CN106008740B - 含有支链淀粉的粉末及其制备方法以及用途 - Google Patents
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Abstract
本发明旨在提供不经由溶剂沉淀等的烦琐的纯化步骤而制备,并且,在成形为膜之时示相比以往品更高的断裂强度的含有支链淀粉的粉末和其制备方法以及用途。通过提供含有支链淀粉的粉末,其特征在于,是不经从将属于出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)的微生物的变异株在含葡萄糖及麦芽糖作为碳源的培养基中培养而得到的培养物除去夹杂糖质的步骤而制备的含有支链淀粉的粉末,含在75容积%水性甲醇中不溶的支链淀粉级分和可溶的夹杂糖质级分,基于蒽酮‑硫酸法求出的,相对于粉末全体中含的全糖质含量的夹杂糖质级分中含的夹杂糖质含量的比例是3质量%以下,同时含有甘露糖醇、及其制备方法以及用途来解决上述课题。
Description
本申请是2011年6月17日提交的同名发明专利申请201180034815.6的分案申请。
【技术领域】
本发明涉及含有支链淀粉的粉末和其制备方法以及用途,具体而言,涉及可不经烦琐的纯化步骤而廉价地制备,并且,示优良的特性的新颖的含有支链淀粉的粉末和其制备方法、以及其用途。
【背景技术】
支链淀粉是,如所熟知,由属于作为真菌类之一种的出芽短梗霉(Aureobasidiumpullulans)的微生物产生的无色、无臭的水溶性多糖,基本上是麦芽三糖通过α-1,6键重复键合的直链状的α-葡聚糖。支链淀粉,通常是以水饴等的糖质或淀粉作为碳源而制备的安全、且可食性的多糖。另外,由于具备水溶性、且粘接性强,造膜性优良等的特性,作为食品、药品等的粘结剂或包被材,另外,将可食性膜、染料等的各种成分分散的片、还有,作为封入含有食品或药品领域中使用的功能性成分的颗粒的胶囊等的各种成形物,在以食品为首的,化妆品、药品等广泛的领域中使用。
例如,在特公昭59-4291号公报、特开昭59-111817号公报、及特开平5-285969号公报中公开了支链淀粉膜的制备方法;在特开昭57-155975号公报及特表2009-539719号公报中公开了支链淀粉膜的向食品包装的用途;在专利第3350823号公报中公开了以支链淀粉作为主成分的粘结剂;在特公昭52-6346号公报中公开了使用支链淀粉膜或支链淀粉皮膜的氧化防止方法;在特公昭60-16217号公报中公开了向支链淀粉膜中分散甜味料的膜状膳食甜味料;在特公平7-553号公报及特开2005-21124号公报中公开了向支链淀粉膜中分散药剂等的膜状制剂。另外,在「中村敏、“油化学”、第34卷、第10号、865-871页、1985年」中述对于支链淀粉膜的制备和其利用的概述,在「中村敏、“日本食品科学”、第25卷、第4号、61-67页、1986年」、「中村敏、“食品工业”、第30卷、第10号、株式会社光琳发行、33-39页、1987年」、「田中良直、“包装技术”、第29卷、第8号、852-859页、1991年」、「竹内叶、“コンバーテック”、第28卷、第9号、17-19页、2000年」、及「“食的科学”、通卷277号、3月号、株式会社光琳发行、96-99页、2001」年中介绍了作为可食性膜的支链淀粉膜的制法或用途。
本申请人,首先,在特公昭51-36360号公报、特公昭51-42199号公报、及特公昭55-42635号公报中公开,通过在作为碳源含有水饴等的糖质或淀粉部分分解物的培养基中培养属于出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)的微生物,以工业的规模制备支链淀粉及含有支链淀粉的粉末的方法。支链淀粉在上述微生物的培养物中产生,含支链淀粉的培养物通过离心分离或过滤等除去微生物的菌体,根据需要脱色、脱盐之后,加甲醇等的有机溶剂而纯化。即,支链淀粉在甲醇中不溶,但支链淀粉以外的夹杂糖质,通常在水性甲醇中可溶,所以通过向上述培养物加甲醇等的有机溶剂而使支链淀粉沉淀,分离沉淀和上清,可除去夹杂糖质。通过重复此有机溶剂的添加和沉淀和上清的分离的操作而支链淀粉被纯化,可提高其纯度。纯化的支链淀粉经适宜的粉末化步骤而作为含有支链淀粉的粉末。在特开昭48-21739号公报、特公昭55-27099号公报、及特公昭58-50665号公报中公开了使用如上所述纯化、制备的支链淀粉的膜、包被膜、片、胶囊等的成形物的制备方法。
但是,在通过向含有支链淀粉的培养物加有机溶剂而使支链淀粉沉淀,被称为将其与上清分离的溶剂沉淀的支链淀粉的纯化步骤中,大量的有机溶剂是必要的,即便将使用的有机溶剂通过蒸馏等的手段回收,也无法无视用于回收的装置或有机溶剂中要求的费用,有制品成本升高的不适合。另外,被称为添加有机溶剂而使支链淀粉沉淀而分离的纯化操作自体也由于烦琐而耗工,结果,成为使得到的含有支链淀粉的粉末的价格升高的结果。因此,经如上述一样的纯化步骤制备的含有支链淀粉的粉末如,例如,「中村敏、“油化学”、第34卷、第10号、865-871页、1985年」、「中村敏、“日本食品科学”、第25卷、第4号、61-67页、1986年」、「中村敏、“食品工业”、第30卷、第10号、株式会社光琳发行、33-39页、1987年」、及特公昭60-49164号公报中所记载,止于“试剂用支链淀粉”、或者成分子量测定时的分子量标准的“支链淀粉标准样品”、在药品领域中的“血浆增量剂”等的特殊用途中使用。顺便而言,作为由支链淀粉组成的分子量标志物,在专利第3012917号公报中公开通过使用酰胺键型氧化硅填充柱的顺相分配模式的高效液相层析分离、纯化的支链淀粉。
鉴于上述的事情,本申请人,在专利第3232488号公报中公开,通过调节培养条件,不经由溶剂沉淀的纯化步骤,将每固体物的支链淀粉含量提高至约50质量%以上、优选至约55~90质量%的支链淀粉高含有物和其制备方法以及用途。由于此支链淀粉高含有物不经由溶剂沉淀的烦琐的纯化步骤制备,有可简便地制备、且廉价的益处。另外,本申请人,在专利第4203322号公报中公开了通过含有α,α-海藻糖而提高对湿度变化的稳定性的支链淀粉高含有物和其用途;在特开2003-96103号公报中公开了通过均质地含以葡萄糖作为构成糖的非还原性糖质而提高对湿度变化的稳定性的含有支链淀粉的粉末;在特开2004-261132号公报中公开了使用支链淀粉分解酶分解支链淀粉而制备质量平均分子量/数平均分子量的比降低的支链淀粉的方法。
其后,本申请人再发展上述专利第3232488号公报中得到的见解,不经由溶剂沉淀的纯化步骤而开发了支链淀粉含量提高至90质量%以上的含有支链淀粉的粉末,作为在食品、药品、化妆品中广用的含有支链淀粉的粉末,将被称为“PI-20”(株式会社林原商事销售)、及“PF-20”(株式会社林原商事销售)的2种的含有支链淀粉的粉末制品化(参照「中村敏、“油化学”、第34卷、第10号、865-871页、1985年」、「中村敏、“日本食品科学”、第25卷、第4号、61-67页、1986年」、及「中村敏、“食品工业”、第30卷、第10号、株式会社光琳发行、33-39页、1987年」)。这2种含有支链淀粉的粉末,其后,统合为与“PI-20”大致是同等品的“食品添加物支链淀粉”(株式会社林原商事销售),现在此“食品添加物支链淀粉”在市售。“食品添加物支链淀粉”的粘接力、附着力、被膜性、润滑性优良,同时安全,并且,比较廉价,因此作为广用的含有支链淀粉的粉末,作为食品用的增粘剂、粘接剂、粘着剂、被膜剂,加工成膜状,瞬时溶于水的无地膜,或作为使用可食性墨印刷的印刷膜、将食品、香料等混合的混合膜等,在广泛的领域中使用。
但是,根据本发明人得到的其后的见解,上述“食品添加物支链淀粉”尽管有各种优良的特性,使用其制备的支链淀粉膜,也有由于其厚度,曲折,或湾曲等而产生应力集中位置,则经时从其应力集中位置破裂或断裂,从而不适宜使用的缺点。另外,上述“食品添加物支链淀粉”尽管支链淀粉含量达90质量%以上,但支链淀粉含量或含的支链淀粉的分子量分布在每制备批中不恒定,有难得到在溶解性或粘结力等的方面品质一定的产品的缺点。即,根据本发明人所确认,在“食品添加物支链淀粉”中的支链淀粉含量尽管在90质量%以上,但通常、在每制备批中在约90~96质量%的范围内变动。伴随此变动,所含的支链淀粉以外的夹杂糖质的含量也在约4~10质量%左右的范围内变动,如果夹杂糖质的含量有2倍以上的变动幅,则当然会对含有支链淀粉的粉末的溶解性或粘结性等产生影响,就会有难得到在溶解性或粘结力等的方面品质一定的产品的问题。同样地,如果所含的支链淀粉的分子量分布有变动,则会对含有支链淀粉的粉末中含的支链淀粉自体的溶解性或粘结力产生影响,随着夹杂糖质含量的变动,含有支链淀粉的粉末的溶解性或粘结力会变动。因此,将“食品添加物支链淀粉”在以膜为首的成形物中使用之时,得到的成形物的强度、溶解性、崩解性等的性质,在极端的情况中,在“食品添加物支链淀粉”的每制备批中会不同。例如,药品要求施用之后的有效成分的吸收、分布、代谢、排泄等的在活体内的动态恒定,其中使用的药品添加物不对药品的药理作用产生影响而体内动态必需维持稳定,但在将以往的“食品添加物支链淀粉”作为药品添加物,例如作为药品的锭剂等的粘结剂使用之时,有效成分的溶出的速度在每制品不恒定,给在活体内的药物动态带来影响。如此,“食品添加物支链淀粉”,无论是作为食品用,还是作为要求强度或溶解性、粘结力等的性质恒定、且药效成分的体内动态常恒定的药品用、或者准药品用或化妆品用等的添加物,都说不上是必然充分。使支链淀粉,或含有支链淀粉的成形物的用途不停留于食品,而为了扩大到食品以外的药品、准药品、化妆品等,要求每制品无偏差的恒定、且一定的品质的制品的提供的领域,另外,即便是食品等的从以往就使用“食品添加物支链淀粉”的领域,为了再扩大到相比支链淀粉膜等的含有支链淀粉的成形物要求更高的强度的用途,解消作为广用的含有支链淀粉的粉末的“食品添加物支链淀粉”具有的上述的缺点是不可或缺的。
【发明内容】
本发明旨在解消以往的含有支链淀粉的粉末具有的上述的缺点,不经由溶剂沉淀等的烦琐的纯化步骤而制备,并且,在成形为膜之时示相比以往品更高的断裂强度,同时有将夹杂糖的含量稳定维持到极其少的水平的一定的组成,优选为,旨在提供所含的支链淀粉的分子量分布在一定的范围内的含有支链淀粉的粉末和其制备方法、以及那样的含有支链淀粉的粉末的用途。
