CN105973854B - 一种基于f2蛋白的检测4型禽腺病毒抗体的间接免疫荧光试剂盒 - Google Patents

一种基于f2蛋白的检测4型禽腺病毒抗体的间接免疫荧光试剂盒 Download PDF

Info

Publication number
CN105973854B
CN105973854B CN201610327763.6A CN201610327763A CN105973854B CN 105973854 B CN105973854 B CN 105973854B CN 201610327763 A CN201610327763 A CN 201610327763A CN 105973854 B CN105973854 B CN 105973854B
Authority
CN
China
Prior art keywords
albumen
serum
type
antibody
cells
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201610327763.6A
Other languages
English (en)
Other versions
CN105973854A (zh
Inventor
叶建强
王伟康
邵红霞
梁广成
万志敏
秦爱建
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Yangzhou University
Original Assignee
Yangzhou University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Yangzhou University filed Critical Yangzhou University
Priority to CN201610327763.6A priority Critical patent/CN105973854B/zh
Publication of CN105973854A publication Critical patent/CN105973854A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN105973854B publication Critical patent/CN105973854B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
    • G01N21/6486—Measuring fluorescence of biological material, e.g. DNA, RNA, cells
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/5302—Apparatus specially adapted for immunological test procedures

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明属于生物技术检测领域，具体涉及一种基于F2蛋白的检测4型禽腺病毒抗体的间接免疫荧光试剂盒。该试剂盒包括表达F2蛋白的293T细胞，FITC标记的羊抗鸡抗体，样品稀释液和洗涤液。本发明试剂盒具有良好的特异性。该试剂盒不仅能用于血清4型禽腺病毒感染状况流行病学调查，而且能有效用于监测免疫鸡群血清4型禽腺病毒抗体水平，用于评价免疫保护性抗体水平等。

