CN106086173A - 一种基于上转换荧光共振能量转移的快速细菌检测方法 - Google Patents

一种基于上转换荧光共振能量转移的快速细菌检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN106086173A
CN106086173A CN201610422520.0A CN201610422520A CN106086173A CN 106086173 A CN106086173 A CN 106086173A CN 201610422520 A CN201610422520 A CN 201610422520A CN 106086173 A CN106086173 A CN 106086173A
Authority
CN
China
Prior art keywords
fluorescence
conversion
conversion fluorescence
bacteria
energy transfer
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201610422520.0A
Other languages
English (en)
Other versions
CN106086173B (zh
Inventor
林敏�
徐峰
金碧瑞
卢天健
金瀛
张淑静
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Xian Jiaotong University
China Astronaut Research and Training Center
Original Assignee
Xian Jiaotong University
China Astronaut Research and Training Center
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Xian Jiaotong University, China Astronaut Research and Training Center filed Critical Xian Jiaotong University
Priority to CN201610422520.0A priority Critical patent/CN106086173B/zh
Publication of CN106086173A publication Critical patent/CN106086173A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN106086173B publication Critical patent/CN106086173B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6813—Hybridisation assays
    • C12Q1/6816—Hybridisation assays characterised by the detection means
    • C12Q1/6818—Hybridisation assays characterised by the detection means involving interaction of two or more labels, e.g. resonant energy transfer
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/531—Production of immunochemical test materials
    • G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
    • G01N33/533—Production of labelled immunochemicals with fluorescent label
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56911—Bacteria

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种基于上转换荧光共振能量转移的快速细菌检测方法，属于细菌检测技术领域。该方法在纳米金颗粒表面修饰能特异性的识别目标细菌的核酸适配子，在稀土上转换荧光颗粒表面修饰与适配子互补配对的cDNA，两种纳米颗粒混合后，由于两段核酸序列的碱基互补配对，两种颗粒的距离被拉近，从而导致上转换荧光颗粒的荧光被纳米金颗粒猝灭。当加入目标物后，目标物会与cDNA竞争性与适配子结合，从而导致上转换纳米颗粒的荧光恢复。根据不同的荧光恢复强度，可以实现对目标细菌的定量测量。本发明方法灵敏度高，特异性强，操作简便，通过适配子序列的改变可以测定各种目标物，在环境监测及食品分析等方面具有十分重要的意义。

Description

一种基于上转换荧光共振能量转移的快速细菌检测方法
技术领域
本发明属于细菌检测技术领域，具体涉及一种基于上转换荧光共振能量转移的高灵敏度、高特异性的快速细菌检测方法。
背景技术
食源性致病菌致病是当今世界上最为普遍的问题之一。全球每年平均每10人中就有1人因摄入致病菌而致病。
大肠杆菌被认为是粪便污染的指标。当水和食物中检出大肠杆菌，即证明其可能存在粪便污染。因此，大肠菌群数或大肠菌值常作为饮水和食物等的卫生学标准。
大肠杆菌为生物体肠道中的常居菌，多数不致病，但在一定条件下可引起肠道外感染。大肠杆菌菌毛株能产生耐热肠毒素与不耐热肠毒素黏附于小肠粘膜上皮并定居繁殖产生肠毒素导致生物体严重腹泻、脱水最后衰竭死亡，因此，常见致病性大肠杆菌的检测显得格外重要。
传统的平板计数法作为细菌检测的金标准，其检测下限位可达到1cfu/mL,但整个过程需要48-72h，且检测结果不够准确。利用免疫学快速检测技术与富集培养基技术相结合，能使整个过程所需时间减少，为了增加目标抗原量达到检测水平105-107cfu/mL，大多数市场可获得的ELISA方法均结合了传统的预先和后选择富集培养基方法，但整个检测过程还是需要24-56h。而核酸检测方法涉及DNA杂交和PCR技术，也包括菌落杂交、水溶液中单相杂交和几种商业PCR检测试剂盒，它们所需要时间为24小时以上，它们的检测下限位100-102cfu/mL。
因此，从整体水平看，传统的平板计数法检测技术虽然要求低，不需要特殊的仪器，并且价廉，但是耗时费力，检测不准确。利用免疫学快速检测技术与富集培养基技术相结合虽然克服了传统方法的缺点，但富集过程复杂并且要求熟练工人操作，而且由于要得到一个阳性结果需要目标菌数量较高，检测时间仍需要一天以上。
发明内容
本发明的目的在于提供一种基于上转换荧光共振能量转移的快速细菌检测方法，该方法具有快速、高特异性、高灵敏度等优势。
本发明是通过以下技术方案来实现：
一种基于上转换荧光共振能量转移的快速细菌检测方法，包括以下步骤：
1)采用表面配体交换法，使用聚丙烯酸对稀土掺杂上转换荧光纳米粒进行水溶性修饰；
2)合成目标细菌适配子及与该目标细菌适配子碱基互补配对的cDNA单链；
3)采用缩合反应，完成cDNA单链在经步骤1)水溶性修饰后的稀土掺杂上转换荧光纳米粒表面的再次修饰，得到上转换荧光探针；
4)采用金-硫反应，完成步骤2)合成的目标细菌适配子在纳米金颗粒表面的修饰，得到纳米金探针；
5)将步骤3)所得上转换荧光探针与步骤4)所得纳米金探针按1:1的摩尔比混合，并在37℃下孵育30min，得到检测探针，并用荧光光谱测定980nm激发波长时540nm发射波长的荧光值；
6)制备已知浓度的检测体系，得到不同浓度的菌液，然后用步骤5)制得的检测探针，检测不同浓度的菌液，测定荧光恢复值，绘制标准曲线；
7)制备待测样品的检测体系，测定待测样品的荧光值，求得待测样品中的目标细菌的数量。
所述稀土掺杂上转换荧光纳米粒为掺杂镧系金属的上转换荧光纳米粒，且该上转换荧光纳米粒中包含了NaYF4、Er或Yb。
所述稀土掺杂上转换荧光纳米粒采用热分解法制得，具体操作为：分别将NaOH、NH4F、YCl3、稀土激活剂的氯化物以及稀土敏化剂的氯化物加入有机溶剂中，加热至280～290℃，保温反应0.5～3小时，制得稀土掺杂上转换荧光纳米粒。
步骤6)中，制备已知浓度的检测体系，得到不同浓度的菌液，具体操作是：将1-3mL目标细菌接种于200-500mL LB培养基中，35-37℃180-200rpm培养26-32h后，采用平板计数法计算每毫升目标细菌数目：按比例梯度稀释成1-106cfu/mL不同浓度菌液保存。
步骤6)中，绘制标准曲线的具体操作是：分别将不同浓度的菌液与目标物混合经过孵育后，置于石英比色皿中，用荧光光谱测定980nm激发波长时540nm发射波长的荧光值，并与步骤5)所得荧光值做差，绘制得到标准曲线。
步骤7)中，制备样品检测体系的具体操作是：取500-1000μL细菌样品加入灭菌处理的池塘水或自来水中，加入检测探针进行检测，根据测得的待测样品荧光恢复值，查目标细菌浓度对数值与对应的荧光值标准曲线，即求得样品中目标细菌的数量。
与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果：
本发明方法在纳米金颗粒表面修饰能特异性的识别目标细菌的核酸适配子，在稀土上转换荧光颗粒表面修饰与适配子互补配对核酸序列(cDNA)。两种纳米颗粒混合后，由于两段核酸序列的碱基互补配对，两种颗粒的距离被拉近，从而导致上转换荧光颗粒的荧光被纳米金颗粒猝灭。当加入目标物后，目标物会与cDNA竞争性与适配子结合，从而导致上转换纳米颗粒的荧光恢复。根据不同的荧光恢复强度，可以实现对目标细菌的定量测量。本发明方法灵敏度高，特异性强，操作简便，通过适配子序列的改变可以测定各种目标物，在环境监测及食品分析等方面具有十分重要的意义。
附图说明
图1上转换颗粒及纳米金颗粒实物图；其中，(a)为稀土掺杂上转换荧光纳米粒；(b)为纳米金颗粒；
图2为本发明实施例测定大肠杆菌E.coli 8739的荧光光谱强度；
图3为E.coli 8739浓度的对数值与对应的荧光值标准曲线；
图4为该检测探针的特异性实验结果。
具体实施方式
下面结合具体的实施例对本发明做进一步的详细说明，所述是对本发明的解释而不是限定。
本发明的基于上转换荧光共振能量转移的快速细菌检测方法，包括以下步骤：
1)分别将NaOH、NH4F、YCl3以及稀土激活剂的氯化物、稀土敏化剂的氯化物加入有机溶剂中，加热至280～290℃，保温反应0.5～3小时，制得稀土掺杂上转换荧光纳米粒；(具体制备过程，可以参考中国专利：ZL20131 0439588.6)。
2)采用表面配体交换法，使用聚丙烯酸对稀土掺杂上转换荧光纳米粒进行水溶性修饰；
3)选择生化方法合成目标细菌适配子及与适配子碱基互补配对的cDNA单链；
4)采用缩合反应，完成cDNA单链在经步骤2)水溶性修饰后的稀土掺杂上转换荧光纳米粒表面的再次修饰，得到上转换荧光探针；
5)采用金-硫反应完成步骤3)合成的目标细菌适配子在纳米金颗粒表面的修饰，得到纳米金探针；
6)将步骤4)所得探针与步骤5)所得探针按1:1的摩尔比混合并在37℃下孵育30min，得到检测探针，并用荧光光谱测定980nm激发波长时540nm发射波长的荧光值；
7)制备已知浓度的检测体系：将1-3mL目标细菌接种于200-500mL LB培养基中，35-37℃180-200rpm培养26-32h后，采用平板计数法计算每毫升目标细菌数目：按比例梯度稀释成1-106cfu/mL不同浓度菌液保存；
8)用步骤6)制备好的检测探针检测步骤8)的不同浓度的目标细菌，检测荧光恢复值，绘制标准曲线：分别将不同浓度的菌液与目标物混合经过孵育后置于石英比色皿中，用荧光光谱测定980nm激发波长时540nm发射波长的荧光值并与步骤6)所得荧光值做差并绘制标准曲线；
9)制备待测样品检测体系，测定待测样品的荧光值：制备样品检测体系：取500-1000μL细菌样品加入灭菌处理的池塘水、自来水中，按上述步骤加入探针进行检测，根据测得的待测样品荧光恢复值，查目标细菌浓度对数值与对应的荧光值标准曲线，即求得样品中目标细菌的数量。
参见图1，是上转换颗粒及纳米金颗粒实物图；其中，(a)为稀土掺杂上转换荧光纳米粒；(b)为纳米金颗粒。
下面以大肠杆菌ATCC 8739的检测为例，说明本发明方法的效果，具体实验过程，包括以下步骤：
(1)将4.5mL 1％的柠檬酸三钠和1.2mL 0.825％的氯金酸加入100mL煮沸的超纯水中，直到颜色变为酒红色；
(2)采用E.coli 8739为目标细菌，选取由西安生工合成的特异性适配子，其序列为：
5’GCAATGGTACGGTACTTCCCCATGAGTGTTGTGAAATGTTGGGACACTAGGTGGCATAGAGCCGCAAAAGTGCACGCTACTTTGCTAA-SH-3’；
(3)将步骤(2)中适配子中加入4μL 10nM的TCEP，20μL 500mM醋酸盐(pH＝4.76)和100μL蒸馏水活化1小时，加入1)中制备好的纳米金溶液在加入1％的SDS和2M NaCl达到最终浓度为0.01％SDS和0.16M NaCl，14000转离心后去上清液，沉淀溶于1mL PBS获得标记纳米金的适配子；
(4)将粒径30nm的β-NaYF4:Er/Yb(2/18mol％),YCl3·6H2O(242.69mg,0.8mmol),YbCl3·6H2O(69.75mg,0.18mmol)和ErCl3·6H2O(7.64mg,0.02mmol)溶入2mL去离子水中，并加入7.5mL油酸和15mL十八烯在室温下搅拌30分钟之后缓慢加热到120℃恒温1小时再加热到156℃恒温1小时，后在氩气保护下脱水并冷却到室温。加入溶有NH4F(148.15mg,4mmol)和NaOH(100mg,2.5mmol)的甲醇10mL在室温下搅拌2小时。待甲醇挥发后加热溶液至280℃恒温1.5小时后冷却到室温。使用乙醇和环己烷清洗3-5次，在环己烷中保存；
(5)混合14.5μL聚丙乙烯，1mL乙醇和1mL分散到氯仿中的稀土掺杂上转换荧光纳米粒(15mg/ml)，并经过过夜搅拌。以10000转/分钟的速度离心并洗涤2-3次，得到包裹聚丙烯酸的稀土掺杂上转换荧光纳米粒；
(6)选择由西安生工合成的cDNA，其序列为：
5’-NH3-TTAGCAAAGTAGCGTGCACTTTTG-3’；
(7)将1mL步骤(5)制备的包裹聚丙烯酸的稀土掺杂上转换荧光纳米粒以10000rpm离心并重悬在MES溶液中，加入120μL 2mg/mL的EDC以及60μL 2mg/mL的硫化NHS在37℃下孵育2小时。加入步骤6)的cDNA后静置过夜，清洗3次后保存在PBS中；
(8)将200μL步骤(7)获得的连接cDNA的上转换颗粒与200μL步骤(5)获得的连接适配子的金纳米颗粒混合，37℃孵育30分钟，获得检测探针，并在荧光光谱下扫描并记录540nm的峰值，参见图2中0值曲线；
(9)制备已知浓度的检测体系：将1-3mL大肠杆菌ATCC 8739接种于200-500mL LB培养基中，35-37℃，180-200rpm培养26-32h后进行平板计数，求出每毫升大肠杆菌的数目；按比例稀释成102、103、104、105、106、107、108、109cfu/mL 8个浓度；各浓度各取500μL至EP管中，6000-8000g离心10-20分钟后弃上清，每个EP管中加100-200μL PBS溶液待用；
(10)参见图2，加入目标物会导致荧光共振能量转移系统的破裂从而荧光恢复，荧光恢复的数值与目标物的数量相关。用步骤(8)制备好的检测探针检测大肠杆菌ATCC8739，测定荧光恢复值，绘制标准曲线：分别将8个EP管中的溶液置于石英比色皿中，用荧光光谱测定980nm激发波长是540nm发射波长的荧光值，做该荧光值与步骤(8)获得荧光值的差值，根据菌液浓度的对应荧光差值绘制标准曲线；标准曲线参见图3，检测范围在5cfu/mL-106cfu/mL。
(11)对检测体系特异性的检验：在步骤(8)制备的检测探针中加入相同数量的E.coli 8739、E.coli 25922、E.coli DH5a、S.aureus、Bacillus。检测结果参见图4，该检测系统只对目标细菌E.coli 8739具有强烈反应。
(12)制备待测样品检测体系，测定待测样品的荧光值：制备样品检测体系：取步骤(8)制备的检测探针以1000rpm离心10分钟后重悬于PBS溶液中，加入超纯水到终体积达到1mL；将溶液置于石英比色皿中，用荧光光谱测荧光值；根据测得的待测样品荧光恢复值，查大肠杆菌ATCC 8739浓度的对数值与对应的荧光恢复值标准曲线，即求得样品中大肠杆菌ATCC 8739的含量。
通过此实例，可以看出，本发明方法灵敏度高，特异性强，操作简便，并可通过适配子序列的更换测定各种试样，在环境监测及食品安全分析等方面具有十分重要的意义。

Claims (6)

1.一种基于上转换荧光共振能量转移的快速细菌检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)采用表面配体交换法，使用聚丙烯酸对稀土掺杂上转换荧光纳米粒进行水溶性修饰；
2)合成目标细菌适配子及与该目标细菌适配子碱基互补配对的cDNA单链；
3)采用缩合反应，完成cDNA单链在经步骤1)水溶性修饰后的稀土掺杂上转换荧光纳米粒表面的再次修饰，得到上转换荧光探针；
4)采用金-硫反应，完成步骤2)合成的目标细菌适配子在纳米金颗粒表面的修饰，得到纳米金探针；
5)将步骤3)所得上转换荧光探针与步骤4)所得纳米金探针按1:1的摩尔比混合，并在37℃下孵育30min，得到检测探针，并用荧光光谱测定980nm激发波长时540nm发射波长的荧光值；
6)制备已知浓度的检测体系，得到不同浓度的菌液，然后用步骤5)制得的检测探针，检测不同浓度的菌液，测定荧光恢复值，绘制标准曲线；
7)制备待测样品的检测体系，测定待测样品的荧光值，求得待测样品中的目标细菌的数量。
2.根据权利要求1所述的基于上转换荧光共振能量转移的快速细菌检测方法，其特征在于，所述稀土掺杂上转换荧光纳米粒为掺杂镧系金属的上转换荧光纳米粒，且该上转换荧光纳米粒中包含了NaYF4、Er或Yb。
3.根据权利要求2所述的基于上转换荧光共振能量转移的快速细菌检测方法，其特征在于，所述稀土掺杂上转换荧光纳米粒采用热分解法制得，具体操作为：分别将NaOH、NH4F、YCl3、稀土激活剂的氯化物以及稀土敏化剂的氯化物加入有机溶剂中，加热至280～290℃，保温反应0.5～3小时，制得稀土掺杂上转换荧光纳米粒。
4.根据权利要求1所述的基于上转换荧光共振能量转移的快速细菌检测方法，其特征在于，步骤6)中，制备已知浓度的检测体系，得到不同浓度的菌液，具体操作是：将1-3mL目标细菌接种于200-500mL LB培养基中，35-37℃180-200rpm培养26-32h后，采用平板计数法计算每毫升目标细菌数目：按比例梯度稀释成1-106cfu/mL不同浓度菌液保存。
5.根据权利要求1所述的基于上转换荧光共振能量转移的快速细菌检测方法，其特征在于，步骤6)中，绘制标准曲线的具体操作是：分别将不同浓度的菌液与目标物混合经过孵育后，置于石英比色皿中，用荧光光谱测定980nm激发波长时540nm发射波长的荧光值，并与步骤5)所得荧光值做差，绘制得到标准曲线。
6.根据权利要求1所述的基于上转换荧光共振能量转移的快速细菌检测方法，其特征在于，步骤7)中，制备样品检测体系的具体操作是：取500-1000μL细菌样品加入灭菌处理的池塘水或自来水中，加入检测探针进行检测，根据测得的待测样品荧光恢复值，查目标细菌浓度对数值与对应的荧光值标准曲线，即求得样品中目标细菌的数量。
CN201610422520.0A 2016-06-14 2016-06-14 一种基于上转换荧光共振能量转移的快速细菌检测方法 Expired - Fee Related CN106086173B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610422520.0A CN106086173B (zh) 2016-06-14 2016-06-14 一种基于上转换荧光共振能量转移的快速细菌检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610422520.0A CN106086173B (zh) 2016-06-14 2016-06-14 一种基于上转换荧光共振能量转移的快速细菌检测方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN106086173A true CN106086173A (zh) 2016-11-09
CN106086173B CN106086173B (zh) 2019-12-24

Family

ID=57846984

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610422520.0A Expired - Fee Related CN106086173B (zh) 2016-06-14 2016-06-14 一种基于上转换荧光共振能量转移的快速细菌检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN106086173B (zh)

Cited By (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106498047A (zh) * 2016-10-21 2017-03-15 江南大学 基于金‑上转换纳米粒子四面体的双信号原位检测胞内microRNA的方法
CN108196044A (zh) * 2017-12-27 2018-06-22 西安交通大学 一种基于上转换荧光适配体的侧流试纸检测方法
WO2018182510A1 (en) * 2017-03-28 2018-10-04 Agency For Science, Technology And Research Nanomaterial-based bacterial sensors
CN108680545A (zh) * 2018-04-28 2018-10-19 绍兴文理学院 一种食源性致病菌现场快速检测方法
CN108801988A (zh) * 2018-04-02 2018-11-13 军事科学院军事医学研究院环境医学与作业医学研究所 基于上转换荧光适配体传感器的双酚a和雌二醇检测试剂盒及应用和检测方法
CN109283333A (zh) * 2018-09-21 2019-01-29 江南大学 一种基于金壳-上转换手性二聚体对大肠杆菌耐药性定量分析的方法
CN110726840A (zh) * 2019-11-29 2020-01-24 中山大学 Dna-二维材料阵列传感器、微生物检测试剂盒、微生物检测方法和抗菌药分类方法
CN110846286A (zh) * 2019-09-12 2020-02-28 天津大学 利用稀土上转换荧光颗粒标记仙台病毒包膜的方法
CN111683897A (zh) * 2017-11-03 2020-09-18 华盛顿大学 使用编码颗粒的数字核酸扩增
CN111733215A (zh) * 2020-06-24 2020-10-02 深圳市光与生物科技有限公司 一种基于上转换荧光探针的核酸快速检测方法
CN111856012A (zh) * 2020-06-08 2020-10-30 中南民族大学 一种基于上转换纳米材料与碳量子点荧光共振能量转移检测癌抗原125的方法
US20200400641A1 (en) * 2016-02-13 2020-12-24 BacTrac Technologies LLC Lanthanide-Doped Nanoparticle Compositions for Detecting Microorganisms
CN112129732A (zh) * 2020-08-13 2020-12-25 江苏大学 一种基于上转换磁分离的快速检测蜡样芽孢杆菌的方法
CN112255397A (zh) * 2020-10-16 2021-01-22 吉林大学 一种检测单核细胞增多性李斯特菌、副溶血性弧菌和鼠伤寒沙门菌的试剂盒及其制备方法
CN112275335A (zh) * 2020-10-16 2021-01-29 吉林大学 一种自吸阀区隔式芯片、制备方法及单增李斯特菌的检测方法