本发明人在为了解决上述课题而重复锐意研究,在重复各种试行错误之中发现,在从属于出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)的微生物人为地创制的变异株之中,在含葡萄糖及麦芽糖作为碳源的选择培养基中培养之时,尽管支链淀粉的生成量与亲本株是同程度,但支链淀粉以外的糖质、即夹杂糖质的比例相比亲本株更显著地少的几种变异株。在这些的变异株之中,选择夹杂糖质的比例最少的变异株,将其在含有葡萄糖及麦芽糖作为碳源的培养基中培养,从该培养物,不经使用有机溶剂使支链淀粉沉淀的由溶剂沉淀的纯化步骤,基于常规方法制备含有支链淀粉的粉末时,尽管微少含有作为属于出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)的微生物的代谢产物的甘露糖醇,但得到夹杂糖质含量相比上述“食品添加物支链淀粉”显著地更少的含有支链淀粉的粉末。使用此含有支链淀粉的粉末通过常规方法成形支链淀粉膜时,其断裂强度相比上述使用“食品添加物支链淀粉”得的支链淀粉膜显著地更高。再者,此含有支链淀粉的粉末,无关于制备批,夹杂糖质含量稳定地维持在极其少的水平,糖质组成大致一定,同时所含的支链淀粉的分子量分布稳定地在一定的范围内,所以不仅上述断裂强度,在对水的溶解性或将其他物质相互结合的粘结力等的方面也常可期待一定的品质,例如,在成形为膜、片、锭剂、颗粒等的药品、准药品、化妆品等中使用的成形物时,可在强度、溶解性、崩解性等的性质面维持一定的品质。从而,可得到有药品、准药品、化妆品等中要求的一定、且恒定的性质的成形物,特别是即便在药品中使用,也无由于溶解性或崩解性的偏差等给有效成分的体内动态带来影响的担忧,所以此含有支链淀粉的粉末也可作为药品添加物使用。本发明基于这些见解完成。
即,本发明通过提供含有支链淀粉的粉末解决上述的课题,所述含有支链淀粉的粉末特征在于,是不经从将属于出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)的微生物的变异株在含葡萄糖及麦芽糖作为碳源的培养基中培养而得到的培养物除去夹杂糖质的步骤而制备的含有支链淀粉的粉末,含在75容积%水性甲醇中不溶的支链淀粉级分和可溶的夹杂糖质级分,基于蒽酮-硫酸法求出的,相对于粉末全体中含的全糖质含量的夹杂糖质级分中含的夹杂糖质含量的比例是3质量%以下,同时含有甘露糖醇。
本发明的含有支链淀粉的粉末,如上所述,以相对于粉末全体中含的全糖质含量的夹杂糖质级分中含的夹杂糖质含量的比例是3质量%以下而极其少作为大的特征,上述全糖质含量及上述夹杂糖质含量均基于蒽酮-硫酸法求出。蒽酮-硫酸法,如众所周知,是利用由蒽酮的呈色反应的糖质的定量方法,由该呈色反应的吸光度作为与糖质的量成比例的值得到,所以可基于该值测定糖的量。再有,在定量以葡萄糖作为构成糖的糖质时,可通过将D-葡萄糖作为标准物质使用而作为D-葡萄糖换算量求出。蒽酮-硫酸法,在“食品添加物公定书”(第8版)、日本食品添加物协会发行、2007年、572-573页(“支链淀粉”的项)中,也作为在支链淀粉的纯度试验中的“单糖类及少糖类”的测定方法被采用。上述“食品添加物公定书”记载的方法是作为在斯界中的支链淀粉纯度的测定方法广泛被认知的标准的方法,所以在本发明中,如后述的实验2~3所示,以上述“食品添加物公定书”记载的“单糖类及少糖类”的测定方法作为基准,求出相对于粉末全体中含的全糖质含量的夹杂糖质含量的比例。
但是,在糖质之中,例如,如后述的甘露糖醇一样,存在在蒽酮-硫酸法中不呈色,无法检测的糖质,基于蒽酮-硫酸法求出的全糖质含量及夹杂糖质含量虽然不必然对应于严格意义上的全糖质含量及夹杂糖质含量,但在本说明书中,只要未特别说明,将基于蒽酮-硫酸法求出的全糖质含量简称为“全糖质含量”、将基于蒽酮-硫酸法求出的夹杂糖质级分中的夹杂糖质含量简称为“夹杂糖质含量”。
顺便而言,在含有支链淀粉的粉末中的支链淀粉含量是将在支链淀粉级分中的支链淀粉含量,以夹杂糖质含量为基准,基于蒽酮-硫酸法求出也可,但本发明的含有支链淀粉的粉末是由支链淀粉级分和夹杂糖质级分组成的粉末,所以可通过从上述全糖质含量减算上述夹杂糖质含量来更简便地求出。从而,在本发明的含有支链淀粉的粉末中,如果相对于全糖质含量的夹杂糖质含量的比例在3质量%以下,在支链淀粉级分中的支链淀粉含量成为全糖质含量的97质量%以上。再有,在此支链淀粉含量中,当然,不含在如甘露糖醇一样的蒽酮-硫酸法中检测不到的糖质的量。如此,在本发明的含有支链淀粉的粉末中尽管含夹杂糖质,但其量最大也就是全糖质含量的3质量%,是极其少量,所以假设,即便夹杂糖质含量在从超过0质量%到3质量%的范围变动,相对于其余的97质量%以上的支链淀粉的变动比例小,作为全体,在本发明的含有支链淀粉的粉末中的全糖质组成是大致一定的。
另外,本发明的含有支链淀粉的粉末,如上所述,以含有甘露糖醇作为另一大的特征。甘露糖醇虽然依赖于培养中使用的碳源的种类,但通常是作为属于出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)的微生物的代谢产物在培养物中含的物质。但是,甘露糖醇可溶于水性甲醇,所以在培养物由使用有机溶剂的溶剂沉淀被纯化之时被除去。从而,甘露糖醇不被除去而在粉末中含有示,本发明的含有支链淀粉的粉末是不经通过使用有机溶剂的溶剂沉淀等除去夹杂糖质的步骤而制备的含有支链淀粉的粉末。在所述含有支链淀粉的粉末中通常存在以无水物换算计2质量%左右的不由蒽酮-硫酸法呈色而无法检测的糖质成分,其主成分是甘露糖醇。
顺便而言,甘露糖醇的量可,例如,通过后述的实验4所示的高效液相层析(HPLC)分析求出。由上述HPLC分析的甘露糖醇的检测限界通常被认为是0.01质量%左右,所以本发明的含有支链淀粉的粉末含有甘露糖醇是指在粉末中含有以无水物换算计0.01质量%以上的甘露糖醇。另外,虽然也依赖于培养中使用的碳源的种类,但本发明的含有支链淀粉的粉末中含的甘露糖醇的含量,通常不超过以无水物换算计2质量%。再有,甘露糖醇是在75容积%水性甲醇中可溶,所以通常含在夹杂糖质级分中,如前所述,由于用蒽酮-硫酸法检测不到,所以在上述夹杂糖质含量中不含。
如上所述,本发明的含有支链淀粉的粉末含有甘露糖醇,即便是不经通过使用有机溶剂的溶剂沉淀等除去夹杂糖质的步骤制备的含有支链淀粉的粉末,夹杂糖质含量是全糖质含量的3质量%以下,是极其少量。如此又含甘露糖醇,并且,夹杂糖质含量是极其少量的含有支链淀粉的粉末,据本申请人所知,在本申请申请前不存在,是新颖的含有支链淀粉的粉末。
本发明的含有支链淀粉的粉末,成形含有支链淀粉的粉末而得到的厚度100μm的膜、更具体而言,将含有支链淀粉的粉末的20质量/容积%水溶液在平板上流延之后,于25℃干燥,再在相对湿度22%的气氛调湿而得到的厚度100μm的膜,在使用截面积1mm2的突刺试验用适配体进行的突刺强度试验中,显示20MPa以上的突刺断裂强度。此突刺断裂强度,如通过后述的实验示,相比使用上述“食品添加物支链淀粉”得到的支链淀粉膜更显著地高,本发明的含有支链淀粉的粉末即便是不经由溶剂沉淀等的支链淀粉的纯化步骤制备的,说起来是“广用品”,示成形为膜时,有突刺断裂强度大的优良的特性。
另外,本发明通过提供含有支链淀粉的粉末的制备方法解决上述的课题,所述方法的特征在于包括将属于出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)的微生物的变异株在含葡萄糖及麦芽糖作为碳源的培养基中培养的步骤、将得到的培养物除去菌体、脱色、脱盐、浓缩、及粉末化的步骤,不包括夹杂糖质的除去步骤。
本发明的制备方法中使用的属于出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)的微生物的变异株只要可不经夹杂糖质的除去步骤,制备本发明的含有支链淀粉的粉末,则是何变异株均可,不特别限定,例如,作为其适宜的一例,可举出后述的出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)S-2株(专利生物保藏中心保藏号FERM BP-11261)的变异株。这样的变异株,基于本说明书的公开,以S-2株作为亲本株,可通过向其适用惯用的变异方法和后述的实验中所述的筛选方法得到。即,如后述的实验1所示,将S-2株用惯用的变异方法随机地变异,对得到的变异株在含葡萄糖及麦芽糖作为碳源的培养基中培养之时,以培养物中含的支链淀粉以外的夹杂糖质的含量作为指标进行筛选,选择其含量相比作为亲本株的S-2株更显著地少的即可。
在如上述一样得到的变异株之中,作为可适宜地使用的变异株之一例,可举出例如,变异株MA446株(专利生物保藏中心保藏号FERM BP-11250)。
本发明的含有支链淀粉的粉末是不经溶剂沉淀等的烦琐的纯化步骤制备的廉价的含有支链淀粉的粉末,且成形为膜的时,有得到突刺断裂强度大,所以例如,作为支链淀粉膜,可在更宽的用途中使用的益处。另外,根据本发明的含有支链淀粉的粉末的制备方法,得到可不要求溶剂沉淀等的烦琐的纯化步骤,简便并且廉价地,制备具备如上述一样的优良的益处的含有支链淀粉的粉末的益处。
另外,本发明通过提供将本发明的含有支链淀粉的粉末在至少原料的一部分中使用而制备的含有支链淀粉的成形物来解决上述的课题。即,本发明的含有支链淀粉的粉末,如上所述,即便是不经由溶剂沉淀等的支链淀粉的纯化步骤制备的,说起来是“广用品”,在成形为膜之时,有突刺断裂强度大的优良的特性。而且,本发明的含有支链淀粉的粉末的夹杂糖质含量是3质量%以下,极其低,有高的支链淀粉纯度,即便制备批不同,糖质组成也维持在大致一定,同时优选为,所含的支链淀粉的分子量分布在于一定的范围内,所以断裂强度自不用说,溶解性或粘结力等的性质也变动或偏差少,可作为药品添加物,在要求有效成分的体内动态常常一定的药品、准药品、化妆品等中使用。作为药品等中使用的形态,不仅膜,可作为用于例如,作为片、锭剂、颗粒、纤维等的成形物,或者,作为包被剂、糖衣剂、赋形剂、粘着剂等,还有,作为液剂使用的即时溶解型的固体制剂,可得到有药品、准药品、化妆品等要求的一定、且恒定的性质的成形物。尤其是,在药品中使用之时,本发明的含有支链淀粉的粉末在溶解速度或崩解速度、断裂强度等的性质面,每制品无偏差,无由溶解性或崩解性的偏差等给有效成分的体内动态带来影响的担忧,所以可作为药品添加物使用。再有,本发明的含有支链淀粉的粉末也可通过由在药品制备中一般使用的公知的方法作为无热原的,而作为用于在注射剂等中使用的即时溶解型的固体制剂的原料使用。
【附图说明】
【图1】是使本发明的含有支链淀粉的粉末的水溶液经历凝胶渗透层析而得到的溶出图。
【图2】是使“食品添加物支链淀粉”的水溶液经历凝胶渗透层析而得到的溶出图。
【图3】是使本发明的含有支链淀粉的粉末的75容积%水性甲醇可溶的夹杂糖质级分的水溶液经历凝胶渗透层析而得到的溶出图。
【图4】是使“食品添加物支链淀粉”的75容积%水性甲醇可溶的夹杂糖质级分的水溶液经历凝胶渗透层析而得到的溶出图。
