CN100415258C - 一种治疗白细胞减少的中药组合物及其制备和质量控制方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种治疗白细胞减少的药物组合物及制备和质量控制方法。该组合物是由如下原料药制成的：黄芪520-580重量份、鸡血藤440-480重量份、女贞子400-450重量份、白术190-220重量份、当归140-180重量份、补骨脂140-180重量份、枸杞子120-170重量份、鹿角胶50-70重量份。本发明组合物对治疗白细胞减少效果显著。
Description
发明领域
本发明涉及一种中药组合物及其该组合物的制备和质量控制方法，特别涉及一种治疗白细胞减少的药物组合物及制备和质量控制方法。
背景技术
现代医学认为白细胞减少症是外来致病因素抑制了骨髓的造血功能或大量破坏了周围血液中的白细胞所引起。中医认为是外来致病因素伤及脾肾，气血虚弱所致。肾藏精，主骨生髓，故精能生髓，髓能生血，肾精不足，则骨髓空虚，不利于血液的生成；脾为后天之本，气血生化之源，脾虚则气血亦虚。气虚无以生血，血虚无以化气，终致气血两虚。而先天之精有赖后天气血的供养。脾胃虚弱，气血生化之源不足，则先天之精亦乏，精虚髓减而致血虚，故中医认为脾肾亏损，气血虚弱是导致白细胞减少症的主要病机。通过补脾滋肾，既可补益气血，又可充养先天之精，精足而能生髓，髓能生血。因此，确立补脾滋肾，益气补血为治疗白细胞减少症的基本治疗方法研制本药物组合物及其制备和质量控制方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种药物组合物；本发明的另一目的是提供该中药组合物的制备方法和质量控制方法；本发明的第三个目的是提供该药物组合物在制备治疗白细胞减少的药物中的应用。
本发明是通过以下技术方案实现的：
药物组合物的原料药组成及配比如下：
黄芪520-580重量份 鸡血藤440-480重量份 女贞子400-450重量份
白术190-220重量份 当归140-180重量份 补骨脂140-180重量份
枸杞子120-170重量份 鹿角胶50-70重量份
其中药物组合物的最佳配比关系为：
黄芪520重量份 鸡血藤480重量份 女贞子400重量份
白术220重量份 当归140重量份 补骨脂180重量份
枸杞子120重量份 鹿角胶70重量份
黄芪580重量份 鸡血藤440重量份 女贞子450重量份
白术190重量份 当归180重量份 补骨脂140重量份
枸杞子170重量份 鹿角胶70重量份
黄芪542重量份 鸡血藤458重量份 女贞子417重量份
白术208重量份 当归167重量份 补骨脂167重量份
枸杞子146重量份 鹿角胶62重量份
按药剂学方法，可以将上述原料药制备成各种临床或药学上可接受的剂型，包括但不限于如下剂型当中的一种：如：片剂、硬胶囊、软胶囊缓释片、控释片、缓释胶囊、控释胶囊，口服溶液剂、口服混悬剂、口服乳剂、胶浆剂、口服液、乳剂、胶体溶液、合剂、酊剂、滴剂、混悬滴剂，丸剂、滴丸，颗粒剂、肠溶颗粒剂，散剂、粉剂等。
上述药物组合物的制备方法：
女贞子用4-6倍量乙醇加热回流1-3次，每次1-2小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，滤液浓缩至相对密度在80℃时为1.08～1.12，药渣备用；当归、白术、补骨脂加水5-8倍量温浸1-2小时，水蒸气蒸馏提取挥发油，药渣备用；上述两种药渣与黄芪、鸡血藤、枸杞子加水6-10倍量，煎煮1-3次，每次0.5-1.5小时，滤过，合并滤液，滤液浓缩至每1ml相当于原生药1g，静置20-30小时，取上清液继续浓缩至相对密度在80℃时为1.35～1.38，趁热加入鹿角胶与上述乙醇提取物及上述挥发油，再按照常规工艺加入辅料制成片剂、硬胶囊、软胶囊缓释片、控释片、缓释胶囊、控释胶囊，口服溶液剂、口服混悬剂、口服乳剂、胶浆剂、口服液、乳剂、胶体溶液、合剂、酊剂、滴剂、混悬滴剂，丸剂、滴丸，颗粒剂、肠溶颗粒剂，散剂或粉剂。
上述药物组合物颗粒剂的制备方法为：
女贞子用4-6倍量乙醇加热回流1-3次，每次1-2小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，滤液浓缩至相对密度在80℃时为1.08～1.12，药渣备用；当归、白术、补骨脂加水5-8倍量温浸1-2小时，水蒸气蒸馏提取挥发油，药渣备用；上述两种药渣与黄芪、鸡血藤、枸杞子加水6-10倍量，煎煮1-3次，每次0.5-1.5小时，滤过，合并滤液，滤液浓缩至每1ml相当于原生药1g，静置20-30小时，取上清液继续浓缩至相对密度在80℃时为1.35～1.38，趁热加入鹿角胶与上述乙醇提取物和糊精500-600重量份，混匀制粒，干燥，喷入上述挥发油，混匀，制粒，即得。
本药物组合物的颗粒剂、片剂或胶囊制剂的质量控制方法包括如下鉴别方法中的一种和/或几种
