CN1058846A

CN1058846A - 溶液和生物体液中多肽和蛋白质的定性定量测定方法

Info

Publication number: CN1058846A
Application number: CN91104059.5A
Authority: CN
Inventors: 弗朗西斯科·德拉·瓦莱; 兰弗兰科·卡列加罗
Original assignee: Fidia SpA
Current assignee: Fidia SpA
Priority date: 1990-06-12
Filing date: 1991-06-12
Publication date: 1992-02-19
Also published as: IT1243281B; WO1991019982A1; IT9041626A0; IT9041626A1; AU7969091A; IL98466A0; EP0533779A1

Abstract

提供定性和定量测定生物体液或溶液中多肽或蛋白质检品的方法。本方法利用一种竞争型分析系统，其中竞争性试剂为待测物氨基酸序列中某个标记肽段。本方法以测定人神经生长因子为例加以说明。同时提供了应用本分析方法测定多肽或蛋白质检品的一套试剂系统，以及用在人类医学和兽医学中诊断和/或监测以及治疗各种疾病的方法，其中，特征性的多肽或蛋白质提供了有效的诊断手段。

Description

本发明涉及对溶液和生物体液中存在的多肽和蛋白质进行定性和定量测定的分析方法，尤其涉及到应用对多肽或蛋白质的一段氨基酸序列有专一性的抗体的一种竞争型分析测试系统，因而此多肽或蛋白或它们的某个片段可用作分析试剂。

对生物学上重要分子的分析方法必须灵敏而有专一性。至今为止，已发展了许多种测定生物体液中待测成分的方法（Levi montalci-ni R.et al.，J.Exp.Zool.116：321，1951;Varon S.et al.，Biochem-istry 6：2202，1967;Angeletti R.H.，Proe，Natl.Acad.Sci.USA 65：668，1970;Harper G.P.et al.，Nature 279：160，1979;Goldstein L.D.et al.，Neurochem.Res.3：175，1978;Walker P.et al.，Life Sci-ence 26：195，1980;Calissano P.et al.，Hormonal Prot，Peptides，Ⅻ：2，1984;意大利专利申请第47745A88号;Callegaro et al.，Proceed-ings of the Satellite to the 20th Annual Meeting of the American Society for Neurochemistry，“Trophic Facters and the Nervous System”，Colum-bus，Ohio，March 12-14，1989，Raven Pess，Fidia Research Series-印刷中，Kingsbury D.T.，Falkow S.，“Rapid Detection and Identification of Infectious Agents”，Academic Press，Levi Montalcini R.，Science 1237，1154，1987）。

所有这些方法都要求先获得一种或几种单克隆或多克隆抗体，或先获得可激活检测系统的待测成分。总之，无论以往还是现在都必须有相当大量的待测成分，以便通过免疫和克隆的方法获得抗体，或者用于发展标记系统。

抗原物质在生物体液中是否存在及浓度高低均可通过免疫分析技术进行测定。这项技术是根据待测抗原物质与抗体之间可形成复合物，而复合物中的一个成分可以接受标记，因而在把复合的受标记抗原或抗体与未复合的受标记抗原或抗体分离开后即可进行检测或定量分析。

在竞争型免疫分析技术中，待测液样品中的抗原物质与已知量的标记抗原共同竞争一定量的抗体结合位点。因此，与抗体结合的标记抗原与样品中的抗原在数量上成反比。与此相反，免疫测定分析用的是标记抗体，而结合到复合物中的标记抗体与样品液中的抗原物质在数量上成正比。

本方法中，为确定蛋白质分子中具有生物学意义的区段，先要确定其疏水区域和亲水区域。由于亲水区域一般都暴露在蛋白质分子的表面，因而很可能担负特定的生物功能，例如它们可能作为受体结合区域发挥作用，也可能就是抗原位点，诱导特异性抗体的产生。

本技术可用于鉴别多肽和蛋白质中与不同抗原性区域相对应的不同的疏水区域和亲水区域。例如，Hopp和Woods（（1961）Proc，Natl.Acad.Sci.USA 78：3824）提出了一个推导蛋白质分子亲水趋势的计算公式，因而能够推断多肽上某一给定肽段究竟是趋于位于蛋白结构表面还是处在结构内部。本方法着眼于长度为6-10个氨基酸残基的肽链，对单个氨基酸残基设定系数后计算其亲水值。这样沿着整个序列划分区段，每次改换一个氨基酸后进行计算，最终就得到了完整的图形（meier R.et al.，EMBO J 5：1489，1986）。亲水性最强的序列对应于Hopp-Woods图上的正峰，这些峰区以外的单点正值则对应于向溶剂暴露最多的残基，而这部分分子结构即相当于主要的抗原位点，也是活性位点之所在，或者说，分子的外露区域可同其它生物大分子发生作用。

目前技术的发展要求能设计出一种灵敏而高度专一的分析方法，使多肽的蛋白，包括生物活性并不完全清楚的多肽和蛋白质的检测更为便利。这类多肽之一为神经生长因子（NGF）。

在动物模型上已有很多NGF的体外和体内研究。发展至今，已有人设想NGF可望在早老性痴呆疾病的治疗中发挥重要作用（Sci-ence 243：11，1989）。最近，有人提出了其他一些意义的假说，认为NGF在中枢神经系统和免疫系统之间起调和作用（Aloe L.et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1983，6184：1986;Spillantini M.G.et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1986，8555：1989）。故迫切需要发展一种定量分析技术，使生物体液或培养基质中的人体NGF或其它有医学意义的多肽和蛋白质的检测更为使利。其次，还需要一种分析方法和对于待测分子适宜而有专一性的试剂。

在现有的蛋白质免疫分析方法中，“竞争型”系统无疑是在保证专一性的前提下最为灵敏的。利用竞争型反应系统检测生物体液的待测成分是这样进行的：将含或不含待测成分的样品与结合有抗待测成分的抗体的载体（通常称作固定相）一起保温。此后，在去除未同抗体结合的待测成分后，用适宜的缓冲溶液洗涤固定相，再同待测成分一起保温。以后待测成分可用一种可检测的试剂如生物素-抗生物素蛋白-酶系统进行直接或间接标记（Johnson B.et al.，J. Immunol.meth 115：219，1988）。目前已有多种检测方法可用于显示竞争型系统中待测成分与抗体之间的相互作用，也发现了好几种载体可用于吸附抗体。载体和检测系统仍在不断地改进，但建立在竞争型系统基础上的定量和定性分析技术主要还是利用了其专一性，即能明确而专一地确定某特定待测成分是否存在于液体中。显然，分析测定的专一性因其对具有某特定结构形式并与生物活性相关联的待测成分有特异性的识别而有所提高，同时也增加了对这种待测成分进行定量检测的生物学意义。在分析测定中，竞争型的专一性主要通过抗待测成分的抗体和用作示踪剂的标记待测成分而获得。

因此，本发明的一个目的在于为定性或定量检测生物体液或溶液中的多肽或蛋白质成分提供一种方法，包括以下步骤：

（a）生产对抗所述多肽或蛋白质的某一肽段的抗体;

（b）将所述生物体液或溶液的样品与所述抗体在标记的所述肽段存在下进行反应，以便检测所述抗体与所述标记肽段所形成的复合物;

（c）从（b）步骤的反应混合物中去除未反应的生物体液或溶液及标记肽段;

（d）将剩余的抗体同能检测抗体一标记肽段复合物的试剂一起保温;

（e）对（d）步骤的所述抗体复合物进行定性和定量的检测或测定。

本发明的另一个日的在于为诊断和/或监测乃至治疗人体或动物的某些疾病提供一种方法，这类疾病如神经免疫内分泌疾病、神经免疫退行性疾病，中枢神经系统方面和周围神经系统方面的疾病。根据此方法，还可确定与病理诊断有关的多肽或蛋白质成分在所述人体或动物的生物体液中的含量水平。

本发明的进一步的目的在于为定性或定量测定存在于生物体液或溶液中的多肽或蛋白质待测成分提供一套试剂系统，它包括：

抗待测成分的抗体，对所述多肽或蛋白质的某一片段有专一性，能够识别所述多肽或蛋白质待测成分;

