CN106661100A - 改进的免疫球蛋白可变结构域 - Google Patents
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Abstract
VH结构域，其中：(i)位置112处的氨基酸残基是K或Q中的一个；和/或(ii)位置89处的氨基酸残基是T；和/或(iii)位置89处的氨基酸残基是L并且位置110处的氨基酸残基是K或Q中的一个；并且(iv)在情况(i)至(hi)中的每一种中，位置11处的氨基酸优选是V；并且其中所述VH结构域包含C‑端延伸(X)n，其中n是1至10，优选地是1至5，如1、2、3、4或5(并且优选地是1或2，如1)；并且各个X是(优选地天然存在的)这样的氨基酸残基，其是被独立地选择的，并且优选地独立地选自由以下组成的组：丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)或异亮氨酸(I)。
Description
本发明涉及改进的重链免疫球蛋白可变结构域。
本发明特别地涉及这样的改进的重链免疫球蛋白可变结构域，其具有暴露的C-端区域或末端(如本文中进一步描述的；也参见WO 12/175741)或被用于(或意在用于)这样的应用，其中它们具有暴露的C-端区域或末端(同样，如本文中进一步描述的)。前者的一些优选的而非限制性的实例是免疫球蛋白单可变结构域(在本文中也被称为“ISV”或“ISVD”)如纳米抗体(包括VHH，人源化的VHH和骆驼源化的VH如骆驼源化的人VH)，作为VH结构域或来源于VH结构域的(单结构域)抗体，和作为VH结构域或来源于VH结构域的dAb。后者的一些优选的而非限制性的实例是用于(或意在用于)单链FV(ScFv)或双抗体的VH结构域。
本发明还涉及包含(一个或多个)如本文中所述的本发明的改进的重链免疫球蛋白可变结构域或基本上由(一个或多个)如本文中所述的本发明的改进的重链免疫球蛋白可变结构域组成的蛋白质、多肽和其他构建体、分子或化学实体；涉及用于表达/制备本发明的改进的重链免疫球蛋白可变结构域和/或用于表达/制备包含其的蛋白质、多肽和其他构建体、分子或化学实体的方法；涉及包含本发明的改进的重链免疫球蛋白可变结构域和/或含有本发明的改进的重链免疫球蛋白可变结构域的蛋白质、多肽和其他构建体、分子或化学实体的组合物和产品(如药物组合物和产品)；涉及编码本发明的改进的重链免疫球蛋白可变结构域和/或编码包含本发明的改进的重链免疫球蛋白可变结构域的蛋白质或多肽的核苷酸序列和核酸；并且涉及本发明的改进的重链免疫球蛋白可变结构域和包含其的蛋白质、多肽和其他构建体、分子或化学实体的用途(并且特别是治疗、预防和诊断用途)。
由本文中的进一步描述，本发明的进一步的方面、实施方案、优点、应用和用途将变得清楚。
在本申请中，免疫球蛋白重链可变结构域中的氨基酸残基/位置将根据Kabat的编号来指示。为了方便，图1给出了列出了本文中将具体提及的一些氨基酸位置及其根据一些备选编号系统(如Aho和IMGT。注意：对于本申请的说明书和权利要求，Kabat编号是决定性的；给出其他编号系统仅作为参考)的编号的表。
此外，在本发明中，当免疫球蛋白可变结构域不与恒定结构域(如CH1结构域)结合或连接时，称其具有“暴露的C-端末端或区域”。参考本文中引用的相关现有技术。
特别地，如WO 12/175741中所述，C-端区域(当本文中也使用该术语时)是ISV上的推定表位的一部分，除了其他残基以外，所述表位还包括位置14处的氨基酸残基(以及氨基酸序列中与其紧邻/接近的氨基酸残基，如位置11、13和15)并且还可以包括位置83处的氨基酸残基(以及氨基酸序列中与其紧邻/接近的氨基酸残基，如位置82、82a、82b和84)和/或位置108处的氨基酸残基(以及氨基酸序列中与其紧邻/接近的氨基酸残基，如位置107)。如在WO 12/17574中，该推定表位在本文中也被统称为“C-端区域”，要理解的是该C-端区域至少包括C端序列VTVSS(即位置109、110、111、112和113中的每个)和位置14处的氨基酸残基，并且还可以包括位置83和108处的氨基酸残基，并且还可能包括位置13、15、82b、83、84和107处的氨基酸残基。
作为研究单链Fv或"ScFv"(其是包含与ISVD类似地不与恒定结构域相结合的免疫球蛋白可变结构域的构建体)的结果，本领域中已经描述了，免疫球蛋白可变结构域的C-末端包含疏水片(patch)，所述疏水片在常规全尺寸抗体中被埋在可变结构域和恒定结构域之间的界面中但是当可变结构域不与恒定结构域相结合时其暴露于溶剂(参见例如Nieba等,Protein Engineering,10,435-444(1997)和Harmsen等,Molecular Immunology(2000),579-590)。
还已知，通常埋在蛋白质结构内的表位(也被称为“新表位”或“隐蔽表位”)在其暴露于溶剂(例如由于所涉及的蛋白质的降解、错误折叠或聚集所致)后可以触发免疫系统。例如，在生物分子的埋藏的疏水部分(所谓的“hyppos”)的情况中，已经提示，在hyppos暴露于溶剂后，所述疏水部分形成导致先天免疫系统应答的与总体损伤相关联的分子模式的一部分(参见例如Seong和Matzinger，Nature Reviews 2004,469)，并且本领域中已经描述了触发免疫应答的之前埋藏的疏水片的多种实例(参见例如David等,JBC,2001,6370-6377；Matsuura等,International Immunology,2000,1183-1192；Rasheed等,Life Sciences 79(2000),2320-2328)。更加一般性地，本领域中也已知的是，疏水氨基酸倾向于成为B细胞表位的一部分(参见例如WO 11/07586，第10页；和Kolaskar,FEBS 276,172-174(1990))。类似地，已经描述的是，重链可变结构域的C-末端处的疏水片(如以上的Nieba等和Harmsen等所述的)可以形成B-细胞表位，所述表位可以使(新出现的和/或预先存在的)抗药抗体出现和/或与其相互作用(WO 11/07586)。因为该原因，已经提出对形成可变结构域的C-末端的部分的氨基酸残基中的一些进行突变以减小疏水性和/或除去B-细胞表位。例如，Nieba等提出突变VH区域的位置11、14、41、84、87和/或89(根据Kabat编号)，而在WO 11/07586中建议的是突变VL结构域的位置99，101和/或148(AHo编号)或VH结构域的位置12、97、98、99、103和/或144(同样是AHo编号-这些位置对应于根据Kabat的位置11、83、84、85、89和103)。类似地，Harmsen等建议突变位置12和101(IMGT编号；这些是根据Kabat的位置11和89)以抵偿CH1结构域的缺失；并且其还鉴定了含有作为用于在这些位置处取代的合适候选物的氨基酸的VHH的具体亚家族(被称为“VHH4”)。
现有技术(参见例如WO 12/175741和接下来的段落中引用的文献)已经描述了获得自人受试者的生物学样品可以包含能够与免疫球蛋白可变结构域的暴露的C-端区域或末端(例如，ISVD或ScFv或双抗体中的VH或VL结构域的C-端区域或末端)结合的(原始)蛋白质或因子。
例如，WO 2013/024059记载了“在来自一些健康的首次用于实验的(naive)人受试者的血清中，出现可以结合VH结构域抗体和VHH分子的预先存在的(pre-existing)抗-VH自身抗体以及可以结合VL分子的抗-VL(例如Vκ(VK))自身抗体。”，以及“结合VH dAb的预先存在的ADA与抗-铰链抗体的类似之处在于其结合IgG片段但是不结合在完整IgG上原位发现的那些相同序列。”
Holland等,J.Clin.Immunol.2013,33(7):1192-203描述了约半数的正常健康人类的血液含有不同水平的一类新的抗-IgG自身抗体，其可以结合全长人VH结构域抗体的框架序列(也被Holland等称为“HAVH自身抗体”)。Holland等还提及了这些自身抗体表现为主要是IgG同种型，显示较高的对VH序列的亲合力(约10-10M)，并且游离的C-末端表现为对于这些HAVH自身抗体与VH结构域的结合是重要的。
Xue等，AAPS J.2013；15(3):852-5也一般地讨论了与预先存在的针对生物治疗分子的生物治疗反应性抗体及其调控影响相关的问题。
前述现有技术也聚焦于这样的方式，其中免疫球蛋白可变结构域的序列可以被修饰从而防止或减少此种预先存在的抗体/因子与可变结构域的结合。关于此，WO 2011/07586提议在可变结构域的氨基酸序列中在所述结构域的一些特定位置(所述位置是暴露于表面的)处进行一个或多个突变。WO 12/175741描述了可以通过以下方式减少此种预先存在的抗体/因子的结合：向VH-结构域的C-端添加若干氨基酸残基(并且少至一个丙氨酸残基)和/或在可变结构域的C-端区域内进行一个或多个特定取代或缺失，其在WO 12/175741中被描述为至少包含C-端氨基酸序列VTVSS和位置14处的氨基酸残基(对于所述位置，WO 12/175741教导了：与存在“人”氨基酸残基脯氨酸相比，丙氨酸残基的存在提供减少的预先存在的抗体的结合)，并且同样可能的是位置108和83处的氨基酸残基和与所述位置邻近的氨基酸残基(WO 2013/024059提供了与WO 12/175741基本相同的教导)。
例如，在导致提交WO 12/175741的申请人/受让人进行的研究中，已经发现，向暴露的VH结构域的C-端区域或末端添加单个丙氨酸残基通常将防止/去除存在于获得自大部分人受试者的样品中的预先存在的抗体/因子的(基本上全部)结合(参见例如WO 12/175741的第62页第20-25行和第57页第30行至第58页第3行)；并且这些发现已经被申请人/受让人在提交WO 12/175741后在将WO 12/175741的C-端丙氨酸取代应用于其他纳米抗体时获得的另外的结果(数据未显示)确认。
此外，在申请人/受让人的WO 12/175741以及WO 12/175400中，WO 12/175741中描述的C-端延伸被应用于某些结合血清-白蛋白的纳米抗体(参见例如WO 12/175741：SEQ IDNO:37、51-53和55-64和SEQ ID NO:41、43和44中所示的构建体；以及WO 12/175400：SEQ IDNO:6至11)。
WO 12/175741的图9还描述了两个白蛋白结合序列，其在以下实验部分中被用作参比序列。这两个序列是WO 12/175741的图9中的SEQ ID NO:37(在本文中也被称为“参比B”；其序列在本文中作为SEQ ID NO:45给出)和WO 12/175741的图9中的“不具有添加的C-端氨基酸残基的SEQ ID NO:37”(在本文中也被称为“参比A”；其序列在SEQ ID NO:44中给出)。参比A和参比B都来源于在WO 06/122787中被作为SEQ ID NO:62给出的人源化的抗-白蛋白纳米抗体“Alb-8”的序列(并且其在本文中也被称为“Alb-11”)；但是，与Alb-11的序列相比，参比A包含N-端His标签；并且参比B包含N-端His标签和C-端丙氨酸残基。参比A、参比B和Alb-8/Alb-11都含有分别在SEQ ID NO:41至43中给出的CDR。
在C-端区域中具有C-端延伸和/或突变的纳米抗体和其他免疫球蛋白单可变结构域的其他实例可以例如在以下现有技术中找到：WO 06/129843(参见例如SEQ ID NO:4、6、8和10)；WO 03/035695(参见例如第61-64页列出的一些序列)；Vu等,MolecularImmunology,1121-1131,1997(参见例如图2中列出的一些序列)；WO 11/003622(参见例如作为SEQ ID NO:10至27给出的序列)；WO09/058383(参见例如第51页上提及的序列TAR2h-10-27)；WO 10/042815(参见例如序列SEQ ID NO:15、17、27和30)；和WO 04/044204(参见例如序列SEQ ID NO:31、35、37、47和49)。
本文中引用的一些文献还给出了ISVD序列的实例，其中ISVD的最后一个C-端的氨基酸是除丝氨酸(S)以外的氨基酸，例如因为位置113处的丝氨酸已被另一种氨基酸替代和/或因为位置113处的丝氨酸已经缺失并且已经添加了一个C-端氨基酸(实际上，对于C-端氨基酸序列来说最后的结果将是一样的)。
本文中引用的一些文献还给出了其中位置112是不同于丝氨酸的氨基酸的纳米抗体和其他免疫球蛋白单可变结构域的实例。例如，WO 12/175741描述了位置112是甘氨酸(G)的纳米抗体；Vu等(同上)描述了位置112是丙氨酸(A)或异亮氨酸(I)的纳米抗体；WO13/024059例示了S112A取代；并且以下引用的WO 08/020079例示了S112F取代并且还一般地陈述了其中描述的纳米抗体可以包含有限数目的添加在纳米抗体的氨基酸序列的羧基端处的氨基酸残基。
在导致本发明的研究中，在已经确定向纳米抗体的C-端区域或末端添加C-端延伸(其最简单可以是单个C-端丙氨酸残基，同样参见WO 12/175741，实施例3)基本上防止/去除大部分人受试者/患者样品中的预先存在的抗体/因子的结合后，研究了获得自人受试者(健康志愿者和/或患有疾病或病症的受试者)的样品是否可能含有甚至在存在C-端延伸的情况下仍可以结合纳米抗体(或其他VH结构域)的暴露的C-端区域的(其他)预先存在的抗体或因子。在这样做的过程中，本发明人发现，虽然在健康志愿者的血液或血清中或在获得自患有多种不同疾病(包括一些炎性疾病或自体免疫病症–数据未显示)之一的人患者的血液或血清中基本上没有发现与C-端延伸的VH结构域结合的此种预先存在的抗体，但是一些获得自某些(不是全部)患有某些严重的(自体)免疫病症(如系统性红斑狼疮；本文中也被简写为“SLE”)的人受试者的血液或血清样品表现为含有一些在所述纳米抗体包含C-端延伸时仍然可以结合纳米抗体的预先存在的抗体/因子。
因此，一般地，本发明的目的是提供改进的重链免疫球蛋白可变结构域(并且特别是改进的重链ISVD并且更特别地是改进的纳米抗体)，所述结构域在其具有暴露的C-端区域或末端时，较不容易被预先存在的抗体/因子(如在获得自人受试者的血液或血清样品中发现的那些)结合。
特别地，本发明的目的是提供改进的重链免疫球蛋白可变结构域，所述结构域在其具有暴露的C-端区域或末端时，较不容易被在所述结构域包含C-端延伸时仍然可以结合重链可变结构域的暴露的C-端区域或末端的预先存在的抗体/因子(同样，如在获得自人受试者的血液或血清样品中发现的那些)结合(例如，如WO 12/175741、WO 13/024059和本文中引用的其他现有技术中所述)。
如本文中提及的，本发明人发现，此种可以结合具有C-端延伸的重链可变结构域的预先存在的抗体存在于获得自患有某些严重影响/激活免疫系统的(自体)免疫疾病或病症(如SLE)的人受试者的血液或血清样品中。
因此，更特别地，本发明的目的是提供改进的重链免疫球蛋白可变结构域(并且特别是改进的重链ISVD并且更特别是改进的纳米抗体)，所述结构域在其具有暴露的C-端区域或末端时，较不容易被预先存在的抗体/因子(如在获得自患有某些严重影响/激活免疫系统的(自体)免疫疾病或病症(如SLE)的人受试者的血液或血清样品中发现的那些)结合。
甚至更特别地，本发明的目的是提供改进的重链免疫球蛋白可变结构域(并且特别是改进的重链ISVD并且更特别是改进的纳米抗体)，所述结构域在其具有暴露的C-端区域或末端时，较不容易被在获得自患有某些(自体)免疫疾病或病症的人受试者的血液或血清样品中发现的并且在VH结构域包含C-端延伸时仍然可以结合VH结构域的暴露的C-端区域或末端的那些预先存在的抗体/因子结合。
现在已经发现，通过将位置112(Kabat编号)处的丝氨酸突变成赖氨酸(K)或谷氨酰胺(Q)可以(进一步)减少预先存在的抗体/因子与具有暴露的C-末端的重链可变结构域的结合。特别地，已经发现，此种S112K或S112Q突变可以(进一步)减少或基本上阻止/去除可以结合包含C-端延伸(但是没有S112K或S112Q突变)的重链可变结构域的预先存在的抗体/因子(如在患有严重自体免疫病症如SLE的人受试者的血液或血清样品中发现的那些预先存在的抗体/因子)的结合。
还发现，引入本文中公开的特定突变(并且特别是以下突变：L11V，其与V89L组合，并且任选地进一步与T110K组合)可以改善，或有助于(进一步)改善本文一般和具体公开的免疫球蛋白单可变结构域(如ISVD)的溶解性(数据未显示)。
因此，在第一方面，本发明涉及免疫球蛋白重链可变结构域(VH结构域)，其中位置112(Kabat编号)处的氨基酸残基是赖氨酸(K)残基或谷氨酰胺(Q)残基。此种免疫球蛋白重链可变结构域在本文中也被称为“本发明的VH结构域”。当本发明的VH结构域是免疫球蛋白单可变结构域(如优选的)时，其在本文中也将被称为“本发明的ISVD”。类似地，当本发明的VH结构域是纳米抗体(如甚至更优选的)时，其在本文中也将被称为“本发明的纳米抗体”。
一般地，本发明的VH结构域具有暴露的C-端末端或区域，和/或存在于其中具有暴露的C-端末端或区域的蛋白质、多肽、化合物、实体或构建体，和/或意在用于这样的用途，其中其具有暴露的C-端区域(例如，用于蛋白质、多肽、化合物、实体或构建体，其中其意在形成C-端末端或区域)。
在本发明的一个方面，本发明的VH结构域是(重链)免疫球蛋白单可变结构域，意味着可以在不与VL结构域相互作用的情况下形成功能性抗原结合位点的重链可变结构域。例如，本发明的VH结构域可以是纳米抗体(包括VHH、人源化的VHH和/或骆驼源化的VH如骆驼源化的人VH)、作为VH结构域或来源于VH结构域的(单)结构域抗体，或作为VH结构域或来源于VH结构域的dAb。本发明的VH结构域优选是纳米抗体(例如VHH结构域、人源化的VHH结构域或骆驼源化的VH结构域如骆驼源化的人VH结构域)。
根据本发明的另一个方面，本发明的VH结构域可以是这样的重链可变结构域，其在其所存在的蛋白质、多肽、蛋白质或构建体中，需要与VL结构域相互作用以形成抗原结合位点并且具有或形成暴露的C-端末端或区域。例如，根据本发明的该方面的VH结构域可以是存在于和/或用于ScFv和或双抗体中的VH结构域。
根据本发明的更具体的方面，本发明的VH结构域具有VTVKS(SEQ ID NO:1)或VTVQS(SEQ ID NO:2)的C-端序列(根据Kabat的位置109至113)，或与序列VTVKS和/或VTVQS相比具有一个氨基酸差异(即在位置109、110、111或113中的一个处)而在位置112处仍然具有赖氨酸(K)或谷氨酰胺(Q)的序列。
此外，如本文中进一步描述的，在本发明的一个特别优选的方面，本发明的VH结构域在其C-末端还包含C-端延伸(例如如WO 12/175741和/或WO 13/024059中所述)(即与VTVKS-、VTVQS-或类似基序的末端处的丝氨酸残基相连)，特别是本文中进一步限定的C-端延伸。然而，同样如本文中进一步描述的，还可能的是，VTVKS-、VTVQS-或类似基序形成VH结构域的C-末端(虽然这通常是较不优选的)，或者本发明的VH结构域在其C-末端连接(任选地具有合适的接头)至另一个氨基酸序列、部分(moiety)、结构域或结合单元。例如，当本发明的VH结构域是ISVD时，VH结构域可以在其C-末端任选地经由接头连接至另一个ISVD(并且所述另一个ISVD也可以是本发明的VH结构域)。
总之，如一般地对于免疫球蛋白可变结构域已知的，本发明的VH结构域将包含4个框架区(FW1、FW2、FW3和FW4)和3个CDR(CDR1、CDR2和CDR3)。关于免疫球蛋白可变结构域，通常，CDR的序列将取决于本发明的VH结构域所针对的和/或意欲结合的抗原/靶标。框架区通常可以是任何适用于VH结构域的框架区(虽然位置112和/或位置89将是如本文中进一步描述的)。如果本发明的VH结构域是ISVD，则VH结构域将具有适合于ISVD的框架序列(任选地结合一个或多个CDR)。例如，如果本发明的VH结构域是纳米抗体，则框架区将通常包含合适数目的VHH标志残基(关于其，参见例如WO 08/020079和本文中引用的申请人/受让人的一些其他专利申请)。
因此，例如，当本发明的VH结构域是纳米抗体时，本发明的所述纳米抗体可以含有一个或多个作为VHH/纳米抗体的特征的“标志残基”(例如在位置11、37、44、45、47、83、84、103、104和/或108处；参见例如WO 08/020079的表A-3和A-5至A-8)；一个或多个可以存在于VHH/纳米抗体中的其他氨基酸残基(如一个或多个已知本身可用于VHH和纳米抗体的人源化取代；参考例如WO 08/020079中的教导；同样参见之前提及的表A-3和A-5至A-8)和/或一个或多个其他适用于VHH/纳米抗体的氨基酸残基或取代；或所述氨基酸残基/取代的任何合适的组合。
位置112是K或Q(即具有或不具有C-端延伸)的本发明的纳米抗体在位置11处优选地含有选自L(VHH中最常出现的氨基酸残基)、E、K、M、S、V、W或Y的氨基酸；更优选地选自L、E、K、V或Y，并且甚至更优选地选自L、K或V(其中V是最优选的)的氨基酸。举例来说且没有限制，与在VHH中最常出现的亮氨酸残基相比，其可以含有L11K或L11V突变。其也可以，但不限于，例如含有Q108L突变(公知的用于VHH/纳米抗体的人源化取代)。可以存在的其他氨基酸残基(同样，不限于，并且例如天然出现在人VH或VHH中的该位置处的其他氨基酸残基也可以存在于这些位置处)是例如位置14处的丙氨酸(A)(其是天然存在的VHH中的该位置处非常常见的氨基酸残基)、位置14处的脯氨酸(其是人VH结构域中的该位置处最常见的氨基酸)以及Harmsen等建议的突变(特别地，Harmsen等建议的基于VHH4-类VHH的序列的那些，如V89M或V89T)和/或Nieba建议的位置处的(其他)突变(例如，在位置11、87和/或89中的一个或多个，参见Nieba，第437页，右栏)中的一个或多个。另一个合适的突变是例如T110K或T110Q。此外：(i)位置41可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置41所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)中的一个并且可以特别地是(或选自)脯氨酸(P)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、丙氨酸(A)或亮氨酸(L)，这些是人或骆驼的该位置处最经常出现的一些氨基酸残基，并且可以更特别地是脯氨酸(P)或丙氨酸(A)；和/或(ii)此外，位置42可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置42所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)中的一个并且可以特别地是(或选自)甘氨酸(G)或谷氨酸(E)；和/或(iii)位置87可以例如是WO 08/020079的表A-7中针对位置87所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)中的一个并且可以特别地是(或选自)苏氨酸(T)或丙氨酸(A)。
根据本发明的更具体的方面，本发明的VH结构域(其是如本文中进一步描述的)具有框架4(FW4序列)，其是：
a)是以下表1中提及的SEQ ID NO:3至20的FW4序列中的一个
表1：FW4序列
| WGQGTQVTVKS(SEQ ID NO:3) |
| WGKGTLVTVKS(SEQ ID NO:4) |
| RGQGTRVTVKS(SEQ ID NO:5) |
| WGLGTQVTISS(SEQ ID NO:6) |
| GSQGTQVTVKS(SEQ ID NO:7) |
| LRGGTQVTVKS(SEQ ID NO:8) |
| RGQGTLVTVKS(SEQ ID NO:9) |
| RSRGIQVTVKS(SEQ ID NO:10) |
| WGKGTQVTVKS(SEQ ID NO:11) |
| WGQGTQVTVQS(SEQ ID NO:12) |
| WGKGTLVTVQS(SEQ ID NO:13) |
| RGQGTRVTVQS(SEQ ID NO:14) |
| WGLGTQVTISS(SEQ ID NO:15) |
| GSQGTQVTVQS(SEQ ID NO:16) |
| LRGGTQVTVQS(SEQ ID NO:17) |
| RGQGTLVTVQS(SEQ ID NO:18) |
| RSRGIQVTVQS(SEQ ID NO:19) |
| WGKGTQVTVQS(SEQ ID NO:20) |
或：
b)是与SEQ ID NO 3至20的FW4序列中的至少一个相比具有不超过三个，优选地不超过两个氨基酸差异的序列，其中(i)对应于Kabat编号的位置112的位置处的氨基酸残基是K或Q；并且其中(ii)对应于Kabat编号的位置103的位置处的氨基酸残基优选是W或R；(iii)对应于Kabat编号的位置104的位置处的氨基酸残基优选是G；(iv)对应于Kabat编号的位置106的位置处的氨基酸残基优选是G；(v)对应于Kabat编号的位置107的位置处的氨基酸残基优选是T；(vi)对应于Kabat编号的位置108的位置处的氨基酸残基优选是Q或L(并且在人源化的纳米抗体中优选是L)；(vii)对应于Kabat编号的位置109的位置处的氨基酸残基优选是V；(viii)对应于Kabat编号的位置110的位置处的氨基酸残基优选是T(或备选地可以是K或Q)；(ix)对应于Kabat编号的位置111的位置处的氨基酸残基优选是V。以下表2给出了可以存在于此种FW4序列的不同位置(根据Kabat编号)处的氨基酸残基的一些非限制性实例。
表2：可以存在于本发明的VH结构域的FW4序列中的氨基酸残基的实例。
优选地，本发明的VH结构域具有以下的框架4(FW4序列)：
a)WGQGTQVTVKS(SEQ ID NO:3)或WGQGTQVTVQS(SEQ ID NO:12)；或
b)与SEQ ID NO:3和/或SEQ ID NO:12相比具有不超过三个，优选地不超过两个氨基酸差异(如仅一个氨基酸差异)的序列，其中(i)对应于Kabat编号的位置112的位置处的氨基酸残基是K或Q；并且其中(ii)对应于Kabat编号的位置103的位置处的氨基酸残基优选是W或R；(iii)对应于Kabat编号的位置104的位置处的氨基酸残基优选是G；(iv)对应于Kabat编号的位置106的位置处的氨基酸残基优选是G；(v)对应于Kabat编号的位置107的位置处的氨基酸残基优选是T；(vi)对应于Kabat编号的位置108的位置处的氨基酸残基优选是Q或L(并且在人源化的纳米抗体中优选是L)；(vii)对应于Kabat编号的位置109的位置处的氨基酸残基优选是V；(viii)对应于Kabat编号的位置110的位置处的氨基酸残基优选是T(或备选地可以是K或Q)；(ix)对应于Kabat编号的位置111的位置处的氨基酸残基优选是V。同样，表2给出了可以存在于此种FW4序列的不同位置(根据Kabat编号)处的氨基酸残基的一些非限制性实例。
如本文中进一步描述的，根据本发明的一个优选方面，包含如上所述的FW4序列的本发明的VH结构域优选地还包含C-端延伸(如本文中进一步描述的)。然而，如本文中还进一步描述的，还可能的是FW4序列形成VH结构域的C-末端(虽然这通常是较不优选的)或本发明的VH结构域在其C-末端连接(任选地经由合适的接头)至另一个氨基酸序列、部分、结构域或结合单元。例如，当本发明的VH结构域是ISVD时，VH结构域可以在其C-末端任选地经由接头连接至另一个ISVD(并且所述另一个ISVD可以也是本发明的VH结构域)。
如本文中指出的，根据本发明的优选的但非限制性的方面，本发明的VH结构域含有C-端延伸，如WO 12/175741和/或WO 13/024059中所述的C-端延伸，并且特别是如WO 12/175741中所述的C-端延伸。
因此，根据该方面，本发明的VH结构域是免疫球蛋白重链可变结构域(VH结构域)，其中：(i)位置112(Kabat编号)处的氨基酸残基不是丝氨酸残基，并且优选是赖氨酸(K)残基或谷氨酰胺(Q)残基；并且(ii)在其C-末端(即连接至根据Kabat编号的位置113或对应于Kabat编号的位置113的位置处的氨基酸残基)连接至另一个氨基酸序列(即“C-端延伸”)，所述另一个氨基酸序列包含1至5个(如1、2、3、4或5个，并且优选地1、2或3个，并且最优选地仅1或2个如仅1个)氨基酸残基，所述氨基酸残基各自独立地选自合适的氨基酸残基，并且优选地各自独立地选自天然存在的氨基酸，并且更优选地各自独立地选自由以下组成的组：丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)或异亮氨酸(I)(然而，如由WO 12/17574中提供的数据可见的，其他氨基酸残基如丝氨酸、脯氨酸、苏氨酸和/或赖氨酸也可以用作C-端延伸的一部分)。
特别地，根据本发明的该方面，本发明的VH结构域优选地具有的C-端序列为VTVKS(X)n(SEQ ID NO:21)或VTVQS(X)n(SEQ ID NO:22)(或是与序列VTVKS和/或VTVQS相比，在VTVKS基序或VTVQS-基序的所述位置处具有一个氨基酸差异而在位置112仍具有赖氨酸(K)或谷氨酰胺(Q)的氨基酸序列)，其中(i)VTVKS-或VTVQS-基序(或VTVKS-或VTVQS-样基序)的氨基酸残基对应于根据Kabat编号的VH结构域的位置109至113；(ii)n是1至10，优选地是1至5，如1、2、3、4或5(并且优选地是1或2，如1)；并且(iii)各个X是(优选地天然存在的)这样的氨基酸残基，其是被独立地选择的，并且优选地独立地选自由以下组成的组：丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)或异亮氨酸(I)。
更特别地，根据本发明的该方面，本发明的VH结构域可以具有SEQ ID NO 3至20的FW4序列中的一个(或与SEQ ID NO 3至20的FW4序列中的至少一个相比具有不超过三个，优选地不超过两个氨基酸差异的氨基酸序列，其中对应于Kabat编号的位置112的位置处的氨基酸残基是K或Q)作为其FW4序列，其中所述FW 4序列在其C-末端连接至C-端延伸(X)n，其中n是1至10，优选地是1至5，如1、2、3、4或5(并且优选地是1或2，如1)；并且各个X是(优选地天然存在的)这样的氨基酸残基，其是被独立地选择的，并且优选地独立地选自由以下组成的组：丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)或异亮氨酸(I)。
因此，在本发明的该方面，本发明的VH结构域可以在其C-末端具有：
a)如表3中的SEQ ID NO:23至40所给出的氨基酸序列中的一个；
表3：具有C-端延伸的FW4序列
| WGQGTQVTVKS(X)n(SEQ ID NO:23) |
| WGKGTLVTVKS(X)n(SEQ ID NO:24) |
| RGQGTRVTVKS(X)n(SEQ ID NO:25) |
| WGLGTQVTISS(X)n(SEQ ID NO:26) |
| GSQGTQVTVKS(X)n(SEQ ID NO:27) |
| LRGGTQVTVKS(X)n(SEQ ID NO:28) |
| RGQGTLVTVKS(X)n(SEQ ID NO:29) |
| RSRGIQVTVKS(X)n(SEQ ID NO:30) |
| WGKGTQVTVKS(X)n(SEQ ID NO:31) |
| WGQGTQVTVQS(X)n(SEQ ID NO:32) |
| WGKGTLVTVQS(X)n(SEQ ID NO:33) |
| RGQGTRVTVQS(X)n(SEQ ID NO:34) |
| WGLGTQVTISS(X)n(SEQ ID NO:35) |
| GSQGTQVTVQS(X)n(SEQ ID NO:36) |
| LRGGTQVTVQS(X)n(SEQ ID NO:37) |
| RGQGTLVTVQS(X)n(SEQ ID NO:38) |
| RSRGIQVTVQS(X)n(SEQ ID NO:39) |
| WGKGTQVTVQS(X)n(SEQ ID NO:40) |
其中(i)SEQ ID NO:23至40中的(X)n C-端延伸(extension)之前的FW4序列的氨基酸残基对应于VH结构域的FW4的氨基酸位置(即根据Kabat编号的位置103至113)；(ii)n是1至10，优选地是1至5，如1、2、3、4或5(并且优选地是1或2，如1)；并且(iii)各个X是(优选地天然存在的)这样的氨基酸残基，其是被独立地选择的，并且优选地独立地选自由以下组成的组：丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)或异亮氨酸(I)；或
b)与氨基酸序列SEQ ID NO 23至40中的至少一个相比具有不超过三个，优选地不超过两个氨基酸差异的氨基酸序列(其中所述氨基酸差异是在对应于VH结构域的FW4的氨基酸位置的位置处，即在根据Kabat编号的位置103至113处，其中忽略C-端延伸(X)n内的任何氨基酸差异)，其中：(i)对应于Kabat编号的位置112的位置处的氨基酸残基是K或Q；(ii)n是1至10，优选地是1至5，如1、2、3、4或5(并且优选地是1或2，如1)；并且(iii)各个X是(优选地天然存在的)这样的氨基酸残基，其是被独立地选择的，并且优选地独立地选自由以下组成的组：丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)或异亮氨酸(I)。同样，进一步对于之前的语句中提及的特征(i)至(iii)，在此种氨基酸序列中：(iv)对应于Kabat编号的位置103的位置处的氨基酸残基优选是W或R；(v)对应于Kabat编号的位置104的位置处的氨基酸残基优选是G；(vi)对应于Kabat编号的位置106的位置处的氨基酸残基优选是G；(vii)对应于Kabat编号的位置107的位置处的氨基酸残基优选是T；(viii)对应于Kabat编号的位置108的位置处的氨基酸残基优选是Q或L(并且在人源化的纳米抗体中优选是L)；(ix)对应于Kabat编号的位置109的位置处的氨基酸残基优选是V；(x)对应于Kabat编号的位置110的位置处的氨基酸残基优选是T(或备选地可以是K或Q)；(xi)对应于Kabat编号的位置111的位置处的氨基酸残基优选是V；并且对于可以存在于各位置处的可能的氨基酸残基，再次参考表2。
优选地，根据本发明的该方面，本发明的VH结构域在其C-末端具有：
a)氨基酸序列WGQGTQVTVKS(X)n(SEQ ID NO:23)或WGQGTQVTVQS(X)n(SEQ ID NO:32)，其中(ii)n是1至10，优选地是1至5，如1、2、3、4或5(并且优选地是1或2，如1)；并且(iii)各个X是(优选地天然存在的)这样的氨基酸残基，其是被独立地选择的，并且优选地独立地选自由以下组成的组：丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)或异亮氨酸(I)；或
b)与氨基酸序列WGQGTQVTVKS(X)n(SEQ ID NO:23)或WGQGTQVTVQS(X)n(SEQ IDNO:32)中的至少一个相比具有不超过三个，优选地不超过两个氨基酸差异的氨基酸序列(其中所述氨基酸差异是在对应于VH结构域的FW4的氨基酸位置的位置处，即在根据Kabat编号的位置103至113处，其中忽略C-端延伸(X)n内的任何氨基酸差异)，其中：(i)对应于Kabat编号的位置112的位置处的氨基酸残基是K或Q；(ii)n是1至10，优选地是1至5，如1、2、3、4或5(并且优选地是1或2，如1)；并且(iii)各个X是(优选地天然存在的)这样的氨基酸残基，其是被独立地选择的，并且优选地独立地选自由以下组成的组：丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)或异亮氨酸(I)。同样，对于此种氨基酸序列，如之前的段落中所述的特征(vi)至(xi)优选地同样适用。
此外，如本文中提及的，本发明的VH结构域也可以在相关位置处含有本身在本领域中已知可用于VH结构域并且特别是ISVD(并且更特别是纳米抗体)的其他氨基酸残基或取代。一些非限制性实例可以是如本文中提及的并且例如包括一个或多个作为VHH/纳米抗体的特征的“标志残基”(包括例如位置11处的亮氨酸(L))，VHH中天然存在的其他氨基酸残基(如位置14处的丙氨酸(A))，本身已知用于VHH/纳米抗体的人源化取代(如Q108L和A14P)，Harmsen建议的一个或多个突变(如V89M或V89T)和/或在Nieba所建议的位置(例如11、87或89)处的一个或多个突变；或其任何合适的组合；和/或例如T110K、T110Q或V89L突变。
当本发明的VH结构域包含C-端延伸(X)n时，根据此种延伸的一些优选的而非限制性的实例，X和n可以如下：
(a)n＝1并且X＝Ala；
(b)n＝2并且各个X＝Ala；
(c)n＝3并且各个X＝Ala；
(d)n＝2并且至少一个X＝Ala(其余的氨基酸残基X独立地选自任何天然存在的氨基酸但是优选地独立地选自Val、Leu和/或Ile)；
(e)n＝3并且至少一个X＝Ala(其余的氨基酸残基X独立地选自任何天然存在的氨基酸但是优选地独立地选自Val、Leu和/或Ile)；
(f)n＝3并且至少两个X＝Ala(其余的氨基酸残基X独立地选自任何天然存在的氨基酸但是优选地独立地选自Val、Leu和/或Ile)；
(g)n＝1并且X＝Gly；
(h)n＝2并且各个X＝Gly；
(i)n＝3并且各个X＝Gly；
(j)n＝2并且至少一个X＝Gly(其余的氨基酸残基X独立地选自任何天然存在的氨基酸但是优选地独立地选自Val、Leu和/或Ile)；
(k)n＝3并且至少一个X＝Gly(其余的氨基酸残基X独立地选自任何天然存在的氨基酸但是优选地独立地选自Val、Leu和/或Ile)；
(l)n＝3并且至少两个X＝Gly(其余的氨基酸残基X独立地选自任何天然存在的氨基酸但是优选地独立地选自Val、Leu和/或Ile)；
(m)n＝2并且各个X＝Ala或Gly；
(n)n＝3并且各个X＝Ala或Gly；
(o)n＝3并且至少一个X＝Ala或Gly(其余的氨基酸残基X独立地选自任何天然存在的氨基酸但是优选地独立地选自Val、Leu和/或Ile)；或
(p)n＝3并且至少两个X＝Ala或Gly(其余的氨基酸残基X独立地选自任何天然存在的氨基酸但是优选地独立地选自Val、Leu和/或Ile)；
方面(a)、(b)、(c)、(g)、(h)、(i)、(m)和(n)是特别优选的，n＝1或2的方面是优选的并且n＝1的方面是特别优选的。
也应当注意，优选地，任何存在于本发明的VH结构域中的C-端延伸都不含有(游离的)半胱氨酸残基(除非所述半胱氨酸残基被用于或意在用于另外的官能化，例如用于聚乙二醇化)。
此外，在WO 12/175741的第35至41页上指出的对于根据WO 12/175741使用的C-端延伸的优先选择(其也是优选的用于根据本发明的VH结构域的C-端延伸)同样适用于用于本发明的VH结构域的C-端延伸，并且这些根据WO 12/175741的优先选择也通过引用包括在本文中。
优选地，当本发明的VH结构域包含C-端延伸(X)n时，n＝1、2或3，并且各个X是Ala或Gly。更优选地，各个X是Ala，并且n＝1或2，并且优选地为1。
当本发明的VH结构域含有C-端延伸时，其通常将存在于(并且通常形成)其所存在的蛋白质、多肽、化合物、构建体或其他化学实体的C-末端。同样，此种蛋白质、多肽、化合物、构建体或其他化学实体可以含有一个或多个其他的本发明的VH结构域(即不在C-末端)；在此种情况下，所述其他的本发明的VH结构域将在位置112处含有赖氨酸(K)或谷氨酰胺(Q)(并且如本文中进一步描述的)，但是将不含有C-端延伸(代替地，其可以在其C-末端(任选地经由一个或多个合适的接头)连接至一个或多个存在于蛋白质、多肽、化合物、构建体或其他化学实体中的其他氨基酸序列、部分、结合结构域或结合单元，如具有存在于C-末端的C-端延伸的本发明的VH结构域)。
因为本发明的VH结构域(及包含其的蛋白质、多肽、化合物、构建体和其他化学实体，如本文中进一步描述的)尤其可用于(并且意在用于)药物用途(如预防、治疗和/或诊断有此需要的人受试者中的疾病和病症)，其在其框架区中与人VH结构域的框架序列优选地具有高度的序列同源性。特别地，本发明的VH结构域优选地与至少一个人种系序列(如DP-47、DP-51或DP-29)具有总体至少80％，优选地至少85％，如90％以上程度的序列同一性(如本文中进一步描述地确定，并且仅考虑框架区而不考虑CDR，并且也不考虑可能存在的位置112处的取代和任何C-端延伸)。更特别地，本发明的VH结构域优选地与以下人种系序列中的至少一个：DP-47、DP-51和/或DP-29具有总体至少80％，优选地至少85％，如90％以上程度的序列同一性(如本文中进一步所述确定，并且仅考虑框架区而不考虑CDR，并且也不考虑可能存在的位置112处的取代和任何C-端延伸)。
如本文中进一步描述的，根据本发明的一个方面，本发明的VH结构域可以是重链可变结构域，所述重链可变结构域在其所存在的蛋白质、多肽、蛋白质或构建体中，与VL结构域相互作用/相结合(或意在与其相互作用/相结合)以形成抗原结合位点，其中至少所述VH结构域具有暴露的C-端末端或区域。例如，根据本发明的该方面的VH结构域可以是这样的VH结构域，其存在和/或被用于ScFv和或双抗体中，其中其将与VL结构域结合以形成抗原结合位点。
然而，根据本发明的一个优选方面，本发明的VH结构域是(重链)免疫球蛋白单可变结构域或“ISVD”，意为可以在不与VL结构域相互作用的情况下形成功能性抗原结合位点的重链可变结构域。例如，本发明的VH结构域可以是纳米抗体(包括VHH，人源化的VHH和/或骆驼源化的VH，如骆驼源化的人VH)，(单结构域)抗体是VH结构域或来源于VH结构域，或是作为VH结构域或来源于VH结构域的dAb。本发明的VH结构域优选是纳米抗体(并且更优选是VHH结构域，人源化的VHH结构域或骆驼源化的VH结构域如骆驼源化的人VH结构域)。
在本说明书中：
-术语“纳米抗体”通常是如WO 08/020079或WO 09/138519中所定义的，并且因此在具体方面通常表示VHH，人源化的VHH或骆驼源化的VH(如骆驼源化的人VH)或通常表示序列优化的VHH(如例如针对以下进行优化：化学稳定性和/或溶解性，与已知人框架区的最大重叠和最大表达)。要注意的是，术语纳米抗体(Nanobody)或纳米抗体(Nanobodies)是埃博灵克斯股份有限公司的注册商标并且因此还可以被称为和/或)；
-术语“ISVD”(或“ISV”)，如本文中以其最广义使用的，也包括“基于ISVD的生物制剂”并且，当ISVD是纳米抗体时，包括“基于纳米抗体的生物制剂”。“基于ISVD的生物制剂”在本文中被定义为包含至少一个(如一个、两个或三个)ISVD或基本上由其组成的蛋白质、多肽或其他生物学药物。类似地，“基于纳米抗体的生物制剂”被定义为包含至少一个(如一个、两个或三个)纳米抗体或由其组成的蛋白质、多肽或其他生物学药物。关于术语“ISVD”，当使用术语“基于ISVD的生物制剂”时，应当理解的是，此种基于ISVD的生物制剂优选是基于纳米抗体的生物制剂。在本发明的语境中，“基于ISVD的生物制剂”和“基于纳米抗体的生物制剂”都可以分别例如是单价、二价(或多价)、双特异性(或多特异性)，并且双抗体决定簇(或“多抗体决定簇)的ISVD构建体或纳米抗体构建体。此外，任何基于ISVD的或基于纳米抗体的生物制剂可以例如，除了一个或多个(如一个、两个或三个)ISVD或纳米抗体外，还任选地包含一个或多个(如一个或两个)其他另外的治疗剂部分和/或一个或多个(如一个或两个)其他影响基于ISVD的或基于纳米抗体的生物制剂的药物动力学或药效学性质(如其半衰期)的部分。此种另外的治疗剂或其他部分的合适的实例是技术人员清楚的，并且例如通常可以包括任何具有治疗活性的蛋白质、多肽或其他结合结构域或结合单元，以及例如修饰如WO 09/138159的第149至152页上所述的那些。基于ISVD的生物制剂或基于纳米抗体的生物制剂优选是治疗剂或意在用作治疗剂(其包括预防和诊断)，并且对于此用途，优选地包含至少一个针对治疗相关靶标(如例如RANK-L、vWF、IgE、RSV、CXCR4、IL-23或其他白介素等)的ISVD。对于此种基于ISVD的或基于纳米抗体的生物制剂的一些具体而非限制性的实例，可参考实施例8至18并且也可例如参考埃博灵克斯股份有限公司的各种申请(如例如且不限于WO 2004/062551、WO 2006/122825，WO 2008/020079和WO 2009/068627)，并且例如(且不限于)参考申请如WO 06/038027、WO 06/059108、WO 07/063308、WO 07/063311、WO07/066016和WO 07/085814。此外，如本文中进一步描述的，如本文中使用的ISVD或纳米抗体可以是针对(人)血清蛋白质如(人)血清白蛋白，并且此种ISVD或纳米抗体还可以具有治疗用途，特别是在延长治疗剂部分和化合物的半衰期中和/或用于延长治疗剂部分和化合物的半衰期(如在延长本文中所述的基于ISV的生物制剂的半衰期中或用于延长本文中所述的基于ISV的生物制剂的半衰期)。参考例如WO 2004/041865、WO 2006/122787和WO2012/175400，其一般地描述了血清-白蛋白结合纳米抗体用于半衰期延长的用途。此外，在本说明书中，除非在本文中明确地另有提及，则本文中提及的所有术语具有WO 09/138519(或WO 09/138519中引用的现有技术)或WO 08/020079(或WO 08/020079中引用的现有技术)中给出的含义。此外，当一种方法或技术在本文中未被具体描述时，则其可以如WO 09/138519(或WO 09/138519中引用的现有技术)或WO 08/020079(或WO 08/020079中引用的现有技术)中所述进行。
