CN105792851B - 修饰的治疗剂及其组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了用于延长治疗剂的半衰期的方法和组合物。可将一个或多个半衰期延长部分附接至治疗剂，由此延长该治疗剂的半衰期。包含一个或多个附接至治疗剂的半衰期延长部分的修饰的治疗剂(mTA)可用于治疗有需要的受试者的疾病或状况。

Description

修饰的治疗剂及其组合物
相关申请的交叉引用
本申请要求于2013年9月13日提交的美国临时申请号61/877,799以及于2013年12月18日提交的美国临时申请号61/917,816的权益，所有这些申请均通过引用全文并入本文。
序列表
本申请包含已经以ASCII格式电子提交的序列表，该序列表通过引用以其全文并入本文。所述ASCII拷贝创建于2014年12月2日，命名为41135-709.601_SL.txt，大小为51,235字节。
背景技术
治疗剂(例如，生物药物)的开发经常受到较短的半衰期的阻碍。物质的生物半衰期或消除半衰期是物质(例如，代谢物、药物、信号分子、放射性核素或其它物质)损失其药理学、生理学或放射学活性的一半所耗费的时间。由于半衰期短，患者常常要更频繁地施用更高的剂量，这可能导致降低的依从性、更高的成本以及更大的副作用风险。
延长释放产品被设计成延长具有短半衰期的药物的吸收，从而允许较长的给药间隔，同时最小化血清药物水平的波动。目前用于延长半衰期的策略是增加流体力学体积(聚乙二醇化(PEGylation))或采用FcRn介导的再循环(白蛋白融合)的那些策略。多肽或亲脂性成分与药物的附接也已用于延长生物剂的半衰期(US6,268,343；US5,750,497；US8,129,343)。
本公开内容提供了用于改善治疗剂的生物、化学、生理学、药理学、药代动力学和/或药效学性质的修饰的治疗剂(mTA)。
发明内容
提供了用于形成修饰的治疗剂的方法和组合物。所述修饰的治疗剂(mTA)可包含治疗剂和一个或多个半衰期延长部分，其中所述治疗剂为肽，该肽经由该肽上的半胱氨酸残基与所述一个或多个半衰期延长部分中的每一个共价附接；并且所述修饰的治疗剂的半衰期长于单独该肽的半衰期。mTA可包含两个或更多个半衰期延长部分。该两个或更多个半衰期延长部分可以是相同的。该两个或更多个半衰期延长部分可以是不同的。所述一个或多个半衰期延长部分的半衰期延长部分可包含脂质、聚二醇区或其组合。所述一个或多个半衰期延长部分中的每一个可包含脂质。所述一个或多个半衰期延长部分的半衰期延长部分可包含聚二醇区。所述一个或多个半衰期延长部分的半衰期延长部分可包含脂质和聚二醇区。所述一个或多个半衰期延长部分的半衰期延长部分可包含延伸重组多肽(XTEN)，该延伸重组多肽包含(i)氨基酸序列，其特征为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)、亮氨酸(L)和脯氨酸(P)残基的总和构成总氨基酸序列的大于约70％；(ii)基本非重复的氨基酸序列；(iii)具有少于约10％的α螺旋的氨基酸序列；和/或(iv)具有少于约10％的β折叠的氨基酸序列。所述XTEN可包含这样的氨基酸序列，该氨基酸序列的特征为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)、亮氨酸(L)和脯氨酸(P)残基的总和构成总氨基酸序列的大于约75％、77％、80％、83％、85％、87％、90％、92％、95％、97％或99％。所述XTEN可包含选自SEQ ID NO:66-67的氨基酸序列。所述XTEN可包含与选自SEQ ID NO:66-67的氨基酸序列至少约70％同源的氨基酸序列。所述脂质可选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺、脂肪胺和脂肪醇，及其衍生物。所述聚二醇区可包含一个或多个聚乙二醇单元、聚丙二醇单元或聚丁二醇单元或其组合。所述聚二醇区可包含一千个或更多个聚乙二醇单元、聚丙二醇单元或聚丁二醇单元或其组合。所述肽可包含一个或多个氨基酸添加、缺失或置换或其组合。所述肽可选自松弛素、H1松弛素、H2松弛素、H3松弛素、人INSL3、人INSL4、人INSL6、人IGF1、人IGFII、人胰岛素、泌酸调节肽(oxyntomodulin)、艾塞那肽(exenatide)、毒蜥外泌肽-4、胰高血糖素样蛋白-1(GLP-1)、GLP-2、胰高血糖素、GLP-1R和GIPR双重激动剂、GLP-1R和GCGR双重激动剂、瘦素、betatrophin、FGF 21、GDF 11、ANGPTL3、基于肽的毒素、Moka和VM-24，或其衍生物，该衍生物为包含一个或多个氨基酸添加、缺失或置换或其组合的肽。所述肽可选自松弛素、泌酸调节肽、艾塞那肽、毒蜥外泌肽-4、胰高血糖素样蛋白-1(GLP-1)、GLP-2、胰高血糖素、GLP-1R和GIPR双重激动剂、GLP-1R和GCGR双重激动剂、瘦素、betatrophin、FGF 21、GDF 11、ANGPTL3、毒素-550、Moka和VM-24，或其衍生物，该衍生物为包含一个或多个氨基酸添加、缺失或置换或其组合的肽。所述肽可以是松弛素或其衍生物，该衍生物为包含一个或多个氨基酸添加、缺失或置换或其组合的肽。所述肽可由包含选自SEQ ID NO:10-56的多肽序列的至少一部分的氨基酸序列编码。所述肽可由包含基于或衍生自选自SEQ ID NO:10-56的多肽序列的10个或更多个氨基酸的氨基酸序列编码。所述肽可包含与选自SEQ ID NO:10-56的氨基酸序列至少约50％同源的氨基酸序列。所述肽可包含与选自SEQ ID NO:10-56的氨基酸序列至少80％同源的氨基酸序列。所述肽可包含一个或多个选自SEQ ID NO:10-56的氨基酸序列。所述肽可包含两个或更多个选自SEQ ID NO:10-56的氨基酸序列。所述半胱氨酸残基可位于肽的N-末端或C-末端上。所述半胱氨酸残基可位于肽的非末端位置上。所述半胱氨酸残基可以是该肽上的氨基酸添加或置换。所述半胱氨酸残基可以是野生型肽上的氨基酸添加或置换。