一肽段，可被上述抗体所识别，也可被检测系统所检测。

本发明更进一步的目的在于为检测生物体液或溶液中的人体神经生长因子提供一种方法。包括下列步骤：

用人工合成的人神经生长因子的20-36肽段免疫家兔;生产抗上述人神经生长因子的多克隆抗体;

将上述多克隆抗体吸附至聚碳酸酯微量滴定的样品槽表面;

将上述生物体液或溶液样品置于上述样品槽中，与同生物素结合的20-36肽段一起在室温下保温24小时;

去除过量的未反应试剂，以含有牛白蛋白和去垢剂的缓冲溶液洗涤上述样品槽;

将与抗生物素蛋白结合的酶加至上述样品槽中，保温一段时间，直到抗生物素蛋白-生物素复合物形成;

洗涤上述样品槽以去除过量的试剂。

将溶于适宜缓冲溶液中的酶底物加到洗清的上述样品槽中，保温至生成酶反应的最终产物;

测定所形成的上述终产物的量;

借助于人神经生长因子的标准曲线，将上述所形成的终产物的量与上述人神经生长因子的量相对应;

下面提供的详述和附图将使本发明的进一步应用范围变得更明显。然而，必须明白，当指出较佳实施方案时，只是通过例证给出详细说明和特殊实施例，因为对于熟悉本技术的人们来说，从这一详述显而易见地可在本发明的主旨和范围内作各种改变和完善。

从下面的详细说明，结合附图，可以更好地理解本发明的上述及其它目的、特点和优点。所有这些都只是作为说明，而并非对本发明的限制。

图1表示这些抗20-36区段的人NGF多克隆抗体的反应性，与以NGF的2.5s成分为免疫剂获得的多克隆抗体在Western印迹杂交实验中对人NGF表现出的反应性相比较：a）用NGF的20-36肽段免疫家兔产生的多克隆抗体;b）用NGF的2.5s成分免疫家兔产生的多克隆抗体，分别用固定在固相载体上的20-36肽段和固定了的NGF的亲和层析进行提纯。采用市售放大系统检出多克隆抗体的存在。

在Western印迹杂交实验中，与NGF无关的抗血清不与该蛋白质起反应（未列出资料）。

检测系统：按制备说明书，用抗家兔Auroprobe BL加第二抗体（Janssen），可显现出形成印迹的蛋白质。

分子量：使用Pharmacla低分子量标识校准盒测定。

图2是如实施例1所述，显示在492nm处所处理样品光吸收值的标准曲线，揭示了在竞争性免疫测试系统存在下，待测成分、人NGF和光密度之间的线性关系。

X轴＝ng/ml人NGF

Y轴＝B/Bo，其中

Bo＝标准浓度示踪剂（用生物素标记的20-36肽段）的光吸收值。

B＝在相应量的竞争剂（人NGF）存在下得到的光吸收值。

下面是本发明的详细说明，以有助于技术人员实践本发明，尽管如此，下述本发明的详细说明不应视为是对本发明的不适当的限制，因为一般技术人员均可对此处讨论的实施方案进行改进和补充，而不偏离本发明的主旨和范围。

本说明中讨论到的每篇参考文献的内容都经全面考虑而结合到文中。

本发明的目的，是通过计算其基因序列及由之衍生的氨基酸序列的水合趋势，提供对某种可溶性多肽或蛋白质或其某个片段进行分析的方法。

下面以实施例1和例2来说明对通过重组DNA方法获得的生物活性形式的人体NGF的分析测定（意大利专利申请第48564A89）。同时，本发明的叙述中关于NGF的应用只是说明性质的，并非任何程度的限制，而基于本发明的具体实验操作可应用于任何多肽和蛋白质。

