CN106579396A - 由可食用花制备的花酵素及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种花酵素，所述花酵素以代代花、显脉旋覆花、重瓣红玫瑰、线叶金雀花、丹凤牡丹花、菊花、万寿菊和洛神花中的一种或多种为原料，经两次接种发酵而得。经检测，本发明的花酵素产品中所含的SOD酶为市售其他酵素产品的2倍，经过90天稳定性试验显示，SOD酶活性无变化。同时，动物实验结果表明花酵素中含有丰富的脂肪酶，能起到清除脂肪的作用。
Description
技术领域
本发明涉及植物来源的功能产品的技术领域，具体地涉及一种由多种可食用花制备的花酵素以及该花酵素的制备方法。
背景技术
植物酵素一直是酵素(酶)类产品中的畅销品。植物酵素是以果蔬、谷类、海藻及菇类等植物，经自然发酵研制而成的，其保留了植物中的营养精华，含有人体需要的各种酶、寡糖及多种维他命和矿物质，还可以产生丰富的SOD抗氧化酶成分，能够提高机体的抗氧化能力，进而增强免疫力。
以营养学的观点来说，植物酵素借助发酵作用，使植物成分分解成较小分子的营养素，从而直接被人体迅速吸收，参与调节新陈代谢过程。营养摄取不均衡、消化吸收状况差、容易疲劳的人可食用植物酵素来调理体质。
当前消费者的保健意识正在逐步增强，酵素产品也备受消费者青睐。然而市面上大多是果蔬、菌菇、中草药酵素，缺少花酵素产品。而花酵素产品既具备一般酵素的产品功效，并且花的美容养颜的特性又迎合了女性消费群体的需求。因此有必要开发一种花酵素产品，以满足市场的需求。
发明内容
本发明的目的是提供一种花酵素，所述花酵素采用代代花、显脉旋覆花、重瓣红玫瑰、线叶金雀花、丹凤牡丹花、菊花、万寿菊或洛神花中的一种或多种作为原料经发酵而得，其活性成分含量和种类以及稳定性得到进一步改善，更有利于发挥酵素产品的生理或药理功能。
优选地，本发明的花酵素是采用所述花中的两种或两种以上作为原料经发酵而得的；更优选地，本发明的花酵素是采用代代花、显脉旋覆花、重瓣红玫瑰、线叶金雀花、丹凤牡丹花、菊花、万寿菊和洛神花作为原料经发酵而得的；优选地，本发明的花酵素是采用等质量的多种所述花作为原料经发酵而得的。
优选地，根据本发明的花酵素，其中所述花酵素经过两次发酵而得，其中第一次发酵接种包含3％g/ml的乳酸菌、1.0％g/ml酵母菌和1.5％g/ml米曲霉的混合菌液，每种菌液的浓度的数量级均为1～9×106CFU/ml；第二次发酵接种包含1.0％g/ml嗜酸乳杆菌和1.5％g/ml益生元的混合溶液，其中嗜酸乳杆菌菌液浓度的数量级为1～9×106CFU/ml；优选地，所述乳酸菌由保加利亚乳杆菌和长双歧杆菌组成，所述酵母菌由啤酒酵母、葡萄汁酵母和汉逊酵母组成；更优选地，按质量比计，保加利亚乳杆菌∶长双歧杆菌＝1∶1，啤酒酵母∶葡萄汁酵母∶汉逊酵母＝2∶1∶1；优选地，所述嗜酸乳杆菌和益生元的质量比为1∶10；再优选地，所述益生元为低聚果糖。
本发明还提供一种制备花酵素的方法，所述方法包括以下步骤：
(1)净选干的代代花、显脉旋覆花、重瓣红玫瑰、线叶金雀花、丹凤牡丹花、菊花、万寿菊和洛神花中的一种或多种，超微粉碎，过500～1000目筛，得花粉末；
(2)向步骤(1)所得花粉末中加入红糖水，配制成培养基，然后将培养基在105℃下灭菌30～40分钟或者在121℃下灭菌15～20分钟，冷却；
(3)接种事先制备好的第一接种液，然后在30℃下密闭恒温发酵90～120天，巴氏灭菌；其中，所述第一接种液包含3％g/ml乳酸菌、1.0％g/ml酵母菌和1.5％g/ml米曲霉混合菌液，每种菌的浓度的数量级均为1～9×106CFU/ml；
优选地，所述乳酸菌由保加利亚乳杆菌和长双歧杆菌组成，酵母菌由啤酒酵母、葡萄汁酵母和汉逊酵母组成；更优选地，按质量计，保加利亚乳杆菌∶长双歧杆菌＝1∶1，啤酒酵母∶葡萄汁酵母∶汉逊酵母＝2∶1∶1。
优选地，在本发明所述方法的步骤(3)中，第一接种液添加量为每1～1.5kg培养基添加0.02～0.05g第一接种液。
(4)向步骤(3)制得的发酵液接种事先制备好的第二接种液，然后在30℃下密闭恒温发酵120～150天，发酵液经过滤、冷冻干燥得成品；其中，第二接种液包含1.0％g/ml嗜酸乳杆菌和1.5％g/ml益生元，嗜酸乳杆菌的浓度数量级为1～9×106CFU/ml。
优选地，在本发明所述方法的步骤(4)中，第二接种液添加量为每1～1.5kg培养基添加0.01～0.03g第二接种液。
优选地，在本发明所述方法的步骤(2)中，所述花粉末与红糖水的质量比为1∶2；更优选地，所述红糖水由按重量计的1份红糖和10份水制成。
优选地，在本发明所述方法的步骤(4)中，所述益生元为低聚果糖。
本发明的花酵素产品所含的SOD酶为市售其他酵素产品的2倍，经过90天稳定性试验显示，SOD酶活性无变化。同时，动物实验结果表明本发明的花酵素含有丰富的脂肪酶，能起到清除脂肪的作用。
具体实施方式
实施例1
红糖水的制备：取红糖500g，水5000g，配成红糖水。
第一接种液的制备：3％(g/ml)乳酸菌(保加利亚乳杆菌∶长双歧杆菌＝1∶1)、1.0％(g/ml)酵母菌(啤酒酵母∶葡萄汁酵母∶汉逊酵母＝2∶1∶1)和1.5％(g/ml)米曲霉的混合菌液，每种菌的浓度数量级均为1～9×106CFU/ml。
第二接种液的组成：1.0％(g/ml)嗜酸乳杆菌和低聚果糖，嗜酸乳杆菌浓度的数量级为1～9×106CFU/ml。
实施例2
花酵素的制备步骤。
(1)选取干的代代花、显脉旋覆花、重瓣红玫瑰和万寿菊各100g，超微粉碎，过500目筛，得到花粉末。
(2)取步骤(1)得到的花粉末300g，加入600g实施例1制备的红糖水，配成培养基，然后将得到的培养基在105℃下灭菌40分钟，冷却；
(3)在步骤(2)得到的冷却的灭菌培养基中加入实施例1制备的第一接种液(第一接种液添加量为每1kg培养基添加0.02g第一接种液)，在30℃下密闭恒温发酵90天，巴氏灭菌30分钟；
(4)在步骤(3)得到的巴氏灭菌的发酵液中加入实施例1制备的第二接种液(第二接种液添加量为每1.5kg培养基添加0.03g第二接种液)，在30℃下密闭恒温发酵150天，然后将发酵液过滤、冷冻干燥，得到花酵素成品——花酵素固体饮料。
实施例3
(1)选取干的代代花、显脉旋覆花、重瓣红玫瑰、线叶金雀花、丹凤牡丹花、菊花、万寿菊和洛神花各100g，超微粉碎，过1000目筛，得到花粉末。
(2)取步骤(1)得到的花粉末500g，加入实施例1制备的红糖水1000g，配成培养基，然后将得到的培养基在121℃下灭菌15分钟，冷却；
(3)在步骤(2)得到的冷却的灭菌培养基中加入实施例1制备的第一接种液(第一接种液添加量为每1.5kg培养基添加0.05g第一接种液)，在30℃下密闭恒温发酵120天，巴氏灭菌30分钟；
(4)在步骤(3)得到的巴氏灭菌的发酵液中加入实施例1制备的第二接种液(第二接种液添加量为每1kg培养基添加0.01g第二接种液)，在30℃下密闭恒温发酵120天，然后将发酵液过滤、冷冻干燥，得到花酵素成品——花酵素固体饮料。
实施例4
(1)选取干的菊花500g，超微粉碎，过800目筛，得到花粉末。
(2)取步骤(1)得到的花粉末300g，加入600g实施例1制备的红糖水，配成培养基，然后将得到的培养基在105℃下灭菌30分钟，冷却；
(3)在步骤(2)得到的冷却的灭菌培养基中加入实施例1制备的第一接种液(第一接种液添加量为每1.5kg培养基添加0.04g第一接种液)，在30℃下密闭恒温发酵100，巴氏灭菌30分钟；
(4)在步骤(3)得到的巴氏灭菌的发酵液中加入实施例1制备的第二接种液(第二接种液添加量为每1kg培养基添加0.03g第二接种液)，在30℃下密闭恒温发酵125天，然后将发酵液过滤、冷冻干燥，得到花酵素成品——花酵素固体饮料。
实施例5
(1)选取干的代代花、显脉旋覆花、重瓣红玫瑰、线叶金雀花各200g，超微粉碎，过1000目筛，得到花粉末。
(2)取步骤(1)得到的花粉末500g，加入实施例1制备的红糖水1000g，配成培养基，然后将得到的培养基在121℃下灭菌15分钟，冷却；
(3)在步骤(2)得到的冷却的灭菌培养基中加入实施例1制备的第一接种液(第一接种液添加量为每1.5kg培养基添加0.05g第一接种液)，在30℃下密闭恒温发酵120天，巴氏灭菌30分钟；
(4)在步骤(3)得到的巴氏灭菌的发酵液中加入实施例1制备的第二接种液(第二接种液添加量为每1kg培养基添加0.02g第二接种液)，在30℃下密闭恒温发酵150天，然后将发酵液过滤、冷冻干燥，得到花酵素成品——花酵素固体饮料。
实施例6
(1)选取干的代代花、显脉旋覆花、重瓣红玫瑰、线叶金雀花、洛神花和菊花各100g，超微粉碎，过800目筛，得到花粉末。
(2)取步骤(1)得到的花粉末500g，加入实施例1制备的红糖水1000g，配成培养基，然后将得到的培养基在121℃下灭菌20分钟，冷却；
(3)在步骤(2)得到的冷却的灭菌培养基中加入实施例1制备的第一接种液(第一接种液添加量为每1.5kg培养基添加0.05g第一接种液)，在30℃下密闭恒温发酵120天，巴氏灭菌30分钟；
(4)在步骤(3)得到的巴氏灭菌的发酵液中加入实施例1制备的第二接种液(第二接种液添加量为每1.5kg培养基添加0.03g第二接种液)，在30℃下密闭恒温发酵120天，然后将发酵液过滤、冷冻干燥，得到花酵素成品——花酵素固体饮料。
实施例7
本实施例的SOD活力测定样品取自实施例5。
花酵素的超氧化物歧化酶(SOD)的活力测定按照邻苯三酚自氧化法(GB/T5009.171-2003)进行。
试剂
1.A液：pH 8.20，0.1mol/l三羟甲基氨基甲烷(Tris)-盐酸缓冲溶液(内含1mmol/lEDTA·2Na)。称取1.2114g Tris和37.2mg EDTA·2Na溶于62.4ml 0.1mol/l盐酸溶液中，用蒸馏水定容至100ml。
2.B液：4.5mmol/L邻苯三酚盐酸溶液。称取邻苯三酚(分析纯)56.7mg溶于少量10mmol/l盐酸溶液，并定容至100ml。
3.10mmol/l盐酸溶液
4.0.200mg/ml超氧化物歧化酶液(SOD液)
5.蒸馏水：二重石英蒸馏水
仪器：紫外可见分光光度仪；精密酸度计，精确度为0.01pH；离心机；10ml比色管；10ml离心管；玻璃乳钵。
样液的制备：
取实施例5步骤(4)中得到的发酵液，经4000r/min离心15min，再取
上清液作为样液进行测定。
分析步骤：
1.邻苯三酚自氧化速率测定：在25℃左右，于10ml比色管中依次加入A液2.35ml，蒸馏水2.00ml，B液0.15ml。加入B液立即混合并倾入比色皿，分别测定在325nm波长条件下初始时和1min后吸光值，二者之差即为邻苯三酚自氧化速率ΔA325(min-1)。本实验确定ΔA325(min-1)为0.060。
2.样液和SOD液抑制邻苯三酚自氧化速率测定：分别加入一定量样液或SOD液使抑制邻苯三酚自氧化速率约为1/2ΔA325(min-1)，即ΔA′325(min-1)为0.030。
SOD活性测定加样程序见表1。
表1
SOD活力按式(1)计算：
式中：
U/mL：SOD酶活性单位
ΔA325：邻苯三酚自氧化速率
ΔA′325：样液或SOD液邻苯三酚自氧化速率
V：所加酶液或样液体积，单位为毫升(mL)
D：SOD液或样液的稀释倍数
4.5：反应液总体积，单位为毫升(mL)
表2 本发明花酵素样液与市售不含花类原料的中药植物酵素产品的SOD稳定性对比试验
结论：本发明的花酵素所含的SOD酶的活力为市售其他酵素产品的2倍，说明本发明的花酵素产品具有更好的抗氧化能力，具有抗衰老的功效。另外，本发明的产品经过90天稳定性试验后，SOD酶活性无变化，说明产品功效稳定性强。
实施例8
血脂调节实验
样品及处理：取实施例6的花酵素固体饮料(粉剂)，实验时，采用40℃蒸馏水配制成各种剂量。
试剂及仪器：胆固醇测定试剂盒、酶法甘油三酯测定试剂盒、HDL测定试剂盒；ACE全自动生化分析仪。
高脂饲料：90.5％基础饲料、2％胆固醇、0.5％胆盐和7％猪油。
方法及结果
(1)剂量设计：实验设三个剂量组和一个高脂对照组。低、中、高三个剂量分别为0.20、0.40、1.20g/kg，分别相当于人体推荐量的5、10、30倍(人体推荐量为2.4g/日)。
(2)试验方法：在实验环境下大鼠喂饲基础饲料观察一周，取尾血，测TC观察指标的正常值。正式试验开始后，各组动物用高脂饲料喂饲两周，取尾血，测定血脂以确定是否已形成高血脂症。高血脂症模型建立后，再根据TC水平，进行随机分组，经口灌胃给样品，灌胃量为1ml/100g，为期两周到四周，高血脂对照组给同体积的蒸馏水，继续给予高脂饲料，并定期称重体重，于实验开始的第二周到第四周取尾血，测定血脂各项指标。
(3)结果：常规喂饲基础饲料一周，测得大鼠血清TC正常值为1.69±0.16mmol/L。喂饲高脂饲料两周后，测得大鼠血清TC值为3.21±0.55mmol/L，与正常值有非常显著差异，大鼠实验性高脂血症模型建立。
①大鼠实验性高脂血症模型建立后，继续给予高脂饲料，于实验开始的第二周时，测定血清TC，结果见表1，与高脂对照组相比，高、中、低剂量组均能明显降低高血脂症大鼠血清TC含量(q检验，P＜0.05)。
表1 花酵素对高血脂大鼠血清TC的影响
q检验：与高脂对照组比较，*P＜0.05。
②大鼠实验性高脂血症模型建立后，继续给予高脂饲料，在实验开始的第二周时，测定血清TG，结果见表2，与高脂对照组相比，高、中、低剂量组均能明显降低高血脂症大鼠血清TG含量(q检验，P＜0.05)。
表2 花酵素对高血脂大鼠血清TG的影响
q检验：与高脂对照组比较，*P＜0.05。
③大鼠实验性高脂血症模型建立后，继续给予高脂饲料，在实验开始的第二周时，测定血清HDL-C，结果见表3，高脂对照组与高、中、低剂量组相比，差异无统计学意义(方差分析，P＞0.05)。
表3 花酵素对高血脂大鼠血清HDL-C的影响
结论：通过以上动物实验，结果表明本发明的花酵素含有丰富的脂肪酶，能起到清除脂肪的作用。
Claims (9)
1.一种花酵素，其采用代代花、显脉旋覆花、重瓣红玫瑰、线叶金雀花、丹凤牡丹花、菊花、万寿菊或洛神花中的一种或多种为原料经发酵而得。
2.根据权利要求1所述的花酵素，其特征在于，其采用代代花、显脉旋覆花、重瓣红玫瑰、线叶金雀花、丹凤牡丹花、菊花、万寿菊或洛神花中的两种或两种以上为原料经发酵而得；优选地，所采用的两种或两种以上的花的质量是相等的。
3.根据权利要求1或2所述的花酵素，其特征在于，所述花酵素经两次发酵而得，其中第一次发酵接种包含3％g/ml的乳酸菌、1.0％g/ml酵母菌和1.5％g/ml米曲霉的混合菌液，每种菌的浓度的数量级均为1～9×106CFU/ml；第二次发酵接种包含1.0％g/ml嗜酸乳杆菌和1.5％g/ml益生元的混合溶液，其中嗜酸乳杆菌的浓度的数量级为1～9×106CFU/ml；
优选地，所述乳酸菌由保加利亚乳杆菌和长双歧杆菌组成，所述酵母菌由啤酒酵母、葡萄汁酵母和汉逊酵母组成；更优选地，按质量计，保加利亚乳杆菌∶长双歧杆菌＝1∶1，啤酒酵母∶葡萄汁酵母∶汉逊酵母＝2∶1∶1；
优选地，所述嗜酸乳杆菌和益生元的质量比为1∶10；更优选地，所述益生元为低聚果糖。
4.一种制备花酵素的方法，所述方法包括以下步骤：
(1)净选干的代代花、显脉旋覆花、重瓣红玫瑰、线叶金雀花、丹凤牡丹花、菊花、万寿菊和洛神花中的一种或多种，超微粉碎，过500～1000目筛，得花粉末；
(2)向步骤(1)所得花粉末加入红糖水，配制成培养基，然后将培养基在105℃下灭菌30～40分钟或者在121℃下灭菌15～20分钟，冷却；
(3)接种事先制备好的第一接种液，然后在30℃下密闭恒温发酵，巴氏灭菌；所述第一接种液为包含3％g/ml乳酸菌、1.0％g/ml酵母菌和1.5％g/ml米曲霉的混合菌液，其中每种菌的浓度的数量级均为1～9×106CFU/ml；
(4)向步骤(3)制得的发酵液接种事先制备好的第二接种液，然后在30℃下密闭恒温发酵，发酵液经过滤、冷冻干燥得成品；所述第二接种液包含1.0％g/ml嗜酸乳杆菌和1.5％g/ml益生元，其中嗜酸乳杆菌的浓度的数量级为1～9×106CFU/ml。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述花粉末与红糖水的质量比为1∶2；优选地，所述红糖水由按重量计的1份红糖和10份水制成。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，在步骤(3)中，所述乳酸菌由保加利亚乳杆菌和长双歧杆菌组成，所述酵母菌由啤酒酵母、葡萄汁酵母和汉逊酵母组成；更优选地，按质量计，保加利亚乳杆菌∶长双歧杆菌＝1∶1，啤酒酵母∶葡萄汁酵母∶汉逊酵母＝2∶1∶1。
7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，在步骤(3)中，第一接种液添加量为每1～1.5kg培养基添加0.02～0.05g第一接种液。
8.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，在步骤(4)中，所述益生元为低聚果糖。
9.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，在步骤(4)中，第二接种液添加量为每1～1.5kg培养基添加0.01～0.03g第二接种液。
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