A.取本药物组合物制剂7g，研细，加甲醇30-50ml，回流0.5-1.5小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水8-12ml在30-40℃下使溶解，用水饱和的正丁醇提取2-4次，每次15-25ml，合并正丁醇液，再用氨试液提取1-3次，每次15-25ml，弃去氨试液，正西醇液蒸干，残渣5ml使溶解，放冷，通过大孔吸附树脂柱，以水40-60ml洗脱，弃去水液，再用30-50％乙醇40-60ml洗脱，弃去乙醇洗脱液，继用60-80％乙醇40-60ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇2ml便溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以12-14∶5-7∶1-3的氯仿-甲醇-水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以8-12％硫酸乙醇溶液，在102-108℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同的棕褐色斑点；在365nm的紫外光灯下显相同的橙色荧光斑点；
B.取本药物组合物制剂7g，研细，加乙醇40-60ml加热回流20-40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加醋酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液；另取补骨脂素、异补骨脂素对照品，分别加醋酸乙酯制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以3-5∶1的正己烷-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以35-45％的氢氧化钾甲醇溶液，置365nm的紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
本药物组合的颗粒剂、片剂或胶囊制剂的质量控制方法包括如下含量测定方法
取本药物组合物制剂装差异项下的约3g，研细，精密称定，加乙醇40-60ml，加热回流20-40分钟，放冷，滤过，药渣加乙醇同上，再重复回流1-3次，合并滤液，蒸干，残渣加无水乙醇在30-40℃下使溶解，转移至10ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另精密称取齐墩果酸对照品适量，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，精密吸取供试品溶液5μl、对照品溶液2μl与4μl，分别交叉点于同一硅胶G薄层板上，以4-6∶1-3∶1的环己烷-丙酮-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在100℃加热至斑点显色清晰，取出，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照薄层色谱法进行扫描，波长λs＝530nm，λR＝700nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得；
本药物组合物制剂每g含齐墩果酸C30H48O3不得少于1.7mg。
本发明组合物配方独特，方中黄芪甘温益气，补中健脾，为君药；鹿角胶补肝肾，益精血，女贞子补养肝肾，共为臣药；白术助黄芪益气健脾，补骨脂，补肾壮阳，枸杞子，滋养肝肾，增强鹿角胶补肾填精，共为佐药。诸药配合，肝肾同养，气血双补。
制备方法方面，本发明立足于临床效果，注重在不损失有效成分，对女贞子的主要有效成分齐墩果酸进行了研究，工艺采用了醇提后煎煮；对含挥发油的当归、白术、补骨脂工艺进行了研究，工艺采用提油后煎煮；对含水溶性成分的黄芪、鸡血藤、枸杞子工艺采用水煎。本发明制备方法能最大限度地获得有效组份，减少无效组份。
本药物组合物能增强免疫功能，特别是对免疫功能低下的机体，非特异免疫和特异免疫功能都得到增强，它的作用优于“复方阿胶浆”，接近西药组-佛氏不完全佐剂；对化学药物、辐射损伤、化工有害物多种因素引起的机体白细胞降低都有一定对抗作用，所以本药物组合物也是一个促进升高机体白细胞的药物，与“复方阿胶浆”作用相等或相当；能升高受损机体的红细胞数和血红蛋白含量作用优于补血名药“复方阿胶浆”。
下面实验例用于进一步说明但不限于本发明。
实验例1：鹿角胶烊化条件试验
鹿角胶分别采用10倍量药液、水为溶剂、水浴加热至完全烊化过100目筛，得胶液。考查了烊化完全所需时间。结果见表1
表1鹿角胶烊化成胶液所需时间考查结果
根据实验结果，所需时间相近，故鹿有胶以药液烊化适宜。
实验例2：浸泡时间对挥发油收量的影响试验
实验分两组，每组取药材(粗颗粒)各442g，均加水6倍量，一组浸泡一小时，另一组浸泡30分钟，在平行条件下，以5～10ml/min/kg的速度提取挥发油，实验结果见表2
表2浸泡时间对挥发油收量的影响
提取时间在3小时内，浸泡1小时的比浸泡半小时的出油量高。根据工厂实际，提油前温浸1小时即可。
实验例3：加水量对挥发油量的影响试验
实验分三组进行，每组各取药材(粗颗粒)442g，分别加入5倍量水，6倍量水，7倍量水，浸泡1小时，以5～10ml/min/kg蒸馏速度提取挥发油.实验结果见表3
表3加水量对挥发油收量的影响
随着加水量的减少挥发油的量逐渐升高，以5倍量水收油量最高，7倍量水收油量最低.根据生产实际，以6倍量为宜.
实验例4：挥发油提取时间筛选试验
实验取药材(粗粉)442g加6倍量水，浸泡1小时，以5-10ml/min/kg蒸馏速度，分别以0.5小时、1、2、3、4、5、6、小时收集挥发油，试验结果见表4。
表4提取时间对挥发油收量影响结果
从实验结果可知，4小时可以将油提出93％，可将提油时间定为4小时。
经以上考查结果，结合生产实际，挥发油提取工艺为：取药材，加6倍量水，以5～10ml/min/Kg速度提取4小时，即可。
实验例5：黄芪、鸡血藤、枸杞子提取条件的筛选试验
提取温度固定为100℃，加水量、提取时间、提取次数是影响提取效果的主要因素。以水浸出物的量为标准，对提取工艺条件进行筛选，选正交表L9(3)4，以水浸出物的量为指标，筛选提取工艺条件。
实验方法：取药材100g，分别按表5影响因素加入不同倍数的水量，提取不同的时间和次数后，相同条件过滤，滤液定容至100ml，混匀后精密吸取滤液25ml置以干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小时，移置干燥器中，冷却30分钟，迅速精密称定重量，计算得出浸出物的百分率。
表5正交试验表头设计
| 因素水平 | A：加水量(倍) | B：提取时间(小时) | C：提取次数(次) |
| 1 | 11 | 0.5 | 2 |
| 2 | 9 | 1 | 1 |
| 3 | 7 | 1.5 | 3 |
按表头设计进行试验，结果是加11倍水，提取3次，每次1.5小时。与一般规律一致，故未列出试验果表。根据工厂实际，节约成本，将提取工艺定为加9倍量水，提取2次，每次1小时，可将水溶性成分提出。
实验例6：女贞子的提取试验
分别取女贞子100克用上述三种醇浓度进行下面实验。
所得齐墩果酸粗品，于105℃干燥3小时，移置干燥器中，冷却30分钟，迅速精密称定重量。得出齐墩果酸粗品的重量。计算得出齐墩果酸粗品的百分率。结果见表6
表6不同浓度的醇从女贞子中提取齐墩果酸粗品量
用75％和85％乙醇提取的齐墩果酸粗品重差不大。从降低成本考虑，用75％乙醇热回流即可。
实验例7：对小鼠血清溶血素形成影响试验
本试验分六组，除空白对照组外用环磷酰胺造型，使小鼠血液溶血素形成降低、体液免疫功能下降，结果表明药本药物组合物颗粒剂(下称颗粒)组2.6/kg和3.9g/kg组较模型组溶血素形成明显增加，分别为P＜0.02，P＜0.01，且较空白对照组〔未给环磷酰胺的正常组〕的溶血素形成也明显增加，P＜0.05。上述实验结果均表明：芪鹿补血颗粒有非常显著地增强体液免疫功能的作用。
表7芪鹿补血颗粒对小鼠血清溶血素形成影响
※：P＜0.05与对照组比较
实验例8：对免疫器官增重作用试验
实验例7所述试验测定免疫器官〔未测定佐剂组〕发现，注射环磷酰胺后，小鼠免疫器官重量明显降低〔P＜0.01〕，与免疫功能降低相符，而颗粒组2.6g/kg和3.9g/kg能明显使脾、胸腺重量增加，P＜0.01，且其对免疫器官的增重作用比阿胶浆稍强。这为免疫功能的增强提供了组织学基础。
表8芪鹿补血颗粒对小鼠免疫器官重量影响
※※：P＜0.02，※※※P＜0.01与造型组比较
△：P＜0.05，△△△：P＜0.01与对照组比较
实验例9：对照碳粒廓清速度影响试验
按常规方法，[2]取体重18～22g小鼠50只，雌雄各半，分为5组，分组及剂量如下表，连续给药7天，在给药3天后ip氢化可的松〔HC〕25mg/kg，连续3天，于第7天ig给药后1小时，尾静脉注射印度墨汁(生理盐水稀释1倍)0.2ml/20g，于iv后30秒，5分分别从眼眶静脉取血20μl，加入2.0ml，0.1％NaCO3液中，摇匀，于72型比色计680nm比色测定OD30、OD5，计算K。并测定肝、脾、胸腺重量变化，结果表明：颗粒2.6g/kg、1.3g/kg使HC致免疫功能降低的小鼠血液中碳粒廓清速度显著增加，分别为P＜0.02，P＜0.01，提示本剂有增强小鼠网状内皮吞噬功能，有增强非特异免疫功能的作用；给药组使胸腺重显著增加，P＜0.01，与免疫功能的增强相一致。
相似的方法证明：颗粒对正常小鼠血液碳粒廓清速度无影响，对脾重无明显影响，但在2次使用正常动物实验中，给药组胸腺重都较对照组显著增加，提示本剂主要是对免疫功能低下动物有明显调节作用，对正常动物的免疫腺体也有显著增强作用。见下面两表。
表9芪鹿补血颗粒对碳粒廓清速度影响
表10芪鹿补血颗粒对解毒、免疫器官影响〔X±SD〕
※：P＜0.05，※※：P＜0.01与正常对照组比较
实验例10：对环磷酰胺〔Cy〕所致白细胞降低作用试验
领取18～22g标准小鼠50只，雌雄各半，均分5组，给药前计数WBC一次，然后按表11剂量，各组ig给药1/日×14日，并于给药后第8天，各组均ip Cy30mg/kg，1/日×7日，于ip Cy后第5、第7天分别取尾血〔清晨空服〕、眼静脉取血计数WBC。
结果表明颗粒大剂量3.9g/kg、中剂量2.6g/kg，对环磷酰胺握致小鼠降低的白细胞有一定升高作用，高出对照组15～20％。如表11。
表11芪鹿补血颗粒对环磷酰胺〔Cy〕致白细胞降低的影响〔X±SD〕
△△：P＜0.01与正常对照组比较
重复验证，方法同前，只是在给药的当天ip Cy30mg/kg，1/日×7日，同时每天各组ig给药连续9天，给药第2天及第10天每只尾部取血，计数WBC，结果，同样证明芪鹿补血颗粒能对抗Cy致白细胞降低，有升高白细胞的作用，较对照组升高10-20％左右，且比阿胶将作用强。
实验例11：对60Co-γ辐射致白细胞降低作用试验
按常规研究抗辐射药物方法，分2批进行，领取18～22g雄性小鼠，分组及给药剂量如表12，连续ig给药5天，第5天用60Co-γ射线4.0Gy一次全身照射，照后继续每天ig给药，第1天尾部取血，第9天眼眶取血，计数白细胞，结果，两批实验均表明芪鹿补血颗粒的中剂量2.6g/kg，大剂量3.9g/kg，连服9天，可使辐射致小鼠白细胞降低得以回升，且大剂量组较未给药组有非常显著差异，P＜0.02，见表12。
表12芪鹿补血颗粒对60Co致白细胞降低的影响X±SD
※：P＜0.02与60Co照射组比较
实验例12：对有机苯所致大降低白细胞影响试验
领取Wistar大鼠83只，体重100±5g，雌雄均有，均皮下注射苯液〔苯∶麻油＝1∶1〕0.3ml/只，每天1次共50天，于第30天、50天各测白细胞计数1次，按白细胞降低情况，均匀分4组，以后继续注射苯液，同时各组ig不同药物，剂量如表13，每天1次，连续12天后停止注射苯液，并继续给药，并于停止造型后第1、第5天测定WBC回升情况。
结果表明：经50天有害有机溶剂苯液的作用，大鼠白细胞普遍降低，〔由正常值14.0×109/L降至8.0×109、L左右〕，苯液与药同给12天后，第13天测定WBC，白细胞数仍继续下降，阿胶浆及补血剂小剂量组白细胞数与模型组相近，补血剂大剂量下降少，WBC高于模型组，停止注射苯液，连续给药，第5天〔总给药第17天〕各给药组白细胞计数均高于模型组，补血剂大剂量组和阿胶浆更明显。分别高出模型组，30.92％，18.64％，补血剂作用强于阿胶浆组。见表13。
表13芪鹿补血颗粒对苯液致白细胞降低的影响〔X±SD〕
实验例13：对60Co-γ辐射小鼠RBC和Hb影响试验
领取小鼠80只，雌雄各半，分为5组，提前7天按下两表剂量ig给药，第8天用60Co-γ源4.5Gy一次全身照射。照后每天连续ig给药，并于第11天眼眶静脉丛取血，测定红细胞计数〔RBC〕和血红蛋白值〔Hb〕结果表明：中剂量2.6g/kg较对照组红细胞增加非常显著，P＜0.05，中剂量2.6g/kg、大剂量组3.9g/kg较对照组血红蛋白含量升高非常显著，P＜0.02，这与给药组较对照组动物生长更健康的状况相一致。
表14芪鹿补血颗粒对60Co-γ射线降低的RBC的影响(X±SD)
△△：P＜0.01正常对照组比较
※：P＜0.05与60Co照射组比较
表15芪鹿补血颗粒对60Co-γ射线降低的Hb的影响(X±SD)
△：P＜0.05与正常对照组比较
※：P＜0.05与60Co照射组比较
具体实施例如下：
实施例1：片剂的制备
黄芪520g、鸡血藤480g、女贞子400g、白术220g、当归140g、补骨脂180g、枸杞子120g、鹿角胶70g，按常规方法制成片剂500片，白细胞减少的肿瘤患者服用，每日3次，每次3片。
实施例2：胶囊剂的制备
黄芪580g、鸡血藤440g、女贞子450g、白术190g、当归180g、补骨脂140g、枸杞子170g、鹿角胶70g，按常规方法制成胶囊剂500粒，白细胞减少的放、化疗患者服用每日3次，每次2粒。
实施例3：缓释片的制备
黄芪542g、鸡血藤458g、女贞子417g、白术208g、当归167g、补骨脂167g、枸杞子146g、鹿角胶62g，按常规方法制成缓释片500片，白细胞减少患者服用，每日3次，每次3片。
实施例4：口服乳剂的制备
黄芪550g、鸡血藤430g、女贞子420g、白术210g、当归150g、补骨脂170g、枸杞子130g、鹿角胶60g，按常规方法制成口服乳剂1000ml，白细胞减少患者服用，每日3次，每次10ml。
实施例5：制备颗粒剂
黄芪542g、鸡血藤458g、女贞子417g、白术208g、当归167g、补骨脂167g、枸杞子146g、鹿角胶62g，女贞子用5倍量乙醇加热回流2次，每次1.5小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，滤液浓缩至相对密度为1.08～1.12(80℃)，药渣备用；当归、白术、补骨脂加水6倍量温浸1小时，水蒸气蒸馏提取挥发油，药渣备用；上述两种药渣与黄芪、鸡血藤、枸杞子加水9倍量，煎煮2次，每次1小时，滤过，合并滤液，滤液浓缩至每1ml相当于原生药1g，静置24小时，取上清液继续浓缩至相对密度1.35～1.38(80℃)，趁热加入鹿角胶与上述乙醇提取物和糊精520g，混匀制粒，干燥，喷入上述挥发油，混匀，制成1000g，即得。服用方法：每日服3次，每次7g。
实施例6：制备缓释胶囊
女贞子用4倍量乙醇加热回流3次，每次1小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，滤液浓缩至相对密度在80℃时为1.08～1.12，药渣备用；当归、白术、补骨脂加水8倍量温浸1小时，水蒸气蒸馏提取挥发油，药渣备用；上述两种药渣与黄芪、鸡血藤、枸杞子加水10倍量，煎煮1次，每次1.5小时，滤过，合并滤液，滤液浓缩至每1ml相当于原生药1g，静置20小时，取上清液继续浓缩至相对密度在80℃时为1.35～1.38，趁热加入鹿角胶与上述乙醇提取物及上述挥发油，再按照常规工艺加入辅料制成缓释胶囊。
实施例7：制备滴剂
女贞子用6倍量乙醇加热回流1次，每次2小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，滤液浓缩至相对密度在80℃时为1.08～1.12，药渣备用；当归、白术、补骨脂加水5倍量温浸2小时，水蒸气蒸馏提取挥发油，药渣备用；上述两种药渣与黄芪、鸡血藤、枸杞子加水6-10倍量，煎煮3次，每次0.5小时，滤过，合并滤液，滤液浓缩至每1ml相当于原生药1g，静置30小时，取上清液继续浓缩至相对密度在80℃时为1.35～1.38，趁热加入鹿角胶与上述乙醇提取物及上述挥发油，再按照常规工艺加入辅料制成滴剂。
实施例8：制备口服溶液剂
女贞子用4倍量乙醇加热回流1次，每次2小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，滤液浓缩至相对密度在80℃时为1.08～1.12，药渣备用；当归、白术、补骨脂加水8倍量温浸1小时，水蒸气蒸馏提取挥发油，药渣备用；上述两种药渣与黄芪、鸡血藤、枸杞子加水6倍量，煎煮3次，每次1.5小时，滤过，合并滤液，滤液浓缩至每1ml相当于原生药1g，静置20小时，取上清液继续浓缩至相对密度在80℃时为1.35～1.38，趁热加入鹿角胶与上述乙醇提取物及上述挥发油，再按照常规工艺加入辅料制成口服溶液剂。
实施例9：制备冻干粉针
女贞子用6倍量乙醇加热回流3次，每次1小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，滤液浓缩至相对密度在80℃时为1.08～1.12，药渣备用；当归、白术、补骨脂加水5倍量温浸2小时，水蒸气蒸馏提取挥发油，药渣备用；上述两种药渣与黄芪、鸡血藤、枸杞子加水10倍量，煎煮1次，每次0.5小时，滤过，合并滤液，滤液浓缩至每1ml相当于原生药1g，静置30小时，取上清液继续浓缩至相对密度在80℃时为1.35～1.38，趁热加入鹿角胶与上述乙醇提取物及上述挥发油，再按照常规工艺加入辅料制成冻干粉针剂。
实施例10：制备注射剂
女贞子用4倍量乙醇加热回流1次，每次1小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，滤液浓缩至相对密度在80℃时为1.08～1.12，药渣备用；当归、白术、补骨脂加水8倍量温浸2小时，水蒸气蒸馏提取挥发油，药渣备用；上述两种药渣与黄芪、鸡血藤、枸杞子加水10倍量，煎煮1次，每次0.5小时，滤过，合并滤液，滤液浓缩至每1ml相当于原生药1g，静置20小时，取上清液继续浓缩至相对密度在80℃时为1.35～1.38，趁热加入鹿角胶与上述乙醇提取物及上述挥发油，再按照常规工艺加入辅料制成注射剂。
实施例11：质量控制方法
取实施例1的片剂，进行鉴别。A.片剂研细取7g，加甲醇40ml，回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml微热使溶解，用水饱和的正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，再用氨试液提取2次，每次20ml，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣5ml使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱(内径1.5cm，长12cm)，以水50ml洗脱，弃去水液，再用40％乙醇50ml洗脱，弃去40％乙醇洗脱液，继用70％乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇2ml便溶解，作为供试品溶液。另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各2μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(13∶6∶2)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同的棕褐色斑点；紫外光灯(365nm)下显相同的橙色荧光斑点。
B.片剂研细取7g，研细，加乙醇50ml加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加醋酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液。另取补骨脂素、异补骨脂素对照品，分别加醋酸乙酯制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB试验，吸取供试品溶液10μ1，对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正乙烷-醋酸乙酯(4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以40％的氢氧化钾甲醇溶液，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
实施例12：质量控制方法
取实施例5的颗粒剂，含量测定：取装差异项下的颗粒3g，研细，精密称定，加乙醇50ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，药渣加乙醇同上，再重复回流2次，合并滤液，蒸干，残渣加无水乙醇微热使溶解，转移至10ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另精密称取齐墩果酸对照品适量，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，精密吸取供试品溶液5μl、对照品溶液2μl与4μl，分别交叉点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-丙酮-醋酸乙酯(5∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在100℃加热至斑点显色清晰，取出，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB薄层扫描法)进行扫描，波长：λs＝530nm，λR＝700nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得。
本药物组合物每g含齐墩果酸(C30H48O3)不得少于1.7mg。
实施例13：质量控制方法
取实施例2的胶囊，进行质量控制。
A.取7g，研细，加甲醇40ml，回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml微热使溶解，用水饱和的正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，再用氨试液提取2次，每次20ml，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣5ml使溶解，放冷，通过D型大孔吸附树脂柱(内径1.5cm，长12cm)，以水50ml洗脱，弃去水液，再用40％乙醇50ml洗脱，弃去40％乙醇洗脱液，继用70％乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇2ml便溶解，作为供试品溶液。另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(13∶6∶2)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同的棕褐色斑点；紫外光灯(365nm)下显相同的橙色荧光斑点。
B.取7g，研细，加乙醇50ml加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加醋酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液。另取补骨脂素、异补骨脂素对照品，分别加醋酸乙酯制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正乙烷-醋酸乙酯(4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以40％的氢氧化钾甲醇溶液，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
含量测定：取装差异项下的本品约3g，研细，精密称定，加乙醇50ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，药渣加乙醇同上，再重复回流2次，合并滤液，蒸干，残渣加无水乙醇微热使溶解，转移至10ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另精密称取齐墩果酸对照品适量，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，精密吸取供试品溶液5μl、对照品溶液2μl与4μl，分别交叉点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-丙酮-醋酸乙酯(5∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在100℃加热至斑点显色清晰，取出，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB薄层扫描法)进行扫描，波长：λs＝530nm，λR＝700nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得。
本药物组合物每g含齐墩果酸(C30H18O3)不得少于1.7mg。
Claims (15)
1. 一种治疗白细胞减少的药物组合物，其特征在于该药物组合物是由如下原料药按重量份制成：
黄 芪520-580重量份 鸡血藤440-480重量份 女贞子400-450重量份
白 术190-220重量份 当 归140-180重量份 补骨脂140-180重量份
枸杞子120-170重量份 鹿角胶50-70重量份。
2. 如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物是由如下原料药按重量份制成：
黄 芪520重量份 鸡血藤480重量份 女贞子400重量份
白 术220重量份 当 归140重量份 补骨脂180重量份
枸杞子120重量份 鹿角胶70重量份。
3. 如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物是由如下原料药按重量份制成：
黄 芪580重量份 鸡血藤440重量份 女贞子450重量份
白 术190重量份 当 归180重量份 补骨脂140重量份
枸杞子170重量份 鹿角胶70重量份。
4. 如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物是由如下原料药按重量份制成：
黄 芪542重量份 鸡血藤458重量份 女贞子417重量份
白 术208重量份 当 归167重量份 补骨脂167重量份
枸杞子146重量份 鹿角胶62重量份。
5. 如权利要求1、2、3或4所述的药物组合物，其特征在于该组合物制成片剂、硬胶囊、软胶囊、缓释胶囊、控释胶囊，口服溶液剂、口服混悬剂、口服乳剂、胶浆剂、口服液、乳剂、胶体溶液、合剂、酊剂、滴剂、混悬滴剂、丸剂、颗粒剂、肠溶颗粒剂，散剂或粉剂。
6. 如权利要求5所述的药物组合物，其特征在于所述片剂为缓释片或控释片，丸剂为滴丸。
7. 如权利要求5所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤：
女贞子用4-6倍量乙醇加热回流1-3次，每次1-2小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，滤液浓缩至相对密度在80℃时为1.08～1.12，药渣备用；当归、白术、补骨脂加水5-8倍量温浸1-2小时，水蒸气蒸馏提取挥发油，药渣备用；上述两种药渣与黄芪、鸡血藤、枸杞子加水6-10倍量，煎煮1-3次，每次0.5-1.5小时，滤过，合并滤液，滤液浓缩至每1ml相当于原生药1g，静置20-30小时，取上清液继续浓缩至相对密度在80℃时为1.35～1.38，趁热加入鹿角胶与上述乙醇提取物及上述挥发油，再按照常规工艺加入辅料制成片剂、硬胶囊、软胶囊、缓释胶囊、控释胶囊，口服溶液剂、口服混悬剂、口服乳剂、胶浆剂、口服液、乳剂、胶体溶液、合剂、酊剂、滴剂、混悬滴剂，丸剂、颗粒剂、肠溶颗粒剂，散剂或粉剂。
8. 如权利要求6所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤：
女贞子用4-6倍量乙醇加热回流1-3次，每次1-2小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，滤液浓缩至相对密度在80℃时为1.08～1.12，药渣备用；当归、白术、补骨脂加水5-8倍量温浸1-2小时，水蒸气蒸馏提取挥发油，药渣备用；上述两种药渣与黄芪、鸡血藤、枸杞子加水6-10倍量，煎煮1-3次，每次0.5-1.5小时，滤过，合并滤液，滤液浓缩至每1ml相当于原生药1g，静置20-30小时，取上清液继续浓缩至相对密度在80℃时为1.35～1.38，趁热加入鹿角胶与上述乙醇提取物及上述挥发油，再按照常规工艺加入辅料制成缓释片、控释片或滴丸。
9. 如权利要求7所述的药物组合物的颗粒剂的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤：
女贞子用5倍量乙醇加热回流2次，每次1.5小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，滤液浓缩至相对密度在80℃时为1.08～1.12，药渣备用；当归、白术、补骨脂加水6倍量温浸1小时，水蒸气蒸馏提取挥发油，药渣备用；上述两种药渣与黄芪、鸡血藤、枸杞子加水9倍量，煎煮2次，每次1小时，滤过，合并滤液，滤液浓缩至每1ml相当于原生药1g，静置24小时，取上清液继续浓缩至相对密度在80℃时为1.35～1.38，趁热加入鹿角胶与上述乙醇提取物和糊精520重量份，混匀制粒，干燥，喷入上述挥发油，混匀，制粒，即得。
10. 如权利要求5所述的药物组合物的颗粒剂、片剂或胶囊制剂的质量控制方法，其特征在于该方法中的鉴别方法包括如下鉴别中的一种和/或几种：
A.取本药物组合物制剂7g，研细，加甲醇30-50ml，回流0.5-1.5小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水8-12ml在30-40℃下至溶解，用水饱和的正丁醇提取2-4次，每次15-25ml，合并正丁醇液，再用氨试液提取1-3次，每次15-25ml，弃去氨试液，正西醇液蒸干，残渣5ml使溶解，放冷，通过大孔吸附树脂柱，以水40-60ml洗脱，弃去水液，再用30-50％乙醇40-60ml洗脱，弃去乙醇洗脱液，继用60-80％乙醇40-60ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇2ml便溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以12-14∶5-7∶1-3的氯仿-甲醇-水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以8-12％硫酸乙醇溶液，在102-108℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同的棕褐色斑点；在365nm的紫外光灯下显相同的橙色荧光斑点；
B.取本药物组合物制剂7g，研细，加乙醇40-60ml加热回流20-40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加醋酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液；另取补骨脂素、异补骨脂素对照品，分别加醋酸乙酯制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以3-5∶1的正乙烷-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以35-45％的氢氧化甲醇溶液，置365nm的紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
11. 如权利要求10所述的药物组合物的颗粒剂、片剂或胶囊制剂质量控制方法，其特征在于该方法中的鉴别方法包括如下鉴别中的一种或几种：
A.取本药物组合物制剂7g，研细，加甲醇40ml，回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml在30-40℃下至溶解，用水饱和的正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，再用氨试液提取2次，每次20ml，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣5ml使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱，以水50ml洗脱，弃去水液，再用40％乙醇50ml洗脱，弃去40％乙醇洗脱液，继用70％乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇2ml便溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以13∶6∶2的氯仿-甲醇-水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同的棕褐色斑点；在365nm的紫外光灯下显相同的橙色荧光斑点；
B.取本药物组合物制剂7g，研细，加乙醇50ml加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加醋酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液；另取补骨脂素、异补骨脂素对照品，分别加醋酸乙酯制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以4∶1的正己烷-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以40％的氢氧化钾甲醇溶液，置365nm的紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
12. 如权利要求5所述的药物组合物的颗粒剂、片剂或胶囊制剂的质量控制方法，其特征在于该方法中的含量测定为：
取本药物组合物制剂3g，研细，精密称定，加乙醇40-60ml，加热回流20-40分钟，放冷，滤过，药渣加乙醇同上，再重复回流1-3次，合并滤液，蒸干，残渣加无水乙醇在30-40℃下使溶解，转移至10ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另精密称取齐墩果酸对照品适量，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，精密吸取供试品溶液5μl、对照品溶液2μl与4μl，分别交叉点于同一硅胶G薄层板上，以4-6∶1-3∶1的环己烷-丙酮-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在100℃加热至斑点显色清晰，取出，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照薄层色谱法进行扫描，波长λs＝530nm，λR＝700nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得；
本药物组合物制剂每g含齐墩果酸C30H48O3不得少于1.7mg。
13. 如权利要求10所述的药物组合物颗粒剂、片剂或胶囊制剂的质量控制方法，其特征在于该方法中的含量测定为：
取装量差异项下本药物组合物制剂3g，研细，精密称定，加乙醇50ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，药渣加乙醇同上，再重复回流2次，合并滤液，蒸干，残渣加无水乙醇在30-40℃下使溶解，转移至10ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另精密称取齐墩果酸对照品适量，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，精密吸取供试品溶液5μl、对照品溶液2μl与4μl，分别交叉点于同一硅胶G薄层板上，以5∶2∶1的环己烷-丙酮-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在100℃加热至斑点显色清晰，取出，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照薄层色谱法进行扫描，波长：λs＝530nm，λR＝700nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得；
本药物组合物制剂每g含齐墩果酸C30H48O3不得少于1.7mg。
14. 如权利要求1、2、3或4所述的药物组合物在制备治疗白细胞减少的药物中的应用。
15. 如权利要求14所述的药物组合物的应用，其特征在于所述的治疗白细胞减少是指能增强免疫、升高白细胞或升高红血球和血红蛋白。
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