此外，当被用于本说明书或权利要求中时，以下术语具有与在WO 09/138519的第62-75页上给出的相同的含义和/或在适用时可以以WO 09/138519的第62-75页中所述的方式确定：“激动剂”，“拮抗剂”，“反激动剂”，“非极性、不带电荷的氨基酸残基”，“极性、不带电荷的氨基酸残基”，“极性、带电荷的氨基酸残基”，“序列同一性”，“完全相同”和“氨基酸差异”(当涉及两个氨基酸序列的序列比较时)，“(为)基本上分离的(形式)”，“结构域”，“结合结构域”，“抗原决定簇”，“表位”，“针对”或“使针对”(抗原)，“特异性”和“半衰期”。此外，术语“介导的”和“介导”，“相互作用位点”，“对……具有特异性”，“交叉阻断”，“被交叉阻断”和“交叉阻断的”和“基本上与pH无关”是如申请人的WO 10/130832的第74-79页上所定义的(和/或可以如其所述确定)。此外，当涉及本发明的构建体、化合物、蛋白质或多肽时，术语如“单价的”，“二价的”(或“多价的”)，“双特异性的”(或“多特异性的”)，以及“双抗体决定簇”(或“多抗体决定簇”)可以具有WO 09/138.519、WO 10/130832或WO 08/020079中给出的含义。
如本文中关于本文中提及的ISVD、纳米抗体、基于ISVD的生物制剂、基于纳米抗体的生物制剂或任何其他氨基酸序列、化合物或多肽所使用的术语“半衰期”可以通常如WO08/020079的第57页上的段落o)中所述被定义并且如其中提及的，是指在体内氨基酸序列、化合物或多肽的血清浓度减少50％(例如由于通过天然机制的序列或化合物的分解和/或序列或化合物的清除或螯合)所需的时间。本发明的氨基酸序列、化合物或多肽的体内半衰期可以以任何本身已知的方式确定，如通过药物动力学分析。合适的技术对于本领域技术人员将是清楚的，并且可以例如通常如WO 08/020079的第57页上的段落o)中所述。如同样在WO 08/020079的第57页上的段落o)中提及的，半衰期可以使用参数如t1/2-α、t1/2-β和曲线下面积(AUC)表示。关于此，应当注意的是，如本文中使用的术语“半衰期”特别地是指t1/2-β或终末半衰期(其中t1/2-α和/或AUC或两者都可以不被考虑)。参考例如以下实验部分，以及标准手册，如Kenneth,A等:Chemical Stability of Pharmaceuticals:AHandbook for Pharmacists和Peters等,Pharmacokinete analysis:A PracticalApproach(1996)。也可参考"Pharmacokinetics",M Gibaldi&D Perron,Marcel Dekker出版,2nd Rev.版本(1982)。类似地，术语“半衰期增加”或“增加的半衰期”同样如WO 08/020079的第57页上的段落o)中所定义并且特别地是指t1/2-β的增加(不管t1/2-α和/或AUC或两者是否增加)。
当一个术语在本文中未被具体限定时，其具有其在本领域中的通常含义，这对于技术人员将是清楚的。参考例如标准手册，如Sambrook等,"Molecular Cloning:ALaboratory Manual"(第2版),1-3卷,Cold Spring Harbor Laboratory Press(1989)；F.Ausubel等编辑,"Current protocols in molecular biology",Green Publishing&Wiley Interscience,纽约(1987)；Lewin,“Genes II”,John Wiley&Sons,纽约,N.Y.,(1985)；Old等,“Principles of Gene Manipulation:An Introduction to GeneticEngineering”,第2版,University of California Press,Berkeley,CA(1981)；Roitt等,“Immunology”(第6版),Mosby/Elsevier,Edinburgh(2001)；Roitt等,Roitt’s EssentialImmunology,第10版Blackwell Publishing,UK(2001)；以及Janeway等.,“Immunobiology”(第6版),Garland Science Publishing/Churchill Livingstone,纽约(2005)，以及本文中引用的一般背景技术。
此外，如已经在本文中指出的，纳米抗体的氨基酸残基根据Kabat等(“Sequenceof proteins of immunological interest”,US Public Health Services,NIHBethesda,MD,Publication No.91)给出的用于VH结构域的一般编号来编号，如在Riechmann和Muyldermans的文章(J.Immunol.Methods 2000 Jun 23；240(1-2):185-195)中用于来自骆驼科的VHH结构域的；或本文中涉及的。根据该编号，纳米抗体的FR1包含位置1-30处的氨基酸残基，纳米抗体的CDR1包含位置31-35处的氨基酸残基，纳米抗体的FR2包含位置36-49处的氨基酸，纳米抗体的CDR2包含位置50-65处的氨基酸残基，纳米抗体的FR3包含位置66-94处的氨基酸残基，纳米抗体的CDR3包含位置95-102处的氨基酸残基，并且纳米抗体的FR4包含位置103-113处的氨基酸残基。[关于此，应当注意的是-如本领域中对于VH结构域和VHH结构域已知的-各CDR中氨基酸残基的总数可以变化并且可以不对应于Kabat编号所指示的氨基酸残基的总数(即，根据Kabat编号的一个或多个位置可以不占据在实际序列中，或实际序列可以含有比Kabat编号所允许的数目更多的氨基酸残基)。这意味着，通常，根据Kabat的编号可以也可以不对应于实际序列中的氨基酸残基的实际编号。然而，通常，可以这样说，根据Kabat的编号并且与CDR中氨基酸残基的数目无关，根据Kabat编号的位置1对应于FR1的开始并且反之亦然，根据Kabat编号的位置36对应于FR2的开始并且反之亦然，根据Kabat编号的位置66对应于FR3的开始并且反之亦然，并且根据Kabat编号的位置103对应于FR4的开始并且反之亦然。]。
关于VH结构域的氨基酸残基编号的备选方法(所述方法也可以类似的方式应用于来自骆驼科的VHH结构域和纳米抗体)是Chothia等(Nature 342,877-883(1989))描述的方法，所谓的“AbM定义”和所谓的“接触定义”。然而，在本说明书、方面和附图中，除非另外指出，则将遵照被Riechmann和Muyldermans应用于VHH结构域的根据Kabat的编号。
还应当注意，除非本文中明确地另有所指，则给出附图、任何序列表和实验部分/实施例仅是为了进一步说明本发明而绝不应当被解释为或视为限制本发明和/或所附的权利要求的范围。
本发明的VH结构域可以是针对任何合适的或所需的抗原或靶标，包括如本文中所述的任何药物和/或治疗相关靶标。
根据本发明的一个具体方法，本发明的VH结构域针对血清蛋白质，并且特别是人血清蛋白质。根据优选的方面，当本发明的VH结构域针对血清蛋白质时，其针对血清白蛋白，并且特别是人血清白蛋白。因此，本发明还涉及本发明的VH结构域(如本文中限定的，包括针对本发明的VH结构域所限定的优先选择)，所述VH结构域能够特异性结合血清蛋白质，特别是人血清蛋白质，并且可以优选地特异性结合血清白蛋白，并且更优选地特异性结合人血清白蛋白。同样，此种VH结构域优选是ISVD(如本文中所述的)并且更优选是纳米抗体。
例如，针对血清白蛋白的本发明的VH结构域可以是WO 2004/041865并且特别是WO2006/122787和WO 2012/175400(都是申请人/受让人的申请)中所述的针对(人)血清白蛋白的纳米抗体之一，其中位置112处的氨基酸被K或Q替代，并且其任选地设置有如本文中所述的C-端延伸(并且也可以例如含有本文中提及的其他具体氨基酸残基/取代中的一个或多个，如11L、L11V、L11K、14A、P14A、14P、A14P、89T、V89T、89L、V89L、108L、Q108L、110Q、T110Q、110K和/或T110K；虽然当位置112是K或Q时通常不需要在位置110处存在另外的取代，在所述情况中位置110优选是T)。此外，预期的是，本发明还可以被应用于其他血清-白蛋白结合重链ISVD，如WO 03/035694、WO 04/003019、WO 05/118642、WO 06/059106、WO 08/096158、WO 09/121804WO 10/108937或US 2013/0129727中所述的那些，即通过合适地引入本文中所述的取代(即S112K、S112Q和/或V89T中的至少一个，并且任选地本文中所述的其他氨基酸残基/取代中的一个或多个，如L11V)和任选地(并且，如本文中所指出的，通常优选地)添加C-端延伸(如本文中进一步描述的)。本发明的此种结合血清白蛋白的纳米抗体的一些优选的而非限制性的实例是WO 2006/122787的SEQ ID NO:52(在WO 2006/122787中被称为“Alb-1”)的氨基酸序列的人源化变体，其中位置112处的氨基酸被K或Q取代(并且其任选地设置有如本文中所述的C-端延伸)，如WO 2006/122787的SEQ ID NO:57至64中给出的Alb-1的人源化变体(在每种情况中，具有S112K或S112Q取代，并且任选地具有C-端延伸)或WO 2012/175400的SEQ ID NO 3至11中给出的Alb-1的人源化变体(同样，在每种情况中，具有S112K或S112Q取代)，其中SEQ ID NO 3、4和5可以任选地含有C-端延伸，并且SEQ IDNO 6至11已经含有C-端延伸(并且同样，此种变体可以含有本文中提及的其他具体氨基酸残基/取代中的一个或多个，如11L、L11V、L11K、14A、P14A、14P、A14P、89T、V89T、89L、V89L、108L、Q108L、110Q、T110Q、110K和/或T110K；虽然当位置112是K或Q时通常不需要在位置110处存在另外的取代，在所述情况中位置110优选是T)。此外：(i)位置41可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置41所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)脯氨酸(P)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、丙氨酸(A)或亮氨酸(L)，这些是人或骆驼中该位置处最经常出现的一些氨基酸残基，并且可以更特别地是脯氨酸(P)或丙氨酸(A)；和/或(ii)位置42可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置42所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)甘氨酸(G)或谷氨酸(E)；和/或(iii)位置87可以例如是WO 08/020079的表A-7中针对位置87所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)苏氨酸(T)或丙氨酸(A)。
因此，在另一个方面，本发明涉及本发明的纳米抗体(如本文中限定的)，所述纳米抗体可以结合(并且特别是特异性地结合)血清白蛋白(并且特别是人血清白蛋白)，其中：
-CDR1是氨基酸序列SFGMS(SEQ ID NO:41)；
-CDR2是氨基酸序列SISGSGSDTLYADSVKG(SEQ ID NO:42)；
-CDR3是氨基酸序列GGSLSR(SEQ ID NO:43)；
-位置112处的氨基酸残基是K或Q；
并且其任选地在其C-末端包含C-端延伸(X)n，其中n是1至10，优选地是1至5，如1、2、3、4或5(并且优选地是1或2，如1)；并且各个X是(优选地天然存在的)这样的氨基酸残基，其是被独立地选择的，并且优选地独立地选自由以下组成的组：丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)或异亮氨酸(I)(同样，此种C-端延伸优选是如本文中进一步描述的，并且同样此种纳米抗体也可以例如含有本文中提及的其他具体氨基酸残基/取代中的一个或多个，如11L、L11V、L11K、14A、P14A、14P、A14P、89T、V89T、89L、V89L、108L、Q108L、110Q、T110Q、110K和/或T110K；虽然当位置112是K或Q时通常不需要在位置110处存在另外的取代，在所述情况中位置110优选是T)。此外：(i)位置41可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置41所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)脯氨酸(P)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、丙氨酸(A)或亮氨酸(L)，这些是人或骆驼中该位置处最经常出现的一些氨基酸残基，并且可以更特别地是脯氨酸(P)或丙氨酸(A)；和/或(ii)位置42可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置42所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)甘氨酸(G)或谷氨酸(E)；和/或(iii)位置87可以例如是WO 08/020079的表A-7中针对位置87所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)苏氨酸(T)或丙氨酸(A)。
在特别的方面中，本发明涉及本发明的纳米抗体(如本文中限定的)，所述纳米抗体可以结合(并且特别是特异性地结合)血清白蛋白(并且特别是人血清白蛋白)，所述纳米抗体是WO 2006/122787的SEQ ID NO:52的人源化变体，其中：
-CDR1是氨基酸序列SFGMS(SEQ ID NO:41)；
-CDR2是氨基酸序列SISGSGSDTLYADSVKG(SEQ ID NO:42)；
-CDR3是氨基酸序列GGSLSR(SEQ ID NO:43)；
-位置112处的氨基酸残基是K或Q；
并且其任选地在其C-末端包含C-端延伸(X)n，其中n是1至10，优选地是1至5，如1、2、3、4或5(并且优选地是1或2，如1)；并且各个X是(优选地天然存在的)这样的氨基酸残基，其是被独立地选择的，并且优选地独立地选自由以下组成的组：丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)或异亮氨酸(I)(同样，此种C-端延伸优选是如本文中进一步描述的，并且同样此种纳米抗体也可以例如含有本文中提及的其他具体氨基酸残基/取代中的一个或多个，如11L、L11V、L11K、14A、P14A、14P、A14P、89T、V89T、89L、V89L、108L、Q108L、110Q、T110Q、110K和/或T110K；虽然当位置112是K或Q时通常不需要在位置110处存在另外的取代，在所述情况中位置110优选是T)。此外：(i)位置41可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置41所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)脯氨酸(P)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、丙氨酸(A)或亮氨酸(L)，这些是人或骆驼中该位置处最经常出现的一些氨基酸残基，并且可以更特别地是脯氨酸(P)或丙氨酸(A)；和/或(ii)位置42可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置42所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)甘氨酸(G)或谷氨酸(E)；和/或(iii)位置87可以例如是WO 08/020079的表A-7中针对位置87所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)苏氨酸(T)或丙氨酸(A)。
在特别的方面中，本发明涉及本发明的纳米抗体(如本文中限定的)，所述纳米抗体可以结合(并且特别是特异性地结合)血清白蛋白(并且特别是人血清白蛋白)，所述纳米抗体与Alb-1(WO 2006/122787的SEQ ID NO:52)、Alb-8(本文中的SEQ ID NO:46)和/或Alb-23(本文中的SEQ ID NO:61)中的至少一个具有至少80％、优选地至少85％、更优选地至少90％(如至少95％)的序列同一性(考虑框架序列和CDR两者，但是不考虑任何C-端延伸)，其中位置112处的氨基酸残基是K或Q，并且其任选地在其C-末端包含C-端延伸(X)n，其中n是1至10，优选地是1至5，如1、2、3、4或5(并且优选地是1或2，如1)；并且各个X是(优选地天然存在的)这样的氨基酸残基，其是被独立地选择的，并且优选地独立地选自由以下组成的组：丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)或异亮氨酸(I)(同样，此种C-端延伸优选是如本文中进一步描述的，并且同样此种纳米抗体也可以例如含有本文中提及的其他具体氨基酸残基/取代中的一个或多个，如11L、L11V、L11K、14A、P14A、14P、A14P、89T、V89T、89L、V89L、108L、Q108L、110Q、T110Q、110K和/或T110K；虽然当位置112是K或Q时通常不需要在位置110处存在另外的取代，在所述情况中位置110优选是T)。此外：(i)位置41可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置41所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)脯氨酸(P)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、丙氨酸(A)或亮氨酸(L)，这些是人或骆驼中该位置处最经常出现的一些氨基酸残基，并且可以更特别地是脯氨酸(P)或丙氨酸(A)；和/或(ii)位置42可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置42所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)甘氨酸(G)或谷氨酸(E)；和/或(iii)位置87可以例如是WO 08/020079的表A-7中针对位置87所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)苏氨酸(T)或丙氨酸(A)。
此种本发明的纳米抗体再一次优选是Alb-1的人源化变体(但是具有S112K或S112Q取代)，并且更优选地具有分别在SEQ ID NO 41至43中给出的CDR1、CDR2和/或CDR3中的至少一个、特别地任意两个、并且更特别地全部三个。
根据一个具体方面，任何本发明的结合血清白蛋白的纳米抗体也可以具有如WO12/175400中所述的Alb-23及其变体的特征性氨基酸残基(即位置44和45上的氨基酸基序GP，位置74至76上的氨基酸基序SKN，并且优选地位置16处的G和同样任选地位置83处的R)。
针对人血清白蛋白的本发明的纳米抗体的一些优选的而非限制性的实例在表4和实施例20中给出。
在另一个方面，本发明涉及VH结构域，并且特别是ISVD，并且更特别是纳米抗体，其具有：
a)为以下FW4序列之一的FW 4序列：
表5：FW4序列
| SSQGTLVTVKS(SEQ ID NO:99) |
| SSQGTLVTVQS(SEQ ID NO:100) |
| SSQGTLVKVSS(SEQ ID NO:101) |
| SSQGTLVQVSS(SEQ ID NO:102) |
| SSQGTLVTVKS(X)n(SEQ ID NO:103) |
| SSQGTLVTVQS(X)n(SEQ ID NO:104) |
| SSQGTLVKVSS(X)n(SEQ ID NO:105) |
| SSQGTLVQVSS(X)n(SEQ ID NO:106) |
其中(i)SEQ ID NO:23至40中的(X)n C-端延伸之前的FW4序列的氨基酸残基对应于VH结构域的FW4的氨基酸位置(即根据Kabat编号的位置103至113)；(ii)n是1至10，优选地是1至5，如1、2、3、4或5(并且优选地是1或2，如1)；并且(iii)各个X是(优选地天然存在的)这样的氨基酸残基，其是被独立地选择的，并且优选地独立地选自由以下组成的组：丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)或异亮氨酸(I)；或
c)与氨基酸序列SEQ ID NO:99至106中的至少一个具有不超过三个、优选地不超过两个氨基酸差异(其中所述氨基酸差异是在对应于VH结构域的FW4的氨基酸位置的位置处，即在根据Kabat编号的位置103至113处，忽略C-端延伸(X)n内的任何氨基酸差异)的氨基酸序列，其中：(i)当对应于Kabat编号的位置112的位置处的氨基酸残基是K或Q时，所述氨基酸差异是在不同于112的另一个氨基酸位置处，并且VH结构域的位置89处的氨基酸残基优选地选自V、T或L(并且最优选是V)；(i)当对应于Kabat编号的位置110的位置处的氨基酸残基是K或Q时，所述氨基酸差异是在不同于110的另一个氨基酸位置处，并且位置89是VH结构域是L；(iii)n是1至10，优选地是1至5，如1、2、3、4或5(并且优选地是1或2，如1)；并且(iv)各个X是(优选地天然存在的)这样的氨基酸残基，其是被独立地选择的，并且优选地独立地选自由以下组成的组：丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)或异亮氨酸(I)。同样，对于如之前的语句中提及的特征(i)至(iv)，进一步，在此种氨基酸序列中：(v)对应于Kabat编号的位置103的位置处的氨基酸残基优选是S；(vi)对应于Kabat编号的位置104的位置处的氨基酸残基优选是S；(vii)对应于Kabat编号的位置106的位置处的氨基酸残基优选是G；(viii)对应于Kabat编号的位置107的位置处的氨基酸残基优选是T；(ix)对应于Kabat编号的位置108的位置处的氨基酸残基优选是Q或L(并且在人源化的纳米抗体中优选是L)；(ix)对应于Kabat编号的位置109的位置处的氨基酸残基优选是V；并且对于可以存在于各位置处的可能的氨基酸残基，再次参考表2。
同样，在本发明的此种VH结构域中：(a)位置11处的氨基酸残基是L、V或K中的一个(并且更优选是V)；位置14处的氨基酸残基优选是A或P中的一个；位置41处的氨基酸残基优选是A或P中的一个。此外，此种本发明的VH结构域优选是ISVD，并且更优选是纳米抗体；并且可以同样是针对人血清白蛋白(在该情况中，其优选地分别具有分别对应于SEQ ID NO41、42和43的CDR1、CDR2和CDR3)。此外，当所述VH结构域是针对人血清白蛋白的ISVD或纳米抗体时，其可以进一步是如本文中对于针对人血清白蛋白的本发明的纳米抗体所述的。
针对血清白蛋白的本发明的VH结构域(并且特别是结合血清-白蛋白的本发明的ISVD)可以用于增加治疗活性化合物、(多)肽、蛋白质、结合结构域、结合单元或其他治疗活性实体或部分的半衰期，基本上以WO 2004/041865、WO 2006/122787和/或WO 2012/175400中对于所述文献中公开的血清白蛋白-结合纳米抗体的使用所描述的方式(即通过合适地将结合血清白蛋白的ISVD连接至蛋白质、多肽、化合物或其他实体，任选地经由合适的接头。例如，WO 12/175400第12和13页给出了所述方式的一些实例，其中可以构建合适的融合蛋白)。
在另一个方面，本发明涉及免疫球蛋白重链可变结构域(VH结构域)，其中位置89(Kabat编号)处的氨基酸残基是苏氨酸(T)并且位置112处的氨基酸残基是丝氨酸(S)、赖氨酸(K)残基或谷氨酰胺(Q)残基。此种位置89处为T的免疫球蛋白重链可变结构域(VH结构域)也被包括在如本文中以其最广义使用的术语“本发明的VH结构域”中并且可以进一步是如本文中对于在位置112处包含K或Q的本发明的VH结构域所述的。因此，此种免疫球蛋白重链可变结构域(VH结构域)可以具有如本文中进一步描述的C-端延伸(包括指出的对于此种C-端延伸的优先选择)；可以是ISVD并且特别地是纳米抗体，如本文中进一步描述的。
同样，如果此种本发明的VH结构域具有暴露的C-端区域(例如，因为其形成蛋白质、多肽或其存在于其中的其他构建体的C-末端)，其优选地包含C-端延伸(参见下表C中所示的数据)。
此外，位置89是T的本发明的纳米抗体(即具有或不具有C-端延伸)在位置11处含有的氨基酸优选地选自：L(VHH中最常出现的氨基酸残基)、E、K、M、S、V、W或Y；更优选地选自L、E、K、V或Y，并且甚至更优选地选自L、K或V(其中V是最优选的)。例如，其可以含有L11K或L11V取代，以及例如P14A或A14P取代，Q108L取代，和/或T110K，T110Q，S112K和/或S112Q取代(虽然通常，当位置89是T时，将不需要通常不需要在位置110和/或112处存在一个或两个另外的取代，在该情况中位置110优选是T并且位置112优选是S)。
特别地，根据该特别的方面的本发明的免疫球蛋白重链可变结构域(VH结构域)具有在位置89(Kabat)处的T和C-末端，所述C-末端是以下中的一个：VTVSS(SEQ ID NO:77)，VTVSS(X)n(SEQ ID NO:78)，VTVKS(SEQ ID NO:1)，VTVKS(X)n(SEQ ID NO:21)，VTVQS(SEQID NO:2)，VTVQS(X)n(SEQ ID NO:22)，VKVSS(SEQ ID NO:95)，VKVSS(X)n(SEQ ID NO:97)，VQVSS(SEQ ID NO:96)，VQVSS(X)n(SEQ ID NO:98)，VZVZS(SEQ ID NO:107，其中各氨基酸残基Z独立地是K或Q)或VZVZSX(n)(SEQ ID NO:108，其中各氨基酸残基Z独立地是K或Q)(并且特别是以下中的一个：VTVKS(SEQ ID NO:1)，VTVQS(SEQ ID NO:2)，VTVSS(SEQ ID NO:77)，VTVKS(X)n(SEQ ID NO:21)，VTVQS(X)n(SEQ ID NO:22)或VTVSS(X)n(SEQ ID NO:78)，并且更特别地是VTVSS(SEQ ID NO:77)或VTVSS(X)n(SEQ ID NO:78))，其中n和X是如本文中对于位置112是Q或K的本发明的VH结构域进一步描述的(并且其中任何C-端延伸优选是如本文中对于位置112是Q或K的本发明的VH结构域进一步描述的)。此外，与位置112是Q或K的本发明的VH结构域一样，当此种位置89处为T的VH结构域是纳米抗体时，位置11优选是亮氨酸(L)，位置14可以特别地是丙氨酸(A)或脯氨酸(P)并且位置108可以特别地是Q或L(并且在人源化的纳米抗体中优选是L)；并且此种在位置89处为T的纳米抗体可以含有一个或多个纳米抗体标志残基和/或可以被合适地人源化。此外：(i)位置41可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置41所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)脯氨酸(P)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、丙氨酸(A)或亮氨酸(L)，这些是人或骆驼中该位置处最经常出现的一些氨基酸残基，并且可以更特别地是脯氨酸(P)或丙氨酸(A)；和/或(ii)位置42可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置42所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)甘氨酸(G)或谷氨酸(E)；和/或(iii)位置87可以例如是WO 08/020079的表A-7中针对位置87所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)苏氨酸(T)或丙氨酸(A)。
此种位置89处为T的本发明的VH结构域同样还可以是如本文中进一步描述的血清白蛋白纳米抗体。例如，此种结合血清白蛋白的纳米抗体可以是序列SEQ ID NO:46至75中的一个(但是在位置89处为T)；或与Alb-1(WO 2006/122787的SEQ ID NO:52)、Alb-8(本文中的SEQ ID NO:46)和/或Alb-23(本文中的SEQ ID NO:61)中的至少一个具有至少80％、优选地至少85％、更优选地至少90％(如至少95％)的序列同一性(考虑框架序列和CDR两者，但是不考虑任何C-端延伸)的另一种位置89处为T的结合血清白蛋白的纳米抗体。此种位置89处为T的纳米抗体的其他一些实例在SEQ ID NO:78至91(这些是位置89处为T并且位置112处为S的Alb-1/Alb-8或Alb-23的进一步的变体)中给出。
更通常地，根据本发明的该方面的针对血清白蛋白的VH结构域可以是WO 2004/041865并且特别是WO 2006/122787和WO 2012/175400(都是申请人/受让人的申请)中所述的针对(人)血清白蛋白的纳米抗体中的一种，其中位置89处的氨基酸是苏氨酸(T)，并且其任选地设置有如本文中所述的C-端延伸(并且也可以例如合适地含有本文中提及的其他具体氨基酸残基/取代中的一个或多个，如11L、L11V、L11K、14A、P14A、14P、A14P、108L、Q108L、110K、T110K、110Q、T110Q、S112K和/或S112Q；虽然通常，当T存在于位置89处时，将不需要通常不需要在位置110和/或112处存在另外的取代，在该情况中位置110优选是T并且位置112优选是S)。此外：(i)位置41可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置41所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)脯氨酸(P)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、丙氨酸(A)或亮氨酸(L)，这些是人或骆驼中该位置处最经常出现的一些氨基酸残基，并且可以更特别地是脯氨酸(P)或丙氨酸(A)；和/或(ii)位置42可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置42所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)甘氨酸(G)或谷氨酸(E)；和/或(iii)位置87可以例如是WO 08/020079的表A-7中针对位置87所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)苏氨酸(T)或丙氨酸(A)。此外，预期的是，本发明也可以应用其他结合血清白蛋白的重链ISVD，如WO 03/035694、WO 04/003019、WO 05/118642、WO 06/059106、WO 08/096158、WO 09/121804、WO 10/108937或US 2013/0129727中所述的那些，即通过合适地在位置89处引入苏氨酸(T)，并且任选地引入一个或多个本文中所述的其他氨基酸残基/取代)和任选地(并且通常是优选的，如本文中所述)添加C-端延伸(如本文中进一步描述的)。
此种本发明的结合血清白蛋白的纳米抗体的一些优选的而非限制性的实例是WO2006/122787的SEQ ID NO:52(在WO 2006/122787中被称为“Alb-1”)的氨基酸序列的人源化变体，其中位置89处的氨基酸是T(并且其任选地设置有如本文中所述的C-端延伸)，如在WO 2006/122787的SEQ ID NO:57至64中给出的Alb-1的人源化变体(在每种情况中，具有V89T取代，并且任选地具有C-端延伸)或在WO 2012/175400的SEQ ID NO 3至11中给出的Alb-1的人源化变体(同样，在每种情况中，具有V89T取代)，其中SEQ ID NO 3、4和5可以任选地含有C-端延伸，并且SEQ ID NO 6至11已经含有C-端延伸(并且同样，此种变体可以含有本文中提及的其他具体氨基酸残基/取代中的一个或多个，如11L、L11V、L11K、14A、P14A、14P、A14P、108L、Q108L、110K、T110K、110Q、T110Q、112Q、112K、S112Q和/或S112K；虽然通常，当位置89是T时，将不需要通常不需要在位置110和/或112处存在一个或两个另外的取代，在该情况中位置110优选是T并且位置112优选是S)。此外：(i)位置41可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置41所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)脯氨酸(P)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、丙氨酸(A)或亮氨酸(L)，这些是人或骆驼中该位置处最经常出现的一些氨基酸残基，并且可以更特别地是脯氨酸(P)或丙氨酸(A)；和/或(ii)位置42可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置42所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)甘氨酸(G)或谷氨酸(E)；和/或(iii)位置87可以例如是WO 08/020079的表A-7中针对位置87所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)苏氨酸(T)或丙氨酸(A)。
因此，在另一个方面，本发明涉及本发明的纳米抗体(如本文中限定的)，所述纳米抗体可以结合(并且特别是特异性地结合)血清白蛋白(并且特别是人血清白蛋白)，其中：
-CDR1是氨基酸序列SFGMS(SEQ ID NO:41)；
-CDR2是氨基酸序列SISGSGSDTLYADSVKG(SEQ ID NO:42)；
-CDR3是氨基酸序列GGSLSR(SEQ ID NO:43)；
-位置89处的氨基酸残基是T；
并且其任选地在其C-末端包含C-端延伸(X)n，其中n是1至10，优选地是1至5，如1、2、3、4或5(并且优选地是1或2，如1)；并且各个X是(优选地天然存在的)这样的氨基酸残基，其是被独立地选择的，并且优选地独立地选自由以下组成的组：丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)或异亮氨酸(I)(同样，此种C-端延伸优选是如本文中进一步描述的，并且同样此种纳米抗体也可以例如含有本文中提及的其他具体氨基酸残基/取代中的一个或多个，如11L、L11V、L11K、14A、P14A、14P、A14P、108L、Q108L、110K、T110K、110Q、T110Q、112Q、112K、S112Q和/或S112K；虽然通常，当位置89是T时，将不需要通常不需要在位置110和/或112处存在一个或两个另外的取代，在该情况中位置110优选是T并且位置112优选是S)。此外：(i)位置41可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置41所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)脯氨酸(P)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、丙氨酸(A)或亮氨酸(L)，这些是人或骆驼中该位置处最经常出现的一些氨基酸残基，并且可以更特别地是脯氨酸(P)或丙氨酸(A)；和/或(ii)位置42可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置42所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)甘氨酸(G)或谷氨酸(E)；和/或(iii)位置87可以例如是WO08/020079的表A-7中针对位置87所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)苏氨酸(T)或丙氨酸(A)。
在特别的方面中，本发明涉及本发明的纳米抗体(如本文中限定的)，所述纳米抗体可以结合(并且特别是特异性地结合)血清白蛋白(并且特别是人血清白蛋白)，所述纳米抗体是WO 2006/122787的SEQ ID NO:52的人源化变体，其中：
-CDR1是氨基酸序列SFGMS(SEQ ID NO:41)；
-CDR2是氨基酸序列SISGSGSDTLYADSVKG(SEQ ID NO:42)；
-CDR3是氨基酸序列GGSLSR(SEQ ID NO:43)；
-位置89处的氨基酸残基是T；
并且其任选地在其C-末端包含C-端延伸(X)n，其中n是1至10，优选地是1至5，如1、2、3、4或5(并且优选地是1或2，如1)；并且各个X是(优选地天然存在的)这样的氨基酸残基，其是被独立地选择的，并且优选地独立地选自由以下组成的组：丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)或异亮氨酸(I)(同样，此种C-端延伸优选是如本文中进一步描述的，并且同样此种纳米抗体也可以例如含有本文中提及的其他具体氨基酸残基/取代中的一个或多个，如11L、L11V、L11K、14A、P14A、14P、A14P、108L、Q108L、110K、T110K、110Q、T110Q、112Q、112K、S112Q和/或S112K；虽然通常，当位置89是T时，将不需要通常不需要在位置110和/或112处存在一个或两个另外的取代，在该情况中位置110优选是T并且位置112优选是S)。此外：(i)位置41可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置41所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)脯氨酸(P)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、丙氨酸(A)或亮氨酸(L)，这些是人或骆驼中该位置处最经常出现的一些氨基酸残基，并且可以更特别地是脯氨酸(P)或丙氨酸(A)；和/或(ii)位置42可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置42所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)甘氨酸(G)或谷氨酸(E)；和/或(iii)位置87可以例如是WO08/020079的表A-7中针对位置87所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)苏氨酸(T)或丙氨酸(A)。
在特别的方面中，本发明涉及本发明的纳米抗体(如本文中限定的)，所述纳米抗体可以结合(并且特别是特异性地结合)血清白蛋白(并且特别是人血清白蛋白)，所述纳米抗体与Alb-1(WO 2006/122787的SEQ ID NO:52)、Alb-8(本文中的SEQ ID NO:46)和/或Alb-23(本文中的SEQ ID NO:61)中的至少一个具有至少80％、优选地至少85％、更优选地至少90％(如至少95％)的序列同一性(考虑框架序列和CDR两者，但是不考虑任何C-端延伸)，其中位置89处的氨基酸残基是T，并且其任选地在其C-末端包含C-端延伸(X)n，其中n是1至10，优选地是1至5，如1、2、3、4或5(并且优选地是1或2，如1)；并且各个X是(优选地天然存在的)这样的氨基酸残基，其是被独立地选择的，并且优选地独立地选自由以下组成的组：丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)或异亮氨酸(I)(同样，此种C-端延伸优选是如本文中进一步描述的，并且同样此种纳米抗体也可以例如含有本文中提及的其他具体氨基酸残基/取代中的一个或多个，如11L、L11V、L11K、14A、P14A、14P、A14P、108L、Q108L、110K、T110K、110Q、T110Q、112Q、112K、S112Q和/或S112K；虽然通常，当位置89是T时，将不需要通常不需要在位置110和/或112处存在一个或两个另外的取代，在该情况中位置110优选是T并且位置112优选是S)。此外：(i)位置41可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置41所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)脯氨酸(P)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、丙氨酸(A)或亮氨酸(L)，这些是人或骆驼中该位置处最经常出现的一些氨基酸残基，并且可以更特别地是脯氨酸(P)或丙氨酸(A)；和/或(ii)位置42可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置42所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)甘氨酸(G)或谷氨酸(E)；和/或(iii)位置87可以例如是WO 08/020079的表A-7中针对位置87所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)苏氨酸(T)或丙氨酸(A)。
根据一个具体方面，任何此种位置89处为T的本发明的结合血清白蛋白的纳米抗体也可以具有如WO 12/175400中所述的Alb-23及其变体的特征性氨基酸残基(即位置44和45上的氨基酸基序GP，位置74至76上的氨基酸基序SKN，并且优选地位置16处的G和同样任选地位置83处的R)。
与位置112处含有Q或K的本发明的VH结构域一样，位置89处含有T(任选地与位置112处的Q或K一起和/或与C-端延伸一起)的本发明的VH结构域显示被预先存在的抗体结合减少，并且特别是能够在C-端延伸存在下结合VH结构域和纳米抗体的预先存在的抗体(如例如在获自SLE患者的样品中发现的)的结合减少。
在另一方面，本发明涉及免疫球蛋白重链可变结构域(VH结构域)，其中位置89(Kabat编号)处的氨基酸残基是亮氨酸(L)并且位置110处的氨基酸残基是赖氨酸(K)残基或谷氨酰胺(Q)残基。此种在位置89处为L并且在位置110处为K或Q的免疫球蛋白重链可变结构域(VH结构域)也被包括在如本文中以其最广义使用的术语“本发明的VH结构域”中并且可以进一步是如本文中对于其他本发明的VH结构域所述的(即在位置112处包含K或Q或在位置89处包含T的那些)。因此，此种免疫球蛋白重链可变结构域(VH结构域)可以具有如本文中进一步描述的C-端延伸(包括指出的对于此种C-端延伸的优先选择)；可以是ISVD并且特别地是纳米抗体，如本文中进一步描述的。
同样，如果此种本发明的VH结构域具有暴露的C-端区域(例如，因为其形成有其存在的蛋白质、多肽或其他构建体的C-末端)，其优选地包含C-端延伸(参见下表C中所示的数据)。