提供了用于形成脂质缀合物(LC)的方法和组合物。所述脂质缀合物(LC)可包含(a)一个或多个脂质，该脂质选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺、脂肪胺和脂肪醇，及其衍生物；和(b)治疗剂(TA)，其中该TA为肽，并且该一个或多个脂质经由该肽上的氨基酸残基与该TA缀合。所述氨基酸残基可以是半胱氨酸或赖氨酸。所述氨基酸残基可以是半胱氨酸。所述氨基酸残基可以是该肽上的氨基酸添加或氨基酸置换。所述氨基酸残基可位于肽的N-末端或C-末端。所述氨基酸残基可位于肽的非末端位置。所述TA可为包含一个或多个氨基酸添加、缺失或置换或其组合的肽。可通过一个或多个氨基酸添加或置换或其组合引入一个或多个半胱氨酸或赖氨酸残基。所述脂质缀合物(LC)可包含(a)一个或多个脂质，该脂质选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺和脂肪醇；和(b)一个或多个治疗剂(TA)，其中所述一个或多个脂质经由半胱氨酸残基与所述一个或多个治疗剂缀合。
本文进一步公开了一种脂质缀合物(LC)，其包含(a)一个或多个脂质，该脂质选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺、脂肪胺和脂肪醇，及其衍生物；和(b)治疗剂(TA)，其中所述TA包含松弛素肽或其衍生物，并且所述一个或多个脂质经由该肽上的氨基酸残基与该TA缀合。本文进一步公开了一种脂质缀合物(LC)，其包含(a)一个或多个脂质，该脂质选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺和脂肪醇；和(b)一个或多个治疗剂(TA)，其中所述一个或多个TA包含松弛素肽或其衍生物，其中所述一个或多个脂质经由半胱氨酸残基与该一个或多个治疗剂附接。
本文进一步公开了一种脂质缀合物(LC)，其包含与一个或多个治疗剂(TA)附接的一个或多个脂质，其中所述一个或多个TA包含修饰的松弛素肽，并且其中所述修饰的松弛素肽包括具有一个或多个氨基酸突变的野生型松弛素多肽。本文进一步公开了一种脂质缀合物(LC)，其包含(a)一个或多个脂质，该脂质选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺、脂肪胺和脂肪醇，及其衍生物；和(b)治疗剂(TA)，其中所述TA包含修饰的松弛素肽，并且其中所述修饰的松弛素肽包括具有一个或多个氨基酸突变的野生型松弛素多肽。
本文公开了包含LC的药物组合物，其中所述LC包含(a)一个或多个脂质，该脂质选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺和脂肪醇；和(b)一个或多个治疗剂(TA)，其中所述一个或多个脂质经由半胱氨酸残基与该一个或多个治疗剂缀合。
本文进一步公开了包含LC的药物组合物，其中所述LC包含(a)一个或多个脂质，该脂质选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺、脂肪胺和脂肪醇，及其衍生物；和(b)治疗剂(TA)，其中所述TA为肽，并且所述一个或多个脂质经由该肽上的氨基酸残基与该TA缀合。
本文进一步公开了包含LC的药物组合物，其中所述LC包含(a)一个或多个脂质，该脂质选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺和脂肪醇；和(b)一个或多个治疗剂(TA)，其中该一个或多个TA包含松弛素肽或其衍生物，其中所述一个或多个脂质经由半胱氨酸残基与该一个或多个治疗剂附接。
本文进一步公开了包含LC的药物组合物，其中所述LC包含(a)一个或多个脂质，该脂质选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺、脂肪胺和脂肪醇，及其衍生物；和(b)治疗剂(TA)，其中所述TA包含松弛素肽或其衍生物，并且所述一个或多个脂质经由该肽上的氨基酸残基与该TA缀合。
本文进一步公开了包含LC的药物组合物，其中所述LC包含与一个或多个治疗剂(TA)附接的一个或多个脂质，其中该一个或多个TA包含修饰的松弛素肽，并且其中所述修饰的松弛素肽包括具有一个或多个氨基酸突变的野生型松弛素多肽。
本文进一步公开了包含LC的药物组合物，其中所述LC包含一个或多个与治疗剂(TA)附接的脂质，其中所述TA包含修饰的松弛素肽，并且其中所述修饰的松弛素肽包括具有一个或多个氨基酸突变的野生型松弛素多肽。
本文公开了一种治疗有需要的受试者的疾病或状况的方法，该方法包括向受试者施用包含LC的组合物，其中所述LC包含(a)一个或多个脂质，该脂质选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺、脂肪胺和脂肪醇，及其衍生物；和(b)治疗剂(TA)，其中所述TA为肽，并且所述一个或多个脂质经由该肽上的氨基酸残基与该TA缀合。
本文进一步公开了一种治疗有需要的受试者的疾病或状况的方法，该方法包括向受试者施用包含LC的组合物，其中所述LC包含(a)一个或多个脂质，该脂质选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺和脂肪醇；和(b)一个或多个治疗剂(TA)，其中所述一个或多个脂质经由半胱氨酸残基与该一个或多个治疗剂缀合。