【图5】成形在本发明的含有支链淀粉的粉末而得到的膜的由放射光的X射线小角散射分析中,散射角2θ的范围是0.001~0.1°的回折图。
【图6】成形在本发明的含有支链淀粉的粉末而得到的膜的由放射光的X射线小角散射分析中,散射角2θ的范围是0.01~2°的回折图。
【实施方式】
本发明的含有支链淀粉的粉末,如前所述,是具有如下特征的含有支链淀粉的粉末,其为不经从将属于出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)的微生物的变异株在含葡萄糖及麦芽糖作为碳源的培养基中培养而得到的培养物除去夹杂糖质的步骤而制备的含有支链淀粉的粉末,含在75容积%水性甲醇中不溶的支链淀粉级分和可溶的夹杂糖质级分,相对于粉末全体中含的全糖质含量的夹杂糖质含量的比例是3质量%以下,同时含有甘露糖醇。再有,75容积%水性甲醇是指将水和甲醇以容积比1:3混合的混液。
属于出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)的微生物的变异株只要可不经从其培养物,除去夹杂糖质的步骤而制备本发明的含有支链淀粉的粉末,是何变异株都可。作为所使用的亲本株,可使用例如,作为「上田诚之助、“工业化学杂志”、第67卷、757-760页、1964年」中记载的支链淀粉产生菌的芽霉属(Pullularia sp.)S-2株。再有,芽霉(Pullularia)属现在被分类为短梗霉(Aureobasidium)属,在短梗霉(Aureobasidium)属中,仅知出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)1种。S-2株产生支链淀粉,另外,如后所述,与出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)有极好的一致的培养性状,所以被鉴定为是属于出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)的微生物,在茨城县筑波市东1丁目1番地1中央第6所在的独立行政法人产业技术综合研究所、专利生物保藏中心中,于2010年6月28日,以保藏号FERM BP-11261保藏。
为了得到本发明中所使用的属于出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)的微生物的变异株,在上述S-2株中实施,例如,「杉山纯多等编、“新版微生物化学实验法”、株式会社讲谈公司Scientific、1999年3月20日发行、126-133页」中记载的,由紫外线照射或变异剂的药剂处理等的本领域中通常进行的突变处理而得到变异株、对于得到的变异株,以在含葡萄糖及麦芽糖作为碳源的培养基中培养之时培养物中含的支链淀粉以外的夹杂糖质的含量作为指标进行筛选,选择其含量相比作为亲本株的S-2株更显著地少的即可。在后述的实验1中,详述筛选的方法之一例。作为本发明中使用的变异株,在含葡萄糖及麦芽糖作为碳源的选择培养基中培养之时,培养物中含的支链淀粉以外的夹杂糖质的含量优选相比将作为亲本株的S-2株在同培养基中培养之时更低,更优选是成将作为亲本株的S-2株在同培养基中培养之时的50%以下。
如上所述,本发明的含有支链淀粉的粉末绝对不限于由特定的变异株的培养物制备的,作为可制备本发明的含有支链淀粉的粉末的适宜的变异株的具体例,可举出对上述出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)S-2株实施突变而得到的变异株出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)MA446株。变异株MA446株与作为亲本株的S-2株同样产生支链淀粉,另外,如后所述,与出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)有极良好一致的培养性状,所以被鉴定为是属于出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)的微生物,在茨城县筑波市东1丁目1番地1中央第6所在的独立行政法人产业技术综合研究所、专利生物保藏中心中,于2010年4月30日以保藏号FERM BP-11250进行保藏。
顺便而言,作为亲本株的S-2株及变异株MA446株的培养性状如下。
<S-2株及变异株MA446株的培养性状>
在马铃薯右旋糖琼脂培养基(马铃薯浸出液末4.0g、葡萄糖20.0g、琼脂15.0g、纯化水1,000ml、pH5.6)上于27℃好氧地培育,产生暗黑色的染料。不确认到变形而移动的样子或子实体的形成。观察不到有性生殖,在菌丝中确认隔壁。在培育约4天往后,形成单性房状出芽型的分生子,从直链状的菌丝尖端或中间发生出芽型分生子。成熟的分生子作为单胞存在,无色、滑面。
作为变异株的培养中使用的培养基,只要是基本上,培养后,培养基中含的夹杂糖质的含量少,可不经从培养物夹杂糖质的除去步骤,制备本发明的含有支链淀粉的粉末,就不特别限制,与为了支链淀粉产生而培养属于出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)的微生物中使用的培养基同样地,可使用适宜含有碳源、氮源、有机营养源、无机物质等的培养基。
作为碳源,使用含有葡萄糖及麦芽糖的糖质混合物,优选为,含有葡萄糖及麦芽糖的右旋糖-当量(以下,表示为“DE”)50~90的糖质、更优选为,使用各自以无水物换算计10质量%以上含有葡萄糖及麦芽糖的糖质。在作为碳源缺少葡萄糖或麦芽糖之任何或双方时,培养物的夹杂糖质的含量不变那么低,制备本发明的含有支链淀粉的粉末变得困难。另外,在作为碳源所使用的糖质的DE不足50或超90之时,支链淀粉的生成不变少,在得到的含有支链淀粉的粉末中的支链淀粉的含量降低,相对夹杂糖质的含量增加,所以不喜好。再有,培养基中的碳源的浓度作为5~20质量/容积%是优选的。
作为氮源,使用选自铵盐、硝酸盐等的无机氮源或谷氨酸盐、胨、酵母提取物、玉米浆等的有机氮源等的1种或2种以上。此外,作为无机物质,适宜使用磷酸盐、镁盐、铁盐等。培养在通气下搅拌或振荡而好氧地进行是优选的。作为培养温度,适宜于出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)的培育的27℃是适宜的。作为培养时间,碳源被消费,支链淀粉的产生量变得大致最大,夹杂糖质的含量降低而至成大致一定是优选的。另外,根据需要,为了增大支链淀粉的产生量或作为所望的分子量,通过向培养基添加适宜的pH调节剂,或间歇或连续地移出培养液而适宜供给-补足新鲜的营养培养基来调节培养液的稀释速度下进行连续培养也可。
从如上述一样得到的培养物,通过离心分离或过滤等的惯用的适宜的方法除去菌体,可得到含支链淀粉的培养上清。将得到的培养上清通过由常规方法,脱色、脱盐、浓缩、干燥、粉末化,可得到本发明的含有支链淀粉的粉末。
作为脱色处理,通常进行使用粉末活性炭的过滤。另外,在脱盐处理中,通常、使用阳离子交换树脂及阴离子交换树脂。作为阳离子交换树脂,可适宜使用例如,“DIAIONPK218”(三菱化学株式会社制备)或,“DIAION SK-1B”(三菱化学株式会社制备)等,作为阴离子交换树脂,可适宜使用“DIAION WA30”(三菱化学株式会社制备)或,“AmberliteIRA411”(有机株式会社销售)等的市售的离子交换树脂。
干燥及粉末化基于常规方法进行即可,例如,干燥后,将得到的块粉碎而粉末化也可,由喷雾干燥法同时进行干燥和粉末化也可。
如上述一样得到的本发明的含有支链淀粉的粉末,其相对于粉末全体中含的全糖质含量的夹杂糖质含量是3质量%以下,换言之,支链淀粉含量稳定为97质量%以上,更优选为,相对于粉末全体中含的全糖质含量的夹杂糖质含量是1质量%以下,换言之,支链淀粉含量极其稳定为99质量%以上,并且,含有甘露糖醇。
顺便而言,在本发明的含有支链淀粉的粉末中,在夹杂糖质级分中的夹杂糖质中,含葡萄糖聚合度3~90的糖质。葡萄糖聚合度3~90的糖质是指,具体而言,如后述的实验4中记载,使在含有支链淀粉的粉末的75容量%水性甲醇中可溶的夹杂糖质级分经历凝胶渗透层析(以下,简称为“GPC”)之时,相当于葡萄糖聚合度3~90的分子量、即,考虑到在由GPC求出的平均分子量中含一定的误差,是在分子量500~15,000道尔顿的范围检测的成分。
在本发明的含有支链淀粉的粉末中,上述的葡萄糖聚合度3~90的糖质的含量在粉末全体中含的全糖质含量的2质量%以下是优选的。葡萄糖聚合度3~90的糖质的含量超2质量%,则在成形为膜之时,有得不到所期的突刺断裂强度的情况而不喜好。顺便而言,上述葡萄糖聚合度3~90的糖质,当向其作用支链淀粉酶之时,作为主成分生成麦芽三糖和少量的麦芽四糖,所以被认为是有基本上麦芽三糖以α-1,6结合聚合的支链淀粉样的结构的糖质。但是,尽管此糖质有支链淀粉样的结构,但是在75容积%水性甲醇中可溶的低分子量的糖质。
如前所述,尽管依赖于培养基中使用的碳源的种类,在属于出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)的微生物的培养物中,通常含作为所述微生物的代谢产物的甘露糖醇。甘露糖醇在75容积%水性甲醇中可溶,只要不由溶剂沉淀等进行夹杂糖质的除去,含在从上述培养物制备的含有支链淀粉的粉末中。从而,含有支链淀粉的粉末中含甘露糖醇示,所述含有支链淀粉的粉末不经由溶剂沉淀等的夹杂糖质的除去步骤而制备。如前所述,甘露糖醇在蒽酮-硫酸法中检测不到,但含有支链淀粉的粉末中的甘露糖醇的量可例如由后述的实验4中所使用的高效液相层析(HPLC)分析求出。在本发明的含有支链淀粉的粉末中的甘露糖醇的量是以无水物换算计,通常、含有支链淀粉的粉末的0.04质量%以上,不超2质量%。
作为本发明的含有支链淀粉的粉末的主成分的支链淀粉的分子量只要在成形为膜之时得到期望的突刺断裂强度,就不特别限制,但作为基于GPC分析的质量平均分子量(以下,表示为Mw)在约50,000~1,000,000道尔顿是优选的,在约50,000~500,000道尔顿是更优选的。Mw低于50,000道尔顿,则成形为膜变得困难而不喜好,另外,高于1,000,000道尔顿,则其水溶液的粘度变得过高而有发生难处理的问题之时。