此外，位置89是L并且位置110处是K或Q(即具有或不具有C-端延伸)的本发明的纳米抗体在位置11处含有的氨基酸优选地选自L(VHH中最常出现的氨基酸残基)、E、K、M、S、V、W或Y；更优选地选自L、E、K、V或Y，并且甚至更优选地选自L、K或V(其中V是最优选的)。例如，其可以含有L11K或L11V取代，以及例如P14A或A14P取代和/或Q108L取代(其也可以合适地含有S112K和/或S112Q突变，虽然通常，当位置89是L并且位置110是K或Q时，将不需要通常不需要在位置112处存在另外的取代，在该情况中位置112优选是S)。此外：(i)位置41可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置41所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)脯氨酸(P)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、丙氨酸(A)或亮氨酸(L)，这些是人或骆驼中该位置处最经常出现的一些氨基酸残基，并且可以更特别地是脯氨酸(P)或丙氨酸(A)；和/或(ii)位置42可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置42所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)甘氨酸(G)或谷氨酸(E)；和/或(iii)位置87可以例如是WO 08/020079的表A-7中针对位置87所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)苏氨酸(T)或丙氨酸(A)。
此外，在一个方面，在89是L并且110是K或Q的此种本发明的VH结构域中，位置112处的氨基酸残基是丝氨酸(S)。更特别地，此种VH结构域的C-末端可以是(并且优选是)VKVSS(SEQ ID NO:95)，VQVSS(SEQ ID NO:96)，VKVSS(X)n(SEQ ID NO:97)或VQVSS(X)n(SEQID NO:98)中的一个，其中n和X是如本文中对于位置112是Q或K的本发明的VH结构域进一步描述的(并且其中任何C-端延伸优选是如本文中对于位置112是Q或K的本发明的VH结构域进一步描述的)。此外，与位置112是Q或K或位置89是T的本发明的VH结构域一样，当位置89为L并且位置110为K或Q的此种VH结构域是纳米抗体时，位置11优选是亮氨酸(L)，位置14可以特别地是丙氨酸(A)或脯氨酸(P)并且位置108可以特别地是Q或L(并且在人源化的纳米抗体中优选是L)；并且位置89为L并且位置110为K或Q的此种纳米抗体可以含有一个或多个纳米抗体标志残基和/或可以被合适地人源化。此外：(i)位置41可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置41所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)脯氨酸(P)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、丙氨酸(A)或亮氨酸(L)，这些是人或骆驼中该位置处最经常出现的一些氨基酸残基，并且可以更特别地是脯氨酸(P)或丙氨酸(A)；和/或(ii)位置42可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置42所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)甘氨酸(G)或谷氨酸(E)；和/或(iii)位置87可以例如是WO 08/020079的表A-7中针对位置87所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)苏氨酸(T)或丙氨酸(A)。
位置89处为L并且位置110处为K或Q的此种本发明的VH结构域可以同样也是血清白蛋白纳米抗体，如本文中进一步描述的。例如，此种结合血清白蛋白的纳米抗体可以是序列SEQ ID NO:46至75中的一个，但其中位置89处为L并且位置110处为K或Q；或与Alb-1(WO2006/122787的SEQ ID NO:52)、Alb-8(本文中的SEQ ID NO:46)和/或Alb-23(本文中的SEQID NO:61)中的至少一个具有至少80％、优选地至少85％、更优选地至少90％(如至少95％)的序列同一性(考虑框架序列和CDR两者，但是不考虑任何C-端延伸)的另一种在位置89处为L并且在位置110处为K或Q的结合血清白蛋白的纳米抗体。
更通常地，根据本发明的该方面的针对血清白蛋白的VH结构域可以是WO 2004/041865，并且特别是WO 2006/122787和WO 2012/175400(都是申请人/受让人的申请)中所述的针对(人)血清白蛋白的纳米抗体中的一个，其中位置89处的氨基酸是亮氨酸(L)并且位置110处的氨基酸残基是K或Q，并且其任选地设置有如本文中所述的C-端延伸(并且也可以例如含有本文中提及的其他具体氨基酸残基/取代中的一个或多个，如11L、L11V、L11K、14A、P14A、14P、A14P、108L和/或Q108L；以及S112K或S112Q，虽然通常，当位置89是L并且位置110是K或Q时，将不需要通常不需要在位置112处存在另外的取代，在该情况中位置112优选是S)。此外，预期的是本发明也可以应用其他结合血清白蛋白的重链ISVD，如WO 03/035694、WO 04/003019、WO 05/118642、WO 06/059106、WO 08/096158、WO 09/121804WO 10/108937或US 2013/0129727中所述的那些，即通过合适地引入位置89处的亮氨酸(L)和位置110处的K或Q，并且任选地引入一个或多个本文中所述的其他氨基酸残基/取代)并且任选地(并且通常是优选的，如本文中所述)添加C-端延伸(如本文中进一步描述的)。在这些针对血清白蛋白的VH结构域中，位置112处的氨基酸优选是S，并且所述VH结构域优选地具有C-末端，所述C-末端是SEQ ID NO:95至98之一。此外：(i)位置41可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置41所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)脯氨酸(P)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、丙氨酸(A)或亮氨酸(L)，这些是人或骆驼中该位置处最经常出现的一些氨基酸残基，并且可以更特别地是脯氨酸(P)或丙氨酸(A)；和/或(ii)位置42可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置42所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)甘氨酸(G)或谷氨酸(E)；和/或(iii)位置87可以例如是WO 08/020079的表A-7中针对位置87所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)苏氨酸(T)或丙氨酸(A)。
此种结合血清白蛋白的本发明的纳米抗体的一些优选的而非限制性的实例是WO2006/122787的SEQ ID NO:52(在WO 2006/122787中被称为“Alb-1”)的氨基酸序列的人源化变体，其中位置89处的氨基酸是L并且位置110处的氨基酸是K或Q(并且其任选地设置有如本文中所述的C-端延伸)，如WO 2006/122787的SEQ ID NO:57至64中给出的Alb-1的人源化变体(在每种情况中，具有V89L取代和T110Q或T110K取代，并且任选地具有C-端延伸)或在WO 2012/175400的SEQ ID NO 3至11中给出的Alb-1的人源化变体(同样，在每种情况中，具有V89L取代和T110Q或T110K取代)，其中SEQ ID NO 3、4和5可以任选地含有C-端延伸，并且SEQ ID NO 6至11已经含有C-端延伸(并且同样，此种变体可以含有本文中提及的其他具体氨基酸残基/取代中的一个或多个，如11L、L11V、L11K、14A、P14A、14P、A14P、108L和/或Q108L；以及S112K或S112Q，虽然通常，当位置89是L并且位置110是K或Q时，将不需要通常不需要在位置112处存在另外的取代，在该情况中位置112优选是S)。在这些针对血清白蛋白的VH结构域中，位置112处的氨基酸优选是S，并且所述VH结构域优选地具有C-末端，所述C-末端是SEQ ID NO:95至98之一。此外：(i)位置41可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置41所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)脯氨酸(P)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、丙氨酸(A)或亮氨酸(L)，这些是人或骆驼中该位置处最经常出现的一些氨基酸残基，并且可以更特别地是脯氨酸(P)或丙氨酸(A)；和/或(ii)位置42可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置42所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)甘氨酸(G)或谷氨酸(E)；和/或(iii)位置87可以例如是WO 08/020079的表A-7中针对位置87所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)苏氨酸(T)或丙氨酸(A)。
因此，在另一个方面，本发明涉及本发明的纳米抗体(如本文中限定的)，所述纳米抗体可以结合(并且特别是特异性地结合)血清白蛋白(并且特别是人血清白蛋白)，其中：
-CDR1是氨基酸序列SFGMS(SEQ ID NO:41)；
-CDR2是氨基酸序列SISGSGSDTLYADSVKG(SEQ ID NO:42)；
-CDR3是氨基酸序列GGSLSR(SEQ ID NO:43)；
-位置89处的氨基酸残基是L；
-位置110处的氨基酸残基是K或Q；
并且其任选地在其C-末端包含C-端延伸(X)n，其中n是1至10，优选地是1至5，如1、2、3、4或5(并且优选地是1或2，如1)；并且各个X是(优选地天然存在的)这样的氨基酸残基，其是被独立地选择的，并且优选地独立地选自由以下组成的组：丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)或异亮氨酸(I)(同样，此种C-端延伸优选是如本文中进一步描述的，并且同样此种纳米抗体也可以例如含有本文中提及的其他具体氨基酸残基/取代中的一个或多个，如11L、L11V、L11K、14A、P14A、14P、A14P、108L和/或Q108L；以及S112K或S112Q，虽然通常，当位置89是L并且位置110是K或Q时，将不需要通常不需要在位置112处存在另外的取代，在该情况中位置112优选是S)。在这些针对血清白蛋白的VH结构域中，位置112处的氨基酸优选是S，并且所述VH结构域优选地具有C-末端，所述C-末端是SEQ ID NO:95至98之一。此外：(i)位置41可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置41所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)脯氨酸(P)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、丙氨酸(A)或亮氨酸(L)，这些是人或骆驼中该位置处最经常出现的一些氨基酸残基，并且可以更特别地是脯氨酸(P)或丙氨酸(A)；和/或(ii)位置42可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置42所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)甘氨酸(G)或谷氨酸(E)；和/或(iii)位置87可以例如是WO08/020079的表A-7中针对位置87所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)苏氨酸(T)或丙氨酸(A)。
在特别的方面中，本发明涉及本发明的纳米抗体(如本文中限定的)，所述纳米抗体可以结合(并且特别是特异性地结合)血清白蛋白(并且特别是人血清白蛋白)，所述纳米抗体是WO 2006/122787的SEQ ID NO:52的人源化变体，其中：
-CDR1是氨基酸序列SFGMS(SEQ ID NO:41)；
-CDR2是氨基酸序列SISGSGSDTLYADSVKG(SEQ ID NO:42)；
-CDR3是氨基酸序列GGSLSR(SEQ ID NO:43)；
-位置89处的氨基酸残基是L；
-位置110处的氨基酸残基是K或Q；
并且其任选地在其C-末端包含C-端延伸(X)n，其中n是1至10，优选地是1至5，如1、2、3、4或5(并且优选地是1或2，如1)；并且各个X是(优选地天然存在的)这样的氨基酸残基，其是被独立地选择的，并且优选地独立地选自由以下组成的组：丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)或异亮氨酸(I)(同样，此种C-端延伸优选是如本文中进一步描述的，并且同样此种纳米抗体也可以例如含有本文中提及的其他具体氨基酸残基/取代中的一个或多个，如11L、L11V、L11K、14A、P14A、14P、A14P、108L和/或Q108L；以及S112K或S112Q，虽然通常，当位置89是L并且位置110是K或Q时，将不需要通常不需要在位置112处存在另外的取代，在该情况中位置112优选是S))。在这些针对血清白蛋白的VH结构域中，位置112处的氨基酸优选是S，并且所述VH结构域优选地具有C-末端，所述C-末端是SEQ ID NO:95至98之一。此外：(i)位置41可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置41所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)脯氨酸(P)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、丙氨酸(A)或亮氨酸(L)，这些是人或骆驼中该位置处最经常出现的一些氨基酸残基，并且可以更特别地是脯氨酸(P)或丙氨酸(A)；和/或(ii)位置42可以例如是WO08/020079的表A-6中针对位置42所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)甘氨酸(G)或谷氨酸(E)；和/或(iii)位置87可以例如是WO08/020079的表A-7中针对位置87所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)苏氨酸(T)或丙氨酸(A)。
在特别的方面中，本发明涉及本发明的纳米抗体(如本文中限定的)，所述纳米抗体可以结合(并且特别是特异性地结合)血清白蛋白(并且特别是人血清白蛋白)，所述纳米抗体与Alb-1(WO 2006/122787的SEQ ID NO:52)、Alb-8(本文中的SEQ ID NO:46)和/或Alb-23(本文中的SEQ ID NO:61)中的至少一个具有至少80％、优选地至少85％、更优选地至少90％(如至少95％)的序列同一性(考虑框架序列和CDR两者，但是不考虑任何C-端延伸)，其中位置89处的氨基酸残基是L并且位置110处的氨基酸残基是K或Q，并且其任选地在其C-末端包含C-端延伸(X)n，其中n是1至10，优选地是1至5，如1、2、3、4或5(并且优选地是1或2，如1)；并且各个X是(优选地天然存在的)这样的氨基酸残基，其是被独立地选择的，并且优选地独立地选自由以下组成的组：丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)或异亮氨酸(I)(同样，此种C-端延伸优选是如本文中进一步描述的，并且同样此种纳米抗体也可以例如含有本文中提及的其他具体氨基酸残基/取代中的一个或多个，如11L、L11V、L11K、14A、P14A、14P、A14P、108L和/或Q108L；以及S112K或S112Q，虽然通常，当位置89是L并且位置110是K或Q时，将不需要通常不需要在位置112处存在另外的取代，在该情况中位置112优选是S)。此种本发明的纳米抗体同样优选是Alb-1的人源化变体(但是具有V89L和T110K或T110Q取代)，并且更优选地具有分别在SEQ ID NO 41至43中给出的CDR1、CDR2和/或CDR3中的至少一个、特别地任意两个、并且更特别地全部三个。在这些针对血清白蛋白的VH结构域中，位置112处的氨基酸优选是S，并且所述VH结构域优选地具有C-末端，所述C-末端是SEQ ID NO:95至98之一。此外：(i)位置41可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置41所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)脯氨酸(P)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、丙氨酸(A)或亮氨酸(L)，这些是人或骆驼中该位置处最经常出现的一些氨基酸残基，并且可以更特别地是脯氨酸(P)或丙氨酸(A)；和/或(ii)位置42可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置42所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)甘氨酸(G)或谷氨酸(E)；和/或(iii)位置87可以例如是WO 08/020079的表A-7中针对位置87所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)苏氨酸(T)或丙氨酸(A)。
根据一个具体方面，任何此种位置89处为L并且位置110处为K或Q的本发明的结合血清白蛋白的纳米抗体也可以具有如WO 12/175400中所述的Alb-23及其变体的特征性氨基酸残基(即位置44和45上的氨基酸基序GP，位置74至76上的氨基酸基序SKN，并且优选地位置16处的G和同样任选地位置83处的R)。此外：(i)位置41可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置41所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)脯氨酸(P)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、丙氨酸(A)或亮氨酸(L)，这些是人或骆驼中该位置处最经常出现的一些氨基酸残基，并且可以更特别地是脯氨酸(P)或丙氨酸(A)；和/或(ii)位置42可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置42所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)甘氨酸(G)或谷氨酸(E)；和/或(iii)位置87可以例如是WO 08/020079的表A-7中针对位置87所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)苏氨酸(T)或丙氨酸(A)。
与位置112处含有Q或K或位置89处具有T的本发明的VH结构域一样，位置89处含有L并且位置110处为K或Q的本发明的VH结构域显示预先存在的抗体结合减少，并且特别是能够在C-端延伸存在下结合VH结构域和纳米抗体的预先存在的抗体(如例如在获自SLE患者的样品中发现的)的结合减少。
在位置89处具有L并且在位置110处具有K(并且此外，在位置11处具有V)的本发明的VH结构域的一些非限制性实例在图2中作为SEQ ID NO:123-136被给出。这些是与人血清白蛋白结合的VH结构域并且具有本文中对于本发明的优选的结合血清白蛋白的VH结构域所指出的CDR。
在另一方面，本发明涉及免疫球蛋白重链可变结构域(VH结构域)，其中位置89(Kabat编号)处的氨基酸残基是亮氨酸(L)并且位置11处的氨基酸残基是缬氨酸(V)。在位置89处为L并且在位置11处为V的此种免疫球蛋白重链可变结构域(VH结构域)也被包括在如本文中以其最广义使用的术语“本发明的VH结构域”中并且可以进一步是如本文中对于本文中所述的其他本发明的VH结构域所述的(即在位置112处包含K或Q，在位置89处包含T，或在位置89处包含L并且在位置110处包含K或Q的那些；虽然对于根据本方面的VH结构域，位置89处的氨基酸残基将是L，位置11处的氨基酸残基将是V，并且位置110和112处的氨基酸残基分别可以是任何适合这些位置的氨基酸残基)。因此，此种免疫球蛋白重链可变结构域(VH结构域)可以具有如本文中进一步描述的C-端延伸(包括指出的对于此种C-端延伸的优先选择)；可以是ISVD和特别地纳米抗体，如本文中进一步描述的。
同样，如果此种本发明的VH结构域具有暴露的C-端区域(例如，因为其形成有其存在的蛋白质、多肽或其他构建体的C-末端)，其优选地包含C-端延伸(参见下表C中显示的数据)。
此外，位置89是L并且位置11是V(即具有或不具有C-端延伸)的本发明的纳米抗体：(i)优选地在位置110处含有选自T、I、A、K或Q(并且优选地选自T、K或Q，并且特别地可以是T)的氨基酸；(ii)优选地在位置112处含有选自S、F、K或Q(并且更优选是S、K或Q，并且特别地可以是S)的氨基酸；并且(iii)可以例如还含有P14A或A14P取代和/或Q108L取代。根据一个具体实施方案，在根据本发明的该方面的VH结构域中，位置110处的氨基酸残基是T并且位置112处的氨基酸残基是S，并且更优选地C-末端是VTVSS(SEQ ID NO:77)或VTVSS(X)n(SEQ ID NO:78)，其中X和n是如本文中对于其他本发明的VH结构域的C-端延伸所限定的。此外，在根据本发明的该方面的VH结构域：(i)位置41可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置41所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)脯氨酸(P)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、丙氨酸(A)或亮氨酸(L)，这些是人或骆驼中该位置处最经常出现的一些氨基酸残基，并且可以更特别地是脯氨酸(P)或丙氨酸(A)；和/或(ii)位置42可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置42所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)甘氨酸(G)或谷氨酸(E)；和/或(iii)位置87可以例如是WO 08/020079的表A-7中针对位置87所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)苏氨酸(T)或丙氨酸(A)。
因此，例如，在89是L并且11是V的此种本发明的VH结构域中，此种VH结构域的C-末端可以是(并且优选地是)VTVSS(SEQ ID NO:77)，VTVSS(X)n(SEQ ID NO:78)，VTVKS(SEQID NO:1)，VTVKS(X)n(SEQ ID NO:21)，VTVQS(SEQ ID NO:2)，VTVQS(X)n(SEQ ID NO:22)，VKVSS(SEQ ID NO:95)，VKVSS(X)n(SEQ ID NO:97)，VQVSS(SEQ ID NO:96)，VQVSS(X)n(SEQID NO:98)，VZVZS(SEQ ID NO:107，其中各氨基酸残基Z独立地是K或Q)或VZVZSX(n)(SEQID NO:108，其中各氨基酸残基Z独立地是K或Q)中的一个(并且特别是VTVSS，VKVSS(SEQ IDNO:95)，VQVSS(SEQ ID NO:96)，VKVSS(X)n(SEQ ID NO:97)或VQVSS(X)n(SEQ ID NO:98)中的一个，并且可以更特别地是VTVSS(SEQ ID NO:77)或VTVSS(X)n(SEQ ID NO:78))，其中n和X是如本文中对于位置112是Q或K的本发明的VH结构域进一步描述的(并且其中任何C-端延伸优选是如本文中对于位置112是Q或K的本发明的VH结构域所进一步描述的)。此外，与位置112是Q或K或位置89是T的本发明的VH结构域一样，当在位置89处为L并且位置11处为V的此种VH结构域是纳米抗体时，位置14可以特别地是丙氨酸(A)或脯氨酸(P)并且位置108可以是Q或L(并且在人源化的纳米抗体中优选是L)；并且位置89处为L并且位置11处为V的此种纳米抗体可以含有一个或多个纳米抗体标志残基和/或可以被合适地人源化。此外：(i)位置41可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置41所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)脯氨酸(P)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、丙氨酸(A)或亮氨酸(L)，这些是人或骆驼中该位置处最经常出现的一些氨基酸残基，并且可以更特别地是脯氨酸(P)或丙氨酸(A)；和/或(ii)位置42可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置42所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)甘氨酸(G)或谷氨酸(E)；和/或(iii)位置87可以例如是WO 08/020079的表A-7中针对位置87所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)苏氨酸(T)或丙氨酸(A)。
位置89处为L并且位置11处为V的此种本发明的VH结构域同样也可以是如本文中进一步描述的血清白蛋白纳米抗体。例如，此种结合血清白蛋白的纳米抗体可以是序列SEQID NO:46至75中的一个，但是其中位置89处为L并且位置11处为V；或与Alb-1(WO 2006/122787的SEQ ID NO:52)、Alb-8(本文中的SEQ ID NO:46)和/或Alb-23(本文中的SEQ IDNO:61)中的至少一个具有至少80％、优选地至少85％、更优选地至少90％(如至少95％)的序列同一性(考虑框架序列和CDR两者，但是不考虑任何C-端延伸)的位置89处为L并且位置11处为V的另一种结合血清白蛋白的纳米抗体。
更通常地，根据本发明的该方面的针对血清白蛋白的VH结构域可以是WO 2004/041865并且特别是WO 2006/122787和WO 2012/175400(都是申请人/受让人的申请)中所述的针对(人)血清白蛋白的纳米抗体之一，其中位置89处的氨基酸是亮氨酸(L)并且位置11处的氨基酸残基是V，并且其任选地设置有如本文中所述的C-端延伸(并且也可以例如合适地含有本文中提及的其他具体氨基酸残基/取代中的一个或多个，如14A、P14A、14P、A14P、108L、Q108L、V110K、V110Q、S112K和/或S112Q)。此外，预期的是本发明也可以应用其他结合血清白蛋白的重链ISVD，如WO 03/035694、WO 04/003019、WO 05/118642、WO 06/059106、WO08/096158、WO 09/121804WO 10/108937或US 2013/0129727中所述的那些，即通过合适地引入位置89处的亮氨酸(L)和位置11处的缬氨酸，并且任选地引入一个或多个本文中所述的其他氨基酸残基/取代)和任选地(并且通常是优选的，如本文所述)添加C-端延伸(如本文中进一步描述的)。在这些针对血清白蛋白的VH结构域中，位置112处的氨基酸优选是S，并且所述VH结构域优选地具有C-末端，所述C-末端是SEQ ID NO:95至98之一。此外：(i)位置41可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置41所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)脯氨酸(P)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、丙氨酸(A)或亮氨酸(L)，这些是人或骆驼中该位置处最经常出现的一些氨基酸残基，并且可以更特别地是脯氨酸(P)或丙氨酸(A)；和/或(ii)位置42可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置42所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)甘氨酸(G)或谷氨酸(E)；和/或(iii)位置87可以例如是WO 08/020079的表A-7中针对位置87所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)苏氨酸(T)或丙氨酸(A)。
此种结合血清白蛋白的本发明的纳米抗体的一些优选的而非限制性的实例是WO2006/122787的SEQ ID NO:52的氨基酸序列(在WO 2006/122787中被称为“Alb-1”)的人源化变体，其中位置89处的氨基酸是L并且位置11处的氨基酸是V(并且其任选地设置有如本文中所述的C-端延伸)，如WO 2006/122787的SEQ ID NO:57至64中给出的Alb-1的人源化变体(在每种情况中，具有V89L取代和L11V取代，并且任选地具有C-端延伸)或WO 2012/175400的SEQ ID NO 3至11中给出的Alb-1的人源化变体(同样，在每种情况中，具有V89L取代和L11V)，其中SEQ ID NO 3、4和5可以任选地含有C-端延伸，并且SEQ ID NO 6至11已经含有C-端延伸(并且同样，此种变体可以合适地含有本文中提及的其他具体氨基酸残基/取代中的一个或多个，如14A、P14A、14P、A14P、108L、Q108L、T110K、T110Q、S112K和/或S112Q)。在这些位置89处为L并且位置11处为V的针对血清白蛋白的VH结构域中，位置110处的氨基酸优选是T并且位置112处的氨基酸残基优选是S，并且所述VH结构域优选地具有C-末端，所述C-末端是SEQ ID NO:95至98之一。此外：(i)位置41可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置41所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)脯氨酸(P)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、丙氨酸(A)或亮氨酸(L)，这些是人或骆驼中该位置处最经常出现的一些氨基酸残基，并且可以更特别地是脯氨酸(P)或丙氨酸(A)；和/或(ii)位置42可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置42所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)甘氨酸(G)或谷氨酸(E)；和/或(iii)位置87可以例如是WO 08/020079的表A-7中针对位置87所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)苏氨酸(T)或丙氨酸(A)。
因此，在另一个方面，本发明涉及本发明的纳米抗体(如本文中限定的)，所述纳米抗体可以结合(并且特别是特异性地结合)血清白蛋白(并且特别是人血清白蛋白)，其中：
-CDR1是氨基酸序列SFGMS(SEQ ID NO:41)；
-CDR2是氨基酸序列SISGSGSDTLYADSVKG(SEQ ID NO:42)；
-CDR3是氨基酸序列GGSLSR(SEQ ID NO:43)；
-位置89处的氨基酸残基是L；
-位置11处的氨基酸残基是V；
其中优选地
-位置110处的氨基酸残基是K、Q或T中的一个，并且更优选地T；
-位置112处的氨基酸残基是K、Q或S中的一个，并且更优选地S；
并且其任选地在其C-末端包含C-端延伸(X)n，其中n是1至10，优选地是1至5，如1、2、3、4或5(并且优选地是1或2，如1)；并且各个X是(优选地天然存在的)这样的氨基酸残基，其是被独立地选择的，并且优选地独立地选自由以下组成的组：丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)或异亮氨酸(I)(同样，此种C-端延伸优选是如本文中进一步描述的，并且同样此种纳米抗体也可以例如合适地含有本文中提及的其他具体氨基酸残基/取代中的一个或多个，如14A、P14A、14P、A14P、108L、Q108L)。同样，在这些位置89处为L并且位置11处为V的针对血清白蛋白的VH结构域中，位置110处的氨基酸优选是T和位置112处的氨基酸优选是S，并且所述VH结构域优选地具有C-末端，所述C-末端是SEQ ID NO:95至98之一。此外：(i)位置41可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置41所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)脯氨酸(P)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、丙氨酸(A)或亮氨酸(L)，这些是人或骆驼中该位置处最经常出现的一些氨基酸残基，并且可以更特别地是脯氨酸(P)或丙氨酸(A)；和/或(ii)位置42可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置42所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)甘氨酸(G)或谷氨酸(E)；和/或(iii)位置87可以例如是WO 08/020079的表A-7中针对位置87所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)苏氨酸(T)或丙氨酸(A)。
在特别的方面中，本发明涉及本发明的纳米抗体(如本文中限定的)，所述纳米抗体可以结合(并且特别是特异性地结合)血清白蛋白(并且特别是人血清白蛋白)，所述纳米抗体是WO 2006/122787的SEQ ID NO:52的人源化变体，其中：
-CDR1是氨基酸序列SFGMS(SEQ ID NO:41)；
-CDR2是氨基酸序列SISGSGSDTLYADSVKG(SEQ ID NO:42)；
-CDR3是氨基酸序列GGSLSR(SEQ ID NO:43)；
-位置89处的氨基酸残基是L；
-位置11处的氨基酸残基是V；
并且优选地：
-位置110处的氨基酸残基是K、Q或T中的一个，并且更优选地T；
-位置112处的氨基酸残基是K、Q或S中的一个，并且更优选地S；
并且其任选地在其C-末端包含C-端延伸(X)n，其中n是1至10，优选地是1至5，如1、2、3、4或5(并且优选地是1或2，如1)；并且各个X是(优选地天然存在的)这样的氨基酸残基，其是被独立地选择的，并且优选地独立地选自由以下组成的组：丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)或异亮氨酸(I)(同样，此种C-端延伸优选是如本文中进一步描述的，并且同样此种纳米抗体也可以例如含有本文中提及的其他具体氨基酸残基/取代中的一个或多个，如11L、L11V、L11K、14A、P14A、14P、A14P、108L和/或Q108L)。在这些位置89处为L并且位置11处为V的针对血清白蛋白的VH结构域中，位置110处的氨基酸残基优选是T并且位置112处的氨基酸残基优选是S，并且所述VH结构域优选地具有C-末端，所述C-末端是SEQ IDNO:95至98之一。此外：(i)位置41可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置41所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)脯氨酸(P)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、丙氨酸(A)或亮氨酸(L)，这些是人或骆驼中该位置处最经常出现的一些氨基酸残基，并且可以更特别地是脯氨酸(P)或丙氨酸(A)；和/或(ii)位置42可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置42所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)甘氨酸(G)或谷氨酸(E)；和/或(iii)位置87可以例如是WO 08/020079的表A-7中针对位置87所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)苏氨酸(T)或丙氨酸(A)。
在特别的方面中，本发明涉及本发明的纳米抗体(如本文中限定的)，所述纳米抗体可以结合(并且特别是特异性地结合)血清白蛋白(并且特别是人血清白蛋白)，所述纳米抗体与Alb-1(WO 2006/122787的SEQ ID NO:52)、Alb-8(本文中的SEQ ID NO:46)和/或Alb-23(本文中的SEQ ID NO:61)中的至少一个具有至少80％、优选地至少85％、更优选地至少90％(如至少95％)的序列同一性(考虑框架序列和CDR两者，但是不考虑任何C-端延伸)，其中位置89处的氨基酸残基是L并且位置11处的氨基酸残基是V，并且其任选地在其C-末端包含C-端延伸(X)n，其中n是1至10，优选地是1至5，如1、2、3、4或5(并且优选地是1或2，如1)；并且各个X是(优选地天然存在的)这样的氨基酸残基，其是被独立地选择的，并且优选地独立地选自由以下组成的组：丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)或异亮氨酸(I)(同样，此种C-端延伸优选是如本文中进一步描述的，并且同样此种纳米抗体也可以例如合适地含有本文中提及的其他具体氨基酸残基/取代中的一个或多个，如14A、P14A、14P、A14P、108L、Q108L、T110K、T110Q、S112K和/或S112Q)。此种本发明的纳米抗体同样优选是Alb-1的人源化变体(但是具有V89L和L11V取代)，并且更优选地具有分别在SEQ ID NO41至43中给出的CDR1、CDR2和/或CDR3中的至少一个、特别地任意两个、并且更特别地全部三个。在这些针对血清白蛋白的VH结构域中，位置112处的氨基酸优选是S，并且所述VH结构域优选地具有C-末端，所述C-末端是SEQ ID NO:95至98之一。此外：(i)位置41可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置41所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)脯氨酸(P)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、丙氨酸(A)或亮氨酸(L)，这些是人或骆驼中该位置处最经常出现的一些氨基酸残基，并且可以更特别地是脯氨酸(P)或丙氨酸(A)；和/或(ii)位置42可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置42所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)甘氨酸(G)或谷氨酸(E)；和/或(iii)位置87可以例如是WO 08/020079的表A-7中针对位置87所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)苏氨酸(T)或丙氨酸(A)。
根据一个具体方面，任何位置89处为L并且位置11处为V的此种本发明的结合血清白蛋白的纳米抗体也可以具有如WO 12/175400中所述的Alb-23及其变体的特征性氨基酸残基(即位置44和45上的氨基酸基序GP，位置74至76上的氨基酸基序SKN，并且优选地位置16处的G和同样任选地位置83处的R)。此外：(i)位置41可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置41所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)脯氨酸(P)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、丙氨酸(A)或亮氨酸(L)，这些是人或骆驼中该位置处最经常出现的一些氨基酸残基，并且可以更特别地是脯氨酸(P)或丙氨酸(A)；和/或(ii)位置42可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置42所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)甘氨酸(G)或谷氨酸(E)；和/或(iii)位置87可以例如是WO 08/020079的表A-7中针对位置87所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)苏氨酸(T)或丙氨酸(A)。
与位置112处含有Q或K或位置89处具有T的本发明的VH结构域一样，位置89处含有L并且位置11处含有V的本发明的VH结构域显示预先存在的抗体结合减少，并且特别是能够在C-端延伸存在下结合VH结构域和纳米抗体的预先存在的抗体(如例如在获自SLE患者的样品中发现的)的结合减少。与位置89是L并且位置11是V的本发明的VH结构域有关的另一个要注意的事是，已知这些取代以一定的频率在人VH结构域中出现(对于位置11，参见WO08/020079的表A-5，并且对于位置89，参见WO 08/020079的表A-7)。
在位置11处具有V并且在位置89处具有T的本发明的VH结构域的一些非限制性实例在图2中作为SEQ ID NO:109-136给出。在这些VH结构域中，作为SEQ ID NO:123-136给出的序列除了L11V和V89L突变以外还包含T110K突变。这些是结合人血清白蛋白的VH结构域并且具有本文中对于本发明的优选的结合血清白蛋白的VH结构域所指出的CDR。
在另一个方面，本发明涉及VH结构域(并且特别是作为ISVD的VH结构域，并且更特别是作为纳米抗体的VH结构域)，其中：
-位置11处的氨基酸残基是V；并且
-位置14处的氨基酸残基是A或P中的一个；并且
-位置41处的氨基酸残基是A或P中的一个；并且
-位置89处的氨基酸残基是L；并且
-位置108处的氨基酸残基是Q或L中的一个；并且
-位置110处的氨基酸残基是T、K或Q中的一个；并且
-位置112处的氨基酸残基是S、K或Q中的一个；
并且其中所述VH结构域任选地包含C-端延伸(X)n，其中n是1至10，优选地是1至5，如1、2、3、4或5(并且优选地是1或2，如1)；并且各个X是(优选地天然存在的)这样的氨基酸残基，其是被独立地选择的，并且优选地独立地选自由以下组成的组：丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)或异亮氨酸(I)(所述C-端延伸优选是如本文中进一步描述的)。此外：(i)位置42可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置42所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)甘氨酸(G)或谷氨酸(E)；和/或(ii)位置87可以例如是WO 08/020079的表A-7中针对位置87所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)苏氨酸(T)或丙氨酸(A)。优选地，在根据本段的VH结构域中，位置110处的氨基酸残基是T并且位置112处的氨基酸残基是S。同样，与其他本发明的VH结构域一样，此种VH结构域可以针对任何合适的靶标(并且特别是治疗相关靶标)。根据一个具体方面，此种VH结构域针对血清白蛋白。
在另一个方面，本发明涉及VH结构域(并且特别是作为ISVD的VH结构域，并且更特别是作为纳米抗体的VH结构域)，其中：
-位置11处的氨基酸残基是L、V或K中的一个；并且
-位置14处的氨基酸残基是A或P中的一个；并且
-位置41处的氨基酸残基是A或P中的一个；并且
-位置89处的氨基酸残基是T、V或L中的一个；并且
-位置108处的氨基酸残基是Q或L中的一个；并且
-位置110处的氨基酸残基是T、K或Q中的一个；并且
-位置112处的氨基酸残基是S、K或Q中的一个；
其中(i)位置112处的氨基酸残基是K或Q中的一个；和/或(ii)位置89处的氨基酸残基是T；和/或(iii)位置89处的氨基酸残基是L并且位置110处的氨基酸残基是K或Q中的一个；并且(iv)在情况(i)至(iii)中的每一种中，位置11处的氨基酸优选是V；并且
其中所述VH结构域任选地包含C-端延伸(X)n，其中n是1至10，优选地是1至5，如1、2、3、4或5(并且优选地是1或2，如1)；并且各个X是(优选地天然存在的)这样的氨基酸残基，其是被独立地选择的，并且优选地独立地选自由以下组成的组：丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)或异亮氨酸(I)(所述C-端延伸优选是如本文中进一步描述的)。此外：(i)位置42可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置42所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)甘氨酸(G)或谷氨酸(E)；和/或(ii)位置87可以例如是WO 08/020079的表A-7中针对位置87所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)苏氨酸(T)或丙氨酸(A)。本发明的另一个方面涉及如本段中所述的VH结构域(并且特别是作为ISVD的VH结构域，并且更特别是作为纳米抗体的VH结构域)，其中位置11处的氨基酸残基是V并且位置110处的氨基酸残基是K或Q(并且其中位置14、41、89、108和112处的氨基酸残基可以是如以上着重号所列出的，位置42和87处的氨基酸残基可以例如是如本段中所述的，并且VH结构域可以任选地含有如本段中所述的C-端延伸(X)n)。
在另一个方面，本发明涉及VH结构域(并且特别是作为ISVD的VH结构域，并且更特别是作为纳米抗体的VH结构域)，其中：
-位置11处的氨基酸残基是L、V或K中的一个；并且
-位置14处的氨基酸残基是A或P中的一个；并且
-位置41处的氨基酸残基是A或P中的一个；并且
-位置89处的氨基酸残基是T、V或L中的一个；并且
-位置108处的氨基酸残基是Q或L中的一个；并且
-位置110处的氨基酸残基是T、K或Q中的一个；并且
-位置112处的氨基酸残基是S、K或Q中的一个；
其中(i)位置112处的氨基酸残基是K或Q中的一个，位置89处的氨基是T、V或L中的一个(并且优选是V)，并且位置110处的氨基酸残基是T、K或Q中的一个(并且优选是T)；和/或(ii)位置89处的氨基酸残基是T，并且位置112处的氨基酸残基是S、K或Q中的一个(并且优选是S)，并且位置110处的氨基酸残基是T、K或Q中的一个(并且优选是T)；和/或(iii)位置89处的氨基酸残基是L并且位置110处的氨基酸残基是K或Q中的一个，并且位置112处的氨基酸残基是S、K或Q中的一个(并且优选是S)；并且(iv)在情况(i)至(iii)中的每一种中，位置11处的氨基酸优选是V；并且
其中所述VH结构域任选地包含C-端延伸(X)n，其中n是1至10，优选地是1至5，如1、2、3、4或5(并且优选地是1或2，如1)；并且各个X是(优选地天然存在的)这样的氨基酸残基，其是被独立地选择的，并且优选地独立地选自由以下组成的组：丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)或异亮氨酸(I)(所述C-端延伸优选是如本文中进一步描述的)。此外：(i)位置42可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置42所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)甘氨酸(G)或谷氨酸(E)；和/或(ii)位置87可以例如是WO 08/020079的表A-7中针对位置87所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)苏氨酸(T)或丙氨酸(A)。本发明的另一个方面涉及如本段中所述的VH结构域(并且特别是作为ISVD的VH结构域，并且更特别是作为纳米抗体的VH结构域)，其中位置11处的氨基酸残基是V并且位置110处的氨基酸残基是K或Q(并且其中位置14、41、89、108和112处的氨基酸残基可以是如以上着重号所列出的，位置42和87处的氨基酸残基可以例如是如本段中所述的，并且VH结构域可以任选地含有如本段中所述的C-端延伸(X)n)。
在另一个方面，本发明涉及VH结构域(并且特别是作为ISVD的VH结构域，并且更特别是作为纳米抗体的VH结构域)，其中：
-位置11处的氨基酸残基是L、V或K中的一个；并且
-位置14处的氨基酸残基是A或P中的一个；并且
-位置41处的氨基酸残基是A或P中的一个；并且
-位置89处的氨基酸残基是T、V或L中的一个；并且
-位置108处的氨基酸残基是Q或L中的一个；并且
-位置110处的氨基酸残基是T、K或Q中的一个；并且
-位置112处的氨基酸残基是S、K或Q中的一个；
其中(i)位置112处的氨基酸残基是K或Q中的一个；或(ii)位置89处的氨基酸残基是T；或(iii)位置89处的氨基酸残基是L并且位置110处的氨基酸残基是K或Q中的一个；并且(iv)在情况(i)至(iii)中的每一种中，位置11处的氨基酸优选是V；并且
其中所述VH结构域任选地包含C-端延伸(X)n，其中n是1至10，优选地是1至5，如1、2、3、4或5(并且优选地是1或2，如1)；并且各个X是(优选地天然存在的)这样的氨基酸残基，其是被独立地选择的，并且优选地独立地选自由以下组成的组：丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)或异亮氨酸(I)(所述C-端延伸优选是如本文中进一步描述的)。此外：(i)位置42可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置42所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)甘氨酸(G)或谷氨酸(E)；和/或(ii)位置87可以例如是WO 08/020079的表A-7中针对位置87所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)苏氨酸(T)或丙氨酸(A)。本发明的另一个方面涉及如本段中所述的VH结构域(并且特别是作为ISVD的VH结构域，并且更特别是作为纳米抗体的VH结构域)，其中位置11处的氨基酸残基是V并且位置110处的氨基酸残基是K或Q(并且其中位置14、41、89、108和112处的氨基酸残基可以是如以上着重号所列出的，位置42和87处的氨基酸残基可以例如是如本段中所述的，并且VH结构域可以任选地含有如本段中所述的C-端延伸(X)n)。
在另一个方面，本发明涉及VH结构域(并且特别是作为ISVD的VH结构域，并且更特别是作为纳米抗体的VH结构域)，其中：
-位置11处的氨基酸残基是L、V或K中的一个；并且
-位置14处的氨基酸残基是A或P中的一个；并且
-位置41处的氨基酸残基是A或P中的一个；并且
-位置89处的氨基酸残基是T、V或L中的一个；并且
-位置108处的氨基酸残基是Q或L中的一个；并且
-位置110处的氨基酸残基是T、K或Q中的一个；并且
-位置112处的氨基酸残基是S、K或Q中的一个；
其中(i)位置112处的氨基酸残基是K或Q中的一个，位置89处的氨基是T、V或L中的一个(并且优选是V)，并且位置110处的氨基酸残基是T、K或Q中的一个(并且优选是T)；或(ii)位置89处的氨基酸残基是T，并且位置112处的氨基酸残基是S、K或Q中的一个(并且优选是S)，并且位置110处的氨基酸残基是T、K或Q中的一个(并且优选是T)；或(iii)位置89处的氨基酸残基是L，并且位置110处的氨基酸残基是K或Q中的一个，并且位置112处的氨基酸残基是S、K或Q中的一个(并且优选是S)；并且(iv)在情况(i)至(iii)中的每一种中，位置11处的氨基酸优选是V；
并且其中所述VH结构域任选地包含C-端延伸(X)n，其中n是1至10，优选地是1至5，如1、2、3、4或5(并且优选地是1或2，如1)；并且各个X是(优选地天然存在的)这样的氨基酸残基，其是被独立地选择的，并且优选地独立地选自由以下组成的组：丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)或异亮氨酸(I)(所述C-端延伸优选是如本文中进一步描述的)。此外：(i)位置42可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置42所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)甘氨酸(G)或谷氨酸(E)；和/或(ii)位置87可以例如是WO 08/020079的表A-7中针对位置87所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)苏氨酸(T)或丙氨酸(A)。本发明的另一个方面涉及如本段中所述的VH结构域(并且特别是作为ISVD的VH结构域，并且更特别是作为纳米抗体的VH结构域)，其中位置11处的氨基酸残基是V并且位置110处的氨基酸残基是K或Q(并且其中位置14、41、89、108和112处的氨基酸残基可以是如以上着重号所列出的，位置42和87处的氨基酸残基可以例如是如本段中所述的，并且VH结构域可以任选地含有如本段中所述的C-端延伸(X)n)。
在另一个方面，本发明涉及VH结构域(并且特别是作为ISVD的VH结构域，并且更特别是作为纳米抗体的VH结构域)，其中：
-位置11处的氨基酸残基是L、V或K中的一个；并且
-位置14处的氨基酸残基是A或P中的一个；并且
-位置41处的氨基酸残基是A或P中的一个；并且
-位置89处的氨基酸残基是T、V或L中的一个；并且
-位置108处的氨基酸残基是Q或L中的一个；并且
-位置110处的氨基酸残基是T、K或Q中的一个；并且
-位置112处的氨基酸残基是S、K或Q中的一个；
其中(i)位置112处的氨基酸残基是K或Q中的一个，位置89处的氨基是V，并且位置110处的氨基酸残基是T；或(ii)位置89处的氨基酸残基是T，位置112处的氨基酸残基是S，并且位置110处的氨基酸残基是T；或(iii)位置89处的氨基酸残基是L并且位置110处的氨基酸残基是K或Q中的一个，并且位置112处的氨基酸残基是S(并且优选是S)；并且(iv)在情况(i)至(iii)中的每一种中，位置11处的氨基酸优选是V；并且
其中所述VH结构域任选地包含C-端延伸(X)n，其中n是1至10，优选地是1至5，如1、2、3、4或5(并且优选地是1或2，如1)；并且各个X是(优选地天然存在的)这样的氨基酸残基，其是被独立地选择的，并且优选地独立地选自由以下组成的组：丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)或异亮氨酸(I)(所述C-端延伸优选是如本文中进一步描述的)。此外：(i)位置42可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置42所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)甘氨酸(G)或谷氨酸(E)；和/或(ii)位置87可以例如是WO 08/020079的表A-7中针对位置87所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)苏氨酸(T)或丙氨酸(A)。本发明的另一个方面涉及如本段中所述的VH结构域(并且特别是作为ISVD的VH结构域，并且更特别是作为纳米抗体的VH结构域)，其中位置11处的氨基酸残基是V并且位置110处的氨基酸残基是K或Q(并且其中位置14、41、89、108和112处的氨基酸残基可以是如以上着重号所列出的，位置42和87处的氨基酸残基可以例如是如本段中所述的，并且VH结构域可以任选地含有如本段中所述的C-端延伸(X)n)。
在另一个方面，本发明涉及VH结构域(并且特别是作为ISVD的VH结构域，并且更特别是作为纳米抗体的VH结构域)，其中：
-位置11处的氨基酸残基是L、V或K中的一个；并且
-位置14处的氨基酸残基是A或P中的一个；并且
-位置41处的氨基酸残基是A或P中的一个；并且
-位置89处的氨基酸残基是T、V或L中的一个；并且
-位置108处的氨基酸残基是Q或L中的一个；并且
-位置110处的氨基酸残基是T、K或Q中的一个；并且
-位置112处的氨基酸残基是S、K或Q中的一个；
其中(i)位置112处的氨基酸残基是K或Q中的一个；和/或(ii)位置89处的氨基酸残基是T；和/或(iii)位置89处的氨基酸残基是L并且位置110处的氨基酸残基是K或Q中的一个；并且(iv)在情况(i)至(iii)中的每一种中，位置11处的氨基酸优选是V；并且
其中所述VH结构域包含C-端延伸(X)n，其中n是1至10，优选地是1至5，如1、2、3、4或5(并且优选地是1或2，如1)；并且各个X是(优选地天然存在的)这样的氨基酸残基，其是被独立地选择的，并且优选地独立地选自由以下组成的组：丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)或异亮氨酸(I)(所述C-端延伸优选是如本文中进一步描述的)。此外：(i)位置42可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置42所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)甘氨酸(G)或谷氨酸(E)；和/或(ii)位置87可以例如是WO 08/020079的表A-7中针对位置87所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)苏氨酸(T)或丙氨酸(A)。本发明的另一个方面涉及如本段中所述的VH结构域(并且特别是作为ISVD的VH结构域，并且更特别是作为纳米抗体的VH结构域)，其中位置11处的氨基酸残基是V并且位置110处的氨基酸残基是K或Q(并且其中位置14、41、89、108和112处的氨基酸残基可以是如以上着重号所列出的，位置42和87处的氨基酸残基可以例如是如本段中所述的，并且VH结构域可以任选地含有如本段中所述的C-端延伸(X)n)。
在另一个方面，本发明涉及VH结构域(并且特别是作为ISVD的VH结构域，并且更特别是作为纳米抗体的VH结构域)，其中：
-位置11处的氨基酸残基是L、V或K中的一个；并且
-位置14处的氨基酸残基是A或P中的一个；并且
-位置41处的氨基酸残基是A或P中的一个；并且
-位置89处的氨基酸残基是T、V或L中的一个；并且
-位置108处的氨基酸残基是Q或L中的一个；并且
-位置110处的氨基酸残基是T、K或Q中的一个；并且
-位置112处的氨基酸残基是S、K或Q中的一个；
其中(i)位置112处的氨基酸残基是K或Q中的一个，位置89处的氨基是T、V或L中的一个(并且优选是V)，并且位置110处的氨基酸残基是T、K或Q中的一个(并且优选是T)；和/或(ii)位置89处的氨基酸残基是T，并且位置112处的氨基酸残基是S、K或Q中的一个(并且优选是S)，并且位置110处的氨基酸残基是T、K或Q中的一个(并且优选是T)；和/或(iii)位置89处的氨基酸残基是L并且位置110处的氨基酸残基是K或Q中的一个，并且位置112处的氨基酸残基是S、K或Q中的一个(并且优选是S)；并且(iv)在情况(i)至(iii)中的每一种中，位置11处的氨基酸优选是V；并且
其中所述VH结构域包含C-端延伸(X)n，其中n是1至10，优选地是1至5，如1、2、3、4或5(并且优选地是1或2，如1)；并且各个X是(优选地天然存在的)这样的氨基酸残基，其是被独立地选择的，并且优选地独立地选自由以下组成的组：丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)或异亮氨酸(I)(所述C-端延伸优选是如本文中进一步描述的)。此外：(i)位置42可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置42所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)甘氨酸(G)或谷氨酸(E)；和/或(ii)位置87可以例如是WO 08/020079的表A-7中针对位置87所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)苏氨酸(T)或丙氨酸(A)。本发明的另一个方面涉及如本段中所述的VH结构域(并且特别是作为ISVD的VH结构域，并且更特别是作为纳米抗体的VH结构域)，其中位置11处的氨基酸残基是V并且位置110处的氨基酸残基是K或Q(并且其中位置14、41、89、108和112处的氨基酸残基可以是如以上着重号所列出的，位置42和87处的氨基酸残基可以例如是如本段中所述的，并且VH结构域可以任选地含有如本段中所述的C-端延伸(X)n)。
在另一个方面，本发明涉及VH结构域(并且特别是作为ISVD的VH结构域，并且更特别是作为纳米抗体的VH结构域)，其中：
-位置11处的氨基酸残基是L、V或K中的一个；并且
-位置14处的氨基酸残基是A或P中的一个；并且
-位置41处的氨基酸残基是A或P中的一个；并且
-位置89处的氨基酸残基是T、V或L中的一个；并且
-位置108处的氨基酸残基是Q或L中的一个；并且
-位置110处的氨基酸残基是T、K或Q中的一个；并且
-位置112处的氨基酸残基是S、K或Q中的一个；
其中(i)位置112处的氨基酸残基是K或Q中的一个；或(ii)位置89处的氨基酸残基是T；或(iii)位置89处的氨基酸残基是L并且位置110处的氨基酸残基是K或Q中的一个；并且(iv)在情况(i)至(iii)中的每一种中，位置11处的氨基酸优选是V；并且
其中所述VH结构域包含C-端延伸(X)n，其中n是1至10，优选地是1至5，如1、2、3、4或5(并且优选地是1或2，如1)；并且各个X是(优选地天然存在的)这样的氨基酸残基，其是被独立地选择的，并且优选地独立地选自由以下组成的组：丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)或异亮氨酸(I)(所述C-端延伸优选是如本文中进一步描述的)。此外：(i)位置42可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置42所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)甘氨酸(G)或谷氨酸(E)；和/或(ii)位置87可以例如是WO 08/020079的表A-7中针对位置87所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)苏氨酸(T)或丙氨酸(A)。本发明的另一个方面涉及如本段中所述的VH结构域(并且特别是作为ISVD的VH结构域，并且更特别是作为纳米抗体的VH结构域)，其中位置11处的氨基酸残基是V并且位置110处的氨基酸残基是K或Q(并且其中位置14、41、89、108和112处的氨基酸残基可以是如以上着重号所列出的，位置42和87处的氨基酸残基可以例如是如本段中所述的，并且VH结构域可以任选地含有如本段中所述的C-端延伸(X)n)。
在另一个方面，本发明涉及VH结构域(并且特别是作为ISVD的VH结构域，并且更特别是作为纳米抗体的VH结构域)，其中：
-位置11处的氨基酸残基是L、V或K中的一个；并且
-位置14处的氨基酸残基是A或P中的一个；并且
-位置41处的氨基酸残基是A或P中的一个；并且
-位置89处的氨基酸残基是T、V或L中的一个；并且
-位置108处的氨基酸残基是Q或L中的一个；并且
-位置110处的氨基酸残基是T、K或Q中的一个；并且
-位置112处的氨基酸残基是S、K或Q中的一个；
其中(i)位置112处的氨基酸残基是K或Q中的一个，位置89处的氨基是T、V或L中的一个(并且优选是V)，并且位置110处的氨基酸残基是T、K或Q中的一个(并且优选是T)；或(ii)位置89处的氨基酸残基是T，并且位置112处的氨基酸残基是S、K或Q中的一个(并且优选是S)，并且位置110处的氨基酸残基是T、K或Q中的一个(并且优选是T)；或(iii)位置89处的氨基酸残基是L，并且位置110处的氨基酸残基是K或Q中的一个，并且位置112处的氨基酸残基是S、K或Q中的一个(并且优选是S)；并且(iv)在情况(i)至(iii)中的每一种中，位置11处的氨基酸优选是V；并且
其中所述VH结构域包含C-端延伸(X)n，其中n是1至10，优选地是1至5，如1、2、3、4或5(并且优选地是1或2，如1)；并且各个X是(优选地天然存在的)这样的氨基酸残基，其是被独立地选择的，并且优选地独立地选自由以下组成的组：丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)或异亮氨酸(I)(所述C-端延伸优选是如本文中进一步描述的)。此外：(i)位置42可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置42所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)甘氨酸(G)或谷氨酸(E)；和/或(ii)位置87可以例如是WO 08/020079的表A-7中针对位置87所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)苏氨酸(T)或丙氨酸(A)。本发明的另一个方面涉及如本段中所述的VH结构域(并且特别是作为ISVD的VH结构域，并且更特别是作为纳米抗体的VH结构域)，其中位置11处的氨基酸残基是V并且位置110处的氨基酸残基是K或Q(并且其中位置14、41、89、108和112处的氨基酸残基可以是如以上着重号所列出的，位置42和87处的氨基酸残基可以例如是如本段中所述的，并且VH结构域可以任选地含有如本段中所述的C-端延伸(X)n)。
在另一个方面，本发明涉及VH结构域(并且特别是作为ISVD的VH结构域，并且更特别是作为纳米抗体的VH结构域)，其中：
-位置11处的氨基酸残基是L、V或K中的一个；并且
-位置14处的氨基酸残基是A或P中的一个；并且
-位置41处的氨基酸残基是A或P中的一个；并且
-位置89处的氨基酸残基是T、V或L中的一个；并且
-位置108处的氨基酸残基是Q或L中的一个；并且
-位置110处的氨基酸残基是T、K或Q中的一个；并且
-位置112处的氨基酸残基是S、K或Q中的一个；
其中(i)位置112处的氨基酸残基是K或Q中的一个，位置89处的氨基是V，并且位置110处的氨基酸残基是T；或(ii)位置89处的氨基酸残基是T，位置112处的氨基酸残基是S，并且位置110处的氨基酸残基是T；或(iii)位置89处的氨基酸残基是L并且位置110处的氨基酸残基是K或Q中的一个，并且位置112处的氨基酸残基是S(并且优选是S)；并且(iv)在情况(i)至(iii)中的每一种中，位置11处的氨基酸优选是V；并且
其中所述VH结构域包含C-端延伸(X)n，其中n是1至10，优选地是1至5，如1、2、3、4或5(并且优选地是1或2，如1)；并且各个X是(优选地天然存在的)这样的氨基酸残基，其是被独立地选择的，并且优选地独立地选自由以下组成的组：丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)或异亮氨酸(I)(所述C-端延伸优选是如本文中进一步描述的)。此外：(i)位置42可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置42所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)甘氨酸(G)或谷氨酸(E)；和/或(ii)位置87可以例如是WO 08/020079的表A-7中针对位置87所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)苏氨酸(T)或丙氨酸(A)。本发明的另一个方面涉及如本段中所述的VH结构域(并且特别是作为ISVD的VH结构域，并且更特别是作为纳米抗体的VH结构域)，其中位置11处的氨基酸残基是V并且位置110处的氨基酸残基是K或Q(并且其中位置14、41、89、108和112处的氨基酸残基可以是如以上着重号所列出的，位置42和87处的氨基酸残基可以例如是如本段中所述的，并且VH结构域可以任选地含有如本段中所述的C-端延伸(X)n)。
同样，在如本文中限定的本发明的VH结构域中，本文中没有明确限定的位置处的氨基酸残基可以是在此位置处适合于VH结构域，并且特别是适合于ISVD并且更特别是适合于纳米抗体(包括人源化的VHH结构域)的任何氨基酸残基。同样参见本文中引用的现有技术，如例如WO 08/020079的表A-3和A-5至A-8。优选地，在每种情况中，位置11处的氨基酸残基是L或V，并且更优选是V。此外：(i)位置41可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置41所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)脯氨酸(P)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、丙氨酸(A)或亮氨酸(L)，这些是人或骆驼中该位置处最经常出现的一些氨基酸残基，并且可以更特别地是脯氨酸(P)或丙氨酸(A)；和/或(ii)位置42可以例如是WO 08/020079的表A-6中针对位置42所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)甘氨酸(G)或谷氨酸(E)；和/或(iii)位置87可以例如是WO 08/020079的表A-7中针对位置87所提及的氨基酸残基(即人VH3残基和/或骆驼科VHH残基)之一并且可以特别地是(或选自)苏氨酸(T)或丙氨酸(A)。
此外，所述本发明的VH结构域可以针对任何合适的靶标，并且特别是治疗靶标。在一个方面，其针对人血清蛋白质如人血清白蛋白。
本发明还涉及包含至少一个本发明的VH结构域的蛋白质、多肽、构建体、化合物或其他化学实体(本文中也被统称为“本发明的化合物”)。
如本文中进一步描述的，根据一个具体方面，在本发明的化合物中，本发明的VH结构域存在于/形成其C-末端。在此种情况下，形成本发明的化合物的C-末端/存在于本发明的化合物的C-末端处的本发明的VH结构域优选地具有如本文中所述的C-端延伸。
如本文中还进一步描述的，本发明的化合物可以是ScFv、双抗体或另一种蛋白质、多肽或构建体(其中一个或多个本发明的VH结构域与一个或多个VL结构域结合以形成一个或多个功能性抗原-结合位点)。
然而，根据本发明的一个优选方面，本发明的VH结构域是ISVD并且本发明的化合物是蛋白质、多肽、构建体、化合物或其他化学实体，其包含至少一个本发明的ISVD和任选地一个或多个另外的氨基酸序列、部分、结合结构域或结合单元(任选地经由一个或多个接头合适地彼此相连)或基本上由其组成。特别地，此种本发明的化合物可以包含一个或多个ISVD或由其组成，所述ISVD中的至少一个是本发明的ISVD。此种本发明的化合物可以特别地具有在其C-末端的本发明的ISVD，在该情况中本发明的ISVD还优选地具有如本文中所述的C-端延伸。此外，如果此种本发明的化合物包含两个以上ISVD，存在的两个以上或基本上全部ISVD可以是本发明的ISVD(即各自具有至少一个以下氨基酸残基/取代：112K、112Q、S112K、S112Q、89T和/或V89T，或V89L与T110K或T110Q的组合；以及任选地一个或多个本发明中对于本发明的ISVD提及的另外的取代，如L11V)。此外，在此种本发明的化合物中，本发明的ISVD优选是本发明的纳米抗体，并且本发明的化合物中存在的全部或基本上全部的ISVD可以是(并且优选地是)纳米抗体(并且特别是本发明的纳米抗体，即各自具有至少一个以下氨基酸残基/取代：112K、112Q、S112K、S112Q、89T和/或V89T，或V89L与T110K或T110Q的组合；以及任选地一个或多个本文中对于本发明的纳米抗体所提及的另外的取代，如L11V)。基于本文中进一步的公开内容，此种本发明的化合物的实例对于技术人员将是显而易见的。
包含一个或多个ISVD(包括至少一个本发明的ISVD)的蛋白质、多肽，构建体、化合物或其他化学实体的一些非限制性实例是多价，多特异性(如双特异性)或多互补位(如双互补位)构建体，其含有两个以上直接或经由一个或多个合适的接头相连的ISVD。同样，ISVD优选是纳米抗体。对于此种构建体的一些非限制性实例和对可以如何制备此种构建体的一般性教导(特别地基于纳米抗体)，可以参考例如Conrath等,JBC 276,10(9),7346(2001)以及Muyldermans.Reviews in Mol.Biotechnol.,74:27(2001)的综述文章。
例如，含有两个以上ISVD(其中至少一个是本发明的ISVD)的此种本发明的化合物可以是二价、三价、四价或五价构建体，和/或可以是单特异性、双特异性、三特异性构建体，和/或可以是双互补位或三互补位构建体。同样参考本文中引用的关于基于IVSD和基于纳米抗体的生物制剂的现有技术。此外，此种本发明的化合物可以已经通过官能化和/或通过包括在使构建体的半衰期增加的构建体部分或结合单元中而具有增加的半衰期。此种官能化、部分或结合单元的实例对于技术人员是显而易见的并且可以例如是如本文中所述的，并且例如可以包括PEG化、与血清白蛋白融合或与可以结合血清蛋白质如血清白蛋白的肽或结合单元融合。此种血清白蛋白结合肽或结合结构域可以是任何能够增加构建体的半衰期(与不具有血清白蛋白结合肽或结合结构域的相同构建体相比)的合适的血清白蛋白结合肽或结合结构域，并且可以特别地是如申请人的WO 2008/068280(并且特别是申请人的WO 2009/127691和未预公开的美国申请61/301,819)中所述的血清白蛋白结合肽，或结合血清白蛋白的ISV(如结合血清白蛋白的纳米抗体；例如Alb-1或Alb-1的人源化版本如Alb-8，关于此可参考例如WO 06/122787)，或针对(人)血清蛋白质如(人)血清白蛋白的本发明的ISVD(如本文中进一步描述的)。通常，任何具有增加的半衰期的本发明的化合物将优选地在人受试者中具有至少1天，优选地至少3天，更优选地至少7天，如至少10天的半衰期(如本文中限定的)。
当本发明的化合物包含至少一个(并且优选地一个)针对(人)血清蛋白质并且特别地针对(人)血清白蛋白的本发明的ISVD(并且特别是本发明的纳米抗体)时，本发明的化合物通常还将含有一个或多个其他治疗活性氨基酸序列、部分、结合结构域或结合单元(即针对治疗相关靶标、途径或机制)，并且本发明的ISVD将起到延长其(以及整个化合物)的半衰期的作用。同样，所述一个或多个另外的治疗活性部分优选地是ISVD(并且更优选是纳米抗体)，并且还可以是本发明的IVSD(并且更优选是本发明的纳米抗体)。在此种本发明的化合物中，针对人血清白蛋白的本发明的ISVD同样可以存在于所述化合物的C-末端/形成所述化合物的C-末端，并且在所述情况中可以(并且优选地)包含如本文中所述的C-端延伸。当本发明的化合物包含针对(人)血清白蛋白的本发明的ISVD时，所述本发明的化合物优选地在被施用了/已经被施用了本发明的化合物的人受试者中具有至少1天，优选地至少3天，更优选地至少7天，如至少10天的半衰期(如本文中限定的)。可以用于该目的的针对人血清白蛋白的本发明的ISVD的一些非限制性实例是如本文中进一步描述的。
在一个方面，存在于所述本发明的化合物中的所有ISVD或纳米抗体都是本发明的ISVD(意味着它们具有如本文中限定的本发明的VH结构域的特征性氨基酸残基/取代，即至少112K或Q，或至少89T，或至少89L连同110K或110Q)。当本发明的化合物中的所有ISVD都是本发明的ISVD时，它们可以具有相同的取代(例如都具有S112K或S112Q取代)或不同取代(例如，一个可以具有S1112K或S112Q取代，而另一个可以具有V89L突变连同T110K或T110Q)。此外，通常，仅本发明的化合物的C-末端处的ISVD具有C-端延伸(因为其他将可能在其C-末端处与所述化合物中存在的另一个ISVD相连)。
因此，在另一个方面，本发明涉及包含本发明的ISVD或基本由其组成的蛋白质、多肽或其他化合物或分子(如本文中进一步描述的)。
本发明还涉及这样的蛋白质、多肽或其他化合物或分子，其包含至少一个本发明的ISVD和至少一个其他治疗部分或实体(直接相连或经由合适的接头相连)。
本发明还涉及这样的蛋白质、多肽或其他化合物或分子，其包含至少一个针对(人)血清蛋白质(并且优选地针对人血清白蛋白)的本发明的ISVD和至少一个其他治疗部分或实体(直接相连或经由合适的接头相连)。
本发明还涉及这样的蛋白质、多肽或其他化合物或分子，其包含至少两个(如两个、三个或四个)免疫球蛋白单可变结构域(直接相连或经由合适的接头相连)，其中至少一个是本发明的ISVD。在该方面：(i)存在的ISVD可以合适地是相同的或不同的；并且当其不同时，其可以针对相同的靶标(例如，其可以具有不同的序列和/或针对相同的靶标上的不同表位)或针对两个以上不同靶标(即使得所得的蛋白质、多肽或其他化合物或分子是双或多特异性构建体)；和/或(ii)存在于蛋白质、多肽或其他化合物或分子的C-末端的ISVD可以是也可以不是本发明的ISVD(但是优选地是)；和/或(iii)当本发明的ISVD存在于蛋白质、多肽或其他化合物或分子的C-末端时，其优选地具有如本文中所述的C-端延伸；和/或(iv)蛋白质、多肽或其他化合物或分子中存在的基本上所有的ISVD都可以是本发明的ISVD。此外，当ISVD针对不同靶标(其中至少一个是治疗靶标)时，根据另一个方面，存在的ISVD中的至少一个可以针对(人)血清蛋白质如人血清白蛋白(并且该ISVD可以是也可以不是本发明的ISVD；并且当其是本发明的ISVD时，其优选是如本文中进一步描述的针对人血清白蛋白的纳米抗体)。
本发明还涉及这样的蛋白质、多肽或其他化合物或分子，其包含两个免疫球蛋白单可变结构域或基本由其组成(直接相连或经由合适的接头相连)。
本发明还涉及这样的蛋白质、多肽或其他化合物或分子，其包含三个免疫球蛋白单可变结构域或基本由其组成(直接相连或经由合适的接头相连)。
本发明还涉及这样的蛋白质、多肽或其他化合物或分子，其包含四个免疫球蛋白单可变结构域或基本由其组成(直接相连或经由合适的接头相连)。
本发明还涉及这样的蛋白质、多肽或其他化合物或分子，其还包含至少一个部分、结合结构域或结合单元，所述至少一个部分、结合结构域或结合单元给予所述蛋白质、多肽或其他化合物或分子增加的半衰期(即与不具有所述部分、结合结构域或结合单元的相应的蛋白质、多肽或其他化合物或分子相比)。根据更特别的方面，给予所述蛋白质、多肽或其他化合物或分子增加的半衰期的所述至少一个部分、结合结构域或结合单元是免疫球蛋白单可变结构域，更特别地是针对血清蛋白质(如血清白蛋白)，并且特别是针对人血清蛋白质(如人血清白蛋白)的免疫球蛋白单可变结构域；并且如本文中所述的可以特别地是本发明的ISVD。所述针对血清蛋白质的ISVD可以在所述蛋白质、多肽或其他化合物或分子的N-末端、C-末端或(如果所述蛋白质、多肽或其他化合物或分子包含超过两个ISVD)在所述分子的中部。
本发明还涉及这样的蛋白质、多肽或其他化合物或分子，其包含以下或基本由其组成：
-两个免疫球蛋白单可变结构域(直接相连或经由合适的接头相连)，即(所述)一个给予增加的半衰期的免疫球蛋白单可变结构域(如纳米抗体)和另一个可以特别地针对治疗靶标的免疫球蛋白单可变结构域(如纳米抗体)；
-三个免疫球蛋白单可变结构域(直接相连或经由合适的接头相连)，即(所述)一个给予增加的半衰期的免疫球蛋白单可变结构域(如纳米抗体)和另外两个可以特别地针对治疗靶标的免疫球蛋白单可变结构域(如另外两个纳米抗体)(其中所述另外两个免疫球蛋白单可变结构域可以针对相同的靶标，针对两个不同靶标或针对相同的靶标上的两个不同表位)；或
-四个免疫球蛋白单可变结构域(直接相连或经由合适的接头相连)，即(所述)一个给予增加的半衰期的免疫球蛋白单可变结构域(如纳米抗体)和另外两个可以特别地针对治疗靶标的免疫球蛋白单可变结构域(如另外两个纳米抗体)(其中所述另外三个免疫球蛋白单可变结构域可以针对相同的靶标，针对两个或三个不同靶标和/或针对相同的靶标上的两个或三个不同表位)。
同样，在此种蛋白质、多肽或其他化合物或分子中：(i)存在的ISVD可以合适地是相同的或不同的；并且当其不同时，其可以针对相同的靶标(例如，其可以具有不同的序列和/或针对相同的靶标上的不同表位)或针对两个以上不同靶标(即使得所得的蛋白质、多肽或其他化合物或分子是双或多特异性构建体)；和/或(ii)所述蛋白质、多肽或其他化合物或分子的C-末端处存在的ISVD可以是也可以不是本发明的ISVD(但是优选地是)；和/或(iii)当本发明的ISVD存在于所述蛋白质、多肽或其他化合物或分子的C-末端时，其优选地具有如本文中所述的C-端延伸；和/或(iv)所述蛋白质、多肽或其他化合物或分子中存在的基本上所有ISVD都可以是本发明的ISVD。
本发明还涉及用于表达/生产/制备本发明的VH结构域和本发明的化合物的方法(如本文中进一步描述的)。例如，本发明的VH结构域可以通过在合适的宿主生物中合适地表达编码其的核酸来表达/生产。参考例如WO 08/020079(以及本文中引用的申请人/受让人的一些其他专利申请)，其一般地描述了适用于表达/生产纳米抗体的方法和技术，所述方法也可以适用于表达/生产本发明的纳米抗体。基于本公开和本文中引用的现有技术，用于表达除纳米抗体以外的本发明的VH结构域的方法对于技术人员也将是清楚的。本发明的化合物可以合适地通过以下方式生产/制备：合适地将一个或多个本发明的VH结构域连接(通常经由共价键)至一个或多个存在于最终的本发明的化合物中的另外的氨基酸残基(和/或其他基团或部分)，任选地经由一个或多个接头或间隔区。备选地，当本发明的化合物是蛋白质或多肽时，其可以通过合适地在合适的宿主生物中表达编码其的核酸来生产/制备。同样参考例如WO 08/020079和本文中引用的申请人/受让人的一些其他专利申请中描述的一般性方法。
本发明还涉及编码本发明的VH结构域或本发明的化合物的核苷酸序列和/或核酸。此种核酸可以是DNA或RNA；并且优选是DNA并且可以是质粒或载体的形式。同样参考例如WO 08/020079和本文中引用的申请人/受让人的一些其他专利申请中描述的一般性方法。
本发明还涉及组合物，所述组合物包含至少一个本发明的VH结构域，本发明的化合物或编码其中任一的核酸。
本发明还涉及药物组合物，所述药物组合物包含ISV(并且优选地治疗性ISV)或包含至少一个ISV(并且优选地至少一个治疗性ISV)的蛋白质或多肽，其中所述ISV、蛋白质或多肽是如本文中进一步描述的(即根据本文中所述的一个或多个方面，并且特别是根据前文中所述的一个或多个方面的ISV、蛋白质或多肽；并且更特别是具有根据本文中所述的一个或多个方面的C-末端/序列的ISV、蛋白质或多肽)，和至少一个合适的载体、稀释剂或赋形剂(即适用于药物用途)，和任选地一个或多个另外的活性物质。此种组合物、载体、稀释剂或赋形剂可以例如是如WO 08/020079中对于包含纳米抗体或包含至少一个纳米抗体的蛋白质或多肽(并且如已经提及的，根据本发明，ISV也优选是纳米抗体)的药物组合物所述的。
本发明还涉及用于治疗人类(例如需要此种治疗的患者)中的疾病的ISV或包含至少一个ISV的蛋白质或多肽，其中所述ISV、蛋白质或多肽是如本文中进一步描述的(即根据本文中所述的一个或多个方面，并且特别是根据前文中所述的一个或多个方面的ISV、蛋白质或多肽；并且更特别是具有根据本文中所述的一个或多个方面的C-末端/序列的ISV、蛋白质或多肽)。
本发明还涉及ISV或包含至少一个ISV的蛋白质或多肽用于制备药物组合物的用途，其中所述ISV、蛋白质或多肽是如本文中进一步描述的(即根据本文中所述的一个或多个方面，并且特别是根据前文中所述的一个或多个方面的ISV、蛋白质或多肽；并且更特别是具有根据本文中所述的一个或多个方面的C-末端/序列的ISV、蛋白质或多肽)。
本发明还涉及治疗方法，所述方法包括向人受试者(例如需要此种治疗的患者)施用用于制备药物组合物的ISV或包含至少一个ISV的蛋白质或多肽，其中所述ISV、蛋白质或多肽是如本文中进一步描述的(即根据本文中所述的一个或多个方面，并且特别是根据前文中所述的一个或多个方面的ISV、蛋白质或多肽；并且更特别是具有根据本文中所述的一个或多个方面的C-末端/序列的ISV、蛋白质或多肽)；或施用包含至少一个此种ISV、蛋白质或多肽的药物组合物(如上所述的)。
关于以上，清楚的是，本文中所述的ISV、蛋白质和多肽的治疗用途是本发明的非常重要的方面，因为此种治疗用途(或此种ISV、蛋白质和多肽用于此种治疗用途的临床开发)可以涉及使用ADA测定以确定所述ISV、蛋白质或多肽是否是免疫原性的(即当施用于人受试者时，可能导致ADA)。关于此，同样清楚的是，当治疗剂被长期使用(达数周、数月或数年)，和/或在人受试者具有至少3天，如至少一周，并且多至10天以上的半衰期(优选地表示为t1/2-β)时，将特别需要解决关于可能的免疫原性的问题。
因此，根据一个具体方面，本发明涉及如本文中所述的本发明的ISV、蛋白质、多肽、化合物或分子(或其药物组合物)，其意在用于治疗人类中的慢性疾病，和/或意在使如本文中所述的此种ISV、蛋白质、多肽存在于施用有(即以治疗活性剂量)所述ISV、蛋白质、多肽达至少一周、优选地至少两周如至少数月时间的受试者的循环中(即以药理学活性水平)；和/或如本文中所述的此种ISV、蛋白质、多肽是这样的，以致其在人受试者中具有至少3天如至少一周并且多至10天以上的半衰期(优选地表示为t1/2-β)；和/或意在将如本文中所述的此种ISV、蛋白质、多肽或药物组合物作为两个以上的剂量施用于人类，所述两个以上的剂量在至少3天如至少一周例如至少两周或至少一个月或甚至更长的时间(即至少3个月、至少6个月或至少一年)内施用，或甚至被长期施用。
此外，如基于本文的公开内容对于技术人员来说将是清楚的，对本文中所述的VH结构域的改进和所得的改进的VH结构域将尤其可用于意在被施用于人受试者(并且特别是患者)的蛋白质、多肽或其他化合物或分子中，所述人受试者(并且特别是患者)的血液/血清包含(或被怀疑包含)根据本发明在获自SLE患者的样品中发现的类型的预先存在的抗体，即，即使在如本文中所述的C-端延伸存在下也可以与VH-结构域的C-端区域结合的预先存在的抗体。特别地，对本文中所述的VH结构域的改进和所得的改进的VH结构域将尤其可用于意在用于治疗或预防此种患者中的疾病或病症的蛋白质、多肽或其他化合物或分子中。这可以是任何疾病或病症，但是可以特别地是导致此种预先存在的抗体存在或出现和/或与此种预先存在的抗体的存在或出现相关联的疾病或病症(一个实例是SLE，但是预期的是，其他严重(自体)-免疫病也可以导致此种预先存在的抗体。这可以通过以下方式容易的确定：测试获自相关患者群体的样品是否存在此种预先存在的抗体，尤其是以与以下实验部分中对来自SLE患者的样品进行的测试类似的方式)。
因此，根据一个具体方面，本发明涉及如本文中所述的本发明的ISV、蛋白质、多肽，化合物或分子(或其药物组合物)，其意在被施用于人受试者，所述人受试者的血液包含预先存在的抗体，所述预先存在的抗体即使在所述VH-结构域包含如本文中所述的C-端延伸(或其中VH结构域的C-末端任选地经由合适的接头连接至另一个蛋白质或多肽，如另一个ISV)时也可以结合VH结构域的暴露的C-端区域。
特别地，本发明涉及如本文中所述的本发明的ISV、蛋白质、多肽，化合物或分子(或其药物组合物)，其用于治疗人受试者中的疾病或病症，所述人受试者的血液包含预先存在的抗体，所述预先存在的抗体即使在所述VH-结构域包含如本文中所述的C-端延伸(或其中VH结构域的C-末端任选地经由合适的接头连接至另一个蛋白质或多肽，如另一个ISV)时也可以结合VH结构域的暴露的C-端区域。所述疾病或病症可以是任何疾病或病症，但是可以特别地是使得、导致在此种患者的血液中出现此种预先存在的抗体或与其相关联的疾病或病症，如SLE或其他(严重的)自体免疫病。
因此，根据更特别的方面，本发明涉及如本文中所述的本发明的ISV、蛋白质、多肽，化合物或分子(或其药物组合物)，其用于治疗人受试者/患者中的疾病或病症，其中所述疾病或病症是使得、导致在所述人受试者/患者的血液中出现预先存在的抗体或与其相关联的疾病或病症，所述预先存在的抗体即使在所述VH-结构域包含如本文中所述的C-端延伸(或其中VH结构域的C-末端任选地经由合适的接头连接至另一个蛋白质或多肽，如另一个ISV)时也可以结合VH结构域的暴露的C-端区域。例如，如本文中所述的此种本发明的ISV、蛋白质、多肽，化合物或分子(或其药物组合物)用于治疗人受试者/患者中的SLE或其他(严重的)自体免疫病。
如对于技术人员是清楚的，当打算将蛋白质、多肽，化合物或分子用于预防或治疗此种疾病或病症时，其将含有至少一个(如一个、两个、三个或四个)对相关疾病或病症(例如对与相关疾病或病症治疗相关的靶标或途径)具有治疗活性的结构域、结合单元或部分或实体。同样，此种结合结构域或结合单元可以例如是(其他)ISVD，并且根据一个方面，可以特别地是本发明的VH结构域或ISVD。此种蛋白质、多肽，化合物或分子另一个一般性实例是这样的蛋白质、多肽，化合物或分子，其中所述一个或多个治疗结构域、结合单元或部分或实体可以不是ISVD(但是例如来源于另一种支架(scaffold))，但是包含本发明的VH结构域以延长其半衰期(如血清白蛋白结合物，如本文中所述)。
在另一个方面，本发明的VH结构域、ISVD或化合物(如本文中所述的)是针对离子通道Kv1.3。此种VH结构域、ISVD或化合物的一些优选的而非限制性的实例在实施例7中给出，并且所述实施例中描述的针对Kv1.3的VH结构域(以及包含其的本发明的化合物)以及所述实施例中描述的针对Kv1.3的具体的本发明的化合物形成本发明的另外的方面。
