CN106036305A

CN106036305A - 茶藨子叶状层菌深层发酵液加工制成饮料制备方法

Info

Publication number: CN106036305A
Application number: CN201510593039.3A
Authority: CN
Inventors: 廉士文; 徐凌川
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2015-09-15
Filing date: 2015-09-15
Publication date: 2016-10-26

Abstract

茶藨子叶状层菌(也称金银花菌)深层发酵液加工制成饮料的制备方法，其生产工艺属微生物工程技术领域。本发明公开了一种茶藨子叶状层菌规模化人工深层发酵生产技术。其特征是用该菌的纯菌种，经过PDA培养基培养，转为液体培养基培养，再经过种子罐培养放大，按照10％接种量转入生产罐，经过36～72小时生产发酵液体达到最佳。该发酵液富含能量、蛋白质、真菌多糖和有机酸、酮类化学成分；发酵液可以直接加工制成或科学添加食品添加剂后加工制成饮料和口服液。作为健康营养性补充剂使用，它具有清热解毒、抗肿瘤的药理学作用，可用以治疗咽炎、上呼吸道感染和清肺祛霾，以此提升和改善人们生活品质。

Description

茶藨子叶状层菌深层发酵液加工制成饮料制备方法

技术领域

本发明属于微生物工程技术领域，涉及一种茶藨子叶状层菌Phylloporia ribis(Schumach.：Fr.)Ryvarden(学名：茶藨子叶孔菌Phylloporia ribis，曾用名：环棱褐孔菌，也称金银花菌或金芝)深层发酵液加工制成饮料的制备方法，属于传统中药和现代生物技术有机结合的产物。

背景技术

茶藨子叶状层菌Phylloporia ribis(Schumach.：Fr.)Ryvarden)是山东著名道地药材金银花植株上的一种药用真菌，在当地民间具有悠久的药用历史，2002年载入《山东省中药材标准》。该菌子实体用于治疗咽炎、喉炎、扁桃体炎等口腔炎症，临床疗效显著。药理实验研究证明，该菌具有抗炎、抗病毒、抗肿瘤、促进肌体免疫等生物活性，是一种珍贵的、可以替代金银花清热解毒、消炎作用的真菌药物资源。为深入开发利用这一资源，我们对其进行了菌种分离纯化，得到了该菌的纯菌种，并通过液体深层发酵的生物技术，达到规模化人工生产茶藨子叶状层菌发酵液加工制成饮料的目的。

目前，我国金银花年产量仅800万公斤，而国内外市场需求量为2000万公斤以上，每年供需缺口达1200万公斤。本发明生产的发酵液，在一定程度上可以替代金银花使用，以缓解金银花供需矛盾紧张的局面。此外本发明生产的发酵液经检测富含能量、蛋白质、碳水化合物、真菌多糖和含有甾醇类、三萜类、有机酸、酮类化学成分；作为健康营养性补充剂具有抗炎、抗病毒、抗肿瘤的药理学作用，用以治疗咽炎、上呼吸道感染和清肺祛霾，对其加工制作成各种安全剂型的饮料饮品、口服液等意义重大。

发明内容

本发明所用的茶藨子叶状层菌原菌种经鉴定，属真菌界、担子菌门、无隔担子菌纲、非褶菌目、绣革孔菌科真菌。子实体形状不规则，呈扁平状、拳形、半圆形或云片状。菌盖表面粗糙，硬而韧，覆瓦状排列，赤酱色至浅栗色，无光泽，有同心环状棱纹及细微绒毛，1.5-4×3-7cm，边缘薄或稍钝，深肉桂色。无菌柄，子实体背面黄褐色，肉眼可见布满细小的管口，管口浅肝褐色至暗褐色，有时可见成簇的新生子实体。断面可见菌肉呈纤维质，棕黄色，菌管长1-2mm。孢子呈淡黄色，球形或阔卵形，直径3μm。

