CN106397623A - 一种何首乌脱色多糖的快速制备方法 - Google Patents
一种何首乌脱色多糖的快速制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN106397623A CN106397623A CN201610889883.5A CN201610889883A CN106397623A CN 106397623 A CN106397623 A CN 106397623A CN 201610889883 A CN201610889883 A CN 201610889883A CN 106397623 A CN106397623 A CN 106397623A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- polysaccharide
- column
- volume
- polygonum multiflorum
- separation
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 title claims abstract description 133
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 title claims abstract description 129
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 title claims abstract description 129
- 241001289529 Fallopia multiflora Species 0.000 title claims abstract description 78
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 31
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 72
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 71
- 239000000945 filler Substances 0.000 claims description 47
- 239000012071 phase Substances 0.000 claims description 41
- 239000012043 crude product Substances 0.000 claims description 33
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 30
- 239000012156 elution solvent Substances 0.000 claims description 28
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 27
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 21
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 claims description 20
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 claims description 19
- 229920000193 polymethacrylate Polymers 0.000 claims description 19
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 15
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 13
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 10
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 9
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 8
- 238000012856 packing Methods 0.000 claims description 6
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 10
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 abstract description 6
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 abstract description 4
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 abstract description 4
- 150000004804 polysaccharides Polymers 0.000 abstract description 4
- 238000010828 elution Methods 0.000 abstract description 2
- 229940126680 traditional chinese medicines Drugs 0.000 abstract 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 18
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 16
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 16
- 238000004042 decolorization Methods 0.000 description 14
- 239000000047 product Substances 0.000 description 12
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 11
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 9
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000005086 pumping Methods 0.000 description 7
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 5
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 4
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 4
- 238000005238 degreasing Methods 0.000 description 4
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 4
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 4
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 4
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 4
- OQUKIQWCVTZJAF-UHFFFAOYSA-N phenol;sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O.OC1=CC=CC=C1 OQUKIQWCVTZJAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 238000003809 water extraction Methods 0.000 description 4
- GUBGYTABKSRVRQ-WFVLMXAXSA-N DEAE-cellulose Chemical compound OC1C(O)C(O)C(CO)O[C@H]1O[C@@H]1C(CO)OC(O)C(O)C1O GUBGYTABKSRVRQ-WFVLMXAXSA-N 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 3
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 3
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 3
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 3
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 2
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 1
- AFCARXCZXQIEQB-UHFFFAOYSA-N N-[3-oxo-3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)propyl]-2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound O=C(CCNC(=O)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F)N1CC2=C(CC1)NN=N2 AFCARXCZXQIEQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010039966 Senile dementia Diseases 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000007873 sieving Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/0003—General processes for their isolation or fractionation, e.g. purification or extraction from biomass
