CN1639572A - 用于抗－ingap抗体的测定 - Google Patents

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Abstract

使用固相测定来检测抗INGAP104－118肽的抗体，其中INGAP104－118肽是15－氨基酸肽，它是胰岛新生相关蛋白(INGAP)的生物活性部分。可确定抗INGAP104－118肽的抗体的同种型。试剂盒也可用于检测抗－INGAP104－118抗体。可监测内源性自身抗体或者在用INGAP104－118治疗哺乳动物期间所产生的抗体。

Description

用于抗-INGAP抗体的测定
发明领域
本发明涉及抗体测定领域。具体地讲，本发明涉及抗施用的治疗剂的在哺乳动物中产生的抗体。
发明背景
胰岛是在体内产生胰岛素的唯一器官。然而，它们具有有限的再生能力。这种有限的再生能力使得哺乳动物容易患有糖尿病。胰岛新生相关蛋白(INGAP，SEQ ID NO：2)在刺激胰岛新生，特别是β细胞从导管细胞中再生方面起重要作用。INGAP104-118肽(IGLHDPSHGTLPNGS，SEQ ID NO：1)是包含INGAP蛋白的氨基酸104-118的15-氨基酸肽，其具有生物活性，并且能够在动物模型中诱导胰岛细胞再生。包含哺乳动物INGAP104-118肽的药物组合物可用于治疗可由糖尿病导致的内分泌性胰腺机能不全。
抗INGAP104-118肽的抗体可在反复施用INGAP104-118肽之后产生，或者可作为抗内源性蛋白的自身抗体产生，它们可减轻INGAP的作用或者用作糖尿病的诊断标记物。因此，本领域需要用于检测可在用INGAP104-118肽治疗后在个体中产生的抗体的方便测定。
发明概述
本发明的一个实施方案是检测试验样本中的抗INGAP104-118肽的抗体的方法。该方法包括将包含哺乳动物血清的试验样本与结合在固体载体上的INGAP104-118肽接触。这种接触是在足以让抗-INGAP104-118抗体与INGAP104-118肽接触的条件下进行的。将固体载体与能特异性地结合哺乳动物的所有同种型的抗体分子的检测抗体接触。测定结合在固体载体上的检测抗体。结合在固体载体上的检测抗体指示试验样本含有抗I NGAP104-118肽的抗体。
本发明的另一个实施方案是检测试验样本中抗INGAP104-118肽的抗体，并确定所述抗体的同种型的方法。该方法包括将包含哺乳动物血清的试验样本与结合在固体载体上的INGAP104-118接触。这种接触是在足以让抗-INGAP104-118抗体与INGAP104-118肽接触的条件下进行的。将固体载体与能特异性地结合哺乳动物的一种同种型的抗体分子的同种型特异性抗体接触。测定结合在固体载体上的同种型特异性抗体。结合在固体载体上的检测抗体指示试验样本含有抗INGAP104-118肽的抗体，以及抗INGAP104-118肽的抗体是一种同种型的抗体。
本发明的再一个实施方案是用于检测哺乳动物血清中的抗-INGAP104-118抗体的试剂盒。所述试剂盒包含INGAP104-118肽和检测抗体。
本发明的这些和其它实施方案给本领域提供了检测能与INGAP104-118肽结合的抗体的工具和方法，这些工具和方法可用于在用INGAP104-118肽治疗期间检测个体以及用于鉴定具有INGAP自身抗体的个体。
附图概述
图1直接检测抗-INGAP104-118的测定的示例性示意图。将肽不可逆地包被到微量滴定孔(1)的底部后，把试验样本加到孔(2)中。如果试验样本中存在对该肽有特异性的抗体，它们就会与肽结合，并且在洗涤步骤之后保留在孔中。通过随后加到孔(3)中的标记次级抗体来检测与该肽接触的抗体。洗涤步骤将没有与抗体-肽复合物接触的标记抗体除去。通过读取孔(4)中的标记信号来确定与肽结合的抗体的存在。
图2所产生的抗INGAP104-118肽的兔子抗体的特异性。将兔子抗-INGAP104-118肽在预先用INGAP104-118肽(SEQ ID NO：1)、牛血清白蛋白(BSA)、INGAP151-164(Cter SEQ ID NO：3)或INGAP139-152(Cseq SEQ ID NO：4)包被的微量滴定孔中培养。所有孔都是用相同浓度的蛋白包被。使用与碱性磷酸酶缀合的抗兔子IgG，并且使用磷酸对硝基苯酯，在405nm光检测对硝基苯酚，来检测抗-INGAP104-118抗体。水平线指示测定的背景信号限度。
图3所产生的抗INGAP104-118肽的兔子抗体的特异性。将兔子抗-INGAP104-118抗体在预先用不同浓度的INGAP104-118u肽包被的微量滴定孔中培养。使用与碱性磷酸酶缀合的抗兔子IgG，并且使用磷酸对硝基苯酯，在405nm光检测对硝基苯酚，来监测结合的兔子抗-INGAP104-118抗体的检测。EC50是150pg，并且显著不同于零的最低检测量是18pg。
图4人血清对抗-INGAP104-118肽抗体的影响。(A)每个数据点代表微量滴定孔中的2-1000ng/mL抗-INGAP104-118抗体和0(◆)、5()、10()、15(X)、30(·)或50(●)％标准人血清。使用与碱性磷酸酶缀合的抗兔子IgG，并且使用磷酸对硝基苯酯，在405nm光检测对硝基苯酚，来监测结合的兔子抗-INGAP104-118抗体的检测。(B)反应是如(A)所述进行的，但是没有加入兔子抗-INGAP104-118抗体。数据点相当于0(◆)、5()、10(·)、15(+)、30(-)和50％ ()标准人血清。
图5抗-INGAP104-118抗体测定样本平板布置图。(1)患者血清样本的稀释物。(2)标准人血清的稀释物。(3)兔子抗-INGAP104-118抗体标准曲线。(4)在未用INGAP104-118肽包被的孔上使用最高浓度的抗-INGAP104-118抗体制备的平板空白。
发明详述
本发明的发现是，可在固相测定中灵敏且特异性地检测体内产生的抗-INGAP抗体。可在不被哺乳动物血清组分干扰的情况下检测抗-INGAP104-118抗体。标准人血清不含有导致假正信号的因子，也不抑制抗-INGAP104-118抗体与INGAP104-118肽的相互作用。
测定哺乳动物样本中的抗-INGAP104-118抗体可用于监测在治疗性施用INGAP104-118肽期间中和抗体的生成。中和抗体可以是内源性自身抗体或者在单次或反复施用INGAP104-118肽之后在个体中产生的抗体。可灵敏且特异性地检测抗-INGAP104-118抗体。
在固相测定中，可将纯化的INGAP104-118肽固定在固体载体上。因为易于将结合的组分与未结合的组分分离，固相免疫测定是方便的。连续的免疫测定步骤，包括步骤之间的洗涤以及检测抗体的结合与指示剂反应的展开可容易地进行，而无需昂贵的自动化操作和技术。
可使用任何样本，包括但不限于血液、血浆或血清。本发明特别涉及含有血清的试验样本。血清可得自任何哺乳动物，包括例如小鼠、大鼠、兔子、豚鼠、猴子、狗、猫、牛、山羊、猪和人。
可以在一个血清浓度或可通过将血清系列稀释而获得的多个浓度下测定试验样本。血清稀释剂可源自是试验样本来源的同一物种。也可以使用其它稀释剂例如缓冲剂和标准盐水。还可以使用能够检测到信号的最高系列稀释度来表征试验样本。例如，可将关于第一种哺乳动物的能够检测到信号的最高系列稀释度与关于第二种哺乳动物的能够检测到信号的最高系列稀释度进行比较，以获得在第一种与第二种哺乳动物中的抗体效价的相对量度。