Description

一种基于F2蛋白的检测4型禽腺病毒抗体的间接免疫荧光试 剂盒
技术领域
本发明属于生物技术检测领域，具体涉及一种基于F2蛋白的检测4型禽腺病毒抗体的间接免疫荧光试剂盒。
背景技术
禽腺病毒(Fowl Adenovirus，FAdV)属于腺病毒科禽腺病毒属，分为5个种(A-E)，12个血清型。虽然在世界各地均有报道，FAdV感染一般引起亚临床状况，而急性感染主要引起包涵体肝炎、心包积液以及肌胃糜烂等。自2013年，国内鸡群由FAdV引起的包涵体肝炎、心包积液病例逐渐增多。到2015年，FAdV感染在国内多个省份鸡群爆发。目前FAdV爆发不仅发生在3-4周龄肉鸡，还发生于10-20周龄的蛋鸡，给国内养鸡业造成了严重经济损失。病毒分离鉴定发现，目前高致病性4型FAdV在国内鸡群流行较广泛。然目前尚无针对4型FAdV血清学抗体检测的快速方法及其试剂盒。在FAdV的编码蛋白中，F2纤突蛋白为FAdV的表面蛋白，在介导FAdV病毒感染宿主细胞中起重要作用，能有效刺激机体产生体液免疫，甚至中和抗体。
发明内容
本发明的目的是在于提供一种基于F2蛋白的检测4型禽腺病毒抗体的间接免疫荧光试剂盒。本发明的原理和最核心的关键技术是构建了血清4型禽腺病毒F2蛋白基因真核表达质粒，并将转染该质粒的表达F2蛋白的293T细胞作为抗原建立试剂盒，检测血清4型禽腺病毒特异性抗体。
本发明所述的一种基于F2蛋白的检测4型禽腺病毒抗体的间接免疫荧光试剂盒，包括表达F2蛋白的293T细胞，FITC标记的羊抗鸡抗体，样品稀释液，洗涤液。
其中，所述表达F2蛋白的293T细胞，是转染F2蛋白真核表达质粒的表达4型禽腺病毒F2蛋白的293T细胞。
其中，所述稀释液及洗涤液，是10mM pH7.2的磷酸缓冲液。
所述表达F2蛋白的293T细胞，通过下述步骤得到：
(1)禽腺病毒F2蛋白真核表达质粒构建：以pcDNA3.1真核表达载体以及血清4型禽腺病毒基因组为模板，分别以SEQ ID NO.1-2和SEQ ID NO.3-4的序列为引物，分别PCR扩增出线性化的pcDNA3.1载体以及血清4型禽腺病毒F2蛋白基因(SEQ ID NO.5)；随后利用重组酶ExnaseTM II将线性化的pc DNA3.1载体以及血清4型禽腺病毒F2蛋白基因的PCR产物进行快速体外重组克隆(参见图1,图2)，重组克隆经序列验证后，命名为pcDNA3.1-FAdV_F2。
(2)制备检测血清4型禽腺病毒抗体的抗原:将pcDNA3.1-FAdV_F2重组质粒，用MIRUS转染液转染293T细胞。细胞转染48小时后，用丙酮乙醇固定液固定细胞5分钟；固定的表达细胞血清4型禽腺病毒F2蛋白的293T细胞自然干燥后置-20度待用，即为检测血清4型禽腺病毒抗体的抗原。
检测血清4型禽腺病毒抗体的间接免疫荧光试剂盒：该试剂盒成分包括固定在96孔中的表达F2蛋白的293T细胞，商品化的FITC标记的羊抗鸡抗体，样品稀释液以及洗涤液。该试剂盒检测血清4型禽腺病毒抗体的步骤及阳性判定标准如下：固定在96孔中的表达F2蛋白的293T细胞用PBS洗涤一遍后，加入稀释的血清样品，37度反应1小时；PBS洗涤3遍后，加入稀释的FITC标记的羊抗鸡抗体，37度反应1小时；PBS洗涤3遍后，进行倒置荧光显微镜下观察。若出现细胞核内亮绿色特异荧光，则该样品判为阳性；否则为阴性。
本发明的有益效果体现在：
为建立快速检测4型FAdV血清学的技术，本发明对4型FAdV的F2纤突蛋白进行了克隆，构建了F2纤突蛋白真核表达质粒，将转染F2纤突蛋白表达质粒、且表达4型FAdV的F2纤突蛋白的293T细胞作为检测用抗原，组装了检测4型FAdV抗体的间接免疫荧光试剂盒。检测结果发现，该检测4型FAdV抗体的间接免疫荧光试剂盒具有良好的4型FAdV特异性、敏感性，在4型FAdV病毒流行病学调查及免疫监测中具有良好的应用价值，填补了国内外空白。
本发明建立的检测血清4型禽腺病毒抗体的间接免疫荧光试剂盒能特异性的检查出抗血清4型禽腺病毒抗体，而不能检测出抗其它病原的抗体。因此，该试剂盒具有良好的特异性。该试剂盒不仅能用于血清4型禽腺病毒感染状况流行病学调查，而且能有效用于监测免疫鸡群血清4型禽腺病毒抗体水平，用于评价免疫保护性抗体水平等。
附图说明
图1，PCR扩增线性化pcDNA3.1载体
1：线性化的pcDNA3.1载体；M：1Kb DNA Ladder。
图2，PCR扩增F2基因
1：FAdv-F2；M：1Kb DNA Ladder。
图3，pcDNA3.1-FAdV_F2重组表达载体鉴定
1:pcDNA3.1-FAdV_F2；M：DL5000 DNA Marker。
图4，pcDNA3.1-FAdV_F2在293T细胞表达效果
M：Protein Marker；1：293T细胞裂解产物；2：pcDNA3.1-FAdV_F2转染293T细胞的裂解产物。
图5，检测4型FAdV抗体的间接免疫荧光试剂盒检测效果
A：转染pcDNA3.1-FAdV_F2的293T细胞与FAdV血清反应；B：未转染质粒的293T细胞与FAdV血清反应；C：转染pcDNA3.1-FAdV_F2的293T细胞与SPF鸡血清反应；D：转染pcDNA3.1-FAdV_F2的293T细胞与抗马立克氏病病毒血清反应；E:转染pcDNA3.1-FAdV_F2的293T细胞与抗禽白血病病毒血清反应；F:转染pcDNA3.1-FAdV_F2的293T细胞与抗禽流感病毒血清反应；G：转染pcDNA3.1-FAdV_F2的293T细胞与抗鸡新城疫病毒血清反应；H:转染pcDNA3.1-FAdV_F2的293T细胞与抗传染性法氏囊病病毒血清反应；I：转染pcDNA3.1-FAdV_F2的293T细胞与抗传染性支气管炎病毒血清反应。
具体实施方式
实施例：
1,血清4型禽腺病毒分离:取疑似4型禽腺病毒感染的病死鸡的肝脏，研碎后用按1:5的比例加入PBS制成悬液；5000r/min离心15min，取上清；加入青霉素和链霉素各1000IU/ml，37℃反应30min；经0.45um微孔滤器过滤后，以0.2ml/胚的剂量，经尿囊腔接种8日龄SPF鸡胚，接种后96-120小时后收取尿囊液；尿囊液经鉴定为4型禽腺病毒后，－20℃保存。
2，设计扩增出含pcDNA3.1线性化载体与血清4型禽腺病毒F2蛋白基因片段的引物：具体引物序列见表1，由苏州金唯智生物科技有限公司合成。
表1 PCR扩增线性化pcDNA3.1及血清4型禽腺病毒F2蛋白基因引物
3,血清4型禽腺病毒基因组的制备：取血清4型禽腺病毒分离毒株病毒上清400uL于1.5mL指形管内，加入400uL细胞裂解液(50mmol/L Tris-HCl pH 8.0，20mmol/L EDTA pH8.0，2％SDS和蛋白酶K)，充分混匀后放置56℃水浴锅作用4小时；加入400uLTris平衡酚，充分混匀后10000r/min离心10分钟，取上清于另一1.5mL指形管；加入400uL酚：氯仿：异戊醇，充分混匀后10000r/min离心5分钟，取上清于另一1.5mL指形管；加入800uL无水乙醇，颠倒混匀后放入-20℃孵育30分钟，12000r/min离心15分钟，弃尽上清；室温自然干燥后向沉淀加入30uL灭菌超纯水和2uLRNA酶，充分溶解后，即得血清4型禽腺病毒基因组，置-20℃备用。
4，PCR扩增pcDNA3.1线性化载体以及血清4型禽腺病毒F2蛋白基因片段：分别以pcDNA3.1载体质粒(Invitrogen公司)以及以上制备的4型禽腺病毒基因组为模板，表1所述相应引物为引物分别进行PCR扩增出线性化的pcDNA3.1载体以及血清4型禽腺病毒F2蛋白基因。PCR扩增反应体系为：模板1uL，5×Buffer10uL，10mM dNTP Mix 1uL，上游引物为10μmol 2uL，下游引物为10μmol 2uL，高保真酶1uL，加入灭菌超纯水至50uL。PCR扩增反应循环参数为：95℃预变性4分钟，随后进行30个循环(95℃变性30秒，55℃退火30秒，72℃延伸3分钟)，72℃延伸10分钟。PCR结束后，PCR产物在1％的琼脂糖凝胶中进行电泳分析(如图1，图2所示)。
5，pcDNA3.1-FAdV_F2重组表达载体构建：将以上纯化的线性化载体pcDNA3.1以及血清4型禽腺病毒F2蛋白基因片段PCR产物在商品化重组酶ExnaseTMⅡ的作用下进行重组克隆。具体重组反应体系如下：纯化的血清4型禽腺病毒F2蛋白基因片段PCR产物50-100ng，纯化的pcDNA3.1线性化载体50ng，2μL商品化的ExnaseTMⅡ酶，4μL5倍的缓冲液，其它补加水至20μL。反应物于37℃作用30分钟后，置冰上5分钟。随后将20μL反应物转化到常规感受态细菌，涂LB板。次日挑取细菌克隆进行质粒制备，并进行PCR鉴定(如图3所示)。
6，制备检测血清4型禽腺病毒抗体的抗原：在96孔细胞板中培养293T细胞至形成80％-90％单层；随即参照转染试剂TransIT-LT1说明书的步骤进行pcDNA3.1-FAdV_F2重组表达质粒转染。具体步骤：先将48ug质粒溶于1.6ml的OPTI-MEM培养基，然后加入72uL的TransIT-LT1转染试剂，混匀后室温放置；45分钟后加入6.4ml的OPTI-MEM培养基；混匀后滴加到96孔细胞板，每孔80ul。细胞转染48小时后，弃去96孔细胞板中培养基，并用丙酮乙醇固定液固定细胞5分钟；固定的表达细胞血清4型禽腺病毒F2蛋白的293T细胞自然干燥后置-20度待用，即为检测血清4型禽腺病毒抗体的抗原。
7，检测血清4型禽腺病毒抗体的间接免疫荧光试剂盒组装及应用：该试剂盒成分包括1块固定的表达F2蛋白的293T细胞96孔板，1ml商品化的FITC标记的羊抗鸡抗体，200ml样品稀释液以及洗涤液(PBS)，1ml阳性血清及1ml阴性血清。该试剂盒检测血清4型禽腺病毒抗体的步骤及阳性判定标准如下：先用PBS洗涤一遍固定有表达F2蛋白的293T细胞96孔板，然后加入1:100稀释的血清样品(同时设立1:100的阳性血清及阴性血清对照)，50ul/孔，37度反应45min；PBS洗涤3遍后，加入1:100稀释的FITC标记的羊抗鸡抗体，50ul/孔，37度反应30min；PBS洗涤3遍后，进行倒置荧光显微镜下观察。若出现细胞核内亮绿色特异荧光，则该样品判为阳性；否则为阴性。

