CN106404961B - 一种半夏中掺伪虎掌的鉴别方法 - Google Patents

一种半夏中掺伪虎掌的鉴别方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种半夏中掺伪虎掌的鉴别方法，包括以下步骤：(1)供试品溶液的制备；(2)供试品溶液的测定；(3)鉴别。试验结果证明，本方法通过提取工艺和高效液相色谱方法的筛选，有效将半夏和虎掌中的各峰分离开来，找到了恰当的虎掌区别于半夏的特征鉴别峰，既可用于半夏与虎掌或其炮制品的鉴别，也可用于半夏中掺伪虎掌及其炮制品的鉴别。本发明方法稳定可靠、简单快捷，可以有效监控半夏药材质量，保障了其疗效及用药安全，具有广阔的市场应用前景。

Description

一种半夏中掺伪虎掌的鉴别方法
技术领域
本发明涉及中药材鉴别领域，具体涉及一种半夏中掺伪虎掌的鉴别方法。
背景技术
半夏为天南星科半夏属植物半夏Pinellia ternata(Thunb.)Breit的干燥块茎。夏、秋二季采挖，洗净，除去外皮和须根，晒干。【性眛与归经】辛、温；有毒。归脾、胃、肺经。【功能与主治】燥湿化痰，降逆止呕，消痞散结。用于湿痰寒痰，咳喘痰多，痰饮眩悸，风痰眩晕，痰厥头痛，呕吐反胃，胸脘痞闷，梅核气；外治痈肿痰核。
半夏的伪品较多，其中天南星科的虎掌为其主要伪品之一。
虎掌为天南星科半夏属植物虎掌Pinelliae Pedatisecta Schott的干燥块茎。虎掌主治恶痢冷漏疮，恶疮疠风。气味苦、辛、有毒。该物种为中国植物图谱数据库收录的有毒植物，其毒性为块茎有毒，含葫芦巴碱、胆碱、环二肽类成分。
虎掌经加工处理后，外观与半夏极为相似，鉴别难度大，不法商贩常在半夏中添加该药材，非法谋取利益，严重损害半夏种植户、半夏饮片生产企业利益，同时也严重影响半夏药材质量、疗效及用药安全。
因此，有必要探索到一种稳定可靠、简单快捷的半夏中掺伪虎掌的鉴别方法。
发明内容
为解决上述问题，本发明提供了一种半夏中掺伪虎掌的鉴别方法，包括以下步骤：
(1)供试品溶液的制备：
取待检药材，水提取，过滤或离心，取液体加酸，乙酸乙酯萃取，萃取液除去乙酸乙酯，加水复溶后过滤得供试品溶液；
(2)供试品溶液的测定：
取供试品溶液，注入高效液相色谱仪，检测，得到供试品的高效液相色谱图；
色谱条件如下：
色谱柱：C18色谱柱；
流动相：流动相A为乙腈，流动相B为0.1％磷酸或磷酸盐水溶液；流动相A的体积百分数为3～10％；
流速：0.8～1.0mL/min；
检测波长210nm；
(3)鉴别：
供试品的高效液相色谱图在保留时间10～15min的范围内，如存在特征峰，则含有虎掌，如无，则不含虎掌。
进一步地，流动相A的体积百分数为3％，流速为0.8mL/min。
进一步地，步骤(1)中，所述提取是超声提取30～60分钟，优选45分钟。
进一步地，步骤(1)中，所述水与待检药材的体积重量比为20mL：1g。
进一步地，步骤(1)中，所述酸为甲酸、盐酸或磷酸，优选磷酸。
进一步地，步骤(1)中，所述酸为磷酸，磷酸的加入量与待检药材的体积重量比为0.1～0.5mL：1g。
进一步地，步骤(1)中，乙酸乙酯的萃取次数为1～5次，优选4次；每次萃取的乙酸乙酯用量与待检药材的体积重量比为20～30mL：1g。
进一步地，步骤(2)中，所述C18色谱柱为Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18液相色谱柱，规格为4.6×250mm，5μm。
进一步地，步骤(2)中，所述色谱条件的柱温为25～40℃，优选40℃。
进一步地，步骤(2)中，所述色谱条件的进样量为5-25μL，优选20μL。
试验结果证明，本方法通过提取工艺和高效液相色谱方法的筛选，有效将半夏和虎掌中的各峰分离开来，找到了恰当的虎掌区别于半夏的特征鉴别峰，既可用于半夏与虎掌或其炮制品的鉴别，也可用于半夏中掺伪虎掌及其炮制品的鉴别。本发明方法稳定可靠、简单快捷，可以有效监控半夏药材质量，保障了其疗效及用药安全，具有广阔的市场应用前景。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1为10批不同来源半夏的色谱图，S1～S10分别对应BX-1～BX-10的半夏药材。
图2为6批不同来源虎掌的色谱图，S1～S6分别对应HZ-1～HZ-6的虎掌药材。
图3为虎掌和半夏的对比色谱图，S1：半夏，S2：虎掌；箭头所示为特征峰。
图4半夏、虎掌及半夏伪品炮制品色谱图，S1：半夏；S2：姜半夏(伪品)；S3：清半夏(伪品)；S4：法半夏(伪品)；S5：虎掌；箭头所示为特征峰。
图5为虎掌药材不同流动相系统色谱图，S1：乙腈-甲酸系统；S2：乙腈-磷酸系统；S3：乙腈-磷酸盐系统；箭头所示为特征峰。
具体实施方式
半夏药材来源如下所示：
编号 药材 来源
BX1 半夏 四川南充
BX2 半夏 四川成都
BX3 半夏 四川南充
BX4 半夏 四川凉山州
BX5 半夏 四川成都
BX6 半夏 湖北荆门
BX7 半夏 甘肃陇南
BX8 半夏 甘肃天水
BX9 半夏 甘肃天水
BX10 半夏 四川南充
虎掌药材来源如下所示：
编号 药材 来源
HZ-1 虎掌 河北1
HZ-2 虎掌 河北2
HZ-3 虎掌 黑龙江1
HZ-4 虎掌 河北3
HZ-5 虎掌 河北4
HZ-6 虎掌 黑龙江2
半夏伪品炮制品：姜半夏(伪品)、清半夏(伪品)、法半夏(伪品)，将虎掌药材生品按照据《中国药典》(2015年版一部)姜半夏、清半夏、法半夏的炮制方法，分别制成姜半夏(伪品)、清半夏(伪品)、法半夏(伪品)。
试剂：
乙腈(色谱纯，sigma)；乙酸乙酯(色谱纯，sigma)；
甲酸、盐酸、磷酸(分析纯，成都市科龙化工试剂厂)；
磷酸盐系统：0.03mmol/L磷酸二氢铵溶液，磷酸调pH至2；