可使用任何免疫反应性形式的INGAP104-118、INGAP或其衍生物。可使用天然、合成或重组形式的INGAP肽，或者能够与抗INGAP104-118肽的抗体发生免疫反应的含有或经过修饰而含有INGAP104-118序列或部分的相关蛋白。因此，可使用INGAP104-118肽的部分或含有这样的部分和其它残基或部分的肽。衍生物包括但不限于对肽的C-末端、N-末端和/或氨基酸侧链进行修饰而获得的衍生物。C-末端羧化物修饰的实例包括酯化(例如苄基、甲基或乙基酯)和酰胺化。N-末端修饰的实例包括乙酰化和烷氧基羰基化。氨基酸侧链修饰包括甲基化、苄基化、叔丁基化、甲苯磺酰化、烷氧基羰基化等。
INGAP104-118肽、INGAP或其衍生物可通过本领域已知的任何方法制得。这些方法包括但不限于通过玻璃纸包裹来诱导哺乳动物胰腺细胞表达INGAP蛋白(Rosenberg，L.，Brown，R.A.和Duguid，W.P.(1982).Surg.Forum 33，227-230)。还可以使用在原核或真核宿主细胞中进行的标准重组技术来制备全长或部分INGAP或INGAP104-118肽。合适的宿主细胞包括细菌、酵母、昆虫或哺乳动物细胞。可使用本领域已知的任何表达载体。可使用酶，通过让全长或部分蛋白发生蛋白酶解来产生小于全长的蛋白。可使用合成化学方法例如固相肽合成法来合成蛋白和多肽。可在用于本发明免疫测定的固体载体上直接合成多肽。
INGAP104-118肽、INGAP蛋白或其部分可通过蛋白纯化领域已知的任何技术来纯化。技术的实例包括离子交换色谱法、疏水相互作用色谱法和免疫亲和方法。
将INGAP104-118肽与固体载体结合。可将其吸附或化学偶联到固相载体上。可使用本领域已知的用于将蛋白或肽固定在固体载体上的任何方法。可通过技术例如经由酰胺或酯键的共价键合或吸附将INGAP104-118肽共价或非共价结合到固相载体上。可使用结合对例如生物素与抗生物素蛋白或抗体与抗原来将其结合。将INGAP104-118肽与固相结合，可将固相载体与阻断溶液(含有阻断蛋白例如牛血清白蛋白)培养，以降低试验样本中抗体与载体表面的非特异性吸附。
可使用各种固相载体，包括但不限于玻璃、聚苯乙烯、聚丙烯、硝化纤维、葡聚糖或其它材料。合适的固相载体的形式包括由这些材料形成的或包被这些材料的小珠、微粒、管、织物或平板。在优选的实施方案中，固体载体包含微量滴定孔，例如96孔微量滴定板。
使用检测抗体来评价结合在固相载体上的抗-INGAP104-118抗体。可将检测抗体标记。标记物可以是能够被检测到的任何组合物。可使用本领域已知的任何分析方法来测定或检测该检测抗体。这些方法包括使用光谱学、化学、光化学、生物化学、免疫化学或光学。标记物可以是例如酶(例如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶和ELISA中常用的其它酶)、放射标记物(例如，3H、125I、35S、14C或32P)、化学发光化合物(例如荧光素和2，3-二氢酞嗪二酮、鲁米诺等)、荧光染料(例如异硫氰酸荧光素、Texas red、罗丹明等)或本领域已知的任何其它染料。
可根据本领域众所周知的方法将标记物直接或间接(例如经由结合对如生物素与抗生物素蛋白)与检测抗体偶联。如上所述，可使用多种标记物。标记物的选择可根据所需的灵敏度、与化合物缀合的容易程度、稳定性要求、可采用的装置或处理条件等。关于可使用的各种标记或信号产生系统的综述可参见美国专利4,391,904。
可通过本领域已知的任何适当方法来检测或测定检测抗体。如果标记物是具有放射性的γ发射体，可通过γ计数器来检测抗体上的标记物，如果标记物是荧光物质，可通过荧光计来检测抗体上的标记物。对于酶，可使用酶的底物来比色检测标记物。在优选的实施方案中，检测抗体可使用与碱性磷酸酶缀合的物种特异性免疫球蛋白来检测。可使用碱性硫酸镁的任何底物。例如，磷酸对硝基苯酯(pNPP)可以是底物，并且可光检测反应产物对硝基苯酚。
测定结果可以是定性或定量结果。可将与载体结合的标记物的量与阳性和阴性对照比较，以确定抗-INGAP104-118抗体的存在。通常可将对照与试验样本平行进行检测。阳性对照可以是含有能与INGAP104-118肽发生免疫反应的抗体的血清。阴性对照可以是不含有能与INGAP104-118肽发生免疫反应的抗体的血清。对于定量测定，可产生和/或使用采用已知量的抗-INGAP104-118抗体的标准曲线。
用作阳性对照的抗体可使用INGAP蛋白的所有氨基酸序列或INGAP蛋白的氨基酸序列的片段来产生。本文所用的“抗体”包括能够结合INGAP104-118肽的表位的完整的免疫球蛋白分子及其片段例如Fab、F(ab’)2和Fv。可产生本领域已知的任何类型的抗体以与INGAP104-118肽的表位特异性地结合。可按照本领域众所周知的方法来产生单克隆或多克隆抗体。
可使用本领域能够采用的任何纯化抗-INGAP104-118抗体的技术。例如，可通过已知方法例如使用蛋白A的亲和分离、在反相烷化硅胶上进行的高压液相色谱法或凝胶过滤来纯化抗体。还可以让抗体通过其上结合有INGAP104-118肽的固相。抗-INGAP抗体将与结合在固体载体上的INGAP104-118结合，并且可将污染物洗去。可用例如具有高盐浓度的缓冲液将结合的抗体洗脱下来。
在本发明测定中使用的具体参数可根据多种不同因素例如样本中的抗体浓度、样本性质、所用的免疫测定类型等而在宽范围内改变。本领域技术人员易于确立最佳条件。典型的测定条件包括约4℃至约45℃的温度范围和约5至9的pH范围。根据测定的性质，培养时间可在宽范围内改变，并且通常为约0.1分钟至约24小时。可采用多种缓冲液，例如TRIS缓冲的盐水，并且还可以包括其它试剂例如用以提高离子强度的盐、蛋白例如血清白蛋白、稳定剂和非离子洗涤剂。实施例2中给出了示例性条件。
可测定抗-INGAP104-118抗体的同种型例如IgG、IgD、IgE、IgA或IgM。同种型的生物功能和生化特征不同，并且试验样本中存在的抗体同种型可表征个体中的免疫反应类型。因此，区别样本中存在的免疫球蛋白分子的同种型可能是有用的。可采用本领域已知的任何方法来确定抗体同种型。例如，同种型确定可在与INGAP104-118肽结合的固体载体上进行。可将试验样本与结合肽的固体载体接触，并且可使用检测抗体。出于该目的而使用的检测抗体可以是同种型特异性的。可将同种型特异性检测抗体标记，并如上所述进行检测。还可以通过本领域已知的任何方法来确定抗体亚同种型。
本发明的另一个实施方案是用于检测哺乳动物血清中的抗-INGAP104-118抗体的试剂盒。所述试剂盒可特别用于检测自然存在的或者在涉及给个体单次或反复施用INGAP104-118的治疗期间产生的抗-INGAP104-118抗体。试剂盒通常含有在分开或未分开的容器中的可特别用于包被固体载体的INGAP104-118肽。或者，试剂盒可含有已经用INGAP104-118肽包被的固体载体。试剂盒还可以含有用作阳性对照和用于标准曲线的抗-INGAP104-118抗体。还可以包括是物种特异性的但是是同种型一般性的检测抗体。可以以可检测的方式将检测抗体标记。试剂盒还可以含有用于确定抗体同种型的同种型特异性检测抗体。试剂盒中可任选包含使用说明书、标准曲线和缓冲液。
下列实施例仅是举例说明，而不是限制本发明的范围。
实施例1
抗-INGAP 104-118 抗体的特异性
为了确定兔子抗-INGAP104-118抗体的特异性，将兔子抗-INGAP104-118抗体在预先用INGAP104-118、牛血清白蛋白(BSA)、INGAP151-164(Cterm)或INGAP139- 152(Cseq)包被的微量滴定孔中培养。所有肽包被的孔都是用相同浓度的肽包被。使用抗兔子IgG碱性磷酸酶(AP)缀合物检测抗体来评价抗-INGAP104- 118抗体结合。将样本与pNPP培养，并在405nm监测光密度(OD)。图2表明了兔子抗-INGAP104-118抗体与INGAP104-118特异性地结合，因为在与pNNP培养后，只有含有抗-INGAP104-118抗体的孔才表现出显著的OD405。从中推断，该抗体特异性地与INGAP104-118肽结合，使得其能够用于测定开发。
抗-INGAP 104-118 抗体的敏感性
通过将兔子抗-INGAP104-118抗体与不同浓度的INGAP104-118肽在预先用不同浓度的INGAP104-118肽包被的微量滴定孔中培养来测定兔子抗-INGAP104-118抗体的敏感性。数据如图3所示。在该测定中，测定的关于INGAP104-118肽的EC50是150pg/孔，显著大于零的最小量为18pg/孔。
发现标准人血清不影响抗-INGAP104-118抗体检测分析。向预先用INGAP104-118肽包被的微量滴定板的孔中加入不同浓度的兔子抗-INGAP104-118抗体。将抗-INGAP104-118抗体在含有标准人血清的缓冲液中系列稀释，所述缓冲液的人血清浓度分别为0％(对照)、5％、10％、15％、30％或50％。参见图4A。用与碱性磷酸酶(AP)缀合的抗-兔子IgG检测兔子抗体的结合。在5-10％血清之间没有观察到测定灵敏度的任何下降。然而，以大于50％的浓度存在的人血清可将测定灵敏度降低最高达3倍。从该数据中可以推断出，在标准人血清中不存在能显著干扰抗-INGAP104-118抗体与INGAP104-118肽的相互作用的因素。
还确定在标准人血清中不存在与INGAP104-118肽相互作用的抗体。进行与上述相同的实验方案以后，用与AP缀合的抗-人免疫球蛋白筛选标准人血清。没有检测到抗体，这表明标准人血清中不存在能结合INGAP104-118肽的抗体。参见图4B。
根据数据，测定成功地检测了INGAP104-118肽特异性抗体。此外，测定在标准人血清存在下能实现其功能。因此，本发明测定适于筛选患者血清中抗-INGAP104-118抗体的存在。该测定是简单的，并且易于流线化，以提高中到高效率的样本筛选。
实施例2-用于检测人血清中的抗-INGAP 104-118 的免疫测定方案
在该实施例中使用的试剂如下：TBS(0.05M TRIS，0.138M NaCl，0.0027KCl，pH8.0，25℃)，TBS-TW(TBS，含有0.05％Tween-20(聚氧乙烯-脱水山梨醇一月桂酸酯))，用于基质稀释缓冲液的阻断溶液(TBS-TW，含有1％w/v牛血清白蛋白)，用于检测人血清的次级抗体(与AP缀合的抗-人IGg(Sigma A-1543)在阻断溶液中的1∶5000稀释液)，用于检测兔子抗体的次级抗体(与AP缀合的抗-兔子IGg(Sigma A-2556)在阻断溶液中的1∶5000稀释液)，基质稀释缓冲液(1∶25人血清：阻断溶液，v/v)，和pNPP底物缓冲液(在5mL去离子水中的一组磷酸对硝基苯酯片剂(Sigma N-1891))。
兔子抗-INGAP104-118抗体由Strelitz Diabetes Institute提供。
标准曲线-依据下表制作标准曲线：
校准标准物   250ng/mL兔子抗-INGAP104-118(μL) 基质稀释缓冲液(μL) 校准标准物浓度(ng/ml) 基质浓度(ng/mL)
    S-01     500     --     250     6250
    S-02     180     120     150     3750
    S-03     160     240     100     2500
    S-04     80     320     50.0     1250
    S-05     30     270     25.0     625
    S-06     使用标准物-0330     270     10.0     250
    S-07     使用标准物-0430     270     5.0     125
测定是在96孔微量滴定板中进行的。如上表所示制备标准物，获得足够多的标准物，将100μL以一式两份加到所需的平板孔中。通过用基质稀释缓冲液将兔子抗-INGAP104-118抗体标准物系列稀释来获得所需的标准物浓度。
采取与制备样本相同的稀释范围由空白人血清制备对照血清样本。没有产生由于将与INGAP104-118肽交叉反应的血清或标准人血清中的任何蛋白浓度所致的假正性结果。
通过将100μL最高浓度的标准物加到每个随后平板的孔H1和H2中来制备平板空白。这些孔未用INGAP104-118肽包被。应当向这些样本中加入所有试剂。对于在该批中使用的所有孔，平板设计所指明的孔作为空白值以被减去。当由于在相同平板上分析的第二批而不能获得平板空白时，则使用对照空白。图6图示说明了代表性的样本测定平板布置图。
所有质量控制样本都是一式两份制备。所有未知的样本都是一式两份制备，并且在微量滴定板分析之前，将100μL各样本用2400μL基质稀释缓冲液稀释。
如下所述进行微量滴定板分析：将100μL标准物、对照空白、质量控制样本或未知样本加到各个平板孔中。将孔用聚酯薄膜盖子覆盖，在室温培养至少1小时或者在4℃培养过夜。通过向每个孔中填充TBS-TW来将孔洗涤3次，在洗涤之间保证除去所有过量液体。仅向血清样本和对照血清中加入100μL抗-人IgG AP缀合的抗体。向校准标准物和质量控制标准物中加入100μL抗-兔子IgG AP-缀合的抗体。将这些混合物在室温培养1-2小时。将每个孔用TBS-TW洗涤1次，然后用TBS洗涤2次，同样在洗涤之间保证除去过量液体。向每个孔中加入100μL pNPP底物缓冲液。显色约30分钟或显色至所需的颜色强度。对于最高校准标准物，最大显色的目标值是2.5OD，因此频繁地监测显色。获得多个平板读数以监测显色。在约30分钟读取显色(显色将随条件而变)。当高标准超过仪器的线性范围时，就发生过度显色。
根据在405nm的OD，使用点到点拟合来计算标准曲线。当OD超过标准曲线的最高点时，以适当的稀释度重新制备所有样本。对照所得点到点曲线来计算样本结果。根据明显的分析误差或非典型的显色，从曲线中可掉下最多2个不连续的点。
如果它们在理论值的20％内，则认为质量控制样本是可接受的。
阳性血清定义为，在1∶25的稀释度OD405大于0.800的样本。根据给出标准信号读数(即0.800 OD405单位)所需的效价(血清稀释度)来进行阳性患者样本之间的血清比较。
                                    序列表
<110>GMP内治疗学股份有限公司(GMP Endotherapeutics，Inc.)
     A.I.维尼克(Vinik，Aaron I.)
     D.A.泰勒-费斯克维克(Taylor-Fishwick，David A.)
<120>用于抗-INGAP抗体的测定
<130>9057#L$
<140>未授权
<141>2003-02-27
<150>U.S.60/361,040
<151>2002-03-01
<160>4
<170>PatentIn version 3.1
<210>1
<211>15
<212>PRT
<213>仓鼠属(hamster sp.)
<400>1
Ile Gly Leu His Asp Pro Ser His Gly Thr Leu Pro Asn Gly Ser
1               5                   10                  15
<210>2
<211>175
<212>PRT
<213>仓鼠属(hamster sp.)
<400>2
Met Met Leu Pro Met Thr Leu Cys Arg Met Ser Trp Met Leu Leu Ser
1               5                   10                  15
Cys Leu Met Phe Leu Ser Trp Val Glu Gly Glu Glu Ser Gln Lys Lys
            20                  25                  30
Leu Pro Ser Ser Arg Ile Thr Cys Pro Gln Gly Ser Val Ala Tyr Gly
        35                  40                  45
Ser Tyr Cys Tyr Ser Leu Ile Leu Ile Pro Gln Thr Trp Ser Asn Ala
    50                  55                  60
Glu Leu Ser Cys Gln Met His Phe Ser Gly His Leu Ala Phe Leu Leu
65                  70                  75                  80
Ser Thr Gly Glu Ile Thr Phe Val Ser Ser Leu Val Lys Asn Ser Leu
                85                  90                  95
Thr Ala Tyr Gln Tyr Ile Trp Ile Gly Leu His Asp Pro Ser His Gly
            100                 105                 110
Thr Leu Pro Asn Gly Ser Gly Trp Lys Trp Ser Ser Ser Asn Val Leu
        115                 120                 125
Thr Phe Tyr Asn Trp Glu Arg Asn Pro Ser Ile Ala Ala Asp Arg Gly
    130                 135                 140
Tyr Cys Ala Val Leu Ser Gln Lys Ser Gly Phe Gln Lys Trp Arg Asp
145                 150                 155                 160
Phe Asn Cys Glu Asn Glu Leu Pro Tyr Ile Cys Lys Phe Lys Val
                165                 170                 175
<210>3
<211>14
<212>PRT
<213>仓鼠属(hamster sp.)
<400>3
Gln Lys Ser Gly Phe Gln Lys Trp Arg Asp Phe Asn Cys Glu
1               5                   10
<210>4
<211>14
<212>PRT
<213>仓鼠属(hampter sp.)
<400>4
Ile Ala Ala Asp Arg Gly Tyr Cys Ala Val Leu Ser Gln Lys
1               5                   10

Claims (10)

1.检测试验样本中的抗INGAP104-118肽的抗体的方法，所述方法包括：
将得自哺乳动物的试验样本与结合在固体载体上的INGAP104-118肽接触，其中所述接触是在足以让抗-INGAP104-118抗体与所述肽结合的条件下进行的；
将所述固体载体与能够特异性地结合哺乳动物的所有同种型的抗体分子的检测抗体接触；和
确定结合在所述固体载体上的检测抗体，其中结合在所述固体载体上的检测抗体指示所述试验样本含有抗INGAP104-118肽的抗体。
2.权利要求1的方法，其中将所结合的检测抗体的量与使用已知量的抗-INGAP104-118肽抗体产生的标准曲线进行比较。
3.权利要求1的方法，其中所述检测抗体包含可检测到的标记物。
4.权利要求3的方法，其中所述可检测到的标记物选自荧光分子、化学发光分子、放射性分子和染料分子。
5.用于检测试验样本中的抗INGAP104-118肽的抗体并确定所述抗体的同种型的方法，所述方法包括：
将得自哺乳动物的试验样本与结合在固体载体上的INGAP104-118肽接触，其中所述接触是在足以让抗-INGAP104-118抗体与所述INGAP104-118肽结合的条件下进行的；
将所述固体载体与能够特异性地结合哺乳动物的一种同种型的抗体分子的同种型特异性检测抗体接触；和
确定结合在所述固体载体上的同种型特异性检测抗体，
其中；
结合在所述固体载体上的同种型特异性检测抗体指示所述试验样本含有抗INGAP104-118肽的抗体并且所述抗INGAP104-118肽的抗体是所述检测到的同种型的抗体。
6.权利要求5的方法，其中所述可检测到的标记物选自荧光分子、化学发光分子、放射性分子和染料分子。
7.用于检测哺乳动物试验样本中的抗-INGAP104-118抗体的试剂盒，
所述试剂盒包含：
INGAP104-118肽；和
检测抗体。
8.权利要求7的试剂盒，其中所述INGAP104-118肽结合在固体载体上。
9.权利要求7的试剂盒，所述试剂盒还包含抗-INGAP104-118抗体。
10.权利要求7的试剂盒，所述试剂盒还包含用于计算试验样本中的抗-INGAP104-118抗体的量的标准曲线。
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SE01 Entry into force of request for substantive examination
C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication