CN103539842B - 草鱼呼肠孤病毒ⅱ型s10基因编码的重组蛋白、由其制备的多克隆抗体及应用 - Google Patents
草鱼呼肠孤病毒ⅱ型s10基因编码的重组蛋白、由其制备的多克隆抗体及应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103539842B CN103539842B CN201310513653.5A CN201310513653A CN103539842B CN 103539842 B CN103539842 B CN 103539842B CN 201310513653 A CN201310513653 A CN 201310513653A CN 103539842 B CN103539842 B CN 103539842B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- gcrv
- recombinant protein
- protein
- grass carp
- gene
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 241000609060 Grass carp reovirus Species 0.000 title claims abstract description 43
- 101150083618 S10 gene Proteins 0.000 title claims abstract description 29
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 title abstract description 26
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 title abstract description 26
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 80
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 60
- 241000252230 Ctenopharyngodon idella Species 0.000 claims abstract description 30
- 208000031169 hemorrhagic disease Diseases 0.000 claims abstract description 14
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 12
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 7
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 7
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract 7
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 45
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 14
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 14
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 8
- 108010008038 Synthetic Vaccines Proteins 0.000 claims description 7
- 229940124551 recombinant vaccine Drugs 0.000 claims description 7
- 241000702263 Reovirus sp. Species 0.000 claims description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 6
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 claims description 5
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 abstract description 9
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 abstract description 6
- 230000003053 immunization Effects 0.000 abstract description 6
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 abstract description 6
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 5
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 abstract description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 abstract description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 abstract description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 15
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 15
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 13
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- FRXSZNDVFUDTIR-UHFFFAOYSA-N 6-methoxy-1,2,3,4-tetrahydroquinoline Chemical compound N1CCCC2=CC(OC)=CC=C21 FRXSZNDVFUDTIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 10
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 10
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 9
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 9
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- 210000004405 cytokine-induced killer cell Anatomy 0.000 description 7
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 7
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 7
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 7
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 6
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 6
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 6
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 6
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 description 6
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 5
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 5
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 230000004044 response Effects 0.000 description 5
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 4
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 4
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 238000004945 emulsification Methods 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 4
- 238000012797 qualification Methods 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 4
- 244000025254 Cannabis sativa Species 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 3
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 3
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 3
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L di(octadecanoyloxy)lead Chemical compound [Pb+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 3
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 3
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 3
- SGWFGVQCRDTUQN-UHFFFAOYSA-N (2-prop-2-ynoyloxy-3-prop-2-ynoylsulfanylpropyl) prop-2-ynoate Chemical compound C#CC(=O)OCC(OC(=O)C#C)CSC(=O)C#C SGWFGVQCRDTUQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000702652 Aquareovirus Species 0.000 description 2
- IIABBYGHLYWVOS-FXQIFTODSA-N Arg-Asn-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O IIABBYGHLYWVOS-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- 241001516406 Avian orthoreovirus Species 0.000 description 2