本文进一步公开了一种治疗有需要的受试者的疾病或状况的方法，该方法包括向受试者施用包含LC的组合物，其中所述LC包含(a)一个或多个脂质，该脂质选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺和脂肪醇；和(b)一个或多个治疗剂(TA)，其中该一个或多个TA包含松弛素肽或其衍生物，其中所述一个或多个脂质经由半胱氨酸残基与该一个或多个治疗剂附接。
本文进一步公开了一种治疗有需要的受试者的疾病或状况的方法，该方法包括向受试者施用包含LC的组合物，其中所述LC包含(a)一个或多个脂质，该脂质选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺、脂肪胺和脂肪醇，及其衍生物；和(b)治疗剂(TA)，其中所述TA包含松弛素肽或其衍生物，并且所述一个或多个脂质经由该肽上的氨基酸残基与该TA缀合。
本文进一步公开了一种治疗有需要的受试者的疾病或状况的方法，该方法包括向受试者施用包含LC的组合物，其中所述LC包含与一个或多个治疗剂(TA)附接的一个或多个脂质，其中所述一个或多个TA包含修饰的松弛素肽，并且其中所述修饰的松弛素肽包括具有一个或多个氨基酸突变的野生型松弛素多肽。
本文进一步公开了一种治疗有需要的受试者的疾病或状况的方法，该方法包括向受试者施用包含LC的组合物，其中所述LC包含一个或多个与治疗剂(TA)附接的脂质，其中所述TA包含修饰的松弛素肽，并且其中所述修饰的松弛素肽包括具有一个或多个氨基酸突变的野生型松弛素多肽。
本文公开了包含LC的试剂盒，其中所述LC包含(a)一个或多个脂质，该脂质选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺、脂肪胺和脂肪醇，及其衍生物；和(b)治疗剂(TA)，其中所述TA为肽，并且所述一个或多个脂质经由该肽上的氨基酸残基与该TA缀合。
本文进一步公开了包含LC的试剂盒，其中所述LC包含(a)一个或多个脂质，该脂质选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺和脂肪醇；和(b)一个或多个治疗剂(TA)，其中所述一个或多个脂质经由半胱氨酸残基与该一个或多个治疗剂缀合。
本文进一步公开了包含LC的试剂盒，其中所述LC包含(a)一个或多个脂质，该脂质选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺、脂肪胺和脂肪醇，及其衍生物；和(b)治疗剂(TA)，其中所述TA包含松弛素肽或其衍生物，并且所述一个或多个脂质经由该肽上的氨基酸残基与该TA缀合。
本文进一步公开了包含LC的试剂盒，其中所述LC包含(a)一个或多个脂质，该脂质选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺和脂肪醇；和(b)一个或多个治疗剂(TA)，其中该一个或多个TA包含松弛素肽或其衍生物，并且所述一个或多个脂质经由半胱氨酸残基与该一个或多个治疗剂附接。
本文进一步公开了包含LC的试剂盒，其中所述LC包含一个或多个与治疗剂(TA)附接的脂质，其中所述TA包含修饰的松弛素肽，并且其中所述修饰的松弛素肽包括具有一个或多个氨基酸突变的野生型松弛素多肽。
本文进一步公开了包含LC的试剂盒，其中所述LC包含与一个或多个治疗剂(TA)附接的一个或多个脂质，其中所述一个或多个TA包含修饰的松弛素肽，并且其中所述修饰的松弛素肽包括具有一个或多个氨基酸突变的野生型松弛素多肽。
本文公开了包含SEQ ID NO:1-9的多核苷酸序列的载体。
本文公开了包含SEQ ID NO:1-9的多核苷酸序列的宿主细胞。
本文公开了包含编码SEQ ID NO:10-56的多肽的多核苷酸序列的载体。
本文公开了包含编码SEQ ID NO:10-56的多肽的多核苷酸序列的宿主细胞。
本文公开的LC可进一步包含一个或多个聚乙二醇亚单位。
本文公开的LC可包含一个或多个聚乙二醇化的脂质。
所述LC可具有以下结构：
TA-A1-P1-L
式(I)
其中：TA为所述治疗剂；A1为连接TA和P1或L的化学基团；P1为键或包含聚二醇；并且L为所述脂质。P1可为键。TA的氨基酸残基的硫或氮原子可经由化学键与A1连接。P1可包含聚二醇。P1可为-PEG-A2-；其中PEG为包含一个或多个聚乙二醇亚单位的化学基团；并且A2为连接PEG和L的化学基团。PEG可选自 其中m和n独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。所述一个或多个脂质可选自十八烷二酸、十四烷基胺、肉豆蔻酸、硬脂酸、二十二碳六烯酸、石胆酸酯、胆酸和棕榈酸。
在式(I)的LC的一些本文所述实施方案中，
A1选自
并且
每个R1、R2、R3和R4独立地选自H、卤代、CN、–SR5、烷基、环烷基、卤代烷基、–NR5R5、-NC(O)R5、-NC(O)OR5和–OR5；
每个R5独立地为H、烷基、卤代烷基、芳基烷基、(环烷基)烷基或杂烷基；
k为1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；
p为2、3、4、5、6、7、8、9或10；并且
q为2、3、4、5、6、7、8、9或10。
在式(I)的LC的一些本文所述实施方案中，
A2选自键、
X为键、NR5、S或O；
每个R1、R2、R3和R4独立地选自H、卤代、CN、–SR5、烷基、环烷基、卤代烷基、–NR5R5和–OR5；
每个R5独立地为H、烷基、卤代烷基、芳基烷基或杂烷基；
R6为OH或–NR5R5；
每个R7独立地选自H、烷基、卤代烷基、芳基烷基和杂烷基；