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102260745A (zh) * 2011-07-27 2011-11-30 中国科学院长春光学精密机械与物理研究所 上转换纳米粒子标记适配子的荧光生物探针
CN103014163A (zh) * 2012-12-19 2013-04-03 江南大学 一种基于适配体识别的鼠伤寒沙门氏菌可视化检测方法
CN103487418A (zh) * 2013-09-18 2014-01-01 广州阳普医疗科技股份有限公司 一种以碳纳米材料为受体的上转换荧光共振能量转移检测方法
CN103773359A (zh) * 2014-02-11 2014-05-07 江苏大学 一种稀土上转换荧光纳米材料表面修饰方法
CN103940792A (zh) * 2014-02-20 2014-07-23 江南大学 一种基于多色上转换荧光标记同时检测三种食源性致病菌的方法
CN104629763A (zh) * 2015-02-09 2015-05-20 天津科技大学 一种基于上转换纳米粒子的传感材料及其制备方法
CN105086999A (zh) * 2015-09-10 2015-11-25 福州大学 聚丙烯酸改性的球状单分散NaGdF4:Yb3+,Er3+上转换荧光粉

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102260745A (zh) * 2011-07-27 2011-11-30 中国科学院长春光学精密机械与物理研究所 上转换纳米粒子标记适配子的荧光生物探针
CN103014163A (zh) * 2012-12-19 2013-04-03 江南大学 一种基于适配体识别的鼠伤寒沙门氏菌可视化检测方法
CN103487418A (zh) * 2013-09-18 2014-01-01 广州阳普医疗科技股份有限公司 一种以碳纳米材料为受体的上转换荧光共振能量转移检测方法
CN103773359A (zh) * 2014-02-11 2014-05-07 江苏大学 一种稀土上转换荧光纳米材料表面修饰方法
CN103940792A (zh) * 2014-02-20 2014-07-23 江南大学 一种基于多色上转换荧光标记同时检测三种食源性致病菌的方法
CN104629763A (zh) * 2015-02-09 2015-05-20 天津科技大学 一种基于上转换纳米粒子的传感材料及其制备方法
CN105086999A (zh) * 2015-09-10 2015-11-25 福州大学 聚丙烯酸改性的球状单分散NaGdF4:Yb3+,Er3+上转换荧光粉

Cited By (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20200400641A1 (en) * 2016-02-13 2020-12-24 BacTrac Technologies LLC Lanthanide-Doped Nanoparticle Compositions for Detecting Microorganisms
CN106498047A (zh) * 2016-10-21 2017-03-15 江南大学 基于金‑上转换纳米粒子四面体的双信号原位检测胞内microRNA的方法
WO2018182510A1 (en) * 2017-03-28 2018-10-04 Agency For Science, Technology And Research Nanomaterial-based bacterial sensors
US11371938B2 (en) 2017-03-28 2022-06-28 Agency For Science, Technology And Research Nanomaterial-based bacterial sensors
US11753681B2 (en) 2017-11-03 2023-09-12 University Of Washington Digital nucleic acid amplification using encoded particles
CN111683897A (zh) * 2017-11-03 2020-09-18 华盛顿大学 使用编码颗粒的数字核酸扩增
CN108196044A (zh) * 2017-12-27 2018-06-22 西安交通大学 一种基于上转换荧光适配体的侧流试纸检测方法
CN108196044B (zh) * 2017-12-27 2021-08-13 西安交通大学 一种基于上转换荧光适配体的侧流试纸检测方法
CN108801988A (zh) * 2018-04-02 2018-11-13 军事科学院军事医学研究院环境医学与作业医学研究所 基于上转换荧光适配体传感器的双酚a和雌二醇检测试剂盒及应用和检测方法
CN108680545A (zh) * 2018-04-28 2018-10-19 绍兴文理学院 一种食源性致病菌现场快速检测方法
CN108680545B (zh) * 2018-04-28 2021-06-29 绍兴文理学院 一种食源性致病菌现场快速检测方法
CN109283333A (zh) * 2018-09-21 2019-01-29 江南大学 一种基于金壳-上转换手性二聚体对大肠杆菌耐药性定量分析的方法
CN110846286A (zh) * 2019-09-12 2020-02-28 天津大学 利用稀土上转换荧光颗粒标记仙台病毒包膜的方法
CN110726840A (zh) * 2019-11-29 2020-01-24 中山大学 Dna-二维材料阵列传感器、微生物检测试剂盒、微生物检测方法和抗菌药分类方法
CN111856012A (zh) * 2020-06-08 2020-10-30 中南民族大学 一种基于上转换纳米材料与碳量子点荧光共振能量转移检测癌抗原125的方法
CN111856012B (zh) * 2020-06-08 2023-10-31 中南民族大学 一种基于上转换纳米材料与碳量子点荧光共振能量转移检测癌抗原125的方法
CN111733215A (zh) * 2020-06-24 2020-10-02 深圳市光与生物科技有限公司 一种基于上转换荧光探针的核酸快速检测方法
CN112129732A (zh) * 2020-08-13 2020-12-25 江苏大学 一种基于上转换磁分离的快速检测蜡样芽孢杆菌的方法
CN112129732B (zh) * 2020-08-13 2023-10-10 江苏大学 一种基于上转换磁分离的快速检测蜡样芽孢杆菌的方法
CN112255397A (zh) * 2020-10-16 2021-01-22 吉林大学 一种检测单核细胞增多性李斯特菌、副溶血性弧菌和鼠伤寒沙门菌的试剂盒及其制备方法
CN112275335A (zh) * 2020-10-16 2021-01-29 吉林大学 一种自吸阀区隔式芯片、制备方法及单增李斯特菌的检测方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN106086173B (zh) 2019-12-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN106086173A (zh) 一种基于上转换荧光共振能量转移的快速细菌检测方法
CN107190063B (zh) 一种等温快速扩增检测食品中致病菌的方法
CN107084962B (zh) 一种检测沙门氏菌的方法
CN108196044A (zh) 一种基于上转换荧光适配体的侧流试纸检测方法
Ren et al. A novel fluorescence resonance energy transfer (FRET)-based paper sensor with smartphone for quantitative detection of Vibrio parahaemolyticus
CN102618655A (zh) 一种检测肺炎支原体的lamp试剂盒
CN103436602B (zh) 双重分子信标-lamp法同时检测金黄色葡萄球菌基因和大肠杆菌基因的试剂盒及方法
Hallier‐Soulier et al. An immunomagnetic separation–reverse transcription polymerase chain reaction (IMS‐RT‐PCR) test for sensitive and rapid detection of viable waterborne Cryptosporidium parvum
CN110106266A (zh) 鉴别铜绿假单胞菌和恶臭假单胞菌的方法
CN104561354A (zh) 一种基于fish技术的活细菌定量检测方法
CN102643919B (zh) 一种食品中副溶血弧菌活菌的检测试剂盒及检测方法
CN102796693A (zh) 一种检测砷生物可利用度的微生物细胞传感器
CN102220417A (zh) 基于磁原位扩增的电化学发光基因传感器检测食品致病菌的方法
Li et al. An autonomous synthetic DNA machine for ultrasensitive detection of Salmonella typhimurium based on bidirectional primers exchange reaction cascades
CN109207615A (zh) 一种免标记荧光检测金黄色葡萄球菌mecA基因的方法及检测试剂盒
CN116554860A (zh) 一种用于检测单增李斯特菌的比率荧光探针及其制备方法
CN108277289A (zh) 大肠埃希氏菌o157:h7干粉化lamp快速检测试剂盒
CN105424927B (zh) 一种副溶血弧菌检测方法
CN116482357A (zh) 一种用于检测单增李斯特菌的荧光淬灭型生物传感器及其制备方法
CN103436623A (zh) 一种食品中沙门氏菌活菌的快速检测试剂盒及使用方法
CN114058721B (zh) 一种上转换荧光识别探针的制备方法及其产品和应用
Ding et al. Development of colloidal gold‐based immunochromatographic strip test using two monoclonal antibodies for detection of Vibrio parahaemolyticus
CN102936625B (zh) 一种用于副溶血性弧菌分子分型的分子马达生物传感器试剂盒
Wang et al. Selective cultivation and rapid detection of Staphylococcus aureus by computer vision
CN102605069B (zh) 肠出血性大肠杆菌o104︰h4检测试剂盒

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20191224