另外,从属于出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)的微生物的培养物,经脱色、脱盐、浓缩、干燥、及粉末化步骤,在不经溶剂沉淀等的夹杂糖质的除去步骤制备的含有支链淀粉的粉末中,对成为分子量分布的指标的支链淀粉的数平均分子量(以下,表示为Mn)的Mw的值(即Mw/Mn)通常成约10~70。在本发明的含有支链淀粉的粉末中,Mw/Mn的值只要在成形为膜之时得到期望的突刺断裂强度,就不特别限制,但100以下是适宜的,更适宜在约10~70的范围是优选的。Mw/Mn的值超100,即分子量分布更宽时,则造膜性不稳定而成形为膜之时难稳定地得到突刺断裂强度高的膜。
本发明的含有支链淀粉的粉末是白色、且粉末而流动性优良,与以往的含有支链淀粉的粉末同样示对水良好的溶解性。本发明的含有支链淀粉的粉末可根据用途,其他材料、例如,选自支链淀粉以外的多糖类、增量剂、赋形剂、填充剂、增粘剂、表面活性剂、发泡剂、消泡剂、pH调节剂、稳定剂、难燃剂、离形剂、抗菌剂、着色剂、着香剂、营养物、嗜好物、呈味物、药效物质及生理活性物质的1种或2种以上的,在食品、药品、准药品及化妆品领域一般使用的成分混合使用。另外,本发明的含有支链淀粉的粉末在作为成形物的具体例成形为膜之时突刺断裂强度优良,与以往的含有支链淀粉的粉末有同样的良好的溶解性,且作为膜的使用耐性优良,所以可作为食品、药品、及化妆品等的领域中使用的膜、片或包被的原材料有利地利用。再有,将本发明的含有支链淀粉的粉末成形为膜等之时,作为剥离剂可使用含蔗糖脂肪酸酯等的糖脂肪酸酯的表面活性剂。
另外,本发明的含有支链淀粉的粉末,如上所述,共具对水的良好的溶解性和成形为膜等之时高的强度,而且,全糖质中的夹杂糖质含量是3质量%以下,且支链淀粉含量是97质量%以上,即支链淀粉纯度高,糖质组成大致一定,而且,所含的支链淀粉自体的分子量分布稳定而在一定的范围内,所以在将其在成形物中使用之时,可期待给所述成形物带来常常一定的强度或溶解速度、崩解速度。从而,本发明的含有支链淀粉的粉末可在不仅食品,作为药品添加物,要求有效成分的体内动态常常一定的药品、准药品、化妆品等中使用,膜自不必说,可作为作为片、纱布或手术丝等中使用的纤维等的成形物,或者,作为制备锭剂或颗粒剂之时的赋形剂、粘结剂或包被剂等,还有,用于作为液剂使用的即时溶解型的固体制剂。在如此得到的化妆品、药品、及准药品中,有每制品无偏差的稳定、且恒定的之一定的品质,特别在药品中,无由溶解性或崩解性的偏差等而给有效成分的体内动态带来影响的担忧。
在将本发明的含有支链淀粉的粉末在至少原料的一部分中使用而制备的成形物中,本发明的含有支链淀粉的粉末以外,可适宜配合在各自的领域中广用的各种成分。在上述成形物是化妆品或其中间制品之时,可作为包装、罩、浴用剂、口中清凉膜等的形态,可将例如,对氧基安息香酸酯、氯化苯扎铵、戊烷二醇等的防腐剂、熊果苷、鞣花酸、四氢类姜黄素、维生素P等的美白剂、甘草酸、甘草提取物等的抗炎症剂、乳铁蛋白、硫酸软骨素、透明质酸、感光素101号、感光素301号等的细胞赋活剂、弹性蛋白、角蛋白、尿素、神经酰胺等的保湿剂、角鲨烷、凡士林、三-2-乙基己酸鲸蜡酯等的油剂、角叉菜胶、羧甲基纤维素、豆角胶、羧基乙烯基聚合物等的水溶性高分子、1,3-丁二醇、聚乙二醇、丙二醇、山梨糖醇、麦芽糖醇等的醇类等,各自1种或2种以上、单独或适宜组合而配合。
另外,在上述成形物是药品或准药品或其中间制品之时,可作为颗粒、锭剂、糖衣锭等的形态,可将例如,硫唑嘌呤、环孢菌素、环磷酰胺、甲氨喋呤、他克莫司水和物、白消安等的免疫抑制剂、卡培他滨、利妥昔单抗、曲妥珠单抗、贝伐珠单抗、多西他赛、伊马替尼甲磺酸盐、5-氟尿嘧啶、阿那曲唑、泰素、他莫昔芬、多西他赛、羟基脲等的抗癌剂、阿巴卡韦硫酸盐、扎西他滨、去羟肌苷、泛昔洛韦、利巴韦林等的抗病毒剂、阿莫西林、酞氨西林、头孢克肟、磺胺甲二唑、左氧氟沙星水和物、头孢卡品匹伏盐酸盐水和物、头孢托仑匹伏、克拉霉素等的抗生物质、醋氨酚、阿司匹林、乙水杨胺、水杨酸甲酯等的解热镇痛剂、泼尼松龙、地塞米松、倍他米松等的类固醇剂、干扰素-α、-β、胰岛素、缩宫素、生长激素、等的蛋白或肽、BCG疫苗、日本脑炎疫苗、麻疹疫苗、脊髓灰质炎疫苗、痘苗、破伤风类病毒、毒蛇抗毒素、人免疫球蛋白等的生物学制剂、视黄醇、硫胺素、核黄素、吡哆素、氰基钴胺、L-抗坏血酸、类胡萝卜素、麦角甾醇、生育酚、生物素、降钙素、辅酶Q、α-硫辛酸、烟酸、甲基萘醌、泛醌、吡咯并醌喹啉等的维生素剂或它们的衍生物、高丽人参提取物、芦荟提取物、蜂胶提取物、甘草提取物、桂皮提取物、獐牙菜提取物等的生药提取物等,各自1种或2种以上、单独或适宜组合而配合。
可将上述的化妆品、药品、及准药品等,在各种成形物或其中间制品中,在不脱离本发明的效果的范围内,作为再改善柔软性或强度的目的,根据需要,化妆品、药品、及准药品等的领域中通常使用的其他高分子物质、适宜的塑化剂、或者赋形剂等的其他成分与本发明的含有支链淀粉的粉末联用,在以其他赋形剂作为主体的成形物中,将本发明的含有支链淀粉的粉末作为粘结剂使用也可。作为高分子物质,可举出含角叉菜胶、黄原胶、羧甲基纤维素、纤维素、半纤维素、阿拉伯胶、瓜尔胶、角叉菜胶、果胶、壳多糖、琼脂糖、糊精、直链淀粉及化工淀粉的淀粉等的多糖类或它们的衍生物、明胶或酪蛋白等的蛋白质等。作为塑化剂,可使用山梨糖醇、麦芽糖醇、海藻糖、甘油、聚乙烯基醇、聚乙二醇或丙二醇等的多元醇。作为赋形剂,可使用麦芽糖醇、甘露糖醇、麦芽糖醇、蔗糖、麦芽糖、乳糖、α,α-海藻糖、α,β-海藻糖、阿拉伯胶、玉米淀粉、结晶纤维素等的糖质、氢氧化铝、氢氧化钙、氢氧化镁、氢氧化钡、硫酸钙、亚硫酸钙、碳酸钙、氧化硅、硅酸钙、碱基性碳酸镁、高岭土、滑石等的无机物。尤其是,α,α-海藻糖有抑制由有效成分的氧化分解等的变性,稳定保持活性的作用,所以可作为稳定化剂有利地利用。
以下,通过实验详细地说明本发明。
<实验1:支链淀粉产生菌的变异株的取得>
向出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)S-2株的分生子实施由紫外线照射的突变处理,播种到马铃薯右旋糖琼脂平板,于27℃培养而将培育的集落作为变异株分离。将分离的变异株及作为亲本株的S-2株,各自,在含有以酸糖化水饴(DE48、以无水物换算计含有葡萄糖约27%、麦芽糖约17%、株式会社林原商事销售)作为固体分10.0质量/容积%、磷酸氢二钾0.2质量/容积%、胨0.2质量/容积%、氯化钠0.2质量/容积%、硫酸镁7水和物0.04质量/容积%、及硫酸亚铁7水和物0.001质量/容积%的液体选择培养基(pH7.0)中植菌,于27℃振荡培养3天。将从各自的培养物通过离心分离除去菌体而得到的培养上清用水稀释10倍。取各自的一部分,向它们加3倍量的甲醇(试剂特级、和光纯药工业株式会社制)而作为75容积%水性甲醇,通过充分混和而将支链淀粉沉淀之后,将离心分离得到的上清再用水稀释10倍的作为夹杂糖质测定用的试验液。再有,该试验液是培养上清被稀释400倍的。另行,将浓度0.01质量/容积%的葡萄糖水溶液作为标准液利用,水作为空白对照,对各试验液,根据“食品添加物公定书”(第8版)、日本食品添加物协会发行、2007年、572-573页(“支链淀粉”的项)中记载的方法,引起基于蒽酮-硫酸法的呈色反应,使用分光光度计测定在波长620nm的吸光度,由下述的式1,求出在培养上清中的夹杂糖质浓度(%)。另外,将上述的培养上清的10倍稀释液再用水稀释100倍的作为全糖质测定用的试验液,与上述同样地引起基于蒽酮-硫酸法的呈色反应,测定在波长620nm的吸光度,由下述的式2,求出在培养上清中的全糖质浓度(%)。通过由下述的式3,从全糖质浓度减夹杂糖质浓度来求出支链淀粉浓度(%)。
式1:
夹杂糖质浓度(%)=[{(Ak-Ao)×400}/{(As-Ao)×100}]×100
其中,Ak:夹杂糖质测定用的试验液的吸光度、As:标准液的吸光度、Ao:水(对照)的吸光度。
式2:
全糖质浓度(%)=[{(Az-Ao)×1000}/{(As-Ao)×100}]×100
其中,Az:全糖质测定用的试验液的吸光度、As、Ao与式1中的相同。
式3:
支链淀粉浓度(%)=全糖质浓度(%)-夹杂糖质浓度(%)
另行,将菌体接种前的培养基的全糖质浓度由蒽酮-硫酸法测定而求出碳源浓度(%),相对于培养基的碳源浓度(%)的夹杂糖质浓度(%)及支链淀粉浓度(%),各自,基于下述的式4、5,作为夹杂糖质率(%)及支链淀粉对糖收率(%)求出。
式4:
夹杂糖质率(%)={夹杂糖质浓度(%)/培养基的碳源浓度(%)}×100
式5:
支链淀粉对糖收率(%)={支链淀粉浓度(%)/培养基的碳源浓度(%)}×100
将如上述一样求出的夹杂糖质率作为指标,选择判断为夹杂糖质率相比亲本株更少的变异株组(分离株的大概1%)。选择的变异株之中,特别是夹杂糖质率低,成为亲本株之一半以下的5株示于表1。如表1所示,在这些的变异株中,尽管支链淀粉对糖收率与作为亲本株的S-2株大致同程度,但夹杂糖质率均在3.0%以下,相比作为亲本株的S-2株(夹杂糖质率6.6%)之一半更低,相对于支链淀粉对糖收率(%)的夹杂糖质率(%)的比率均在0.05以下,此值也成在作为亲本株的S-2株中的比率(0.101)的不足一半。表1所示的这些变异株的支链淀粉对糖收率与亲本株是同程度,夹杂糖质率低,即便不经从它们的培养物由溶剂的沉淀分别等的纯化步骤制备含有支链淀粉的粉末,也相比以往的夹杂糖质少,非常可期待得到稳定的一定组成的含有支链淀粉的粉末。在其中也是,MA446株在得到的变异株之中夹杂糖质率最低,支链淀粉对糖收率与夹杂糖质率的比率也最低,所以选择此株,进行以下的实验。再有,基于上述的突变、培养、筛选的方法,将至少S-2株作为亲本株,可不要求过度的试行错误地适宜、得到可制备本发明的含有支链淀粉的粉末的变异株。
【表1】
<实验2:使用MA446株的含有支链淀粉的粉末的制备>
<实验2-1:产生支链淀粉的培养基中使用的碳源的检查>
将MA446株在使用DE不同的碳源的培养基1~5中各自培养而制备含有支链淀粉的粉末,研究其性质。培养基1~5中使用的碳源各自如下。再有,在使用的酸糖化水饴中,含以无水物换算计葡萄糖约25质量%、麦芽糖约16质量%。
●培养基1:“水饴”(酸糖化水饴、株式会社林原商事销售、DE约42)
●培养基2:葡萄糖(试剂特级、和光纯药工业株式会社制)(以下,在培养基3~5中相同)、麦芽糖(“麦芽糖HHH”、纯度99%以上、林原生物化学研究所制)(以下,在培养基3~4中相同)、及水饴(酶糖化水饴“マルトラップ”、株式会社林原商事销售、将DE47以固体分的质量比1:1:3混合的(混合物的DE是约58)
●培养基3:将葡萄糖、麦芽糖、及水饴(酶糖化水饴“マルトラップ”、株式会社林原商事销售、DE47)以固体分的质量比1:1:1混合的(混合物的DE是约66)