水为超纯水。
实施例1本发明方法鉴别半夏和虎掌
1、供试品溶液的制备
取半夏或虎掌药材粉末1g，加水20mL，超声提取30min以上，滤过或离心，取澄清提取液10mL，加磷酸0.1mL，乙酸乙酯萃取4次，每次20～30mL，回收乙酸乙酯，残渣加5mL水溶解，过微孔滤膜，即得。
2、色谱条件
流动相：A(乙腈)-B(0.1％磷酸)(3:97)
色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18液相色谱柱(4.6×250mm，5μm)；
流速：0.8mL/min；
检测波长：210nm；
柱温：40℃；
进样量：20μL。
3、结果
(1)10份不同来源半夏样品色谱图如图1所示。
(2)6份虎掌样品色谱图如图2所示。
(3)虎掌和半夏的对比色谱图如图3所示。在10～15min范围，虎掌有一个区别于半夏的特征峰，可用于半夏与虎掌的鉴别。
(4)炮制品的鉴别
参照《中国药典》(2015年版一部)，将虎掌生品按照与半夏各种炮制品(姜半夏、清半夏、法半夏)相同的炮制方法进行处理，得到姜半夏、清半夏、法半夏的伪品炮制品，结果如图4所示。
鉴定结果同生品一致，在10～15min范围，伪品炮制品依然有该特征峰。
通过以上鉴别，找到了虎掌区别于半夏的特征峰，可有效的用于虎掌鉴别，也可用于半夏生品或炮制品中掺伪虎掌的情况。
实施例2本发明方法的工艺筛选
1、提取方法考察
(1)料液比
称取虎掌样品1g，提取溶剂水用量分别为20mL、30mL、40mL，超声提取，分别取10mL澄清提取液，加酸0.1mL，乙酸乙酯萃取，回收溶剂，5mL水溶解，过微孔滤膜，上样。结果如表1所示。
表1不同料液比考察
料液比 1:20 1:30 1:40
峰面积 174 107 75
换算峰面积 174 160 150
结果显示，提取效果以料液比为1:20峰面积最高，提取效果最好。
(2)提取时间的考察
称取虎掌样品1g，加水20mL，超声提取，提取时间分别为30min、45min、60min，分别取10mL澄清提取液，加酸0.1mL，乙酸乙酯萃取，回收溶剂，5mL水溶解，过微孔滤膜，上样。结果如表2所示。
表2提取时间考察
提取时间 30min 45min 60min
峰面积 124 143 133
结果显示，以超声提取45min峰面积最大，提取效果最好。
(3)酸的选择
称取虎掌样品1g，加水20mL，超声提取，取10mL澄清提取液，分别加甲酸、盐酸、磷酸0.1mL，乙酸乙酯萃取，回收溶剂，5mL水溶解，过微孔滤膜，上样。结果如表3所示。
表3酸的选择
酸的种类 甲酸 盐酸 磷酸
峰面积 126 143 144
结果显示，加盐酸或磷酸后峰面积最大，均可使用。因盐酸具有挥发性和刺激性，优选酸性中等磷酸。
(4)磷酸用量的考察
称取虎掌样品1g，加水20mL，超声提取，取10mL澄清提取液，分别加磷酸0.1mL、0.2mL、0.5mL，乙酸乙酯萃取，回收溶剂，5mL水溶解，过微孔滤膜，上样。结果如表4所示。
表4磷酸用量的选择
磷酸用量 0.1mL 0.2mL 0.5mL
峰面积 140 147 143
结果显示，考察的3种磷酸用量之间无显著差异，故加磷酸0.1mL。
(5)萃取次数考察
称取虎掌样品1g，加水20mL，超声提取，取10mL澄清提取液，加酸0.1mL，用乙酸乙酯分别萃取1、2、3、4、5次，每次20mL，合并乙酸乙酯，回收溶剂，残渣加5mL水溶解，过微孔滤膜，上样。结果如表5所示。
表5萃取次数考察
萃取次数 1 2 3 4 5
峰面积 73 116 142 158 154
结果显示，萃取4次后，基本可以萃取完全。
2、色谱条件的考察
(1)检测波长
经全波长扫描，特征鉴别峰最大吸收波长为210nm，故检测波长设定为210nm。
(2)流动相考察
考察了乙腈-磷酸盐系统(3:97)、乙腈-磷酸系统(3:97)、乙腈-甲酸系统(3:97)，结果如图5所示。
可以看出，乙腈-甲酸系统色谱峰峰形较差，基线不平稳；乙腈-磷酸盐系统及乙腈-磷酸系统均可以较好实现特征峰的鉴别。
(3)柱温的考察
分别考察25℃、30℃、35℃、40℃。结果如表6所示。
表6柱温考察
柱温 25℃ 30℃ 35℃ 40℃
峰面积 143 142 144 140
峰高 5.4 6.3 7.4 8.1
峰宽 0.40 0.35 0.30 0.26
对称因子 0.75 0.75 0.75 0.75
综合考虑多个因素，柱温优选40℃。
(4)进样量的考察
分别考察进样量为5、10、15、20、25μL。结果如表7所示。
表7进样量的考察
进样量(μL) 5 10 15 20 25
峰面积 37 72 104 141 174
峰高 2.1 4.7 6.4 8.1 10.4
综合考虑到峰面积、色谱柱的耐用性，选择了进样量20μL。
(5)重复性试验
取同一批样品1.0g，共取5份，精密称定，制定5份供试品溶液，分别测定。结果如表8所示。
表8重复性试验结果
重复性实验 1 2 3 4 5 RSD％
峰面积 140.5 145.0 141.7 143.9 146.9 1.78
结果显示，本发明方法重复性好。
(6)稳定性试验
取同一供试品溶液于不同时间，分别进样20ul，测定。结果如表9所示。
表9稳定性试验结果
时间(小时) 0 4 8 12 18 24 RSD％
峰面积 139.9 143.3 140.5 141.1 139.9 144.1 1.28
结果显示，本发明方法稳定性高。
综上所述，本方法通过提取工艺和高效液相色谱方法的筛选，有效将半夏和虎掌中的各峰分离开来，找到了恰当的虎掌区别于半夏的特征鉴别峰，既可用于半夏与虎掌或其炮制品的鉴别，也可用于半夏中掺伪虎掌及其炮制品的鉴别。本发明方法稳定可靠、简单快捷，可以有效监控半夏药材质量，保障了其疗效及用药安全，具有广阔的市场应用前景。

Claims (6)

1.一种半夏中掺伪虎掌的鉴别方法，其特征在于：包括以下步骤：
（1）供试品溶液的制备：
取待检药材，水提取，过滤或离心，取液体加酸，乙酸乙酯萃取，萃取液除去乙酸乙酯，加水复溶后过滤得供试品溶液；
所述乙酸乙酯的萃取次数为4次；每次萃取的乙酸乙酯用量与待检药材的体积重量比为20~30mL：1g；
（2）供试品溶液的测定：
取供试品溶液，注入高效液相色谱仪，检测，得到供试品的高效液相色谱图；
色谱条件如下：
色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18 液相色谱柱，规格为4.6×250mm，5μm；
流动相：流动相A为乙腈，流动相B为0.1%磷酸；流动相A的体积百分数为3%；
流速：0.8mL/min；
检测波长：210nm；
柱温： 40℃；
（3）鉴别：
供试品的高效液相色谱图在保留时间10~15min的范围内，如存在特征峰，则含有虎掌，如无，则不含虎掌。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1）中，所述提取是超声提取45分钟。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1）中，所述水与待检药材的体积重量比为20mL：1g。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1）中，所述酸为甲酸、盐酸或磷酸。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤（1）中，所述酸为磷酸，磷酸的加入量与待检药材的体积重量比为0.1~0.5mL：1g。
6.根据权利利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于：步骤（2）中，所述色谱条件的进样量为20μL。
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