CN106138174A - 防治膀胱癌的药物组合物 - Google Patents

防治膀胱癌的药物组合物 Download PDF

Info

Publication number
CN106138174A
CN106138174A CN201610501342.0A CN201610501342A CN106138174A CN 106138174 A CN106138174 A CN 106138174A CN 201610501342 A CN201610501342 A CN 201610501342A CN 106138174 A CN106138174 A CN 106138174A
Authority
CN
China
Prior art keywords
weight portion
pharmaceutical composition
ethanol
bladder cancer
weight
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
CN201610501342.0A
Other languages
English (en)
Inventor
不公告发明人
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Jinan Xingyi Medical Technology Co Ltd
Original Assignee
Jinan Xingyi Medical Technology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Jinan Xingyi Medical Technology Co Ltd filed Critical Jinan Xingyi Medical Technology Co Ltd
Priority to CN201610501342.0A priority Critical patent/CN106138174A/zh
Publication of CN106138174A publication Critical patent/CN106138174A/zh
Withdrawn legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/365—Lactones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/56—Materials from animals other than mammals
    • A61K35/57—Birds; Materials from birds, e.g. eggs, feathers, egg white, egg yolk or endothelium corneum gigeriae galli
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/48—Fabaceae or Leguminosae (Pea or Legume family); Caesalpiniaceae; Mimosaceae; Papilionaceae
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/30—Extraction of the material
    • A61K2236/33—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones
    • A61K2236/333—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones using mixed solvents, e.g. 70% EtOH
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/30—Extraction of the material
    • A61K2236/39—Complex extraction schemes, e.g. fractionation or repeated extraction steps
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/50—Methods involving additional extraction steps
    • A61K2236/51—Concentration or drying of the extract, e.g. Lyophilisation, freeze-drying or spray-drying
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/50—Methods involving additional extraction steps
    • A61K2236/55—Liquid-liquid separation; Phase separation

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

本发明公开了一种防治膀胱癌的药物组合物及其制备方法，本发明药物组合物是以藏锦鸡儿、透茎冷水花、β‑香树脂醇乙酸酯、旋覆花次内酯、鹅蛋壳为原料药，配比而成，可按常规制剂工艺制成各种剂型，防治膀胱癌疗效显著。

Description

防治膀胱癌的药物组合物
技术领域
本发明属于中药技术领域，尤其涉及一种防治膀胱癌的药物组合物及其制备方法。
背景技术
膀胱癌是泌尿生殖系统中最常见的恶性肿瘤，其发病率居男性肿瘤的第4位，女性肿瘤的第9位。非肌层浸润型膀胱癌约占75%-85%，预后较好，但仍有70%的复发率，1%-45%可在数年内进展为肌浸润型的膀胱癌，目前多采用经尿道膀胱肿瘤切除术，术后膀胱内灌注化疗药物及免疫抑制剂等以起到防止复发、延迟进展和消灭残余肿瘤和原位癌的目的。化疗药物失效、病人对化疗药物出现的不良反应及化疗药物对正常细胞的影响是制约其临床应用发展的原因。免疫抑制剂如白细胞介素-2、干扰素等也因不良反应较多，对部分病人无效、价格因素等原因也未能得到广泛应用。因此，不断寻找理想的抗膀胱癌药物意义重大。
藏锦鸡儿：本品为豆科植物鬼箭锦鸡儿Caragana jubata(pall.)Poir. 及昌都锦鸡儿Caragana changduensis fiauf的木部心材。砍取褐红色木部，切断，阴干。【性味】涩、寒。【功能与主治】破血，化瘀，降压。用于高山多血症，高血压症及月经不调。【性状】本品为外表栓皮多已除净的心材，呈圆柱形或不规则块片,略弯曲，长20～40cm,直径可达5cm。表面有刀斧痕，平滑，有纵向弯曲的细纵或网状纹理和小枝的疤痕，有的显黄白色木纹。茎枝残基处可见黄白色的内皮及深棕色木栓层。质坚硬而致密，难折断。切断面可见年轮。无臭,味淡微辣。收载于卫生部颁藏药标准（第一册），标准编号：WS3-BC-0134-95。
透茎冷水花：本品为荨麻科冷水花属植物透茎冷水花Pilea pumila(L.)A.Cray［Ur-tica pumila L.；P.mongolica Wedd.］的全草或根茎。夏、秋季采收，洗净，晒干。【性味】甘；性寒。【功能主治】清热；利尿；解毒。主尿路感染；急性肾炎；子宫内膜炎；子宫脱垂；赤白带下；跌打损伤；痈肿初起；虫蛇咬伤。【原形态】一年生草本，高40-100cm。茎直立，常分枝，淡绿色，无毛，肉质，有时呈透明状。叶对生；叶柄长1-4cm，相对叶柄不等长；托叶小，早落；叶片菱状卵形或宽卵形，长2-10cm，宽1-7cm，先端渐尖，基部宽楔形，两面均有线状钟乳体，边缘于基部以上有粗锯齿；基出脉3条。花雌雄同株、同序，有时异株；聚伞花序蝎尾状，有时呈簇生状，雄花被片2，舟形，背面近先端有短角，雄蕊2，与花被对生；雌花被片3，狭披针形，雌蕊1。瘦果扁卵形，褐色，光滑。花期8-10月，果期9-11月。收载于中药大辞典。
鹅蛋壳：本品为为鸭科雁属动物家鹅Anser cygnoides domestica Brisson.的卵壳。食用鹅蛋时，收集蛋壳，洗净，晒干或烘干。【性味】甘；淡；平。【归经】肺经。【功能主治】拔毒排脓；理气止痛。主痈疽脓成难溃；疝气；难产。【性状】多呈现碎片状，外表面白色稍粗糙，易破裂；内表面光滑，质脆易碎。气微，味淡。收载于中药大辞典。
β-香树脂醇乙酸酯（β-Amyrin acetate）：CAS号1616-93-9，分子式C32H52O2，分子量468.76。【成分来源】薛荔Ficus pumila，大蓟Il Cirsium japonicum，地梢瓜Cynanchumthesioides，茯苓 Poria cocos，灰苞篙Artemisia roxbugiana，芦竹根Arundo donax，梧桐叶Firmiana simplex，香加皮Periploca seplum。
旋覆花次内酯（Inulicin）：CAS号33627-41-7，分子式C17H24O5，分子量308.37。【药理作用】抗溃疡，中枢神经兴奋剂 。【成分来源】菊科植物旋覆花，线叶旋覆花，大花旋覆花的头状花序。
2个原料药化学结构：
旋覆花次内酯（Inulicin） β-香树脂醇乙酸酯（β-Amyrin acetate）。
发明内容
本发明的目的是克服背景技术的不足，提供一种有效防治膀胱癌的药物组合物及其制备方法。
本发明是采用如下技术方案实现的：
制成该防治膀胱癌的药物组合物的原料药的组成和重量份为：
藏锦鸡儿520-530重量份 透茎冷水花512-520重量份 β-香树脂醇乙酸酯24-28重量份旋覆花次内酯20-26重量份 鹅蛋壳540-550重量份。
优选的用于防治膀胱癌的药物组合物，是由如下重量份的原料药组成：
藏锦鸡儿525重量份 透茎冷水花517重量份 β-香树脂醇乙酸酯26重量份 旋覆花次内酯23重量份 鹅蛋壳545重量份。
一种防治膀胱癌的药物组合物，其特征在于药物组合物可以采用制剂学的常规方法制备成片剂或胶囊剂或滴丸。
一种防治膀胱癌的药物组合物，其特征在于药物组合物与化学药或中药组成的防治膀胱癌药物。
一种防治膀胱癌的药物组合物的制备方法，其特征在于按如下步骤制备：
原料药的组成和重量份为：藏锦鸡儿520-530重量份 透茎冷水花512-520重量份 β-香树脂醇乙酸酯24-28重量份 旋覆花次内酯20-26重量份 鹅蛋壳540-550重量份；
制备方法：
（1）按原料药配比取藏锦鸡儿、透茎冷水花、β-香树脂醇乙酸酯、旋覆花次内酯、鹅蛋壳，混匀，用重量百分比浓度28%乙醇作为溶剂，34.5℃温浸提取，提取次数为13次，每次提取时间为22小时，每次溶剂用量为原料药总重量的55倍，滤过，得药渣A和提取液A，提取液A回收乙醇，浓缩至相对密度1.07，滤过，药液通过LKS02大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，再用重量百分比浓度37.5%乙醇溶液洗脱LKS02大孔吸附树脂柱，收集重量百分比浓度37.5%乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得提取物A；
（2）取步骤（1）药渣A，用重量百分比浓度61%乙醇作为溶剂，加热回流提取9次，每次提取时间为0.2小时，每次溶剂用量为药渣A重量的26倍，滤过，得药渣B和提取液B，提取液B回收乙醇，浓缩至相对密度1.12，滤过，药液通过D3520大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，再用重量百分比浓度74%乙醇溶液洗脱D3520大孔吸附树脂柱，收集重量百分比浓度74%乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得提取物B；
（3）将提取物A和提取物B混匀，即得药物组合物。
优选的一种防治膀胱癌的药物组合物的制备方法，其特征在于按如下步骤制备：
原料药的组成和重量份为：藏锦鸡儿525重量份 透茎冷水花517重量份 β-香树脂醇乙酸酯26重量份 旋覆花次内酯23重量份 鹅蛋壳545重量份；
制备方法：
（1）按原料药配比取藏锦鸡儿、透茎冷水花、β-香树脂醇乙酸酯、旋覆花次内酯、鹅蛋壳，混匀，用重量百分比浓度28%乙醇作为溶剂，34.5℃温浸提取，提取次数为13次，每次提取时间为22小时，每次溶剂用量为原料药总重量的55倍，滤过，得药渣A和提取液A，提取液A回收乙醇，浓缩至相对密度1.07，滤过，药液通过LKS02大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，再用重量百分比浓度37.5%乙醇溶液洗脱LKS02大孔吸附树脂柱，收集重量百分比浓度37.5%乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得提取物A；
（2）取步骤（1）药渣A，用重量百分比浓度61%乙醇作为溶剂，加热回流提取9次，每次提取时间为0.2小时，每次溶剂用量为药渣A重量的26倍，滤过，得药渣B和提取液B，提取液B回收乙醇，浓缩至相对密度1.12，滤过，药液通过D3520大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，再用重量百分比浓度74%乙醇溶液洗脱D3520大孔吸附树脂柱，收集重量百分比浓度74%乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得提取物B；
（3）将提取物A和提取物B混匀，即得药物组合物。
一种防治膀胱癌的药物组合物的制备方法，其特征在于药物组合物可以采用制剂学的常规方法制备成片剂或胶囊剂或滴丸。
一种防治膀胱癌的药物组合物的制备方法，其特征在于药物组合物与化学药或中药组成防治膀胱癌药物。
药物组合物防治膀胱癌疗效显著。
具体实施方式
实施例1：防治膀胱癌的药物组合物及其制备方法
防治膀胱癌的药物组合物的原料药的组成和重量份为：藏锦鸡儿525g 透茎冷水花517g β-香树脂醇乙酸酯26g 旋覆花次内酯23g 鹅蛋壳545g；
制备方法：
（1）按原料药配比取藏锦鸡儿、透茎冷水花、β-香树脂醇乙酸酯、旋覆花次内酯、鹅蛋壳，混匀，用重量百分比浓度28%乙醇作为溶剂，34.5℃温浸提取，提取次数为13次，每次提取时间为22小时，每次溶剂用量为原料药总重量的55倍，滤过，得药渣A和提取液A，提取液A回收乙醇，浓缩至相对密度1.07，滤过，药液通过LKS02大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，再用重量百分比浓度37.5%乙醇溶液洗脱LKS02大孔吸附树脂柱，收集重量百分比浓度37.5%乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得提取物A；
（2）取步骤（1）药渣A，用重量百分比浓度61%乙醇作为溶剂，加热回流提取9次，每次提取时间为0.2小时，每次溶剂用量为药渣A重量的26倍，滤过，得药渣B和提取液B，提取液B回收乙醇，浓缩至相对密度1.12，滤过，药液通过D3520大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，再用重量百分比浓度74%乙醇溶液洗脱D3520大孔吸附树脂柱，收集重量百分比浓度74%乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得提取物B；
（3）将提取物A和提取物B混匀，即得药物组合物。
实施例2：防治膀胱癌的药物组合物及其制备方法
防治膀胱癌的药物组合物的原料药的组成和重量份为：藏锦鸡儿520g 透茎冷水花520g β-香树脂醇乙酸酯24g 旋覆花次内酯26g 鹅蛋壳540g；
制备方法：
（1）按原料药配比取藏锦鸡儿、透茎冷水花、β-香树脂醇乙酸酯、旋覆花次内酯、鹅蛋壳，混匀，用重量百分比浓度28%乙醇作为溶剂，34.5℃温浸提取，提取次数为13次，每次提取时间为22小时，每次溶剂用量为原料药总重量的55倍，滤过，得药渣A和提取液A，提取液A回收乙醇，浓缩至相对密度1.07，滤过，药液通过LKS02大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，再用重量百分比浓度37.5%乙醇溶液洗脱LKS02大孔吸附树脂柱，收集重量百分比浓度37.5%乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得提取物A；
（2）取步骤（1）药渣A，用重量百分比浓度61%乙醇作为溶剂，加热回流提取9次，每次提取时间为0.2小时，每次溶剂用量为药渣A重量的26倍，滤过，得药渣B和提取液B，提取液B回收乙醇，浓缩至相对密度1.12，滤过，药液通过D3520大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，再用重量百分比浓度74%乙醇溶液洗脱D3520大孔吸附树脂柱，收集重量百分比浓度74%乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得提取物B；
（3）将提取物A和提取物B混匀，即得药物组合物。
实施例3：防治膀胱癌的药物组合物及其制备方法
防治膀胱癌的药物组合物的原料药的组成和重量份为：藏锦鸡儿530g 透茎冷水花512g β-香树脂醇乙酸酯28g 旋覆花次内酯20g 鹅蛋壳550g；
制备方法：
（1）按原料药配比取藏锦鸡儿、透茎冷水花、β-香树脂醇乙酸酯、旋覆花次内酯、鹅蛋壳，混匀，用重量百分比浓度28%乙醇作为溶剂，34.5℃温浸提取，提取次数为13次，每次提取时间为22小时，每次溶剂用量为原料药总重量的55倍，滤过，得药渣A和提取液A，提取液A回收乙醇，浓缩至相对密度1.07，滤过，药液通过LKS02大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，再用重量百分比浓度37.5%乙醇溶液洗脱LKS02大孔吸附树脂柱，收集重量百分比浓度37.5%乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得提取物A；
（2）取步骤（1）药渣A，用重量百分比浓度61%乙醇作为溶剂，加热回流提取9次，每次提取时间为0.2小时，每次溶剂用量为药渣A重量的26倍，滤过，得药渣B和提取液B，提取液B回收乙醇，浓缩至相对密度1.12，滤过，药液通过D3520大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，再用重量百分比浓度74%乙醇溶液洗脱D3520大孔吸附树脂柱，收集重量百分比浓度74%乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得提取物B；
（3）将提取物A和提取物B混匀，即得药物组合物。
实施例4：片剂的制备
取实施例1药物组合物135g，加入淀粉225g，混匀，制粒，干燥，加微晶纤维素125g，硬脂酸镁12g，混匀，压制成2000片， 即得药物组合物片剂。
实施例5：胶囊的制备
取实施例2药物组合物300g，加入淀粉400g，混匀，制粒，干燥，整粒，加入适量硬脂酸镁，混匀，装胶囊2000粒，即得药物组合物胶囊。
实施例6：滴丸的制备
称取聚乙二醇 6000 200g水浴(80℃)加热煮熔，加入实施例3药物组合物20g，充分搅拌均匀，以液体石蜡为冷却剂，置玻璃管（4*80cm）中，冷却温度为5℃，滴口内外径为7.0/2.0(mm/mm)，滴口距液面为2.6cm，滴速以每分58滴为最佳条件，用棉布吸干滴丸表面的冷凝剂，即得药物组合物滴丸。
实施例7：防治膀胱癌的药物组合物
防治膀胱癌的药物组合物的原料药的组成和重量份为：
透茎冷水花580重量份 旋覆花次内酯25重量份 鹅蛋壳360重量份。
实施例8：防治膀胱癌的药物组合物
防治膀胱癌的药物组合物的原料药的组成和重量份为：
β-香树脂醇乙酸酯40重量份 旋覆花次内酯12重量份 鹅蛋壳350重量份。
实施例9：防治膀胱癌的药物组合物
防治膀胱癌的药物组合物的原料药的组成和重量份为：
β-香树脂醇乙酸酯70重量份 旋覆花次内酯50重量份 鹅蛋壳650重量份。
实验例1：防治膀胱癌的试验研究
一、材料与方法
1. 细胞株
人膀胱癌细胞株T24来源于由云南省泌尿外科研究所细胞库。
2. 试剂
药物组合物（实施例1药物组合物 批号20120509）。丝裂霉素（分子量300.05，浙江海正药业股份有限公司），磷酸盐缓冲液（PBS，0.01mol/L pH7.4）、胰蛋白酶（0.25%）、RPMI1640、胎牛血清、胰蛋白酶购自美国GIBCO公司。兔抗单克隆抗体、人抗兔IgG购自美国Santa Cruz公司。
3. 实验动物
BALB/c裸小鼠，6-8周龄，雌雄不限，体质量16-21g，平均19g，购自北京维通利华公司，于昆明医科大学重点实验室SPF环境中饲养，控制温度20-22℃，湿度30%-35%。
4. 细胞培养
T24细胞使用含10%胎牛血清RPMI1640完全培养液，置于37℃、湿度95%、5%CO2细胞培养箱培养，BIU-87细胞呈单层贴壁生长。每天镜下观察细胞形态、细胞是否长满、培养液的颜色及透明度，待细胞生长汇合至80%左右传代，细胞冻存于-70℃冰箱或液氮罐保存。
5. MTT法检测药物组合物对T24细胞增殖的影响
胰酶消化对数期细胞，终止后离心收集，制成细胞悬液，按每孔4×103的数目接种到96孔平底细胞培养板，培养箱中培养24h后，加入前预先配好的含不同浓度的药物组合物的完全培养液（0、0.25、0.5、1、2、4、8、16μmol/L），之后将96孔板置于5%CO2，37℃细胞培养箱孵育24、48、72h。之后每孔加入10μL MTT溶液（5mg/mL，即0.5%MTT）继续培养4h后，每孔加入150μL二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，在酶联免疫检测仪OD 570nm处测量各孔的吸光值。细胞增殖抑制率（%）=[1-（用药组OD值-空白孔OD值）/（对照组OD值-空白孔OD值）]×100%。对照设置：设相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜为空白对照，丝裂霉素（MMC）为阳性对照药，阳性对照药MMC的终浓度梯度同样品，阴性对照为未用药组，实验重复3次。
6. 动物模型的建立
取对数生长期的细胞，以0.25%的胰酶消化液消化细胞后收集细胞悬液，800r/min，离心10min，吸出离心管中液体，加入0.9%氯化钠溶液，用吸管轻轻吹打，制成单细胞悬液，离心洗涤细胞1次，调整细胞浓度到1.5×107个/mL。消毒裸鼠右侧肩背部皮肤，每只动物皮下注射细胞悬液0.2mL。动物接种后置于无特定病原体（specific-pathogen free，SPF）环境下饲养。当皮下移植瘤生长到直径约6cm时，全部成瘤后随机分为4组：对照组：未予治疗，让肿瘤自然生长；生理盐水组：瘤体局部注射0.9%氯化钠溶液5mg/kg，1次/周；药物组合物组：瘤体局部注射药物组合物，5mg/kg，1次/周；丝裂霉素C对照组：瘤体局部注射丝裂霉素C，1.5mg/kg，1次/周，每组10只动物。根据公式V=a×b2/2计算肿瘤体积，其中a为瘤体长径，b为瘤体短径。按下列公式计算瘤重抑制率（%）=（1-给药组平均瘤重/对照组平均瘤重）×100%。观察记录不同组别荷瘤鼠60d内存活的只数，以时间（d）为横坐标，存活率（%）为纵坐标，绘制生存曲线。
7. 移植瘤标本
用10%甲醛固定，常规做成石蜡切片，HE染色（苏木素-伊红染色）及免疫组化染色后，用光学显微镜观察肿瘤的病理组织学特征。
8. 统计学方法
两样本间的比较采用t检验，定量测定结果以x±s表示，正态分布资料以F检验检测其方差齐性，经Kaplan-meier分析，得出生存率曲线，比较各组裸鼠平均生存时间。统计学处理通过SPSS 18.0统计软件完成。以P＜0.05为差异有统计学意义。
二、结果
1. 药物组合物抑制T24细胞的增殖
结果表明，浓度≥1μmol/L的药物组合物对人膀胱癌T24细胞的生长抑制率与未用药组相比具有统计学差异，并表现出明显的时间和浓度依赖性。药物组合物对T24细胞作用24、48、72h时的IC50值分别为：8.124、4.233、3.111μmol/L。
2. 皮下移植瘤生长曲线
结果表明，未用药对照组皮下移植瘤生长迅速，30d时肿瘤直径已达16mm左右，药物组合物在用药后2周后，肿瘤体积开始缩小，但是没见完全消失。药物组合物组肿瘤体积减小的趋势与MMC组相仿。与对照组和生理盐水组相比，有显著性差异（P<0.05）；与丝裂霉素组相比无显著性差异。
3. 平均瘤重和瘤重抑制率
荷人膀胱癌BALB/c裸鼠皮下移植瘤瘤重未治疗组高于药物组合物治疗组和MMC治疗组（P＜0.01），药物组合物治疗组与MMC治疗组相比无计学差异。
4. 各组裸鼠生存分析
未用药组平均生存时间为（32.5±1.12）d，生理盐水组为（33.2±0.98）d，药物组合物组的平均生存时间为（49.46±3.12）d，丝裂霉素组的平均生存时间为（49.41±3.35）d。未用药组和生理盐水组生存中位数时间为32d，药物组合物治疗组的生存中位数为45d，MMC治疗组的生存中位数时间为45d。使用药物组合物瘤内注射组裸鼠平均生存时间和生存中位数较对照组延长（P＜0.01），与丝裂霉素组相比未见显著差异。
5. 病理组织学检查
HE染色光镜下见肿瘤细胞呈长梭形、卵圆形，核大深染，核膜清晰，核浆比例增大，异型性明显，核分裂相易见，胞浆丰富，呈中度分化。药物组合物治疗后，可见广泛的细胞核浓缩，核碎裂，胞浆红染，部分区域呈现均质红染。免疫组化见cytochrome c表达显著增加。
结果表明，药物组合物在体外、体内的实验中均见到其能抑制膀胱癌细胞的生长。药物组合物可能是通过线粒体凋亡途径引起细胞的凋亡，从而发挥抗膀胱癌的作用。

Claims (8)

1.一种防治膀胱癌的药物组合物，其特征在于制成该药物组合物的原料药的组成和重量份为：
藏锦鸡儿520-530重量份 透茎冷水花512-520重量份 β-香树脂醇乙酸酯24-28重量份旋覆花次内酯20-26重量份 鹅蛋壳540-550重量份。
2.根据权利要求1所述一种防治膀胱癌的药物组合物，其特征在于制成该药物组合物的原料药的组成和重量份为：
藏锦鸡儿525重量份 透茎冷水花517重量份 β-香树脂醇乙酸酯26重量份 旋覆花次内酯23重量份 鹅蛋壳545重量份。
3.根据权利要求1所述一种防治膀胱癌的药物组合物，其特征在于药物组合物可以采用制剂学的常规方法制备成片剂或胶囊剂或滴丸。
4.根据权利要求1所述一种防治膀胱癌的药物组合物，其特征在于药物组合物与化学药或中药组成的防治膀胱癌药物。
5.一种防治膀胱癌的药物组合物的制备方法，其特征在于按如下步骤制备：
原料药的组成和重量份为：藏锦鸡儿520-530重量份 透茎冷水花512-520重量份 β-香树脂醇乙酸酯24-28重量份 旋覆花次内酯20-26重量份 鹅蛋壳540-550重量份；
制备方法：
（1）按原料药配比取藏锦鸡儿、透茎冷水花、β-香树脂醇乙酸酯、旋覆花次内酯、鹅蛋壳，混匀，用重量百分比浓度28%乙醇作为溶剂，34.5℃温浸提取，提取次数为13次，每次提取时间为22小时，每次溶剂用量为原料药总重量的55倍，滤过，得药渣A和提取液A，提取液A回收乙醇，浓缩至相对密度1.07，滤过，药液通过LKS02大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，再用重量百分比浓度37.5%乙醇溶液洗脱LKS02大孔吸附树脂柱，收集重量百分比浓度37.5%乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得提取物A；
（2）取步骤（1）药渣A，用重量百分比浓度61%乙醇作为溶剂，加热回流提取9次，每次提取时间为0.2小时，每次溶剂用量为药渣A重量的26倍，滤过，得药渣B和提取液B，提取液B回收乙醇，浓缩至相对密度1.12，滤过，药液通过D3520大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，再用重量百分比浓度74%乙醇溶液洗脱D3520大孔吸附树脂柱，收集重量百分比浓度74%乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得提取物B；
（3）将提取物A和提取物B混匀，即得药物组合物。
6.根据权利要求5所述一种防治膀胱癌的药物组合物的制备方法，其特征在于按如下步骤制备：
原料药的组成和重量份为：藏锦鸡儿525重量份 透茎冷水花517重量份 β-香树脂醇乙酸酯26重量份 旋覆花次内酯23重量份 鹅蛋壳545重量份；
制备方法：
（1）按原料药配比取藏锦鸡儿、透茎冷水花、β-香树脂醇乙酸酯、旋覆花次内酯、鹅蛋壳，混匀，用重量百分比浓度28%乙醇作为溶剂，34.5℃温浸提取，提取次数为13次，每次提取时间为22小时，每次溶剂用量为原料药总重量的55倍，滤过，得药渣A和提取液A，提取液A回收乙醇，浓缩至相对密度1.07，滤过，药液通过LKS02大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，再用重量百分比浓度37.5%乙醇溶液洗脱LKS02大孔吸附树脂柱，收集重量百分比浓度37.5%乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得提取物A；
（2）取步骤（1）药渣A，用重量百分比浓度61%乙醇作为溶剂，加热回流提取9次，每次提取时间为0.2小时，每次溶剂用量为药渣A重量的26倍，滤过，得药渣B和提取液B，提取液B回收乙醇，浓缩至相对密度1.12，滤过，药液通过D3520大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，再用重量百分比浓度74%乙醇溶液洗脱D3520大孔吸附树脂柱，收集重量百分比浓度74%乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得提取物B；
（3）将提取物A和提取物B混匀，即得药物组合物。
7.根据权利要求5所述一种防治膀胱癌的药物组合物的制备方法，其特征在于药物组合物可以采用制剂学的常规方法制备成片剂或胶囊剂或滴丸。
8.根据权利要求5所述一种防治膀胱癌的药物组合物的制备方法，其特征在于药物组合物与化学药或中药组成防治膀胱癌药物。
CN201610501342.0A 2016-06-30 2016-06-30 防治膀胱癌的药物组合物 Withdrawn CN106138174A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610501342.0A CN106138174A (zh) 2016-06-30 2016-06-30 防治膀胱癌的药物组合物

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610501342.0A CN106138174A (zh) 2016-06-30 2016-06-30 防治膀胱癌的药物组合物

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN106138174A true CN106138174A (zh) 2016-11-23

Family

ID=57349994

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610501342.0A Withdrawn CN106138174A (zh) 2016-06-30 2016-06-30 防治膀胱癌的药物组合物

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN106138174A (zh)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106540127A (zh) * 2016-12-10 2017-03-29 济南昊雨青田医药技术有限公司 一种防治小儿感冒的药物组合物及其制备方法
CN106727774A (zh) * 2016-12-10 2017-05-31 济南昊雨青田医药技术有限公司 治疗咽炎的药物组合物及其制备方法
CN106727791A (zh) * 2016-12-10 2017-05-31 济南昊雨青田医药技术有限公司 一种治疗扁桃体炎的药物组合物及其制备方法
US10856559B1 (en) 2019-09-09 2020-12-08 King Saud University Method of producing eggshell-derived nanoparticles

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106540127A (zh) * 2016-12-10 2017-03-29 济南昊雨青田医药技术有限公司 一种防治小儿感冒的药物组合物及其制备方法
CN106727774A (zh) * 2016-12-10 2017-05-31 济南昊雨青田医药技术有限公司 治疗咽炎的药物组合物及其制备方法
CN106727791A (zh) * 2016-12-10 2017-05-31 济南昊雨青田医药技术有限公司 一种治疗扁桃体炎的药物组合物及其制备方法
US10856559B1 (en) 2019-09-09 2020-12-08 King Saud University Method of producing eggshell-derived nanoparticles

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TWI300352B (en) Water soluble extract from plant of solanum genus and the preparation process thereof, and pharmaceutical composition containing the water soluble extract
CN106138174A (zh) 防治膀胱癌的药物组合物
CN101904893B (zh) 当归补血胶囊的制备方法
CN108888670A (zh) 一种治疗溃疡性结肠炎的结肠靶向胶囊剂及其制备工艺
CN105125946A (zh) 一种清心除烦的栀子口服液及其制备方法
CN109512870B (zh) 药物组合物及其制备方法和应用
CN103655544B (zh) 棕矢车菊素在制备预防或治疗慢性肝损伤和肝纤维化的药物中的应用
CN106729444A (zh) 一种修复皮肤创面的凝胶乳及其制备方法
CN102641342B (zh) 一种治疗肾病的中药提取物和制备方法
Li et al. Effect of procyanidins from Pinus koraiensis bark on growth inhibition and expression of PCNA and TNF-[alpha][alpha] in mice with U14 cervical cancer
CN109528917B (zh) 一种治疗类风湿性关节炎的朝医方组合物及其乳膏剂的制备方法
CN106038797A (zh) 一种防治膀胱癌的药物组合物
CN105287921A (zh) 治疗胃癌的药物组合物及其制备方法
CN100434092C (zh) 含有草木犀成分的组方及其制剂
CN103285283A (zh) 一种治疗乳腺增生疾病的中药分散片及其制备和质量检测方法
CN105287865A (zh) 治疗恶性肿瘤的药物组合物
CN117731709B (zh) 一种治疗前列腺炎、前列腺增生的药物及其制备方法与应用
CN107050359A (zh) 治疗慢性盆腔炎性疾病后遗症的壮药制剂及其制备方法
CN106511437A (zh) 一种红景天有效部位的制备及其医药用途
CN106038653A (zh) 防治结肠癌的药物组合物
CN105535265A (zh) 一种治疗胰腺癌的药物组合物
CN106728836B (zh) 一种治疗小儿病毒性心肌炎的中药组合物及其制备方法
CN104189365B (zh) 治疗人体疼痛的中药组合物及其制剂和制法
CN106109550A (zh) 治疗结肠癌的药物组合物及其制备方法
CN104042682A (zh) 一种治疗糖尿病并发肺炎的中药组合物

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WW01 Invention patent application withdrawn after publication

Application publication date: 20161123

WW01 Invention patent application withdrawn after publication