从小鼠腺体分离到的NGF表现为7S类型的复合蛋白（分子量约为140，000道尔顿），由三个不同的亚基（α、β、γ）通过一个Zn⁺原子缔合而成。

在生物活性方面，7S分子最有意义的部分包括了两条肽链，每条的分子量均为13，250道尔顿，由118个氨基酸残基组成。每条肽链或亚基都有三个二硫挢，通过这些二硫挢，每两个半胱氨酸之间形成共价键，使蛋白质的三级结构具有高度的稳定性。NGF的这两个单体通过弱键作用结合在一起，形成了分子量为26，500道尔顿的二聚体，其生物活性被证实与一个被称为2.5S的二聚体，即通常所说的βNGF有关。

从Hepp-Woods图中可能的亲水区域中，编号为20-36的氨基酸区段，即在NGF多肽的20-36区段的氨基酸，被选来说明本发明的应用。人工合成的NGF20-36肽段可用于产生多克隆抗体，这种多克隆抗体不但能选择性地识别并与该肽段本身起反应，而且能选择性地识别并与NGF整个分子起反应。这一区段为很多动物种属所共有，促进了NGF蛋白的分析。

用于固相infra，即吸附在载体上的抗NGF抗体可用特定的NGF片段-含有对应于20-36区段氨基酸序列的肽段来制备：将没有载体的此游离肽段配在完全福氏佐剂中，经多部位皮内注射来免疫家兔。获得的抗体再通过固定在固相载体上的同一肽段的亲和层析加以纯化。固定的肽段可由与用于免疫的肽段不同的合成制备方法而得到。这些抗20-36肽段的多克隆抗体被确认与生物活性形式的人NGF，2.5s或称作βNGF，有交叉反应性，被克隆化，并在真核细胞中得到表达（意大利专利申请No.48564A89）。

图1表示这些抗20-36区段的NGF克隆抗体的反应性高低。可以看到，以NGF20-36肽段和NGF的2.5S成分免疫剂获得的兔多克隆抗体在Western印迹杂交实验中对人体NGF表现出同样程度的反应性。

实施例1

在聚碳酸酯微量滴定扳上检测培养基中的人体NGF

A方法

A1.以抗体覆盖微量滴定扳

将前述抗20-36肽段的NGF多肽多克隆抗体吸附到聚碳酸酯微量滴定扳的样品槽内，以pH9.0的碳酸氢盐缓冲液加以稀释，然后于室温下保温24小时。

用于吸附在样品槽中的抗体的浓度从0.1-10μg/ml，较好地为1μg/ml，溶于0.1M，pH8.5的碳酸盐缓冲液。在样品槽中加上20μl-100μl，较好地为50μl这种溶液，如图2所示，50μl的量相当于50ng/槽。

然后，用0.15mol/升磷酸盐缓冲液（pH7.2）洗涤样品槽。

A2.将装有待测样品的微量滴定扳进行保温

在加有受生物素标记的20-36肽段（即半抗原-肽段复合物）的微量滴定扳的样品槽中，分别加入50μl不同浓度的分析样品，室温下静置保温24小时。

如图2所示，NGF的浓度为0.1-100μg/ml。所用缓冲液为含有0.1%小牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液。被标记的20-36肽段的量为2-20ng/ml，较好地为10ng/ml.相当于0.5ng/槽。

然后，去除过量而未起反应的试剂，再以含2%小牛白蛋白和非离子型去垢剂如0.05%吐温20的磷酸盐缓冲液（0.15mol/升，pH7.2）洗涤微量滴定扳的样品槽。

A3.与抗生物素标记的酶共同保温

经A2的操作步骤后，向样品槽加入某种易于购得的示踪剂，其中含有由抗生物素蛋白标记的酶，将溶于pH7.2，含0.05%吐温20和2%牛白蛋白的0.15M磷酸盐缓冲液中的辣根过氧化物酶。再将反应物在室温或37℃下保温4-6小时，用pH7.2，0.15M的磷酸盐缓冲液洗涤样品槽以去除过量试剂。

A4与酶底物共同保温

经A3步骤处理后，向样品槽内加入50μl含有0.4mg/ml邻苯二胺和0.2mg/ml过氧化氢混合物的0.1M枸橼酸盐缓冲溶液（pH5.0），保温15分钟后，再向微量滴定板的样品槽内加50μl 2.5mol/升的硫酸。

A.5光吸收值测定

对微量滴定板样品槽中的样品用分光光度计492nm处测定其吸收值（OD₄₉₂）。

B.结果

根据上述测定，获得样品槽中含不同浓度人体NGF样品溶液的光吸收读数值，并作图如图2。可以看到，待测样品中人体NGF浓度的提高与492nm处光吸收值有线性关系。应用此标准曲线，就可以对含有人体NGF蛋白的待测样品进行定量分折，以确定其含量。

实施例2

测定人体NGF的试剂系统（试剂盒）

本发明还涉及一套含检测研究中的蛋白或多肽所必需的成分的试剂系统。该试剂系统至少包括非结合的或与载体结合的抗肽段的抗体，及同标记试剂结合的此待测多肽或蛋白质，或它们的某个特定片段。

人体NGF的测定可按实施例1所述，使用复合测试试剂盒。该盒含有：

-聚碳酸酯微量滴定扳，其样品槽已吸附了抗20-36肽段，并能识别2.5S态（即βNGF）和非二聚态的NGF多克隆抗体;

-一组专一性示踪剂小瓶，由被抗20-36肽段抗体识别的氨基酸序列所组成;

-磷酸盐缓冲液瓶，pH7.2，含小牛白蛋白：

-吐温20去垢剂溶液瓶;

-酶反应底物瓶，含有在pH5.0缓冲液中的邻苯二胺和过氧化氢;

-含不同浓度人体NGF溶液及阴性对照溶液的小瓶;

-测试说明书。

由玻璃、塑料或其它适宜材料所制的试管，滴定扳或长条、小珠、圆盘均可用作载体。对于给定的测试类型，抗体并不一定要结合到载体上，也可以游离在溶液中，如果抗体不结合在载体上，就必须使用化学或生物学沉淀剂，如聚乙烯乙二醇，或使用复合试剂，如A蛋白或G蛋白。

作为标记/检测试剂，可使用酶类，如辣根过氧化物酶、β-半乳糖苷酶或碱性磷酸酶，荧光底物，荧光发光、化学发光、生物发光、放射活性、金属分子或生物素。

如有必要，试剂系统还可加一检测标记试剂的辅助物如酶反应底物，以及含或不含去垢剂的洗涤缓冲液和稀释缓冲液。

上面讨论了本发明的方法及试剂系统用于检测人体NGF特别是所谓2.5S（即βNGF）生物活性态的方法，而抗肽段抗体的应用则是多方面的。例如，这种抗体可用于对生物体液中所研究蛋白质进行免疫化学方面的定量测定，也可用于免疫亲和层析，使通常浓度很低并存在于成分复杂的生物体液中的相应抗原易于纯化（Corona G.et al.，“Synthetic Peptides： Approaches to bioclogical problems”，UCLA Symposia Colorado uSA 1980）。

任何多肽或蛋白质待测成分都可通过本发明的方法进行定性和/或定量测定。应用本发明的方法进行过测定的蛋白质样品有可溶性细胞激动素和生长因子。包括人类来源的神经生长因子，但并不局限于这些例子。当把本方法应用于测定其他多肽或蛋白质待测成分时，首先必须分析此待测成分的水合趋势，以便从肽段上选取最为有用的序列片段。然后生产抗所选出肽段的抗体。最后，用普通免疫方法确定抗体与多肽或蛋白质全分子的交叉反应程度。能够产生与待测成分全分子有效交叉反应的抗体的肽段序列即可用于本方法和试剂系统，以及所述的对多肽或蛋白质待测成分的定性和/或定量测定。

正如为普通熟练技术人员所显而易见的，本方法所述的在医学和兽医中具有重要意义的蛋白质的定性和定量测定，为诊断、监测和治疗种种疾病提供了一种有价值的快速诊断手段。这些疾病包括，但不限于，神经免疫退化型，如早老性痴呆、多发性硬化、亨延顿氏疾病、运动神经元疾病、格-巴二氏综合征和巴金森氏疾病，中枢神经系统疾病，如创伤性、缺氧、退行性或中毒-传染性疾病，外周神经系统疾病，如创伤-压迫性、退行性、代谢障碍性或中毒传染性疾病等。

本发明方法进一步的优点来自于以下事实，即用来产生分析含待测成分的液体所必需的多肽序列可通过靶蛋白或靶多肽的核苷酸序列来产生。而并不需要了解蛋白质或多肽的氨基酸序列，也不需要获取待测成分本身。此外，只用肽段免疫动物即可获得此种抗体，而不需要佐剂。最后一点，所需肽段的长度是短的，变化于8-30个氨基酸之间，最好为约17个氨基酸。

显然，对这样描述的本发明可作各种方式的修改。这些修改并不视为是对本发明的精神和目的的背离。对于熟练掌握本技术的人员所显而易见的任何修改都将被视为落在下面的权利要求范围内。

Claims

1、对生物体液或溶液中的多肽或蛋白质待测成分进行定性或定量分析的一种方法，其特征在于，包括以下步骤：

(a)生产对上述多肽或蛋白质某一肽段的抗体；

(b)将上述生物体液或溶液样品与上述抗体进行反应，同时要加标记的上述肽段，从而能够检测上述抗体与上述标记肽段所形成的复合物；

(c)从b步骤的反应混合物中去除未起反应的生物体液或溶液样品及标记肽段；

(d)将剩余的抗体与能够检测抗体-标记肽段复合物的试剂一起保温；

(e)对d步骤的上述抗体复合物进行定性和定量检测和测定。

2、如权利要求1所述的方法，其特征在于上述多肽、蛋白质或肽段的氨基酸序列由上述多肽或蛋白质的核苷酸序列获得。

3、如权利要求1所述的方法，其特征在于上述抗体可以游离于溶液中，也可以结合或吸附在载体上。

4、如权利要求1所述的方法，其特征在于所述抗体复合物在接受检测和测定之前即结合在载体上，或从溶液中沉淀出来。

5、如权利要求1所述的方法，其特征在于上述抗体对上述待测成分有专一性。

6、如权利要求1所述的方法，其特征在于所述抗体是通过所述待测成分的氨基酸序列所含的一个肽段进行免疫反应而获得的。

7、如权利要求1所述的方法，其特征在于所述抗体是通过不用佐剂，只用所述待测成分的氨基酸序列中所含的一个肽段进行免疫反应而获得的。

8、如权利要求1所述的方法，其特征在于所述肽段存在于所述多肽或蛋白质待测成分中的亲水区域中。

9、如权利要求8所述的方法，其特征在于上述肽段的确定需借助于可描绘所述多肽或蛋白质待测成分的水合趋势图的计算机程序。

10、如权利要求1所述的方法，其特征在于所述待测成分为一种可溶性细胞激动素。

11、如权利要求1所述的方法，其特征在于所述待测成分是一种生长因子。

12、如权利要求1所述的方法，其特征在于所述待测成分为人体来源的神经生长因子。

13、如权利要求1所述的方法，其特征在于所述抗体为多克隆抗体。

14、如权利要求1所述的方法，其特征在于使用一种通过酶反应可以测定的半抗原-肽段复合物作为竞争物和检测试剂。

15、如权利要求1所述的方法，其特征在于所述抗体对人体神经生长因子有专一性。

16、如权利要求15所述的方法，其特征在于所述抗体结合在固相载体上。

17、如权利要求15所述的方法，其特征在于所述固相载体为微量滴定板。

18、如权利要求16所述的方法，其特征在于使用非离子型去垢剂从所述抗体中去除所述未反应的生物体液或溶液及标记肽段。

19、如权利要求18所述的方法，其特征在于所述非离子型去垢剂为吐温20。

20、如权利要求1所述的方法，其特征在于所述生物体液或溶液选自如血清、隙间流液、淋巴液、关节液、水性体液、尿液、脑背髓液、汗液、泪液、唾液、胃分泌液、肠分泌液、胆汁、乳汁和培养溶液等类型的液体。

21、用于对生物体液或溶液中多肽或蛋白质待测成分进行定性或定量测定的试剂系统，包括：

抗待测成分的抗体，对所述多肽或蛋白质待测成分的某一肽段有专一性，并能识别所述多肽或蛋白质的待测成分。

某一肽段，能被所述抗体识别并由检测系统加以检测。

22、如权利要求21所述的试剂系统，其特征在于所述抗待测成分抗体通过其氨基酸顺序位于所述待测成分序列中的某一肽段的免疫作用而获得。

23、如权利要求22所述的试剂系统，其特征在于所述肽段为所述待测成分的亲水区域中的序列。

24、如权利要求23所述的试剂系统，其特征在于上述肽段的确定需借助于描绘所述待测成分的水合趋势图的计算机程序。

25、如权利要求21所述的试剂系统，其特征在于所述抗待测成分的抗体通过不需佐剂的免疫作用而获得。

26、如权利要求21所述的试剂系统，其特征在于所述抗体可识别人体神经生长因子的肽段区域，也可识别人体神经生长因子本身。

27、如权利要求26所述的试剂系统，其特征在于所述抗体结合或吸附在固相载体上。

28、如权利要求21所述的试剂系统，其特征在于所述肽段相当于所述多肽或蛋白质待测成分氨基酸序列的某一区域。

29、如权利要求21所述的试剂系统，其特征在于所述检测系统包括了荧光底物、显色试剂、金属成分或放射性标记物。

30、如权利要求21所述的试剂系统，其特征在于所述检测系统属于酶性质。

31、如权利要求21所述的试剂系统，其特征在于另外还包括酶底物。

32、如权利要求27所述的试剂系统，其特征在于所述固相载体为聚碳酸酯的微量滴定扳。

33、如权利要求21所述的试剂系统，其特征在于，另外还包括所述多肽或蛋白质待测成分的标准曲线。

34、如权利要求21所述的试剂系统，其特征在于，另外还包括含有去垢剂的蛋白质溶液。

35、诊断或监测人体或动物体的神经免疫内分泌疾病的一种方法，其特征在于，按权利要求1所述的方法，对所述人体或动物体液中某一与诊断有关的多肽或蛋白质的水平进行测定。

36、诊断或监测人或动物的神经免疫退行性疾病的一种方法，其特征在于，按权利要求1所述的方法，测定所述人或动物体液内与诊断有关的多肽或蛋白质的水平。

37、诊断或监测人或动物中枢神经系统疾病的一种方法，其特征在于，按权利要求1所述的方法，测定所述人体或动物体液内与诊断有关的多肽或蛋白质水平。

38、诊断或监测人体或动物周围神经系统疾病的一种方法，其特征在于，按权利要求1所述的方法对所述人体或动物体液中某一与诊断有关的多肽或蛋白质的水平进行测定。

39、测定生物体液或溶液中人体神经生长因子的一种方法，其特征在于，包括以下步骤：

用人工合成的人体神经生长因子20-36肽段免疫家兔产生抗上述人体神经生长因子的多克隆抗体;

将所述的多克隆抗体吸附到聚碳酸酯微量滴定扳的样品槽表面;

将所述生物体液或溶液样品置于所述样品槽中，并加入已结合生物素的20-36肽段，再在室温下保温24小时;

去除过量的未作用试剂，用含有牛白蛋白和去垢剂的缓冲溶液洗涤样品槽;

将与抗生物素蛋白结合的酶加到所述样品槽中，保温一段时间直到抗生物素蛋白-生物素复合物形成;

洗涤所述样品槽以去除过量的试剂;

将溶于适宜缓冲液的酶底物加到上述样品槽中进行保温，使酶反应的终产物得以形成;

测定形成的所述终产物的量;

利用人体神经生长因子的标准曲线，将形成的所述终产物的量与所述人体神经生长因子的量相对应。

40、如权利要求1的方法中选择肽段序列的一种方法，其特征在于，包括以下步骤：

选择存在于所述多肽或蛋白质的氨基酸序列中的肽段;

生产抗所述肽段序列的抗体;

确定所述抗体与所述多肽或蛋白质待测成分全分子交叉反应性的程度;

选择产生能与所述待测成分全分子进行有效交叉反应的抗体的肽段序列用于权利要求1的方法。