我们选择用PDA培养基，对该菌进行了菌种分离纯化，得到了该菌的纯菌种，并通过液体培养实验，初步确定了菌丝体的发酵培养基配方为麦芽汁(10Bx)10％，蛋白胨0.3％，葡萄糖1％，蔗糖1％，玉米浆0.5％，PH5.5-6.0。采用以上培养基，27℃培养96小时摇瓶培养菌丝体收率达到较高，可达到1.5％，而此时发酵液收率≤96％。确立了中试发酵生产流程：试管斜面菌种——500ml三角瓶液体种子(装量200ml)——5L血清瓶种子(装量3L)——1吨发酵罐(装量500L)——加工过滤——菌粉干燥——液体收集——灌装灭菌——包装入库。中试发酵培养基和大生产培养基为；麦芽汁(10Bx)15％，蔗糖1％，葡萄糖1％，蛋白胨0.3％，玉米浆0.5％，PH5.5-6.0，培养条件为：装量50％，接种量6-10％；温度27±1℃，搅拌转速160rpm，通气量6立方米/小时，36～72小时菌丝体收率达到最高，可达到1.6％，而此时发酵液收率≤95％，培养基发酵液收率达到最佳且质量稳定。加工方法如下：

一、试管斜面菌种——三角瓶液体种子——血清瓶种子——种子罐——发酵罐生产——发酵液原液——加工过滤——灌装灭菌——包装入库；

二、试管斜面菌种——三角瓶液体种子——血清瓶种子——种子罐——发酵罐生产——发酵液原液——添加食品添加剂——加工过滤——灌装灭菌——包装入库。

为了对发酵液质量进行测评，首先对发酵菌丝进行检验，通过高效液相法测定了该发酵菌丝的脂溶性成分麦角甾醇含量做了测定并与原子实体中麦角甾醇含量做了对比，结果证明以Agilent 1100LC高效液相色谱仪，Zorbax eclipse XDB C8，(150mm×4.6mm)色谱柱，甲醇为流动相，检测波长为282nm，流速1.0ml/min。标准曲线在0.1～0.5mg/ml线性良好，最低限量为0.1mg/ml，RSD＝2.88％，该菌丝中富含麦角甾醇，液体中含有醇类、有机酸类等化合物。

该菌种已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保存(北京市海淀区中国科学院微生物研究所；邮编100080)；

分类命名：茶藨子叶状层菌Phylloporia ribis(Schumach.：Fr.)Ryvarden)(学名：茶藨子叶孔菌；曾用名：环棱褐孔菌)

保藏编号为；CGMCC No.1195，保藏日期2004年7月22日。

附图说明

附图为茶藨子叶状层菌深层发酵液加工制成饮料生产流程。

具体实施方式

茶藨子叶状层菌深层发酵液加工制成饮料生产流程

1、在PDA培养基上的培养情况：将分离到的纯菌种调取少许，转移到PDA培养基上，30℃培养3天，菌落圆形，边缘整齐，平铺，中间部分隆起，白色，絮状，致密，背面黄色，具放射状沟纹，直径2.7-3.2cm。显微镜下观察菌丝无色，细长，具横隔，纵横交错，多分枝，直径2-2.5μm；菌丝细胞的细胞壁薄而透明，菌丝生长初期可见锁状联合，生长后期分枝较多时，锁状联合不明显。

2、液体培养：将马铃薯去除芽眼与外皮，切成1cm见方的小块，称取600克，加水3000ml，用铝锅在电炉上加热，待其沸腾后，保持30分钟，然后用四层纱布过滤，滤液备用。另外称取葡萄糖60克、磷酸二氢钾6克、硫酸镁1.5克、尿素1.2克，加适量水溶解后，与上述马铃薯水煎液混合，最后定容至3000ml。

取3000ml三角瓶，洗净烘干放冷后，每瓶加入上述培养液150ml，注意不要使液体粘附到瓶壁上，上盖棉塞，最后用牛皮纸、橡皮筋封口。在接种菌种之前，将包装好的三角瓶整体置于紫外灯下消毒40分钟。

3、菌丝的接种与培养：取小三角瓶中固体培养生长情况较好的菌丝进行接种，注意剔除底部含有琼脂的固体培养基，菌丝团的直径大约为1～2mm，尽量使所取菌丝团的大小保持一致，每瓶取5个菌丝团。如前重新封瓶后，置于恒温振荡器上进行培养，保持温度27℃，振幅为2cm，震荡速率为100rpm。

4、菌丝体培养条件优化；摇瓶培养的温度和培养时间的确定，采用500ml三角瓶，装量200ml，摇瓶转速150rpm，在30℃温度条件下，发酵后测定菌丝体于重的收率。由此表明菌丝体的适宜培养温度为27℃，在27℃条件下摇瓶培养的时间为96小时。

5、发酵生产：菌丝体的发酵培养基配方为麦芽汁(10Bx)10％，蛋白胨0.3％，葡萄糖1％，蔗糖1％，玉米浆0.5％，PH5.5-6.0。采用以上培养基，27℃养96小时摇瓶培养菌丝体收率达到较高，可达到1.5％，而此时发酵液收率≤96％。确立了中试发酵生产工艺流程：试管斜面菌种——500ml三角瓶液体种子(装量200ml)——5L血清瓶种子(每个装量3L)——500L发酵罐(装量300L)——5吨发酵罐。培养基为：麦芽汁(10Bx)15％，蔗糖1％，葡萄糖1％，蛋白胨0.3％，玉米浆0.5％，PH5.0-6.0。培养条件为：装量60％，接种量10％；温度27℃，搅拌转速160rpm，通气量6立方米/小时，36小时菌丝体收率就达到最高，可达到1.6％，而此时发酵液收率≤95％。

6、方法一、将发酵罐的发酵液与菌丝加工过滤后集中收取原液，不添加食品添加剂，直接通过无菌管道处理方式进行灌装，经加工制成饮料或口服液，然后再次灭菌，包装入库；方法二、将发酵罐的发酵液与菌丝转入板框压滤，并对压滤后菌丝体进行干燥、装袋，Co辐照灭杂菌备用。与此同时集中收取压滤后的液体，通过科学配比添加食品添加剂，并通过无菌管道处理方式进行灌装，经加工制成饮料或口服液，然后再次灭菌，包装入库。

参考文献

[1].Lee IK，Lee JH，Yun BS.Polychlorinated compounds with PPAR-gammaagonistic effect from the medicinalfungus Phellinus ribis[J].Bioorg Med ChemLett.2008Aug15；18(16)：4566

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[6].卫生部公告2013年第1号批准：茶藨子叶状层菌发酵菌丝体为新资源食品

[7].刘玉红，徐凌川，王建平.茶藨子叶孔菌强酸性化学成分的研究《时珍国医国药》2006，17(9)

[8].刘玉红，徐凌川，王建平.褐孔菌属药用真菌化学成分与药理作用研究纂要《中医药学刊》2003，21(12)

[9].刘玉红，徐凌川，王建平.茶藨子叶孔菌化学成分的研究《中药材》2005，28(11)。

Claims

1.一种用发酵法生产茶藨子叶状层菌(也称金银花菌)发酵液的工艺技术，其特征在于：发酵培养基配方为麦芽汁(10Bx)10％，蛋白胨0.3％，葡萄糖1％，蔗糖1％，玉米浆0.5％，PH5.5-6.0；27℃培养96小时摇瓶培养菌丝体收率达到较高，可达1.5％；发酵原液收率≤96％；生产工艺流程：

二、试管斜面菌种——三角瓶液体种子——血清瓶种子——种子罐——发酵罐生产——发酵液原液——添加食品添加剂——加工过滤——灌装灭菌——包装入库；

所述茶藨子叶状层菌Phylloporia ribis(Schumach.：Fr.)Ryvarden，其保藏号为：CGMCC No 1195。

2.一种权利要求1所述的茶藨子叶状层菌Phylloporia ribis(Schumach.：Fr.)Ryvarden，经鉴定学名为茶藨子叶孔菌Phylloporia ribis；其特征在于：该菌是从金银花植株分离纯化得到的菌种，其保藏号为：CGMCC No 1195，固体培养基上生长的菌丝颜色洁白而浓密，生产发酵所得液体为淡黄色或浅褐色。

3.一种权利要求1所述的以茶藨子叶状层菌及其可食用培养基的发酵原液为原料，不添加或添加食品添加剂，经加工制成的饮料饮品和口服液。

4.一种权利要求1所述的茶藨子叶状层菌发酵液，富含能量、蛋白质、碳水化合物、真菌多糖和含有甾醇类、有机酸、酮类等化学成分；作为健康营养补充剂具有抗炎、抗病毒、抗肿瘤的药理学作用，用以治疗咽炎、上呼吸道感染和清肺祛霾而加工制作成的健康饮料饮品、口服液等各种安全剂型。