r为1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；并且
s为1、2、3、4或5。
所述LC可具有以下结构：
TA-A1-P1-L
式(Ia)
其中：TA为具有半胱氨酸残基的治疗剂，其中该半胱氨酸残基与A1连接；A1为连接TA和P1的化学基团；P1为键或-PEG-A2-；PEG为包含一个或多个聚乙二醇亚单位的化学基团；A2为连接PEG和L的化学基团；并且L为所述脂质。
式(Ia)的TA的半胱氨酸残基的硫原子可经由化学键与A1连接。
式(Ia)的LC的PEG可选自：
其中
m和n可独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。
在式(Ia)的LC的一些本文所述实施方案中，
A1选自并且
R1、R2、R3和R4独立地选自H、卤代、CN、–SR5、烷基、环烷基、卤代烷基、–NR5R5和–OR5；
R5为H、烷基、卤代烷基、芳基烷基或杂烷基；
p为2、3、4、5、6、7、8、9或10；并且
q为2、3、4、5、6、7、8、9或10。
在式(Ia)的LC的一些本文所述实施方案中，
A2选自键、
X为键、NR5或O；
R1、R2、R3和R4独立地选自H、卤代、CN、–SR5、烷基、环烷基、卤代烷基、–NR5R5和–OR5；
R5为H、烷基、卤代烷基、芳基烷基或杂烷基；
每个R7独立地选自H、烷基、卤代烷基、芳基烷基和杂烷基；
r为1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；并且
s为1、2、3、4或5。
对于式(Ia)的LC，P1可为PEG-A2。
式(I)或(Ia)的LC可包含含有修饰的松弛素肽的TA。式(I)或(Ia)的LC可包含一个或多个选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺和脂肪醇的脂质。
所述一个或多个脂质与治疗剂的附接可包括共价附接。所述一个或多个脂质与修饰的松弛素肽的附接可包括共价附接。
所述一个或多个脂质可经由半胱氨酸残基与治疗剂附接。所述一个或多个脂质可经由半胱氨酸残基与修饰的松弛素附接。
本文公开了具有A3-P1-L结构的化合物，其中：A3为卤代乙酰胺、马来酰亚胺、苄基卤或吡啶基二硫化物(pyridyl disulfide)；P1为键或-PEG-A2-；PEG为包含一个或多个聚乙二醇亚单位的化学基团；A2为连接PEG和L的化学基团；并且L为选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺和脂肪醇的脂质。
本文进一步公开了具有A3-P1-L结构的化合物，其中：A3为卤代乙酰胺、马来酰亚胺、苄基卤或吡啶基二硫化物；P1为键或包含聚二醇；并且L为选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺、脂肪胺和脂肪醇的脂质。
本文公开了包含一个或多个脂质的方法和组合物。该一个或多个脂质可选自饱和脂肪酸、不饱和脂肪酸、脂肪二酸、脂肪酰胺、多不饱和脂肪酸、短链脂肪酸、中链脂肪酸、长链脂肪酸和超长链脂肪酸。
所述脂质可选自丙酸、丁酸、戊酸、己酸、庚酸、辛酸、壬酸、癸酸、十一烷酸、十二烷酸、十三烷酸、十四烷酸、肉豆蔻酸、十五烷酸、十六烷酸、十七烷酸、十八烷酸、十九烷酸、二十烷酸、二十一烷酸、二十二烷酸、二十三烷酸、二十四烷酸、二十五烷酸、二十六烷酸、二十七烷酸、二十八烷酸、二十九烷酸、三十烷酸、三十一烷酸、三十二烷酸、三十三烷酸、三十四烷酸、三十五烷酸和三十六烷酸。
所述一个或多个脂质可选自肉豆蔻脑酸、棕榈油酸、十六碳烯酸(sapienicacid)、油酸、反油酸、异油酸、亚油酸、亚麻酸(linoelaidic acid)、α-亚麻酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、芥酸、二十二碳六烯酸。
所述一个或多个脂质可选自十八烷二酸、十四烷基胺、肉豆蔻酸、硬脂酸、二十二碳六烯酸、石胆酸酯、胆酸和棕榈酸。
所述一个或多个脂质可包括肉豆蔻酸。所述一个或多个脂质可包括二十二碳六烯酸(docosahexanoic acid)。所述一个或多个脂质可包括石胆酸酯。所述一个或多个脂质可包括胆酸。所述一个或多个脂质可包括棕榈酸。所述一个或多个脂质可包括十八烷二酸。所述一个或多个脂质可包括十四烷基胺。所述一个或多个脂质可包括硬脂酸。
所述脂肪酸可包含至少约6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30个或更多个碳原子。
所述一个或多个脂质可包括衍生自脂肪酸的脂肪醇，该脂肪酸选自饱和脂肪酸、不饱和脂肪酸、多不饱和脂肪酸、短链脂肪酸、中链脂肪酸、长链脂肪酸和超长链脂肪酸。
所述一个或多个脂质可选自胆固醇、7-OH胆固醇、7,25-二羟基胆固醇、胆酸、鹅脱氧胆酸、石胆酸、脱氧胆酸、甘氨胆酸、甘氨脱氧胆酸、甘氨石胆酸和甘氨鹅脱氧胆酸。
所述一个或多个脂质可选自胆酸、鹅脱氧胆酸、石胆酸、脱氧胆酸、甘氨胆酸、甘氨脱氧胆酸、甘氨石胆酸和甘氨鹅脱氧胆酸。
所述一个或多个脂质可选自α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚、α-生育三烯酚、β-生育三烯酚、γ-生育三烯酚和δ-生育三烯酚。
本文公开了包含一个或多个治疗剂(TA)的方法和组合物。所述方法和组合物可包含治疗剂(TA)。所述一个或多个TA可包含蛋白质、生物分子、化学品、毒素、药物或其任意组合的至少一部分。
所述一个或多个TA可包含激素、激酶、受体、配体、生长因子、调节蛋白、代谢蛋白、细胞因子、抗体或其任意组合的至少一部分。
所述一个或多个TA可包含肽，该肽选自松弛素、H1松弛素、H2松弛素、H3松弛素、人INSL3、人INSL4、人INSL6、人IGF1、人IGFII、人胰岛素、泌酸调节肽、艾塞那肽、毒蜥外泌肽-4、胰高血糖素样蛋白-1(GLP-1)、GLP-2、胰高血糖素、GLP-1R和GIPR双重激动剂、GLP-1R和GCGR双重激动剂、瘦素、betatrophin、FGF 21、GDF 11、ANGPTL3、基于肽的毒素、Moka和VM-24，及其衍生物，该衍生物为包含一个或多个氨基酸添加、缺失或置换或其组合的肽。所述一个或多个TA可包含松弛素、泌酸调节肽、艾塞那肽、毒蜥外泌肽-4、胰高血糖素样蛋白-1(GLP-1)、GLP-2、胰高血糖素、GLP-1R和GIPR双重激动剂、GLP-1R和GCGR双重激动剂、瘦素、betatrophin、FGF 21、GDF 11、ANGPTL3、基于肽的毒素、Moka或VM-24，或其衍生物，该衍生物为包含一个或多个氨基酸添加、缺失或置换或其组合的肽。所述一个或多个TA可包含泌酸调节肽、艾塞那肽、毒蜥外泌肽-4、胰高血糖素样蛋白-1(GLP-1)、GLP-2、胰高血糖素、GLP-1R和GIPR双重激动剂、或GLP-1R和GCGR双重激动剂，或其衍生物，该衍生物为包含一个或多个氨基酸添加、缺失或置换或其组合的肽。所述一个或多个TA可包含H1松弛素、H2松弛素、H3松弛素、人INSL3、人INSL4、人INSL6、人IGF1、人IGFII或人胰岛素，或其衍生物，该衍生物为包含一个或多个氨基酸添加、缺失或置换或其组合的肽。所述一个或多个TA可包含肽基毒素或其衍生物，该衍生物为包含一个或多个氨基酸添加、缺失或置换或其组合的肽。可以使用包含硫酸铵的重折叠缓冲液将所述肽基毒素或其衍生物重折叠。
所述一个或多个TA可包含松弛素肽或其衍生物，该衍生物为包含一个或多个氨基酸添加、缺失或置换或其组合的肽。所述松弛素衍生物可包含修饰的松弛素A链，该链包含一个或多个已添加、缺失或置换或其组合的氨基酸。所述松弛素衍生物可包含修饰的松弛素B链，该链包含一个或多个已添加、缺失或置换或其组合的氨基酸。所述松弛素衍生物可包含修饰的松弛素A链，该链包含一个或多个已添加、缺失或置换或其组合的氨基酸；以及修饰的松弛素B链，该链包含一个或多个已添加、缺失或置换或其组合的氨基酸。所述松弛素衍生物可包含修饰的松弛素原(prorelaxin)，该修饰的松弛素原包含一个或多个已添加、缺失或置换或其组合的氨基酸。
所述TA可以是泌酸调节肽或其衍生物，该衍生物为包含一个或多个氨基酸添加、缺失或置换或其组合的肽。所述TA可以是毒蜥外泌肽-4或其衍生物，该衍生物为包含一个或多个氨基酸添加、缺失或置换或其组合的肽。所述TA可以是艾塞那肽或其衍生物，该衍生物为包含一个或多个氨基酸添加、缺失或置换或其组合的肽。所述TA可以是胰高血糖素样肽(GLP-1)或其衍生物，该衍生物为包含一个或多个氨基酸添加、缺失或置换或其组合的肽。所述TA可以是胰高血糖素或其衍生物，该衍生物为包含一个或多个氨基酸添加、缺失或置换或其组合的肽。
所述一个或多个TA可由选自SEQ ID NO:1-9的核苷酸序列编码。
所述一个或多个TA可由包含20个或更多个核苷酸的核苷酸序列编码，该核苷酸基于或衍生自选自SEQ ID NO:1-9的核苷酸序列。
所述一个或多个TA可由与选自SEQ ID NO:1-9的核苷酸序列至少约50％同源的核苷酸序列编码。
所述一个或多个TA可由与选自SEQ ID NO:1-9的核苷酸序列至少约55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％、99％同源的核苷酸序列编码。
所述一个或多个TA可由包含200个或更少的核苷酸的核苷酸序列编码。
所述一个或多个TA可由包含60-1500个或更少的核苷酸的核苷酸序列编码。
所述一个或多个TA可由包含选自SEQ ID NO:10-56的多肽序列的至少一部分的氨基酸序列编码。
所述一个或多个TA由氨基酸序列编码，该氨基酸序列可包含基于或衍生自选自SEQ ID NO:10-56的多肽序列的10个或更多个氨基酸。
所述一个或多个TA可包含氨基酸序列，该氨基酸序列包含基于或衍生自选自SEQID NO:10-56的氨基酸序列的20-500个或更多个氨基酸。
所述一个或多个TA可包含与选自SEQ ID NO:10-56的氨基酸序列至少约50％同源的氨基酸序列。
所述一个或多个TA可包含与选自SEQ ID NO:10-56的氨基酸序列至少约55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、92％、95％、97％或99％同源的氨基酸序列。
所述一个或多个TA可包含松弛素肽。所述松弛素肽可包括修饰的松弛素肽。所述修饰的松弛素肽可包含含有一个或多个氨基酸突变的野生型松弛素肽的至少一部分。所述松弛素肽可包含松弛素肽的A链和/或B链的至少一部分。
所述松弛素肽可包含一个或多个氨基酸突变。所述一个或多个氨基酸突变可包含缺失、置换、添加或其组合。所述一个或多个氨基酸突变可包括一个或多个氨基酸残基向野生型松弛素多肽的添加。所述一个或多个氨基酸突变可包括野生型松弛素多肽的一个或多个氨基酸残基的置换。所述一个或多个氨基酸突变可包括野生型松弛素多肽的一个或多个氨基酸残基的缺失。
所述一个或多个氨基酸突变可包括野生型松弛素肽的A链和/或B链中的一个或多个氨基酸残基的一个或多个氨基酸置换。所述一个或多个氨基酸突变可包括野生型松弛素肽的A链中的一个或多个氨基酸残基的一个或多个氨基酸置换。所述A链中的一个或多个氨基酸残基的一个或多个氨基酸置换可选自Y3C、A7C、T16C、R18C、S19C或其组合。所述一个或多个氨基酸突变可包括野生型松弛素肽的B链中的一个或多个氨基酸残基的一个或多个氨基酸置换。所述B链中的一个或多个氨基酸残基的一个或多个氨基酸置换可选自S2C、M4C、S26C和S29C或其任意组合。所述一个或多个氨基酸突变可包括野生型松弛素肽的A链中的Y3C置换。所述一个或多个氨基酸突变可包括野生型松弛素肽的A链中的A7C置换。所述一个或多个氨基酸突变可包括野生型松弛素肽的A链中的T16C置换。所述一个或多个氨基酸突变可包括野生型松弛素肽的A链中的R18C置换。所述一个或多个氨基酸突变可包括野生型松弛素肽的A链中的S19C置换。所述一个或多个氨基酸突变可包括野生型松弛素肽的B链中的S2C置换。所述一个或多个氨基酸突变可包括野生型松弛素肽的B链中的M4C置换。所述一个或多个氨基酸突变可包括野生型松弛素肽的B链中的S26C置换。所述一个或多个氨基酸突变可包括野生型松弛素肽的B链中的S29C置换。
所述一个或多个氨基酸突变可包括用半胱氨酸残基置换野生型松弛素肽的一个或多个氨基酸残基。所述野生型松弛素肽的一个或多个氨基酸残基可选自丙氨酸、甲硫氨酸、精氨酸、丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸。
所述一个或多个氨基酸突变可包括向野生型松弛素肽添加一个或多个氨基酸残基。
用于本文公开的方法和组合物的一个或多个脂质可提高一个或多个TA的一种或多种药代动力学性质。
如通过药效学测量的，与未与一个或多个脂质附接的一个或多个TA相比，所述一个或多个脂质可将一个或多个TA的一种或多种药代动力学性质提高至少约200％。如通过药效学测量的，与未与一个或多个脂质附接的TA相比，所述一个或多个脂质可将TA的一种或多种药代动力学性质提高至少约250％。
所述一种或多种药代动力学性质可包括半衰期。
本文公开了具有A3-P1-L结构的化合物，其中：A3可为卤代乙酰胺、马来酰亚胺、苄基卤或吡啶基二硫化物；P1可为键或-PEG-A2-；A2可为连接PEG和L的化学基团；L可为选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺和脂肪醇的脂质；并且PEG可选自：
其中
m和n可独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。
在本文描述的一些实施方案中，
A2选自键、
X为键、NR5或O；
R1、R2、R3和R4独立地选自H、卤代、CN、–SR5、烷基、环烷基、卤代烷基、–NR5R5和–OR5；
R5为H、烷基、卤代烷基、芳基烷基或杂烷基；
每个R7独立地选自H、烷基、卤代烷基、芳基烷基和杂烷基；
r为1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；并且
s为1、2、3、4或5。
本文公开了生产式(I)的LC的方法，该方法包括使TA的半胱氨酸残基与A3-P1-L反应，其中A3为用于形成A1的反应性前体。生产式(I)的LC的方法可包括使TA的半胱氨酸残基与A3-P1-L反应，其中A3为卤代乙酰胺、马来酰亚胺、苄基卤或吡啶基二硫化物。A3可为卤代乙酰胺。A3可为溴乙酰胺。
本文公开的药物组合物可进一步包含一种或多种药学上可接受的盐、赋形剂或载体。
本文公开的方法和组合物可用于治疗有需要的受试者的疾病或状况。所述疾病或状况可以是心血管病症。所述疾病或状况可以是急性心力衰竭。所述疾病或状况可以是纤维化。所述疾病或状况可以是疼痛。所述疼痛可以是神经病理性疼痛或炎性疼痛。
本文公开的LC可与一种或多种附加治疗剂一起施用。所述一种或多种附加治疗剂可选自抗炎药、他汀类药物(statin)、利尿剂、β-阻断剂、血管紧张素转化酶抑制剂、血管紧张素II受体阻断剂或其任意组合。所述一种或多种附加治疗剂可以是阿司匹林。
附图说明
本发明的新特征在所附权利要求书中具体阐述。在结合附图阅读时，将从以下的详述中获得对本发明的最好的理解。要强调的是，根据通常的做法，附图的各个特征不是按比例绘制的。相反，为了清楚起见，各个特征的尺寸被任意放大或缩小。附图中包括以下的图。
图1示出了聚乙二醇化的脂质衍生物与L-半胱氨酸修饰的松弛素的化学缀合的示意图(加框的残基可突变为L-半胱氨酸)。
图2示出了用于脂质缀合的用半胱氨酸修饰的松弛素(加框的残基可突变为例如L-半胱氨酸、赖氨酸、谷氨酰胺、丙氨酸)。
图3示出了在表达LGR7和CRE-Luc报告分子系的HEK293T细胞中，人松弛素2激活松弛素2受体(RXFP2或LGR7)。
图4示出了pVB008松弛素2接头(linker)载体的示意图以及其它松弛素表达构建体的其它示意图。图4公开了作为SEQ ID NO:69的“GGGRGG”。
图5示出了松弛素2S26C和松弛素2S29C PCR产物的琼脂糖凝胶。
图6示出了松弛素2S26C接头和松弛素2S29C接头PCR产物的琼脂糖凝胶。
图7示出了限制酶消化的载体(pVB008和pAC145)和PCR产物(松弛素2、松弛素2S26C接头、松弛素2S29C接头和艾塞那肽)的琼脂糖凝胶。
图8示出了松弛素和松弛素突变体的SDS-PAGE凝胶。
图9示出了在N-末端具有CBD标签的野生型松弛素的SDS-PAGE凝胶。
图10示出了(a)毒素-550肽(野生型)的二硫键模式，和(b)半胱氨酸-结(knot)毒素-550肽的示例性体外折叠途径，中间的结构表示双二硫键中间体，其中二硫键在半胱氨酸I与半胱氨酸IV之间以及半胱氨酸II与半胱氨酸V之间形成。
图11示出了脂质缀合物的小鼠药代动力学数据。
图12示出了野生型松弛素的小鼠药代动力学数据。
图13示出了脂质缀合物在各个时间点的耻骨韧带长度数据。
图14示出了脂质缀合物在24-h时间点的剂量响应数据。
图15示出了XTEN修饰的治疗剂(松弛素-B-D1A，S29C-XTEN-288)的非限制性实例的小鼠药代动力学数据。
图16A-B示出了示例性mTA。条目1-10示出了包含与半衰期延长部分(由X表示)附接的松弛素A链和B链的示例性mTA。条目11-13示出了包含与半衰期延长部分(由X表示)附接的毒素-550的示例性mTA。X可以是FA1、FA2、FA3、FA4、FA5、FA6或FA7或本文所述的另一种脂质。二硫键由连接两个半胱氨酸残基的括号或由连接两个半胱氨酸残基的线表示。图16B公开了分别作为SEQ ID NO 72和71的“GSCGG”和“GSGG”。
图17示出了示例性mTA。示例性mTA包含与半衰期延长部分(由X表示)附接的松弛素A链和B链。X可以是XTEN-288或XTEN-864。二硫键由连接两个半胱氨酸残基的括号或由连接两个半胱氨酸残基的线表示。
具体实施方式
本文公开了修饰的治疗剂(mTA)。通常，mTA可包含治疗剂(TA)和一个或多个半衰期延长部分，其中该TA与所述一个或多个半衰期延长部分附接。该治疗剂可以是肽。该TA可以与所述一个或多个半衰期延长部分中的每一个共价附接。该TA可以经由治疗剂上的半胱氨酸残基与所述一个或多个半衰期延长部分附接。该修饰的治疗剂的半衰期可长于单独该治疗剂的半衰期。半衰期延长部分可包含脂质、聚二醇区或其组合。半衰期延长部分可包含延伸重组多肽(XTEN)，该延伸重组多肽包含(i)氨基酸序列，其特征为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)、亮氨酸(L)和脯氨酸(P)残基的总和构成总氨基酸序列的大于约70％；(ii)基本非重复的氨基酸序列；(iii)具有少于约10％的α螺旋的氨基酸序列；和/或(iv)具有少于约10％的β折叠的氨基酸序列。半衰期延长部分可以与治疗剂上的半胱氨酸残基的硫原子附接。mTA的非限制性实例包括脂质缀合物(LC)和XTEN修饰的治疗剂(XTEN-mTA)。
本文公开了脂质缀合物(LC)。通常，该LC包含脂质和治疗剂。该脂质缀合物(LC)可包含(a)一个或多个脂质，该脂质选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺、脂肪胺和脂肪醇，及其衍生物；和(b)治疗剂(TA)，其中该治疗剂为肽，并且所述一个或多个脂质经由该肽上的氨基酸与治疗剂缀合。
该脂质缀合物(LC)可包含(a)一个或多个脂质，该脂质选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺和脂肪醇；和(b)一个或多个治疗剂(TA)，其中所述一个或多个脂质经由半胱氨酸残基与该一个或多个治疗剂缀合。
本文进一步公开了一种脂质缀合物(LC)，其包含(a)一个或多个脂质，该脂质选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺和脂肪醇；和(b)一个或多个治疗剂(TA)，其中所述一个或多个TA包含松弛素肽或其衍生物，其中所述一个或多个脂质经由半胱氨酸残基与该一个或多个治疗剂附接。
本文进一步公开了一种脂质缀合物(LC)，其包含与一个或多个治疗剂(TA)附接的一个或多个脂质，其中该一个或多个TA包含修饰的松弛素肽，并且其中该修饰的松弛素肽包括具有一个或多个氨基酸突变的野生型松弛素多肽。该LC可包含一个或多个与包含修饰的松弛素肽的治疗剂附接的脂质，其中该修饰的松弛素肽包括具有一个或多个氨基酸突变的野生型松弛素多肽。
本文公开了包含LC的药物组合物，其中该LC包含(a)一个或多个脂质，该脂质选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺、脂肪胺和脂肪醇，及其衍生物；和(b)治疗剂(TA)，其中该治疗剂为肽，并且所述一个或多个脂质经由该肽上的氨基酸与治疗剂缀合。
本文进一步公开了包含LC的药物组合物，其中该LC包含(a)一个或多个脂质，该脂质选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺和脂肪醇；和(b)一个或多个治疗剂(TA)，其中所述一个或多个脂质经由半胱氨酸残基与该一个或多个治疗剂缀合。
本文进一步公开了包含LC的药物组合物，其中该LC包含(a)一个或多个脂质，该脂质选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺和脂肪醇；和(b)一个或多个治疗剂(TA)，其中该一个或多个TA包含松弛素肽或其衍生物，其中所述一个或多个脂质经由半胱氨酸残基与该一个或多个治疗剂附接。
本文进一步公开了包含LC的药物组合物，其中该LC包含与一个或多个治疗剂(TA)附接的一个或多个脂质，其中该一个或多个TA包含修饰的松弛素肽，并且其中该修饰的松弛素肽包括具有一个或多个氨基酸突变的野生型松弛素多肽。该药物组合物可包含LC，其中该LC包含一个或多个与治疗剂(TA)附接的脂质，其中该TA包含修饰的松弛素肽，并且其中该修饰的松弛素肽包括具有一个或多个氨基酸突变的野生型松弛素多肽。
本文公开了一种治疗有需要的受试者的疾病或状况的方法，该方法包括向受试者施用包含LC的组合物，其中该LC包含(a)一个或多个脂质，该脂质选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺、脂肪胺和脂肪醇，及其衍生物；和(b)治疗剂(TA)，其中该治疗剂为肽，并且所述一个或多个脂质经由该肽上的氨基酸与治疗剂缀合。
本文进一步公开了一种治疗有需要的受试者的疾病或状况的方法，该方法包括向受试者施用包含LC的组合物，其中该LC包含(a)一个或多个脂质，该脂质选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺和脂肪醇；和(b)一个或多个治疗剂(TA)，其中所述一个或多个脂质经由半胱氨酸残基与该一个或多个治疗剂缀合。