●培养基4:将葡萄糖、麦芽糖、及水饴(酶糖化水饴“マルトラップ”、株式会社林原商事销售、DE47)以固体分的质量比4:1:1混合的(混合物的DE约83)
●培养基5:仅葡萄糖(DE约100)
<实验2-2:含有支链淀粉的粉末的制备>
将在马铃薯右旋糖琼脂斜面上于27℃培养的MA446株在含有蔗糖10.0质量/容积%、磷酸氢二钾0.2质量/容积%、胨0.2质量/容积%、氯化钠0.2质量/容积%、硫酸镁7水和物0.04质量/容积%、及硫酸亚铁7水和物0.001质量/容积%的液体培养基(pH7.0)中,于27℃、以230rpm旋转振荡培养48小时的作为种培养液。
作为产生支链淀粉的培养基,将含有以无水物换算计10.0质量/容积%的上述各自的碳源,含有磷酸氢二钾0.2质量/容积%、胨0.2质量/容积%、氯化钠0.2质量/容积%、硫酸镁7水和物0.04质量/容积%、及硫酸亚铁7水和物0.001质量/容积%的培养基1~5在每30L容培养槽1基制备20L,调节到pH7.0后,在121℃、灭菌15分钟。将上述种培养液对于各自培养槽1基接种1,000ml,在通气量5.0L/分、搅拌速度400rpm的条件下,在27℃、进行主培养3天。
将各自的培养物以8,000rpm离心分离而除去菌体而得到培养上清,进行由活性炭过滤的脱色处理,接下来,使用阳离子交换树脂(H+型)“DIAION SK1B”(三菱化学株式会社制备)、及阴离子交换树脂(OH-型)“DIAION WA30”(三菱化学株式会社制备)进行脱盐处理。使用活性炭进行精细过滤之后,在减压条件下进行浓缩至固体分浓度约25质量%,将得到的浓缩液喷雾干燥,得到含有支链淀粉的粉末。另外,将作为亲本株的S-2株在培养基1中与上述同样地培养,同样地处理而得到含有支链淀粉的粉末、将其作为对照的含有支链淀粉的粉末。顺便而言,将S-2株在培养基1中与上述同样地培养、处理而得到的含有支链淀粉的粉末与前述的“食品添加物支链淀粉”,支链淀粉含量及夹杂糖质含量是大致相同的,上述对照的含有支链淀粉的粉末是对应于其的物质。
<实验2-3:在含有支链淀粉的粉末中的支链淀粉含量及夹杂糖质含量的测定>
对于使用上述培养基1~5制备的含有支链淀粉的粉末、及对照的含有支链淀粉的粉末的各自,由根据前述的“食品添加物公定书(第8版)”、日本添加物协会发行、2007年、572-573页(“支链淀粉”的项)中记载的纯度试验的下述的方法,求出夹杂糖质含量,及支链淀粉含量。即,将含有各支链淀粉的粉末0.8g溶解于水100ml中,作为样品原液。向各样品原液1ml加水至50ml的作为标准原液(样品原液稀释到50倍)。另外,向各样品原液1ml添加氯化钾饱和溶液0.1ml之后,添加甲醇3ml而充分混和,于4℃以15,700g×10分钟离心分离而得到的上清作为样品液(样品原液稀释到4.1倍)。对于如上述一样制备的标准原液、样品液、及对照的水引起由蒽酮-硫酸法的反应,测定在620nm的各自的吸光度(各自,作为At、As及Aо),由下述式,求出夹杂糖质含量、即,在75容积%水性甲醇中可溶的夹杂糖质级分中含的,基于蒽酮-硫酸法求出的夹杂糖质含量、及支链淀粉含量。测定结果示于表2。再有,在本实验中,夹杂糖质含量及支链淀粉含量基于各样品液和各标准原液的吸光度的比求出,不是通过将D-葡萄糖作为标准物质使用而作为D-葡萄糖换算量求出的,但与作为D-葡萄糖换算量求出的值一致,所以将各自的含量用质量%表示。
式6:
夹杂糖质含量(%)
=[{(At-Ao)×4.1}/{(As-Aо)×50}]×100
={(At-Ao)/(As-Aо)}×8.2
其中,At:样品液的吸光度、As:标准原液的吸光度、Ao:水(对照)的吸光度。
式7:
支链淀粉含量(%)=100(%)-夹杂糖质含量(%)
【表2】
如表2所示,将MA446株在使用培养基2~4培养之时,在得到的含有支链淀粉的粉末中的支链淀粉含量均高于97质量%,成为相比在作为亲本株的S-2株中的支链淀粉含量93.2质量%更显著地高的值。另外,夹杂糖质含量是2.2质量%以下,即低于3质量%,成为相比在S-2株中的夹杂糖质含量6.8质量%更显著地低的值。另一方面,在培养基1中培养之时的夹杂糖质含量是6.8质量%,止于略低于在作为亲本株的S-2株中的夹杂糖质含量。另外,将MA446株在碳源是仅葡萄糖的DE100的培养基5中培养之时,支链淀粉含量成95.5质量%、夹杂糖质含量成4.5质量%,相比将作为亲本株的S-2株在培养基1中培养之时,支链淀粉含量更增加,夹杂糖质含量减少,但其差不像培养基2~4的情况那样显著。
从以上的结果判明,将MA446株在作为碳源含葡萄糖和麦芽糖,DE是约50~90、优选是约55~85的培养基中培养之时,得到支链淀粉含量特别高,夹杂糖质含量显著地低的含有支链淀粉的粉末。
<实验2-4:将含有各支链淀粉的粉末成形的膜的强度>
将实验2-2中得到的含有各支链淀粉的粉末及对照的含有支链淀粉的粉末各自溶解于脱离子水而作为20质量/容积%的水溶液,于62.5℃静置,除沫。将这些除沫的各水溶液各自适量、滴到氯乙烯制的平板上而使流延,在于25℃相对湿度30%的气氛干燥一夜,成形厚度约100μm的膜。将成形的膜从上述平板剥离,切成直径19mm的圆形,将其作为被验样品,在于室温相对湿度22%的条件下放置5天而调湿之后,实施突刺强度试验。
突刺强度试验使用在装置中安装截面积1mm2的突刺试验用适配体的“流变仪CR-500DX”(サン科学公司制)进行,求出向装置上固定的上述膜之中心部将适配体以50mm/分的速度垂直施押之时发生断裂之时的应力,作为突刺断裂强度。对于由各自的含有支链淀粉的粉末成形的膜,测定各10个的被验样品的突刺断裂强度,求出其平均值。另外,对于断裂后的被验样品,目测观察破裂的有无,求出对试验的各10个的被验样品的发生破裂的被验样品的枚数的比例(%),作为破裂发生率(%)。结果示于表3。
【表3】
如示于表3,将从将MA446株在培养基2~4中培养而得到的培养物制备的含有支链淀粉的粉末成形而得到的膜均示超20MPa的突刺断裂强度。此强度是相比由将S-2株在培养基1中培养的对照的含有支链淀粉的粉末成形的膜的突刺断裂强度17.1MPa显著地高的值。另外,培养基2~4中培养之时的膜的破裂发生率均为0%,是相比将作为对照的S-2株在培养基1中培养之时的破裂发生率50%显著地低的值。再有,破裂发生率低是指,即便在断裂发生之时,断裂从其断裂位置向周边扩大少,将由将MA446株在培养基2~4中培养而得到的培养物制备的含有支链淀粉的粉末成形而得到的破裂发生率是0%的膜在强度上有优良的性质。
另一方面,将MA446株在培养基1中培养之时,突刺断裂强度是16.6MPa、破裂发生率是40%,是与将作为对照的S-2株在培养基1中培养之时大致同程度。另外,将MA446株在培养基5中培养之时,突刺断裂强度及破裂发生率的双方比将作为对照的S-2株在培养基1中培养之时见若干的改善,但其差不算显著。
以上的结果作为求出支链淀粉含量及夹杂糖质含量的表2的结果良好整合,夹杂糖质含量是3质量%以下,换言之,在支链淀粉含量是97质量%以上的情况,突刺断裂强度显著地高于将作为对照的S-2株在培养基1中培养之时,同时破裂发生率显著地低,判断为可得到强度上优良的膜。特别是,如在将MA446株在培养基3及4中培养之时见到,知到在夹杂糖质含量是1质量%以下,换言之,支链淀粉含量是99质量%以上的情况,得到更高的突刺断裂强度,从而更优选。再有,上述的膜均在室温示对水良好的溶解性。
<实验3:由不同的菌株得到的含有支链淀粉的粉末的比较>
在实验2-3中,使用作为将MA446株培养之时得到支链淀粉含量比较高的含有支链淀粉的粉末的培养基的培养基2、3、4,将作为亲本株的S-2株、及作为公知的菌株的出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)IFO6353株与在实验2-3中同样地培养,同样地处理培养物,从而制备含有支链淀粉的粉末。将在制备的含有各支链淀粉的粉末中的支链淀粉含量及夹杂糖质含量与实验2-3同样测定,同时与在实验2-4中同样,对于将含有各支链淀粉的粉末成形而得到的膜,求出其突刺断裂强度及。结果示于表4。再有,在表4中的对于MA446株的值是从表2及表3的对应的栏转记的。
【表4】
如表4所示,由将S-2株或IFO6353株在培养基2~4中培养而得到的培养物制备的含有支链淀粉的粉末的支链淀粉含量均低于95质量%,同时夹杂糖质含量成约6质量%以上,与由将MA446株培养的培养物制备的含有支链淀粉的粉末比较,支链淀粉含量显著地低,夹杂糖质含量显著地高。
另外,将S-2株或IFO6353株在培养基2~4中培养而得到的含有支链淀粉的粉末成形的膜在突刺强度试验中在低于18MPa的应力下断裂,其突刺断裂强度相比将MA446株在培养基2~4中培养而得到的含有支链淀粉的粉末成形的膜的高于21MPa的突刺断裂强度显著地低。另外,将S-2株或IFO6353株在培养基2~4中培养而得到的含有支链淀粉的粉末成形的膜,破裂发生率高到30%以上,断裂发生之时,示断裂易扩大到周围。
<实验4:由将MA446株在培养基3中培养而得到的培养物制备的含有支链淀粉的粉末的分析>
在实验2-4中,将得到突刺断裂强度最高的膜的含有支链淀粉的粉末、即,由将MA446株在培养基3中培养而得到的培养物制备的含有支链淀粉的粉末作为被验粉末,对于此被验粉末,进行由GPC的分子量分布的测定。另外,对于被验粉末,制备其在75容积%水性甲醇中可溶的夹杂糖质进行,其GPC分析。再者,将被验粉末中含的甘露糖醇的含量由HPLC测定。并且,将作为市售的广用的含有支链淀粉的粉末的“食品添加物支链淀粉”(株式会社林原商事销售)作为对照粉末,对于此对照粉末进行同样的测定及分析。再有,对于对照粉末,将支链淀粉含量及夹杂糖质含量与在上述实验2-3中同样地用蒽酮-硫酸法测定,结果示于表5。表5中,对于被验粉末的支链淀粉含量及夹杂糖质含量从表2的对应的栏转记。各测定的详细如下。
<平均分子量及分子量分布的测定>
将被验粉末及对照粉末,各自,作为2质量/容积%的水溶液,加等量的20mM磷酸缓冲液pH7.0,用膜滤器过滤,进行GPC分析。GPC分析是将2条串联灌在柱TSK-GELα-M(内径×长度300mm、Tosoh株式会社制)上,在溶离液中使用10mM磷酸缓冲液pH7.0、在检测器中使用示差屈折计,在温度40℃、流速0.3ml/分进行。从GPC溶出图算出支链淀粉的质量平均分子量及数平均分子量。分子量和溶出时间的关系使用葡萄糖、麦芽三糖、及分子量测定用支链淀粉标准品P-2、P-3、P-5、P-10、P-20、P-50、P-100、P-200、P-400、P-800、P-1600、及P-2500(昭和电工株式会社销售)求出。被验粉末及对照粉末的GPC溶出图各自示于图1及图2。另外,质量平均分子量及Mw/Mn的值示于表5。
如图1所示,被验粉末的GPC溶出图由在保持时间约50分钟时有顶点的支链淀粉的单一的峰组成,几乎确认不到保持时间不足40分钟及超60分钟的成分,知是支链淀粉纯度高的粉末。对此,在图2所示的对照粉末的溶出图中,同样地,尽管确认在保持时间约50分钟有顶点的支链淀粉的峰,但在保持时间超60分钟的部分也确认几个峰,知在支链淀粉以外,多含相比支链淀粉更低分子量的夹杂糖质。
<夹杂糖质级分的GPC分析>
对于各粉末,如以下一样制备在75容积%水性甲醇中可溶的夹杂糖质级分。即,将被验粉末及对照粉末,各自作为10质量/容积%的水溶液,向其加3倍量的甲醇而立即充分搅拌,在于4℃15,700g×10分钟的条件下进行离心分离。将上清用蒸发器干燥之后,加纯化水而溶解,将干燥的操作重复2次而除去甲醇之后,再度溶解于纯化水中,将用0.45μm的膜滤器过滤的作为75容积%水性甲醇可溶的夹杂糖质级分得到。将得到的夹杂糖质级分适宜稀释,在与上述分子量分布的分析相同的条件下进行GPC分析。被验粉末及对照粉末的夹杂糖质级分的GPC溶出图各自示于图3及图4。
如图3所示,尽管在被验粉末的夹杂糖质级分中确认几个峰,其面积均小,量微少。另一方面,如图4所示,在对照粉末的夹杂糖质级分中保持时间经约60~70分钟而在宽域确认大的峰,判断这是夹杂糖质的主要成分。保持时间约60~70分钟作为分子量范围相当于约500~15,000,作为有麦芽三糖由α-1,6结合链状结合的支链淀粉样结构的糖质,大致相当于葡萄糖聚合度3~90(以麦芽三糖单位1(分子量504)乃至30(分子量14,598))。
再有,在图3及图4中在保持时间约71分钟确认的峰是作为在被验粉末及对照粉末中支链淀粉的生成中使用的MA446株及S-2株的代谢生成物的甘露糖醇。如此,在被验粉末及对照粉末的夹杂糖质级分中含甘露糖醇,这示,被验粉末及对照粉末均为不经由溶剂沉淀的夹杂糖质的除去步骤而制备的。
<葡萄糖聚合度3~90的糖质的含量的测定>
再有,如前所述,由于甘露糖醇无法由蒽酮-硫酸法测定,所以不含在夹杂糖质中,但在夹杂糖质级分的GPC分析中表现为,在保持时间约71分钟确认的峰。从而,从在图3及图4中得到的溶出区分全体的面积除相当于甘露糖醇的峰的面积,作为由蒽酮-硫酸法测定的夹杂糖质的面积,求出对此面积的相当于葡萄糖聚合度3~90的糖质的峰的面积的比例,作为由蒽酮-硫酸法测定的夹杂糖质中的葡萄糖聚合度3~90的糖质的含量(“夹杂糖质中的DP3-90的糖质含量(%)”)示于表5。再者,向此“夹杂糖质中的DP3-90的糖质含量(%)”,另行、乘以由蒽酮-硫酸法求出的相对于粉末全体中含的全糖质含量的夹杂糖质含量(%),作为“含有支链淀粉的粉末中的DP3-90的糖质含量(%)”,并且,示于表5。即,在表5中的“含有支链淀粉的粉末中的DP3-90的糖质含量(%)”的值是通过向表5所示的由GPC分析得到的“夹杂糖质中的DP3-90的糖质含量(%)”的值乘以同样表5所示的由蒽酮-硫酸法得到的夹杂糖质含量(%)的值来计算而求出的数值。
<含有支链淀粉的粉末中的甘露糖醇含量的测定>
将被验粉末及对照粉末用HPLC分析,求出含有支链淀粉的粉末中的甘露糖醇的含量。HPLC分析在柱中使用MCIGELCK08EC(内径×长度300mm、三菱化学株式会社制)、在溶离液中使用纯化水、在检测器中使用示差屈折计,在温度75℃、溶离液的流速0.6ml/分的条件下进行,以浓度已知的甘露糖醇作为标准,从峰面积求出含有支链淀粉的粉末中的以无水物换算计的甘露糖醇含量。结果示于表5。
【表5】
含有支链淀粉的粉末 | 被验粉末 | 对照粉末 |
夹杂糖质含量(%) | 0.6 | 7.7 |
支链淀粉含量(%) | 99.4 | 92.3 |
质量平均分子量 | 417,000 | 374,000 |
Mw/Mn | 32.4 | 35.0 |
夹杂糖质中DP3-90的糖质含量(%) | 24.2 | 85.1 |
含有支链淀粉的粉末中DP3-90的糖质含量(%) | 0.1 | 6.5 |
含有支链淀粉的粉末中甘露糖醇含量(%) | 0.35 | 0.51 |
如表5所示,由MA446株的培养物制备的被验粉末相比对照粉末,在支链淀粉的平均分子量或分子量分布中确认不到大的差异。夹杂糖质中的葡萄糖聚合度3~90的糖质含量在被验粉末中是24.2质量%(含有支链淀粉的粉末中的葡萄糖聚合度3~90的糖质含量是0.1质量%),相比对照粉末的85.1质量%(含有支链淀粉的粉末中的葡萄糖聚合度3~90的糖质含量是6.5质量%)更低。含有支链淀粉的粉末中的甘露糖醇含量以无水物换算计,在被验粉末中是0.35质量%、在对照粉末中是0.51质量%。在夹杂糖质含量低的被验粉末中,相比对照粉末,夹杂糖质中的葡萄糖聚合度3~90的糖质的含量也少。
<实验5:含有支链淀粉的粉末中的夹杂糖质含量和膜强度的关系>
通过将实验4中使用的被验粉末和对照粉末以表6所示的比例混合,制备夹杂糖质含量不同的被验样品1~10。在各被验样品中的支链淀粉含量、夹杂糖质含量及葡萄糖聚合度3~90的糖质的含量示于表6。使用各被验样品成形膜,比较其强度。膜的成形、以及突刺断裂强度的测定以与在实验2-4中的同样的方法进行。结果示于表7。
【表6】
【表7】
被验样品 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 |
突刺断裂强度(MPa) | 20.9 | 20.5 | 20.2 | 20.1 | 19.3 | 18.9 | 18.4 | 18.0 | 17.7 | 17.3 |
破裂发生率(%) | 0 | 0 | 0 | 0 | 20 | 40 | 40 | 50 | 50 | 60 |
如表6、表7所示,使用支链淀粉含量是97质量%以上,夹杂糖质含量是3质量%以下的被验样品1~4成形的膜,相比使用仅由对照粉末组成的被验样品10成形的膜,示高的突刺断裂强度,即便加20MPa的应力也不发生断裂。对此,在支链淀粉含量低于97质量%,夹杂糖质含量超3质量%的被验样品5~9中,由低于20MPa的应力断裂。结果示,突刺断裂强度随着夹杂糖质含量、及作为夹杂糖质的主成分的葡萄糖聚合度3~90的糖质含量增加而降低的倾向。另外,在支链淀粉含量是97质量%以上,夹杂糖质含量是3质量%以下的被验样品1~4中,与膜的断裂时不发生破裂相比,在支链淀粉含量低于97质量%,夹杂糖质含量超3质量%的被验样品5~10的膜中,确认断裂位置周边发生破裂,确认发生破裂的比例随着夹杂糖质含量增加而变多的倾向。再有,在夹杂糖质含量是2.7质量%而低于3质量%的被验样品4中,粉末中的葡萄糖聚合度是3~90的糖质成分的含量是2质量%以下,为了得到高的突刺断裂强度和低的破裂发生率,判断葡萄糖聚合度是3~90的糖质成分的含量是2质量%以下是优选的。
<实验6:由放射光的支链淀粉膜的分析>
将MA446株用实验2中记载的方法使用培养基3培养而得到的含有支链淀粉的粉末2g用18g的脱离子水加热溶解,将其在平板上流延,于30℃干燥,再在相对湿度22%的气氛下调湿24小时,成形厚度约500μm的膜。将得到的膜进行将同步加速器放射光在线源中使用的X射线小角散射(SAXS)分析。测定使用大型放射光设施“SPring-8”(兵库县佐用郡佐用町光都1-1-1)内的“兵库县光束线(BL08B2)”,在下述的条件下进行。特别是,为了观测散射角是0.1°以下的散射,也在使照相机长变长的条件下测定(下述的<SAXS(Long)>)。
<SAXS(Long)>
波长:
照相机长:6114mm
检测器:成像板
像素尺寸:200μm
测定角度:0.001~0.1°
曝光时间:300秒钟
标准样品:胶原
数据处理装置:RigakuR-AXIS
<SAXS(Short)>
波长:
照相机长:1342mm
检测器:成像板
像素尺寸:200μm
测定角度:0.01~2°
曝光时间:300秒钟
标准样品:山嵛酸银
数据处理装置:RigakuR-AXIS
通过上述分析得到的回折图示于图5、6。在SAXS分析中得到的回折图中,通常观察到、伴随回折角(2θ)的增加而急剧开始之后,缓慢减衰的散射曲线。在样品中存在长周期结构或密度摇摆之时,知由它们所致的散射,散射曲线不一样地平滑减衰,由样品成折曲的形状。如图5及图6所示,在任何的回折图中,散射曲线都不显示折曲等,平滑减衰。这些的结果示,在将MA446株培养而得到的夹杂糖质含量是3质量%以下、低分子量的成分极其少的本发明的含有支链淀粉的粉末的膜中,不存在长周期结构或密度摇摆,从所述膜无在加应力之时特定的位置的歪曲变大的结构上的不均一性的点来看,也说明强度上优良。
<实验7:支链淀粉分子中的麦芽四糖结构的含量>
将MA446株用实验2中记载的方法使用培养基3培养而得到的含有支链淀粉的粉末、及实验4中使用的对照的含有支链淀粉的粉末各自作为10质量/容积%的水溶液,向其加3倍量的甲醇而立即充分搅拌,于4℃以15,700g×10分钟离心分离。将沉淀再度溶解于水之后,再度进行上述操作。将得到的沉淀干燥后,向溶解于20mM醋酸缓冲液pH5.0至成1质量/容积%的,将支链淀粉酶“アマノ3”(アマノ酶制)每含有支链淀粉的粉末1g添加5单位,于53℃反应48小时。将反应液在脱盐后适宜稀释,由HPLC分析,求出麦芽三糖及麦芽四糖的生成量。HPLC分析是,在柱中使用MCIGELCK04SS(内径×长度300mm、三菱化学株式会社制)、在溶离液中使用纯化水、在检测器中使用示差屈折计,在温度75℃、流速0.6ml/分的条件下进行,从在得到的层析谱中的麦芽三糖及麦芽四糖算出各自的峰面积各自的含量,从其值求出摩尔比。结果示于表8。
【表8】
含有支链淀粉的粉末 | 被检粉末 | 对照粉末 |
麦芽三糖(G3)(%) | 97.8 | 97.2 |
麦芽四糖(G4)(%) | 1.8 | 2.3 |
G4/G3(摩尔%) | 1.4 | 1.8 |
如表8所示,将MA446株培养而得到的含有支链淀粉的粉末(被检粉末)中的支链淀粉分子中含的麦芽四糖结构的存在比率(G4/G3)是与对照的含有支链淀粉的粉末(对照粉末)中的支链淀粉分子同程度。在S-2株及其变异株产生的支链淀粉中,相对于麦芽三糖结构,麦芽四糖结构以摩尔比1~3%左右的比例存在。如上所述,从MA446株的培养物得到的含有支链淀粉的粉末相比对照的含有支链淀粉的粉末,在相对于麦芽三糖结构的麦芽四糖结构的比例中无大差。这表明,相比以往的含有支链淀粉的粉末的膜,在由本发明的含有支链淀粉的粉末的膜中突刺断裂强度高、破裂发生率低不是由于对于支链淀粉分子的结构上的差异,是由于夹杂糖质含量的差异。
以下,对于本发明的含有支链淀粉的粉末的制备方法、及,由此得到的含有支链淀粉的粉末、以及将其作为原料或原料的一部分而制备的以支链淀粉膜为首的各种成形物,通过实施例具体说明。再有,本发明不受下述的实施例的局限。
【实施例】
【实施例1】
<含有支链淀粉的粉末>
向加作为碳源含葡萄糖50质量份、麦芽糖50质量份、水饴(酶糖化水饴“マルトラップ”、固体分80%、DE约47、株式会社林原商事销售)50质量份(作为碳源的DE约67)、磷酸氢二钾2质量份、胨2质量份、氯化钠2质量份、硫酸镁7水和物0.4质量份、及硫酸亚铁7水和物0.01质量份及水而计1,000质量份的培养基(pH7.0),接种用同培养基于27℃种培养48小时的出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)MA446株菌体,在通气-搅拌下于27℃培养72小时。相对于作为碳源使用的糖质的支链淀粉对糖收率是72.1质量%。从得到的培养物通过离心分离除去菌体后,通过使用活性炭的脱色过滤、由离子交换树脂的脱盐纯化,进行浓缩、干燥及粉末化,得到白色、粉末的流动性优良的含有支链淀粉的粉末。
含有本支链淀粉的粉末,其支链淀粉含量是99.2质量%、夹杂糖质含量是0.8质量%,葡萄糖聚合度3~90的糖质的含量是0.3质量%。再者,相对于含有支链淀粉的粉末以无水物换算计含0.2质量%的甘露糖醇。另外,含有本支链淀粉的粉末的质量平均分子量是428,000道尔顿,Mw/Mn的值是35.3。所述含有支链淀粉的粉末,通过成形为膜,得到断裂强度优良的支链淀粉膜。另外,含有本支链淀粉的粉末,特别是夹杂糖质少,成为分子量分布的广度的指标的Mw/Mn也为35.3,即在10~70的范围内,所以期待在成形物的强度或溶解速度、崩解速度等的性质面示稳定的性质,不仅食品,还可在化妆品、药品、准药品等中使用,特别是在药品中无由溶解性或崩解性的偏差给有效成分的体内动态带来影响,所以可作为药品添加物适宜地使用。
【实施例2】
<含有支链淀粉的粉末>
除了作为碳源,使用葡萄糖20质量份、麦芽糖20质量份、及水饴(酸糖化水饴、固体分75%、DE约42、株式会社林原商事销售)100质量份(作为碳源的DE约54)以外,与实施例1同样地得到含有支链淀粉的粉末。相对于作为碳源使用的糖质的支链淀粉对糖收率是70.4质量%。从得到的培养物通过离心分离除去菌体后,通过使用活性炭的脱色过滤、由离子交换树脂的脱盐纯化,进行浓缩、干燥及粉末化,得到白色、粉末的流动性优良的含有支链淀粉的粉末。
本含有支链淀粉的粉末,其支链淀粉含量是97.9质量%、夹杂糖质含量是2.1质量%,葡萄糖聚合度3~90的糖质的含量是0.7质量%。再者,相对于含有支链淀粉的粉末含以无水物换算计0.6质量%的甘露糖醇。另外,本含有支链淀粉的粉末的质量平均分子量是401,000道尔顿,Mw/Mn的值是41.1。所述含有支链淀粉的粉末,通过成形为膜,得到断裂强度优良的支链淀粉膜。另外,本含有支链淀粉的粉末,夹杂糖质少,成为分子量分布的广度的指标的Mw/Mn也为41.1,在10~70的范围内,所以期待在成形物的强度或溶解速度、崩解速度等的性质面示稳定的性质,不仅食品,还可在化妆品、药品、准药品等中使用,特别是在药品中无由溶解性或崩解性的偏差给有效成分的体内动态带来影响,所以可作为药品添加物适宜地使用。
【实施例3】
<支链淀粉膜>
向脱离子水750质量份溶解实施例1中制备的含有支链淀粉的粉末250质量份、作为剥离剂的表面活性剂(蔗糖单月桂酸酯)0.5质量份而制备支链淀粉膜原料水溶液,减压除沫。将此原料水溶液在合成塑料膜上流延,在温度35℃、相对湿度33%的环境下干燥,得到厚度50μm的支链淀粉膜。得到的支链淀粉膜含有3.5质量%的水分。
本支链淀粉膜有对于断裂应力的抗性优良的高的强度,同时对于水的溶解性也良好,所以每制备批示偏差少的稳定的溶解速度,所以可在食品、化妆品、药品等中有利地利用。
【实施例4】
<口中清凉膜>
根据常规方法,向脱离子水69.25质量份加用实施例1的方法制备的含有支链淀粉的粉末22质量份、角叉菜胶1质量份、黄原胶0.15质量份、豆角胶0.15质量份、麦芽糖醇0.8质量份、糖转移橙皮苷(林原生物化学研究所株式会社销售、商品名“αG橙皮苷”)3质量份、乳化薄荷油2.6质量份、蜂胶提取物0.5质量份、三氯半乳蔗糖0.3质量份、及柠檬酸0.25质量份,于90℃搅拌3小时而溶解,在2×10m的不锈钢板上均质地流延,于60℃干燥4小时,得到厚度约200μm、宽度约200cm、长度10m、水分含量约8%、每100cm2的质量是约2.2g的膜状成形物。将此膜截断成1×2cm,填充到各20个携带用的容器中,制备口中清凉膜。
本品是有适度的强度,同时在口中快速溶解的可食性的膜,含有糖转移橙皮苷、蜂胶提取物,所以是可以口腔的健康的维持-增进的目的使用的口中清凉膜。另外,本品是将每制备批的偏差少的糖质组成大致一定的本发明的含有支链淀粉的粉末在原料中使用而制备的可食性膜,所以是在口中的溶解速度大致一定,糖转移橙皮苷等的有效成分的溶出的速度常常稳定的可食性膜。
【实施例5】
<支链淀粉片>
制备含实施例2中制备的含有支链淀粉的粉末300质量份、羧甲基纤维素30质量份、L-抗坏血酸2-葡萄糖苷10质量份、感光素401号0.1质量份、α-葡萄糖基芸香苷3质量份、1,2-戊烷二醇5质量份、N-椰油脂肪酸酰酯-L-谷氨酸钠2.5质量份、氢氧化钾1质量份、依地酸三钠0.3质量份、柠檬酸三钠0.3质量份、柠檬酸0.2质量份、离子交换水1000质量份的支链淀粉片原料水溶液,起泡。将此原料水溶液在合成塑料膜上连续流延,通50℃的热风而干燥,制备厚度100μm的支链淀粉片。
本支链淀粉片是将每制备批的偏差少的糖质组成大致一定的本发明的含有支链淀粉的粉末在原料中使用而制备的,所以断裂强度优良而容易处理,同时可期待每制品中无偏差的一定的溶解速度,可作为可将L-抗坏血酸2-葡萄糖苷或α-葡萄糖基芸香苷等的有效成分以稳定的速度作用于皮肤的化妆用包装的加工原材料等适宜地利用。
【实施例6】
<包被膜>
制备将用实施例1的方法制备的含有支链淀粉的粉末1质量份及阿拉伯胶0.2质量份溶解于水100质量份的水溶液。向此含有支链淀粉的水溶液浸渍产卵后10小时以内的新鲜的鸡蛋30秒钟之后,取出,在30℃的温度干燥2小时而在卵壳表面上形成支链淀粉的包被膜。
将形成此包被膜的鸡蛋在室温(15~25℃)保存,将其可食期间与对照的无处理鸡蛋(无支链淀粉包被膜)比较时,形成支链淀粉包被膜的鸡蛋的可食期间延长到无处理鸡蛋(无支链淀粉包被膜)的约5~10倍。此支链淀粉包被膜可在保存用于在食品工业等的原材料中使用的鸡蛋中有利地利用。
【实施例7】
<糖衣锭>
将质量150mg的素锭作为芯剂,向其使用包含结晶麦芽糖醇50质量份、将用实施例2的方法制备的含有支链淀粉的粉末作为浓度10w/w%水溶液的20质量份、水15质量份、滑石25质量份及氧化钛3质量份的下冲液包糖衣至锭剂质量成约230mg,接下来,使用包含相同的结晶麦芽糖醇65质量份、相同的10w/w%浓度的支链淀粉水溶液10质量份及水25质量份的上冲液,包糖衣,再者,用蜡液抛光而得到有光泽的外观优良的糖衣锭。
本品是由含支链淀粉的糖衣包被的糖衣锭,是耐破坏强度优良,搬送或包装时的损伤少,可长期间维持芯剂中含的有效成分的品质的糖衣锭。另外,本品是将每制备批的偏差少的糖质组成大致一定的本发明的含有支链淀粉的粉末在原料中使用而制备的,所以摄取后的溶解速度或与芯剂的粘结力大致一定,是可以稳定的速度吸收素锭中含的有效成分的糖衣锭。
【实施例8】
<锭剂>
将用实施例1的方法制备的含有支链淀粉的粉末5质量份、蜂胶提取物粉末30质量份、含有乳果寡糖的粉末(商品名“乳果オリゴ”LS-55P株式会社林原商事销售)20质量份、乳酸钙10质量份、L-抗坏血酸5质量份、α-糖基芸香苷1质量份、磷酸三钙1质量份、蔗糖脂肪酸酯1质量份及适量的粉末香料均一地混合之后,通过用安装直径6mm的杵的打锭机打锭而得到锭剂(约300mg/锭)。
本品是无打锭时的破裂,有适度的强度,同时示对水的良好的溶解性的易饮的锭剂,加α-糖基芸香苷、蜂胶提取物,含有乳果寡糖及支链淀粉,所以作为用于健康增进的经口摄取物适宜。另外,本品是将每制备批的偏差少的糖质组成大致一定的本发明的含有支链淀粉的粉末在原料中使用而制备的,所以含有支链淀粉的粉末所致的粘结力大致一定,通过将一定的成分在一定的条件下打锭,常常是可作为稳定的形状及强度的锭剂的优良的锭剂。再者,本品是,摄取后的溶解速度或崩解性大致一定,施用之时,可以稳定的速度吸收有效成分的锭剂。
【实施例9】
<锭剂>
根据常规方法,将麦芽糖68质量份、α,α-海藻糖15质量份、由实施例2的方法制备的含有支链淀粉的粉末5质量份、棕榈酸视黄醇酯5质量份、麦角钙化醇5质量份、盐酸呋喃硫胺10质量份、核黄素5质量份、盐酸吡哆素10质量份、醋酸生育酚10质量份、烟酸酰胺30质量份、氰基钴胺0.01质量份、泛酸钙40质量、抗坏血酸2-葡萄糖苷(商品名“AA2G”株式会社林原生物化学研究所销售)60质量份、香料1质量份、及单氟磷酸钠1质量份均一地混合之后,将混合物打锭而得到锭剂(200mg/1锭)。
本品是无打锭时的破裂,有适度的强度,同时示对水的良好的溶解性,作为维生素剂有用的锭剂。另外,本品是将每制备批的偏差少的糖质组成大致一定的本发明的含有支链淀粉的粉末在原料中使用而制备的,所以含有支链淀粉的粉末所致的粘结力大致一定,通过将一定的成分在一定的条件下打锭,常常是可作为稳定的形状及强度的锭剂的优良的锭剂。再者,本品是,溶解速度或崩解性大致一定,施用之时可使稳定吸收作为有效成分的维生素的锭剂。
【实施例10】
<锭剂>
根据常规方法,将乙水杨胺450质量份、醋氨酚300质量份、咖啡因50质量份、麦芽糖醇25质量份、α,α-海藻糖25质量份、蔗糖200质量份、木糖醇400质量份、玉米淀粉500质量份、聚乙二醇20质量份、用实施例1的方法制备的含有支链淀粉的粉末6质量份、阿拉伯胶6质量份、α-葡萄糖基甜叶菊苷(商品名“αG-スイート”东洋精糖株式会社销售)1质量份混合之后,加水40ml混练,用打锭机打锭而得到锭剂(约300mg/锭)。
本品是无打锭时的破裂,有适度的强度,同时示对水的良好的溶解性,可作为可在口腔内边溶解边摄取的舌下剂型的感冒药使用。另外,本品是将每制备批的偏差少的糖质组成大致一定的本发明的含有支链淀粉的粉末在原料中使用而制备的,所以含有支链淀粉的粉末所致的粘结力大致一定,通过将一定的成分在一定的条件下打锭,常常是可作为稳定的形状及强度的锭剂的优良的锭剂。再者,本品是在口腔内的溶解速度大致一定,乙水杨胺或醋氨酚等的有效成分的溶出速度稳定,可使它们高效率作用的锭剂。
【实施例11】
<颗粒剂>
将含有乳果寡糖的糖质(商品名“LS-90P”盐水港精糖株式会社销售。以固体物换算含有乳果寡糖约90质量%)1质量份、用实施例2的方法制备的含有支链淀粉的粉末0.1质量份、糖转移橙皮苷(商品名“αG橙皮苷”林原生物化学研究所株式会社销售)0.5质量份、α-葡萄糖基甜叶菊苷(商品名“αG-スイート”东洋精糖株式会社销售)0.2质量份均一地混合,用颗粒成形机得到颗粒状的散剂。
本品是,由于含支链淀粉,与颗粒的缠绑性优良,安全,溶解性优良的易饮的颗粒剂,再者由于含有糖转移橙皮苷,作为用于健康的维持-增进的健康食品有用。另外,本品是将每制备批的偏差少的糖质组成大致一定的本发明的含有支链淀粉的粉末在原料中使用而制备的,所以含有支链淀粉的粉末所致的粘结力大致一定,通过将一定的成分在一定的条件下用颗粒成形机加工,常常是可作为稳定的形状及强度的颗粒的优良的颗粒剂。再者,本品是,溶解速度大致一定,施用之时,可稳定吸收糖转移橙皮苷等的有效成分的颗粒剂。
【实施例12】
<纤维>
将用实施例1的方法制备的含有支链淀粉的粉末溶解于水而作为浓度40w/w%,向其每固体物溶解1.5w/w%的藻酸及0.02w/w%的豆角胶而作为纺丝原液,将其调节到液温60℃,由直径0.3mm、长度1mm的圆筒状喷嘴以压力3kg/cm2向室温的空气中压出丝条,将水分蒸散干燥,用卷取机卷取。
得到的纤维的粗度是约25μm,此纤维可捻,可编,也可织。而且,有适度的强度和亲水性,同时以支链淀粉作为原料,所以有基本上无毒,无向皮肤的刺激的特征,例如,在手术丝、纱布等中也适宜。另外,本品是将每制备批的偏差少的糖质组成大致一定的本发明的含有支链淀粉的粉末在原料中使用而制备的,所以含有支链淀粉的粉末所致的粘结力或溶解性大致一定,在一定的纺丝条件下,是具备可作为具备强度或溶解性等的品质的纤维状成形物的优良的益处的纤维。
【实施例13】
向浓度约0.01w/v%、比活性约1.5×108单位的干扰素-α溶液1质量份加100质量份用实施例1的方法得到的含有支链淀粉的粉末,无菌过滤之后,根据常规方法作为无热原,向2ml容瓶各分注3,000,000单位,通过常规方法进行冷冻干燥。
本品成为,在室温下也长期稳定,含每制备批的偏差少的糖质组成的大致一定的本发明的含有支链淀粉的粉末,所以对水快速溶解,对作为有效成分的干扰素-α的体内动态也无影响的一定的物质,所以可作为注射药、检查用试剂等有利地使用。
【工业实用性】
从以上的说明明了,根据本发明,可从培养出芽短梗霉(Aureobasidiumpullulans)的变异株而得到的培养物,不经溶剂沉淀等的烦琐的纯化步骤,制备有优良的特性的含有支链淀粉的粉末。本发明的含有支链淀粉的粉末可不经烦琐的纯化步骤而制备,全糖质中的夹杂糖质含量极其低,具备高的支链淀粉纯度和稳定的组成,还有所含的支链淀粉的分子量分布在于一定的范围内。使用本发明的含有支链淀粉的粉末成形的膜等的成形物除了良好之外,有每制备批中偏差少的稳定的一定的强度或溶解性、崩解性,所以本发明的含有支链淀粉的粉末作为比较廉价、且良质的含有支链淀粉的粉末,对于食品自不必说,在药品、准药品、及化妆品等的领域中的支链淀粉的用途扩大也广大地贡献,其产业上的利用可能性是极其大的。
本说明书还包括下列内容:
1.含有支链淀粉的粉末,其特征在于,
是不经从将属于出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)的微生物的变异株在含葡萄糖及麦芽糖作为碳源的培养基中培养而得到的培养物除去夹杂糖质的步骤而制备的含有支链淀粉的粉末,
含在75容积%水性甲醇中不溶的支链淀粉级分和可溶的夹杂糖质级分,
基于蒽酮-硫酸法求出的,相对于粉末全体中含的全糖质含量的夹杂糖质级分中含的夹杂糖质含量的比例是3质量%以下,同时
含有甘露糖醇。
2.实施方式1所述的含有支链淀粉的粉末,其特征在于,甘露糖醇的含量以无水物换算计不超2质量%。
3.实施方式1或2所述的含有支链淀粉的粉末,其还具有下述(1)~(3)的特征:
(1)支链淀粉的质量平均分子量是约50,000~1,000,000道尔顿。
(2)支链淀粉的质量平均分子量/数平均分子量的值是约10~70。
(3)在支链淀粉分子中,相对于麦芽三糖结构,以摩尔比含1~3%麦芽四糖结构。
4.实施方式1~3之任一项所述的含有支链淀粉的粉末,其还具有下述(4)的特征:
(4)成形含有支链淀粉的粉末而得到的厚度500μm的膜,在使用放射光的X射线小角散射分析中,不显示长周期结构或密度摇摆所致的回折峰。
5.实施方式1~4之任一项所述的含有支链淀粉的粉末,其还具有下述(5)的特征:
(5)成形含有支链淀粉的粉末而得到的厚度100μm的膜,在使用截面积1mm2的突刺试验用适配体进行的突刺强度试验中,显示20MPa以上的突刺断裂强度。
6.实施方式1~5之任一项所述的含有支链淀粉的粉末,其中属于出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)的微生物的变异株是出芽短梗霉(Aureobasidiumpullulans)S-2株的变异株。
7.实施方式1~6之任一项所述的含有支链淀粉的粉末的制备方法,其特征在于,
包括
将属于出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)的微生物的变异株在含葡萄糖及麦芽糖作为碳源的培养基中培养的步骤、
将得到的培养物除去菌体、脱色、脱盐、浓缩、及粉末化的步骤,
不包括夹杂糖质的除去步骤。
8.实施方式7所述的含有支链淀粉的粉末的制备方法,其中属于出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)的微生物的变异株是出芽短梗霉(Aureobasidiumpullulans)S-2株的变异株。
9.实施方式7或8所述的含有支链淀粉的粉末的制备方法,其中属于出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)的微生物的变异株是变异株MA446株(专利生物保藏中心保藏号FERM BP-11250)。
10.含有支链淀粉的成形物,其为将实施方式1~6之任一项所述的含有支链淀粉的粉末在至少原料的一部分中使用而制备的。
11.实施方式10所述的含有支链淀粉的成形物,其中含有支链淀粉的成形物是食品、化妆品、药品、准药品、或者它们任何之中间制品。
Claims (9)
1.对于制造成形物有用的含有支链淀粉的粉末,其
含有支链淀粉和含甘露糖醇的夹杂糖质,
经过在含葡萄糖及麦芽糖作为碳源的培养基中培养属于出芽短梗霉(Aureobasidiumpullulans)的微生物的变异株的工序而得到,且
具有下述(1)~(5)的特征:
(1)含支链淀粉级分和夹杂糖质级分,所述支链淀粉级分在75容积%水性甲醇中不溶,而所述夹杂糖质级分在75容积%水性甲醇中可溶;
(2)所述支链淀粉级分中所含的基于蒽酮-硫酸法求出的支链淀粉含量是基于蒽酮-硫酸法求出的粉末全体的糖质量的97质量%以上99.4质量%以下;
(3)所述夹杂糖质级分中所含的基于蒽酮-硫酸法求出的夹杂糖质含量是基于蒽酮-硫酸法求出的粉末全体的糖质量的0.6质量%以上3质量%以下;
(4)甘露糖醇的含量是以无水物换算计粉末全体的糖质量的0.04质量%以上2质量%以下;以及
(5)所述支链淀粉的质量平均分子量是50,000~1,000,000道尔顿。
2.权利要求1所述的含有支链淀粉的粉末,其还具有下述(6)的特征:
(6)所述支链淀粉的质量平均分子量/数平均分子量的比是10~70。
3.权利要求1或2所述的含有支链淀粉的粉末,其还具有下述(7)的特征:
(7)所述夹杂糖质级分中所含的葡萄糖聚合度3~90的糖质含量是、基于蒽酮-硫酸法求出的粉末全体的糖质量的2质量%以下。
4.权利要求1或2所述的含有支链淀粉的粉末,其还具有下述(8)的特征:
(8)在使用截面积1mm2的突刺试验用适配体进行的突刺强度试验中,成形含有支链淀粉的粉末而得到的厚度100μm的膜显示20MPa以上的突刺断裂强度。
5.食品,其含权利要求1~4之任一项所述的含有支链淀粉的粉末。
6.化妆品,其含权利要求1~4之任一项所述的含有支链淀粉的粉末。
7.准药品,其含权利要求1~4之任一项所述的含有支链淀粉的粉末。
8.药品,其含权利要求1~4之任一项所述的含有支链淀粉的粉末。
9.成形物,其含权利要求1~4之任一项所述的含有支链淀粉的粉末。
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WO2003018639A1 (de) * | 2001-08-22 | 2003-03-06 | Supramol Parenteral Colloids Gmbh | Hyperverzweigtes amylopektin zum einsatz in verfahren zur chirurgischen oder therapeutischen behandlung von säugern oder in diagnostizierverfahren, insbesondere zur verwendung als plasmavolumenexpander |
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WO2003018639A1 (de) * | 2001-08-22 | 2003-03-06 | Supramol Parenteral Colloids Gmbh | Hyperverzweigtes amylopektin zum einsatz in verfahren zur chirurgischen oder therapeutischen behandlung von säugern oder in diagnostizierverfahren, insbesondere zur verwendung als plasmavolumenexpander |
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Pullulan production by tropical isolates of Aureobasidium pullulans;Sehanat Prasongsuk et al;《J. Ind. Microbiol. Biotechnol》;20070131;第34卷(第1期);第55–61页 * |
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