CN106258954B - 一种猩红瓶子草的组培快繁方法 - Google Patents

一种猩红瓶子草的组培快繁方法 Download PDF

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    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/008—Methods for regeneration to complete plants

Abstract

本发明属于植物组织培养领域，具体涉及一种猩红瓶子草的组培快繁方法,包括如下步骤：取健壮母株带顶芽的茎段为外植体，分别进行①外植体用0.1%升汞消毒6～8min，②将消毒后的顶芽接入添加了6‑BA、NAA的诱导与分化培养基中培养，③愈伤或不定芽团块接入到添加了6‑BA、BR、PP333与NAA的增殖培养基中，④叶片6～15片、叶宽≥2mm的叶片≥5片且株高≥40mm的芽团接入添加了活性炭的生根培养基中。本发明提供的一种猩红瓶子草组培快繁方法，可以在短时间内获得大量无性繁殖的猩红瓶子草组培苗。

Description

一种猩红瓶子草的组培快繁方法
技术领域
本发明属于植物组织培养领域，具体涉及一种猩红瓶子草的组培快繁方法。
背景技术
猩红瓶子草为瓶子草科瓶子草属多年生草本食虫植物，为园艺杂交种。猩红瓶子草外形奇美，叶子成筒状，直立，有棱角，叶筒口及筒盖上有猩红网纹。猩红瓶子草可诱捕昆虫，其叶筒口小，内壁可分泌蜜汁与消化液，引诱并捕食昆虫。是当今世界最受欢迎的趣味植物之一，具有很高的观赏价值和经济价值。
目前，瓶子草的繁殖的方法主要有分株、播种和组培。
分株繁殖，春季脱盆后，除去根际基质，用利刀将根茎切成3~4丛，每丛至少具一小瓶状叶。栽培基质采用细河沙、泥炭土或腐叶土、苔藓或活水苔混合物。
播种繁殖，瓶子草在自然状态下开花少，结果率低，需人工授粉提高结果率。种子采收后，需经“湿冷积层”的阶段才会发芽。而从种子到成熟植株约需3～5年。
组培繁殖，难度较大。目前，国内外相关的研究报道很少，主要以嫩芽茎尖、叶片进行愈伤组织诱导，然后再诱导愈伤组织分化不定芽，再由不定芽形成完整植株。如东莞市生物技术研发所以白叶瓶子草的娕芽茎尖为外植体，经消毒、愈伤与不定芽分化诱导、增殖、生根，形成完整植株，目前已规模化生产。华南农业大学以瓶子草单芽及叶片为外体值，经消毒、愈伤与不定芽分化诱导、增殖、生根，形成完整植株，但仍处于科研阶段。
发明内容
本发明的目的在于提供一种猩红瓶子草的组培快繁方法，通过对猩红瓶子草茎尖及茎段的诱导，获得大量的猩红瓶子草再生植株。
本发明提供一种猩红瓶子草组培快繁的方法，包括如下步骤：采集猩红瓶子草带顶芽的茎段为外植体，依次进行①外植体消毒，②愈伤组织诱导与不定芽分化，③继代增殖，④不定芽生根，获得猩红瓶子草再生植株。
所述采集猩红瓶子草带顶芽的茎段，是在控水10～15d后采集，要求母株健壮。
所述①外植体消毒，是以带顶芽的茎段为外植体，以0.1%升汞为消毒剂，消毒6～8min，之后无菌水漂洗2～3次。
所述②愈伤组织诱导与不定芽分化，是将消毒后带顶芽的茎段接入诱导与分化化培养基中；1个茎段/杯，26±1℃，300~1800lux培养，光照12h/d。顶芽培养18d后开始萌动，培养27d后，顶芽抽长，茎段长出新芽/叶。
所述诱导与分化培养基是以MS改培养基为基础，含有1～3mg/L 6-BA(6-苄基氨基嘌呤，Benzylaminmopurine)、0.01~0.1mg/L NAA（α-萘乙酸，1-Naphthaleneacetic acid）,30g/L蔗糖, 5.5g /L琼酯，pH6.0。
所述的MS改培养基，其特征在于：硝酸钾、硝酸氨、硫酸镁、硫酸锰、硫酸锌、硫酸铜、磷酸二氢钾、钼酸钠、硼酸用量减半。
所述③继代增殖，切下直径6～10mm的愈伤团块或2～3个芽的不定芽团接入增殖培养中，10团/杯，26±1℃，1500~3000lux培养，光照12h/d。增殖培养30d后，愈伤或不定芽团块增殖率≥4。
所述增殖培养基是以MS改培养基为基础，含有1~3mg/L的6-BA(6-苄基氨基嘌呤，Benzylaminmopurine)、0.01~0.1mg/L BR（芸苔素内酯，Brassinolide）、0.01～0.1PP333（多效唑，Paclobutrazol）、0.01~0.1mg/L NAA（α-萘乙酸，1-Naphthaleneacetic acid），30g/L蔗糖, 6.5g /L琼酯，pH6.0。
所述④不定芽生根，切下叶片6～15片、叶宽≥2mm的叶片≥5片且株高≥40mm的芽团接入生根培养基中。60团/杯，21±1℃，2500~3000lux培养，光照12h/d。
所述生根培养基是以MS改培养基为基础，含有1g/L AC(活性炭，Acticarbon) ，30g/L蔗糖, 7g /L琼酯，pH6.0。培养1周后，即可炼苗移栽。
本发明的创新之处是公开了猩红瓶子草顶芽及茎段愈伤诱导、不定芽分化、增殖、生根的培养基配方及其规模化组培快繁的一种方法。本发明引入了BR，提高了猩红瓶子草的增殖系数；引入了PP333，提高了苗的粗壮度，目前，国内外尚无相关研究报道。
本发明有利于规模化繁殖优良趣味食虫植物瓶子草种苗，满足人们提高生活质量对瓶子草盆花的要求，丰富家庭、办公场所的趣味植物景观。
具体实施方式
一种猩红瓶子草组培快繁方法，该方法包括以下步骤。
实施例1：
①选取外植体：选取健壮无病虫害的猩红瓶子草为母株，取其带顶芽的茎段为外植体，去除叶片与外层苞片，备用。
②外植体消毒：在超净工作台上，将带顶芽的茎段装入无菌空瓶，以0.1%升汞为消毒剂，消毒8min，之后无菌水漂洗2次。无菌率81.1%。
③愈伤组织诱导与不定芽分化：将消毒后的带顶芽茎段接入诱导与分化培养基中； 1个茎段/杯，26±1℃，300~1800lux培养，光照12h/d，1个月转代1次。诱导分化培养基：MS改+2.5mg/L 6-BA+0.05mg/LNAA+30g/L蔗糖+5.5g /L琼酯，pH6.0。顶芽培养18d后开始萌动，培养27d后，顶芽抽长，茎段长出新芽/叶。
④继代增殖：切下直径6～10mm的愈伤团块或2～3个芽的不定芽团接入增殖培养中，10团/杯，26±1℃，1500~3000lux培养，光照12h/d。增殖培养30d后，愈伤或不定芽团块增殖率≥4。增殖培养基：MS改+2.5mg/L 6-BA+0.06mg/L BR+0.06mg/LPP333 +0.08mg/L NAA+30g/L蔗糖+6.5g /L琼酯，pH6.0。
⑤不定芽生根：切下叶片6～15片、叶宽≥2mm的叶片≥5片且株高≥40mm的芽团接入生根培养基中。60团/杯，21±1℃，2500~3000lux培养，光照12h/d。
生根培养基：MS改+0.1g/L AC+30g/L蔗糖+7.0g /L琼酯，pH6.0。培养7d后，即可炼苗移栽。
实施例2：
①选取外植体：选取健壮无病虫害的猩红瓶子草为母株，取其带顶芽的茎段为外植体，去除叶片与外层苞片，备用。
②外植体消毒：在超净工作台上，将带顶芽的茎段装入无菌空瓶，以0.1%升汞为消毒剂，消毒7min，之后无菌水漂洗3次。无菌率82.3%。
③愈伤组织诱导与不定芽分化：将消毒后的带顶芽茎段接入诱导与分化培养基中； 1个茎段/杯，26±1℃，300~1800lux培养，光照12h/d，1个月转代1次。诱导分化培养基：MS改+3mg/L 6-BA+0.1mg/LNAA+30g/L蔗糖+5.5g /L琼酯，pH6.0。顶芽培养20d后开始萌动，培养30d后，顶芽抽长，茎段长出新芽/叶。
④继代增殖：切下直径6～10mm的愈伤团块或2～3个芽的不定芽团接入增殖培养中，10团/杯，26±1℃，1500~3000lux培养，光照12h/d。增殖培养30d后，愈伤或不定芽团块增殖率≥4。增殖培养基：MS改+3mg/L 6-BA+0.1mg/L BR+0.03mg/LPP333+0.1mg/L NAA+30g/L蔗糖+6.5g /L琼酯，pH6.0。
⑤不定芽生根：切下叶片6～15片、叶宽≥2mm的叶片≥5片且株高≥40mm的芽团接入生根培养基中。50团/杯，21±1℃，1500~3000lux培养，光照12h/d。
生根培养基：MS改+0.1g/L AC+30g/L蔗糖+7.0g /L琼酯，pH6.0。培养7d后，即可炼苗移栽。
上述实施例用来解释说明本发明，而不是对本发明进行限制。本发明的保护范围由所附的权利要求来限定。

Claims (2)

1.一种猩红瓶子草的组培快繁方法，包括如下步骤：
取健壮猩红瓶子草植株带项芽的茎段为外植体，依次进行①外植体消毒，②愈伤组织诱导与不定芽分化，③继代增殖，④不定芽生根；
所述②愈伤组织诱导与不定芽分化，将消毒后的带顶芽茎段接入诱导分化培养基中，26±1℃，300～1800lux培养，光照12h/d；顶芽培养18d后开始萌动，培养27d后，顶芽抽长，茎段长出新芽/叶；
所述诱导与分化培养基是以MS改培养基为基础，含有1～3mg/L 6-BA、0.01～0.1mg/LNAA,30g/L蔗糖,5.5g/L琼酯，pH6.0；
所述③继代增殖，切下直径6～10mm的愈伤团块或2～3个芽的不定芽团接入增殖培养中，10团/杯，26±1℃，1500～3000lux培养，光照12h/d；增殖培养30d后，愈伤或不定芽团块增殖率≥4；
所述增殖培养基是以所述MS改培养基为基础，含有1～3mg/L的6-BA、0.01～0.1mg/LBR、0.01～0.1PP333、0.01～0.1mg/L NAA，30g/L蔗糖,6.5g/L琼酯，pH6.0；
所述④不定芽生根，切下叶片6～15片、叶宽≥2mm的叶片≥5片且株高≥40mm的芽团接入生根培养基中；60团/杯，21±1℃，2500～3000lux培养，光照12h/d；
所述生根培养基是以MS改培养基为基础，含有1g/L AC，30g/L蔗糖，7g/L琼酯，pH6.0；培养1周后，炼苗移栽；
所述MS改培养基，是将公知的MS培养基中硝酸钾、硝酸氨、硫酸镁、硫酸锰、硫酸锌、硫酸铜、磷酸二氢钾、钼酸钠、硼酸的用量减半。
2.根据权利要求1所述的一种猩红瓶子草的组培快繁方法，其特征在于：所述①外植体消毒，以带顶芽的茎段为外植体，以0.1％升汞为消毒剂，消毒6～8min，之后无菌水漂洗2～3次。
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