、2.352、2.462、2.659、2.899、2.962;所述的S号色谱峰是丁香酚的特征峰,其平均相对保留时间为1。
本发明公开的风茄平喘膏的标准特征图谱的构建方法是申请人在大量的试验研究中获得,不仅能反映风茄平喘膏的内在质量,而且操作简便快捷。采用本发明公开的上述方法构建的标准特征图谱中的13个特征峰的分离度高,从而为后续风茄平喘膏产品的质量检测有效地提供了数据基础,进而为风茄平喘膏今后的标准化生产提供一种可行的质量控制模式。具体说来,本发明是将合格的各风茄平喘膏制得的标样溶液与丁香酚对照品制得的参照物溶液在规定的实验条件下测定分析得到色谱图,这样将丁香酚对照品的色谱图与合格的各风茄平喘膏的色谱图进行比对,从而可以确定两者之间的共有特征峰,亦即找出各风茄平喘膏测得的色谱图上的丁香酚的特征峰,从而以丁香酚特征峰的相对保留时间为1,计算出各风茄平喘膏的色谱图上其他特征峰的相对保留时间,进而为后续的待测风茄平喘膏产品的质量检测提供数据基础。
需要说明的是,所述的合格的风茄平喘膏也可以理解为是标准风茄平喘膏,其是质量完全符合国家相关标准的风茄平喘膏。
作为进一步的优选方案,步骤b)所述的A相为色谱级甲醇;步骤b)中梯度洗脱的时间及流动相比例为0~60min,A相45%→85%,B相55%→15%;60~65min,A相85%→45%,B相15%→55%;65~70min,A相45%,B相55%。
实际在制备标样溶液和参照物溶液时,优选方案是取15批合格的风茄平喘膏分别进行加热回流提取操作制得各标样溶液,具体的,步骤a)中各标样溶液的加热回流提取步骤为:取各合格的风茄平喘膏5片,除去盖衬,剪成小片,置250ml圆底烧瓶中,精密加入甲醇50ml,称定重量,加热回流60分钟,放冷,称重,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液即为标样溶液;步骤a)中参照物溶液的制备步骤为:取丁香酚对照品,加甲醇制成每1ml含60~70μg丁香酚的溶液,滤过,取续滤液即为参照物溶液。按上述限定参数进行操作制取的标样溶液中各组分的分离效果最好,测得的风茄平喘膏的色谱图也最为准确。
本发明的另一个目的是基于以上方法构建的风茄平喘膏的标准特征图谱,提供一种操作方便、重现性好、精密度高的风茄平喘膏的质量检测方法。
为了实现上述目的,本发明采用的技术方案为,一种风茄平喘膏的质量检测方法,其步骤如下:按照标样溶液和参照物溶液的方法制备并测定得到待测风茄平喘膏的色谱图和对照品丁香酚的色谱图,将待测风茄平喘膏的色谱图与构建的标准特征图谱比对,若待测风茄平喘膏的色谱图中出现标准特征图谱中相同的13个特征峰,与参照物峰相应的峰为S峰,计算各特征峰与S峰的相对保留时间。各特征峰的相对保留时间与标准特征图谱中各特征峰的相对保留时间的相对标准偏差在±5%以内,则该风茄平喘膏的质量合格,反之则不合格。
与现有技术相比,上述风茄平喘膏的质量检测方法可以实现快速、准确地检测判断风茄平喘膏的质量。
附图说明
图1~8为实施例1测得的色谱图;
图9实施例2测得的丁香酚的色谱图;
图10为实施例2测得的标准风茄平喘膏的色谱图;
图11为实施例2测得的15批标准风茄平喘膏的色谱图导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统中进行分析导出的截图;
图12为实施例2制定得到的风茄平喘膏的标准特征图谱;
图13为实施例3测得的风茄平喘膏样品的特征图谱;
图14为实施例4测得的风茄平喘膏样品的特征图谱。
具体实施方式
以下结合实施例1~4对本发明公开的技术方案作进一步的说明:
实施例1:不同条件下风茄平喘膏供试液的高效液相色谱法测定
1、仪器与药品
仪器:Waters高效液相色谱仪,2489检测器。
药品:磷酸(分析纯);甲醇(色谱级,SIGAMA);风茄平喘膏,批号为20180501,由安徽安科余良卿药业有限公司提供;丁香酚对照品(纯度99.7%),批号为110725-201414,由安徽安科余良卿药业有限公司提供。
2、方法与结果
2.1供试品制备
取风茄平喘膏5片,除去盖衬,剪成小片,置250ml圆底烧瓶中,精密加入甲醇50ml,称定重量,加热回流60分钟,放冷,称重,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液即为供试液。
2.2色谱条件的选择
(1)依据文献干姜HPLC指纹图谱研究报道的色谱条件:采用Waters SunFire C18色谱柱,以乙腈为流动相A,水为流动相B,按照文中条件梯度洗脱,检测波长范围为200~500nm,流速为1ml/min,柱温为30℃。精密吸取10μl供试品溶液1,注入液相色谱仪中,测定。比较200-~500nm波长的色谱图,结果如图1所示,在波长为280nm时,色谱峰相对较多,但只有6-~8个的色谱峰,说明采用该色谱条件不能很好的反映风茄平喘膏样品的特征信息。
(2)依据名称为“吴茱萸脂溶性成分指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱”(专利号ZL 200610200917.1)的发明专利公开的色谱条件,采用Waters SunFire C18色谱柱,以乙腈为流动相A,水为流动相B,按文中程序洗脱,检测波长为200~500nm,流速为1ml/min,柱温为30℃。精密吸取10μl供试品溶液,注入液相色谱仪中,测定。比较200~500nm波长的色谱图,结果如图2所示,在波长256nm时,色谱峰较多,但也只有5~7个特征峰,说明采用该色谱条件不能很好的反映风茄平喘膏样品的特征信息。
(3)依据名称为半夏“半夏水溶性指纹图谱的建立及其标准指纹图谱”(专利号ZL200610200920.3)的发明专利公开的色谱条件,采用Waters SunFire C18色谱柱,以乙腈为流动相A,水为流动相B,按文中程序洗脱,检测波长为200~500nm,流速为1ml/min,柱温为30℃。精密吸取10μl供试品溶液,注入液相色谱仪中,测定。比较200~500nm波长的色谱图,结果如图3所示,在波长为240nm时,色谱峰较多,但只有1个较大的峰,说明采用该色谱条件不能很好的反映风茄平喘膏样品的特征信息。
(4)依据名称为“北洋金花非生物碱成分的HPLC指纹图谱研究”(作者刘高峰等)的文献资料公开的色谱条件,采用Waters SunFire C18色谱柱,以乙腈为流动相A,水为流动相B,按文中程序洗脱,检测波长为200~500nm,流速为1ml/min,柱温为30℃。精密吸取10μl供试品溶液,注入液相色谱仪中,测定。比较200~500nm波长的色谱图,结果如图4所示,在波长为345nm时,色谱峰相对较好,但只有1个较大的色谱峰,说明采用该色谱条件不能很好的反映风茄平喘膏样品的特征信息。
(5)依据名称为“麻黄药材HPLC指纹图谱研究”(作者符继红等)的文献资料公开的色谱条件,采用Waters SunFire C18色谱柱,以乙腈为流动相A,0.1%磷酸为流动相B,按文中程序洗脱,检测波长为200~500nm,流速为1ml/min,柱温为30℃。精密吸取10μl供试品溶液,注入液相色谱仪中,测定。比较200~500nm波长的色谱图,结果如图5所示,在波长为215nm时,色谱峰较多,但只有3个主峰,说明采用该色谱条件不能很好的反映风茄平喘膏样品的特征信息。
(6)依据名称为“川乌HPLC指纹图谱研究”(作者林华等)的文献资料公开的色谱条件,采用Waters SunFire C18色谱柱,以乙腈为流动相A,0.2%乙酸(浓氨水调Ph10.0)为流动相B,按文中程序洗脱,检测波长为200~500nm,流速为1ml/min,柱温为30℃。精密吸取10μl供试品溶液,注入液相色谱仪中,测定。比较200~500nm波长的色谱图,结果如图6所示,在波长为260nm时,色谱峰较多,但也只有6个峰,说明采用该色谱条件不能很好的反映风茄平喘膏样品的特征信息;
(7)依据名称为“白芥子炒制前后HPLC指纹图谱的比较分析”(作者张村等)的文献资料公开的色谱条件,采用Waters SunFire C18色谱柱,以乙腈为流动相A,0.1%磷酸为流动相B,按文中程序洗脱,检测波长为200~500nm,流速为1ml/min,柱温为30℃。精密吸取10μl供试品溶液,注入液相色谱仪中,测定。比较200~500nm波长的色谱图,结果如图7所示,在波长为282nm时,色谱峰较多,但只有1个大峰,其它峰面积很小,说明采用该色谱条件不能很好的反映风茄平喘膏样品的特征信息;
从上述实验(1)~(7)可以看出,按照以上现有文献或者专利公开的特征图谱或指纹图谱色谱条件方法测定所得的风茄平喘膏样品的HPLC图谱峰要么较少,要么分离度低,不能准确地反映风茄平喘膏在质量的特征信息。需要说明的是,附图1~7主要是说明了采用现有的条件测定得到的图谱存在缺陷,这些图并不对本发明需要保护的技术内容产生影响,故此处不再对附图的具体数据做出说明。
(8)依据本发明公开的色谱条件,采用C18柱(尺寸250mm×4.6mm,粒径5μm),以甲醇为流动相A,0.1%磷酸溶液为流动相B,按表1中的规定进行梯度洗脱;柱温为30℃,PDA检测波长范围200~500nm,流速为1.0ml/min。精密吸取供试液10μl,注入高效液相色谱仪中,测定。结果如图8所示,在波长为240nm时,色谱峰较多,且分离度高,说明采用该色谱条件能够很好的反映风茄平喘膏样品的特征信息。
表1流动相梯度表
Figure BDA0001839326610000081
实施例2:风茄平喘膏的标准特征图谱的构建
1、仪器与药品
仪器:Waters高效液相色谱仪,2489检测器。
药品:磷酸(分析纯);甲醇(色谱级,SIGAMA);15批标准风茄平喘膏,批号分别为20161101、20161102、20161201、20161202、20170501、20170801、20170901、20171001、20171002、20171201、20171202、20180101、20180301、20180501、20180502,由安徽安科余良卿药业有限公司提供,上述15批标准风茄平喘膏依次编号为S1~S15;丁香酚对照品,批号为110725-201414,由安徽安科余良卿药业有限公司提供。
2、色谱条件
色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长为250mm,内径为4.6mm,粒径5μm);以甲醇为流动相A,以0.1%的磷酸溶液为流动相B,流动相按体积比为45~85∶55~15的A相和B相梯度洗脱,梯度洗脱的时间及流动相比例为:0~60min,A相45%→85%,B相55%→15%;60~65min,A相85%→45%,B相15%→55%;65~70min,A相45%,B相55%,流速1.0ml/min;检测波长240nm;柱温30℃;进样液的进样量为10μl;按照丁香酚计算,理论塔板数≥8000。
3、标准特征图谱的特征峰的测定
3.1标准特征图谱的构建
(1)标样溶液的制备:取15批上述合格的风茄平喘膏分别进行加热回流提取操作,各风茄平喘膏的回流提取步骤为:取合格的风茄平喘膏5片,除去盖衬,剪成小片,置250ml圆底烧瓶中,精密加入甲醇50ml,称定重量,加热回流60分钟,放冷,称重,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液即得标样溶液。
(2)参照物溶液的制备:取丁香酚对照品,置100ml量瓶中,加甲醇制成每1ml含66.24μg丁香酚的溶液,摇匀,滤过,取续滤液作为参照物溶液。
(3)高效液相色谱分析:精密吸取参照物溶液和标样溶液各10μl,分别注入高效液相色谱仪中进行测定,记录70分钟的图谱,即得丁香酚对照品的色谱图(见图9)和标准风茄平喘膏的色谱图(见图10,为批号20180501风茄平喘膏的色谱图)。
(4)标准特征图谱的构建
将检测得到的15批标准风茄平喘膏的色谱图导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统,相应操作后得到如图10所示的标准风茄平喘膏的特征图谱,系统生成的对照图谱R,导出即得如图11所示的标准风茄平喘膏的标准特征图谱。
3.2标准特征图谱中特征峰的确定
经比较15批标准风茄平喘膏色谱图和丁香酚的色谱图,确定风茄平喘膏的色谱图中有13个特征峰,按出现的时间顺序将这13个特征峰依次编号1~2、S、3~12,其中S号色谱峰为丁香酚的特征峰,设定S号峰的相对保留时间为1,计算其他12个峰的相对保留时间,结果如下表2所示。经计算,1~12号峰的平均相对保留时间分别为:0.634、0.922、1.100、1.605、1.684、2.047、2.204、2.352、2.462、2.659、2.899、2.962,相对标准差均不超过0.56%。
Figure BDA0001839326610000111
3.3标准特征图谱的精密度试验
取风茄平喘膏(批号为20180501),按照3.1中步骤(1)公开的方法制备成标样溶液,连续进样6次,得到6个色谱图,均出现13个特征峰,设定丁香酚的特征峰的相对保留时间为1,计算6个色谱图中其它12个特征峰的相对保留时间。经计算,6个色谱图中12个特征峰的相对保留时间的相对标准偏差RSD≤1.10%。
3.4标准特征图谱的重复性试验
取风茄平喘膏(批号为20180501)6份,按照3.1中步骤(1)公开的方法分别制备成标样溶液,分别检测得到6个色谱图,均出现13个特征峰,设定丁香酚的特征峰的相对保留时间为1,计算6个色谱图中12个特征峰的相对保留时间。经计算,6个色谱图中12个特征峰的相对保留时间的相对标准偏差RSD≤1.43%。
3.5标准特征图谱的稳定性试验
取风茄平喘膏(批号为20180501),按照3.1中步骤(1)公开的方法制备成标样溶液,精密吸取6份标样溶液,每份10μl,按上述色谱条件分别在0h、1h、2h、4h、8h和12h进样,检测得到6个色谱图,均出现13个特征峰,设定丁香酚的特征峰的相对保留时间为1,计算6个色谱图中12个特征峰的相对保留时间。经计算,6个色谱图中12个特征峰的相对保留时间的相对标准偏差RSD≤1.11%。
以上试验结果表明,采用本发明公开的方法构建得到的风茄平喘膏的标准特征图谱精密度高,重复性好,结果准确可靠,稳定性强,其能全面的反映风茄平喘膏的化学信息,进而确保该产品的质量与疗效。
实施例3:风茄平喘膏的质量检测
1、仪器与试药
仪器:Waters高效液相色谱仪,2489检测器。
药品:磷酸(分析纯);甲醇(色谱级,SIGAMA);风茄平喘膏,批号为20161101,由安徽安科余良卿药业有限公司提供;丁香酚对照品(纯度99.7%),批号为110725-201414,由安徽安科余良卿药业有限公司提供。
2、色谱条件
色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长为250mm,内径为4.6mm,粒径5μm);以甲醇为流动相A,以0.05%的磷酸溶液为流动相B,流动相按体积比为45~85∶55~15的A相和B相梯度洗脱,梯度洗脱的时间及流动相比例为:0~60min,A相45%→85%,B相55%→15%;60~65min,A相85%→45%,B相15%→55%;65~70min,A相45%,B相55%,流速1.5ml/min;检测波长240nm;柱温30℃;进样液的进样量为10μl;按照丁香酚峰计算,理论塔板数≥8000。
3、特征图谱中的特征峰的测定
(1)待测溶液的制备:取待测风茄平喘膏5片,除去盖衬,剪成小片,置250ml圆底烧瓶中,精密加入甲醇50ml,称定重量,加热回流15分钟,放冷,称重,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液即得待测溶液。
(2)参照物溶液的制备:取丁香酚对照品,置100ml量瓶中,加甲醇制成每1ml含70.01μg丁香酚的溶液,摇匀,滤过,取续滤液作为参照物溶液。
(3)高效液相色谱分析:精密吸取参照物溶液和待测溶液各10μl,分别注入液相色谱仪中进行测定,记录70分钟的图谱,即得丁香酚对照品的色谱图和待测风茄平喘膏的色谱图。如图12所示,待测风茄平喘膏(批号为20161101)的色谱图中共有13个特征峰,以丁香酚的特征峰的相对保留时间为1,其1~12号峰的相对保留时间分别为:0.635、0.923、1.100、1.595、1.679、2.042、2.200、2.349、2.458、2.655、2.893、2.959。经计算,待测风茄平喘膏的色谱图中的1~12号峰的相对保留时间与标准特征图谱中相应特征峰的相对保留时间的相对标准偏差在±5%以内,即在规定范围内,说明该风茄平喘膏(批号为20161101)的质量合格。
实施例4:风茄平喘膏的质量检测
1、仪器与试药
仪器:Waters高效液相色谱仪,2489检测器。
药品:磷酸(分析纯);甲醇(色谱级,SIGAMA);风茄平喘膏,批号为20170501,由安徽安科余良卿药业有限公司提供;丁香酚对照品(纯度99.7%),批号为110725-201414,由安徽安科余良卿药业有限公司提供。
2、色谱条件
色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长为250mm,内径为4.6mm,粒径5μm);以甲醇为流动相A,以0.3%的磷酸溶液为流动相B,流动相按体积比为45~85∶55~15的A相和B相梯度洗脱,梯度洗脱的时间及流动相比例为:0~60min,A相45%→85%,B相55%→15%;60~65min,A相85%→45%,B相15%→55%;65~70min,A相45%,B相55%,流速1.5ml/min;检测波长240nm;柱温30℃;进样液的进样量为10μl;按照丁香酚峰计算,理论塔板数≥8000。
3、特征图谱中的特征峰的测定
(1)待测溶液的制备:取待测风茄平喘膏5片,除去盖衬,剪成小片,置250ml圆底烧瓶中,精密加入甲醇50ml,称定重量,加热回流30分钟,放冷,称重,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液即得待测溶液。
(2)参照物溶液的制备:取丁香酚对照品,置100ml量瓶中,加甲醇制成每1ml含60.85μg丁香酚的溶液,摇匀,滤过,取续滤液作为参照物溶液。
(3)高效液相色谱分析:精密吸取参照物溶液和待测溶液各10μl,分别注入液相色谱仪中进行测定,记录70分钟的图谱,即得丁香酚对照品的色谱图和待测风茄平喘膏的色谱图。如图12所示,待测风茄平喘膏(批号为20170501)的色谱图中共有13个特征峰,以丁香酚的特征峰的相对保留时间为1,其1~12号峰的相对保留时间分别为:0.635、0.921、1.100、1.618、1.683、2.048、2.204、2.352、2.462、2.656、2.903、2.960。经计算,待测风茄平喘膏的色谱图中的1~12号峰的相对保留时间与标准特征图谱中相应特征峰的相对保留时间的相对标准偏差在±5%以内,即在规定范围内,说明该风茄平喘膏(批号为20170501)的质量合格。
需要说明的是,参照图12即可明确知道图13、14中13个特征峰的对应位置,故省略图13、14中的13个特征峰的编号编写。

Claims (5)

1.一种风茄平喘膏的标准特征图谱的构建方法,其步骤如下:
a)标样溶液、参照物溶液的准备:将至少15批次合格的风茄平喘膏分别加热回流提取得到各标样溶液,将丁香酚对照品加甲醇制成参照物溶液;
b)高效液相色谱分析:精密吸取等量的各标样溶液、参照物溶液,分别注入高效液相色谱仪进行测定,即得各标样溶液和参照物溶液的色谱图,高效液相色谱分析的色谱条件为:色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以甲醇为流动相A,以0.05~0.5%的磷酸溶液为流动相B,流动相按体积比为45~85:55~15的A相和B相梯度洗脱,流速0.5~1.5ml/min,检测波长240±2nm,柱温30~40℃,进样液的进样量为10~20μl,按照丁香酚计算,理论塔板数≥8000;
c)标准特征图谱的构建:将得到的各标样溶液的色谱图导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统,制定得到风茄平喘膏的标准特征图谱,该标准特征图谱中有13个特征峰,按出现的时间顺序将所述的13个特征峰依次编号1~2、S、3~12,以参照物溶液的色谱峰的相对保留时间为1,计算得知1~12号特征峰的平均相对保留时间分别为0.634、0.922、1.100、1.605、1.684、2.047、2.204、2.352、2.462、2.659、2.899、2.962;所述的S号色谱峰是丁香酚的特征峰,其平均相对保留时间为1;
所述步骤b)中梯度洗脱的时间及流动相比例为:0~60min,A相45%→85%,B相55%→15%;60~65min,A相85%→45%,B相15%→55%;65~70min,A相45%,B相55%。
2.根据权利要求1所述的风茄平喘膏的标准特征图谱的构建方法,其特征在于:步骤b)中所述的A相为色谱级甲醇。
3.根据权利要求2所述的风茄平喘膏的标准特征图谱的构建方法,其特征在于:步骤a)中各标样溶液的加热回流提取步骤为:分别取合格的风茄平喘膏5片,除去盖衬,剪成小片,置250ml圆底烧瓶中,精密加入甲醇50ml,称定重量,加热回流60~90分钟,放冷,称重,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液即为标样溶液。
4.根据权利要求3所述的风茄平喘膏的标准特征图谱的构建方法,其特征在于:步骤a)中参照物溶液的制备步骤为:取丁香酚对照品,精密称定,加甲醇制成每1ml含60~70μg对照品溶液,滤过,取续滤液即为参照物溶液。
5.根据权利要求1-4任一项所述的风茄平喘膏的标准特征图谱的 构建方法,其特征在于:利用所述标准特征图谱进行质量检测的方法为:按照标样溶液和参照物溶液的方法制备并测定得到待测风茄平喘膏的色谱图和丁香酚对照品的色谱图,将待测风茄平喘膏的色谱图与构建的标准特征图谱比对,若待测风茄平喘膏的色谱图中出现标准特征图谱中相同的13个特征峰,与参照物峰相应的峰为S峰,计算各特征峰与S峰的相对保留时间,各特征峰的相对保留时间与标准特征图谱中各特征峰的相对保留时间的相对标准偏差在±5%以内,则该风茄平喘膏的质量合格,反之则不合格。
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