Claims (2)

1.一种基于F2蛋白的检测4型禽腺病毒抗体的间接免疫荧光试剂盒，其特征在于，包括表达F2蛋白的293T细胞，FITC标记的羊抗鸡抗体，样品稀释液，洗涤液；所述表达F2蛋白的293T细胞，是转染F2蛋白真核表达质粒的表达4型禽腺病毒F2蛋白的293T细胞；所述表达F2蛋白的293T细胞，通过下述步骤得到：(1)禽腺病毒F2蛋白真核表达质粒构建：以pcDNA3.1真核表达载体以及血清4型禽腺病毒基因组为模板，分别以SEQ ID NO.1-2和SEQ ID NO.3-4所示 的序列为引物，分别PCR扩增出线性化的pcDNA3.1载体以及序列如SEQ ID NO.5所示的血清4型禽腺病毒F2蛋白基因；随后利用重组酶ExnaseTM II将线性化的pc DNA3.1载体以及血清4型禽腺病毒F2蛋白基因的PCR产物进行快速体外重组克隆，重组克隆经序列验证后，命名为pcDNA3.1-FAdV_F2。
2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述稀释液及洗涤液，是10mMpH7.2的磷酸缓冲液。
CN201610327763.6A 2016-05-17 2016-05-17 一种基于f2蛋白的检测4型禽腺病毒抗体的间接免疫荧光试剂盒 Active CN105973854B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610327763.6A CN105973854B (zh) 2016-05-17 2016-05-17 一种基于f2蛋白的检测4型禽腺病毒抗体的间接免疫荧光试剂盒

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610327763.6A CN105973854B (zh) 2016-05-17 2016-05-17 一种基于f2蛋白的检测4型禽腺病毒抗体的间接免疫荧光试剂盒

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN105973854A CN105973854A (zh) 2016-09-28
CN105973854B true CN105973854B (zh) 2018-10-23

Family

ID=56956410

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610327763.6A Active CN105973854B (zh) 2016-05-17 2016-05-17 一种基于f2蛋白的检测4型禽腺病毒抗体的间接免疫荧光试剂盒

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105973854B (zh)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106771260A (zh) * 2017-03-31 2017-05-31 中国农业大学 检测血清4型禽腺病毒抗体的间接elisa试剂盒及其检测方法
CN107607717A (zh) * 2017-08-08 2018-01-19 扬州大学 基于f2蛋白的检测血清4型禽腺病毒抗体的间接elisa试剂盒
CN108918869B (zh) * 2018-06-15 2021-12-28 新兴县国研科技有限公司 fiber2蛋白及其重组蛋白在检测血清4型禽腺病毒抗体方面的应用
CN111413499B (zh) * 2020-04-17 2023-06-27 中国兽医药品监察所 一种检测禽腺病毒i群的间接免疫荧光试剂盒
CN111534547A (zh) * 2020-05-19 2020-08-14 扬州大学 一种表达血清4型禽腺病毒纤突蛋白f2的重组杆状病毒的构建方法
CN113173989B (zh) * 2021-05-07 2022-09-06 青岛农业大学 抗纤维蛋白-2抗体序列、四肽链分子及免疫球蛋白分子

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101235085A (zh) * 2008-01-24 2008-08-06 中国科学院微生物研究所 抗西尼罗病毒膜蛋白e的单克隆抗体及其应用
CN101586120A (zh) * 2009-07-15 2009-11-25 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 狂犬病病毒Flury-LEP疫苗株反向遗传操作系统及LEP绿色荧光蛋白重组病毒载体
CN101914498A (zh) * 2010-02-08 2010-12-15 中国农业科学院上海兽医研究所 稳定表达高致病力禽流感病毒ha蛋白的mdck细胞系及其用途
CN102183637A (zh) * 2011-01-25 2011-09-14 中国检验检疫科学研究院 检测人西尼罗病毒IgG抗体的间接ELISA试剂盒及其检测方法
CN102228698A (zh) * 2011-06-28 2011-11-02 广西医科大学附属肿瘤医院 Hpv58型治疗性复合基因疫苗及其构建方法
CN102680699A (zh) * 2011-11-07 2012-09-19 广西壮族自治区兽医研究所 鉴别i群禽腺病毒感染的elisa检测方法
CN103163299A (zh) * 2013-02-05 2013-06-19 扬州大学 禽白血病双抗体夹心elisa抗原检测试剂盒
CN105385765A (zh) * 2015-12-17 2016-03-09 扬州大学 实时荧光绝对定量检测家禽beta连环蛋白的试剂盒及应用

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101235085A (zh) * 2008-01-24 2008-08-06 中国科学院微生物研究所 抗西尼罗病毒膜蛋白e的单克隆抗体及其应用
CN101586120A (zh) * 2009-07-15 2009-11-25 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 狂犬病病毒Flury-LEP疫苗株反向遗传操作系统及LEP绿色荧光蛋白重组病毒载体
CN101914498A (zh) * 2010-02-08 2010-12-15 中国农业科学院上海兽医研究所 稳定表达高致病力禽流感病毒ha蛋白的mdck细胞系及其用途
CN102183637A (zh) * 2011-01-25 2011-09-14 中国检验检疫科学研究院 检测人西尼罗病毒IgG抗体的间接ELISA试剂盒及其检测方法
CN102228698A (zh) * 2011-06-28 2011-11-02 广西医科大学附属肿瘤医院 Hpv58型治疗性复合基因疫苗及其构建方法
CN102680699A (zh) * 2011-11-07 2012-09-19 广西壮族自治区兽医研究所 鉴别i群禽腺病毒感染的elisa检测方法
CN103163299A (zh) * 2013-02-05 2013-06-19 扬州大学 禽白血病双抗体夹心elisa抗原检测试剂盒
CN105385765A (zh) * 2015-12-17 2016-03-09 扬州大学 实时荧光绝对定量检测家禽beta连环蛋白的试剂盒及应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
鹅源腺病毒基因组E3区的鉴定和分析;刘岳龙等;《中国预防兽医学报》;20051130;第27卷(第06期);526-529页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN105973854A (zh) 2016-09-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN105973854B (zh) 一种基于f2蛋白的检测4型禽腺病毒抗体的间接免疫荧光试剂盒
CN101283099B (zh) 用于监测并改善疫苗功效的修饰的流感病毒
CN104962527B (zh) Vii型新城疫病毒l基因突变的减毒疫苗株及其制备方法
Lee et al. A novel avian paramyxovirus (putative serotype 15) isolated from wild birds
CN103539842B (zh) 草鱼呼肠孤病毒ⅱ型s10基因编码的重组蛋白、由其制备的多克隆抗体及应用
CN107607717A (zh) 基于f2蛋白的检测血清4型禽腺病毒抗体的间接elisa试剂盒
CN106443015A (zh) 一种基于hexon蛋白N端保守区的检测禽腺病毒抗体的ELISA试剂盒
CN104962581A (zh) 一种表达非洲猪瘟病毒p72蛋白的重组病毒疫苗株
CN113388587B (zh) 表达牛病毒性腹泻e2基因的重组牛结节疹病毒及其应用
Wille et al. Antarctic penguins as reservoirs of diversity for avian avulaviruses
CN104195116B (zh) 一种表达鹅细小病毒vp3基因的重组新城疫病毒及其构建方法
CN106018780B (zh) 一种基于f1蛋白的检测4型禽腺病毒抗体的间接免疫荧光试剂盒
CN104215762B (zh) 一种检测血清3型鸭甲型肝炎病毒抗体的间接elisa方法及试剂盒
Saikia et al. Recombinant Newcastle disease virus (NDV) expressing sigma C protein of avian reovirus (ARV) protects against both ARV and NDV in chickens
CN107435041A (zh) 克服雏鸡新城疫母源抗体影响的嵌合新城疫病毒载体h9活疫苗候选株及其构建方法
Panigrahi et al. Molecular characterization of chicken astroviruses in gout-affected commercial broiler chickens in Haryana, India
CN108107208A (zh) 一种基于纤突蛋白f的检测血清8型禽腺病毒抗体的间接elisa试剂盒
Lagan Tregaskis et al. The first whole genome sequence and characterisation of avian nephritis virus genotype 3
CN104232797B (zh) 一种鼠肝炎病毒的复合型检测试剂盒、检测方法及应用
Shirodaria et al. Some characteristics of salt-dependent haemagglutinating measles viruses
CN107254450A (zh) 克服鸡新城疫母源抗体影响的嵌合新城疫病毒疫苗载体候选株及构建方法
CN101955950A (zh) 一种重组减蛋综合症病毒纤维蛋白抗原的制备方法
CN110804627B (zh) 一种表达E2-crimson的重组伪狂犬病毒及其制备方法和应用
CN109136267B (zh) BVDV Erns蛋白和抗体及筛选BVDV感染的牛的方法
KR20170079550A (ko) 말 게타바이러스 혈청 진단방법

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant