CN105858669B - 高纯度海绵骨针的制备方法 - Google Patents

Abstract

高纯度海绵骨针的制备方法，涉及海绵骨针。将海绵洗净，干燥，粉碎，过筛，去除大颗粒物质，得海绵粉末；在海绵粉末中加入酸、次氯酸盐中的至少一种，搅拌，同时加热到30～110℃并保温0.5～6h，停止加热后沉淀，收集沉淀的骨针，清洗后得骨针粗产品；配制浓度为1％～10％的粘稠剂，将骨针粗产品与粘稠剂混合，同时加入浓度为1％～30％的过氧化氢溶液，过氧化氢与骨针粗产品中的海绵角蛋白反应，在角蛋白表面产生气泡；将含有过氧化氢、骨针粗产品的粘稠剂放入真空容器中，通过调节真空度的高低调节角蛋白表面气泡的大小及逃逸时间，静置后，杂质与骨针分层，平衡压力后打开真空容器，将上层杂质去除，清洗下层沉淀，即得产物。

Description

高纯度海绵骨针的制备方法

技术领域

本发明涉及海绵骨针，尤其是涉及一种高纯度海绵骨针的制备方法。

背景技术

海绵动物属于多孔动物门，俗称海绵，是最简单的多细胞动物，它们没有明确的器官结构，但中胶层发达，其中的细胞具有全能性。海绵中与其它后生动物相比，海绵细胞呈现出高度的独立性。海绵主要营固着生活，体内有一套特有的水沟系统，是其摄食、呼吸、排泄、生殖等生命活动的主要通道。由于成体海绵营固着或附着生活，不具备运动能力。

海绵动物在地球上分布广泛，生物量巨大，估计约有15,000种现生种，已记录了约8,500种海绵，除了150种淡水海绵外，其余的都是海洋种类(Hooper，2002)。它们大量存活在包括深海和极地海域在内的所有的海域中。大部分沿海种类的海绵披覆生长在岩石，贝壳的外壳，海水中的木头或珊瑚礁等坚硬物质的表面，这样能够降低它们被海浪剥离、拆散的危险。而直立生长的海绵在水流缓慢的深海中较常见，直立生长也可以避免它们在深海中被大量的沉积物所覆盖。大部分海绵种类生活在较浅的水域，也有一些种类包括大部分的六放海绵是栖息在深海中。而未污染的沿海以及热带珊瑚礁海域则是海绵主要的生活区域。

骨针(spiculers)是由海绵动物体内一种具有富集并有条理地沉淀硅或钙能力的造骨细胞(sclerocytes)分泌产生，它们是一种特殊中胶层细胞，分布于中胶层中。

海绵的骨针形态多样，是海绵分类鉴定的重要依据。骨针主要成分为二氧化硅的寻常海绵纲的种类占海绵生物种类80％以上，其主要分布区域为浅海。

由于海绵骨针形态随种类而异，粒径一致，数量众多且成分稳定，其利用价值逐渐为人们所重视。目前仅有以科研为目的的海绵骨针提取方法为科研工作者所熟知(参考文献：王德祥，沈铭辉，海绵骨针的制备方法，厦门大学学报(自然科学版)，2006)，但是该方法存在处理量少、成本高、海绵骨针提取纯度不高等缺点，特别是海绵角蛋白等特殊蛋白去除不彻底，因此该方法仅适用于以形态分类为目的的海绵骨针提取。

发明内容

本发明的目的在于针对传统的海绵骨针批量制备上存在的上述不足，提供一种高纯度海绵骨针的制备方法。

本发明包括以下步骤：

1)将海绵洗净，干燥；

2)将干燥后的海绵粉碎，过筛，去除大颗粒物质，得海绵粉末；

3)在海绵粉末中加入酸、次氯酸盐中的至少一种，搅拌，同时加热到30～110℃并保温0.5～6h，停止加热后沉淀，收集沉淀的骨针，清洗后得骨针粗产品；粗产品中最主要的固体杂质是海绵角蛋白；

4)配制质量百分浓度为1％～10％的粘稠剂，将步骤3)得到的骨针粗产品与粘稠剂混合，同时加入质量百分浓度为1％～30％的过氧化氢溶液，过氧化氢与骨针粗产品中的海绵角蛋白反应，在角蛋白表面产生气泡；

5)将含有过氧化氢、骨针粗产品的粘稠剂放入真空容器中，通过调节真空度的高低调节角蛋白表面气泡的大小及逃逸的时间，静置后，杂质与骨针逐步分层，平衡压力后打开真空容器，将上层的杂质去除，清洗下层沉淀，即得高纯度海绵骨针。

在步骤1)中，所述海绵可采用养殖的海绵，或者自然海区采集的方式获得的具有矿物骨针的天然海绵，或者提取活性物质剩余的海绵残渣；所述洗净可将海绵撕成0.5～5.0cm³大小，用清水冲洗，去除泥沙、杂质及共生生物；所述干燥可采用离心或挤压方式去除多余水分，再晾干或烘干。

在步骤2)中，所述过筛可过15～60目的筛网。

在步骤3)中，所述酸可选自盐酸、硝酸、硫酸、磷酸等中的一种；所述沉淀可采用自然沉淀0.5～6h或离心，所述离心的离心力<1000g；所述清洗可采用清水漂洗1～4次。

在步骤4)中，所述粘稠剂可选自甘油、纤维素类、聚丙烯酸类等中的一种。

本发明采用将样品与酸或次氯酸盐共热处理，过氧化氢气泡悬浮角蛋白等方法，显著提高海绵骨针的获取率及纯度。

具体实施方式

实施例1:

以海绵活性产物提取剩余的海绵残渣为材料，通风橱中晾干，去除有机溶剂。通过40目，80目的两级套筛过滤，获得粉末状的海绵残渣。按照海绵残渣与盐酸质量体积比为1∶2的比例加入盐酸开始消化，密封消化容器，同时沸水浴加热。2h后，用清水漂洗消化后的骨针两遍。取出骨针粗产品。粗产品中，杂质的含量约占产品干重的12％。配制2％的纤维素凝胶溶液，将100g骨针粗产品与50mL过氧化氢混合，迅速加入1L新配制的凝胶溶液，搅拌分散后，放入真空容器中抽真空。保持真空状态静置10min后，迅速解除真空状态，将浮在表面的杂质迅速取出。凝胶溶液底部沉淀的海绵骨针的纯度可以达到95％～98％。

实施例2：

以新鲜获取的海绵为材料，撕开，清洗，去除其中的杂质及其他生物。洗净后的海绵晾干、粉碎。通过20目以及60目的两级套筛，获得粉末状的海绵残渣。按照海绵粉末与次氯酸钠的质量体积比为1∶4的比例加入次氯酸钠溶液，在通风系统中加热至60～70℃，消化过程不断搅拌。4h后停止加热，自然冷却，沉淀。将上清倒出，清洗沉淀2～3次。此时获得的海绵骨针的纯度约为82％.配制6％的海藻酸凝胶溶液2L，将海绵骨针的粗产品500g与100mL的过氧化氢搅拌，迅速放入凝胶溶液中，搅拌分散后置于真空容器中抽真空。保持真空状态20min后，迅速解除真空状态，将漂浮在表面的杂质取出。经显微镜检测，骨针的纯度可以达到97％。

Claims (8)

1.高纯度海绵骨针的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1)将海绵洗净，干燥；

2)将干燥后的海绵粉碎，过筛，去除大颗粒物质，得海绵粉末；

3)在海绵粉末中加入酸、次氯酸盐中的至少一种，搅拌，同时加热到30～110℃并保温0.5～6h，停止加热后沉淀，收集沉淀的骨针，清洗后得骨针粗产品；粗产品中最主要的固体杂质是海绵角蛋白；

4)配制质量百分浓度为1％～10％的粘稠剂，将步骤3)得到的骨针粗产品与粘稠剂混合，同时加入质量百分浓度为1％～30％的过氧化氢溶液，过氧化氢与骨针粗产品中的海绵角蛋白反应，在角蛋白表面产生气泡；

所述粘稠剂选自甘油、纤维素类、聚丙烯酸类中的一种；

5)将含有过氧化氢、骨针粗产品的粘稠剂放入真空容器中，通过调节真空度的高低调节角蛋白表面气泡的大小及逃逸的时间，静置后，杂质与骨针逐步分层，平衡压力后打开真空容器，将上层的杂质去除，清洗下层沉淀，即得高纯度海绵骨针。

2.如权利要求1所述高纯度海绵骨针的制备方法，其特征在于在步骤1)中，所述海绵采用养殖的海绵，或者自然海区采集的方式获得的具有矿物骨针的天然海绵，或者提取活性物质剩余的海绵残渣。

3.如权利要求1所述高纯度海绵骨针的制备方法，其特征在于在步骤1)中，所述洗净是将海绵撕成0.5～5.0cm³大小，用清水冲洗，去除泥沙、杂质及共生生物。

4.如权利要求1所述高纯度海绵骨针的制备方法，其特征在于在步骤1)中，所述干燥是采用离心或挤压方式去除多余水分，再晾干或烘干。

5.如权利要求1所述高纯度海绵骨针的制备方法，其特征在于在步骤2)中，所述过筛是过15～60目的筛网。

6.如权利要求1所述高纯度海绵骨针的制备方法，其特征在于在步骤3)中，所述酸选自盐酸、硝酸、硫酸、磷酸中的一种。

7.如权利要求1所述高纯度海绵骨针的制备方法，其特征在于在步骤3)中，所述沉淀采用自然沉淀0.5～6h或离心，所述离心的离心力<1000g。

8.如权利要求1所述高纯度海绵骨针的制备方法，其特征在于在步骤3)中，所述清洗采用清水漂洗1～4次。