举例来说而非限制，指向Kv1.3的本发明的化合物可以包含单个针对Kv1.3的本发明的VH结构域(并且优选地是纳米抗体)或由其组成或可以包含至少两个(如两个或三个)针对Kv1.3的本发明的VH结构域(并且优选是纳米抗体)或由其组成。当此种多肽包含两个以上针对Kv1.3的本发明的VH结构域时，这些VH结构域可以是相同的或不同的，并且当其不同时，其可以针对相同的Kv1.3上的表位或Kv1.3上的亚基或针对不同表位或亚基。
同样，如本文中对于本发明的化合物一般所述的，此种化合物可以合适地含有一个或多个接头，可以含有C-端延伸(即如本文中进一步描述的)并且也可以含有一个或多个另外的结合单元或结合结构域(或其他氨基酸序列或部分)，如另外的针对不同于Kv1.3的靶标的ISVD。举例来说而非限制，本发明的化合物可以(也)含有提供延长的半衰期的结合结构域或结合单元，如针对血清蛋白质如血清白蛋白的ISVD(例如，针对人血清白蛋白的纳米抗体如针对人血清白蛋白的本发明的纳米抗体)。
在另外的方面，本发明涉及如本文中所述的免疫球蛋白可变结构域序列的(合成)文库(即含有如本文中所述的氨基酸残基/突变/取代)。此种文库通常将含有至少100个不同的序列，如至少1000个不同的序列，特别地超过105个不同的序列，更特别地超过106个不同的序列，如108至1010或更多个不同的序列(其最广义地具有序列之间具有至少一个氨基酸差异)，通常都具有(基本上)相同的框架序列(所述框架序列含有本文中所指出的氨基酸残基/突变)和不同CDR(意味着文库中的各序列与文库中的其他序列相比在其至少一个CDR中具有至少“一个氨基酸差异”)。
免疫球蛋白单可变结构域序列的合成的文库(例如基于人VH序列或来源于骆驼科的VHH序列)和产生/构建其(包括基于预先确定的支架和/或在框架区中包含一个或多个特定氨基酸残基/突变的文库)的方法是本领域中已知的。参考例如Tanha等,J.Biol.Chem.,Vol.276,pp.24774–24780,2001；Bond等,J.Mol.Biol.(2003)332,643–655；Mandrup等,PLOS One,2013年10月,卷8,第10期,e76834；Goldman等,Anal.Chem.,2006,78,8245-8255；Hussak等,Protein Engineering,Design&Selection vol.25no.6pp.313–318,2012；以及Chen等,Methods Mol.Biol.,2009,525,81。其中描述的技术(及本身已知的类似技术)可以被合适地用于或适用于产生根据本发明的免疫球蛋白单可变结构域文库。
存在于此种文库中的ISVD可以合适地含有来自任何合适来源的任何合适的CDR，如由“首次用于实验的”哺乳动物的免疫库(repertoire)开始获得/产生的CDR(如骆驼科物种或人序列)，已被抗原合适地免疫的由来自动物(如骆驼科物种)的免疫库开始获得/产生的CDR；完全合成的CDR库；或通过技术如诱变(例如随机诱变或定点诱变)获得的库。此种文库可以例如也是在本身已知的亲和力成熟过程中产生的文库。
存在于此种文库中的ISVD的框架区可以合适地来源于任何合适的起始序列/支架，例如基于由VH序列(如人VH序列)开始或由纳米抗体序列(如VHH序列或人源化的VH序列)开始获得的支架。还可能的是，文库包含来源于两个以上不同来源或基于两个以上不同支架的ISVD(例如，因为文库通过将获得自不同来源或基于不同支架的两个以上的文库合并而获得)。
此外，所述文库(中存在的ISVD)可以是蛋白质的形式或编码相关ISVD的DNA或RNA的形式。例如，文库可以是适合于筛选和/或选择技术的表达文库的形式，并且为此，可以例如是可以使用合适的展示技术展示的形式，如噬菌体展示文库、酵母展示文库或核糖体展示文库。
因此，通常，本发明还涉及包含本发明的VH结构域(如本文中进一步所述的)的文库(如本文中所述的)。优选地，根据此种文库的一个具体方面，存在的VH结构域都具有相同的(或基本相同的)框架序列，但是具有不同的CDR序列(同样，如提及的，这意味着文库中的各个体VH结构域与文库中的其他VH结构域相比在至少一个CDR中具有至少一个氨基酸差异)。
在一个方面，本发明的此种文库是本发明的ISVD的文库(如本文中进一步描述的，包括编码所述ISVD的合适的核酸的文库)，其中：
-位置11处的氨基酸残基是L、V或K中的一个；并且
-位置14处的氨基酸残基是A或P中的一个；并且
-位置41处的氨基酸残基是A或P中的一个；并且
-位置89处的氨基酸残基是T、V或L中的一个；并且
-位置108处的氨基酸残基是Q或L中的一个；并且
-位置110处的氨基酸残基是T、K或Q中的一个；并且
-位置112处的氨基酸残基是S、K或Q中的一个；
其中(i)位置112处的氨基酸残基是K或Q中的一个；和/或(ii)位置89处的氨基酸残基是T；和/或(iii)位置89处的氨基酸残基是L并且位置110处的氨基酸残基是K或Q中的一个；并且(iv)在情况(i)至(iii)中的每一种中，位置11处的氨基酸优选是V。任选地，存在于此种文库中的ISVD还可以含有C-端延伸(如本文中对于本发明的VH结构域进一步描述的)和/或合适地含有合适的标签(如组氨酸标签)。
在另一个方面，本发明的此种文库是本发明的ISVD的文库(如本文中进一步描述的，包括编码所述ISVD的合适的核酸的文库)，其中：
-位置11处的氨基酸残基是V；并且
-位置14处的氨基酸残基是A或P中的一个；并且
-位置41处的氨基酸残基是A或P中的一个；并且
-位置89处的氨基酸残基是一个L；并且
-位置108处的氨基酸残基是Q或L中的一个；并且
-位置110处的氨基酸残基是T、K或Q中的一个；并且
-位置112处的氨基酸残基是S、K或Q中的一个；
任选地，存在于此种文库中的ISVD还可以含有C-端延伸(如本文中对于本发明的VH结构域进一步描述的)和/或合适地含有合适的标签(如组氨酸标签)。
本发明的文库可以用于任何本身已知的合适的/有意的用途。例如，其可以例如用于筛选和/或选择用途(或作为筛选和/或选择方法的一部分)，用于/用作亲合力成熟用途或意在产生改进的VH结构域的其他方法的一部分，或例如用于丙氨酸扫描。实际上，通常，文库的大小、设计及其他特征将适应于其目的用途，这将在技术人员的技能之内。
现在将借助以下非限制性的优选方面、实施例和附图来进一步描述本发明，其中：
-图1是表，其列出了将在本文中被具体提及的一些氨基酸位置及其根据一些备选编号系统(如Aho和IMGT)的编号；
-图2列出了本文中提及的序列；
-图3是这样的图，其显示在实施例4中当测试96个血清样品的与不具有S112K突变的参比纳米抗体(参比A，SEQ ID NO:44，图3中指示为(1))相比的对具有S112K突变的代表性纳米抗体(参比A+S 112K+C-端丙氨酸，图3中指示为(2))的结合时获得的数据点；
-图4是这样的图，其显示在实施例4中当测试129个血清样品的与不具有V89T突变的参比纳米抗体(参比A，SEQ ID NO:44，图4中指示为(1))相比的对具有V89T突变的代表性纳米抗体(参比A+L11V+V89T+C-端丙氨酸，图4中指示为(2))的结合时获得的数据点；
-图5是这样的图，其显示在实施例5中当测试100个血清样品的与不具有以下突变中的任一种的参比纳米抗体(参比A，SEQ ID NO:44，图5中指示为(1))相比的对具有V89L、T110K和/或T110Q突变的代表性纳米抗体(参比A+L11V+V89L+C-端Ala，图5中指示为(2)；参比A+L11V+V89L+T110K+C-端Ala，图5中指示为(3)；参比A+L11V+V89L+T110Q+C-端Ala，图(5)中指示为(4)，以及参比A+L11V+T87A+V89L+C-端Ala，图5中指示为(5))的结合时获得的数据点。
-图6是这样的图，其显示在实施例6中当测试获得自健康受试者的98个血清样品的对代表性三价纳米抗体构建体的结合时获得的数据点。各点表示通过测试针对98个血清样品之一的指定的构建体收集的数据点。图例：(1)＝参比X(纳米抗体A-35GS-纳米抗体A-35GS-纳米抗体B)；(2)＝参比X+C-端Ala；(3)＝参比X+L11V+V89L+C-端Ala；(4)＝参比X+L11V+T87A+V89L+C-端Ala；(5)＝参比X+L11V+V89L+T110K+C-端Ala；(6)＝参比X+L11V+V89L+T110Q+C-端Ala。
-图7是这样的图，其显示在实施例6中当测试获得自健康受试者的30个血清样品(选择样品使得即使在C-端丙氨酸延伸存在下预先存在的抗体也具有高的效价或也存在具有高度结合的预先存在的抗体)的对代表性三价纳米抗体构建体的结合时获得的数据点。各点表示通过测试针对30个血清样品之一的指定的构建体收集的数据点。图例：(1)＝参比X+C-端Ala；(2)＝参比X+L11V+V89L+C-端Ala；(4)＝参比X+L11V+T87A+V89L+C-端Ala；(4)＝参比X+L11V+V89L+T110K+C-端Ala。
-图8是这样的图，其显示在实施例6中当测试获得自健康受试者的98个血清样品的对代表性二价纳米抗体构建体的结合时获得的数据点。各点表示通过测试针对30个血清样品之一的指定的构建体收集的数据点。图例：(1)＝参比Y(纳米抗体A-35GS-纳米抗体B)；(2)＝参比Y+C-端Ala；(3)＝参比Y+L11V+V89L+C-端Ala；(4)＝参比Y+L11V+T87A+V89L+C-端Ala；(5)＝参比Y+L11V+V89L+T110K+C-端Ala；(6)＝参比Y+L11V+V89L+T110Q+C-端Ala；
-图9A和9B显示针对离子通道Kv1.3的本发明的单价纳米抗体(图9A)和本发明的三价双特异性半衰期延长的化合物(图9B)的优选的而非限制性的实例；并且图9C列出了针对Kv1.3的ISVD的一些优选的CDR(分别根据Kabat和Abm分类)。
-图10是这样的图，其显示在实施例7中当测试获得自糖尿病人受试者的47个血清样品的对代表性的针对Kv1.3的本发明的三价双特异性半衰期延长的化合物的结合时获得的数据点。各点表示通过测试针对47个血清样品之一的指定的构建体收集的数据点。SEQID NO指示图9中列出的相关序列；
-图11是这样的图，其显示在实施例7时当测试来自健康志愿者的90个血清样品的对代表性的针对Kv1.3的本发明的三价双特异性半衰期延长的化合物的结合时获得的数据点。各点表示通过测试针对47个血清样品之一的指定的构建体收集的数据点。SEQ ID NO指示图9中列出的相关序列；
-图12A和12B列出了基于指定的参比序列的针对IL-23的本发明的纳米抗体的一些优选的而非限制性的实例的CDR和氨基酸序列(amino sequences)。也参见实施例8；
-图13列出了基于指定的参比序列的针对OX40-L的本发明的纳米抗体的一些优选的而非限制性的实例的CDR和氨基酸序列。也参见实施例9；
-图14列出了基于指定的参比序列的针对IgE的本发明的纳米抗体的一些优选的而非限制性的实例的CDR和氨基酸序列。也参见实施例10；
-图15A和15B列出了基于指定的参比序列的针对CXCR-4的本发明的纳米抗体的一些优选的而非限制性的实例的CDR和氨基酸序列。也参见实施例11；
-图16A和16B列出了基于指定的参比序列的针对HER-3的本发明的纳米抗体的一些优选的而非限制性的实例的CDR和氨基酸序列。也参见实施例12；
-图17A和17B列出了基于指定的参比序列的针对TNF的本发明的纳米抗体的一些优选的而非限制性的实例的CDR和氨基酸序列。也参见实施例13和14；
-图18A和18B列出了基于指定的参比序列的针对c-Met的本发明的纳米抗体的一些优选的而非限制性的实例的CDR和氨基酸序列。也参见实施例15；
-图19列出了基于指定的参比序列的针对RANK-L的本发明的纳米抗体的一些优选的而非限制性的实例的CDR和氨基酸序列。也参见实施例16；
-图20A至20C列出了基于指定的参比序列的针对CXCR-7的本发明的纳米抗体的一些优选的而非限制性的实例的CDR和氨基酸序列。也参见实施例17；
-图21A和21B列出了基于指定的参比序列的针对A-β的本发明的纳米抗体的一些优选的而非限制性的实例的CDR和氨基酸序列。也参见实施例18；
-图22给出了针对IL-23的本发明的化合物的一些优选的而非限制性的实例的氨基酸序列；
-图23给出了针对OX40-L的本发明的化合物的一些优选的而非限制性的实例的氨基酸序列；
-图24给出了针对IgE的本发明的化合物的一些优选的而非限制性的实例的氨基酸序列；
-图25给出了针对CXCR-4的本发明的化合物的一些优选的而非限制性的实例的氨基酸序列；
-图26给出了针对HER-3的本发明的化合物的一些优选的而非限制性的实例的氨基酸序列；
-图27给出了针对TNF的本发明的化合物的一些优选的而非限制性的实例的氨基酸序列；
-图28A和28B给出了针对c-Met的本发明的化合物的一些优选的而非限制性的实例的氨基酸序列；
-图29给出了针对RANK-L的本发明的化合物的一些优选的而非限制性的实例的氨基酸序列；
-图30给出了针对A-β的本发明的化合物的一些优选的而非限制性的实例的氨基酸序列；
-图31A是这样的图，其显示在实施例19中当测试获得自健康志愿者的92个血清样品的对代表性的针对A-β的本发明的三价双特异性半衰期延长的化合物的结合时获得的数据点。各点表示通过测试针对92个血清样品之一的指定的构建体收集的数据点。参比编号是如表CC-1中所列出的。类似地，图30B是这样的图，其显示在实施例19中当测试获得自健康志愿者的92个血清样品的对存在于图31A中测试的构建体中的(单价)C-端纳米抗体的结合时获得的数据点。各点表示通过测试针对92个血清样品之一的指定的构建体收集的数据点。参比编号是如表CC-2中所列出的。
实验部分
以下实验部分中使用的人样品获得自商业来源或人志愿者(在获得所有必需的同意和批准后)并且根据适用的法律和法规要求(包括但不限于关于医疗秘密和患者隐私的那些)使用。
在以下实施例中，使用ProteOn如下确定存在于所用样品中的预先存在的抗体(即来自健康志愿者、类风湿性关节炎(RA)患者和SLE患者)与测试的纳米抗体的结合：使用ProteOn XPR36(Bio-Rad Laboratories,Inc.)评估预先存在的抗体与被捕获在人血清白蛋白(HSA)上的纳米抗体的结合。PBS/吐温(磷酸缓冲盐水，pH7.4，0.005％吐温20)用作运转缓冲液并且实验在25℃进行。ProteOn GLC Sensor Chip的配体道用EDC/NHS(流速30μl/min)活化并且在ProteOn乙酸缓冲液pH4.5中以10μg/ml注入HSA(流速100μl/min)以提供约3200RU的固定水平。在固定后，用乙醇胺HCl(流速30μl/min)使表面钝化。用2分钟以45μl/min在HSA表面上注射纳米抗体以提供约200RU的纳米抗体捕获水平。将含预先存在的抗体的样品以14,000rpm离心2分钟并将上清液1:10稀释在PBS-吐温20(0.005％)中，之后将其以45μl/min注射2分钟，之后是400秒的离解步骤。在各循环后(即在新的纳米抗体捕获和血液样品注入步骤前)，通过以45μl/min注射2分钟的HCl(100mM)来使HAS表面复原。传感图处理和数据分析利用ProteOn Manager 3.1.0(Bio-Rad Laboratories,Inc.)进行。在通过减去1)纳米抗体-HSA离解和2)与参比配体道的非特异性结合的双重参照后获得显示预先存在的抗体结合的传感图。预先存在的抗体的结合水平通过在125秒(结合完成后5秒)设置报告点来确定。计算相对于参比纳米抗体在125秒的结合水平的预先存在的抗体结合的降低百分数。
实施例1：S112K突变抑制预先存在的抗体的结合
确定位置112处的取代对人样品中的预先存在的抗体与纳米抗体的结合的影响，并且将其与如WO 12/175741中所述的C-端丙氨酸延伸的影响相比。
针对获得自六名不同RA患者的血清和八份获得自不同健康人受试者的血清，测试两个参比化合物(不具有C-端丙氨酸延伸的参比A和具有C-端丙氨酸延伸的参比B)和在位置112处具有不同突变的这些参比化合物的变体。在ProteOn上根据上述一般方法，测量样品中的预先存在的抗体与测试的纳米抗体的结合。结果显示在下表A中。
如可见的，在测试的位置112处的突变中，S112K突变导致的存在于测试的血清中的预先存在的抗体的结合下降与C-端丙氨酸延伸的相当(即使在S112K变体中不存在C-端丙氨酸延伸的情况下)。在三份人血浆样品的情况下获得类似结果(数据未显示)。
实施例2：S112K突变对存在于人SLE样品中的预先存在的抗体的结合的影响
测试与实施例1中所用相同的纳米抗体变体与来自7份血清样品的预先存在的抗体的结合，所述血清样品获自被确认为系统性红斑狼疮(SLE)阳性的患者。为了进行比较，包括来自两个健康人志愿者的血浆样品。
在ProteOn上根据上述一般方法，测量样品中预先存在的抗体与测试的纳米抗体的结合。结果显示在下表B中。
如由参比A和参比B与本发明的纳米抗体的结合数据的比较可见的，获得自一些SLE患者的样品表现为含有即使在存在C-端丙氨酸残基的情况下仍然可以与纳米抗体结合的某些预先存在的抗体(C-端丙氨酸残基确实基本上防止/除去(部分地或基本上完全地)存在于来自健康受试者的血浆样品中的预先存在的抗体的全部结合)。
进一步可见的是，来自SLE样品的这些预先存在的抗体的结合可以被位置11和112处的突变(并且在位置112的情况中，特别地是S112K)极大地减小。
实施例3：组合的框架突变和C-端延伸对存在于人SLE样品中的预先存在的抗体的
结合的影响
测试四种不同纳米抗体(具有特定的框架突变并且具有或不具有C-端丙氨酸延伸)的对来自5个血清样品的预先存在的抗体的结合，所述血清样品获自被确认为系统性红斑狼疮(SLE)阳性的患者。为了比较，包括一份来自健康人志愿者的血浆样品。
在ProteOn上根据上述一般方法，测量样品中预先存在的抗体与测试的纳米抗体的结合。结果显示在下表C和D中。
如由参比A和参比B的结合数据的比较可见的，获自SLE患者的样品表现为含有即使在存在C-端丙氨酸残基的情况下仍然可以与纳米抗体结合的某些预先存在的抗体(C-端丙氨酸残基确实基本上防止/除去存在于来自健康志愿者的血浆样品中的预先存在的抗体的全部结合)。
还可见的是，来自SLE样品的这些预先存在的抗体的结合可以被位置11和112处的突变(并且在位置112的情况中，特别地是S112K)极大地减小。
实施例4：V89T突变对来自SLE患者的样品中的预先存在的抗体的结合的影响。
如本文中所述的，获自某些SLE患者的样品表现为含有即使在C-端延伸存在时仍然可以结合VH结构域的暴露的C-末端的预先存在的抗体/因子。研究V89T突变是否能够减少或防止/去除此种结合(在存在C-端延伸的情况下或在不存在C-端延伸的情况下)。结合也显示在下表C和E中。
如可见的，V89T突变能够基本上防止/去除存在于获自SLE患者的样品中的预先存在的抗体的结合，程度与S112K突变类似。然而，如由表C和E中给出的具有V89T突变而不具有C-端延伸的纳米抗体与具有S112K突变而不具有C-端延伸的类似纳米抗体的比较数据可见的，具有在纳米抗体中的位置112处的突变而不具有C-端延伸通常以与V89T突变相比更大的程度减少来自健康志愿者的样品中的预先存在的抗体的结合(即S112K纳米抗体分别为100％、85％和64％而V89T纳米抗体分别为9％、11％和16％)。因此，与使用位置89处的突变(如V89T)相比，使用位置112处的突变(并且特别是S112K或S112K)通常是优选的。
然而，如也可以由表C和E中的数据看出的，向V89T纳米抗体添加C-端丙氨酸完全防止/去除获自健康志愿者的样品中的预先存在的抗体的结合，并且因此，V89T突变与如本文中所述的C-端延伸组合通常将是优选的(即与在没有C-端延伸的情况下使用V89T相比)，如果V89T纳米抗体或VH结构域具有，或意图具有，其将存在于其中的蛋白质或多肽中的暴露的C-端区域(例如，因为如果形成其C-末端)。
为了确认上表的结果/发现是广泛适用的，针对96(S112k)和129(V89T)人血清样品的测试组对具有S112K和/或V89T突变的代表性纳米抗体进行测试。在ProteOn上使用上述方法确定结合。
结果总结于图3和表F(具有S112K突变的代表性纳米抗体)和图4和表G(具有V89T突变的代表性纳米抗体)中。
在图3中，将具有S112K突变的纳米抗体(参比A+S112K+C-端丙氨酸–参见上表C)与参比纳米抗体(参比A；SEQ ID NO:44)相比。针对每种血清样品对具有S112K突变的纳米抗体和参比A两者进行测试，并且确定在125秒的结合水平(RU)。然后将数据作图于图3中，每个点显示参比A(图3中指示为(1))或S112K突变体(图3中指示为(2))的一个样品的结合。虚线指示测量的结合水平为20RU。
相同的数据也用数字显示在表F中，表F对于参比A和S112K突变体分别提及在125秒给出超过20RU、小于20RU(即0至20RU)和小于10RU的结合水平的测试的样品总数。
如由图3中绘制的和表F中显示的数据可见的，对于参比A，测试的96个样品中超过半数给出超过20RU的结合水平(在某些情况中，高至150-200RU)，指示存在于样品中的预先存在的抗体结合至参比A。通过比较，对于S112K突变体，没有样品给出超过20RU的结合水平(并且大部分小于10RU)，指示S122K突变基本上能够减少/防止所有96个测试的样品中的预先存在的抗体的结合。
类似的图和类似的数据分别显示在图4和表G中，对于具有V89T突变的代表性纳米抗体(参比A+L11V+V89T+C-端丙氨酸；参见上表E)，针对129个血清样品进行测试并且同样相比于参比A(图4中由(1)指示；在图4中，V89T突变体由(2)指示)。同样，根据图4中的图和表G的数据，可以看出的是，在几乎没有例外的情况下(即小于10％的测试的样品，其在125秒后各自给出约100RU以下的绝对结合值)，在129个测试的样品的大部分中，V89T突变能够减少/防止预先存在的抗体的结合，而在大部分测试的样品中，不具有V89T突变的参比被预先存在的抗体结合。
表F：针对96个血清样品测试具有S112K突变的代表性纳米抗体。
表G：针对129个血清样品测试具有V89L和/或T100K/Q突变的纳米抗体突变体。
实施例5：V89L突变与T110K或T110Q突变的组合对来自SLE患者的样品中的预先存
在的抗体的结合的影响。
如本文中所述的，获自某些SLE患者的样品表现为含有即使在C-端延伸存在时仍然可以结合VH结构域的暴露的C-末端的预先存在的抗体/因子。研究V89L和/或T110Q或T110K突变(或其组合)是否能够减少或防止/去除此种结合(在存在或不存在C-端延伸的情况下)。结果也显示在表H和I中，所述表给出来自两个单独实验的数据(上表D也显示本发明的S112Q突变与V89L突变的组合的数据)。表I中使用的纳米抗体也被用于产生图5和表J中显示的数据。
为了确认来自上表的结果/发现是广泛适用的，同样针对一组99个人血清样品测试具有V89L、T110K和/或T110Q突变的代表性纳米抗体。同样获得结合数据并且将其如实施例4中对于图3和4和表F和G中显示的结果和数据所指出的那样作图。
测试的纳米抗体是(编号对应于图5中使用的编号)：(1)参比A；(2)参比A+L11V+V89L+C-端Ala；(3)参比A+L11V+V89L+T110K+C-端Ala；(4)参比A+L11V+V89L+T110Q+C-端Ala；(5)参比A+L11V+T87A+V89L+C-端Ala。结果显示在图5和表I中。
如可见的，引入测试的突变同样极大地减少其中预先存在的抗体能够结合测试的纳米抗体的样品的数目。也可以看出的是，对于图5中的纳米抗体(2)(参比A+L11V+V89L+C-端Ala)，在125秒后仍然有一些样品显示超过20RU(但是已经远小于100RU)的预先存在的抗体结合水平。然而，当将V89L突变与T110K突变(纳米抗体(3))或T100Q突变(纳米抗体(4))组合时，则基本上全部的99个测试的样品都显示小于20RU的结合水平(并且实际上小于10RU，参见表J)。
表J：针对99个血清样品测试具有V89L、T110K和/或T110Q突变的代表性纳米抗体。
实施例6：测试多价构建体与预先存在的抗体结合
基于以下纳米抗体制备多价构建体：
纳米抗体A(针对治疗靶标)：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFNNYAMGWFRQAPGKEREFVAAITRSGVRSGVSAIYGDSVKDRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCAASAIGSGALRRFEYDYSGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：92)
纳米抗体B(针对血清白蛋白)：
EVQLVESGGGLVQPGNSLRLSCAASGFTFSSFGMSWVRQAPGKGLEWVSSISGSGSDTLYADSVKGRFTISRDNAKTTLYLQMNSLRPEDTAVYYCTIGGSLSRSSQGTLVTVSS(SEQ ID NO：93)
纳米抗体C(针对治疗靶标)：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASRSIGRLDRMGWYRHRPGEPRELVATITGGSSINYGDSVKGRFTISIDNSKNTVYLQMNSLRPEDTAVYYCNFNKYVTSRDTWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：94)
制备的构建体列于下表K中(在每种情况中，相关纳米抗体中引入的取代(如果存在的话)在括号中提及。“HIS6”表示N-端6个组氨酸残基的his-标签，并且“-Ala”表示C-端1个丙氨酸残基的延伸)。
表K：测试的多价构建体
| HIS6-纳米抗体A(E1D，L11V，S112K)-35GS-纳米抗体B-Ala |
| HIS6-纳米抗体A(E1D，L11V，S112K)-35GS-纳米抗体B(L11V，S112K)-Ala |
| HIS6-纳米抗体A(E1D)-35GS-纳米抗体B |
| HIS6-纳米抗体A(E1D)-35GS-纳米抗体B-Ala |
| HIS6-纳米抗体A(E1D，L11V，S112K)-35GS-纳米抗体B(L11V，S112K) |
| HIS6-纳米抗体A(E1D，S112K)-35GS-纳米抗体B(S112K)-Ala |
| HIS6-纳米抗体A(E1D，S112Q)-35GS-纳米抗体B(S112Q)-Ala |
| HIS6-纳米抗体A(E1D，V89L，S112K)-35GS-纳米抗体B(V89L，S112K)-Ala |
| HIS6-纳米抗体A(E1D，L11V，S112Q)-35GS-纳米抗体B(L11V，S112Q)-Ala |
| HIS6-纳米抗体B(E1D)-35GS-纳米抗体A |
| HIS6-纳米抗体B(E1D)-35GS-纳米抗体A-Ala |
| HIS6-纳米抗体A(E1D)-35GS-纳米抗体B(L11V，S112K)-Ala |
| HIS6-纳米抗体B(E1D，L11V，S112K)-35GS-纳米抗体A-Ala |
| HIS6-纳米抗体B(E1D，)-35GS-纳米抗体A(L11V，S112K)-Ala |
| HIS6-纳米抗体A(E1D，V89L，S112Q)-35GS-纳米抗体B(V89L，S112Q)-Ala |
| HIS6-纳米抗体B(E1D，L11V，S112K)-35GS-纳米抗体A(L11V，S112K)-Ala |
| HIS6-纳米抗体B(S112K)-Ala |
| 纳米抗体B(L11V，S112K)-Ala |
| 纳米抗体B(L11V，S112Q)-Ala |
| 纳米抗体B(S112Q)-Ala |
表K(续)
表K(续)
针对存在于获自患有SLE的患者和健康志愿者的血液或血清样品中的预先存在的抗体的结合，对代表性多价构建体进行测试。两者都使用ProteOn，基本上如上所述那样确定。
测试的代表性构建体列于表L(三价构建体)和M(二价构建体)中，并且结果显示在图6-8和表N-Q中。测试的三价构建体来源于参比构建体纳米抗体A-35GS-纳米抗体A-35GS-纳米抗体B(“参比X”)而二价构建体来源于参比构建体纳米抗体A-35GS-纳米抗体B(“参比X”)。所有构建体(除了参比构建体以外)具有，被指示，C-端丙氨酸残基以及，在各“纳米抗体A”和“纳米抗体B”结构单元(building block)中，指示的突变。
表L：测试的三价构建体。
表M：测试的二价构建体。
表N：针对存在于获自健康人志愿者的98个血清样品中的预先存在的抗体结合，对三价构建体进行测试的结果。结果也被在图6中显示为这样的图，其中各点表示通过测试针对98个血清样品之一的指定的构建体收集的数据点。
表O：针对存在于获自健康人志愿者的30份选择的血清样品中的预先存在的抗体的结合，对三价构建体进行测试的结果。预先选择所用的30个样品，所述样品具有已知的高的预先存在的抗体效价或因为已知存在于所述样品中的预先存在的抗体即使在存在C-端丙氨酸残基的情况下仍然具有高度的结合。结果也被在图7中显示为这样的图，其中各点表示通过测试针对选择的30个血清样品之一的指定的构建体收集的数据点。
表P：针对存在于获自健康人志愿者的98个血清样品中的预先存在的抗体结合，对二价构建体进行测试的结果。结果也被在图8中显示为这样的图，其中各点表示通过测试针对98个血清样品之一的指定的构建体收集的数据点。
还针对获自SLE患者的血清样品测试了三种代表性三价构建体。结果显示在表Q中。
实施例7：针对离子通道Kv1.3的纳米抗体和纳米抗体-构建体。
在一个具体方面，本发明的VH结构域(并且特别是本发明的ISVD并且更特别地本发明的纳米抗体)和本发明的化合物可以针对离子通道Kv.1.3。
同时待审的美国临时申请USSN 62/014,023(标题：“Kv1.3结合免疫球蛋白”；受让人：Ablynx N.V.；申请日：2014年6月18日)以及随后在2015年3月16日提交的相同标题的美国临时申请(受让人：Ablynx N.V.)等描述了针对钾选择性电压门控的离子通道Kv1.3的免疫球蛋白单可变结构域(并且特别是纳米抗体)，以及包含至少一个此种针对Kv1.3的纳米抗体的蛋白质、多肽和其他基于纳米抗体的构建体。
本申请中描述的突变(任选地合适地与如本文中和/或WO 12/175741中所述的C-端延伸组合)还可以被合适地应用于这两个美国临时申请中描述的针对Kv1.3的纳米抗体、蛋白质、多肽和其他基于纳米抗体的构建体。
因此，在一个方面，本发明涉及VH结构域，其针对Kv1.3并且是如本文中对于本发明的ISVD进一步描述的(即包含如本文中所述的氨基酸残基/突变)。
同样，关于本文中所述的本发明的其他方面和实施方案，当具体的ISVD(如该实施例中所述的针对Kv1.3的ISVD)或包含其的化合物被说成是“根据本发明的”或“如本文中进一步描述的”时，本文中对于本发明的ISVD或化合物一般性描述的优选方面/实施方案和优先选择同样特别地分别适用于所述具体的ISVD或化合物，除非明确另有所指或除非具体的技术背景另有所需。
因此，在特别的方面中，本发明涉及针对Kv1.3的VH结构域，其中(i)位置112是K或Q；或(ii)位置110是K或Q并且位置11是V；或(iii)位置89是T；或(iv)位置89是L并且位置110是K或Q；或(v)位置11是V并且位置89是L；或(i)至(v)的任何合适的组合。特别地，在此种针对Kv1.3的VH结构域中：
-位置11处的氨基酸残基优选地选自L、V或K(并且最优选是V)；并且
-位置14处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置41处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置89处的氨基酸残基优选地合适地选自T、V或L；并且
-位置108处的氨基酸残基优选地合适地选自Q或L；并且
-位置110处的氨基酸残基优选地合适地选自T、K或Q；并且
-位置112处的氨基酸残基优选地合适地选自S、K或Q；
以致(i)位置112是K或Q；或(ii)位置110是K或Q并且位置11是V；或(iii)位置89是T；或(iv)位置89是L并且位置110是K或Q；或(v)位置11是V并且位置89是L；或(i)至(v)的任何合适的组合。
该实施例中提及的针对Kv1.3的VH结构域可以特别地具有USSN62/014,023的第5-10页上所述的CDR(包括此种CDR的任何优选的方面/实施方案)或其序列优化的版本，如以上提及的其他US临时申请中所述的。
特别地，该实施例中提及的针对Kv1.3的VH结构域可以特别地具有选自在跨USSN62/014,023的第9和第10页的列表中作为优选的方面被列出的CDR1、CDR2和CDR3的组合之一的CDR1、CDR2和CDR3的组合。
在本发明的一些优选的而非限制性的方面:
-在本发明的VH结构域中：(i)CDR1(根据Kabat)是序列SED ID NO:166或与序列SEQ ID NO:166具有一个或两个氨基酸差异的氨基酸序列；(ii)CDR2(根据Kabat)是序列SED ID NO:167或与序列SEQ ID NO:167具有一个或两个氨基酸差异的氨基酸序列；并且(iii)CDR3(根据Kabat)是序列SED ID NO:168或与序列SEQ ID NO:168具有一个或两个氨基酸差异的氨基酸序列；并且甚至更优选地：(i)CDR1(根据Kabat)是序列SED ID NO:166；(ii)CDR2(根据Kabat)是序列SED ID NO:167；并且(iii)CDR3(根据Kabat)是序列SED IDNO:168；和/或
-在本发明的VH结构域中：(i)CDR1(根据Abm)是序列SED ID NO:169或与序列SEQID NO:169具有一个或两个氨基酸差异的氨基酸序列；(ii)CDR2(根据Abm)是序列SED IDNO:170或与序列SEQ ID NO:170具有一个或两个氨基酸差异的氨基酸序列；并且(iii)CDR3(根据Abm)是序列SED ID NO:171或与序列SEQ ID NO:171具有一个或两个氨基酸差异的氨基酸序列；并且甚至更优选地：(i)CDR1(根据Abm)是序列SED ID NO:169；(ii)CDR2(根据Abm)是序列SED ID NO:170；并且(iii)CDR3(根据Abm)是序列SED ID NO:178。
本发明的针对Kv1.3的VH结构域还可以是如本文中所述的并且同样可以特别地是针对Kv1.3的ISVD(并且更特别地是纳米抗体)或包含至少一种此种ISVD的蛋白质、多肽或其他化合物或构建体。此种蛋白质、多肽或其他化合物或构建体还可以是如本文中进一步描述的，并且可以例如具有增加的半衰期(即如本文中所述的，例如表示为t1/2β的在人受试者中至少1天、优选地至少3天、更优选地至少7天、如至少10天的半衰期)，并且为此可以例如包含结合血清白蛋白的纳米抗体，其还可以是结合血清白蛋白的本发明的纳米抗体(同样，如本文中所述的)。
此外，此种ISVD可以合适地具有C-端延伸(如本文中和WO 12/175741中进一步描述的)，特别是在所述ISVD形成包含其的蛋白质、多肽或其他化合物或构建体的C-末端时(同样，如本文中进一步描述的)。
举例来说而非限制，本发明的针对Kv1.3的VH结构域可以是USSN 62/014,023的表A-1中列出的序列之一(USSN 62/014,023中的SEQ ID NO:1至123)或题为“Kv1.3结合免疫球蛋白”的US临时申请(受让人：Ablynx N.V.；申请日：2015年3月16日)的表A-1中列出的序列之一(所述US临时申请中的SEQ ID NO:1至123、495、498至513或523至540；并且特别是序列SEQ ID NO:495)，但是合适地具有本文中对于本发明的ISVD所述的突变/具体氨基酸残基，并且任选地合适地具有C-端延伸。
在一个具体方面，针对Kv1.3的本发明的纳米抗体是SEQ ID NO:137的纳米抗体的变体(与SEQ ID NO:137具有至少90％序列同一性)，其中：
-位置11处的氨基酸残基优选地选自L、V或K(并且最优选是V)；并且
-位置14处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置41处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置89处的氨基酸残基优选地合适地选自T、V或L；并且
-位置108处的氨基酸残基优选地合适地选自Q或L；并且
-位置110处的氨基酸残基优选地合适地选自T、K或Q；并且
-位置112处的氨基酸残基优选地合适地选自S、K或Q；
以致(i)位置112是K或Q；或(ii)位置110是K或Q并且位置11是V；或(iii)位置89是T；或(iv)位置89是L并且位置110是K或Q；或(v)位置11是V并且位置89是L；或(i)至(v)的任何合适的组合。
针对Kv1.3的本发明的纳米抗体和包含其的本发明的化合物的一些特别优选的而非限制性的实例列在图9A(单价纳米抗体：SEQ ID NO:138至155)和图9B(三价双特异性半衰期延长的构建体：SEQ ID NO:156至164)中。包含选自SEQ ID NO:138至155的抗-Kv1.3纳米抗体的至少一个(如一个、两个或三个)抗-Kv1.3纳米抗体或由其组成的本发明的化合物形成本发明的进一步的方面。此外，SEQ ID NO:156至164的每种化合物形成本发明的进一步的方面。在一个具体方面，此种化合物含有两个此种本发明的针对Kv1.3的纳米抗体和一个针对人血清白蛋白的纳米抗体(其同样优选是本发明的纳米抗体)。此外，同样，此种构建体可以含有合适的接头和C-端延伸。
SEQ ID NO:138至155的单价抗-Kv1.3纳米抗体通过将本发明的L11V和V89L突变引入SEQ ID NO:137(参比)的起始序列产生。此外，引入人源化(或其他序列优化的)突变的不同组合，如E1D、A14P、G19R、M53A或M53Q或M53Y、T62S、A74S、K83R、S94G和/或T97E)。SEQID NO:138至155的各序列中引入的具体突变在图9A中给出。
图9A中的一些单价抗-Kv1.3纳米抗体也被制成(formatted)三价双特异性构建体，所述三价双特异性构建体包含两个针对Kv1.3的本发明的纳米抗体和一个针对人血清白蛋白的本发明的半衰期延长的纳米抗体(SEQ ID NO:109，在图9B中也被称为“ALB-82”)。使用35GS接头，并且所有构建体都具有C-端延伸(单个C-端丙氨酸残基)。所得的构建体的序列在SEQ ID NO 156至164中给出。在这些中，使用本文中所述的一般性方法，对于获自47名糖尿病人受试者和90名健康人受试者的样品中的预先存在的抗体的结合，对三个构建体(SEQ ID NO:156、157和160)进行测试。将来自这两组的样品的预先存在的抗体的结合与参比构建体SEQ ID NO:165相比，所述参比构建体是基于SEQ ID NO:137的参比抗-Kv1.3结构单元和血清白蛋白结合蛋白Alb-8(SEQ ID NO:46)并同样结合有C-端丙氨酸延伸的相应的三价双特异性构建体。结果显示在图10(来自47名糖尿病患者的样品)和图11(90名健康志愿者的样品)中。在每种情况中，与参比构建体相比，本发明的具有L11V和V89L突变的构建体都显示与预先存在的抗体结合的减少。
实施例8：针对IL-23的VH结构域(并且特别是纳米抗体)及包含其的本发明的化合
物。
在一个具体方面，本发明的VH结构域(并且特别是本发明的ISVD并且更特别地本发明的纳米抗体)和本发明的化合物可以针对IL-23。
此种针对IL-23的本发明的VH结构域将通常包含：(i)合适的框架序列，所述框架序列合适地包含如本文中所述的本发明的氨基酸残基/突变；以及(ii)CDR序列，所述CDR序列允许本发明的VH结构域特异性结合IL-23。此外，此种针对IL-23的本发明的VH结构域还可以合适地具有如本文中所述的C-端延伸，特别是当所述VH结构域是单价的或形成其中存在所述VH结构域的本发明的化合物的C-末端时(同样，如本文中进一步描述的)。此种针对IL-23的本发明的VH结构域还可以是如本文中进一步描述的，并且可以特别地是ISVD。
同样，关于本文中所述的本发明的其他方面和实施方案，当具体的ISVD(如该实施例中所述的针对IL-23的ISVD)或包含其的化合物被说成是“根据本发明的”或“如本文中进一步描述的”时，本文中对于本发明的ISVD或化合物一般性描述的优选方面/实施方案和优先选择同样特别地分别适用于所述具体的ISVD或化合物，除非明确另有所指或除非具体的技术背景另有所需。
因此，在特别的方面中，本发明涉及针对IL-23的VH结构域(并且特别是ISVD)，其中(i)位置112是K或Q；或(ii)位置110是K或Q并且位置11是V；或(iii)位置89是T；或(iv)位置89是L并且位置110是K或Q；或(v)位置11是V并且位置89是L；或(i)至(v)的任何合适的组合。特别地，在针对IL-23的此种VH结构域中：
-位置11处的氨基酸残基优选地选自L、V或K(并且最优选是V)；并且
-位置14处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置41处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置89处的氨基酸残基优选地合适地选自T、V或L；并且
-位置108处的氨基酸残基优选地合适地选自Q或L；并且
-位置110处的氨基酸残基优选地合适地选自T、K或Q；并且
-位置112处的氨基酸残基优选地合适地选自S、K或Q；
以致(i)位置112是K或Q；或(ii)位置110是K或Q并且位置11是V；或(iii)位置89是T；或(iv)位置89是L并且位置110是K或Q；或(v)位置11是V并且位置89是L；或(i)至(v)的任何合适的组合。
针对IL-23的本发明的VH结构域还可以是如本文中所述的并且同样可以特别地是针对IL-23的ISVD(并且更特别地是纳米抗体)或包含至少一种此种ISVD的蛋白质、多肽或其他化合物或构建体。此种蛋白质、多肽或其他化合物或构建体还可以是如本文中进一步描述的，并且可以例如具有增加的半衰期(即如本文中所述的，例如表示为t1/2β的在人受试者中至少1天、优选地至少3天、更优选地至少7天、如至少10天的半衰期)，并且为此可以例如包含结合血清白蛋白的纳米抗体，其还可以是结合血清白蛋白的本发明的纳米抗体(同样，如本文中所述的)。
此外，此种ISVD可以合适地具有C-端延伸(如本文中和WO 12/175741中进一步描述的)，特别是在所述ISVD形成包含其的蛋白质、多肽或其他化合物或构建体的C-末端时(同样，如本文中进一步描述的)。
在一个优选的方面，针对IL-23的本发明的VH结构域包含(i)CDR1序列，所述CDR1序列是序列SEQ ID NO:173(其是优选的)或是与序列SEQ ID NO:173具有仅一个氨基酸差异的氨基酸序列；(ii)CDR2序列，所述CDR2序列是序列SEQ ID NO:174(其是优选的)或是与序列SEQ ID NO:174具有仅一个或两个氨基酸差异的氨基酸序列；和(iii)CDR3序列，所述CDR3序列是序列SEQ ID NO:175(其是优选的)或是与序列SEQ ID NO:175具有仅一个或两个氨基酸差异的氨基酸序列。
更优选地，在根据该方面的针对IL-23的本发明的VH结构域中：(i)CDR1是SEQ IDNO:173；(ii)CDR2是SEQ ID NO:174；并且(iii)CDR3是SEQ ID NO:175。
在一个具体方面，针对IL-23的本发明的纳米抗体是SEQ ID NO:172的纳米抗体的变体(与SEQ ID NO:172具有至少90％序列同一性，如至少95％序列同一性)，其中：
-位置11处的氨基酸残基优选地选自L、V或K(并且最优选是V)；并且
-位置14处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置41处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置89处的氨基酸残基优选地合适地选自T、V或L；并且
-位置108处的氨基酸残基优选地合适地选自Q或L；并且
-位置110处的氨基酸残基优选地合适地选自T、K或Q；并且
-位置112处的氨基酸残基优选地合适地选自S、K或Q；
以致(i)位置112是K或Q；或(ii)位置110是K或Q并且位置11是V；或(iii)位置89是T；或(iv)位置89是L并且位置110是K或Q；或(v)位置11是V并且位置89是L；或(i)至(v)的任何合适的组合。此种ISV的CDR优选是如前两段中所限定的。
在另一个优选的方面，针对IL-23的本发明的VH结构域包含(i)CDR1序列，所述CDR1序列是序列SEQ ID NO:191(其是优选的)或是与序列SEQ ID NO:191具有仅一个氨基酸差异的氨基酸序列；(ii)CDR2序列，所述CDR2序列是序列SEQ ID NO:192(其是优选的)或是与序列SEQ ID NO:192具有仅一个或两个氨基酸差异的氨基酸序列；和(iii)CDR3序列，所述CDR3序列是序列SEQ ID NO:193(其是优选的)或是与序列SEQ ID NO:193具有仅一个或两个氨基酸差异的氨基酸序列。
更优选地，在根据该方面的针对IL-23的本发明的VH结构域中：(i)CDR1是SEQ IDNO:191；(ii)CDR2是SEQ ID NO:192；并且(iii)CDR3是SEQ ID NO:193。
在一个具体方面，针对IL-23的本发明的纳米抗体是SEQ ID NO:172的纳米抗体的变体(与SEQ ID NO:190具有至少90％序列同一性，如至少95％序列同一性)，其中：
-位置11处的氨基酸残基优选地选自L、V或K(并且最优选是V)；并且
-位置14处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置41处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置89处的氨基酸残基优选地合适地选自T、V或L；并且
-位置108处的氨基酸残基优选地合适地选自Q或L；并且
-位置110处的氨基酸残基优选地合适地选自T、K或Q；并且
-位置112处的氨基酸残基优选地合适地选自S、K或Q；
以致(i)位置112是K或Q；或(ii)位置110是K或Q并且位置11是V；或(iii)位置89是T；或(iv)位置89是L并且位置110是K或Q；或(v)位置11是V并且位置89是L；或(i)至(v)的任何合适的组合。同样，此种ISV的CDR优选是如前两段中所限定的。
此种针对IL-23的本发明的纳米抗体的一些特别优选的而非限制性的实例分别在图12A中作为SEQ ID NO:176至189并且在图12B中作为SEQ ID NO:194至207列出；并且这些纳米抗体中的每个形成本发明另外的方面。
本发明还涉及针对IL-23的本发明的化合物，其包含SEQ ID NO:176至189和/或194至207的本发明的纳米抗体中的至少一个(如一个、两个或三个)。此种针对IL-23的本发明的化合物同样可以是如本文中进一步描述的，并且因此例如可以包含合适的接头，可以包含如本文中所述的C-端延伸，并且可以是半衰期延长的(例如因为其包含针对人血清白蛋白的纳米抗体，如(优选地)针对人血清白蛋白的本发明的纳米抗体)。参见下表R。
如例如WO 2009/068627、WO 2010/142534和WO2011/135026中所述的，一类特别优选的针对IL-23的基于纳米抗体的化合物是双互补位化合物。因此，在本发明的一个方面，针对IL-23的本发明的化合物是双互补位构建体，其包含一个SEQ ID NO:172的ISV或(优选地)来源于SEQ ID NO:172的本发明的ISV(如该实施例8中所述的)和一个SEQ ID NO:190的ISV或(优选地)来源于SEQ ID NO:190的本发明的ISV(如该实施例8中所述的)，前提是这些ISV中的至少一个(并且优选两个)是本发明的ISV。此种双互补位构建体还可以是半衰期延长的(即借助于结合血清白蛋白的ISV)。此种双互补位构建体的一些具体实例在SEQ IDNO:514至549中给出。
针对IL-23的本发明的化合物的一些特别优选的实例在图22中作为SEQ ID NO:514至549给出；并且这些化合物中的每个形成本发明的另外的方面。因此，在另一个方面，本发明涉及针对IL-23并且具有选自由以下组成的组的氨基酸序列的多肽：SEQ ID NO:514至549。更通常地，针对IL-23的本发明的化合物可以是如WO 2009/068627、WO 2010/142534和WO2011/135026中所述的，但是包含本发明的ISV。其还可以用于WO 2009/068627、WO2010/142534和WO2011/135026中所述的用途。
实施例9：针对OX40-L的VH结构域(并且特别是纳米抗体)及包含其的本发明的化
合物。
在一个具体方面，本发明的VH结构域(并且特别是本发明的ISVD并且更特别地本发明的纳米抗体)和本发明的化合物可以针对OX40-L。
此种针对OX40-L的本发明的VH结构域将通常包含：(i)合适的框架序列，所述框架序列合适地包含如本文中所述的本发明的氨基酸残基/突变；以及(ii)CDR序列，所述CDR序列允许本发明的VH结构域特异性结合OX40-L。此外，此种针对OX40-L的本发明的VH结构域还可以合适地具有如本文中所述的C-端延伸，特别是当所述VH结构域是单价的或形成其中存在所述VH结构域的本发明的化合物的C-末端时(同样，如本文中进一步描述的)。此种针对OX40-L的本发明的VH结构域还可以是如本文中进一步描述的，并且可以特别地是ISVD。
同样，关于本文中所述的本发明的其他方面和实施方案，当具体的ISVD(如该实施例中所述的针对OX40-L的ISVD)或包含其的化合物被说成是“根据本发明的”或“如本文中进一步描述的”时，本文中对于本发明的ISVD或化合物一般性描述的优选方面/实施方案和优先选择同样特别地分别适用于所述具体的ISVD或化合物，除非明确另有所指或除非具体的技术背景另有所需。
因此，在特别的方面中，本发明涉及针对OX40-L的VH结构域(并且特别是ISVD)，其中(i)位置112是K或Q；或(ii)位置110是K或Q并且位置11是V；或(iii)位置89是T；或(iv)位置89是L并且位置110是K或Q；或(v)位置11是V并且位置89是L；或(i)至(v)的任何合适的组合。特别地，在此种针对OX40-L的VH结构域中：
-位置11处的氨基酸残基优选地选自L、V或K(并且最优选是V)；并且
-位置14处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置41处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置89处的氨基酸残基优选地合适地选自T、V或L；并且
-位置108处的氨基酸残基优选地合适地选自Q或L；并且
-位置110处的氨基酸残基优选地合适地选自T、K或Q；并且
-位置112处的氨基酸残基优选地合适地选自S、K或Q；
以致(i)位置112是K或Q；或(ii)位置110是K或Q并且位置11是V；或(iii)位置89是T；或(iv)位置89是L并且位置110是K或Q；或(v)位置11是V并且位置89是L；或(i)至(v)的任何合适的组合。
针对OX40-L的本发明的VH结构域还可以是如本文中所述的并且同样可以特别地是针对OX40-L的ISVD(并且更特别地是纳米抗体)或包含至少一种此种ISVD的蛋白质、多肽或其他化合物或构建体。此种蛋白质、多肽或其他化合物或构建体还可以是如本文中进一步描述的，并且可以例如具有增加的半衰期(即如本文中所述的，例如表示为t1/2β的在人受试者中至少1天、优选地至少3天、更优选地至少7天、如至少10天的半衰期)，并且为此可以例如包含结合血清白蛋白的纳米抗体，其还可以是结合血清白蛋白的本发明的纳米抗体(同样，如本文中所述的)。
此外，此种ISVD可以合适地具有C-端延伸(如本文中和WO 12/175741中进一步描述的)，特别是在所述ISVD形成包含其的蛋白质、多肽或其他化合物或构建体的C-末端时(同样，如本文中进一步描述的)。
在一个优选的方面，针对OX40-L的本发明的VH结构域包含(i)CDR1序列，所述CDR1序列是序列SEQ ID NO:209(其是优选的)或是与序列SEQ ID NO:209具有仅一个氨基酸差异的氨基酸序列；(ii)CDR2序列，所述CDR2序列是序列SEQ ID NO:210(其是优选的)或是与序列SEQ ID NO:210具有仅一个或两个氨基酸差异的氨基酸序列；和(iii)CDR3序列，所述CDR3序列是序列SEQ ID NO:211(其是优选的)或是与序列SEQ ID NO:211具有仅一个或两个氨基酸差异的氨基酸序列。
更优选地，在根据该方面的针对OX40-L的本发明的VH结构域中：(i)CDR1是SEQ IDNO:209；(ii)CDR2是SEQ ID NO:210；并且(iii)CDR3是SEQ ID NO:211。
在一个具体方面，针对OX40-L的本发明的纳米抗体是SEQ ID NO:208的纳米抗体的变体(与SEQ ID NO:208具有至少90％序列同一性，如至少95％序列同一性)，其中：
-位置11处的氨基酸残基优选地选自L、V或K(并且最优选是V)；并且
-位置14处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置41处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置89处的氨基酸残基优选地合适地选自T、V或L；并且
-位置108处的氨基酸残基优选地合适地选自Q或L；并且
-位置110处的氨基酸残基优选地合适地选自T、K或Q；并且
-位置112处的氨基酸残基优选地合适地选自S、K或Q；
以致(i)位置112是K或Q；或(ii)位置110是K或Q并且位置11是V；或(iii)位置89是T；或(iv)位置89是L并且位置110是K或Q；或(v)位置11是V并且位置89是L；或(i)至(v)的任何合适的组合。此种ISV的CDR优选是如前两段中所限定的。
针对OX40-L的本发明的纳米抗体的一些特别优选的而非限制性的实例在图13中作为SEQ ID NO:212至225列出；并且这些纳米抗体中的每个形成本发明另外的方面。
本发明还涉及针对OX40-L的本发明的化合物，其包含SEQ ID NO:212至225的本发明的纳米抗体中的至少一个(如一个、两个或三个)。此种针对OX40-L的本发明的化合物同样可以是如本文中进一步描述的，并且因此例如可以包含合适的接头，可以包含如本文中所述的C-端延伸，并且可以是半衰期延长的(例如因为其包含针对人血清白蛋白的纳米抗体，如(优选地)针对人血清白蛋白的本发明的纳米抗体)。参见下表S。
针对OX40-L的本发明的化合物的一些特别优选的实例在图23中作为SEQ ID NO:550至585给出；并且这些化合物中的每个形成本发明的另外的方面。因此，在另一个方面，本发明涉及针对OX40-L并且具有选自由以下组成的组的氨基酸序列的多肽：SEQ ID NO:550至585。更通常地，针对OX40-L的本发明的化合物可以是如WO 2011/073180中所述的，但是包含本发明的ISV。其还可以用于WO 2011/073180中所述的用途。
实施例10：针对IgE的VH结构域(并且特别是纳米抗体)及包含其的本发明的化合
物。
在一个具体方面，本发明的VH结构域(并且特别是本发明的ISVD并且更特别地本发明的纳米抗体)和本发明的化合物可以针对IgE。
此种针对IgE的本发明的VH结构域将通常包含：(i)合适的框架序列，所述框架序列合适地包含如本文中所述的本发明的氨基酸残基/突变；以及(ii)CDR序列，所述CDR序列允许本发明的VH结构域特异性结合IgE。此外，此种针对IgE的本发明的VH结构域还可以合适地具有如本文中所述的C-端延伸，特别是当所述VH结构域是单价的或形成其中存在所述VH结构域的本发明的化合物的C-末端时(同样，如本文中进一步描述的)。此种针对IgE的本发明的VH结构域还可以是如本文中进一步描述的，并且可以特别地是ISVD。
同样，关于本文中所述的本发明的其他方面和实施方案，当具体的ISVD(如该实施例中所述的针对IgE的ISVD)或包含其的化合物被说成是“根据本发明的”或“如本文中进一步描述的”时，本文中对于本发明的ISVD或化合物一般性描述的优选方面/实施方案和优先选择同样特别地分别适用于所述具体的ISVD或化合物，除非明确另有所指或除非具体的技术背景另有所需。
因此，在特别的方面中，本发明涉及针对IgE的VH结构域(并且特别是ISVD)，其中(i)位置112是K或Q；或(ii)位置110是K或Q并且位置11是V；或(iii)位置89是T；或(iv)位置89是L并且位置110是K或Q；或(v)位置11是V并且位置89是L；或(i)至(v)的任何合适的组合。特别地，在此种针对IgE的VH结构域中：
-位置11处的氨基酸残基优选地选自L、V或K(并且最优选是V)；并且
-位置14处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置41处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置89处的氨基酸残基优选地合适地选自T、V或L；并且
-位置108处的氨基酸残基优选地合适地选自Q或L；并且
-位置110处的氨基酸残基优选地合适地选自T、K或Q；并且
-位置112处的氨基酸残基优选地合适地选自S、K或Q；
以致(i)位置112是K或Q；或(ii)位置110是K或Q并且位置11是V；或(iii)位置89是T；或(iv)位置89是L并且位置110是K或Q；或(v)位置11是V并且位置89是L；或(i)至(v)的任何合适的组合。
针对IgE的本发明的VH结构域还可以是如本文中所述的并且同样可以特别地是针对IgE的ISVD(并且更特别地是纳米抗体)或包含至少一种此种ISVD的蛋白质、多肽或其他化合物或构建体。此种蛋白质、多肽或其他化合物或构建体还可以是如本文中进一步描述的，并且可以例如具有增加的半衰期(即如本文中所述的，例如表示为t1/2β的在人受试者中至少1天、优选地至少3天、更优选地至少7天、如至少10天的半衰期)，并且为此可以例如包含结合血清白蛋白的纳米抗体，其还可以是结合血清白蛋白的本发明的纳米抗体(同样，如本文中所述的)。
此外，此种ISVD可以合适地具有C-端延伸(如本文中和WO 12/175741中进一步描述的)，特别是在所述ISVD形成包含其的蛋白质、多肽或其他化合物或构建体的C-末端时(同样，如本文中进一步描述的)。
在一个优选的方面，针对IgE的本发明的VH结构域包含(i)CDR1序列，所述CDR1序列是序列SEQ ID NO:227(其是优选的)或是与序列SEQ ID NO:227具有仅一个氨基酸差异的氨基酸序列；(ii)CDR2序列，所述CDR2序列是序列SEQ ID NO:228(其是优选的)或是与序列SEQ ID NO:228具有仅一个或两个氨基酸差异的氨基酸序列；和(iii)CDR3序列，所述CDR3序列是序列SEQ ID NO:229(其是优选的)或是与序列SEQ ID NO:229具有仅一个或两个氨基酸差异的氨基酸序列。
更优选地，在根据该方面的针对IgE的本发明的VH结构域中：(i)CDR1是SEQ IDNO:227；(ii)CDR2是SEQ ID NO:228；并且(iii)CDR3是SEQ ID NO:229。
在一个具体方面，针对IgE的本发明的纳米抗体是SEQ ID NO:226的纳米抗体的变体(与SEQ ID NO:226具有至少90％序列同一性，如至少95％序列同一性)，其中：
-位置11处的氨基酸残基优选地选自L、V或K(并且最优选是V)；并且
-位置14处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置41处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置89处的氨基酸残基优选地合适地选自T、V或L；并且
-位置108处的氨基酸残基优选地合适地选自Q或L；并且
-位置110处的氨基酸残基优选地合适地选自T、K或Q；并且
-位置112处的氨基酸残基优选地合适地选自S、K或Q；
以致(i)位置112是K或Q；或(ii)位置110是K或Q并且位置11是V；或(iii)位置89是T；或(iv)位置89是L并且位置110是K或Q；或(v)位置11是V并且位置89是L；或(i)至(v)的任何合适的组合。此种ISV的CDR优选是如前两段中所限定的。
针对IgE的本发明的纳米抗体的一些特别优选的而非限制性的实例在图14中作为SEQ ID NO:230至243列出；并且这些纳米抗体中的每个形成本发明另外的方面。
本发明还涉及针对IgE的本发明的化合物，其包含SEQ ID NO:230至243的本发明的纳米抗体中的至少一个(如一个、两个或三个)。此种针对IgE的本发明的化合物同样可以是如本文中进一步描述的，并且因此例如可以包含合适的接头，可以包含如本文中所述的C-端延伸，并且可以是半衰期延长的(例如因为其包含针对人血清白蛋白的纳米抗体，如(优选地)针对人血清白蛋白的本发明的纳米抗体)。参见下表T。
针对IgE的本发明的化合物的一些特别优选的实例在图24中作为SEQ ID NO:586至594给出；并且这些化合物中的每个形成本发明的另外的方面。因此，在另一个方面，本发明涉及针对IgE并且具有选自由以下组成的组的氨基酸序列的多肽：SEQ ID NO:586至594。
更通常地，针对IgE的本发明的化合物可以是如WO 2012/175740和WO2012/175400的相关部分中所述的，但是包含本发明的ISV。其还可以用于WO 2012/175740中所述的用途。
实施例11：针对CXCR4的VH结构域(并且特别是纳米抗体)及包含其的本发明的化
合物。
在一个具体方面，本发明的VH结构域(并且特别是本发明的ISVD并且更特别地本发明的纳米抗体)和本发明的化合物可以针对CXCR4。
此种针对CXCR4的本发明的VH结构域将通常包含：(i)合适的框架序列，所述框架序列合适地包含如本文中所述的本发明的氨基酸残基/突变；以及(ii)CDR序列，所述CDR序列允许本发明的VH结构域特异性结合CXCR4。此外，此种本发明的VH结构域针对CXCR4还可以合适地具有如本文中所述的C-端延伸，特别是当所述VH结构域是单价的或形成其中存在所述VH结构域的本发明的化合物的C-末端时(同样，如本文中进一步描述的)。此种针对CXCR4的本发明的VH结构域还可以是如本文中进一步描述的，并且可以特别地是ISVD。
同样，关于本文中所述的本发明的其他方面和实施方案，当具体的ISVD(如该实施例中所述的针对CXCR4的ISVD)或包含其的化合物被说成是“根据本发明的”或“如本文中进一步描述的”时，本文中对于本发明的ISVD或化合物一般性描述的优选方面/实施方案和优先选择同样特别地分别适用于所述具体的ISVD或化合物，除非明确另有所指或除非具体的技术背景另有所需。
因此，在特别的方面中，本发明涉及针对CXCR4的VH结构域(并且特别是ISVD)，其中(i)位置112是K或Q；或(ii)位置110是K或Q并且位置11是V；或(iii)位置89是T；或(iv)位置89是L并且位置110是K或Q；或(v)位置11是V并且位置89是L；或(i)至(v)的任何合适的组合。特别地，在此种针对CXCR4的VH结构域中：
-位置11处的氨基酸残基优选地选自L、V或K(并且最优选是V)；并且
-位置14处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置41处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置89处的氨基酸残基优选地合适地选自T、V或L；并且
-位置108处的氨基酸残基优选地合适地选自Q或L；并且
-位置110处的氨基酸残基优选地合适地选自T、K或Q；并且
-位置112处的氨基酸残基优选地合适地选自S、K或Q；
以致(i)位置112是K或Q；或(ii)位置110是K或Q并且位置11是V；或(iii)位置89是T；或(iv)位置89是L并且位置110是K或Q；或(v)位置11是V并且位置89是L；或(i)至(v)的任何合适的组合。
针对CXCR4的本发明的VH结构域还可以是如本文中所述的并且同样可以特别地是针对CXCR4的ISVD(并且更特别地是纳米抗体)或包含至少一种此种ISVD的蛋白质、多肽或其他化合物或构建体。此种蛋白质、多肽或其他化合物或构建体还可以是如本文中进一步描述的，并且可以例如具有增加的半衰期(即如本文中所述的，例如表示为t1/2β的在人受试者中至少1天、优选地至少3天、更优选地至少7天、如至少10天的半衰期)，并且为此可以例如包含结合血清白蛋白的纳米抗体，其还可以是结合血清白蛋白的本发明的纳米抗体(同样，如本文中所述的)。
此外，此种ISVD可以合适地具有C-端延伸(如本文中和WO 12/175741中进一步描述的)，特别是在所述ISVD形成包含其的蛋白质、多肽或其他化合物或构建体的C-末端时(同样，如本文中进一步描述的)。
在一个优选的方面，针对CXCR4的本发明的VH结构域包含(i)CDR1序列，所述CDR1序列是序列SEQ ID NO:245(其是优选的)或是与序列SEQ ID NO:245具有仅一个氨基酸差异的氨基酸序列；(ii)CDR2序列，所述CDR2序列是序列SEQ ID NO:246(其是优选的)或是与序列SEQ ID NO:246具有仅一个或两个氨基酸差异的氨基酸序列；和(iii)CDR3序列，所述CDR3序列是序列SEQ ID NO:247(其是优选的)或是与序列SEQ ID NO:247具有仅一个或两个氨基酸差异的氨基酸序列。
更优选地，在根据该方面的针对CXCR4的本发明的VH结构域中：(i)CDR1是SEQ IDNO:245；(ii)CDR2是SEQ ID NO:246；并且(iii)CDR3是SEQ ID NO:247。
在一个具体方面，针对CXCR4的本发明的纳米抗体是SEQ ID NO:244的纳米抗体的变体(与SEQ ID NO:244具有至少90％序列同一性，如至少95％序列同一性)，其中：
-位置11处的氨基酸残基优选地选自L、V或K(并且最优选是V)；并且
-位置14处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置41处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置89处的氨基酸残基优选地合适地选自T、V或L；并且
-位置108处的氨基酸残基优选地合适地选自Q或L；并且
-位置110处的氨基酸残基优选地合适地选自T、K或Q；并且
-位置112处的氨基酸残基优选地合适地选自S、K或Q；
以致(i)位置112是K或Q；或(ii)位置110是K或Q并且位置11是V；或(iii)位置89是T；或(iv)位置89是L并且位置110是K或Q；或(v)位置11是V并且位置89是L；或(i)至(v)的任何合适的组合。此种ISV的CDR优选是如前两段中所限定的。
在另一个优选的方面，针对CXCR4的本发明的VH结构域包含(i)CDR1序列，所述CDR1序列是序列SEQ ID NO:263(其是优选的)或是与序列SEQ ID NO:263具有仅一个氨基酸差异的氨基酸序列；(ii)CDR2序列，所述CDR2序列是序列SEQ ID NO:264(其是优选的)或是与序列SEQ ID NO:264具有仅一个或两个氨基酸差异的氨基酸序列；和(iii)CDR3序列，所述CDR3序列是序列SEQ ID NO:265(其是优选的)或是与序列SEQ ID NO:265具有仅一个或两个氨基酸差异的氨基酸序列。
更优选地，在根据该方面的针对CXCR-4的本发明的VH结构域中：(i)CDR1是SEQ IDNO:263；(ii)CDR2是SEQ ID NO:264；并且(iii)CDR3是SEQ ID NO:265。
在一个具体方面，针对IL-23的本发明的纳米抗体是SEQ ID NO:262的纳米抗体的变体(与SEQ ID NO:262具有至少90％序列同一性，如至少95％序列同一性)，其中：
-位置11处的氨基酸残基优选地选自L、V或K(并且最优选是V)；并且
-位置14处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置41处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置89处的氨基酸残基优选地合适地选自T、V或L；并且
-位置108处的氨基酸残基优选地合适地选自Q或L；并且
-位置110处的氨基酸残基优选地合适地选自T、K或Q；并且
-位置112处的氨基酸残基优选地合适地选自S、K或Q；
以致(i)位置112是K或Q；或(ii)位置110是K或Q并且位置11是V；或(iii)位置89是T；或(iv)位置89是L并且位置110是K或Q；或(v)位置11是V并且位置89是L；或(i)至(v)的任何合适的组合。同样，此种ISV的CDR优选是如前两段中所限定的。
针对CXCR4的本发明的纳米抗体的一些特别优选的而非限制性的实例在图15A中作为SEQ ID NO:248至261列出并且在图15B中作为SEQ ID NO:266至279列出；并且这些纳米抗体中的每个形成本发明另外的方面。
本发明还涉及针对CXCR4的本发明的化合物，其包含SEQ ID NO:248至261和/或266至279的本发明的纳米抗体中的至少一个(如一个、两个或三个)。此种针对CXCR4的本发明的化合物同样可以是如本文中进一步描述的，并且因此例如可以包含合适的接头，可以包含如本文中所述的C-端延伸，并且可以是半衰期延长的(例如因为其包含针对人血清白蛋白的纳米抗体，如(优选地)针对人血清白蛋白的本发明的纳米抗体)。参见下表U。
如例如WO 2009/138519、WO 2011/042398和WO 2011/161266中所述，一类特别优选的针对CXCR4的基于纳米抗体的化合物是双互补位化合物。因此，在本发明的一个方面，针对CXCR4的本发明的化合物是双互补位构建体，其包含一个SEQ ID NO:244的ISV或(优选地)来源于SEQ ID NO:244的本发明的ISV(如该实施例11中所述)和一个SEQ ID NO:262的ISV或(优选地)来源于SEQ ID NO:262的本发明的ISV(如该实施例11中所述)，前提是这些ISV中的至少一个(并且优选两个)是本发明的ISV。此种双互补位构建体还可以是半衰期延长的(即借助于结合血清白蛋白的ISV)。此种双互补位构建体的一些具体实例在SEQ IDNO:595至603中列出。
针对CXCR-4的本发明的化合物的一些特别优选的实例在图25中作为SEQ ID NO:595至603给出；并且这些化合物中的每个形成本发明的另外的方面。因此，在另一个方面，本发明涉及针对CXCR-4并且具有选自由以下组成的组的氨基酸序列的多肽：SEQ ID NO:595至603。更通常地，针对CXCR-4的本发明的化合物可以是如WO 2009/138519、WO 2011/042398和WO 2011/161266WO 2011/144749中所述的，但是包含本发明的ISV。其还可以用于WO 2009/138519、WO 2011/042398和WO 2011/161266中所述的用途。
实施例12：针对HER-3的VH结构域(并且特别是纳米抗体)及包含其的本发明的化
合物。
在一个具体方面，本发明的VH结构域(并且特别是本发明的ISVD并且更特别地本发明的纳米抗体)和本发明的化合物可以针对HER-3。
此种针对HER-3的本发明的VH结构域将通常包含：(i)合适的框架序列，所述框架序列合适地包含如本文中所述的本发明的氨基酸残基/突变；以及(ii)CDR序列，所述CDR序列允许本发明的VH结构域特异性结合HER-3。此外，此种针对HER-3的本发明的VH结构域还可以合适地具有如本文中所述的C-端延伸，特别是当所述VH结构域是单价的或形成其中存在所述VH结构域的本发明的化合物的C-末端时(同样，如本文中进一步描述的)。此种针对HER-3的本发明的VH结构域还可以是如本文中进一步描述的，并且可以特别地是ISVD。
同样，关于本文中所述的本发明的其他方面和实施方案，当具体的ISVD(如该实施例中所述的针对HER-3的ISVD)或包含其的化合物被说成是“根据本发明的”或“如本文中进一步描述的”时，本文中对于本发明的ISVD或化合物一般性描述的优选方面/实施方案和优先选择同样特别地分别适用于所述具体的ISVD或化合物，除非明确另有所指或除非具体的技术背景另有所需。
因此，在特别的方面中，本发明涉及针对HER-3的VH结构域(并且特别是ISVD)，其中(i)位置112是K或Q；或(ii)位置110是K或Q并且位置11是V；或(iii)位置89是T；或(iv)位置89是L并且位置110是K或Q；或(v)位置11是V并且位置89是L；或(i)至(v)的任何合适的组合。特别地，在此种针对HER-3的VH结构域中：
-位置11处的氨基酸残基优选地选自L、V或K(并且最优选是V)；并且
-位置14处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置41处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置89处的氨基酸残基优选地合适地选自T、V或L；并且
-位置108处的氨基酸残基优选地合适地选自Q或L；并且
-位置110处的氨基酸残基优选地合适地选自T、K或Q；并且
-位置112处的氨基酸残基优选地合适地选自S、K或Q；
以致(i)位置112是K或Q；或(ii)位置110是K或Q并且位置11是V；或(iii)位置89是T；或(iv)位置89是L并且位置110是K或Q；或(v)位置11是V并且位置89是L；或(i)至(v)的任何合适的组合。
针对HER-3的本发明的VH结构域还可以是如本文中所述的并且同样可以特别地是针对HER-3的ISVD(并且更特别地是纳米抗体)或包含至少一种此种ISVD的蛋白质、多肽或其他化合物或构建体。此种蛋白质、多肽或其他化合物或构建体还可以是如本文中进一步描述的，并且可以例如具有增加的半衰期(即如本文中所述的，例如表示为t1/2β的在人受试者中至少1天、优选地至少3天、更优选地至少7天、如至少10天的半衰期)，并且为此可以例如包含结合血清白蛋白的纳米抗体，其还可以是结合血清白蛋白的本发明的纳米抗体(同样，如本文中所述的)。
此外，此种ISVD可以合适地具有C-端延伸(如本文中和WO 12/175741中进一步描述的)，特别是在所述ISVD形成包含其的蛋白质、多肽或其他化合物或构建体的C-末端时(同样，如本文中进一步描述的)。
在一个优选的方面，针对HER-3的本发明的VH结构域包含(i)CDR1序列，所述CDR1序列是序列SEQ ID NO:281(其是优选的)或是与序列SEQ ID NO:281具有仅一个氨基酸差异的氨基酸序列；(ii)CDR2序列，所述CDR2序列是序列SEQ ID NO:282(其是优选的)或是与序列SEQ ID NO:282具有仅一个或两个氨基酸差异的氨基酸序列；和(iii)CDR3序列，所述CDR3序列是序列SEQ ID NO:283(其是优选的)或是与序列SEQ ID NO:283具有仅一个或两个氨基酸差异的氨基酸序列。
更优选地，在根据该方面的针对HER-3的本发明的VH结构域中：(i)CDR1是SEQ IDNO:281；(ii)CDR2是SEQ ID NO:282；并且(iii)CDR3是SEQ ID NO:283。
在一个具体方面，针对HER-3的本发明的纳米抗体是SEQ ID NO:280的纳米抗体的变体(与SEQ ID NO:280具有至少90％序列同一性，如至少95％序列同一性)，其中：
-位置11处的氨基酸残基优选地选自L、V或K(并且最优选是V)；并且
-位置14处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置41处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置89处的氨基酸残基优选地合适地选自T、V或L；并且
-位置108处的氨基酸残基优选地合适地选自Q或L；并且
-位置110处的氨基酸残基优选地合适地选自T、K或Q；并且
-位置112处的氨基酸残基优选地合适地选自S、K或Q；
以致(i)位置112是K或Q；或(ii)位置110是K或Q并且位置11是V；或(iii)位置89是T；或(iv)位置89是L并且位置110是K或Q；或(v)位置11是V并且位置89是L；或(i)至(v)的任何合适的组合。此种ISV的CDR优选是如前两段中所限定的。
在另一个优选的方面，针对HER-3的本发明的VH结构域包含(i)CDR1序列，所述CDR1序列是序列SEQ ID NO:299(其是优选的)或是与序列SEQ ID NO:299具有仅一个氨基酸差异的氨基酸序列；(ii)CDR2序列，所述CDR2序列是序列SEQ ID NO:300(其是优选的)或是与序列SEQ ID NO:300具有仅一个或两个氨基酸差异的氨基酸序列；和(iii)CDR3序列，所述CDR3序列是序列SEQ ID NO:301(其是优选的)或是与序列SEQ ID NO:301具有仅一个或两个氨基酸差异的氨基酸序列。
更优选地，在根据该方面的针对HER-3的本发明的VH结构域中：(i)CDR1是SEQ IDNO:299；(ii)CDR2是SEQ ID NO:300；并且(iii)CDR3是SEQ ID NO:301。
在一个具体方面，针对HER-3的本发明的纳米抗体是SEQ ID NO:298的纳米抗体的变体(与SEQ ID NO:298具有至少90％序列同一性，如至少95％序列同一性)，其中：
-位置11处的氨基酸残基优选地选自L、V或K(并且最优选是V)；并且
-位置14处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置41处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置89处的氨基酸残基优选地合适地选自T、V或L；并且
-位置108处的氨基酸残基优选地合适地选自Q或L；并且
-位置110处的氨基酸残基优选地合适地选自T、K或Q；并且
-位置112处的氨基酸残基优选地合适地选自S、K或Q；
以致(i)位置112是K或Q；或(ii)位置110是K或Q并且位置11是V；或(iii)位置89是T；或(iv)位置89是L并且位置110是K或Q；或(v)位置11是V并且位置89是L；或(i)至(v)的任何合适的组合。同样，此种ISV的CDR优选是如前两段中所限定的。
针对HER-3的本发明的纳米抗体的一些特别优选的而非限制性的实例分别在图16A中作为SEQ ID NO:284至297列出并且在图16B中作为SEQ ID NO:302至315列出；并且这些纳米抗体中的每个形成本发明另外的方面。
本发明还涉及针对HER-3的本发明的化合物，其包含SEQ ID NO:284至297和/或302至315的本发明的纳米抗体中的至少一个(如一个、两个或三个)。此种针对HER-3的本发明的化合物同样可以是如本文中进一步描述的，并且因此例如可以包含合适的接头，可以包含如本文中所述的C-端延伸，并且可以是半衰期延长的(例如因为其包含针对人血清白蛋白的纳米抗体，如(优选地)针对人血清白蛋白的本发明的纳米抗体)。参见下表V。
如例如WO 2011/144749中所述的，一类特别优选的针对HER-3的基于纳米抗体的化合物是双互补位化合物。因此，在本发明的一个方面，针对HER-3的本发明的化合物是双互补位构建体，其包含一个SEQ ID NO:280的ISV或(优选地)来源于SEQ ID NO:280的本发明的ISV(如该实施例12中所述)和一个SEQ ID NO:298的ISV或(优选地)来源于SEQ ID NO:298的本发明的ISV(如该实施例12中所述)，前提是这些ISV中的至少一个(并且优选两个)是本发明的ISV。此种双互补位构建体还可以是半衰期延长的(即借助于结合血清白蛋白的ISV)。此种双互补位构建体的一些具体实例在SEQ ID NO:604至639中给出。
针对HER-3的本发明的化合物的一些特别优选的实例在图26中作为SEQ ID NO:604至639给出；并且这些化合物中的每个形成本发明的另外的方面。因此，在另一个方面，本发明涉及针对HER-3并且具有选自由以下组成的组的氨基酸序列的多肽：SEQ ID NO:604至639。更通常地，本发明的化合物针对HER-3可以是如WO 2011/144749中所述的，但是包含本发明的ISV。其还可以用于WO 2011/144749中所述的用途。
实施例13：针对TNF的VH结构域(并且特别是纳米抗体)及包含其的本发明的化合
物。
在一个具体方面，本发明的VH结构域(并且特别是本发明的ISVD并且更特别地本发明的纳米抗体)和本发明的化合物可以针对TNF。
此种针对TNF的本发明的VH结构域将通常包含：(i)合适的框架序列，所述框架序列合适地包含如本文中所述的本发明的氨基酸残基/突变；以及(ii)CDR序列，所述CDR序列允许本发明的VH结构域特异性结合TNF。此外，此种针对TNF的本发明的VH结构域还可以合适地具有如本文中所述的C-端延伸，特别是当所述VH结构域是单价的或形成其中存在所述VH结构域的本发明的化合物的C-末端时(同样，如本文中进一步描述的)。此种针对TNF的本发明的VH结构域还可以是如本文中进一步描述的，并且可以特别地是ISVD。
同样，关于本文中所述的本发明的其他方面和实施方案，当具体的ISVD(如该实施例中所述的针对TNF的ISVD)或包含其的化合物被说成是“根据本发明的”或“如本文中进一步描述的”时，本文中对于本发明的ISVD或化合物一般性描述的优选方面/实施方案和优先选择同样特别地分别适用于所述具体的ISVD或化合物，除非明确另有所指或除非具体的技术背景另有所需。
因此，在特别的方面中，本发明涉及针对TNF的VH结构域(并且特别是ISVD)，其中(i)位置112是K或Q；或(ii)位置110是K或Q并且位置11是V；或(iii)位置89是T；或(iv)位置89是L并且位置110是K或Q；或(v)位置11是V并且位置89是L；或(i)至(v)的任何合适的组合。特别地，在此种针对TNF的VH结构域中：
-位置11处的氨基酸残基优选地选自L、V或K(并且最优选是V)；并且
-位置14处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置41处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置89处的氨基酸残基优选地合适地选自T、V或L；并且
-位置108处的氨基酸残基优选地合适地选自Q或L；并且
-位置110处的氨基酸残基优选地合适地选自T、K或Q；并且
-位置112处的氨基酸残基优选地合适地选自S、K或Q；
以致(i)位置112是K或Q；或(ii)位置110是K或Q并且位置11是V；或(iii)位置89是T；或(iv)位置89是L并且位置110是K或Q；或(v)位置11是V并且位置89是L；或(i)至(v)的任何合适的组合。
针对TNF的本发明的VH结构域还可以是如本文中所述的并且同样可以特别地是针对TNF的ISVD(并且更特别地是纳米抗体)或包含至少一种此种ISVD的蛋白质、多肽或其他化合物或构建体。此种蛋白质、多肽或其他化合物或构建体还可以是如本文中进一步描述的，并且可以例如具有增加的半衰期(即如本文中所述的，例如表示为t1/2β的在人受试者中至少1天、优选地至少3天、更优选地至少7天、如至少10天的半衰期)，并且为此可以例如包含结合血清白蛋白的纳米抗体，其还可以是结合血清白蛋白的本发明的纳米抗体(同样，如本文中所述的)。
此外，此种ISVD可以合适地具有C-端延伸(如本文中和WO 12/175741中进一步描述的)，特别是在所述ISVD形成包含其的蛋白质、多肽或其他化合物或构建体的C-末端时(同样，如本文中进一步描述的)。
在一个优选的方面，针对TNF的本发明的VH结构域包含(i)CDR1序列，所述CDR1序列是序列SEQ ID NO:317(其是优选的)或是与序列SEQ ID NO:317具有仅一个氨基酸差异的氨基酸序列；(ii)CDR2序列，所述CDR2序列是序列SEQ ID NO:318(其是优选的)或是与序列SEQ ID NO:318具有仅一个或两个氨基酸差异的氨基酸序列；和(iii)CDR3序列，所述CDR3序列是序列SEQ ID NO:319(其是优选的)或是与序列SEQ ID NO:319具有仅一个或两个氨基酸差异的氨基酸序列。
更优选地，在根据该方面的针对TNF的本发明的VH结构域中：(i)CDR1是SEQ IDNO:317；(ii)CDR2是SEQ ID NO:318；并且(iii)CDR3是SEQ ID NO:319。
在一个具体方面，针对TNF的本发明的纳米抗体是SEQ ID NO:316的纳米抗体的变体(与SEQ ID NO:316具有至少90％序列同一性，如至少95％序列同一性)，其中：
-位置11处的氨基酸残基优选地选自L、V或K(并且最优选是V)；并且
-位置14处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置41处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置89处的氨基酸残基优选地合适地选自T、V或L；并且
-位置108处的氨基酸残基优选地合适地选自Q或L；并且
-位置110处的氨基酸残基优选地合适地选自T、K或Q；并且
-位置112处的氨基酸残基优选地合适地选自S、K或Q；
以致(i)位置112是K或Q；或(ii)位置110是K或Q并且位置11是V；或(iii)位置89是T；或(iv)位置89是L并且位置110是K或Q；或(v)位置11是V并且位置89是L；或(i)至(v)的任何合适的组合。此种ISV的CDR优选是如前两段中所限定的。
针对TNF的本发明的纳米抗体的一些特别优选的而非限制性的实例在图17A中作为SEQ ID NO:320至333列出；并且这些纳米抗体中的每个形成本发明另外的方面。
本发明还涉及针对TNF的本发明的化合物，其包含SEQ ID NO:320至333的本发明的纳米抗体中的至少一个(如一个、两个或三个)。此种针对TNF的本发明的化合物同样可以是如本文中进一步描述的，并且因此例如可以包含合适的接头，可以包含如本文中所述的C-端延伸，并且可以是半衰期延长的(例如因为其包含针对人血清白蛋白的纳米抗体，如(优选地)针对人血清白蛋白的本发明的纳米抗体)。参见下表W。通常，因为TNF是多价靶标，所以包含两个或三个抗-TNF ISV(和合适长度的接头，参见WO 06/122786)的本发明的化合物是优选的)
针对TNF的本发明的化合物的一些特别优选的实例在图27中作为SEQ ID NO:640至675给出；并且这些化合物中的每个形成本发明的另外的方面。因此，在另一个方面，本发明涉及针对TNF并且具有选自由以下组成的组的氨基酸序列的多肽：SEQ ID NO:640至675。更通常地，本发明的化合物针对TNF可以是如WO 2006/122786中所述的，但是包含本发明的ISV。其还可以用于WO 2006/122786中所述的用途。
实施例14：进一步的针对TNF的VH结构域(并且特别是纳米抗体)及包含其的本发
明的化合物。
在一个具体方面，本发明的VH结构域(并且特别是本发明的ISVD并且更特别地本发明的纳米抗体)和本发明的化合物可以针对TNF。
此种针对TNF的本发明的VH结构域将通常包含：(i)合适的框架序列，所述框架序列合适地包含如本文中所述的本发明的氨基酸残基/突变；以及(ii)CDR序列，所述CDR序列允许本发明的VH结构域特异性结合TNF。此外，此种针对TNF的本发明的VH结构域还可以合适地具有如本文中所述的C-端延伸，特别是当所述VH结构域是单价的或形成其中存在所述VH结构域的本发明的化合物的C-末端时(同样，如本文中进一步描述的)。此种针对TNF的本发明的VH结构域还可以是如本文中进一步描述的，并且可以特别地是ISVD。
同样，关于本文中所述的本发明的其他方面和实施方案，当具体的ISVD(如该实施例中所述的针对TNF的ISVD)或包含其的化合物被说成是“根据本发明的”或“如本文中进一步描述的”时，本文中对于本发明的ISVD或化合物一般性描述的优选方面/实施方案和优先选择同样特别地分别适用于所述具体的ISVD或化合物，除非明确另有所指或除非具体的技术背景另有所需。
因此，在特别的方面中，本发明涉及针对TNF的VH结构域(并且特别是ISVD)，其中(i)位置112是K或Q；或(ii)位置110是K或Q并且位置11是V；或(iii)位置89是T；或(iv)位置89是L并且位置110是K或Q；或(v)位置11是V并且位置89是L；或(i)至(v)的任何合适的组合。特别地，在此种针对TNF的VH结构域中：
-位置11处的氨基酸残基优选地选自L、V或K(并且最优选是V)；并且
-位置14处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置41处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置89处的氨基酸残基优选地合适地选自T、V或L；并且
-位置108处的氨基酸残基优选地合适地选自Q或L；并且
-位置110处的氨基酸残基优选地合适地选自T、K或Q；并且
-位置112处的氨基酸残基优选地合适地选自S、K或Q；
以致(i)位置112是K或Q；或(ii)位置110是K或Q并且位置11是V；或(iii)位置89是T；或(iv)位置89是L并且位置110是K或Q；或(v)位置11是V并且位置89是L；或(i)至(v)的任何合适的组合。
针对TNF的本发明的VH结构域还可以是如本文中所述的并且同样可以特别地是针对TNF的ISVD(并且更特别地是纳米抗体)或包含至少一种此种ISVD的蛋白质、多肽或其他化合物或构建体。此种蛋白质、多肽或其他化合物或构建体还可以是如本文中进一步描述的，并且可以例如具有增加的半衰期(即如本文中所述的，例如表示为t1/2β的在人受试者中至少1天、优选地至少3天、更优选地至少7天、如至少10天的半衰期)，并且为此可以例如包含结合血清白蛋白的纳米抗体，其还可以是结合血清白蛋白的本发明的纳米抗体(同样，如本文中所述的)。
此外，此种ISVD可以合适地具有C-端延伸(如本文中和WO 12/175741中进一步描述的)，特别是在所述ISVD形成包含其的蛋白质、多肽或其他化合物或构建体的C-末端时(同样，如本文中进一步描述的)。
在一个优选的方面，针对TNF的本发明的VH结构域包含(i)CDR1序列，所述CDR1序列是序列SEQ ID NO:335(其是优选的)或是与序列SEQ ID NO:335具有仅一个氨基酸差异的氨基酸序列；(ii)CDR2序列，所述CDR2序列是序列SEQ ID NO:336(其是优选的)或是与序列SEQ ID NO:336具有仅一个或两个氨基酸差异的氨基酸序列；和(iii)CDR3序列，所述CDR3序列是序列SEQ ID NO:337(其是优选的)或是与序列SEQ ID NO:337具有仅一个或两个氨基酸差异的氨基酸序列。
更优选地，在根据该方面的针对TNF的本发明的VH结构域中：(i)CDR1是SEQ IDNO:335；(ii)CDR2是SEQ ID NO:336；并且(iii)CDR3是SEQ ID NO:337。
在一个具体方面，针对TNF的本发明的纳米抗体是SEQ ID NO:334的纳米抗体的变体(与SEQ ID NO:334具有至少90％序列同一性，如至少95％序列同一性)，其中：
-位置11处的氨基酸残基优选地选自L、V或K(并且最优选是V)；并且
-位置14处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置41处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置89处的氨基酸残基优选地合适地选自T、V或L；并且
-位置108处的氨基酸残基优选地合适地选自Q或L；并且
-位置110处的氨基酸残基优选地合适地选自T、K或Q；并且
-位置112处的氨基酸残基优选地合适地选自S、K或Q；
以致(i)位置112是K或Q；或(ii)位置110是K或Q并且位置11是V；或(iii)位置89是T；或(iv)位置89是L并且位置110是K或Q；或(v)位置11是V并且位置89是L；或(i)至(v)的任何合适的组合。此种ISV的CDR优选是如前两段中所限定的。
针对TNF的本发明的纳米抗体的一些特别优选的而非限制性的实例在图17B中作为SEQ ID NO:338至351列出；并且这些纳米抗体中的每个形成本发明另外的方面。
本发明还涉及针对TNF的本发明的化合物，其包含SEQ ID NO:338至251的本发明的纳米抗体中的至少一个(如一个、两个或三个)。此种针对TNF的本发明的化合物同样可以是如本文中进一步描述的，并且因此例如可以包含合适的接头，可以包含如本文中所述的C-端延伸，并且可以是半衰期延长的(例如因为其包含针对人血清白蛋白的纳米抗体，如(优选地)针对人血清白蛋白的本发明的纳米抗体)。参见下表X。通常，因为TNF是多价靶标，所以包含两个或三个抗-TNF ISV的本发明的化合物是优选的。
实施例15：针对c-Met的VH结构域(并且特别是纳米抗体)及包含其的本发明的化
合物。
在一个具体方面，本发明的VH结构域(并且特别是本发明的ISVD并且更特别地本发明的纳米抗体)和本发明的化合物可以针对c-Met。
此种针对c-Met的本发明的VH结构域将通常包含：(i)合适的框架序列，所述框架序列合适地包含如本文中所述的本发明的氨基酸残基/突变；以及(ii)CDR序列，所述CDR序列允许本发明的VH结构域特异性结合c-Met。此外，此种针对c-Met的本发明的VH结构域还可以合适地具有如本文中所述的C-端延伸，特别是当所述VH结构域是单价的或形成其中存在所述VH结构域的本发明的化合物的C-末端时(同样，如本文中进一步描述的)。此种针对c-Met的本发明的VH结构域还可以是如本文中进一步描述的，并且可以特别地是ISVD。
同样，关于本文中所述的本发明的其他方面和实施方案，当具体的ISVD(如该实施例中所述的针对c-Met的ISVD)或包含其的化合物被说成是“根据本发明的”或“如本文中进一步描述的”时，本文中对于本发明的ISVD或化合物一般性描述的优选方面/实施方案和优先选择同样特别地分别适用于所述具体的ISVD或化合物，除非明确另有所指或除非具体的技术背景另有所需。
因此，在特别的方面中，本发明涉及针对c-Met的VH结构域(并且特别是ISVD)，其中(i)位置112是K或Q；或(ii)位置110是K或Q并且位置11是V；或(iii)位置89是T；或(iv)位置89是L并且位置110是K或Q；或(v)位置11是V并且位置89是L；或(i)至(v)的任何合适的组合。特别地，在此种针对c-Met的VH结构域中：
-位置11处的氨基酸残基优选地选自L、V或K(并且最优选是V)；并且
-位置14处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置41处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置89处的氨基酸残基优选地合适地选自T、V或L；并且
-位置108处的氨基酸残基优选地合适地选自Q或L；并且
-位置110处的氨基酸残基优选地合适地选自T、K或Q；并且
-位置112处的氨基酸残基优选地合适地选自S、K或Q；
以致(i)位置112是K或Q；或(ii)位置110是K或Q并且位置11是V；或(iii)位置89是T；或(iv)位置89是L并且位置110是K或Q；或(v)位置11是V并且位置89是L；或(i)至(v)的任何合适的组合。
针对c-Met的本发明的VH结构域还可以是如本文中所述的并且同样可以特别地是针对c-Met的ISVD(并且更特别地是纳米抗体)或包含至少一种此种ISVD的蛋白质、多肽或其他化合物或构建体。此种蛋白质、多肽或其他化合物或构建体还可以是如本文中进一步描述的，并且可以例如具有增加的半衰期(即如本文中所述的，例如表示为t1/2β的在人受试者中至少1天、优选地至少3天、更优选地至少7天、如至少10天的半衰期)，并且为此可以例如包含结合血清白蛋白的纳米抗体，其还可以是结合血清白蛋白的本发明的纳米抗体(同样，如本文中所述的)。
此外，此种ISVD可以合适地具有C-端延伸(如本文中和WO 12/175741中进一步描述的)，特别是在所述ISVD形成包含其的蛋白质、多肽或其他化合物或构建体的C-末端时(同样，如本文中进一步描述的)。
在一个优选的方面，针对c-Met的本发明的VH结构域包含(i)CDR1序列，所述CDR1序列是序列SEQ ID NO:353(其是优选的)或是与序列SEQ ID NO:353具有仅一个氨基酸差异的氨基酸序列；(ii)CDR2序列，所述CDR2序列是序列SEQ ID NO:354(其是优选的)或是与序列SEQ ID NO:354具有仅一个或两个氨基酸差异的氨基酸序列；和(iii)CDR3序列，所述CDR3序列是序列SEQ ID NO:355(其是优选的)或是与序列SEQ ID NO:355具有仅一个或两个氨基酸差异的氨基酸序列。
更优选地，在根据该方面的针对c-Met的本发明的VH结构域中：(i)CDR1是SEQ IDNO:353；(ii)CDR2是SEQ ID NO:354；并且(iii)CDR3是SEQ ID NO:355。
在一个具体方面，针对c-Met的本发明的纳米抗体是SEQ ID NO:352的纳米抗体的变体(与SEQ ID NO:352具有至少90％序列同一性，如至少95％序列同一性)，其中：
-位置11处的氨基酸残基优选地选自L、V或K(并且最优选是V)；并且
-位置14处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置41处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置89处的氨基酸残基优选地合适地选自T、V或L；并且
-位置108处的氨基酸残基优选地合适地选自Q或L；并且
-位置110处的氨基酸残基优选地合适地选自T、K或Q；并且
-位置112处的氨基酸残基优选地合适地选自S、K或Q；
以致(i)位置112是K或Q；或(ii)位置110是K或Q并且位置11是V；或(iii)位置89是T；或(iv)位置89是L并且位置110是K或Q；或(v)位置11是V并且位置89是L；或(i)至(v)的任何合适的组合。此种ISV的CDR优选是如前两段中所限定的。
在另一个优选的方面，针对c-Met的本发明的VH结构域包含(i)CDR1序列，所述CDR1序列是序列SEQ ID NO:371(其是优选的)或是与序列SEQ ID NO:371具有仅一个氨基酸差异的氨基酸序列；(ii)CDR2序列，所述CDR2序列是序列SEQ ID NO:372(其是优选的)或是与序列SEQ ID NO:372具有仅一个或两个氨基酸差异的氨基酸序列；和(iii)CDR3序列，所述CDR3序列是序列SEQ ID NO:373(其是优选的)或是与序列SEQ ID NO:373具有仅一个或两个氨基酸差异的氨基酸序列。
更优选地，在此种本发明的VH结构域针对c-Met根据该方面：(i)CDR1是SEQ IDNO:371；(ii)CDR2是SEQ ID NO:372；并且(iii)CDR3是SEQ ID NO:373。
在一个具体方面，针对c-Met的本发明的纳米抗体是SEQ ID NO:370的纳米抗体的变体(与SEQ ID NO:370具有至少90％序列同一性，如至少95％序列同一性)，其中：
-位置11处的氨基酸残基优选地选自L、V或K(并且最优选是V)；并且
-位置14处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置41处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置89处的氨基酸残基优选地合适地选自T、V或L；并且
-位置108处的氨基酸残基优选地合适地选自Q或L；并且
-位置110处的氨基酸残基优选地合适地选自T、K或Q；并且
-位置112处的氨基酸残基优选地合适地选自S、K或Q；
以致(i)位置112是K或Q；或(ii)位置110是K或Q并且位置11是V；或(iii)位置89是T；或(iv)位置89是L并且位置110是K或Q；或(v)位置11是V并且位置89是L；或(i)至(v)的任何合适的组合。同样，此种ISV的CDR优选是如前两段中所限定的。
针对c-Met的本发明的纳米抗体的一些特别优选的而非限制性的实例分别在图18A中作为SEQ ID NO:356至369列出并且在图18B中作为SEQ ID NO:374至387列出；并且这些纳米抗体中的每个形成本发明另外的方面。
本发明还涉及针对c-Met的本发明的化合物，其包含SEQ ID NO:356至369和/或374至387的本发明的纳米抗体中的至少一个(如一个、两个或三个)。此种针对c-Met的本发明的化合物同样可以是如本文中进一步描述的，并且因此例如可以包含合适的接头，可以包含如本文中所述的C-端延伸，并且可以是半衰期延长的(例如因为其包含针对人血清白蛋白的纳米抗体，如(优选地)针对人血清白蛋白的本发明的纳米抗体)。参见下表Y。
如例如WO 2013/045707中所述，一类特别优选的针对c-Met的基于纳米抗体的化合物是双互补位化合物。因此，在本发明的一个方面，针对c-Met的本发明的化合物是双互补位构建体，其包含一个SEQ ID NO:352的ISV或(优选地)来源于SEQ ID NO:352的本发明的ISV(如该实施例15中所述)和一个SEQ ID NO:370的ISV或(优选地)来源于SEQ ID NO:370的本发明的ISV(如该实施例15中所述)，前提是这些ISV中的至少一个(并且优选两个)是本发明的ISV。此种双互补位构建体还可以是半衰期延长的(即借助于结合血清白蛋白的ISV)。此种双互补位构建体的一些具体实例在SEQ ID NO:676至693中给出。此外，针对c-Met的双特异性构建体还可以包含针对VEGF或EGFR的ISV。同样参考WO 2014/341309。
针对c-Met的本发明的化合物的一些特别优选的实例在图28A和28BSEQ ID NO:676至694中给出；并且这些化合物中的每个形成本发明的另外的方面。因此，在另一个方面，本发明涉及针对c-Met并且具有选自由以下组成的组的氨基酸序列的多肽：SEQ ID NO:676至694。更通常地，针对c-Met的本发明的化合物可以是如WO 2013/045707中所述的，但是包含本发明的ISV。其还可以用于WO 2013/045707中所述的用途。
实施例16：针对RANK-L的VH结构域(并且特别是纳米抗体)及包含其的本发明的化
合物。
在一个具体方面，本发明的VH结构域(并且特别是本发明的ISVD并且更特别地本发明的纳米抗体)和本发明的化合物可以针对RANK-L。
此种针对RANK-L的本发明的VH结构域将通常包含：(i)合适的框架序列，所述框架序列合适地包含如本文中所述的本发明的氨基酸残基/突变；以及(ii)CDR序列，所述CDR序列允许本发明的VH结构域特异性结合RANK-L。此外，此种针对RANK-L的本发明的VH结构域还可以合适地具有如本文中所述的C-端延伸，特别是当所述VH结构域是单价的或形成其中存在所述VH结构域的本发明的化合物的C-末端时(同样，如本文中进一步描述的)。此种针对RANK-L的本发明的VH结构域还可以是如本文中进一步描述的，并且可以特别地是ISVD。
同样，关于本文中所述的本发明的其他方面和实施方案，当具体的ISVD(如该实施例中所述的针对RANK-L的ISVD)或包含其的化合物被说成是“根据本发明的”或“如本文中进一步描述的”时，本文中对于本发明的ISVD或化合物一般性描述的优选方面/实施方案和优先选择同样特别地分别适用于所述具体的ISVD或化合物，除非明确另有所指或除非具体的技术背景另有所需。
因此，在特别的方面中，本发明涉及针对RANK-L的VH结构域(并且特别是ISVD)，其中(i)位置112是K或Q；或(ii)位置110是K或Q并且位置11是V；或(iii)位置89是T；或(iv)位置89是L并且位置110是K或Q；或(v)位置11是V并且位置89是L；或(i)至(v)的任何合适的组合。特别地，在此种针对RANK-L的VH结构域中：
-位置11处的氨基酸残基优选地选自L、V或K(并且最优选是V)；并且
-位置14处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置41处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置89处的氨基酸残基优选地合适地选自T、V或L；并且
-位置108处的氨基酸残基优选地合适地选自Q或L；并且
-位置110处的氨基酸残基优选地合适地选自T、K或Q；并且
-位置112处的氨基酸残基优选地合适地选自S、K或Q；
以致(i)位置112是K或Q；或(ii)位置110是K或Q并且位置11是V；或(iii)位置89是T；或(iv)位置89是L并且位置110是K或Q；或(v)位置11是V并且位置89是L；或(i)至(v)的任何合适的组合。
针对RANK-L的本发明的VH结构域还可以是如本文中所述的并且同样可以特别地是针对RANK-L的ISVD(并且更特别地是纳米抗体)或包含至少一种此种ISVD的蛋白质、多肽或其他化合物或构建体。此种蛋白质、多肽或其他化合物或构建体还可以是如本文中进一步描述的，并且可以例如具有增加的半衰期(即如本文中所述的，例如表示为t1/2β的在人受试者中至少1天、优选地至少3天、更优选地至少7天、如至少10天的半衰期)，并且为此可以例如包含结合血清白蛋白的纳米抗体，其还可以是结合血清白蛋白的本发明的纳米抗体(同样，如本文中所述的)。
此外，此种ISVD可以合适地具有C-端延伸(如本文中和WO 12/175741中进一步描述的)，特别是在所述ISVD形成包含其的蛋白质、多肽或其他化合物或构建体的C-末端时(同样，如本文中进一步描述的)。
在一个优选的方面，针对RANK-L的本发明的VH结构域包含(i)CDR1序列，所述CDR1序列是序列SEQ ID NO:389(其是优选的)或是与序列SEQ ID NO:389具有仅一个氨基酸差异的氨基酸序列；(ii)CDR2序列，所述CDR2序列是序列SEQ ID NO:390(其是优选的)或是与序列SEQ ID NO:390具有仅一个或两个氨基酸差异的氨基酸序列；和(iii)CDR3序列，所述CDR3序列是序列SEQ ID NO:391(其是优选的)或是与序列SEQ ID NO:391具有仅一个或两个氨基酸差异的氨基酸序列。
更优选地，在根据该方面的针对RANK-L的本发明的VH结构域中：(i)CDR1是SEQ IDNO:389；(ii)CDR2是SEQ ID NO:390；并且(iii)CDR3是SEQ ID NO:391。
在一个具体方面，针对RANK-L的本发明的纳米抗体是SEQ ID NO:388的纳米抗体的变体(与SEQ ID NO:388具有至少90％序列同一性，如至少95％序列同一性)，其中：
-位置11处的氨基酸残基优选地选自L、V或K(并且最优选是V)；并且
-位置14处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置41处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置89处的氨基酸残基优选地合适地选自T、V或L；并且
-位置108处的氨基酸残基优选地合适地选自Q或L；并且
-位置110处的氨基酸残基优选地合适地选自T、K或Q；并且
-位置112处的氨基酸残基优选地合适地选自S、K或Q；
以致(i)位置112是K或Q；或(ii)位置110是K或Q并且位置11是V；或(iii)位置89是T；或(iv)位置89是L并且位置110是K或Q；或(v)位置11是V并且位置89是L；或(i)至(v)的任何合适的组合。此种ISV的CDR优选是如前两段中所限定的。
针对RANK-L的本发明的纳米抗体的一些特别优选的而非限制性的实例在图19中作为SEQ ID NO:392至405列出；并且这些纳米抗体中的每个形成本发明另外的方面。
本发明还涉及针对RANK-L的本发明的化合物，其包含SEQ ID NO:392至405的本发明的纳米抗体中的至少一个(如一个、两个或三个)。此种针对RANK-L的本发明的化合物同样可以是如本文中进一步描述的，并且因此例如可以包含合适的接头，可以包含如本文中所述的C-端延伸，并且可以是半衰期延长的(例如因为其包含针对人血清白蛋白的纳米抗体，如(优选地)针对人血清白蛋白的本发明的纳米抗体)。参见下表Z。
针对RANK-L的本发明的化合物的一些特别优选的实例在图29中作为SEQ ID NO:694至729给出；并且这些化合物中的每个形成本发明的另外的方面。因此，在另一个方面，本发明涉及针对RANK-L并且具有选自由以下组成的组的氨基酸序列的多肽：SEQ ID NO:694至729。
更通常地，针对RANK-L的本发明的化合物可以是如WO 2008/142164中所述的，但是包含本发明的ISV。其还可以用于WO 2008/142164中所述的用途。
实施例17：针对CXCR-7的VH结构域(并且特别是纳米抗体)及包含其的本发明的化
合物。
在一个具体方面，本发明的VH结构域(并且特别是本发明的ISVD并且更特别地本发明的纳米抗体)和本发明的化合物可以针对CXCR-7。
此种针对CXCR-7的本发明的VH结构域将通常包含：(i)合适的框架序列，所述框架序列合适地包含如本文中所述的本发明的氨基酸残基/突变；以及(ii)CDR序列，所述CDR序列允许本发明的VH结构域特异性结合CXCR-7。此外，此种针对CXCR-7的本发明的VH结构域还可以合适地具有如本文中所述的C-端延伸，特别是当所述VH结构域是单价的或形成其中存在所述VH结构域的本发明的化合物的C-末端时(同样，如本文中进一步描述的)。此种针对CXCR-7的本发明的VH结构域还可以是如本文中进一步描述的，并且可以特别地是ISVD。
同样，关于本文中所述的本发明的其他方面和实施方案，当具体的ISVD(如该实施例中所述的针对CXCR-7的ISVD)或包含其的化合物被说成是“根据本发明的”或“如本文中进一步描述的”时，本文中对于本发明的ISVD或化合物一般性描述的优选方面/实施方案和优先选择同样特别地分别适用于所述具体的ISVD或化合物，除非明确另有所指或除非具体的技术背景另有所需。
因此，在特别的方面中，本发明涉及针对CXCR-7的VH结构域(并且特别是ISVD)，其中(i)位置112是K或Q；或(ii)位置110是K或Q并且位置11是V；或(iii)位置89是T；或(iv)位置89是L并且位置110是K或Q；或(v)位置11是V并且位置89是L；或(i)至(v)的任何合适的组合。特别地，在此种针对CXCR-7的VH结构域中：
-位置11处的氨基酸残基优选地选自L、V或K(并且最优选是V)；并且
-位置14处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置41处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置89处的氨基酸残基优选地合适地选自T、V或L；并且
-位置108处的氨基酸残基优选地合适地选自Q或L；并且
-位置110处的氨基酸残基优选地合适地选自T、K或Q；并且
-位置112处的氨基酸残基优选地合适地选自S、K或Q；
以致(i)位置112是K或Q；或(ii)位置110是K或Q并且位置11是V；或(iii)位置89是T；或(iv)位置89是L并且位置110是K或Q；或(v)位置11是V并且位置89是L；或(i)至(v)的任何合适的组合。
针对CXCR-7的本发明的VH结构域还可以是如本文中所述的并且同样可以特别地是针对CXCR-7的ISVD(并且更特别地是纳米抗体)或包含至少一种此种ISVD的蛋白质、多肽或其他化合物或构建体。此种蛋白质、多肽或其他化合物或构建体还可以是如本文中进一步描述的，并且可以例如具有增加的半衰期(即如本文中所述的，例如表示为t1/2β的在人受试者中至少1天、优选地至少3天、更优选地至少7天、如至少10天的半衰期)，并且为此可以例如包含结合血清白蛋白的纳米抗体，其还可以是结合血清白蛋白的本发明的纳米抗体(同样，如本文中所述的)。
此外，此种ISVD可以合适地具有C-端延伸(如本文中和WO 12/175741中进一步描述的)，特别是在所述ISVD形成包含其的蛋白质、多肽或其他化合物或构建体的C-末端时(同样，如本文中进一步描述的)。
在一个优选的方面，针对CXCR-7的本发明的VH结构域包含(i)CDR1序列，所述CDR1序列是序列SEQ ID NO:407(其是优选的)或是与序列SEQ ID NO:407具有仅一个氨基酸差异的氨基酸序列；(ii)CDR2序列，所述CDR2序列是序列SEQ ID NO:408(其是优选的)或是与序列SEQ ID NO:408具有仅一个或两个氨基酸差异的氨基酸序列；和(iii)CDR3序列，所述CDR3序列是序列SEQ ID NO:409(其是优选的)或是与序列SEQ ID NO:409具有仅一个或两个氨基酸差异的氨基酸序列。
更优选地，在根据该方面的针对CXCR-7的本发明的VH结构域中：(i)CDR1是SEQ IDNO:407；(ii)CDR2是SEQ ID NO:408；并且(iii)CDR3是SEQ ID NO:409。
在一个具体方面，针对CXCR-7的本发明的纳米抗体是SEQ ID NO:406的纳米抗体的变体(与SEQ ID NO:406具有至少90％序列同一性，如至少95％序列同一性)，其中：
-位置11处的氨基酸残基优选地选自L、V或K(并且最优选是V)；并且
-位置14处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置41处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置89处的氨基酸残基优选地合适地选自T、V或L；并且
-位置108处的氨基酸残基优选地合适地选自Q或L；并且
-位置110处的氨基酸残基优选地合适地选自T、K或Q；并且
-位置112处的氨基酸残基优选地合适地选自S、K或Q；
以致(i)位置112是K或Q；或(ii)位置110是K或Q并且位置11是V；或(iii)位置89是T；或(iv)位置89是L并且位置110是K或Q；或(v)位置11是V并且位置89是L；或(i)至(v)的任何合适的组合。此种ISV的CDR优选是如前两段中所限定的。
在另一个优选的方面，针对CXCR-7的本发明的VH结构域包含(i)CDR1序列，所述CDR1序列是序列SEQ ID NO:425(其是优选的)或是与序列SEQ ID NO:425具有仅一个氨基酸差异的氨基酸序列；(ii)CDR2序列，所述CDR2序列是序列SEQ ID NO:426(其是优选的)或是与序列SEQ ID NO:426具有仅一个或两个氨基酸差异的氨基酸序列；和(iii)CDR3序列，所述CDR3序列是序列SEQ ID NO:427(其是优选的)或是与序列SEQ ID NO:427具有仅一个或两个氨基酸差异的氨基酸序列。
更优选地，在根据该方面的针对CXCR-7的本发明的VH结构域中：(i)CDR1是SEQ IDNO:425；(ii)CDR2是SEQ ID NO:426；并且(iii)CDR3是SEQ ID NO:427。
在一个具体方面，针对CXCR-7的本发明的纳米抗体是SEQ ID NO:424的纳米抗体的变体(与SEQ ID NO:424具有至少90％序列同一性，如至少95％序列同一性)，其中：
-位置11处的氨基酸残基优选地选自L、V或K(并且最优选是V)；并且
-位置14处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置41处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置89处的氨基酸残基优选地合适地选自T、V或L；并且
-位置108处的氨基酸残基优选地合适地选自Q或L；并且
-位置110处的氨基酸残基优选地合适地选自T、K或Q；并且
-位置112处的氨基酸残基优选地合适地选自S、K或Q；
以致(i)位置112是K或Q；或(ii)位置110是K或Q并且位置11是V；或(iii)位置89是T；或(iv)位置89是L并且位置110是K或Q；或(v)位置11是V并且位置89是L；或(i)至(v)的任何合适的组合。同样，此种ISV的CDR优选是如前两段中所限定的。
针对CXCR-7的本发明的纳米抗体的一些特别优选的而非限制性的实例在图20A中作为SEQ ID NO:410至423列出并且在图20B中作为SEQ ID NO:428至441列出；并且这些纳米抗体中的每个形成本发明另外的方面。
本发明还涉及针对CXCR-7的本发明的化合物，其包含SEQ ID NO:410至423和/或428至441的本发明的纳米抗体中的至少一个(如一个、两个或三个)。此种针对CXCR-7的本发明的化合物同样可以是如本文中进一步描述的，并且因此例如可以包含合适的接头，可以包含如本文中所述的C-端延伸，并且可以是半衰期延长的(例如因为其包含针对人血清白蛋白的纳米抗体，如(优选地)针对人血清白蛋白的本发明的纳米抗体)。参见下表AA。
如例如WO2012/130874中所述的，一类特别优选的针对CXCR7的基于纳米抗体的化合物是双互补位化合物。因此，在本发明的一个方面，针对CXCR-7的本发明的化合物是双互补位构建体，其包含一个SEQ ID NO:406的ISV或(优选地)来源于SEQ ID NO:406的本发明的ISV(如该实施例17中所述)和一个SEQ ID NO:424的ISV或(优选地)来源于SEQ ID NO:424的本发明的ISV(如该实施例17中所述)，前提是这些ISV中的至少一个(并且优选两个)是本发明的ISV。此种双互补位构建体还可以是半衰期延长的(即借助于结合血清白蛋白的ISV)。
更通常地，本发明的化合物针对CXCR-7可以是如WO2012/130874中所述的，但是包含本发明的ISV。其还可以用于WO2012/130874中所述的用途。
实施例18：针对A-β的VH结构域(并且特别是纳米抗体)及包含其的本发明的化合
物。
在一个具体方面，本发明的VH结构域(并且特别是本发明的ISVD并且更特别地本发明的纳米抗体)和本发明的化合物可以针对A-β。
此种针对A-β的本发明的VH结构域将通常包含：(i)合适的框架序列，所述框架序列合适地包含如本文中所述的本发明的氨基酸残基/突变；以及(ii)CDR序列，所述CDR序列允许本发明的VH结构域特异性结合A-β。此外，此种针对A-β的本发明的VH结构域还可以合适地具有如本文中所述的C-端延伸，特别是当所述VH结构域是单价的或形成其中存在所述VH结构域的本发明的化合物的C-末端时(同样，如本文中进一步描述的)。此种针对A-β的本发明的VH结构域还可以是如本文中进一步描述的，并且可以特别地是ISVD。
同样，关于本文中所述的本发明的其他方面和实施方案，当具体的ISVD(如该实施例中所述的针对A-β的ISVD)或包含其的化合物被说成是“根据本发明的”或“如本文中进一步描述的”时，本文中对于本发明的ISVD或化合物一般性描述的优选方面/实施方案和优先选择同样特别地分别适用于所述具体的ISVD或化合物，除非明确另有所指或除非具体的技术背景另有所需。
因此，在特别的方面中，本发明涉及针对A-β的VH结构域(并且特别是ISVD)，其中(i)位置112是K或Q；或(ii)位置110是K或Q并且位置11是V；或(iii)位置89是T；或(iv)位置89是L并且位置110是K或Q；或(v)位置11是V并且位置89是L；或(i)至(v)的任何合适的组合。特别地，在此种针对A-β的VH结构域中：
-位置11处的氨基酸残基优选地选自L、V或K(并且最优选是V)；并且
-位置14处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置41处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置89处的氨基酸残基优选地合适地选自T、V或L；并且
-位置108处的氨基酸残基优选地合适地选自Q或L；并且
-位置110处的氨基酸残基优选地合适地选自T、K或Q；并且
-位置112处的氨基酸残基优选地合适地选自S、K或Q；
以致(i)位置112是K或Q；或(ii)位置110是K或Q并且位置11是V；或(iii)位置89是T；或(iv)位置89是L并且位置110是K或Q；或(v)位置11是V并且位置89是L；或(i)至(v)的任何合适的组合。
针对A-β的本发明的VH结构域还可以是如本文中所述的并且同样可以特别地是针对A-β的ISVD(并且更特别地是纳米抗体)或包含至少一种此种ISVD的蛋白质、多肽或其他化合物或构建体。此种蛋白质、多肽或其他化合物或构建体还可以是如本文中进一步描述的，并且可以例如具有增加的半衰期(即如本文中所述的，例如表示为t1/2β的在人受试者中至少1天、优选地至少3天、更优选地至少7天、如至少10天的半衰期)，并且为此可以例如包含结合血清白蛋白的纳米抗体，其还可以是结合血清白蛋白的本发明的纳米抗体(同样，如本文中所述的)。
此外，此种ISVD可以合适地具有C-端延伸(如本文中和WO 12/175741中进一步描述的)，特别是在所述ISVD形成包含其的蛋白质、多肽或其他化合物或构建体的C-末端时(同样，如本文中进一步描述的)。
在一个优选的方面，针对A-β的本发明的VH结构域包含(i)CDR1序列，所述CDR1序列是序列SEQ ID NO:461(其是优选的)或是与序列SEQ ID NO:461具有仅一个氨基酸差异的氨基酸序列；(ii)CDR2序列，所述CDR2序列是序列SEQ ID NO:462(其是优选的)或是与序列SEQ ID NO:462具有仅一个或两个氨基酸差异的氨基酸序列；和(iii)CDR3序列，所述CDR3序列是序列SEQ ID NO:463(其是优选的)或是与序列SEQ ID NO:463具有仅一个或两个氨基酸差异的氨基酸序列。
更优选地，在根据该方面的针对A-β的本发明的VH结构域中：(i)CDR1是SEQ IDNO:461；(ii)CDR2是SEQ ID NO:462；并且(iii)CDR3是SEQ ID NO:463。
在一个具体方面，针对A-β的本发明的纳米抗体是SEQ ID NO:460的纳米抗体的变体(与SEQ ID NO:460具有至少90％序列同一性，如至少95％序列同一性)，其中：
-位置11处的氨基酸残基优选地选自L、V或K(并且最优选是V)；并且
-位置14处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置41处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置89处的氨基酸残基优选地合适地选自T、V或L；并且
-位置108处的氨基酸残基优选地合适地选自Q或L；并且
-位置110处的氨基酸残基优选地合适地选自T、K或Q；并且
-位置112处的氨基酸残基优选地合适地选自S、K或Q；
以致(i)位置112是K或Q；或(ii)位置110是K或Q并且位置11是V；或(iii)位置89是T；或(iv)位置89是L并且位置110是K或Q；或(v)位置11是V并且位置89是L；或(i)至(v)的任何合适的组合。此种ISV的CDR优选是如前两段中所限定的。
在另一个优选的方面，针对A-β的本发明的VH结构域包含(i)CDR1序列，所述CDR1序列是序列SEQ ID NO:479(其是优选的)或是与序列SEQ ID NO:479具有仅一个氨基酸差异的氨基酸序列；(ii)CDR2序列，所述CDR2序列是序列SEQ ID NO:480(其是优选的)或是与序列SEQ ID NO:480具有仅一个或两个氨基酸差异的氨基酸序列；和(iii)CDR3序列，所述CDR3序列是序列SEQ ID NO:481(其是优选的)或是与序列SEQ ID NO:481具有仅一个或两个氨基酸差异的氨基酸序列。
更优选地，在根据该方面的针对A-β的本发明的VH结构域中：(i)CDR1是SEQ IDNO:479；(ii)CDR2是SEQ ID NO:480；并且(iii)CDR3是SEQ ID NO:481。
在一个具体方面，针对A-β的本发明的纳米抗体是SEQ ID NO:478的纳米抗体的变体(与SEQ ID NO:478具有至少90％序列同一性，如至少95％序列同一性)，其中：
-位置11处的氨基酸残基优选地选自L、V或K(并且最优选是V)；并且
-位置14处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置41处的氨基酸残基优选地合适地选自A或P；并且
-位置89处的氨基酸残基优选地合适地选自T、V或L；并且
-位置108处的氨基酸残基优选地合适地选自Q或L；并且
-位置110处的氨基酸残基优选地合适地选自T、K或Q；并且
-位置112处的氨基酸残基优选地合适地选自S、K或Q；
以致(i)位置112是K或Q；或(ii)位置110是K或Q并且位置11是V；或(iii)位置89是T；或(iv)位置89是L并且位置110是K或Q；或(v)位置11是V并且位置89是L；或(i)至(v)的任何合适的组合。同样，此种ISV的CDR优选是如前两段中所限定的。
针对A-β的本发明的纳米抗体的一些特别优选的而非限制性的实例在图21A中作为SEQ ID NO:464至477列出并且在图21B中作为SEQ ID NO:482至495列出；并且这些纳米抗体中的每个形成本发明另外的方面。
本发明还涉及针对A-β的本发明的化合物，其包含SEQ ID NO:464至477和/或482至495的本发明的纳米抗体中的至少一个(如一个、两个或三个)。此种针对A-β的本发明的化合物同样可以是如本文中进一步描述的，并且因此例如可以包含合适的接头，可以包含如本文中所述的C-端延伸，并且可以是半衰期延长的(例如因为其包含针对人血清白蛋白的纳米抗体，如(优选地)针对人血清白蛋白的本发明的纳米抗体)。参见下表BB。
如例如WO 2006/040153中所述的并且特别地如EP2542579中所述的，一类特别优选的针对A-β的基于纳米抗体的化合物是双互补位化合物。因此，在本发明的一个方面，针对A-β的本发明的化合物是双互补位构建体，其包含一个SEQ ID NO:460的ISV或(优选地)来源于SEQ ID NO:460的本发明的ISV(如该实施例17中所述)和一个SEQ ID NO:478的ISV或(优选地)来源于SEQ ID NO:478的本发明的ISV(如该实施例17中所述)，前提是这些ISV中的至少一个(并且优选两个)是本发明的ISV。此种双互补位构建体还可以是半衰期延长的(即借助于结合血清白蛋白的ISV)。此种双互补位构建体的一些具体实例在SEQ ID NO:730至766中给出。
针对A-β的本发明的化合物的一些特别优选的实例在图30中作为SEQ ID NO:730至766给出；并且这些化合物中的每个形成本发明的另外的方面。因此，在另一个方面，本发明涉及针对A-β并且具有选自由以下组成的组的氨基酸序列的多肽：SEQ ID NO:730至766。更通常地，针对A-β的本发明的化合物可以是如WO 2006/040153中所述的并且特别是如EP2542579中所述的，但是包含本发明的ISV。其还可以用于WO 2006/040153和特别地EP2542579中所述的用途。
实施例19：针对预先存在的抗体的结合，测试抗-A-β构建体。
使用本文中所述的一般性方法，针对预先存在的抗体的结合，对三个半衰期延长的抗-A-β构建体(具有通式[A-β-1]-9GS-ALB8-9GS-[A-β-2]-A)进行测试并且相比较。根据本发明的两个构建体在全部三个结构单元中(即在两个抗-A-β纳米抗体中并且在结合血清白蛋白的纳米抗体中)都指示本发明的突变。参比构建体(SEQ ID NO:766)在任何结构单元中都不具有本发明的突变。测试的所有构建体都具有C-端丙氨酸。结果在表CC-1和图31A中给出。
表CC-1：针对预先存在的抗体的结合，对抗-A-β构建体进行测试
存在于构建体的C-末端处的抗-A-β纳米抗体也作为单价构建体(具有C-端丙氨酸)被单独测试。结果在表CC-2和图31A中给出。
表CC-2：针对预先存在的抗体的结合，对单价抗-A-β纳米抗体进行测试
实施例20：本发明的血清白蛋白结合物的概览
以下表DD和EE给出了分别基于Alb-8(表DD)和Alb-23(表EE)的本发明的结合血清白蛋白的纳米抗体的一些优选的而非限制性的实例。
如提及的，本发明还涉及多肽，蛋白质，化合物或构建体(并且特别是本发明的化合物)，其包含下表DD或EE中列出的结合血清白蛋白的纳米抗体之一。此种多肽、蛋白质、化合物或构建体(并且特别是本发明的化合物)还可以包含针对至少一个治疗靶标的至少一个(如一个、两个或三个)结合结构域或结合单元(如ISVD，并且特别是本发明的ISV)。此种多肽、蛋白质、化合物或构建体对于治疗靶标同样可以合适地是单特异性、双特异性或三特异性的，并且可以是二价、三价、四价或更高价的。其通常还将含有合适的接头，并且可以包含如本文中所述的C-端延伸。
特别地，此种多肽、蛋白质、化合物或构建体可以是本发明的化合物(如本文中所述的)和/或可以是如本文中对于本发明的化合物进一步描述的(包括本发明的化合物的优选的实施方案。因此，包含ISVD并且特别是包含纳米抗体的化合物是特别优选的)。因此，包含表DD或EE中列出的结合血清白蛋白的纳米抗体之一的本发明的化合物形成本发明另外的方面。
Claims (72)
1.VH结构域，其中：(i)位置112处的氨基酸残基是K或Q中的一个；和/或(ii)位置89处的氨基酸残基是T；和/或(iii)位置89处的氨基酸残基是L并且位置110处的氨基酸残基是K或Q中的一个；并且(iv)在情况(i)至(iii)中的每一种中，位置11处的氨基酸优选是V；并且其中所述VH结构域包含C-端延伸(X)n，其中n是1至10，优选地是1至5，如1、2、3、4或5(并且优选地是1或2，如1)；并且各个X是(优选地天然存在的)这样的氨基酸残基，其是被独立地选择的，并且优选地独立地选自由以下组成的组：丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)或异亮氨酸(I)。
2.根据权利要求1所述的VH结构域，其是免疫球蛋白单可变结构域。
3.根据权利要求2所述的VH结构域，其是纳米抗体。
4.VH结构域，其中位置112处的氨基酸残基是K或Q中的一个。
5.根据权利要求4所述的VH结构域，其包含C-端延伸(X)n，其中n是1至10，优选地是1至5，如1、2、3、4或5(并且优选地是1或2，如1)；并且各个X是(优选地天然存在的)这样的氨基酸残基，其是被独立地选择的，并且优选地独立地选自由以下组成的组：丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)或异亮氨酸(I)。
6.根据权利要求4或5所述的VH结构域，其是免疫球蛋白单可变结构域。
7.根据权利要求6所述的VH结构域，其是纳米抗体。
8.VH结构域，其中位置89处的氨基酸残基是T，并且其中所述VH结构域包含C-端延伸(X)n，其中n是1至10，优选地是1至5，如1、2、3、4或5(并且优选地是1或2，如1)；并且各个X是(优选地天然存在的)这样的氨基酸残基，其是被独立地选择的，并且优选地独立地选自由以下组成的组：丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)或异亮氨酸(I)。
9.根据权利要求8所述的VH结构域，其是免疫球蛋白单可变结构域。
10.根据权利要求9所述的VH结构域，其是纳米抗体。
11.VH结构域，其中位置89处的氨基酸残基是L并且位置110处的氨基酸残基是K或Q中的一个。
12.根据权利要求11所述的VH结构域，其中所述VH结构域包含C-端延伸(X)n，其中n是1至10，优选地是1至5，如1、2、3、4或5(并且优选地是1或2，如1)；并且各个X是(优选地天然存在的)这样的氨基酸残基，其是被独立地选择的，并且优选地独立地选自由以下组成的组：丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)或异亮氨酸(I)。
13.根据权利要求11或12所述的VH结构域，其是免疫球蛋白单可变结构域。
14.根据权利要求13所述的VH结构域，其是纳米抗体。
15.VH结构域，其中位置11处的氨基酸残基是V并且位置110处的氨基酸残基是K或Q中的一个。
16.根据权利要求15所述的VH结构域，其中所述VH结构域包含C-端延伸(X)n，其中n是1至10，优选地是1至5，如1、2、3、4或5(并且优选地是1或2，如1)；并且各个X是(优选地天然存在的)这样的氨基酸残基，其是被独立地选择的，并且优选地独立地选自由以下组成的组：丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)或异亮氨酸(I)。
17.根据权利要求15或16所述的VH结构域，其是免疫球蛋白单可变结构域。
18.根据权利要求17所述的VH结构域，其是纳米抗体。
19.VH结构域，其中位置89处的氨基酸残基是L并且位置11处的氨基酸残基是V。
20.根据权利要求19所述的VH结构域，其中所述VH结构域包含C-端延伸(X)n，其中n是1至10，优选地是1至5，如1、2、3、4或5(并且优选地是1或2，如1)；并且各个X是(优选地天然存在的)这样的氨基酸残基，其是被独立地选择的，并且优选地独立地选自由以下组成的组：丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)或异亮氨酸(I)。
21.根据权利要求19或20所述的VH结构域，其是免疫球蛋白单可变结构域。
22.根据权利要求21所述的VH结构域，其是纳米抗体。
23.VH结构域，其中：
-位置11处的氨基酸残基是L、V或K中的一个；并且
-位置14处的氨基酸残基是A或P中的一个；并且
-位置41处的氨基酸残基是A或P中的一个；并且
-位置89处的氨基酸残基是T、V或L中的一个；并且
-位置108处的氨基酸残基是Q或L中的一个；并且
-位置110处的氨基酸残基是T、K或Q中的一个；并且
-位置112处的氨基酸残基是S、K或Q中的一个；
其中(i)位置112处的氨基酸残基是K或Q中的一个；和/或(ii)位置89处的氨基酸残基是T；和/或(iii)位置89处的氨基酸残基是L并且位置110处的氨基酸残基是K或Q中的一个；并且(iv)在情况(i)至(iii)中的每一种中，位置11处的氨基酸优选是V；并且
其中所述VH结构域任选地包含C-端延伸(X)n，其中n是1至10，优选地是1至5，如1、2、3、4或5(并且优选地是1或2，如1)；并且各个X是(优选地天然存在的)这样的氨基酸残基，其是被独立地选择的，并且优选地独立地选自由以下组成的组：丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)或异亮氨酸(I)。
24.根据权利要求23所述的VH结构域，其是免疫球蛋白单可变结构域。
25.根据权利要求23或24所述的VH结构域，其是纳米抗体。
26.根据权利要求23至25中任一项所述的VH结构域，其中位置112处的氨基酸残基是K或Q中的一个。
27.根据权利要求23至25中任一项所述的VH结构域，其中位置89处的氨基酸残基是T。
28.根据权利要求23至25中任一项所述的VH结构域，其中位置89处的氨基酸残基是L并且位置110处的氨基酸残基是K或Q中的一个。
29.根据权利要求23至25中任一项所述的VH结构域，其中位置89处的氨基酸残基是L并且位置11处的氨基酸残基是V。
30.根据权利要求23至29中任一项所述的VH结构域，其中所述VH结构域包含C-端延伸(X)n，其中n是1至10，优选地是1至5，如1、2、3、4或5(并且优选地是1或2，如1)；并且各个X是(优选地天然存在的)这样的氨基酸残基，其是被独立地选择的，并且优选地独立地选自由以下组成的组：丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)或异亮氨酸(I)。
31.VH结构域，其中：
位置11处的氨基酸残基是L；并且
位置14处的氨基酸残基是A或P中的一个；并且
位置41处的氨基酸残基是A或P中的一个；并且
位置89处的氨基酸残基是T、V或L中的一个；并且
位置108处的氨基酸残基是Q或L中的一个；并且
位置110处的氨基酸残基是K或Q中的一个；并且
位置112处的氨基酸残基是S、K或Q中的一个；
并且其中所述VH结构域任选地包含C-端延伸(X)n，其中n是1至10，优选地是1至5，如1、2、3、4或5(并且优选地是1或2，如1)；并且各个X是(优选地天然存在的)这样的氨基酸残基，其是被独立地选择的，并且优选地独立地选自由以下组成的组：丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)或异亮氨酸(I)。
32.根据权利要求31所述的VH结构域，其是免疫球蛋白单可变结构域。
33.根据权利要求30或31所述的VH结构域，其是纳米抗体。
34.根据权利要求30至32中任一项所述的VH结构域，其中所述VH结构域包含C-端延伸(X)n，其中n是1至10，优选地是1至5，如1、2、3、4或5(并且优选地是1或2，如1)；并且各个X是(优选地天然存在的)这样的氨基酸残基，其是被独立地选择的，并且优选地独立地选自由以下组成的组：丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)或异亮氨酸(I)。
35.根据前述权利要求中任一项所述的VH结构域，其能够特异性结合人血清白蛋白。
36.根据权利要求35所述的VH结构域，其是免疫球蛋白单可变结构域。
37.根据权利要求36所述的VH结构域，其是纳米抗体。
38.根据权利要求1至7中任一项所述的VH结构域的文库。
39.编码根据权利要求1至7中任一项所述的VH结构域的核酸残基的文库。
40.根据权利要求39所述的文库，其是表达文库。
41.根据权利要求38-40中任一项所述的文库，其是合成的文库。
42.根据权利要求38-41中任一项所述的文库，其包含至少至少100个不同的序列，如至少1000个不同的序列，特别地超过105个不同的序列，更特别地超过106个不同的序列，如108至1010或更多个不同的序列。
43.根据权利要求8至10中任一项所述的VH结构域的文库。
44.编码根据权利要求8至10中任一项所述的VH结构域的核酸残基的文库。
45.根据权利要求44所述的文库，其是表达文库。
46.根据权利要求43-45中任一项所述的文库，其是合成的文库。
47.根据权利要求43-46中任一项所述的文库，其包含至少至少100个不同的序列，如至少1000个不同的序列，特别地超过105个不同的序列，更特别地超过106个不同的序列，如108至1010或更多个不同的序列。
48.根据权利要求11至14中任一项所述的VH结构域的文库。
49.编码根据权利要求11至14中任一项所述的VH结构域的核酸残基的文库。
50.根据权利要求48所述的文库，其是表达文库。
51.根据权利要求48-50中任一项所述的文库，其是合成的文库。
52.根据权利要求48-51中任一项所述的文库，其包含至少至少100个不同的序列，如至少1000个不同的序列，特别地超过105个不同的序列，更特别地超过106个不同的序列，如108至1010或更多个不同的序列。
53.根据权利要求15-18中任一项所述的VH结构域的文库。
54.编码根据权利要求15-18中任一项所述的VH结构域的核酸残基的文库。
55.根据权利要求54所述的文库，其是表达文库。
56.根据权利要求53-55中任一项所述的文库，其是合成的文库。
57.根据权利要求53-56中任一项所述的文库，其包含至少至少100个不同的序列，如至少1000个不同的序列，特别地超过105个不同的序列，更特别地超过106个不同的序列，如108至1010或更多个不同的序列。
58.根据权利要求19-22中任一项所述的VH结构域的文库。
59.编码根据权利要求19-22中任一项所述的VH结构域的核酸残基的文库。
60.根据权利要求59所述的文库，其是表达文库。
61.根据权利要求58-60中任一项所述的文库，其是合成的文库。
62.根据权利要求58-61中任一项所述的文库，其包含至少至少100个不同的序列，如至少1000个不同的序列，特别地超过105个不同的序列，更特别地超过106个不同的序列，如108至1010或更多个不同的序列。
63.根据权利要求23-30中任一项所述的VH结构域的文库。
64.编码根据权利要求23-30中任一项所述的VH结构域的核酸残基的文库。
65.根据权利要求64所述的文库，其是表达文库。
66.根据权利要求63-65中任一项所述的文库，其是合成的文库。
67.根据权利要求63-66中任一项所述的文库，其包含至少至少100个不同的序列，如至少1000个不同的序列，特别地超过105个不同的序列，更特别地超过106个不同的序列，如108至1010或更多个不同的序列。
68.根据权利要求31至37中任一项所述的VH结构域的文库。
69.编码根据权利要求31至37中任一项所述的VH结构域的核酸残基的文库。
70.根据权利要求69所述的文库，其是表达文库。
71.根据权利要求68-70中任一项所述的文库，其是合成的文库。
72.根据权利要求68-71中任一项所述的文库，其包含至少至少100个不同的序列，如至少1000个不同的序列，特别地超过105个不同的序列，更特别地超过106个不同的序列，如108至1010或更多个不同的序列。
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Families Citing this family (54)
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| WO2022117572A2 (en) | 2020-12-02 | 2022-06-09 | Oncurious Nv | An ltbr agonist in combination therapy against cancer |
| WO2022120388A2 (en) | 2020-12-04 | 2022-06-09 | Tidal Therapeutics, Inc. | Ionizable cationic lipids and lipid nanoparticles, and methods of synthesis and use thereof |
| MX2023007299A (es) | 2020-12-18 | 2023-07-04 | Ablynx Nv | Polipeptidos de reclutamiento de celulas t basados en la reactividad de tcr alfa/beta. |
| US11897951B2 (en) | 2020-12-18 | 2024-02-13 | Ablynx N.V. | Polypeptides comprising immunoglobulin single variable domains targeting IL-6 and TNF-α |
| WO2022129560A1 (en) | 2020-12-18 | 2022-06-23 | Ablynx Nv | Polypeptides comprising immunoglobulin single variable domains targeting glypican-3 and t cell receptor |
| GB202020502D0 (en) | 2020-12-23 | 2021-02-03 | Vib Vzw | Antibody composistion for treatment of corona virus infection |
| CN117794566A (zh) | 2021-02-05 | 2024-03-29 | Vib研究所 | 沙贝病毒结合剂 |
| CA3207548A1 (en) | 2021-02-05 | 2022-08-11 | Xavier Saelens | Sarbecovirus binders |
| WO2022175532A1 (en) | 2021-02-19 | 2022-08-25 | Vib Vzw | Cation-independent mannose-6-phosphate receptor binders |
| CN117043184A (zh) * | 2021-04-01 | 2023-11-10 | 南京再明医药有限公司 | 抗人血清白蛋白（hsa）的纳米抗体及其应用 |
| EP4377352A2 (en) | 2021-07-30 | 2024-06-05 | Vib Vzw | Cation-independent mannose-6-phosphate receptor binders for targeted protein degradation |
| WO2023093899A1 (zh) * | 2021-11-29 | 2023-06-01 | 江苏恒瑞医药股份有限公司 | 经修饰的蛋白或多肽 |
| WO2023111266A1 (en) | 2021-12-17 | 2023-06-22 | Ablynx Nv | POLYPEPTIDES COMPRISING IMMUNOGLOBULIN SINGLE VARIABLE DOMAINS TARGETING TCRαβ, CD33 AND CD123 |
| WO2023135198A1 (en) | 2022-01-12 | 2023-07-20 | Vib Vzw | Human ntcp binders for therapeutic use and liver-specific targeted delivery |
| WO2023198848A1 (en) | 2022-04-13 | 2023-10-19 | Vib Vzw | An ltbr agonist in combination therapy against cancer |
| WO2023214047A1 (en) | 2022-05-06 | 2023-11-09 | Numab Therapeutics AG | Antibody variable domains and antibodies having decreased immunogenicity |
| EP4273162A1 (en) * | 2022-05-06 | 2023-11-08 | Numab Therapeutics AG | Antibody variable domains and antibodies having decreased immunogenicity |
| WO2023222825A1 (en) | 2022-05-18 | 2023-11-23 | Vib Vzw | Sarbecovirus spike s2 subunit binders |
| US20240002331A1 (en) | 2022-06-08 | 2024-01-04 | Tidal Therapeutics, Inc. | Ionizable cationic lipids and lipid nanoparticles, and methods of synthesis and use thereof |
| US20240109965A1 (en) | 2022-06-14 | 2024-04-04 | Ablynx N.V. | Immunoglobulin single variable domains targeting t cell receptor |
| US20240132624A1 (en) | 2022-07-27 | 2024-04-25 | Ablynx N.V. | Polypeptides binding to a specific epitope of the neonatal fc receptor |
| WO2024068744A1 (en) | 2022-09-27 | 2024-04-04 | Vib Vzw | Antivirals against human parainfluenza virus |
| WO2024083843A1 (en) | 2022-10-18 | 2024-04-25 | Confo Therapeutics N.V. | Amino acid sequences directed against the melanocortin 4 receptor and polypeptides comprising the same for the treatment of mc4r-related diseases and disorders |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2011075861A1 (en) * | 2009-12-23 | 2011-06-30 | Esbatech, An Alcon Biomedical Research Unit Llc | Method for decreasing immunogenicity |
| WO2012175741A2 (en) * | 2011-06-23 | 2012-12-27 | Ablynx Nv | Techniques for predicting, detecting and reducing aspecific protein interference in assays involving immunoglobulin single variable domains |
| WO2013024059A2 (en) * | 2011-08-17 | 2013-02-21 | Glaxo Group Limited | Modified proteins and peptides |
Family Cites Families (88)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE1545106C3 (de) | 1963-07-16 | 1979-05-31 | Union Carbide Corp., New York, N.Y. (V.St.A.) | Verfahren zur Herstellung von linearen Polyarylenpolyäthern |
| IL85035A0 (en) | 1987-01-08 | 1988-06-30 | Int Genetic Eng | Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same |
| JP3101690B2 (ja) | 1987-03-18 | 2000-10-23 | エス・ビィ・２・インコーポレイテッド | 変性抗体の、または変性抗体に関する改良 |
| WO1992022653A1 (en) | 1991-06-14 | 1992-12-23 | Genentech, Inc. | Method for making humanized antibodies |
| ES2162823T5 (es) | 1992-08-21 | 2010-08-09 | Vrije Universiteit Brussel | Inmunoglobulinas desprovistas de cadenas ligeras. |
| JP2003525016A (ja) | 1998-02-19 | 2003-08-26 | エクサイト セラピーズ， インコーポレイテッド | リンパ球活性化を調節するための組成物および方法 |
| CA2359067C (en) | 1999-01-15 | 2017-03-14 | Genentech, Inc. | Polypeptide variants with altered effector function |
| CA2441903C (en) * | 2000-05-26 | 2012-07-31 | National Research Council Of Canada | Single-domain brain-targeting antibody fragments derived from llama antibodies |
| US7829084B2 (en) | 2001-01-17 | 2010-11-09 | Trubion Pharmaceuticals, Inc. | Binding constructs and methods for use thereof |
| US20100081792A1 (en) | 2001-06-28 | 2010-04-01 | Smithkline Beecham Corporation | Ligand |
| CN1642982A (zh) | 2001-07-26 | 2005-07-20 | 唐诚公司 | 活化或抑制类Toll受体9的试剂 |
| JP2005289809A (ja) | 2001-10-24 | 2005-10-20 | Vlaams Interuniversitair Inst Voor Biotechnologie Vzw (Vib Vzw) | 突然変異重鎖抗体 |
| AU2003244817B2 (en) | 2002-06-28 | 2010-08-26 | Domantis Limited | Antigen-binding immunoglobulin single variable domains and dual-specific constructs |
| US9321832B2 (en) | 2002-06-28 | 2016-04-26 | Domantis Limited | Ligand |
| US20060002935A1 (en) | 2002-06-28 | 2006-01-05 | Domantis Limited | Tumor Necrosis Factor Receptor 1 antagonists and methods of use therefor |
| FR2846667B1 (fr) | 2002-11-06 | 2004-12-31 | Pasteur Institut | Fragments variables d'anticorps de camelides a chaine unique diriges contre le peptide beta-amyloide 1-42 et leurs applications pour le diagnostic et le traitement des maladies neuroagregatives |
| EP1558650A2 (en) | 2002-11-08 | 2005-08-03 | Ablynx N.V. | Camelidae antibodies against immunoglobulin e and use thereof for the treatment of allergic disorders |
| CA2505325C (en) | 2002-11-08 | 2014-02-25 | Ablynx N.V. | Stabilized single domain antibodies |
| GB0230203D0 (en) | 2002-12-27 | 2003-02-05 | Domantis Ltd | Fc fusion |
| WO2004062551A2 (en) | 2003-01-10 | 2004-07-29 | Ablynx N.V. | RECOMBINANT VHH SINGLE DOMAIN ANTIBODY FROM CAMELIDAE AGAINST VON WILLEBRAND FACTOR (vWF) OR AGAINST COLLAGEN |
| EP2053062A1 (en) | 2004-03-24 | 2009-04-29 | Xencor, Inc. | Immunoglobin variants outside the Fc region |
| AU2005250216B2 (en) | 2004-06-01 | 2009-12-10 | Domantis Limited | Bispecific fusion antibodies with enhanced serum half-life |
| KR20070084170A (ko) | 2004-10-13 | 2007-08-24 | 아블린쓰 엔.브이. | 알쯔하이머병 등의 퇴행성 신경 질환의 치료 및 진단을위한 단일 도메인 카멜리드 항-아밀로이드 베타 항체 및이를 포함하는 폴리펩타이드 |
| RU2428431C2 (ru) | 2004-12-02 | 2011-09-10 | Домантис Лимитед | Слитые конструкции лекарственного средства и конъюгаты |
| BRPI0518622A2 (pt) | 2004-12-02 | 2008-12-02 | Domantis Ltd | usos de antagonistas de receptor do tipo 1 de interleucina-1(il-1r1) para a fabricaÇço de um medicamento para o tratamento de uma doenÇa respiratària; composiÇço farmacÊutica que compreende um antagonista do il-1r1 e um veÍculo fisiologicamente aceitÁvel e dispositivo de liberaÇço de medicamento |
| HUE045710T2 (hu) * | 2005-05-18 | 2020-01-28 | Ablynx Nv | Javított, alfa tumor nekrózis faktor elleni nanobodies |
| BRPI0609797B8 (pt) | 2005-05-20 | 2021-05-25 | Ablynx Nv | nanocorpos melhorados para o tratamento de desordens mediadas por agregação |
| WO2006129843A2 (en) | 2005-05-31 | 2006-12-07 | Canon Kabushiki Kaisha | Bispecific capturing molecule |
| PE20071101A1 (es) * | 2005-08-31 | 2007-12-21 | Amgen Inc | Polipeptidos y anticuerpos |
| CN101466734A (zh) | 2005-12-01 | 2009-06-24 | 杜门蒂斯有限公司 | 与白细胞介素-1受体1型结合的竞争性域抗体形式 |
| WO2007063308A2 (en) | 2005-12-01 | 2007-06-07 | Domantis Limited | Noncompetitive domain antibody formats that bind interleukin 1 receptor type 1 |
| FR2894741B1 (fr) | 2005-12-08 | 2009-12-04 | Centre Nat Etd Spatiales | Chaine de reception par satellite |
| AU2007209201A1 (en) | 2006-01-24 | 2007-08-02 | Domantis Limited | Fusion proteins that contain natural junctions |
| WO2008020079A1 (en) | 2006-08-18 | 2008-02-21 | Ablynx N.V. | Amino acid sequences directed against il-6r and polypeptides comprising the same for the treatment of deseases and disorders associated with il-6-mediated signalling |
| CA2671581A1 (en) | 2006-12-05 | 2008-06-12 | Ablynx N.V. | Peptides capable of binding to serum proteins |
| EP2102241A2 (en) | 2006-12-15 | 2009-09-23 | Ablynx N.V. | Amino acid sequences that modulate the interaction between cells of the immune system |
| KR101264473B1 (ko) | 2007-05-24 | 2013-05-29 | 아블린쓰 엔.브이. | Ｒａｎｋ-ｌ에 대한 아미노산 서열, 및 이를 포함하는 골 질환 및 장애 치료용 폴리펩티드 |
| JP5611820B2 (ja) | 2007-06-25 | 2014-10-22 | エスバテック − ア ノバルティスカンパニー エルエルシー | 抗体の修飾方法並びに改善された機能特性を有する修飾された抗体 |
| AU2008328779B2 (en) | 2007-11-27 | 2014-06-05 | Ablynx N.V. | Amino acid sequences directed against HER2 and polypeptides comprising the same for the treatment of cancers and/or tumors |
| JP2011517561A (ja) | 2008-03-31 | 2011-06-16 | グラクソ グループ リミテッド | 薬物融合体および複合体 |
| AU2009237662A1 (en) | 2008-04-17 | 2009-10-22 | Ablynx N.V. | Peptides capable of binding to serum proteins and compounds, constructs and polypeptides comprising the same |
| WO2009138494A2 (en) * | 2008-05-15 | 2009-11-19 | Ablynx N.V. | Amino acid sequences directed against toll-like receptors and polypeptides comprising the same for the treatment of diseases related to toll-like receptors |
| DE102008023620A1 (de) | 2008-05-15 | 2009-11-19 | Mettler-Toledo (Albstadt) Gmbh | Funktionseinheit mit einer aufrufbaren Funktion und Verfahren zu deren Aufruf |
| KR20110020825A (ko) | 2008-05-16 | 2011-03-03 | 아블린쓰 엔.브이. | Ｃｘｃｒ4 및 다른 ｇｐｃｒ에 대해 유도된 아미노산 서열 및 이를 포함하는 화합물 |
| EP2143735A1 (en) * | 2008-07-10 | 2010-01-13 | Institut Pasteur | Variable domains of camelid heavy-chain antibodies directed against glial fibrillary acidic proteins |
| AR072999A1 (es) | 2008-08-11 | 2010-10-06 | Medarex Inc | Anticuerpos humanos que se unen al gen 3 de activacion linfocitaria (lag-3) y los usos de estos |
| WO2010042815A2 (en) | 2008-10-09 | 2010-04-15 | Duke University | Vhh antibody fragments for use in the detection and treatment of cancer |
| BRPI1013588A2 (pt) | 2009-03-27 | 2016-04-19 | Glaxo Group Ltd | composição |
| EP3828201A1 (en) | 2009-04-30 | 2021-06-02 | Ablynx N.V. | Method for the production of domain antibodies |
| WO2010130832A2 (en) | 2009-05-15 | 2010-11-18 | Ablynx N.V. | Amino acid sequences directed against dickkopf-1 and polypeptides comprising the same for the treatment of diseases and disorders associated with bone loss and/or osteolytic lesions |
| WO2010142534A1 (en) | 2009-05-27 | 2010-12-16 | Ablynx Nv | Biparatopic protein constructs directed against il-23 |
| HUE051430T2 (hu) | 2009-07-10 | 2021-03-01 | Ablynx Nv | Eljárás variábilis domének elõállítására |
| US8306355B2 (en) | 2009-07-13 | 2012-11-06 | Sharp Laboratories Of America, Inc. | Methods and systems for reducing compression artifacts |
| EP2486056A1 (en) | 2009-10-09 | 2012-08-15 | Ablynx N.V. | Immunoglobulin single variable domain directed against human cxcr4 and other cell associated proteins and methods to generate them |
| WO2011073180A1 (en) | 2009-12-14 | 2011-06-23 | Ablynx N.V. | Single variable domain antibodies against ox40l, constructs and therapeutic use |
| AP2012006359A0 (en) | 2010-03-03 | 2012-08-31 | Boehringer Ingelheim Int | Biparatopic abeta binding polypeptides |
| EP2552962B1 (en) | 2010-03-26 | 2016-03-23 | Ablynx N.V. | Immunoglobulin single variable domains directed against cxcr7 |
| EP2563814A1 (en) | 2010-04-30 | 2013-03-06 | Ablynx N.V. | Amino acid sequences of nanobodies directed against p19 subunit of the heterodimeric cytokine il-23 |
| AU2011254557B2 (en) | 2010-05-20 | 2015-09-03 | Ablynx Nv | Biological materials related to HER3 |
| WO2011161266A1 (en) | 2010-06-25 | 2011-12-29 | Ablynx Nv | Improved immunoglobulin single variable domains and constructs thereof directed against cxcr4 |
| JP2013145769A (ja) | 2010-08-04 | 2013-07-25 | Kri Inc | 異方性希土類ボンド磁石とその製造方法 |
| WO2012175400A1 (en) | 2011-06-23 | 2012-12-27 | Ablynx Nv | Serum albumin binding proteins |
| WO2012042026A1 (en) | 2010-09-30 | 2012-04-05 | Ablynx Nv | Biological materials related to c-met |
| JP2014505698A (ja) * | 2011-02-02 | 2014-03-06 | グラクソ グループ リミテッド | 新規抗原結合タンパク質 |
| US20150158948A9 (en) | 2011-03-28 | 2015-06-11 | Francis Descamps | Bispecific anti-cxcr7 immunoglobulin single variable domains |
| UA117218C2 (uk) | 2011-05-05 | 2018-07-10 | Мерк Патент Гмбх | Поліпептид, спрямований проти il-17a, il-17f та/або il17-a/f |
| EP2723772A1 (en) | 2011-06-23 | 2014-04-30 | Ablynx N.V. | Immunoglobulin single variable domains directed against ige |
| US20130019175A1 (en) * | 2011-07-14 | 2013-01-17 | Microsoft Corporation | Submenus for context based menu system |
| CA2850261C (en) | 2011-09-30 | 2021-04-20 | Ablynx Nv | C-met immunoglobulin single variable domains |
| HUE057680T2 (hu) | 2011-10-17 | 2022-06-28 | Regeneron Pharma | Korlátozott immunglobulin-nehézlánccal rendelkezõ egerek |
| US20130129727A1 (en) | 2011-11-17 | 2013-05-23 | Nanjingjinsirui Science & Technology Biology Corporation | Methods and systems for increasing protein stability |
| EA028647B1 (ru) | 2012-01-31 | 2017-12-29 | Ридженерон Фармасьютикалз, Инк. | Антитела к asic1 и их применение |
| TWI641619B (zh) | 2012-06-25 | 2018-11-21 | 美商再生元醫藥公司 | 抗－ｅｇｆｒ抗體及其用途 |
| EP2895510A2 (en) | 2012-09-13 | 2015-07-22 | Novartis AG | Single domain antibody with c-terminal modification |
| US9667316B2 (en) | 2013-05-17 | 2017-05-30 | The Boeing Company | Aircraft data transmission using phase separation |
| RS63085B1 (sr) | 2014-05-16 | 2022-04-29 | Ablynx Nv | Varijabilni domeni imunoglobulina |
| US10968271B2 (en) * | 2015-10-30 | 2021-04-06 | Ablynx N.V. | Polypeptides against IL-23 |
| EP3374395A1 (en) | 2015-11-12 | 2018-09-19 | Ablynx NV | Improved p2x7 receptor binders and polypeptides comprising the same |
| NO2768984T3 (zh) | 2015-11-12 | 2018-06-09 | ||
| ES2905912T3 (es) | 2015-11-13 | 2022-04-12 | Ablynx Nv | Dominios variables de inmunoglobulina de unión a albúmina sérica mejorados |
| US11332519B2 (en) | 2015-11-18 | 2022-05-17 | Ablynx N.V. | Serum albumin binders |
| AU2016355568A1 (en) | 2015-11-18 | 2018-06-21 | Merck Sharp & Dohme Llc | PD1/CTLA4 Binders |
| CN108473585B (zh) | 2015-11-18 | 2022-04-05 | 默沙东公司 | Pd1和/或lag3结合剂 |
| KR102095140B1 (ko) | 2015-11-18 | 2020-03-31 | 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 | Ctla4 결합제 |
| CA3050574A1 (en) | 2017-01-17 | 2018-07-26 | Ablynx Nv | Improved serum albumin binders |
| BR112022009799A2 (pt) | 2019-12-06 | 2022-08-16 | Ablynx Nv | Polipeptídeos compreendendo domínios variáveis únicos de imunoglobulina alvejando tnfalfa e il-23 |
| AR120698A1 (es) * | 2019-12-09 | 2022-03-09 | Ablynx Nv | Polipéptidos que comprenden dominios variables únicos de inmunoglobulina que se dirigen a il-13 y tslp |
| US11897951B2 (en) * | 2020-12-18 | 2024-02-13 | Ablynx N.V. | Polypeptides comprising immunoglobulin single variable domains targeting IL-6 and TNF-α |
-
2015
- 2015-05-13 RS RS20220328A patent/RS63085B1/sr unknown
- 2015-05-13 SG SG10201805288QA patent/SG10201805288QA/en unknown
- 2015-05-13 HR HRP20220400TT patent/HRP20220400T1/hr unknown
- 2015-05-13 EP EP20167969.3A patent/EP3702369A1/en active Pending
- 2015-05-13 EP EP15722211.8A patent/EP3143042B1/en active Active
- 2015-05-13 IL IL295534A patent/IL295534A/en unknown
- 2015-05-13 KR KR1020237033317A patent/KR20230145503A/ko active Application Filing
- 2015-05-13 CA CA3175002A patent/CA3175002A1/en active Pending
- 2015-05-13 RS RS20201034A patent/RS60717B1/sr unknown
- 2015-05-13 CA CA2948076A patent/CA2948076A1/en active Pending
- 2015-05-13 AU AU2015261536A patent/AU2015261536B2/en active Active
- 2015-05-13 WO PCT/EP2015/060643 patent/WO2015173325A2/en active Application Filing
- 2015-05-13 KR KR1020237012548A patent/KR20230054503A/ko not_active Application Discontinuation
- 2015-05-13 ES ES17178990T patent/ES2912069T3/es active Active
- 2015-05-13 BR BR122018009619-5A patent/BR122018009619B1/pt active IP Right Grant
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Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2011075861A1 (en) * | 2009-12-23 | 2011-06-30 | Esbatech, An Alcon Biomedical Research Unit Llc | Method for decreasing immunogenicity |
| WO2012175741A2 (en) * | 2011-06-23 | 2012-12-27 | Ablynx Nv | Techniques for predicting, detecting and reducing aspecific protein interference in assays involving immunoglobulin single variable domains |
| WO2013024059A2 (en) * | 2011-08-17 | 2013-02-21 | Glaxo Group Limited | Modified proteins and peptides |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108473563A (zh) * | 2015-11-12 | 2018-08-31 | 埃博灵克斯股份有限公司 | 改进的tnf结合剂 |
| CN108473563B (zh) * | 2015-11-12 | 2022-06-14 | 埃博灵克斯股份有限公司 | 改进的tnf结合剂 |
| CN108290943A (zh) * | 2015-11-13 | 2018-07-17 | 埃博灵克斯股份有限公司 | 改进的血清白蛋白结合免疫球蛋白可变结构域 |
| CN108473564A (zh) * | 2015-11-18 | 2018-08-31 | 埃博灵克斯股份有限公司 | 改进的血清白蛋白结合剂 |
| CN108473564B (zh) * | 2015-11-18 | 2022-04-08 | 埃博灵克斯股份有限公司 | 改进的血清白蛋白结合剂 |
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