CN110051705B - 提取及纯化桦褐孔菌多酚的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种高效提取及纯化桦褐孔菌多酚的方法,属于生物提纯技术领域。其方法包括如下步骤:(1)原料预处理;(2)原料浸泡;(3)装柱;(4)循环柱层析提取;(5)大孔树脂的预处理;(6)大孔树脂柱层析吸附及平液用于下一根提取柱提取;(7)大孔树脂柱蒸馏水洗除杂;(8)洗脱;(9)静置除杂;(10)减压浓缩;(11)干燥。本发明采用循环柱层析提取桦褐孔菌多酚,使多层析柱组合成一条连续自动的生产线,可以不间断收取提取液进入下一道大孔树脂分离工序,利于大规模连续生产,且使桦褐孔菌多酚提取率达到85%,解决了现有技术中提取率低,纯度不高的问题。
Description
技术领域
本发明属于生物提纯技术领域,具体涉及一种高效提取及纯化桦褐孔菌多酚的方法。
背景技术
桦褐孔菌是一种生长在桦树上的野生药用、食用菌,含有多种生物活性物质,其子实体和发酵菌丝体中含有多种生物活性物质,主要活性物质为多酚类、多糖类、三萜类等化合物,具有很强的抗氧化活性和抗炎、抗肿瘤、抗病毒、抗血小板聚集、免疫调节等活性,其具有抗氧化性能的主要成分是桦褐孔菌中的多酚。因此,以桦褐孔菌为原料提取桦褐孔菌多酚,并将其应用于抗氧化、抗炎、抗肿瘤、抗病毒以及免疫调节药物中,对人类的健康及保健具有积极的意义,具有广泛的开发价值和应用前景。
目前,以桦褐孔菌为原料提取、纯化桦褐孔菌多酚多采用有机溶剂浸提法提取、离子沉淀法分离纯化的方法,存在提取率低,纯度不高等问题。
发明内容
针对上述技术中存在的桦褐孔菌多酚提取率低,纯度不高的问题,本发明的目的是提供一种高效提取及纯化桦褐孔菌多酚的方法。
为解决上述技术问题,本发明采用了以下技术方案:
高效提取及纯化桦褐孔菌多酚的方法,包括如下步骤:
步骤1.原料预处理
选取桦褐孔菌,清水冲洗表面杂质后,干燥至含水量为2%~5%,机械剪切粉碎;
步骤2.原料浸泡
将预处理的桦褐孔菌原料中加入提取溶剂,于70℃下浸泡至材料充分吸胀;
步骤3.装柱
将充分吸胀的桦褐孔菌原料与提取溶剂一起转入层析柱或容器中,室温下,用柱层析洗脱的方法将多酚从层析柱内的桦褐孔菌中洗脱出来;
步骤4.循环柱层析提取
将层析柱内流出的洗脱液以1个柱体积为单位进行收集,第1根柱的提取液经大孔树脂柱吸附后流出的平液直接用于第2根提取柱的提取,依次类推,实现多个层析柱循环提取;采用循环柱层析提取的方法,使多层析柱组合成一条连续自动的生产线,可以不间断收取提取液进入下一道大孔树脂分离工序,利于大规模连续生产。经过循环柱层析提取,桦褐孔菌多酚提取率可达85%。
步骤5.大孔树脂的预处理
先将大孔树脂依次用95%的酒精、0.1mol/L的盐酸、0.1mol/L的NaOH溶液分别浸泡12小时后,再装入层析柱,并使层析柱中树脂的高度为柱直径的10~15 倍,用蒸馏水洗涤;
步骤6.大孔树脂柱层析吸附及平液用于下一根提取柱提取
将步骤4的提取液加入经步骤5预处理的大孔树脂柱,或将步骤4的提取液加入再生后的大孔树脂柱,加样时柱内的流出液以柱体积为单位分开收集,多酚被吸附后,大孔树脂柱流出液直接用于下一根提取柱中桦褐孔菌多酚的提取;
步骤7.大孔树脂柱蒸馏水洗除杂
待样品完全流入柱内后,用蒸馏水洗涤大孔树脂柱,洗去杂质,不损失多酚;
步骤8.洗脱
用80%的乙醇从大孔树脂柱中洗脱多酚,收集洗脱液;
步骤9.静置除杂
将步骤8收集好的多酚洗脱液密封,避光在低温冷藏箱中放置12小时后减压过滤或离心过滤除去沉淀;
步骤10.减压浓缩
将步骤9除杂得到的多酚滤液或离心上清液于40~45℃下减压浓缩至除去乙醇;低于40℃乙醇不易通过减压蒸馏完全除去,残留的乙醇会对下一步干燥带来困难。
步骤11.干燥
将步骤10减压浓缩后的多酚浓缩液于-20℃预冷2小时后,再经-80℃真空冷冻干燥12小时得黄色粉末,即为桦褐孔菌多酚。采用超低温冷冻干燥方法,多酚降解率较低。
进一步地,所述步骤1原料预处理中,选取桦褐孔菌,清水冲洗表面杂质后,干燥至含水量为2%~5%,机械剪切粉碎;其中,所述桦褐孔菌为成熟干燥的桦褐孔菌,干燥温度为45℃,机械剪切粉碎至40目;桦褐孔菌经机械剪切粉碎后的材料不宜过细,否则溶剂流动困难,提取柱压增大;材料过粗会造成提取溶剂浸润困难,耗时较长不利于工业化应用。
更进一步地,所述步骤2原料浸泡中,将预处理的桦褐孔菌原料中加入提取溶剂,于70℃下浸泡至材料充分吸胀;其中,所述加入的提取溶剂的量为:干燥桦褐孔菌原料与提取溶剂的质量比为1:3.73,或桦褐孔菌原料与提取溶剂的料液质量比为1:3.73,提取溶剂为60%的乙醇水溶液,并用1mol/L盐酸将其酸碱度pH调为3,浸泡时间为90分钟;可以根据原料预处理中干燥的情况灵活选用桦褐孔菌原料与提取溶剂的质量比,或桦褐孔菌原料与提取溶剂的料液质量比,确保对原料的充分浸泡。
更进一步地,所述步骤3装柱中,将充分吸胀的桦褐孔菌原料与提取溶剂一起转入层析柱或容器中,室温下,用柱层析洗脱的方法将多酚从层析柱内的桦褐孔菌中洗脱出来;其中,所述层析柱中材料的高度应为柱直径的5倍,洗脱流速为1BV/小时,柱内液面始终高于材料;
更进一步地,所述步骤5大孔树脂的预处理中,所述用蒸馏水洗涤具体为用蒸馏水以1.5BV/小时的流速洗涤5BV。
更进一步地,所述步骤6大孔树脂柱层析吸附及平液用于下一根提取柱提取中,将步骤4的提取液加入经步骤5预处理的大孔树脂柱,或将步骤4的提取液加入再生后的大孔树脂柱,加样时柱内的流出液以柱体积为单位分开收集,多酚被吸附后,大孔树脂柱流出液直接用于下一根提取柱中桦褐孔菌多酚的提取;其中,提取液加入的流速为1.5BV/小时,加样体积不超过大孔树脂柱体积的4.5倍。
更进一步地,所述步骤7大孔树脂柱蒸馏水洗除杂中,待样品完全流入柱内后,用蒸馏水洗涤大孔树脂柱,具体为用蒸馏水以2BV/小时流速洗涤树脂柱 3BV,洗去杂质,不损失多酚。
更进一步地,所述步骤8洗脱中,用80%的乙醇从大孔树脂柱中洗脱多酚,收集洗脱液;具体为用3BV的80%的乙醇以1.5BV/小时的流速从大孔树脂柱中洗脱多酚,收集洗脱液。
更进一步地,所述步骤9静置除杂中,将步骤8收集好的多酚洗脱液密封,避光在低温冷藏箱中放置12小时后减压过滤或离心过滤除去沉淀;其中冷藏箱的温度设置为4℃;步骤8的洗脱液中乙醇浓度为80%,因此无需再调整乙醇浓度,直接低温静置即可进一步除去了洗脱液中残留的多糖及蛋白杂质。
更进一步地,所述步骤11干燥中,还可以采用喷雾干燥的方法进行干燥,具体是将步骤10减压浓缩后的浓缩液以进风口温度为145℃,进料流速10mL/ 分钟的条件喷雾干燥得黄色粉末,即为桦褐孔菌多酚;喷雾干燥耗时短,可连续大批量处理,适合工业化生产。
与现有技术相比,本发明具有以下有益效果:
1、本发明采用循环柱层析提取桦褐孔菌多酚,使多层析柱组合成一条连续自动的生产线,可以不间断收取提取液进入下一道大孔树脂分离工序,利于大规模连续生产。
2、本发明采用循环柱层析提取桦褐孔菌多酚,使桦褐孔菌多酚提取率达到85%,与现有技术相比,采用本发明的方法使桦褐孔菌多酚提取率显著提高。
3、本发明采用的两种干燥途径下制得的多酚粉末纯度均可达60%或以上,含水量仅为3%到4.5%。采用超低温冷冻干燥具有多酚降解率较低的优点;采用喷雾干燥耗具有时短,可连续大批量处理,适合工业化生产的优点。
附图说明
图1是实施例中桦褐孔菌多酚循环柱层析提取流程图;
图2是不同提取溶剂对桦褐孔菌多酚提取率的影响;
图3是不同乙醇体积分数对桦褐孔菌多酚提取率的影响;
图4是不同pH提取液对桦褐孔菌多酚提取率的影响;
图5是不同提取温度对桦褐孔菌多酚提取率的影响;
图6是溶剂吸附及提取动力学;
图7是径高比1:5对桦褐孔菌多酚柱层析提取率的影响;
图8是桦褐孔菌多酚循环柱层析提取。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明做进一步说明。
实施例1
如图1所示,高效提取及纯化桦褐孔菌多酚的方法,包含如下步骤:
步骤1.原料预处理
选择成熟干燥桦褐孔菌,清水冲洗表面杂质后于45℃下干燥至含水量为 2%,机械剪切粉碎至40目;
步骤2.原料浸泡
将预处理的干燥桦褐孔菌原料按桦褐孔菌原料与提取溶剂的质量比为 1:3.73的比例,加入提取溶剂,提取溶剂为60%乙醇水溶液,并用1mol/L盐酸将其酸碱度pH调为3,70℃下浸泡材料90分钟至材料充分吸胀;
步骤3.装柱
将充分吸胀的桦褐孔菌原料与提取溶剂一起转入层析柱中,室温下,用柱层析洗脱的方法将多酚从层析柱内的桦褐孔菌中洗脱出来;为达到高效率提取的目的,洗脱过程必须严格按照柱层析中物质洗脱的方法;层析柱中材料的高度应为柱直径的5倍,洗脱流速为1BV/小时,柱内液面必须始终高于材料;
步骤4.循环柱层析提取
将层析柱内流出的洗脱液以1个柱体积为单位进行收集,第1根柱的提取液经XAD-2大孔树脂柱吸附后流出的平液由于含有60%乙醇,直接用于第2根提取柱的提取,依次类推,第2根柱的提取液经XAD-2大孔树脂柱吸附后流出的平液由于含有60%乙醇,直接用于第3根提取柱的提取,实现多个层析柱循环提取;经检测经过循环柱层析提取,桦褐孔菌多酚提取率可达85%。循环柱层析提取的流程图见图1.
步骤5.大孔树脂的预处理
先将XAD-2大孔树脂依次用95%酒精、0.1mol/L盐酸、0.1mol/L NaOH溶液分别浸泡12小时后,再装入层析柱,并使层析柱中树脂的高度为柱直径的10 倍,用蒸馏水以1.5BV/小时的流速充分洗涤5BV;
步骤6.大孔树脂柱层析吸附及平液用于下一根提取柱提取
将步骤4的提取液以1.5BV/小时的流速加入经步骤5预处理的大孔树脂柱,加样体积不超过大孔树脂柱体积的4.5倍,加样时柱内的流出液以柱体积为单位分开收集,多酚被吸附后,大孔树脂柱流出液主要为60%乙醇,直接用于下一根提取柱中桦褐孔菌多酚的提取;
步骤7.大孔树脂柱蒸馏水洗除杂
待样品完全流入柱内后,用蒸馏水以2BV/小时流速洗涤大孔树脂柱3BV,洗去杂质,不损失多酚;
步骤8.洗脱
用3BV的80%的乙醇从大孔树脂柱中洗脱多酚,洗脱流速1.5BV/小时,收集洗脱液;
步骤9.静置除杂
将步骤8收集好的多酚洗脱液密封,避光在4℃低温冷藏箱中放置12小时后减压过滤除去沉淀;洗脱液中乙醇浓度为80%,因此无需再调整乙醇浓度,直接低温静置即可进一步除去了洗脱液中残留的多糖及蛋白杂质。
步骤10.减压浓缩
将步骤9除杂得到的多酚滤液于40℃下减压浓缩至除去乙醇;
步骤11.干燥
将步骤10减压浓缩后的多酚浓缩液于-20℃预冷2小时后,再经-80℃真空冷冻干燥12小时得黄色粉末,即为桦褐孔菌多酚。采用超低温冷冻干燥方法,多酚降解率较低,仅为4.18%。
实施例2
如图1所示,高效提取及纯化桦褐孔菌多酚的方法,包含如下步骤:
步骤1.原料预处理
选择成熟干燥桦褐孔菌,清水冲洗表面杂质后于45℃下干燥至含水量为 3%,机械剪切粉碎至40目;
步骤2.原料浸泡
将预处理的干燥桦褐孔菌原料按桦褐孔菌原料与提取溶剂的质量比为 1:3.73的比例,加入提取溶剂,提取溶剂为60%乙醇水溶液,并用1mol/L盐酸将其酸碱度pH调为3,70℃下浸泡材料90分钟至材料充分吸胀;
步骤3.装柱
将充分吸胀的桦褐孔菌原料与提取溶剂一起转入容器中,室温下,用柱层析洗脱的方法将多酚从层析柱内的桦褐孔菌中洗脱出来;为达到高效率提取的目的,洗脱过程必须严格按照柱层析中物质洗脱的方法;层析柱中材料的高度应为柱直径的5倍,洗脱流速为1BV/小时,柱内液面必须始终高于材料;
步骤4.循环柱层析提取
将层析柱内流出的洗脱液以1个柱体积为单位进行收集,第1根柱的提取液经XAD-2大孔树脂柱吸附后流出的平液由于含有60%乙醇,直接用于第2根提取柱的提取,依次类推,第2根柱的提取液经XAD-2大孔树脂柱吸附后流出的平液由于含有60%乙醇,直接用于第3根提取柱的提取,实现多个层析柱循环提取;经检测经过循环柱层析提取,桦褐孔菌多酚提取率可达85%。循环柱层析提取的流程图见图1.
步骤5.大孔树脂的预处理
先将XAD-2大孔树脂依次用95%酒精、0.1mol/L盐酸、0.1mol/L NaOH溶液分别浸泡12小时后,再装入层析柱,并使层析柱中树脂的高度为柱直径的12 倍,用蒸馏水以1.5BV/小时的流速充分洗涤5BV;
步骤6.大孔树脂柱层析吸附及平液用于下一根提取柱提取
将步骤4的提取液以1.5BV/小时的流速加入再生后的大孔树脂柱,加样体积为大孔树脂柱体积的4倍量,加样时柱内的流出液以柱体积为单位分开收集,多酚被吸附后,大孔树脂柱流出液主要为60%乙醇,直接用于下一根提取柱中桦褐孔菌多酚的提取;
步骤7.大孔树脂柱蒸馏水洗除杂
待样品完全流入柱内后,用蒸馏水以2BV/小时流速洗涤大孔树脂柱3BV,洗去杂质,不损失多酚;
步骤8.洗脱
用3BV的浓度为80%的乙醇从大孔树脂柱中洗脱多酚,洗脱流速1.5BV/小时,收集洗脱液;
步骤9.静置除杂
将步骤8收集好的多酚洗脱液密封,避光在4℃低温冷藏箱中放置12小时后减压离心过滤除去沉淀;洗脱液中乙醇浓度为80%,因此无需再调整乙醇浓度,直接低温静置即可进一步除去了洗脱液中残留的多糖及蛋白杂质。
步骤10.减压浓缩
将步骤9除杂得到的多酚离心上清液于42℃下减压浓缩至除去乙醇;
步骤11.干燥
将步骤10减压浓缩后的多酚浓缩液以进风口温度为145℃,进料流速10mL/ 分钟的条件喷雾干燥得黄色粉末,即为桦褐孔菌多酚。
实施例3
如图1所示,高效提取及纯化桦褐孔菌多酚的方法,包含如下步骤:
步骤1.原料预处理
选择成熟干燥桦褐孔菌,清水冲洗表面杂质后于45℃下干燥至含水量为5%,机械剪切粉碎至40目;
步骤2.原料浸泡
将预处理的干燥桦褐孔菌原料按桦褐孔菌原料与提取溶剂的质量比为 1:3.73的比例,加入提取溶剂,提取溶剂为60%乙醇水溶液,并用1mol/L盐酸将其酸碱度pH调为3,70℃下浸泡材料90分钟至材料充分吸胀;
步骤3.装柱
将充分吸胀的桦褐孔菌原料与提取溶剂一起转入层析柱中,室温下,用柱层析洗脱的方法将多酚从层析柱内的桦褐孔菌中洗脱出来;为达到高效率提取的目的,洗脱过程必须严格按照柱层析中物质洗脱的方法;层析柱中材料的高度应为柱直径的5倍,洗脱流速为1BV/小时,柱内液面必须始终高于材料;
步骤4.循环柱层析提取
将层析柱内流出的洗脱液以1个柱体积为单位进行收集,第1根柱的提取液经XAD-2大孔树脂柱吸附后流出的平液由于含有60%乙醇,直接用于第2根提取柱的提取,依次类推,第2根柱的提取液经XAD-2大孔树脂柱吸附后流出的平液由于含有60%乙醇,直接用于第3根提取柱的提取,实现多个层析柱循环提取;经检测经过循环柱层析提取,桦褐孔菌多酚提取率可达85%。循环柱层析提取的流程图见图1。
步骤5.大孔树脂的预处理
先将XAD-2大孔树脂依次用95%酒精、0.1mol/L盐酸、0.1mol/L NaOH溶液分别浸泡12小时后,再装入层析柱,并使层析柱中树脂的高度为柱直径的15 倍,用蒸馏水以1.5BV/小时的流速充分洗涤5BV;
步骤6.大孔树脂柱层析吸附及平液用于下一根提取柱提取
将步骤4的提取液以1.5BV/小时的流速加入经步骤5预处理的大孔树脂柱,加样体积不超过大孔树脂柱体积的4.5倍,加样时柱内的流出液以柱体积为单位分开收集,多酚被吸附后,大孔树脂柱流出液主要为60%乙醇,直接用于下一根提取柱中桦褐孔菌多酚的提取;
步骤7.大孔树脂柱蒸馏水洗除杂
待样品完全流入柱内后,用蒸馏水以2BV/小时流速洗涤大孔树脂柱3BV,洗去杂质,不损失多酚;
步骤8.洗脱
用3BV的浓度为80%的乙醇从大孔树脂柱中洗脱多酚,洗脱流速1.5BV/小时,收集洗脱液;
步骤9.静置除杂
将步骤8收集好的多酚洗脱液密封,避光在4℃低温冷藏箱中放置12小时后减压过滤除去沉淀;洗脱液中乙醇浓度为80%,因此无需再调整乙醇浓度,直接低温静置即可进一步除去了洗脱液中残留的多糖及蛋白杂质。
步骤10.减压浓缩
将步骤9除杂得到的多酚滤液于45℃下减压浓缩至除去乙醇;
步骤11.干燥
将步骤10减压浓缩后的多酚浓缩液于-20℃预冷2小时后,再经-80℃真空冷冻干燥12小时得黄色粉末,即为桦褐孔菌多酚。采用超低温冷冻干燥方法,多酚降解率较低。
经检测实施例1、实施例2和实施例3中两种干燥途径下制得的多酚粉末纯度均可达60%或以上,含水量仅为3%~4.5%。
结合图2-7对不同提取溶剂、不同乙醇体积分数、不同pH提取液、不同提取温度、径高比1:5对桦褐孔菌多酚柱层析提取率的影响和桦褐孔菌多酚循环柱层析进行分析。
图2为不同提取溶剂对桦褐孔菌多酚提取率的影响。从图2可知,甲醇、乙醇的提取效率相近,但甲醇有毒,所以采用乙醇作为提取溶剂。
图3为不同乙醇体积分数对桦褐孔菌多酚提取率的影响。从图3可知,随着乙醇体积分数的增大,溶剂对桦褐孔菌多酚的提取呈先增大后减小的趋势,乙醇体积分数为60%时,提取率最高。
图4为不同pH提取液对桦褐孔菌多酚提取率的影响。从图4可知,采用 50%乙醇作为提取溶剂时,溶剂的pH对桦褐孔菌多酚的提取效果影响显著,以 pH为3,60%乙醇水溶液作为提取液时提取效率最高。综上所述,确定桦褐孔菌多酚的最佳提取溶剂为pH为3,60%乙醇水溶液。
图5为不同提取温度对桦褐孔菌多酚提取率的影响。从图5可知,采用pH 为3、60%乙醇在不同温度下提取,当提取温度为70℃时,提取率最高。
图6为在70℃下,采用pH为3、60%乙醇提取时,提取材料对提取溶剂的吸附动力学曲线及多酚提取动力学曲线。从图6可知,在浸泡提取时间达到90 分钟时,溶剂吸附及多酚的溶出浓度达到平衡,每g提取材料可吸附3.73毫升 pH3、60%乙醇。因此后续柱层析提取时选择材料浸泡时间为90分钟,浸泡料液比为1:3.73。
图7为径高比1:5对桦褐孔菌多酚柱层析提取率的影响。从图7可知,提取液总多酚浓度在洗脱至20mL时达到最高为1.49mg/mL,洗脱至50毫升时接近洗脱完全。
图8为桦褐孔菌多酚循环柱层析提取。从图8可知,总多酚最高浓度始终稳定在为1.3mg/mL,极大的方便了工业上的应用。
Claims (9)
1.高效提取及纯化桦褐孔菌多酚的方法,其特征在于:包括如下步骤:
步骤1.原料预处理
选取桦褐孔菌,清水冲洗表面杂质后,干燥至含水量为2%~5%,机械剪切粉碎;
步骤2.原料浸泡
将预处理的桦褐孔菌原料中加入提取溶剂,于70℃下浸泡至材料充分吸胀;其中,所述加入的提取溶剂的量为:干燥桦褐孔菌原料与提取溶剂的质量比为1:3.73,提取溶剂为60%的乙醇水溶液,并用1mol/L盐酸将其酸碱度pH调为3,浸泡时间为90分钟;
步骤3.装柱
将充分吸胀的桦褐孔菌原料与提取溶剂一起转入层析柱中,室温下,用柱层析洗脱的方法将多酚从层析柱内的桦褐孔菌中洗脱出来;
步骤4.循环柱层析提取
将层析柱内流出的洗脱液以1个柱体积为单位进行收集,第1根柱的提取液经大孔树脂柱吸附后流出的平液直接用于第2根提取柱的提取,依次类推,实现多个层析柱循环提取;
步骤5.大孔树脂的预处理
先将大孔树脂依次用95%酒精、0.1mol/L盐酸、0.1mol/L NaOH溶液分别浸泡12小时后,再装入层析柱,并使层析柱中树脂的高度为柱直径的10~15倍,用蒸馏水洗涤;
步骤6.大孔树脂柱层析吸附及平液用于下一根提取柱提取
将步骤4的提取液加入经步骤5预处理的大孔树脂柱,或将步骤4的提取液加入再生后的大孔树脂柱,加样时柱内的流出液以柱体积为单位分开收集,多酚被吸附后,大孔树脂柱流出液直接用于下一根提取柱中桦褐孔菌多酚的提取;
步骤7.大孔树脂柱蒸馏水洗除杂
待样品完全流入柱内后,用蒸馏水洗涤大孔树脂柱,洗去杂质,不损失多酚;
步骤8.洗脱
用80%的乙醇从大孔树脂柱中洗脱多酚,收集洗脱液;
步骤9.静置除杂
将步骤8收集好的多酚洗脱液密封,避光在低温冷藏箱中放置12小时后减压过滤或离心过滤除去沉淀;
步骤10.减压浓缩
将步骤9除杂得到的多酚滤液或离心上清液于40~45℃下减压浓缩至除去乙醇;
步骤11.干燥
将步骤10减压浓缩后的多酚浓缩液于-20℃预冷2小时后,再经-80℃真空冷冻干燥12小时得黄色粉末,即为桦褐孔菌多酚。
2.根据权利要求1所述的高效提取及纯化桦褐孔菌多酚的方法,其特征在于:所述步骤1原料预处理中,选取桦褐孔菌,清水冲洗表面杂质后,干燥至含水量为2%~5%,机械剪切粉碎;其中,所述桦褐孔菌为成熟干燥的桦褐孔菌,干燥温度为45℃,机械剪切粉碎至40目。
3.根据权利要求2所述的高效提取及纯化桦褐孔菌多酚的方法,其特征在于:所述步骤3装柱中,将充分吸胀的桦褐孔菌原料与提取溶剂一起转入层析柱或容器中,室温下,用柱层析洗脱的方法将多酚从层析柱内的桦褐孔菌中洗脱出来;其中,所述层析柱中材料的高度应为柱直径的5倍,洗脱流速为1BV/小时,柱内液面始终高于材料。
4.根据权利要求 3所述的高效提取及纯化桦褐孔菌多酚的方法,其特征在于:所述步骤5大孔树脂的预处理中,所述用蒸馏水洗涤具体为用蒸馏水以1.5BV/小时的流速洗涤5BV。
5.根据权利要求 4所述的高效提取及纯化桦褐孔菌多酚的方法,其特征在于:所述步骤6大孔树脂柱层析吸附及平液用于下一根提取柱提取中,将步骤4的提取液加入经步骤5预处理的大孔树脂柱,或将步骤4的提取液加入再生后的大孔树脂柱,加样时柱内的流出液以柱体积为单位分开收集,多酚被吸附后,大孔树脂柱流出液直接用于下一根提取柱中桦褐孔菌多酚的提取;其中,提取液加入的流速为1.5BV/小时,加样体积不超过大孔树脂柱体积的4.5倍。
6.根据权利要求 5所述的高效提取及纯化桦褐孔菌多酚的方法,其特征在于:所述步骤7大孔树脂柱蒸馏水洗除杂中,待样品完全流入柱内后,用蒸馏水洗涤大孔树脂柱,具体为用蒸馏水以2BV/小时流速洗涤树脂柱3BV,洗去杂质,不损失多酚。
7.根据权利要求 6所述的高效提取及纯化桦褐孔菌多酚的方法,其特征在于:所述步骤8洗脱中,用80%的乙醇从大孔树脂柱中洗脱多酚,收集洗脱液;具体为用3BV的80%的乙醇以1.5BV/小时的流速从大孔树脂柱中洗脱多酚,收集洗脱液。
8.根据权利要求 7所述的高效提取及纯化桦褐孔菌多酚的方法,其特征在于:所述步骤9静置除杂中,将步骤8收集好的多酚洗脱液密封,避光在低温冷藏箱中放置12小时后减压过滤或离心过滤除去沉淀;其中冷藏箱的温度设置为4℃。
9.根据权利要求 8所述的高效提取及纯化桦褐孔菌多酚的方法,其特征在于:所述步骤11干燥中,还可以采用喷雾干燥的方法进行干燥,具体是将步骤10减压浓缩后的浓缩液以进风口温度为145℃,进料流速10mL/分钟的条件喷雾干燥得黄色粉末,即为桦褐孔菌多酚。
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