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Abstract
本发明属于中药化学领域，涉及一种何首乌脱色多糖的快速制备方法。本发明提供的何首乌脱色多糖制备方法，操作简便，经济，方便，快速高效，对多糖结构和活性均无影响，仅用水相洗脱，无有机溶剂残留，收率和纯度高，多糖含量达到85％以上，保留率超过90％。
Description
技术领域
本发明属于中药化学领域，涉及一种操作简便，经济，方便，快速高效，对多糖结构和活性均无影响，无有机溶剂残留，高收率和纯度的何首乌脱色多糖制备方法。
背景技术
何首乌多糖具有抗衰老、免疫调节、抗氧化及抗老年痴呆症等生物活性，是何首乌的重要功能性成分。通常情况下，传统的水提醇沉法是获取何首乌多糖的主要手段，但所得的多糖产品色泽深、杂质较多，严重影响多糖的纯度、色度、稳定性及生物活性，也阻碍了对多糖结构与其生物活性关系的深入研究。
为了提高何首乌多糖产品质量，目前主要采用活性炭吸附、双氧水氧化、DEAE纤维素柱层析、大孔树脂吸附法等方法进行纯化脱色处理，但尚不能达到理想的效果。如活性炭吸附法虽然经济，但其脱色时间较长，脱色效果差且多糖保留率低。双氧水氧化法脱色效果虽好，但反应过程会对多糖结构造成一定破坏，影响其生物活性。DEAE纤维素柱层析法虽然能取得较好的脱色效果，但DEAE纤维素柱使用寿命短，使用成本太高。大孔树脂吸附法则存在脱色时间长，脱色效率低，样品处理量小，溶剂耗量大等缺陷，如专利文献CN102731667A公开的大孔树脂吸附法，样品处理浓度仅为5-15g/L，脱色纯化时间需4-8h，溶剂用量极大，脱色效率太低。
因此，研究一种经济、方便、快速高效、对多糖结构和活性无影响、无有机溶剂残留、高收率和纯度的何首乌脱色脱色多糖制备方法，具有重要的价值和应用前景。
发明内容
本发明的目的是提供一种经济、方便、快速高效、对多糖结构无破坏和对活性无影响、无有机溶剂残留、高收率和纯度的何首乌脱色多糖制备方法。
为实现上述发明目的，本发明提供以下的技术方案：
一种何首乌脱色多糖的制备方法，其特征在于所述的何首乌脱色多糖是以何首乌多糖粗品样品为原料，通过以聚甲基丙烯酸酯类MCI GEL反相精细分离填料为层析柱填料的加压层析系统柱层析分离得到。
根据本发明的制备方法，所述的何首乌多糖粗品样品为浓度为0.01～0.2g/mL的何首乌多糖粗品水溶液。优选地，所述的何首乌多糖粗品样品为浓度为0.05～0.1g/mL的何首乌多糖粗品水溶液。
根据本发明的制备方法，所述的加压层析系统为中低压加压层析系统。优选地，所述的加压层析系统的最大耐压为40bar。
根据本发明的制备方法，所述的加压层析系统包括一根最大耐压40bar的中压柱、一台低压泵以及馏分收集器。优选地，所述的加压层析系统包括一根最大耐压40bar的中压玻璃柱、一台二元低压泵以及可计时收集的馏分收集器。
根据本发明的制备方法，所述的柱层析分离条件是以粒径为50～70μm的聚甲基丙烯酸酯类MCI GEL反相精细分离填料为柱填料，以水为洗脱溶剂，设置泵流速1～20mL/min，多糖粗品样品与分离填料柱体积之比为1:3～1:20，洗脱溶剂体积为1～10倍柱体积，收集水相冷冻干燥，获得本发明的何首乌多糖。其中，优选地，所述的泵流速设置为3～20mL/min，进一步优选地，所述的泵流速设置为3-10mL/min；优选地，所述的多糖样品与分离填料柱体积之比为1:5-1:20，进一步优选地，所述的多糖样品与分离填料柱体积之比为1:5-1:10；优选地，所述的洗脱溶剂体积为1.5-10倍柱体积，进一步优选地，所述的洗脱溶剂体积为1.5-5倍柱体积。
在另一些实施方案中，本发明的制备方法，所述的柱层析分离条件是以粒径为50～70μm的聚甲基丙烯酸酯类MCI GEL反相精细分离填料为柱填料，柱体积为400～1000mL，以水为洗脱溶剂，设置泵流速1-20mL/min，多糖粗品样品与分离填料柱体积之比为1:3～1:20，进样完毕后吸附0-10min，洗脱溶剂体积为1-10倍柱体积，收集水相冷冻干燥，获得本发明的何首乌多糖。其中，优选地，所述的泵流速设置为3～20mL/min，进一步优选地，所述的泵流速设置为3-10mL/min；优选地，所述的多糖样品与分离填料柱体积之比为1:5-1:20，进一步优选地，所述的多糖样品与分离填料柱体积之比为1:5-1:10；优选地，所述的洗脱溶剂体积为1.5-10倍柱体积，进一步优选地，所述的洗脱溶剂体积为1.5-5倍柱体积。
根据本发明的制备方法，还可以进一步包括如下步骤：用有机相冲洗经水相洗脱的分离柱，再用水相置换有机相，平衡分离柱后重复步骤(2)的柱层析分离步骤，所述的有机相选择甲醇、异丙醇、丙酮中的一种或多种，有机相冲洗体积为1-10倍柱体积。优选地，所述的有机相为甲醇，冲洗体积为3-10倍柱体积。
在一些具体的实施方案中，本发明提供的何首乌脱色多糖的制备方法，包括以下步骤：
(1)将何首乌多糖粗品配制成多糖粗品样品；
(2)以聚甲基丙烯酸酯类MCI GEL反相精细分离填料为层析填料，通过加压层析系统柱层析，收集水相冷冻干燥得到；
其中，
步骤(1)的何首乌多糖粗品样品为浓度为0.01-0.2g/mL的多糖粗品水溶液；优选地，所述何首乌多糖粗品样品为浓度为0.05-0.1g/mL的多糖粗品水溶液；
步骤(2)的加压层析系统为最大耐压为40bar的中低压加压层析系统；
步骤(2)的柱层析条件为：以粒径为50～70μm的聚甲基丙烯酸酯类MCI GEL反相精细分离填料为柱填料，以水为洗脱溶剂，设置泵流速1～20mL/min，多糖粗品样品与分离填料柱体积之比为1:3～1:20，洗脱溶剂体积为1～10倍柱体积，其中，所述的水优选为蒸馏水。
在一些优选的实施方案中，本发明提供的何首乌脱色多糖的制备方法，其中步骤(1)的何首乌多糖粗品样品的配制方法是将何首乌多糖与水按照质量(g)体积(mL)比为1:100-1:5的比例溶解，并过滤。
在一些优选的实施方案中，本发明提供的何首乌脱色多糖的制备方法，其中步骤(1)的何首乌多糖粗品样品的配制方法是将何首乌多糖与水按照质量(g)体积(mL)比为1:20-1:5的比例溶解，并过滤。
在一些优选的实施方案中，本发明提供的何首乌脱色多糖的制备方法，其中步骤(1)的何首乌多糖粗品样品的配制方法是将何首乌多糖与水按照质量(g)体积(mL)比为1:20-1:10的比例溶解，并过滤。
在一些优选的实施方案中，本发明提供的何首乌脱色多糖的制备方法，其中步骤(1)的何首乌多糖粗品样品的配制方法是在50-80℃下，将何首乌多糖与水按照质量(g)体积(mL)比为1:100-1:5的比例溶解，过滤后冷却至室温。
在一些优选的实施方案中，本发明提供的何首乌脱色多糖的制备方法，其中步骤(1)的何首乌多糖粗品样品的配制方法是在50-80℃下，将何首乌多糖与水按照质量(g)体积(mL)比为1:20-1:5的比例溶解，过滤后冷却至室温。
在一些优选的实施方案中，本发明提供的何首乌脱色多糖的制备方法，其中步骤(1)的何首乌多糖粗品样品的配制方法是在50-80℃下，将何首乌多糖与水按照质量(g)体积(mL)比为1:20-1:10的比例溶解，过滤后冷却至室温。
在一些优选的实施方案中，本发明提供的何首乌脱色多糖的制备方法，其中步骤(2)的柱层析条件是以粒径为50～70μm的聚甲基丙烯酸酯类MCI GEL反相精细分离填料为柱填料，以水为洗脱溶剂，设置泵流速3～20mL/min，多糖粗品样品与分离填料柱体积之比为1:5～1:10，洗脱溶剂体积为1.5～10倍柱体积，其中，所述的水优选为蒸馏水。
在一些优选的实施方案中，本发明提供的何首乌脱色多糖的制备方法，其中步骤(2)的柱层析条件是以粒径为50～70μm的聚甲基丙烯酸酯类MCI GEL反相精细分离填料为柱填料，以水为洗脱溶剂，设置泵流速3～10mL/min，多糖粗品样品与分离填料柱体积之比为1:5～1:10，洗脱溶剂体积为1.5～5倍柱体积，其中，所述的水优选为蒸馏水。
在一些优选的实施方案中，本发明提供的何首乌脱色多糖的制备方法，其中步骤(2)的柱层析分离条件是以粒径为50～70μm的聚甲基丙烯酸酯类MCI GEL反相精细分离填料为柱填料，柱体积为400～1000mL，以水为洗脱溶剂，设置泵流速3～20mL/min，多糖粗品样品与分离填料柱体积之比为1:3～1:20，进样完毕后吸附0-10min，洗脱溶剂体积为3～10倍柱体积。
在一些优选的实施方案中，本发明提供的何首乌脱色多糖的制备方法，还可以进一步包括如下步骤：用有机相冲洗经水相洗脱的分离柱，再用水相平衡分离柱后重复步骤(2)的柱层析分离步骤，所述的有机相选择甲醇、异丙醇、丙酮中的一种或多种，有机相冲洗体积为1-10倍柱体积。优选地，所述的有机相选择甲醇、异丙醇、丙酮中的一种或多种，有机相冲洗体积为3-10倍柱体积。
本发明提供的较佳实施方案是本发明的何首乌脱色多糖的制备方法，包括以下步骤：
(1)将何首乌多糖粗品和蒸馏水按照质量(g)体积(mL)比为1:20-1:10的比例溶解，并过滤，配制成浓度为0.05～0.1g/mL的多糖粗品水溶液；
(2)以粒径为50～70μm的聚甲基丙烯酸酯类MCI GEL反相精细分离填料为柱填料，以水为洗脱溶剂，柱体积为400～1000mL，设置泵流速3～10mL/min，多糖粗品样品与分离填料柱体积之比为1:5～1:10，进样完毕后吸附0-10min，洗脱溶剂体积为1.5～5倍柱体积，收集水相冷冻干燥。
本发明提供的另一些较佳实施方案是本发明的何首乌脱色多糖的制备方法，包括以下步骤：
(1)将何首乌多糖粗品和蒸馏水按照质量(g)体积(mL)比为1:20-1:10的比例溶解，并过滤，配制成浓度为0.05～0.1g/mL的多糖粗品水溶液；
(2)以粒径为50～70μm的聚甲基丙烯酸酯类MCI GEL反相精细分离填料为柱填料，以水为洗脱溶剂，柱体积为400～1000mL，设置泵流速3～10mL/min，多糖粗品样品与分离填料柱体积之比为1:5～1:10，进样完毕后吸附0-10min，洗脱溶剂体积为1.5～5倍柱体积，收集水相冷冻干燥。
(3)用选自甲醇、丙酮或异丙醇中一种或多种的有机相冲洗分离柱，有机相体积为3～10倍柱体积，再用水相置换有机相，平衡分离柱，重复步骤(2)。
本发明提供的何首乌脱色多糖制备方法，采用聚甲基丙烯酸酯类MCI GEL反相精细分离填料为柱填料，中低压加压系统分离，常温下即可快速连续地实现何首乌多糖的脱色纯化，不破坏何首乌多糖的结构和活性，脱色时间短，最大处理浓度可达0.2g/mL，进样量大，经有机相冲洗分离柱后，可用水相置换有机相，平衡柱子后进行新一轮的多糖分离制备，实现了多糖的中小批量连续制备，大大提高了多糖样品的处理量，纯化脱色效率高。本发明提供的快速制备方法制备的何首乌多糖，脱色后多糖含量提高至85％以上，保留率超过90％，产品外观由脱色前的棕色变为脱色后的灰白色，纯化脱色效果明显。此外，本发明制备的多糖全部来源于水相洗脱部分，并直接通过冷冻干燥除去水分，避免了常规脱色方法中可能带来的活性炭或有机溶剂残留的问题，不仅简便了后续处理步骤，而且保证了多糖产品的安全性。
术语解释
本发明所述的何首乌多糖粗品是指以生何首乌药材饮片为原料，通过传统水提醇沉法制备的粗多糖或水提法制备的何首乌多糖提取液。例如采用传统水提醇沉法，以生何首乌药材饮片为原料，将除去杂质的何首乌粉碎，先用石油醚脱脂，再用蒸馏水提取，最后加入乙醇醇沉，取沉淀得到何首乌粗多糖；或者以生何首乌药材饮片为原料，将除去杂质的何首乌粉碎，先用石油醚脱脂，再用蒸馏水提取，将提取液直接浓缩获得何首乌多糖提取液。
本发明所述的何首乌多糖粗品样品是指与水配制成合适浓度的多糖粗品水溶液。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细阐述，但本发明不限于这些实施例。本文中使用的试剂和原料均为商购所得。
实施例1何首乌多糖粗品的制备
步骤A脱脂：以生何首乌药材饮片为原料，将除去杂质的何首乌粉碎，经100目铁筛过筛，收集过筛的原料粉末用石油醚以体积比为1:8，在90℃水浴环境中提取0.5h，过滤，取滤渣重复石油醚脱脂2次；收集脱脂后的滤渣，挥干表面有机溶剂得到脱脂处理的何首乌药材原料。
步骤B提取：将步骤A获得的脱脂处理的何首乌药材原料和蒸馏水按照质量(g)体积(mL)料液比1:6，85℃下，在多功能提取罐中进行提取，提取2h，过滤，滤渣重复提取3次。收集并合并提取液，浓缩至原体积的1/10获得何首乌多糖提取液。
实施例2何首乌多糖粗品的制备
步骤A脱脂：同实施例1步骤A的方法获得脱脂处理的何首乌药材原料。
步骤B提取：将步骤A获得的脱脂处理的何首乌药材原料和蒸馏水按照质量(g)体积(mL)料液比1:6，85℃下在多功能提取罐中进行提取2h，过滤，滤渣重复提取2次，收集并合并提取液，浓缩至原体积的1/10。
步骤C醇沉：将步骤B获得的何首乌多糖浓缩液冷却至室温后，加入4倍体积的无水乙醇，4℃静置24h，离心30min，转速3000r/min，取沉淀真空干燥，得到何首乌粗多糖。
采用苯酚-硫酸法测量实施例1-2制备的何首乌中多糖含量范围为30％-60％。
实施例3何首乌脱色多糖的制备
将实施例1获得的何首乌多糖提取液或实施例2获得的何首乌粗多糖和蒸馏水按照质量(g)体积(mL)比1:20溶解，过滤，取滤液作为进样样品。
以400mL 50～70μm的聚甲基丙烯酸酯类MCI GEL反相精细分离填料为柱填料，以水为洗脱溶剂。取80mL进样样品以1.0mL/min的速度泵入分离柱中，进样完毕后吸附10min，调整泵流速为10mL/min，待柱压稳定后，用5倍柱体积水相洗脱，设置馏分收集器每5min收集一管，采用苯酚-硫酸法逐管检测，收集呈阳性反应者。浓缩并冷冻干燥得到何首乌脱色多糖，产品为灰白色。
实施例4何首乌脱色多糖的制备
将实施例1获得的何首乌多糖提取液或实施例2获得的何首乌粗多糖和蒸馏水按照质量(g)体积(mL)比1:15溶解，过滤，取滤液作为进样样本。
以1000mL 50～70μm的聚甲基丙烯酸酯类MCI GEL反相精细分离填料为柱填料，以水为洗脱溶剂。将125mL进样样品以3.0mL/min的速度泵入分离柱中，进样完毕后吸附10min，调整泵流速为3.0mL/min，待柱压稳定后，用1.5倍柱体积水相洗脱，设置馏分收集器每5min收集一管，采用苯酚-硫酸法逐管检测，收集呈阳性反应者，，冷冻干燥得到何首乌脱色多糖，产品为灰白色。
实施例5何首乌脱色多糖的制备
将实施例1获得的何首乌多糖提取液或实施例2获得的何首乌粗多糖和蒸馏水按照质量(g)体积(mL)比1:10溶解，过滤，取滤液作为进样样本。
以600mL 50～70μm的聚甲基丙烯酸酯类MCI GEL反相精细分离填料为柱填料，以水为洗脱溶剂。将60mL进样样本以1.0mL/min的速度泵入分离柱中，进样完毕后静态吸附5min，调整泵流速为5.0mL/min，待柱压稳定后，先以3倍柱体积蒸馏水洗脱，收集水相部分浓缩，冷冻干燥得到何首乌脱色多糖，产品为灰白色。
继续用3倍柱体积的甲醇冲洗分离柱，换水相置换出分离柱的甲醇，平衡分离柱后，取60mL进样样品以2.0mL/min的速度泵入分离柱中，进样完毕后静态吸附10min，调整泵流速为8.0mL/min，待柱压稳定后，以3倍柱体积蒸馏水洗脱，收集水相部分浓缩，冷冻干燥得到何首乌脱色多糖，产品为灰白色。
实施例6何首乌脱色多糖的制备
将实施例1获得的何首乌多糖提取液或实施例2获得的何首乌粗多糖和蒸馏水按照质量(g)体积(mL)比1:10溶解，过滤，取滤液作为进样样本。
以1000mL 50～70μm的聚甲基丙烯酸酯类MCI GEL反相精细分离填料为柱填料，以水为洗脱溶剂。将50mL进样样本以1.0mL/min的速度泵入分离柱中，进样完毕后静态吸附5min，调整泵流速为10.0mL/min，待柱压稳定后，以1倍柱体积蒸馏水洗脱，收集水相部分浓缩，冷冻干燥得到何首乌脱色多糖，产品为灰白色。
继续用2倍柱体积的丙酮冲洗分离柱，换水相置换出分离柱的丙酮，平衡分离柱后，取75mL进样样品以3.0mL/min的速度泵入分离柱中，进样完毕后静态吸附10min，调整泵流速为10.0mL/min，待柱压稳定后，以3倍柱体积蒸馏水洗脱，收集水相部分浓缩，冷冻干燥得到何首乌脱色多糖，产品为灰白色。
继续用2倍柱体积的异丙醇冲洗分离柱，换水相置换出分离柱的异丙醇，平衡分离柱后，取50mL进样样品以2.0mL/min的速度泵入分离柱中，进样完毕后静态吸附10min，调整泵流速为5.0mL/min，待柱压稳定后，以2倍柱体积蒸馏水洗脱，收集水相部分浓缩，冷冻干燥得到何首乌脱色多糖，产品为灰白色。
实施例1-6制备得到的何首乌脱色多糖均为灰白色，经苯酚-硫酸法检测多糖含量范围85-90％，多糖保留率90％以上。
Claims (10)
1.一种何首乌脱色多糖的制备方法，其特征在于所述的何首乌脱色多糖是以何首乌多糖粗品样品为原料，通过以聚甲基丙烯酸酯类MCI GEL反相精细分离填料为层析柱填料的加压层析系统柱层析分离得到。
2.根据权利要求1的制备方法，所述的制备方法包括以下步骤：
(1)将何首乌多糖粗品配制成多糖粗品样品；
(2)以聚甲基丙烯酸酯类MCI GEL反相精细分离填料为层析填料，通过加压层析系统柱层析，收集水相冷冻干燥得到何首乌脱色多糖。
3.根据权利要求1的制备方法，所述的制备方法包括以下步骤：
(1)将何首乌多糖粗品配制成多糖粗品样品；
(2)以聚甲基丙烯酸酯类MCI GEL反相精细分离填料为层析填料，通过加压层析系统柱层析，收集水相冷冻干燥得到何首乌脱色多糖；
(3)用有机相冲洗分离柱，再用水相置换有机相，平衡分离柱，重复步骤(2)。
4.根据权利要求1-3之任一项所述的制备方法，其中所述的多糖粗品样品为浓度为0.01～0.2g/mL的何首乌多糖粗品水溶液；优选地，所述的多糖粗品样品为浓度为0.05～0.1g/mL的何首乌多糖粗品水溶液。
5.根据权利要求1-3之任一项所述的制备方法，其中所述的加压层析系统为中低压加压层析系统；优选地，所述的加压层析系统为最大耐压不超过40bar的中低压加压层析系统。
6.根据权利要求1-3之任一项所述的制备方法，其中所述的柱层析分离条件是以粒径为50～70μm的聚甲基丙烯酸酯类MCI GEL反相精细分离填料为柱填料，以水为洗脱溶剂，设置泵流速1～20mL/min，多糖粗品样品与分离填料柱体积之比为1:3～1:20，洗脱溶剂体积为1～10倍柱体积。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其中所述柱层析分离条件中泵流速为3～20mL/min；优选地，所述泵流速为3～10mL/min。
8.根据权利要求6所述的制备方法，其中所述柱层析分离条件中多糖样品与分离填料柱体积之比为1:5-1:20；优选地，所述多糖样品与分离填料柱体积之比为1:5-1:10。
9.根据权利要求6所述的制备方法，其中所述柱层析分离条件中洗脱溶剂体积为1.5-10倍柱体积；优选地，所述洗脱溶剂体积为1.5-5倍柱体积。
10.根据权利要求3之任一项所述的制备方法，其中步骤(3)所述的有机相选自甲醇、异丙醇、丙酮中的一种或多种，有机相冲洗体积为1-10倍柱体积；优选地，所述的有机相为甲醇，冲洗体积为3-10倍柱体积。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610889883.5A CN106397623A (zh) | 2016-10-12 | 2016-10-12 | 一种何首乌脱色多糖的快速制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610889883.5A CN106397623A (zh) | 2016-10-12 | 2016-10-12 | 一种何首乌脱色多糖的快速制备方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN106397623A true CN106397623A (zh) | 2017-02-15 |
Family
ID=59229220
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201610889883.5A Pending CN106397623A (zh) | 2016-10-12 | 2016-10-12 | 一种何首乌脱色多糖的快速制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN106397623A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116693711A (zh) * | 2023-06-09 | 2023-09-05 | 中国食品药品检定研究院 | 一种何首乌多糖及其提取方法和应用 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102344500A (zh) * | 2011-10-09 | 2012-02-08 | 广东药学院 | 一种制何首乌多糖及其在制备抗衰老药物中的应用 |
| CN102731667A (zh) * | 2011-04-12 | 2012-10-17 | 谭智丽 | 一种何首乌多糖的提取纯化方法 |
| CN103936812A (zh) * | 2014-04-29 | 2014-07-23 | 中国科学院昆明植物研究所 | 羽扇豆烷型三萜类化合物及其药物组合物和其应用 |
-
2016
- 2016-10-12 CN CN201610889883.5A patent/CN106397623A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102731667A (zh) * | 2011-04-12 | 2012-10-17 | 谭智丽 | 一种何首乌多糖的提取纯化方法 |
| CN102344500A (zh) * | 2011-10-09 | 2012-02-08 | 广东药学院 | 一种制何首乌多糖及其在制备抗衰老药物中的应用 |
| CN103936812A (zh) * | 2014-04-29 | 2014-07-23 | 中国科学院昆明植物研究所 | 羽扇豆烷型三萜类化合物及其药物组合物和其应用 |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116693711A (zh) * | 2023-06-09 | 2023-09-05 | 中国食品药品检定研究院 | 一种何首乌多糖及其提取方法和应用 |
| CN116693711B (zh) * | 2023-06-09 | 2024-02-02 | 中国食品药品检定研究院 | 一种何首乌多糖及其提取方法和应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102276679B (zh) | 一种从油茶饼粕减压沸腾提取高纯度茶皂素的方法 | |
| CN105294790A (zh) | 一种从甜叶菊中提取高纯度甜叶菊糖苷的方法 | |
| CN112321450B (zh) | 一种羟基-α-山椒素单体的制备方法 | |
| CN103450703B (zh) | 一种制备高纯度脱味紫甘薯色素的方法 | |
| CN101781351B (zh) | 一种从西洋参中提取人参皂甙Rb1的方法及其粉针剂 | |
| CN110051705B (zh) | 提取及纯化桦褐孔菌多酚的方法 | |
| CN106349324A (zh) | 从油橄榄叶中提取分离山楂酸的方法 | |
| CN101328201A (zh) | 一种从桦树皮中提取白桦脂醇的方法 | |
| CN104876843B (zh) | 一种从胭脂萝卜籽中制备高纯度莱菔素的方法 | |
| JP6768970B2 (ja) | ルブソシドの調製方法 | |
| CN106831930B (zh) | 一种用于熊果酸提取的萃取剂及提取方法 | |
| CN110330537B (zh) | 一种从栀子果中提取高纯度藏红花素工艺的方法 | |
| CN106397623A (zh) | 一种何首乌脱色多糖的快速制备方法 | |
| CN111040011A (zh) | 一种高纯度人参皂苷Rg1的精制方法 | |
| CN110917240A (zh) | 一种从青钱柳中分离多种有效成分的连续化方法 | |
| CN111187328A (zh) | 一种制备罗汉果醇的方法 | |
| CN110054704B (zh) | 采用硫酸铵及ctab沉淀结合大孔树脂精制凉粉草多糖的方法 | |
| CN111892503B (zh) | 一种从平卧菊三七花中快速制备高纯度绿原酸的方法 | |
| CN1176087C (zh) | 喜树碱高效生产工艺 | |
| CN113861248A (zh) | 一种石榴皮提取液重金属处理及安石榴甙的纯化方法 | |
| CN102772452A (zh) | 超低酸银杏叶提取物的生产方法 | |
| CN108558645B (zh) | 从栀子中提取藏红花素的方法 | |
| CN111747826A (zh) | 一种超声波逆流提取大麻二酚的方法 | |
| CN111217780A (zh) | 一种利用超高压技术提取苍术酮的方法 | |
| CN104530170A (zh) | 一种从黄芪中提取黄芪甲苷和黄芪皂苷ⅴ的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20170215 |