CN106563001A - 一种植物有效成分的提取方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种植物有效成分的提取方法，包括如下步骤：将洗净干燥的甜茶叶进行汽爆处理后，采用微波加远红外光波烘干，得粉体；向粉体中加入8‑10倍热水，浸提1h后，按比例加入中性蛋白酶进行酶解1‑2h，过滤，得酶解液；将所得的发酵液迅速冷冻后再自然解冻，使提取物中淀粉老化沉淀；收集上清液，剩余部分离心，收集离心液体并合并于上清液中；将甜茶提取液通过预处理好的D101大孔树脂、732阳离交换柱、707阴离交换柱、聚酰胺柱，进行各流出液的收集、浓缩、干燥，得各有效成分。本发明提高了甜茶的综合利用，而且甜茶多酚、甜茶黄酮回收工艺简单，易于操作，成本低，符合工业绿色化要求，可实现工业化生产。

Description

一种植物有效成分的提取方法
技术领域
本发明属于天然产物化学技术领域，尤其涉及一种植物有效成分的提取方法。
背景技术
甜茶为我国独有生物资源，甜茶甙、甜茶多酚和总黄酮是甜茶主要活性成分，由于甜茶甙的甜度为蔗糖的300倍，是一种低热量的非蔗糖甜味物质，可供代蔗糖食用，供糖尿病、肥胖症及忌糖者长期饮用，因此目前对甜茶活性成分的提取及其产品的开发主要集中在甜茶甙，而在提取甜茶甙的工艺中，甜茶多酚和甜茶黄酮作为废液、废渣弃掉。已有研究表明甜茶多酚和黄酮具有良好的抗氧化等生物活性，尤其是甜茶多酚还具有抗炎、抗过敏的能力，对过敏性疾病如鼻炎、花粉症、皮炎、气喘等有明显改善作用，甜茶多酚同时还是透明质酸酶良好的抑制物，因此加强甜茶多酚和黄酮的研究有重要意义。而现有甜茶多酚和黄酮的研究一是大多为实验室研究，规模化研究几乎为空白；二是大多以甜茶叶为原料提取一种活性成分，同时提取多种活性成分的工艺鲜见。
发明内容
本发明的目的在于提供一种植物有效成分的提取方法，在提取甜茶叶主要活性成分甜茶甙的同时获取甜茶多酚、甜茶黄酮的方法，提高甜茶的综合利用。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：
一种植物有效成分的提取方法，包括如下步骤：
S1、称取洗净干燥的甜茶叶置于汽爆罐内，先通入氮气至汽爆罐内压力为0.6-1.4MPa，爆破处理8-25min；然后迅速通入蒸汽至汽爆罐内压力为1.4-1.8MPa，蒸汽爆破处理0.5-2.5min后，室温浓缩至相对密度1.10-1.20，采用微波加远红外光波烘干，得粉体；
S2、向粉体中加入8-10倍热水，浸提1h，降至30-40℃，按质量百分比为2-3％的比例加入中性蛋白酶，酶解1-2h，过滤，得酶解液；
S3、将所得的发酵液迅速冷冻后再自然解冻，使提取物中淀粉老化沉淀；收集上清液，剩余部分离心，收集离心液体并合并于上清液中；
S4、将甜茶提取液以树脂2-4BV/h的流速缓慢通过预处理好的D101大孔树脂，D101大孔树脂用75％的乙醇以2BV/h洗脱，洗脱液再以1-3BV/h依次过732阳离交换柱、707阴离交换柱和聚酰胺柱，收集聚酰胺柱流出液，采用钛棒过滤器浓缩，浓缩到浓缩前液体体积1/3-1/4后，干燥，得甜茶甙；
S4、收集D101树脂的过柱液，将过柱液采用钛棒过滤器浓缩至3.131mg/ml后，取1.5L树脂，以3BV/h的流速缓慢通过预处理好的LSA-21树脂然后依次用蒸馏水、30％乙醇1000mL梯度洗脱，收集30％乙醇洗脱液的中间段，于旋转蒸发仪上旋干所得到的产品，得甜茶多酚；
S5、将聚酰胺柱依次用水洗、75％乙醇洗涤，收集75％乙醇洗脱液；将75％乙醇洗脱液浓缩、干燥，得黄酮粗品；
S6、将所得的黄酮粗品配制成600ml浓度为2.164mg/ml的溶液，过FL-3大孔树脂，并用80％乙醇洗脱，将80％乙醇洗脱液后段浓缩、干燥，得黄酮提取物。
优选地，所述钛棒过滤器滤芯孔径0.2～3微米。
优选地，所述步骤S3的冷冻包括预冻处理阶段和升华处理阶段，预冻处理阶段，选择速冻方式，预冻温度为23℃，预冻时间7h；在升华处理阶段，升华温度为-10.5℃，真空度为270pa，升华时间230min。
本发明具有以下有益效果：
解决了提取甜茶甙的工艺中，甜茶多酚、甜茶黄酮废弃的问题，提高了甜茶的综合利用，而且甜茶多酚、甜茶黄酮回收工艺简单，易于操作，成本低，乙醇可回收，大孔树脂可再生，均可反复利用，产品纯度较较高，溶剂仅为水和乙醇，符合工业绿色化要求，可实现工业化生产。
具体实施方式
为了使本发明的目的及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
以下实施例中，所使用的钛棒过滤器滤芯孔径0.2～3微米。所述步骤S3的冷冻包括预冻处理阶段和升华处理阶段，预冻处理阶段，选择速冻方式，预冻温度为23℃，预冻时间7h；在升华处理阶段，升华温度为-10.5℃，真空度为270pa，升华时间230min
实施例1
一种植物有效成分的提取方法，包括如下步骤：
S1、称取洗净干燥的甜茶叶置于汽爆罐内，先通入氮气至汽爆罐内压力为0.6MPa，爆破处理25min；然后迅速通入蒸汽至汽爆罐内压力为1.4MPa，蒸汽爆破处理2.5min后，室温浓缩至相对密度1.10-1.20，采用微波加远红外光波烘干，得粉体；
S2、向粉体中加入8倍热水，浸提1h，降至30℃，按质量百分比为3％的比例加入中性蛋白酶，酶解2h，过滤，得酶解液；
S3、将所得的发酵液迅速冷冻后再自然解冻，使提取物中淀粉老化沉淀；收集上清液，剩余部分离心，收集离心液体并合并于上清液中；
S4、将甜茶提取液以树脂2BV/h的流速缓慢通过预处理好的D101大孔树脂，D101大孔树脂用75％的乙醇以2BV/h洗脱，洗脱液再以1BV/h依次过732阳离交换柱、707阴离交换柱和聚酰胺柱，收集聚酰胺柱流出液，采用钛棒过滤器浓缩，浓缩到浓缩前液体体积1/3后，干燥，得甜茶甙；
S4、收集D101树脂的过柱液，将过柱液采用钛棒过滤器浓缩至3.131mg/ml后，取1.5L树脂，以3BV/h的流速缓慢通过预处理好的LSA-21树脂然后依次用蒸馏水、30％乙醇1000mL梯度洗脱，收集30％乙醇洗脱液的中间段，于旋转蒸发仪上旋干所得到的产品，得甜茶多酚；
S5、将聚酰胺柱依次用水洗、75％乙醇洗涤，收集75％乙醇洗脱液；将75％乙醇洗脱液浓缩、干燥，得黄酮粗品；
S6、将所得的黄酮粗品配制成600ml浓度为2.164mg/ml的溶液，过FL-3大孔树脂，并用80％乙醇洗脱，将80％乙醇洗脱液后段浓缩、干燥，得黄酮提取物。
实施例2
一种植物有效成分的提取方法，包括如下步骤：
S1、称取洗净干燥的甜茶叶置于汽爆罐内，先通入氮气至汽爆罐内压力为1.4MPa，爆破处理8min；然后迅速通入蒸汽至汽爆罐内压力为1.8MPa，蒸汽爆破处理0.5min后，室温浓缩至相对密度1.10-1.20，采用微波加远红外光波烘干，得粉体；
S2、向粉体中加入10倍热水，浸提1h，降至40℃，按质量百分比为2％的比例加入中性蛋白酶，酶解1h，过滤，得酶解液；
S3、将所得的发酵液迅速冷冻后再自然解冻，使提取物中淀粉老化沉淀；收集上清液，剩余部分离心，收集离心液体并合并于上清液中；
S4、将甜茶提取液以树脂4BV/h的流速缓慢通过预处理好的D101大孔树脂，D101大孔树脂用75％的乙醇以2BV/h洗脱，洗脱液再以3BV/h依次过732阳离交换柱、707阴离交换柱和聚酰胺柱，收集聚酰胺柱流出液，采用钛棒过滤器浓缩，浓缩到浓缩前液体体积1/4后，干燥，得甜茶甙；
S4、收集D101树脂的过柱液，将过柱液采用钛棒过滤器浓缩至3.131mg/ml后，取1.5L树脂，以3BV/h的流速缓慢通过预处理好的LSA-21树脂然后依次用蒸馏水、30％乙醇1000mL梯度洗脱，收集30％乙醇洗脱液的中间段，于旋转蒸发仪上旋干所得到的产品，得甜茶多酚；
S5、将聚酰胺柱依次用水洗、75％乙醇洗涤，收集75％乙醇洗脱液；将75％乙醇洗脱液浓缩、干燥，得黄酮粗品；
S6、将所得的黄酮粗品配制成600ml浓度为2.164mg/ml的溶液，过FL-3大孔树脂，并用80％乙醇洗脱，将80％乙醇洗脱液后段浓缩、干燥，得黄酮提取物。
实施例3
一种植物有效成分的提取方法，包括如下步骤：
S1、称取洗净干燥的甜茶叶置于汽爆罐内，先通入氮气至汽爆罐内压力为1MPa，爆破处理16.5min；然后迅速通入蒸汽至汽爆罐内压力为1.6MPa，蒸汽爆破处理1.5min后，室温浓缩至相对密度1.10-1.20，采用微波加远红外光波烘干，得粉体；
S2、向粉体中加入9倍热水，浸提1h，降至35℃，按质量百分比为2.5％的比例加入中性蛋白酶，酶解1.5h，过滤，得酶解液；
S3、将所得的发酵液迅速冷冻后再自然解冻，使提取物中淀粉老化沉淀；收集上清液，剩余部分离心，收集离心液体并合并于上清液中；
S4、将甜茶提取液以树脂3BV/h的流速缓慢通过预处理好的D101大孔树脂，D101大孔树脂用75％的乙醇以2BV/h洗脱，洗脱液再以2BV/h依次过732阳离交换柱、707阴离交换柱和聚酰胺柱，收集聚酰胺柱流出液，采用钛棒过滤器浓缩，浓缩到浓缩前液体体积7/24后，干燥，得甜茶甙；
S4、收集D101树脂的过柱液，将过柱液采用钛棒过滤器浓缩至3.131mg/ml后，取1.5L树脂，以3BV/h的流速缓慢通过预处理好的LSA-21树脂然后依次用蒸馏水、30％乙醇1000mL梯度洗脱，收集30％乙醇洗脱液的中间段，于旋转蒸发仪上旋干所得到的产品，得甜茶多酚；
S5、将聚酰胺柱依次用水洗、75％乙醇洗涤，收集75％乙醇洗脱液；将75％乙醇洗脱液浓缩、干燥，得黄酮粗品；
S6、将所得的黄酮粗品配制成600ml浓度为2.164mg/ml的溶液，过FL-3大孔树脂，并用80％乙醇洗脱，将80％乙醇洗脱液后段浓缩、干燥，得黄酮提取物。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (3)

1.一种植物有效成分的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、称取洗净干燥的甜茶叶置于汽爆罐内，先通入氮气至汽爆罐内压力为0.6-1.4MPa，爆破处理8-25min；然后迅速通入蒸汽至汽爆罐内压力为1.4-1.8MPa，蒸汽爆破处理0.5-2.5min后，室温浓缩至相对密度1.10-1.20，采用微波加远红外光波烘干，得粉体；
S2、向粉体中加入8-10倍热水，浸提1h，降至30-40℃，按质量百分比为2-3％的比例加入中性蛋白酶，酶解1-2h，过滤，得酶解液；
S3、将所得的发酵液迅速冷冻后再自然解冻，使提取物中淀粉老化沉淀；收集上清液，剩余部分离心，收集离心液体并合并于上清液中；
S4、将甜茶提取液以树脂2-4BV/h的流速缓慢通过预处理好的D101大孔树脂，D101大孔树脂用75％的乙醇以2BV/h洗脱，洗脱液再以1-3BV/h依次过732阳离交换柱、707阴离交换柱和聚酰胺柱，收集聚酰胺柱流出液，采用钛棒过滤器浓缩，浓缩到浓缩前液体体积1/3-1/4后，干燥，得甜茶甙；
S4、收集D101树脂的过柱液，将过柱液采用钛棒过滤器浓缩至3.131mg/ml后，取1.5L树脂，以3BV/h的流速缓慢通过预处理好的LSA-21树脂然后依次用蒸馏水、30％乙醇1000mL梯度洗脱，收集30％乙醇洗脱液的中间段，于旋转蒸发仪上旋干所得到的产品，得甜茶多酚；
S5、将聚酰胺柱依次用水洗、75％乙醇洗涤，收集75％乙醇洗脱液；将75％乙醇洗脱液浓缩、干燥，得黄酮粗品；
S6、将所得的黄酮粗品配制成600ml浓度为2.164mg/ml的溶液，过FL-3大孔树脂，并用80％乙醇洗脱，将80％乙醇洗脱液后段浓缩、干燥，得黄酮提取物。
2.根据权利要求1所述的一种植物有效成分的提取方法，其特征在于，所述钛棒过滤器滤芯孔径0.2～3微米。
3.根据权利要求1所述的一种植物有效成分的提取方法，其特征在于，所述步骤S3的冷冻包括预冻处理阶段和升华处理阶段，预冻处理阶段，选择速冻方式，预冻温度为23℃，预冻时间7h；在升华处理阶段，升华温度为-10.5℃，真空度为270pa，升华时间230min。
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