- PMGDADKJMCOXHX-UHFFFAOYSA-N L-Arginyl-L-glutamin-acetat Natural products NC(=N)NCCCC(N)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(O)=O PMGDADKJMCOXHX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000006180 TBST buffer Substances 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 108010047495 alanylglycine Proteins 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 108010008355 arginyl-glutamine Proteins 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 2
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 2
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 108010090894 prolylleucine Proteins 0.000 description 2
- XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M propidium iodide Chemical compound [I-].[I-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CCC[N+](C)(CC)CC)=C1C1=CC=CC=C1 XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 2
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- BVSGPHDECMJBDE-HGNGGELXSA-N Ala-Glu-His Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N BVSGPHDECMJBDE-HGNGGELXSA-N 0.000 description 1
- DCVYRWFAMZFSDA-ZLUOBGJFSA-N Ala-Ser-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O DCVYRWFAMZFSDA-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- PEFFAAKJGBZBKL-NAKRPEOUSA-N Arg-Ala-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O PEFFAAKJGBZBKL-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 1
- QPOARHANPULOTM-GMOBBJLQSA-N Arg-Asn-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N QPOARHANPULOTM-GMOBBJLQSA-N 0.000 description 1
- RWCLSUOSKWTXLA-FXQIFTODSA-N Arg-Asp-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O RWCLSUOSKWTXLA-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- NKBQZKVMKJJDLX-SRVKXCTJSA-N Arg-Glu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O NKBQZKVMKJJDLX-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- AILDTIZEPVHXBF-UHFFFAOYSA-N Argentine Natural products C1C(C2)C3=CC=CC(=O)N3CC1CN2C(=O)N1CC(C=2N(C(=O)C=CC=2)C2)CC2C1 AILDTIZEPVHXBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ORXCYAFUCSTQGY-FXQIFTODSA-N Asn-Ala-Met Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N ORXCYAFUCSTQGY-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- DDPXDCKYWDGZAL-BQBZGAKWSA-N Asn-Gly-Arg Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N DDPXDCKYWDGZAL-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- HYQYLOSCICEYTR-YUMQZZPRSA-N Asn-Gly-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O HYQYLOSCICEYTR-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- PTSDPWIHOYMRGR-UGYAYLCHSA-N Asn-Ile-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O PTSDPWIHOYMRGR-UGYAYLCHSA-N 0.000 description 1
- KEUNWIXNKVWCFL-FXQIFTODSA-N Asn-Met-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O KEUNWIXNKVWCFL-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- YRTOMUMWSTUQAX-FXQIFTODSA-N Asn-Pro-Asp Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O YRTOMUMWSTUQAX-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- HPNDKUOLNRVRAY-BIIVOSGPSA-N Asn-Ser-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N)C(=O)O HPNDKUOLNRVRAY-BIIVOSGPSA-N 0.000 description 1
- CBHVAFXKOYAHOY-NHCYSSNCSA-N Asn-Val-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O CBHVAFXKOYAHOY-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- KRXIWXCXOARFNT-ZLUOBGJFSA-N Asp-Ala-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O KRXIWXCXOARFNT-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- SPKCGKRUYKMDHP-GUDRVLHUSA-N Asp-Ile-Pro Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N SPKCGKRUYKMDHP-GUDRVLHUSA-N 0.000 description 1
- ZBYLEBZCVKLPCY-FXQIFTODSA-N Asp-Ser-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O ZBYLEBZCVKLPCY-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- 108010077805 Bacterial Proteins Proteins 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000252228 Ctenopharyngodon Species 0.000 description 1
- SBORMUFGKSCGEN-XHNCKOQMSA-N Cys-Glu-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N)C(=O)O SBORMUFGKSCGEN-XHNCKOQMSA-N 0.000 description 1
- LHJDLVVQRJIURS-SRVKXCTJSA-N Cys-Phe-Asp Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N LHJDLVVQRJIURS-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- GGRDJANMZPGMNS-CIUDSAMLSA-N Cys-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O GGRDJANMZPGMNS-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- NDNZRWUDUMTITL-FXQIFTODSA-N Cys-Ser-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O NDNZRWUDUMTITL-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- 206010011732 Cyst Diseases 0.000 description 1
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- VOUSELYGTNGEPB-NUMRIWBASA-N Gln-Thr-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O VOUSELYGTNGEPB-NUMRIWBASA-N 0.000 description 1
- JRCUFCXYZLPSDZ-ACZMJKKPSA-N Glu-Asp-Ser Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O JRCUFCXYZLPSDZ-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- VSMQDIVEBXPKRT-QEJZJMRPSA-N Glu-Cys-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N VSMQDIVEBXPKRT-QEJZJMRPSA-N 0.000 description 1
- PJBVXVBTTFZPHJ-GUBZILKMSA-N Glu-Leu-Asp Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N PJBVXVBTTFZPHJ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- FGSGPLRPQCZBSQ-AVGNSLFASA-N Glu-Phe-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FGSGPLRPQCZBSQ-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- ALMBZBOCGSVSAI-ACZMJKKPSA-N Glu-Ser-Asn Chemical compound C(CC(=O)O)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N ALMBZBOCGSVSAI-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- PYUCNHJQQVSPGN-BQBZGAKWSA-N Gly-Arg-Cys Chemical compound C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)CN)CN=C(N)N PYUCNHJQQVSPGN-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- IWAXHBCACVWNHT-BQBZGAKWSA-N Gly-Asp-Arg Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N IWAXHBCACVWNHT-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- PDUHNKAFQXQNLH-ZETCQYMHSA-N Gly-Lys-Gly Chemical compound NCCCC[C@H](NC(=O)CN)C(=O)NCC(O)=O PDUHNKAFQXQNLH-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- DBJYVKDPGIFXFO-BQBZGAKWSA-N Gly-Met-Ala Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O DBJYVKDPGIFXFO-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- FWWJVUFXUQOEDM-WDSOQIARSA-N His-Trp-Arg Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC3=CN=CN3)N FWWJVUFXUQOEDM-WDSOQIARSA-N 0.000 description 1
- XLCZWMJPVGRWHJ-KQXIARHKSA-N Ile-Glu-Pro Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N XLCZWMJPVGRWHJ-KQXIARHKSA-N 0.000 description 1
- PHRWFSFCNJPWRO-PPCPHDFISA-N Ile-Leu-Thr Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)N PHRWFSFCNJPWRO-PPCPHDFISA-N 0.000 description 1
- XLXPYSDGMXTTNQ-UHFFFAOYSA-N Ile-Phe-Leu Natural products CCC(C)C(N)C(=O)NC(C(=O)NC(CC(C)C)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XLXPYSDGMXTTNQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000880493 Leptailurus serval Species 0.000 description 1
- ZRLUISBDKUWAIZ-CIUDSAMLSA-N Leu-Ala-Asp Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O ZRLUISBDKUWAIZ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- OXKYZSRZKBTVEY-ZPFDUUQYSA-N Leu-Asn-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O OXKYZSRZKBTVEY-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 1
- WGNOPSQMIQERPK-GARJFASQSA-N Leu-Asn-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N WGNOPSQMIQERPK-GARJFASQSA-N 0.000 description 1
- WGNOPSQMIQERPK-UHFFFAOYSA-N Leu-Asn-Pro Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(CC(=O)N)C(=O)N1CCCC1C(=O)O WGNOPSQMIQERPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GZAUZBUKDXYPEH-CIUDSAMLSA-N Leu-Cys-Cys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N GZAUZBUKDXYPEH-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- PRZVBIAOPFGAQF-SRVKXCTJSA-N Leu-Glu-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O PRZVBIAOPFGAQF-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- LIINDKYIGYTDLG-PPCPHDFISA-N Leu-Ile-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O LIINDKYIGYTDLG-PPCPHDFISA-N 0.000 description 1
- DSFYPIUSAMSERP-IHRRRGAJSA-N Leu-Leu-Arg Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N DSFYPIUSAMSERP-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- RXGLHDWAZQECBI-SRVKXCTJSA-N Leu-Leu-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O RXGLHDWAZQECBI-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- IDGZVZJLYFTXSL-DCAQKATOSA-N Leu-Ser-Arg Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N IDGZVZJLYFTXSL-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- IWMJFLJQHIDZQW-KKUMJFAQSA-N Leu-Ser-Phe Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 IWMJFLJQHIDZQW-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- BGGTYDNTOYRTTR-MEYUZBJRSA-N Leu-Tyr-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N)O BGGTYDNTOYRTTR-MEYUZBJRSA-N 0.000 description 1
- DUTMKEAPLLUGNO-JYJNAYRXSA-N Lys-Glu-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O DUTMKEAPLLUGNO-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241001042466 Mammalian orthoreovirus Species 0.000 description 1
- GAELMDJMQDUDLJ-BQBZGAKWSA-N Met-Ala-Gly Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(O)=O GAELMDJMQDUDLJ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- OSOLWRWQADPDIQ-DCAQKATOSA-N Met-Asp-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O OSOLWRWQADPDIQ-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- ZRACLHJYVRBJFC-ULQDDVLXSA-N Met-Lys-Phe Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 ZRACLHJYVRBJFC-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- LBSWWNKMVPAXOI-GUBZILKMSA-N Met-Val-Ser Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O LBSWWNKMVPAXOI-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- 108010047562 NGR peptide Proteins 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- 239000008118 PEG 6000 Substances 0.000 description 1
- FRPVPGRXUKFEQE-YDHLFZDLSA-N Phe-Asp-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O FRPVPGRXUKFEQE-YDHLFZDLSA-N 0.000 description 1
- KDYPMIZMXDECSU-JYJNAYRXSA-N Phe-Leu-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 KDYPMIZMXDECSU-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- KLYYKKGCPOGDPE-OEAJRASXSA-N Phe-Thr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O KLYYKKGCPOGDPE-OEAJRASXSA-N 0.000 description 1
- 229920002584 Polyethylene Glycol 6000 Polymers 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 244000308495 Potentilla anserina Species 0.000 description 1
- 235000016594 Potentilla anserina Nutrition 0.000 description 1
- FZHBZMDRDASUHN-NAKRPEOUSA-N Pro-Ala-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1)C(O)=O FZHBZMDRDASUHN-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 1
- PULPZRAHVFBVTO-DCAQKATOSA-N Pro-Glu-Arg Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O PULPZRAHVFBVTO-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- SMFQZMGHCODUPQ-ULQDDVLXSA-N Pro-Lys-Phe Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O SMFQZMGHCODUPQ-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- GOMUXSCOIWIJFP-GUBZILKMSA-N Pro-Ser-Arg Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O GOMUXSCOIWIJFP-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- QFBNNYNWKYKVJO-DCAQKATOSA-N Ser-Arg-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CO)CCCN=C(N)N QFBNNYNWKYKVJO-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- ZXLUWXWISXIFIX-ACZMJKKPSA-N Ser-Asn-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O ZXLUWXWISXIFIX-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- RDFQNDHEHVSONI-ZLUOBGJFSA-N Ser-Asn-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O RDFQNDHEHVSONI-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- OHKFXGKHSJKKAL-NRPADANISA-N Ser-Glu-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O OHKFXGKHSJKKAL-NRPADANISA-N 0.000 description 1
- GZSZPKSBVAOGIE-CIUDSAMLSA-N Ser-Lys-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O GZSZPKSBVAOGIE-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- PTWIYDNFWPXQSD-GARJFASQSA-N Ser-Lys-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)N)C(=O)O PTWIYDNFWPXQSD-GARJFASQSA-N 0.000 description 1
- ADJDNJCSPNFFPI-FXQIFTODSA-N Ser-Pro-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)CO ADJDNJCSPNFFPI-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- WUXCHQZLUHBSDJ-LKXGYXEUSA-N Ser-Thr-Asp Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O WUXCHQZLUHBSDJ-LKXGYXEUSA-N 0.000 description 1
- FLMYSKVSDVHLEW-SVSWQMSJSA-N Ser-Thr-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O FLMYSKVSDVHLEW-SVSWQMSJSA-N 0.000 description 1
- BDMWLJLPPUCLNV-XGEHTFHBSA-N Ser-Thr-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O BDMWLJLPPUCLNV-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 1
- FHXGMDRKJHKLKW-QWRGUYRKSA-N Ser-Tyr-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 FHXGMDRKJHKLKW-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- WYKJENSCCRJLRC-ZDLURKLDSA-N Thr-Gly-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)O WYKJENSCCRJLRC-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 1
- SIMKLINEDYOTKL-MBLNEYKQSA-N Thr-His-Ala Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)O)N)O SIMKLINEDYOTKL-MBLNEYKQSA-N 0.000 description 1
- VRUFCJZQDACGLH-UVOCVTCTSA-N Thr-Leu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O VRUFCJZQDACGLH-UVOCVTCTSA-N 0.000 description 1
- 229910004338 Ti-S Inorganic materials 0.000 description 1
- XZSJDSBPEJBEFZ-QRTARXTBSA-N Trp-Asn-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O XZSJDSBPEJBEFZ-QRTARXTBSA-N 0.000 description 1
- PALLCTDPFINNMM-JQHSSLGASA-N Trp-Val-Pro Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CNC3=CC=CC=C32)N PALLCTDPFINNMM-JQHSSLGASA-N 0.000 description 1
- NGALWFGCOMHUSN-AVGNSLFASA-N Tyr-Gln-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O NGALWFGCOMHUSN-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- AKLNEFNQWLHIGY-QWRGUYRKSA-N Tyr-Gly-Asp Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N)O AKLNEFNQWLHIGY-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- IQQYYFPCWKWUHW-YDHLFZDLSA-N Val-Asn-Tyr Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)O)N IQQYYFPCWKWUHW-YDHLFZDLSA-N 0.000 description 1
- XTAUQCGQFJQGEJ-NHCYSSNCSA-N Val-Gln-Arg Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)N XTAUQCGQFJQGEJ-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- AGKDVLSDNSTLFA-UMNHJUIQSA-N Val-Gln-Pro Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N AGKDVLSDNSTLFA-UMNHJUIQSA-N 0.000 description 1
- WDIGUPHXPBMODF-UMNHJUIQSA-N Val-Glu-Pro Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N WDIGUPHXPBMODF-UMNHJUIQSA-N 0.000 description 1
- OTJMMKPMLUNTQT-AVGNSLFASA-N Val-Leu-Arg Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N OTJMMKPMLUNTQT-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- SYSWVVCYSXBVJG-RHYQMDGZSA-N Val-Leu-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O SYSWVVCYSXBVJG-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- VHIZXDZMTDVFGX-DCAQKATOSA-N Val-Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](C(C)C)N VHIZXDZMTDVFGX-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 1
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000005267 amalgamation Methods 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000009360 aquaculture Methods 0.000 description 1
- 244000144974 aquaculture Species 0.000 description 1
- 108010038633 aspartylglutamate Proteins 0.000 description 1
- 108010092854 aspartyllysine Proteins 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 210000005252 bulbus oculi Anatomy 0.000 description 1
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000012916 chromogenic reagent Substances 0.000 description 1
- 230000004087 circulation Effects 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 208000031513 cyst Diseases 0.000 description 1
- 238000013016 damping Methods 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 208000010824 fish disease Diseases 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 108010063718 gamma-glutamylaspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000012268 genome sequencing Methods 0.000 description 1
- 108010049041 glutamylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010037850 glycylvaline Proteins 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 1
- 238000010185 immunofluorescence analysis Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 108010078274 isoleucylvaline Proteins 0.000 description 1
- 108010057821 leucylproline Proteins 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 description 1
- 108010005942 methionylglycine Proteins 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 108091027963 non-coding RNA Proteins 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 108010051242 phenylalanylserine Proteins 0.000 description 1
- 238000013081 phylogenetic analysis Methods 0.000 description 1
- 210000002706 plastid Anatomy 0.000 description 1
- 239000002574 poison Substances 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000009465 prokaryotic expression Effects 0.000 description 1
- 108010029020 prolylglycine Proteins 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000010926 purge Methods 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 239000011535 reaction buffer Substances 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 235000011149 sulphuric acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000010414 supernatant solution Substances 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012549 training Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 239000005723 virus inoculator Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/15—Reoviridae, e.g. calf diarrhea virus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2720/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsRNA viruses
- C12N2720/00011—Details
- C12N2720/12011—Reoviridae
- C12N2720/12211—Orthoreovirus, e.g. mammalian orthoreovirus
- C12N2720/12222—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2720/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsRNA viruses
- C12N2720/00011—Details
- C12N2720/12011—Reoviridae
- C12N2720/12211—Orthoreovirus, e.g. mammalian orthoreovirus
- C12N2720/12234—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
- G01N2333/08—RNA viruses
- G01N2333/14—Reoviridae, e.g. rotavirus, bluetongue virus, Colorado tick fever virus
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5091—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing the pathological state of an organism
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56983—Viruses
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明公开了一种草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型S10基因编码的重组蛋白、由其制备的多克隆抗体及应用。草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型S10基因编码蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，编码该蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明获得的重组蛋白具有较好的免疫原性，与GCRV其它结构蛋白相比，其诱导免疫动物产生的特异性抗体效价更高。进一步试验表明，用S10重组蛋白免疫草鱼，可使草鱼诱导产生较高的特异性抗体，并能对草鱼呼肠孤病毒强毒株的攻击起到一定的免疫保护作用。因此，对GCRV Ⅱ型S10基因编码蛋白的研究和应用，对开发草鱼出血病新型疫苗及免疫学检测试剂盒具有极其重要的意义，为草鱼出血病提供新的有效解决途径。
Description
技术领域
本发明属于生物基因工程领域，具体涉及由草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型S10基因编码的重组S10抗原蛋白、由S10抗原蛋白制备的多克隆抗体及其应用。
背景技术
由草鱼呼肠孤病毒（Grass Crap Reovirus，GCRV）引起的草鱼出血病给我国草鱼养殖业造成巨大经济损失，严重制约着我国草鱼养殖的健康发展。GCRV具双层衣壳，病毒粒子平均直径为60 nm～70 nm，二十面体对称，无囊膜，基因组由11条分节段的双链RNA组成，根据其基因节段的大小，将其基因组按分子量大小分为3个组，分别命名为L1-L3、M4-M6和S7-S11。这11个RNA节段可以编码12种多肽蛋白，其中7种结构蛋白，分别命名为VP1-VP7，其余为非结构蛋白，命名为NS1-NS5。由于病毒的基因组的分节段特性，不同毒株之间可发生重配而产生高度变异，使得草鱼呼肠孤病毒的毒株较为复杂，目前已报道有20多个分离株，包括GCRV854、GCRV861、GCRV873、GCRV875、GCRV876、GCRV991、GCRV096、GCRV829、H962、ZV-8802、ZV-8909、GCHV-854、GCRV-HZ08、JX09-01、GCRV-104、GCRV-9014、GCRV-2008、GD108等，不同分离株在基因组序列、基因组带型、细胞病变、对草鱼的致病力等方面差异较大。根据现有的分离株基因序列信息，进行核苷酸序列与氨基酸序列比对以及构建系统进化树分析，所有毒株总体上可以分为3大类，分为3个基因型，即GCRVⅠ型（代表株为GCRV-873与GCRV-JX09-01）、GCRVⅡ型（代表株为GCRV-HZ08）和GCRV Ⅲ型(代表株为GCRV-104为)。当前，全国各地分离到的流行株中，三类亚型均有报道，有单独感染，也有混合感染,以HZ08株为代表的GCRV Ⅱ型是目前导致草鱼出血病流行和爆发的主要株型。
目前，对于草鱼出血病的防治，还没有特异有效的治疗药物和方法，最为有效的办法仍然是免疫预防，草鱼出血病细胞灭活疫苗与细胞弱毒疫苗的应用，对减少草鱼出血病的发生起到了一定的效果。但灭活疫苗的免疫原性比较差，需要足够大的量才能引起免疫应答，而大剂量又可引起局部或全身反应，并且所获得的免疫应答比较短暂，需要多次注射来增强免疫应答，而灭活疫苗的生产成本又比较高；细胞弱毒疫苗存在毒力返强的危险，有散毒的风险。和传统疫苗相比，基因工程疫苗存在较多有点，其抗原成分单一、免疫原性强，能够刺激机体产生较强的体液和细胞免疫应答，持续时间长；可规模化生产，成本相对低廉。此外，一种疫苗的免疫效果如何，需要合适的方法来检测和评价。通过免疫学方法来检测免疫动物特异性抗体的有无及抗体效价的高低是目前最为简便和有效的方法。由于草鱼呼肠孤病毒免疫原性比较差，至今还没有一种有效的免疫学诊断方法，尤其是缺乏评价疫苗免疫效果的血清学检测方法。
GCRV-873（Ⅰ型）是第一个完成全基因组测序的水生呼肠孤病毒，是至今为止研究最为深入和系统的毒株，关于GCRV-873株基因组各基因节段及其编码蛋白的功能和作用研究比较多。GCRV-HZ08（Ⅱ型） 为一个新的分离株，对其各节段基因及其编码蛋白的功能和作用还未有深入研究。通过生物信息学软件分析表明，HZ08株S10编码一个长达345AA的VP38蛋白，分子量为38.39kDa，该蛋白与禽呼肠孤病毒（Avian Reovirus，ARV）的非结构蛋白sNS同源性约14.5%，与哺乳动物正呼肠孤病毒（Mammal reovirus，MRV）的非结构sNS的同源性约7.2%，在核苷酸和氨基酸水平上均找不到和水生呼肠孤病毒的同源基因。因此，一直以来GCRV-HZ08株S10基因编码蛋白被认为是非结构蛋白，且可能具有与MRV和ARV的sNS蛋白相似的功能。
发明内容
我们的最近研究发现：GCRV-HZ08株S10基因编码蛋白为结构蛋白，且比GCRV其它结构蛋白诱导免疫动物产生更高效价的特异性抗体，具有更好的免疫原性；针对S10编码蛋白的抗体可以特异性识别GCRV Ⅱ型毒株，并对该类型毒株具有很强的中和能力；进一步试验表明，用S10重组蛋白免疫草鱼，可使草鱼诱导产生较高的特异性抗体，并能对草鱼呼肠孤病毒强毒株的攻击起到一定的免疫保护作用。因此，对GCRV Ⅱ型S10基因编码蛋白的研究和应用，对开发草鱼出血病新型疫苗及免疫学检测试剂盒具有极其重要的意义。
由此，本发明的一个目的在于提供一种S10抗原蛋白，及由其制备得到的多克隆抗体。
本发明的另一个目的在于提供上述S10抗原蛋白和抗S10抗原蛋白的多克隆抗体在制备草鱼出血病基因工程疫苗或制备草鱼呼肠孤病毒检测试剂盒上中的应用。
本发明所采取的技术方案是：
一种草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型S10基因编码蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。
一种编码权利要求1所述蛋白的核酸，其碱基序列如SEQ ID NO:1所示。
上述S10基因编码蛋白作为鱼呼肠孤病毒抗原蛋白的应用。
一种多克隆抗体，是以氨基酸序列为SEQ ID NO:2所示的蛋白为抗原，免疫动物制备所得。
上述S10基因编码蛋白和/或上述的抗S10基因编码蛋白的多克隆抗体在制备草鱼出血病基因工程疫苗中的应用。
上述S10基因编码蛋白在制备草鱼呼肠孤病毒检测试剂盒上的应用。
一种基因工程疫苗，含有上述的S10基因编码蛋白或抗S10基因编码蛋白的多克隆抗体。
一种检测草鱼呼肠孤病毒的试剂盒，含有上述的S10基因编码蛋白。
本发明的有益效果是：
本发明获得的重组蛋白具有较好的免疫原性，与GCRV其它结构蛋白相比，其诱导免疫动物产生的特异性抗体效价更高。以S10基因编码蛋白免疫草鱼，可使草鱼诱导产生较高的特异性抗体，并能对草鱼呼肠孤病毒强毒株的攻击起到较好的免疫保护效果（保护率为73.3%）。因此，S10基因编码蛋白是研制草鱼出血病基因工程疫苗较好的候选抗原。以S10基因编码蛋白作为检测草鱼呼肠孤病毒抗体效价的间接酶联免疫吸附试验（ELISA）的包被抗原，能很好的识别GCRV感染或疫苗免疫草鱼产生的特异性抗体；并且，通过该方法获取的包被抗原，具有快速、特异、敏感、简便和安全的优点，克服了组织和细胞培养方法产生完整病毒作为间接ELISA包被抗原而造成的操作过程繁琐、不稳定、产量低、成本高的缺点。因此，本发明的GCRV Ⅱ型S10基因及其编码蛋白，对开发草鱼出血病新型疫苗、免疫学检测试剂盒及治疗产品具有重要的意义，为草鱼出血病提供新的有效解决途径。
附图说明
图1为GCRV Ⅱ型毒株 S10基因PCR扩增产物电泳图，图1中 M为DL marker 1000；1为阴性对照；2为以 pVAX1-S10质粒为模板的PCR扩增产物；
图 2为重组质粒pET-32a-S10双酶切鉴定结果，图2中M为DL marker 15000；1为重组质粒pET-32a-S10双酶切产物；2为空载体pET-32a（+）双酶切产物；
图3为SDS-PAGE分析重组质粒pET-32a-S10表达产物及其可溶性，图3中M为低分子质量蛋白质marker；1为IPTG诱导的pET-32a-S10菌体；2为IPTG诱导的pET-32a-S10菌液上清；3为未经IPTG诱导的pET-32a-S10菌体；4为未经IPTG诱导pET-32a-S10的菌液上清；5为IPTG诱导的pET-32a（+）的菌体；6为菌体超声波破碎后的上清；7为菌体超声波破碎后的沉淀；
图4为S10基因编码重组蛋白经Ni柱纯化后SDS-PAGE分析结果，图4中M低分子质量蛋白质marker；1为纯化的S10基因编码重组蛋白；2为通过Ni柱的流穿液；3为未纯化的菌体总蛋白；
图5为western blot 分析S10编码蛋白抗血清特性，图5中M低分子质量蛋白质marker；1为纯化的HZ08毒株；2为 pET-32a（+）空载体；3为纯化的S10基因编码重组蛋白；
图6为间接免疫荧光分析S10编码蛋白抗血清特性，图6中A为接种HZ08株的CIK细胞；B为未接种病毒的正常CIK细胞对照。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明，但并不局限于此。
以下实施例中所采用的分子生物学实验技术包括PCR扩增、质粒提取、质粒转化、DNA片段连接、酶切、凝胶电泳等，如无特殊说明，通常按照常规方法操作，具体可参见《分子克隆实验指南》(第三版) (Sambrook J, Russell DW，Janssen K, Argentine J.黄培堂等译，2002，北京：科学出版社) ，或按照制造厂商所建议的条件。
实施例
一、草鱼呼肠孤病毒HZ08株RNA的提取和S10基因片段扩增
按照Qiagen RNA提取试剂盒（购自Qiagen公司，货号：74104）的说明书步骤，从感染GCRV HZ08株病毒的CIK细胞内中提取RNA，用TAKARA（购自大连宝生物工程有限公司，货号：）反转录试剂盒将病毒RNA反转录成cDNA。GCRV HZ08病毒株由珠江水产研究所鱼病室保藏。
根据GenBank（GenBank: GU350747.1）中GCRV-HZ08株S10基因序列设计1对引物，上游引物：5'- ATA GGA TCC ATG GCG GGT GTG TCT CT CAA CA - 3'（SEQ ID NO:3）；下游引物：5'-GCT AAG CTT CAG CAT CTG CGC AAA TAT ACG TC -3'（SEQ ID NO:4），在上下游引物序列中分别插入BanHⅠ和HandⅢ酶切位点（带下划线的基因），以上述制备的cDNA为模版，对S10基因进行PCR扩增。每25μL反应体系中加入2.5μL 10×PCR reaction buffer，0.5μL dNTP（10mM each），上、下游引物分别为0.5μL，2μL cDNA作为模版，LA Taq酶0.25μL，ddH2O 18.75μL；反应条件为：95℃预变性5min，94℃ 40s，54℃ 45s，72℃ 1min，共30个循环，72℃延伸8min。
PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测，发现在约110bp处出现一条预期大小一致的特异性扩增条带（见图 1），用胶回收试剂盒回收纯化目的条带，经测序验证与预期相符。
二、pET-32a-S10重组表达载体构建
将PCR回收产物和原核表达载体pET-32a（+）分别双酶切处理（BanHⅠ1μl，HandⅢ 1μl，10×K buffer 2μl，质粒16μl）后，经1%琼脂糖电泳分析，胶回收S10目的片段和处理好的pET-32a（+）载体，用T4 DNA连接酶连接S10目的片段和pET-32a（+）（T4 Liqase 1.5μl，T4 Liqase buffer 1.5μl，pET-32a（+）3μl，S10目的片段9μl，共15μl）,，将连接产物转化到大肠杆菌DH5α，筛选阳性克隆，菌液PCR鉴定为阳性的提取质粒，质粒经双酶切和测序鉴定正确后，命名为pET-32a-S10，保存用于后续试验。
PCR和双酶切鉴定结果(见图 2)均显示重组表达质粒pET-32a-S10构建正确，测序结果证实目的片段及阅读框均正确，且目的基因S10和pET-32a（+）的His-Tag标签蛋白在同一开放阅读框下。
三、诱导表达和可溶性分析
诱导表达：将鉴定正确的重组质粒pET-32a-S10转化到大肠杆菌BL21（DE3），挑取LB/Amp平板筛选的阳性克隆，于LB/Amp培养基中，37℃，200rpm/min恒温摇床培养至光密度（OD600=0.6）时，加入终浓度为1mmol/L的TPTG诱导，诱导10h后取200μl菌液离心收集菌体和上清备用，同时设立空载体pET-32a（+）作为阴性对照。
可溶性分析：将pET-32a-S10诱导表达20ml，离心收集菌体，用PBS重悬离心洗涤2次后，加入5ml PBS重悬菌体，在冰上超声波破碎（工作5s，间歇10s，功率250w）约2h至溶液澄清，吸取200μL破碎液，6000rpm/min离心5min，将上清吸到另一EP管记为溶液A，沉淀用200μl 6M的尿素溶解，记为溶液B，分别将A、B溶液进行SDS-PAGE，对该重组蛋白进行可溶性分析，若目的蛋白主要在A溶液中，则该蛋白为可溶性蛋白；若目的蛋白主要在B溶液中，则目的蛋白以包涵体形式存在。
经SDS-PAGE分析诱导表达的重组蛋白显示，重组质粒pET-32a-S10菌株在53ku处出现一条目的条带（见图3），pET-32a（+）载体的的His-标签蛋白与目的蛋白一起融合表达。取超声波破碎液离心后的上清溶液A和6M尿素溶解沉淀的溶液B ，经SDS-PAGE分析表明，融合标签蛋白的目的蛋白主要存在B溶液中，即目的蛋白主要以包涵体形式存在（见图3）。
四、诱导表达条件的优化
采用棋盘法优化诱导条件，把pET-32a-S10转化到大肠杆菌BL21（DE3）感受态中，LB/Amp平板筛选阳性菌落，挑取单菌落于3ml LB/Amp培养基中，在37℃，200rpm/min恒温摇床培养12h，然后将菌液接种20μL到2mL LB/Amp培养基中，在37℃，200rpm/min恒温摇床培养至光密度（OD600设0.2、0.4、0.6、0.8和1.0，已实际测定为准）时，加入TPTG诱导（IPTG终浓度设0.5、1.0、1.5、2.0、3.0 mmol/L），培养10h后取200μl菌液离心，收集菌体，经SDS-PAGE分析后用BandScan 5.0软件分析重组蛋白的相对表达量。
最后得出当诱导表达条件是：OD600为0.8左右，IPTG终浓度为1.5mmol/L时，其表达条件最佳，目的蛋白的含量可达60%以上。
五、目的蛋白的大量表达和纯化
挑取LB/Amp平板筛选得阳性单菌落到1mL LB/Amp培养基培养10~12h，然后将其接种到1L LB/Amp培养基，37℃，200rpm/min恒温摇床培养，在优化的表达条件下诱导表达。将诱导表达的菌液在10000rpm/min离心5min，收集菌体，用400ml PBS重悬离心洗涤2次，再加入100 ml PBS重悬，在冰上超声波破碎至溶液澄清。将破碎液离心收集包涵体（该蛋白可溶性检验为包涵体蛋白），然后参照Ni-凝胶纯化试剂盒（包涵体蛋白纯化）说明书纯化目的蛋白。用50ml Binding Buffer溶解包涵体过夜，将溶解液10000rpm/min离心20min收集上清，再0.45μm的滤膜过滤，将上清负载上已平衡好的Ni柱流速10倍柱体积/小时，收集流穿液；用15倍柱体积的Binding Buffer洗去未结合蛋白和杂蛋白，然后用20ml Elution Buffer洗脱目的蛋白，收集洗脱峰（整个纯化过程在4℃冰箱中进行）。将Ni柱上洗脱下的蛋白装入透析袋，依次放入含6M，4M，2M，1M，0.5M，0M尿素的PBS溶液中透析，每个浓度透析12h（全部过程在4℃冰箱中进行）。透析完成后加入PEG-6000，4℃冰箱静置浓缩，浓缩50%后分装成1mL/管，用紫外吸光光度法测浓度后－20℃保存备用。
六、多克隆抗体的制备
将纯化的目的蛋白用无菌PBS稀释至200μg/ml后注射昆明小白鼠。第一次免疫用弗氏完全佐剂1:1乳化，注射量为200μL/只，共免疫10只。第二次免疫和第三次免疫用弗氏不完全佐剂1:1乳化，注射同样的量。每次免疫时间间隔14d。第三次免疫10d后天断尾取血，制备血清，用ELISA检测血清抗体的效价。如抗体效价不够，可以加强免疫一次，如足够高，则第14d摘眼球取血。采取的血样37℃静置1h后4℃冰箱静置过夜，第二天3000rpm/min离心8min，收集血清，－20℃保存备用。对照组注射无菌PBS制备阴性血清。
七、血清抗体效价测定
根据本实验室建立的草鱼呼肠孤病毒间接ELISA检测方法来测定血清抗体效价，即用纯化的S10编码蛋白作为抗原包被聚苯乙烯反应板来建立的间接ELISA方法。其简要过程如下：将纯化的重组蛋白用pH9.6的碳酸盐缓冲液按1:8000倍稀释（70ng/ml）包被100μL于96孔酶标板，4℃过夜；用200μL 1%BSA于37℃封闭2h；将制备的血清按1:10、1:102、1:103、1:104、1:105、1:106、1:107、1:108、1:109、1:1010等梯度稀释加入100μL，37℃孵育2h，以相应稀释倍数的阴性血清做对照；加入1：5000稀释的HRP标记的羊抗鼠IgG100μL， 37℃孵育1h；以上每步反应后都用200μL PBST洗板3—5次，每次5min；最后用TMB显色试剂盒显色20min，加入0.5M的H2SO4终止显色，在酶标仪（Infinite M200 PRO）上读OD450值。当OD450≥0.277，且P/N≥2.1判定为阳性。
用间接ELISA 法对S10基因编码重组蛋白鼠抗血清进行效价测定，结果表明该抗体效价约为1:106。
八、多克隆抗体特性分析
Western blot分析：将纯化的GCRV HZ08病毒、IPTG诱导的pET-32a(+)空载体和纯化的S10基因编码重组蛋白经SDS-PAGE电泳，电泳结束后用半干转膜法将蛋白转移到NC膜上，用含5%脱脂牛奶的TBST缓冲液4℃封闭过夜；加入1:1000稀释的血清，37℃孵育2h；加入1:5000稀释的HRP标记的羊抗鼠IgG，37℃孵育1h；每次反应后用TBST洗3～5次，每次5min，最后用DAB显色剂显色并观察结果。
制备的多克隆抗体经western blot分析，加入纯化的GCRV HZ08毒株的孔道中，在约38ku处出现一条特异性条带，与病毒S10基因自身编码的蛋白大小一致；在加入纯化的重组蛋白的孔道中，在约53ku处出现一条特异条带，与预期大小一直；而加入空载体菌体的孔道中没有任何条带。
间接免疫荧光试验（Indirect immunofluorescent assay，IFA）：将CIK细胞传代至96孔细胞培养板中，待细胞长至单层铺满80%左右后，感染HZ08病毒；感染病毒5d后，将细胞培养板中的培养基吸尽，用0.01mol/L的PBS洗涤3次，加入80%的丙酮溶液室温孵育30min，吸去丙酮，室温干燥1h；每孔加100μl 1：1000稀释的鼠抗S10蛋白多克隆抗体，37℃孵育1h，PBST洗涤3次，加入1:50稀释的羊抗鼠IgG-FITC标记的荧光二抗100μl，37℃孵育1h；PBST洗涤3次，最后加入细胞核染料碘化丙啶（PI）作用5min，荧光倒置显微镜（Nikon，Eclipse Ti-S）下观察结果。阴性对照为未感染病毒的正常CIK细胞。
间接免疫荧光实验的结果显示，制备的多克隆抗体能使感染HZ08毒株的CIK细胞能产生特异性的荧光 (见图6中 A)，而在未感染病毒的正常CIK细胞中观察不到荧光信号。
九、动物免疫保护试验
以当年8－10 cm左右大小（大约20g-25 g）的草鱼作为免疫对象，在试验池中暂养2周后进行免疫试验。实验前采取10尾草鱼的血清，作为阴性对照。纯化的重组蛋白用无菌PBS稀释，试验分为3各组，每组30尾鱼，第一组没尾注射10μg重组蛋白；第二组注射20μg重组蛋白，第三组注射PBS作为空白对照。第一次免疫用弗氏完全佐剂1:1乳化，每尾腹腔注射200μL。免疫2周后，加强免疫用弗氏不完全佐剂1:1乳化，注射同样的量。分别从第一次2周和加强免疫2周后的每组鱼中采取4尾鱼的血清，用ELISA检测血清抗体的滴度。ELISA检测的操作步骤为：大体步骤实施例第七步所述方法进行，只是这里的血清换成200倍稀释的草鱼血清作为一抗，每孔加入100μL，酶标二抗换成HRP标记的鼠抗草鱼IgM，最后用TMB显色试剂盒显色20min，加入0.5M的H2SO4终止显色，在酶标仪（Infinite M200 PRO）上读OD450值（见 表1）。
表 1 免疫草鱼血清特异性抗体滴度
以上实验结果表明，用S10重组蛋白免疫草鱼，可使草鱼诱导产生较高的特异性抗体，并能对草鱼呼肠孤病毒强毒株的攻击起到一定的免疫保护作用。
以上实施例仅为介绍本发明的优选案例，对于本领域技术人员来说，在不背离本发明精神的范围内所进行的任何显而易见的变化和改进，都应被视为本发明的一部分。
<110> 中国水产科学研究院珠江水产研究所
<120> 草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型S10基因编码的重组蛋白、由其制备的多克隆抗体及应
用
<130>
<160> 4
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 1038
<212> DNA
<213> Grass Crap Reovirus
<400> 1
atggcgggtg tgtctctcaa catcaatcgc aacatctcaa actcggcatc aacgatcttt 60
ctcgaagata ttccattact gtcatgttca gtgcggtgtg aacccggtaa aggacgcgaa 120
ttaccaaaat ttaacatgag ctgccctgct attaacgcga tgggtcgatg tcttaatcca 180
atgaagttca ttgctgagca ctgggtcccc aacagtccaa gtcgtaaacc atccagacag 240
cattggcgta atgttttgaa tggactggaa ttcagtaatg gtcgtggatt cgatgtgctg 300
agtttctcac cagcgggcat ggctgttctt cgtgacatcc tgacagaaga tagcgtgaac 360
tattgctttg acgagagtaa cacttgcagt ttgttcacct tgctgtacac tctgtgttgc 420
gatgccgcag gcgtagaacc gatggacttg gattcacgtc agacggacgc cagtgcccgg 480
atggtgagct accaagatcg cgctatcgtg ctgacctcta atgaggcagg agatagaatt 540
gagccgtgga atgttgagct cgacaaggag tttggaaatc cagatctgct cagccgtctg 600
aacatctcat atggcgtgca acgatatggc gactccaaag ccagcacaga cactctgacc 660
ttggctgatg ccccagagag gtccaagcct gctctgatta ctgtgcaacc cttgttggtg 720
gctatgtgca tcaaacaatc tttggatggc ttgctggctt tatctgattt gcgcctgaga 780
ttcgatcagt atcctggata cgcaaatgct ctcatgaatg ctatggccat gtacgcttgc 840
ctagatcgtg acttgatgcg ttttctgctc cgcttagaaa tgactcacgc gagcacggtg 900
tctgaagtgg ctgagtgctg gaggaactct cgcaactctc gcgatgcaac aggttgtcat 960
attgtcccac gtcaaggttt gctcatcatc gtttccggag atgtcgaggt aagacgtata 1020
tttgcgcaga tgctgtag 1038
<210> 2
<211> 345
<212> PRT
<213> Grass Crap Reovirus
<400> 2
Met Ala Gly Val Ser Leu Asn Ile Asn Arg Asn Ile Ser Asn Ser Ala
1 5 10 15
Ser Thr Ile Phe Leu Glu Asp Ile Pro Leu Leu Ser Cys Ser Val Arg
20 25 30
Cys Glu Pro Gly Lys Gly Arg Glu Leu Pro Lys Phe Asn Met Ser Cys
35 40 45
Pro Ala Ile Asn Ala Met Gly Arg Cys Leu Asn Pro Met Lys Phe Ile
50 55 60
Ala Glu His Trp Val Pro Asn Ser Pro Ser Arg Lys Pro Ser Arg Gln
65 70 75 80
His Trp Arg Asn Val Leu Asn Gly Leu Glu Phe Ser Asn Gly Arg Gly
85 90 95
Phe Asp Val Leu Ser Phe Ser Pro Ala Gly Met Ala Val Leu Arg Asp
100 105 110
Ile Leu Thr Glu Asp Ser Val Asn Tyr Cys Phe Asp Glu Ser Asn Thr
115 120 125
Cys Ser Leu Phe Thr Leu Leu Tyr Thr Leu Cys Cys Asp Ala Ala Gly
130 135 140
Val Glu Pro Met Asp Leu Asp Ser Arg Gln Thr Asp Ala Ser Ala Arg
145 150 155 160
Met Val Ser Tyr Gln Asp Arg Ala Ile Val Leu Thr Ser Asn Glu Ala
165 170 175
Gly Asp Arg Ile Glu Pro Trp Asn Val Glu Leu Asp Lys Glu Phe Gly
180 185 190
Asn Pro Asp Leu Leu Ser Arg Leu Asn Ile Ser Tyr Gly Val Gln Arg
195 200 205
Tyr Gly Asp Ser Lys Ala Ser Thr Asp Thr Leu Thr Leu Ala Asp Ala
210 215 220
Pro Glu Arg Ser Lys Pro Ala Leu Ile Thr Val Gln Pro Leu Leu Val
225 230 235 240
Ala Met Cys Ile Lys Gln Ser Leu Asp Gly Leu Leu Ala Leu Ser Asp
245 250 255
Leu Arg Leu Arg Phe Asp Gln Tyr Pro Gly Tyr Ala Asn Ala Leu Met
260 265 270
Asn Ala Met Ala Met Tyr Ala Cys Leu Asp Arg Asp Leu Met Arg Phe
275 280 285
Leu Leu Arg Leu Glu Met Thr His Ala Ser Thr Val Ser Glu Val Ala
290 295 300
Glu Cys Trp Arg Asn Ser Arg Asn Ser Arg Asp Ala Thr Gly Cys His
305 310 315 320
Ile Val Pro Arg Gln Gly Leu Leu Ile Ile Val Ser Gly Asp Val Glu
325 330 335
Val Arg Arg Ile Phe Ala Gln Met Leu
340 345
<210> 3
<211> 31
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
ataggatcca tggcgggtgt gtctctcaac a 31
<210> 4
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 4
gctaagcttc agcatctgcg caaatatacg tc 32
Claims (6)
1.S10基因编码蛋白在制备鱼呼肠孤病毒抗原制剂中的应用，所述S10基因编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。
2.一种多克隆抗体，其特征在于，是以氨基酸序列为SEQ ID NO:2所示的蛋白为抗原，免疫动物制备所得。
3.S10基因编码蛋白和/或权利要求2所述的多克隆抗体在制备草鱼出血病基因工程疫苗中的应用，所述S10基因编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。
4.S10基因编码蛋白在制备草鱼呼肠孤病毒检测试剂盒上的应用，所述S10基因编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。
5.一种基因工程疫苗，其特征在于，含有S10基因编码蛋白或含有权利要求2所述的多克隆抗体，所述S10基因编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。
6.一种检测草鱼呼肠孤病毒的试剂盒，其特征在于，含有S10基因编码蛋白，所述S10基因编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310513653.5A CN103539842B (zh) | 2013-10-25 | 2013-10-25 | 草鱼呼肠孤病毒ⅱ型s10基因编码的重组蛋白、由其制备的多克隆抗体及应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310513653.5A CN103539842B (zh) | 2013-10-25 | 2013-10-25 | 草鱼呼肠孤病毒ⅱ型s10基因编码的重组蛋白、由其制备的多克隆抗体及应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103539842A CN103539842A (zh) | 2014-01-29 |
| CN103539842B true CN103539842B (zh) | 2015-05-13 |
Family
ID=49963740
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201310513653.5A Expired - Fee Related CN103539842B (zh) | 2013-10-25 | 2013-10-25 | 草鱼呼肠孤病毒ⅱ型s10基因编码的重组蛋白、由其制备的多克隆抗体及应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103539842B (zh) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104560860B (zh) * | 2015-01-27 | 2017-09-19 | 中国科学院水生生物研究所 | 一种枯草芽孢杆菌gc5表面展示gcrv vp7蛋白的重组芽孢及制备方法 |
| CN106866796A (zh) * | 2017-02-07 | 2017-06-20 | 中国水产科学研究院珠江水产研究所 | 草鱼呼肠孤病毒ⅱ型s9基因编码的重组蛋白及其应用 |
| CN108324936B (zh) * | 2017-10-27 | 2019-11-01 | 河南师范大学 | 一种草鱼呼肠孤病毒vp35蛋白亚单位疫苗及其制备方法和应用 |
| CN108251445B (zh) * | 2017-12-29 | 2020-10-13 | 广东海大畜牧兽医研究院有限公司 | 一种gcrv ii s9及s10重组蛋白规模化的制备工艺及应用 |
| CN108342513B (zh) * | 2018-05-10 | 2020-09-29 | 中国水产科学研究院长江水产研究所 | 一种不同基因型草鱼呼肠孤病毒通用型rt-pcr检测引物及应用 |
| CN108504783A (zh) * | 2018-06-07 | 2018-09-07 | 安徽省农业科学院水产研究所 | 一种草鱼呼肠孤病毒的检测方法 |
| CN108846258B (zh) * | 2018-06-08 | 2021-05-18 | 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 | 一种自动检测分节段rna病毒重配的方法 |
| CN111303253A (zh) * | 2020-02-21 | 2020-06-19 | 上海海洋大学 | 一种草鱼Fibulin4蛋白结合多肽及其在抗病毒中的应用 |
| CN112206317B (zh) * | 2020-10-12 | 2023-09-22 | 浙江省淡水水产研究所 | 一种草鱼出血病二价核酸菌蜕疫苗的制备方法 |
| CN115850397A (zh) * | 2022-07-22 | 2023-03-28 | 南阳师范学院 | 一种ii型草鱼呼肠孤病毒样颗粒及其制备方法和应用 |
-
2013
- 2013-10-25 CN CN201310513653.5A patent/CN103539842B/zh not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (6)
| Title |
|---|
| ADJ75343;Wang Q. et al;《Genbank》;20121023;1 * |
| Complete Genome Sequence of a Reovirus Isolated from Grass Carp, Indicating Different Genotypes of GCRV in China;Qing Wang et al;《Journal of Virology》;20121130;第86卷(第22期);12466 * |
| GU350747;Wang Q. et al;《Genbank》;20121023;1 * |
| 草鱼呼肠孤病毒HZ08株S10编码蛋白多克隆抗体制备及其初步应用;李永刚等;《中国水产学会鱼病专业委员会2013年学术研讨会论文摘要汇编》;20131105;65 * |
| 草鱼呼肠孤病毒HZ08株S10编码蛋白多克隆抗体制备及其特性分析;李永刚等;《水产学报》;20140331;第38卷(第3期);449-456 * |
| 草鱼呼肠孤病毒HZ08株VP4蛋白单克隆抗体的制备及鉴定;曾伟伟等;《水产学报》;20130331;第37卷(第3期);450-456 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103539842A (zh) | 2014-01-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103539842B (zh) | 草鱼呼肠孤病毒ⅱ型s10基因编码的重组蛋白、由其制备的多克隆抗体及应用 | |
| CN103585625B (zh) | 一种猪流行性腹泻重组杆状病毒基因工程亚单位疫苗及其制备方法与应用 | |
| CN111218459A (zh) | 一种以人复制缺陷腺病毒为载体的重组新型冠状病毒疫苗 | |
| CN107432930B (zh) | 一种i群4型禽腺病毒dna疫苗及其制备方法和应用 | |
| CN109651488A (zh) | 猪丁型冠状病毒重组n蛋白及其多克隆抗体的制备方法 | |
| CN106866796A (zh) | 草鱼呼肠孤病毒ⅱ型s9基因编码的重组蛋白及其应用 | |
| CN103224914B (zh) | 表达融合外源表位n蛋白的重组小反刍兽疫病毒的构建及应用 | |
| CN105331636A (zh) | 一种稳定表达猪瘟病毒e2蛋白的重组细胞系及其应用 | |
| CN103751774A (zh) | 稳定表达猪瘟病毒e2蛋白的重组细胞系及其在制备猪瘟亚单位疫苗和诊断试剂中的应用 | |
| CN104826100A (zh) | 一种猪瘟病毒重组亚单位疫苗的制备方法与应用 | |
| CN104962581A (zh) | 一种表达非洲猪瘟病毒p72蛋白的重组病毒疫苗株 | |
| CN102807970B (zh) | 犬瘟热病毒敏感细胞系及其建立方法和应用 | |
| CN103751773A (zh) | 稳定表达猪瘟病毒e0-e1-e2蛋白的重组bhk细胞系及其在制备猪瘟疫苗与诊断试剂中的应用 | |
| CN105349562B (zh) | 表达猪细小病毒vp2蛋白的重组载体、重组菌及其应用 | |
| CN107056898A (zh) | 鲤疱疹病毒3型1301株orf136基因重组表达蛋白、抗体及其应用 | |
| CN105198970A (zh) | 一种1型鸭甲肝病毒vp0重组蛋白及其制备方法和应用 | |
| CN112194710A (zh) | 罗非鱼湖病毒s8基因编码的重组蛋白、由其制备的抗体及应用 | |
| CN110305852A (zh) | 表达猪流行性腹泻病毒s1基因重组伪狂犬病病毒的构建 | |
| CN103539839A (zh) | 肠道病毒71型的vp2抗原的中和表位多肽及其用途 | |
| CN106018780B (zh) | 一种基于f1蛋白的检测4型禽腺病毒抗体的间接免疫荧光试剂盒 | |
| CN105886531B (zh) | 分子标记猪瘟病毒弱毒疫苗的构建方法 | |
| CN104894045A (zh) | 一种共表达口蹄疫病毒vp1基因与免疫佐剂牛il-6基因的重组乳酸杆菌及其制备方法和应用 | |
| CN108315306A (zh) | 一株高繁殖能力猪瘟病毒及其构建方法 | |
| CN107936123A (zh) | 一种猪传染性胃肠炎病毒融合蛋白及其制备方法和应用 | |
| CN107167609A (zh) | 区分猪蓝耳病野毒株和疫苗毒株天津株的抗体间接elisa检测方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20180205 Address after: Liwan District Xingyu road Guangzhou City, Guangdong province 510000 No. 1 Co-patentee after: Pearl River Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences Patentee after: Guangzhou Pu Lin Biological Products Co., Ltd. Address before: 510380 Guangdong city of Guangzhou province Liwan District Fangcun West Long Xingyu Road No. 1 Patentee before: Pearl River Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences |
|
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20200409 Address after: 510385 No. 1 Xilongxing Fishing Road, Fangcun, Liwan District, Guangzhou City, Guangdong Province Patentee after: PEARL RIVER FISHERY RESEARCH INSTITUTE, CHINESE ACADEMY OF FISHERY SCIENCES Address before: Liwan District Xingyu road Guangzhou City, Guangdong province 510000 No. 1 Co-patentee before: PEARL RIVER FISHERY RESEARCH INSTITUTE, CHINESE ACADEMY OF FISHERY SCIENCES Patentee before: GUANGZHOU PULIN BIOLOGICAL PRODUCTS Co.,Ltd. |
|
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20150513 Termination date: 20201025 |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |