CN101904893B - 当归补血胶囊的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种当归补血胶囊及其制备方法，当归补血胶囊包括1000重量份的当归补血浸膏颗粒和5～20重量份的明胶颗粒，所述当归补血浸膏颗粒为10重量份的当归和50重量份的黄芪经水煮、真空干燥、粉碎得到的颗粒提取物；制备方法包括选取当归10重量份、黄芪50重量份，经水煮、真空低温干燥、粉碎、添加药用明胶粉并混合均匀、喷入药用乙醇溶液、烘干、冷却、整粒后灌装成胶囊。本发明的当归补血胶囊既完全按照中医中药理论进行调配，又符合现代人们希望简单、方便，易保管、易携带的要求，具有药物成分保留好、制备工艺简单、生产操作方便、浸膏颗粒流动性好、吸湿性小且不易结块，制剂质量稳定，便于仓储、运输、携带和服用的优点。

Description

当归补血胶囊的制备方法

技术领域

本发明涉及中药制剂领域，具体涉及一种当归补血胶囊的制备方法。

背景技术

中医传统补气生血良方“当归补血汤”，主治肌热面赤，烦渴欲饮，脉洪大而虚，重按无力等血虚阳浮发热证；亦治妇人经期、产后血虚发热头痛；或疮疡溃后，久不愈合者。据山东中医学院聂克考证，该方首见于《内外伤辩惑论·暑伤胃气论》(公元1247年)，为金元四大家之一李东垣所创，方用黄芪一两，当归酒洗二钱，以水二盏，煎至一盏，去滓，空腹食前温服。该方简单，疗效确切，历来被医家所推崇。现代中医在继承传统的基础上，用于治疗各种贫血、白细胞减少症等，取得了很好的疗效，扩大了治疗范围。

当今市场上出现了多种号称以“当归补血汤”为基础的当归补血产品，包括当归补血丸、精、膏、液、冲剂等等。仔细研究这些产品及其工艺会发现，所有现售产品或为当归黄芪分煎后的调配品，或为当归黄芪合煎后的酒沉提取物，或先将部分黄芪粉碎，再与当归和剩余黄芪合煎后的浓缩液混合制成的固体颗粒等。显然，上述产品已不是李东垣“当归补血汤”的传承，其疗效当然不能与古方相提并论。

历经千年积累沉淀的中医中药，有着深厚的理论基础和实践经验。中药复方的特色在于讲究阴阳气血的平衡及金木水火土的和谐。传统中药方剂用药强调“共煎”，因其“炮制一共煎”的过程融合了中药的七情四性、君臣佐使的协同配伍，从而发挥中药方剂的特殊作用。而所有这些，仅靠现代技术手段测试几个所谓专一理化指标是不能说明问题的。

首都医科大学附属北京友谊医院的赵奎君与香港科技大学生物系及中药研发中心的李卓明教授等，利用化学和细胞生物学手段对“当归补血汤”进行了深入的研究，通过比较共煎、分煎的当归补血汤的化学成分及生物学活性，发现无论是来源于黄芪的黄芪甲苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素，还是来源于当归的阿魏酸、藁本内酯；或者总黄酮、总皂苷、总多糖等有效组分，共煎的当归补血汤的含量均高于单煎的黄芪、当归及“黄芪+当归”分煎后重组的混合物。此外，共煎当归补血汤不仅能促进有效成分的溶出，而且可以增强免疫活性、补血作用、类雌激素活性、成骨细胞分化活性。在共煎过程中，黄芪和当归的化学成分之间可能因为“助溶”、“增溶”、“吸附”、“沉淀”等过程促进了复方成分间的相互作用、相互反应，从而改变活性成分的溶出率，而活性成分含量的变化可能产生特殊的活性，进而直接引起疗效的改变。(《从当归补血汤的研究探讨和分析中药复方共煎的合理性》世界科学技术·中医药现代化2009年2期)。

可见，传统中药复方共煎有着深刻的含意，共煎过程是一个极其复杂的物理化学反应过程，只有共煎方能体现复方的疗效，“单煎”再重组的复方，其活性远远达不到“共煎”的效果。在共煎的作用机制尚未清楚的前提下盲目将复方拆分煎煮，或进行所谓的有效成分提取，很可能失去方中各种成分间物理或化学反应的条件，从而改变复方的物质基础及其含量，继而改变中药复方的治疗效果，故应慎而为之。因此，按中医理论进行分析，现有当归补血产品及其制备方法是有明显缺陷的。

无论是临床验证还是用现代技术手段观察分析，“当归补血汤”确实是补气生血的代表良方。然而，汤剂不易保存和携带，服用也不方便，已不适应现代生活节奏和用药习惯，迫切需要改进。对“当归补血汤”而言，目前的技术不能完全体现古方精髓的原因之一，是当归补血汤的药液浓缩去滓后再干燥成固体非常不易，这一方面是药液中所含的大量糖类、酯类和甙类物质很难用传统的加热方法干燥成固体，另一方面，由当归和黄芪共煎液制得的全浸膏粉末，流动性差，吸湿性强，吸湿后易粘结成块，给进一步生产和储存都带来了困难。

发明内容

本发明的目的是针对上述现有技术的缺点，提供一种既完全按照中医中药理论进行调配，又符合现代人们要求简单、方便，易保管、易携带的当归补血产品，即一种药物成分保留好、制备工艺简单、生产操作方便、浸膏颗粒流动性好、吸湿性小且不易结块，制剂质量稳定，便于仓储、运输、携带和服用的当归补血胶囊的制备方法。

本发明提供的一种当归补血胶囊的制备方法，其实施步骤如下：

(1)选取当归10份、黄芪50份分别进行切片，将切片的当归进行酒洗制成酒洗当归；

(2)将酒洗当归和黄芪混合，进行水煮、冷却、过滤获得当归补血药液；

(3)将当归补血药液进行真空低温干燥制成当归补血干浸膏，再将当归补血干浸膏进行粉碎得到当归补血浸膏颗粒；

(4)将当归补血浸膏颗粒添加药用明胶粉并混合均匀，然后往当归补血浸膏颗粒与药用明胶粉混合物中喷入药用乙醇溶液使之润湿，最后将经药用乙醇溶液润湿的当归补血浸膏颗粒与药用明胶粉混合物进行加热烘干、冷却、整粒后灌装成胶囊。

作为本发明方法的进一步改进：

所述步骤(4)中添加的药用明胶粉用量为当归补血浸膏颗粒重量的0.5％～2％，药用明胶粉的粒度不小于80目，且将当归补血浸膏颗粒与药用明胶粉混合的温度为18～26℃；

所述步骤(4)中添加的药用明胶粉用量为当归补血浸膏颗粒重量的1％，将当归补血浸膏颗粒与药用明胶粉混合的温度为18～20℃，所述步骤(4)中添加药用明胶粉、混合均匀以及喷入药用乙醇溶液是在高效湿法制粒机中进行的，且高效湿法制粒机的混合速度为200～400转/分，切割速度为1500～3000转/分，混合时间为5～10分钟，放置时间为30～45分钟；

所述步骤(4)中喷入的药用乙醇溶液的量为当归补血浸膏颗粒与药用明胶粉混合物的总重量的5％～8％，药用乙醇溶液中乙醇的体积百分比为50％～80％；

所述步骤(4)中喷入的药用乙醇溶液的量为当归补血浸膏颗粒与药用明胶粉混合物的总重量的6％，药用乙醇溶液中乙醇的体积百分比为70％；

所述水煮是指使用重量为步骤(1)选取的黄芪与当归总重量的10倍的水，将酒洗当归和黄芪的混合物文火保持沸腾3～4小时，待药液体积约为原药液体积一半时停止加热，所述过滤采用的过滤材料为双层本色绸布；

所述真空低温干燥是指将当归补血药液放在不超过60℃的真空环境中直至当归补血药液干燥；

所述粉碎是指将当归补血干浸膏采用冷冻粉碎机粉碎，粉碎获得的当归补血浸膏颗粒的大小为30～40目；

所述酒洗是指在10重量份当归中添加1重量份黄酒拌匀、闷透，然后用文火炒干至微焦、冷却后获得酒洗当归；

所述步骤(4)中将经药用乙醇溶液润湿的当归补血浸膏颗粒与药用明胶粉混合物进行加热烘干是在孛荠式糖衣机里进行，孛荠式糖衣机转速为10～25转/分，孛荠式糖衣机内部温度为35～55℃，且孛荠式糖衣机开启引风机将湿热气体排出；

所述步骤(4)中的整粒是将烘干后的药用乙醇溶液润湿的当归补血浸膏颗粒与药用明胶粉混合物颗粒通过40目筛。

本发明具有下述优点：

本发明摒弃了所谓“分煎合药”、“提取有效成分”等现代手段粗暴对待中药方剂的有其名而无其质的所谓中药改革，制备的胶囊中阿魏酸、黄芪甲甙等药物成分保留较好，制备工艺简单、制剂稳定性好，完整地保留了古方“当归补血汤”的神韵和疗效，相比传统的“当归补血汤”，剂型更为合理，服用、携带和保管更为方便，明显提高了应用价值，使其具有更好的社会效益和经济效益；本发明添加的药用明胶粉由18种氨基酸组成，是一种蛋白质结构的高分子材料，有良好的生物相容性和可降解性，具有极好的成膜性，当明胶胶凝时，水被挤出蛋白质矩阵，收缩为橡胶态的膜，干燥后即变为玻璃态的明胶膜，是药物胶囊和片剂覆膜的主要成分，本发明中，明胶可以在当归补血浸膏颗粒上形成防潮薄膜，从而改善当归补血浸膏颗粒的流动性和吸湿性，生产过程中，颗粒储存、灌装比较方便，制得的当归补血胶囊的质量更加稳定；由于水煮的方法与古方一致，有利于最大限度地获取药物的有效成分；真空低温干燥可以有效克服当归补血药液难以干燥的问题，可以简单快速地实现当归补血药液的干燥并完整保留药液的药物成分；粉碎采用冷冻粉碎机粉碎，可以有效避免干浸膏粉碎过程中温度升高产生黏结甚至结焦，破坏有效成分，粉碎得到的颗粒更加均匀，有利于增加制剂颗粒的流动性。

具体实施方式

本实施例的当归补血胶囊的制备方法包括如下步骤：

(1)选取当归10重量份、黄芪50重量份分别进行切片，将切片的当归进行酒洗制成酒洗当归；

(2)将酒洗当归和黄芪混合，进行水煮、冷却、过滤获得当归补血药液；

(3)将当归补血药液进行真空低温干燥制成当归补血干浸膏，再将当归补血干浸膏进行粉碎得到当归补血浸膏颗粒；

(4)在当归补血浸膏颗粒中添加药用明胶粉并混合均匀，然后往当归补血浸膏颗粒与药用明胶粉混合物中喷入药用乙醇溶液使之润湿，最后将经药用乙醇溶液润湿的当归补血浸膏颗粒与药用明胶粉混合物进行加热烘干、冷却、整粒后灌装成胶囊。

步骤(1)中，酒洗是指在10重量份当归中添加1重量份黄酒，拌匀、闷透，然后用文火炒干至微焦、冷却后获得酒洗当归。本实施例中，当归取符合《中国药典》(2005年版)质量标准的当归60克，切成1～2mm的薄片，加黄酒6克，拌匀，密闭放置2小时后，置锅内，用文火炒干，切片略有焦斑后，取出，放凉，制成酒洗当归。本实施例中黄芪取符合《中国药典》(2005年版)质量标准的黄芪300克，切成2～4mm的薄片。

步骤(2)中，水煮是指使用重量为步骤(1)选取的黄芪与当归总重量的10倍的水，将酒洗当归和黄芪的混合物文火保持沸腾3～4小时，待药液体积约为原药液体积一半时停止加热；过滤采用的过滤材料为双层本色绸布。本实施例中，水煮时加饮用水3600ml，加热煮沸，文火保持沸腾状态，待药液体积为1800ml时，停止加热，自然冷却至室温，用双层本色绸布过滤，弃药渣得到当归补血药液。

步骤(3)中，真空低温干燥是指将当归补血药液放在不超过60℃的真空环境中直至当归补血药液干燥；粉碎是指将当归补血干浸膏采用冷冻粉碎机粉碎，粉碎获得的当归补血浸膏颗粒的大小为30～40目。本实施例中，将当归黄芪药液倒在不锈钢盘上，放入真空干燥箱内，减压，并逐步加热，控制真空干燥箱内温度不能超过60℃，直至药液干燥，冷却至室温，取出，用冷冻粉碎机粉碎成40目。

步骤(4)中，添加药用明胶粉的用量为当归补血浸膏颗粒重量的0.5％～2％，药用明胶粉的粒度不小于80目，且将当归补血浸膏颗粒与药用明胶粉混合的温度为18～26℃，优选为18～20℃。优选的，添加药用明胶粉的用量为当归补血浸膏颗粒重量的1％，当归补血浸膏颗粒与药用明胶粉混合的温度为19℃。喷入的药用乙醇溶液的量为当归补血浸膏颗粒与药用明胶粉混合物的总重量的5％～8％，药用乙醇溶液中乙醇的体积百分比为50％～80％。优选的，喷入的药用乙醇溶液的量为当归补血浸膏颗粒与药用明胶粉混合物的总重量的6％，药用乙醇溶液中乙醇的体积百分比为70％，且喷入药用乙醇溶液是在高效湿法制粒机中进行的，且高效湿法制粒机的混合速度为200～400转/分，切割速度为1500～3000转/分，混合时间为5～10分钟，放置时间为30～45分钟。本实施例中，药用明胶粉的用量为1.2g，粒度大小为80目，当归补血浸膏颗粒与80目的药用明胶粉在高效湿法制粒机里进行混合，且高效湿法制粒机的混合速度为200转/分，切割速度为1500转/分，混合时料温为19℃，混合时间为5分钟，然后喷入70％乙醇溶液(v/v)7.5g将物料润湿，放置30分钟后，取出。所述步骤(4)将经药用乙醇溶液润湿的当归补血浸膏颗粒与药用明胶粉混合物加热烘干，优选的，是在孛荠式糖衣机里进行，且孛荠式糖衣机转速为10～25转/分；孛荠式糖衣机内部温度为35～55℃，并开启引风机将湿热气体排出。本实施例中，将经药用乙醇溶液润湿的当归补血浸膏颗粒与药用明胶粉混合物置孛荠式糖衣机内，且孛荠式糖衣机转速为20转/分；加热温度是物料温度为40℃，并开启引风机将湿热气体排出，将颗粒烘干，冷却至室温，取出，置40目筛进行整粒，整粒是将烘干后的药用乙醇溶液润湿的当归补血浸膏颗粒与药用明胶粉混合物颗粒通过40目筛，整粒后用全自动胶囊灌装机将颗粒装入1号硬胶囊壳内(得300粒)，每粒胶囊含干浸膏颗粒0.4g(干浸膏收率33％)，相当于生药1.2g。

实施例1.

当归补血汤制备：取符合《中国药典》(2005年版)质量标准的当归60克，切成1～2mm的薄片，加黄酒6克，拌匀，密闭放置2小时后，置锅内，用文火炒干，切片略有焦斑后，取出，放凉，制成酒洗当归。另取符合《中国药典》(2005年版)质量标准的黄芪300克，切成2～4mm的薄片，与酒洗当归片混匀后，加饮用水3600ml，加热煮沸，文火保持沸腾状态，待药液体积为1800ml时，停止加热，自然冷却至室温，用双层本色绸布过滤，弃药渣得“当归补血汤”。

实施例2.

当归补血胶囊制备：按上述当归补血汤制备方法制得当归补血药液，将药液倒在不锈钢盘上，放入真空干燥箱内，减压，并逐步加热，控制真空干燥箱内温度不能超过60℃，直至药液干燥，冷却至室温，取出，用冷冻粉碎机粉碎成40目，与80目的药用明胶粉1.2g在高效湿法制粒机中进行混合，高效湿法制粒机混合速度为200转/分，切割速度为1500转/分，混合5分钟，混合温度为19℃；喷入70％药用乙醇溶液7.5g，混合5分钟，高效湿法制粒机混合速度为200转/分，切割速度为1500转/分，混合结束放置30分钟，置孛荠式糖衣机里控制孛荠式糖衣机转速为20转/分，加热至40℃，并开启引风机将湿热气体排出，将颗粒烘干，冷却至室温，取出，用40目筛进行整粒，再用全自动胶囊灌装机灌装入1号硬胶囊壳内，得当归补血胶囊300粒。

效果实验

一、药效学研究

实验1.对小鼠失血性贫血的影响：

取健康小白鼠60只(体重18～22g)，性别均衡随机分为5组，按等容积(0.2ml体积/10g体重)每天灌胃给药1次：给药组分别给以当归补血汤0.12g/10g和0.03g/10g(生药量/体重)两种剂量，当归补血胶囊0.12g/10g和0.03g/10g(生药量/体重)两种剂量，对照组灌服等体积0.5％GMC(羟甲基纤维素钠)液，共七天。实验动物于给药前眶后取血测定小白鼠红细胞计数(RBC)、血红蛋白(Hb)(实验前对照值)；在给药的第1～3天，每日用特制的毛细管由小鼠眶后静脉丛放血约0.5ml，第四天复测动物RBC、Hb(失血后值)；继续给药至第八天，再测各组动物RBC、Hb值(恢复后值)。

实验结果表明，给药组动物失血后和恢复后的RBC、Hb值高于对照组，统计检验有显著性或极显著性差异，表明当归补血汤和当归补血胶囊在0.12g/10g、0.03g/10g(生药量/体重)两种实验剂量下，对实验动物的失血性贫血有保护和促进恢复的作用，并且作用相当，详细数据如下表所示

t检验：与0.5％GMC组比较^*p＜0.05  ^**p＜0.01

与0.12g当归补血汤组比较^#p＜0.05  ^##p＜0.01

与0.03g当归补血汤组比较^&p＜0.05  ^&&p＜0.01

实验2.对乙酰苯肼处理小鼠红细胞的影响：

实验动物按实验1方法分组、给药，在给药的第六日和第七日，各组实验动物皮下注射乙酰苯肼(14ml/kg)每日一次，第八日眶后采血测定RBC值。

实验结果表明，给药组实验动物与对照组实验动物有显著差异，说明实验动物分别给予0.12g/10g、0.03g/10g(生药量/体重)两个实验剂量的当归补血汤和当归补血胶囊对由乙酰苯肼(14ml/kg sc.×2)所致实验动物红细胞膜损伤有相似的保护作用，详细数据如下表所示

药物	剂量(/10g)	RBC(1012/L)
			0.5％GMC	0.2ml	7.99±0.79
0.5％GMC+乙酰苯肼	0.2ml	5.41±0.42**
			当归补血汤+乙酰苯肼	0.12g	6.43±0.45++
当归补血汤+乙酰苯肼	0.03g	6.32±0.57++
			当归补血胶囊+乙酰苯肼	0.12g	6.52±0.73++
当归补血胶囊乙酰苯肼	0.03g	6.49±0.75++

t检验：与0.5％GMC+乙酰苯肼组比较⁺p＜0.05  ⁺⁺p＜0.01

实验3.对环磷酰胺处理小鼠的影响：

实验动物按实验1方法分组、给药，各组实验动物于给药后第五日开始皮下注射环磷酰胺(CTX 70mg/kg)，连续三日，于第八日眶后取血测定各组实验动物红细胞计数、血红蛋白、白细胞计数和血小板计数值。

实验结果表明，经CTX处理的实验动物在当归补血汤或当归补血胶囊0.12g/10g、0.03g/10g(生药量/体重)两个实验剂量作用下，末梢血象RBC、WBC、TP值高于0.5％GMC+CTX组，统计检验给药组与对照组实验动物之间有显著差异，表明当归补血汤或当归补血胶囊对经CTX(70Mg/kg sc.×3)处理过的实验动物其上述指标有相同明显的保护作用，详细数据如下表所示

t检验：与0.5％GMC+CTX组比较⁺p＜0.05  ⁺⁺p＜0.01

实验4.对环磷酰胺处理小白鼠骨髓有核细胞的影响：

实验动物按实验1方法分组、给药，于给药后第五日开始注射环磷酰胺(CTX 70mg/kg)，连续三日，第八日用颈椎脱臼法处死动物，取出股骨，用稀释液冲出股骨骨髓有核细胞，显微镜下计数，观察药物的影响。

实验结果表明，实验动物在当归补血汤或当归补血胶囊0.12g/10g、0.03g/10g(生药量/体重)两个实验剂量作用下，骨髓有核细胞数显著高于0.5％GMC+CTX组，表明药物对CTX(70Mg/kg sc.×3)所致小白鼠骨髓有核细胞的抑制有相同明显的保护作用，详细数据如下表所示

t检验：与0.5％GMC+CTX组比较⁺p＜0.05  ⁺⁺p＜0.01

实验5.对小鼠X放射线损伤的影响：

实验动物按实验1方法分组、给药。实验前小白鼠眶后取血测定WBC值(试验前值)。给药第四天，在BJ-4型加速器以4mv，250cGY剂量率照射实验动物(源轴距为80cm)，次日复测各组实验动物WBC值(照射后值)，继续给药至第八日，再测各组实验动物的WBC值(恢复后值)及骨髓有核细胞数。实验结果表明，经X射线照射后及恢复后，给药组实验动物的WBC值和骨髓有核细胞数显著高于对照组，表明当归补血汤或当归补血胶囊的两种实验剂量对由X射线照射造成动物的损伤有相同的明显保护和促进恢复作用，详细数据如下表所示

实验6.免疫功能实验：

实验动物按实验1方法分组、给药。连续给药七天，末次给药后每鼠腹腔注射5％鸡红细胞悬液0.2ml(v/v)，十小时后颈椎脱臼法处死小白鼠，剪开腹腔皮肤，用生理盐水冲洗腹腔，取腹腔液点片，Giemas染色计算腹腔巨噬细胞吞噬率及吞噬指数。实验结果表明，给药组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率及吞噬指数明显高于对照组，表明当归补血汤或当归补血胶囊的两种实验剂量有相同的增强实验动物细胞免疫功能，详细数据如下表所示

结语：当归补血胶囊的药效学研究证实，该药在0.12g/10g、0.03g/10g(生药量/体重)两个实验剂量下，对失血、乙酰苯肼造成“血虚症”模型动物，以及经环磷酰胺和放射损伤造成的白细胞和骨髓有核细胞减少的模型动物均有明显的保护和促进恢复作用，并能提高实验动物细胞免疫功能，相关实验指标与当归补血汤作用相当。根据“中药新药研究指南”和“中药药理研究方法学”有关内容的规定，上述实验选用的动物模型和观察指标可作为治疗血虚症和补血升白新药研究的药效学指标。

二、毒理学研究

实验7.急性毒性试验(药物最大耐受量试验)：

取小白鼠20只(体重20.1±1.52g)雌雄各半，分笼饲养给水，禁食16小时后，以当归补血胶囊溶液最高浓度(1.2g生药/ml)及小鼠最大灌胃体积(0.4ml/10g体重)灌服，于上午六时，十二时，下午六时各一次，即每次给药量为0.48g生药/10g体重，每日给药量为1.44g生药/10g体重，相当于70kg成人每次用药量(口服，每次5粒，一日2次)的560倍，每日用药量的840倍。每次给药后观察动物反应，末次给药后恢复进食。定时测定动物体重，记录进食量，连续观察七天。

实验发现，实验动物除给药后活动减少在数分钟恢复，未见其它异常反应，连续七天中观察中，实验动物无一死亡，活动、进食、粪便未见异常。体重平均增长11.69％，每鼠平均每日摄食量1.36g，动物尸体解剖，主要脏器肉眼检查未见病理变化，当归补血胶囊最大耐受量实验小白鼠体重的变化如下表所示

上述实验结果表明：当归补血胶囊对小白鼠以最大灌胃给药，每次最大耐受量为48g生药/kg体重以上，每日最大耐受量在144g生药/kg以上。

实验8.长期毒性试验：

将实验动物随机分为对照组、高剂量给药组、低剂量给药组，每组雌雄动物各半。观察一周后，高剂量组用当归补血胶囊配成的2.4g生药/ml溶液，以2ml/100g体重剂量灌胃给药；低剂量组用当归补血胶囊配成的0.24g生药/ml溶液，以2ml/100g体重剂量灌胃给药；对照组灌服等体积生理盐水(2ml/100g体重)，每周六天，每天一次，连续给药13周，每周称体重一次并记录每鼠每日平均进食量，观察动物外观、活动、粪便等情况。末次给药后各组处死一半动物(停药后动物)，另一半动物，停药恢复两周后处死(恢复后动物)，两批动物均进行血液学，血液生化学和病理组织学检查。

结果1.对大鼠一般状态的影响：给药期间和停药后各组大鼠毛色、行为、进食量及粪便均无异常，两个给药组体重与对照组比较均无显著差异。

结果2.药物对大鼠血液学的影响：停药后动物和恢复后动物禁食12小时后，复称体重断头取血，取少量血样作红细胞计数(RBC，显微镜计数)、血红蛋白定量(Hh，氰化高铁法)、白细胞计数(WBC，显微镜计数)和分类(DC，瑞氏染色，显微镜分类)。药物灌服13周，给药组与对照组，停药组与恢复组各项指标均无显著差异，说明当归补血胶囊灌服13周在实验剂量下对血液学指标RBC，Hh，WBC，DC，均无影响。

结果3.药物对大鼠血液生化学指标的影响：取上项剩余血样，离心，分离血清测定。丙氨酸氨基转移酶(ALT乳酸脱氢酶动力学法)，天门冬氨酶氨基转移酶(AST苹果酸脱氢酶动力学法)、肌肝(Crea苦味酸法)、血脲素氨(BUN血脲酶法)以观察长期给药对大鼠肝肾功能的影响。实验结果表明药物灌服13周，给药组与对照组，停药组与恢复组各项指标均在正常范围之内，t检验各组指标组间均无显著性差异，说明当归补血胶囊灌服13周在实验剂量下对大鼠肝肾功能无影响。

结果4.药物对大鼠主要脏器的影响：

(1)药物对大鼠脏器系数的影响

解剖各组实验动物，肉眼观察心、肝、脾、肺、肾、肾上腺，胸腺有无病变，并称重各脏器重量，计算脏器系数(脏器重量mg/100g体重)。

各组实验动物主要脏器(心、肝、脾、肺、肾、肾上腺，胸腺)肉眼检查均未见病理改变，给药组与对照组相同器官脏器系数经t检验未见显著差异，说明当归补血胶囊在实验剂量下灌服13周对动物脏器系数无影响。

(2)组织学检查

以10％福尔马林固定各鼠心、肝、脾、肺、肾、肾上腺和胸腺标本。取空白对照组和高剂量组上述器官，石蜡包埋，切片，HE染色，光纤显微镜下进行病理检查：

病理检查结果表明高剂量组和对照组组织切片均属正常，未见基本结构异常改变。

综上所述，大鼠在48g生药/kg，即相当于70kg成人每日用药量(口服，每次5粒，一H 2次)的280倍；4.8g生药/kg即相当于70kg成人每日用药量的28倍剂量下，灌服13周，对整体动物外观，生理行为以及血液学指标(RBC，Hh，WBC，DC)，血液生化学指标(AST，ALT，Crea，BUN)，内脏脏器系数，病例组织学指标均均未见药源性改变。表明药物在上述剂量下使用是安全的。

三、产品质量对比检查

实验9.鉴别对比试验：

(1)阿魏酸鉴别对比试验

当归补血汤及当归补血胶囊中主要药材之一的当归，为伞形科植物当归Angelica sinensis(Oliv.)Diels的干燥根。含蒿本内脂(Ligustilide)、正丁烯酰内酯(n-butylidene phthalide)、阿魏酸、烟酸、蔗糖和多种氨基酸以及倍半萜类化合物等。现已证实阿魏酸(Fumalic acid)具有抗血小板聚集、抑制血小板5-羟色胺释放、抑制血小板血栓素A2(TXA2)的生成、增强前列腺素活性、镇痛、缓解血管痉挛等作用，是生产用于治疗心脑血管疾病及白细胞减少等症药品的基本原料。现已作为药材及成药中是否含有当归及其品质的重要指标之一。

本试验先按实施例1制得3批当归补血汤，实施例2制得3批当归补血胶囊，进行3次相同试验。

取上述当归补血汤75ml(相当于15g生药)，置索氏提取器中，加入醋酸乙酯一甲酸(9.5∶0.5)100ml，回流提取4小时，挥去醋酸乙酯，加甲醇5ml使溶解，滤过，滤液作为当归补血汤供试品溶液。另取上述当归补血胶囊(内容物)5g(相当于15g生药)，置索氏提取器中，加入醋酸乙酯-甲酸(9.5∶0.5)100ml，回流提取4小时，挥去醋酸乙酯，加甲醇5ml使溶解，滤过，滤液作为当归补血胶囊供试品溶液。再取阿魏酸对照品2.5mg，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取当归补血汤供试品溶液5μl，当归补血胶囊供试品溶液5μl，对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶薄层板上，以苯-三氯甲烷-冰醋酸(6∶5∶1)为展开剂展开，取出晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。

结果显示，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝色荧光斑点。表明当归补血胶囊与当归补血汤一样，都含有阿魏酸。

(2)黄芪甲甙鉴别对比试验

当归补血汤及当归补血胶囊中的黄芪，是豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.var.mongho-licus(Bge.)Hsiao或膜荚黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.的干燥根。含有甙类、多糖、氨基酸和微量元素，实验表明其中一些成分有明显的药理作用，黄芪甲甙已作为药材及成药中是否含有黄芪及其品质的重要指标之一。

本试验取上述实施例1、2制得的3批当归补血汤和当归补血胶囊，进行3次相同试验。

取当归补血汤75ml(相当于15g生药)，加甲醇50ml混匀过夜，再加甲醇置索氏提取器中提取4小时，提取液水浴浓缩至干，残渣加饱和食盐水20ml使溶解，用水饱和的正丁醇提取(10ml×2，5ml×2)，合并正丁醇提取液，加氧化镁2g，搅拌，水浴蒸干。加少量甲醇将粉末湿润后装入滤纸筒，置索氏提取器中，加甲醇回流提取4小时，回收溶剂至干，残渣加甲醇5ml使溶解，滤过，滤液作为当归补血汤供试品溶液。另取当归补血胶囊(内容物)5g(相当于15g生药)，加甲醇30ml浸泡过夜，用上述方法制成当归补血胶囊供试品溶液。再取黄芪甲甙对照品5mg，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验。吸取吸取当归补血汤供试品溶液及当归补血胶囊供试品溶液各5μl，对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(65∶35∶10)的下层溶液为展开剂，展开，取出晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃烘约5分钟。

结果显示，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的棕褐色斑点；置紫外光灯(365nm)下检视，显相同的橙黄色荧光斑点，表明当归补血胶囊与当归补血汤一样，都含有黄芪甲苷。

实验10.含量对比试验：

(1)阿魏酸含量对比试验

取上述按实施例制得的3批当归补血汤和当归补血胶囊，采用高效液相色谱法进行测定。以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.085％磷酸溶液(17∶83)为流动相，检测波长为316nm；柱温为35℃。理论板数按阿魏酸峰计算应不低于5000。

取当归补血汤6ml(相当于0.2克当归生药)，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加70％甲醇20ml，密塞，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得当归补血汤供试品溶液。取当归补血胶囊(内容物)0.4克(相当于0.2克当归生药)，按上述方法制得当归补血胶囊供试品溶液。精密称取阿魏酸对照品10mg，置50ml棕色量瓶中，加70％甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取3ml，置50ml棕色量瓶中，加70％甲醇至刻度，摇匀，得阿魏酸对照品溶液(每1ml含阿魏酸12μg)。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ1，注入液相色谱，测定。

试验证明，6ml当归补血汤与0.4g当归补血胶囊(内容物)所含阿魏酸相当，说明采用本发明方法制备得到的当归补血胶囊所含阿魏酸在制备过程中几乎没有损失。详细情况如下表所示：

(2)黄芪甲甙含量对比试验

取上述按实施例制得的3批当归补血汤和当归补血胶囊，采用高效液相色谱法进行测定。以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(32∶68)为流动相，蒸发光散射检测器。理论板数按黄芪甲甙峰计算应不低于4000。

取当归补血汤24ml(相当于4克黄芪生药)精密称定，置索氏提取器中，加甲醇适量，加热回流4小时，提取液回收溶剂并浓缩至干，残渣加水10ml。微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次40ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次40ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水5ml使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱(内径1.5cm，长12cm)，以水50ml洗脱，继用70％乙醇80ml洗脱，弃去洗脱液，蒸干，用甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，制得当归补血汤供试品溶液。取当归补血胶囊(内容物)1.6克(相当于4克黄芪生药)，按上述方法制得当归补血胶囊供试品溶液。

精密称取黄芪甲甙对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.5mg的黄芪甲甙对照品溶液。

分别精密吸取对照品溶液10d、20μl，供试品溶液各20μl，注入液相色谱，测定，以外标两点法对数方程计算。

试验证明，26ml当归补血汤与1.6g当归补血胶囊(内容物)所含黄芪甲甙相当，说明采用本发明方法制备得到的当归补血胶囊所含黄芪甲甙在制备过程中几乎没有损失。详细情况如下表所示：

四、当归补血胶囊稳定性试验

按常温留样观察法，对三批样品进行12个月的性状、鉴别、装量差异、水分、溶散时限、含量及卫生学检查，结果如下表所示：

经以上实验证明：本发明所述当归补血胶囊质量稳定，药效确切，各项指标均符合《中国药典》相关要求，其制备工艺简单易行，检测手段先进，具有开发价值。

Claims (7)

1.一种当归补血胶囊的制备方法，其特征在于其实施步骤如下：

(1)选取当归10重量份、黄芪50重量份分别进行切片，将切片的当归进行酒洗制成酒洗当归；

(2)将酒洗当归和黄芪混合，依次进行水煮、冷却、过滤获得当归补血药液；

(3)将当归补血药液进行真空低温干燥制成当归补血干浸膏，再将当归补血干浸膏进行粉碎得到当归补血浸膏颗粒；

(4)在当归补血浸膏颗粒中添加药用明胶粉并混合均匀，然后往当归补血浸膏颗粒与药用明胶粉混合物中喷入药用乙醇溶液使之润湿，最后将经药用乙醇溶液润湿的当归补血浸膏颗粒与药用明胶粉混合物进行加热烘干、冷却、整粒后灌装成胶囊；

所述步骤(4)中添加的药用明胶粉用量为当归补血浸膏颗粒重量的1％，药用明胶粉的粒度不小于80目，且将当归补血浸膏颗粒与药用明胶粉进行混合时的温度为18～20℃；

所述步骤(4)中添加药用明胶粉、混合均匀以及喷入药用乙醇溶液是在高效湿法制粒机中进行的，且高效湿法制粒机的混合速度为200～400转/分，切割速度为1500～3000转/分，混合时间为5～10分钟，放置时间为30～45分钟。

2.根据权利要求1所述的当归补血胶囊的制备方法，其特征在于：所述步骤(4)中喷入的药用乙醇溶液的量为当归补血浸膏颗粒与药用明胶粉混合物的总重量的5％～8％，药用乙醇溶液中乙醇的体积百分比为50％～80％。

3.根据权利要求2所述的当归补血胶囊的制备方法，其特征在于：所述步骤(4)中喷入的药用乙醇溶液的量为当归补血浸膏颗粒与药用明胶粉混合物的总重量的6％，药用乙醇溶液中乙醇的体积百分比为70％。

4.根据权利要求3所述的当归补血胶囊的制备方法，其特征在于：所述水煮是指使用重量为步骤(1)选取的黄芪与当归总重量的10倍的水，将酒洗当归和黄芪的混合物文火保持沸腾3～4小时，待药液体积约为原药液体积一半时停止加热，所述过滤采用的过滤材料为双层本色绸布。

5.根据权利要求4所述的当归补血胶囊的制备方法，其特征在于：所述真空低温干燥是指将当归补血药液放在不超过60℃的真空环境中直至当归补血药液干燥。

6.根据权利要求5所述的当归补血胶囊的制备方法，其特征在于：所述粉碎是指将当归补血干浸膏采用冷冻粉碎机粉碎，粉碎获得的当归补血浸膏颗粒的大小为30～40目。

7.根据权利要求1～6任一所述的当归补血胶囊的制备方法，其特征在于：所述酒洗是指在10重量份当归中添加1重量份黄酒拌匀、闷透，然后用文火炒干至微焦、冷却后获得酒洗当归；所述步骤(4)中将经药用乙醇溶液润湿的当归补血浸膏颗粒与药用明胶粉混合物进行加热烘干是在孛荠式糖衣机里进行，孛荠式糖衣机转速为10～25转/分，孛荠式糖衣机内部温度为35～55℃，且孛荠式糖衣机开启引风机将湿热气体排出；所述步骤(4)中的整粒是将烘干后的药用乙醇溶液润湿的当归补血浸膏颗粒与药用明胶粉混合物颗粒通过40目筛。