本文进一步公开了治疗有需要的受试者的疾病或状况的方法，该方法包括向受试者施用包含LC的组合物，其中该LC包含(a)一个或多个脂质，该脂质选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺和脂肪醇；和(b)一个或多个治疗剂(TA)，其中该一个或多个TA包含松弛素肽或其衍生物，其中所述一个或多个脂质经由半胱氨酸残基与该一个或多个治疗剂附接。
本文进一步公开了治疗有需要的受试者的疾病或状况的方法，该方法包括向受试者施用包含LC的组合物，其中该LC包含与一个或多个治疗剂(TA)附接的一个或多个脂质，其中该一个或多个TA包含修饰的松弛素肽，并且其中该修饰的松弛素肽包括具有一个或多个氨基酸突变的野生型松弛素多肽。该治疗有需要的受试者的疾病或状况的方法可包括向受试者施用包含LC的组合物，其中该LC包含一个或多个与治疗剂(TA)附接的脂质，其中该TA包含修饰的松弛素肽，并且其中该修饰的松弛素肽包括具有一个或多个氨基酸突变的野生型松弛素多肽。
本文公开了包含LC的试剂盒，其中该LC包含(a)一个或多个脂质，该脂质选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺、脂肪胺和脂肪醇，及其衍生物；和(b)治疗剂(TA)，其中该治疗剂为肽，并且所述一个或多个脂质经由该肽上的氨基酸与治疗剂缀合。
本文进一步公开了包含LC的试剂盒，其中该LC包含(a)一个或多个脂质，该脂质选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺和脂肪醇；和(b)一个或多个治疗剂(TA)，其中所述一个或多个脂质经由半胱氨酸残基与该一个或多个治疗剂缀合。
本文进一步公开了包含LC的试剂盒，其中该LC包含(a)一个或多个脂质，该脂质选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺和脂肪醇；和(b)一个或多个治疗剂(TA)，其中该一个或多个TA包含松弛素肽或其衍生物，其中所述一个或多个脂质经由半胱氨酸残基与该一个或多个治疗剂附接。
本文进一步公开了包含LC的试剂盒，其中该LC包含与一个或多个治疗剂(TA)附接的一个或多个脂质，其中该一个或多个TA包含修饰的松弛素肽，并且其中该修饰的松弛素肽包括具有一个或多个氨基酸突变的野生型松弛素多肽。该试剂盒可包含LC，其中该LC包含一个或多个与治疗剂(TA)附接的脂质，其中该TA包含修饰的松弛素肽，并且其中该修饰的松弛素肽包括具有一个或多个氨基酸突变的野生型松弛素多肽。
本文进一步公开了具有以下结构的LC：
TA-A1-P1-L
式(I)
其中：TA为所述治疗剂；A1为连接TA和P1或L的化学基团；P1为键或包含聚二醇；并且L为所述脂质。
本文进一步公开了具有以下结构的LC：
TA-A1-P1-L
式(Ia)
其中：TA为具有半胱氨酸残基的治疗剂，其中该半胱氨酸残基与A1连接；A1为连接TA和P1的化学基团；P1为键或-PEG-A2-；PEG为包含一个或多个聚乙二醇亚单位的化学基团；A2为连接PEG和L的化学基团；并且L为所述脂质。
本文公开了具有A3-P1-L结构的化合物，其中：A3可为卤代乙酰胺、马来酰亚胺、苄基卤或吡啶基二硫化物；P1可为键或-PEG-A2-；A2可为连接PEG和L的化学基团；L可为选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺和脂肪醇的脂质；并且PEG可选自：
其中
m和n可独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。
本文公开了生产式(Ia)的LC的方法，该方法包括使TA的半胱氨酸残基与A3-P1-L反应，其中A3为用于形成A1的反应性前体。该生产式(Ia)的LC的方法可包括使TA的半胱氨酸残基与A3-P1-L反应，其中A3为卤代乙酰胺、马来酰亚胺、苄基卤或吡啶基二硫化物。A3可为卤代乙酰胺。A3可为溴乙酰胺。
在更详细地描述本发明方法、试剂盒和组合物之前，应当理解，本发明并不局限于所描述的特定方法、试剂盒或组合物，因此当然可能会有所不同。还应当理解，本文所使用的术语仅用于描述特定实施方案的目的，并非旨在限制，因为本发明的范围将仅由所附的权利要求书限制。描述了实施例以便为本领域普通技术人员提供如何制备和使用本发明的完整公开内容和描述，并且并非旨在限制发明人视为其发明的发明范围，也并非旨在表示下面的实验是所进行的全部或仅有的实验。已努力确保关于所用数字(例如量、温度等)的准确性，但一些实验误差和偏差应该予以考虑。除非另外指出，份数是重量份数，分子量是重均分子量，温度是摄氏度，而压力为大气压或接近大气压。
当提供一个数值的范围时，应当理解，该范围的上限和下限之间的每个中间值(到下限的单位的十分之一，除非上下文另有明确说明)也得到具体公开。在所述范围中的任何所述值或中间值与在所述范围中的任何其它所述值或中间值之间的各个较小范围也包含在本发明之内。这些较小范围的上限和下限可独立地包含在该范围内或排除在该范围之外，并且其中任一、无一或两个界限均包含在较小范围内的每个范围也包含在本发明内，服从于所述范围中任何特定地排除在外的界限。当所述范围包含一个或两个界限时，除去任一或两个那些包含在内的界限的范围也包含在本发明中。
除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。虽然与本文所述的那些类似或等同的任何方法和材料可以在本发明的实行或测试中使用，但现在描述一些潜在的和优选的方法和材料。本文提及的所有出版物在此通过引用并入，以公开和描述与所引用的出版物有关的方法和/或材料。可以理解，在存在矛盾的情况下，本公开内容取代所并入的出版物的任何公开内容。
本领域技术人员在阅读本公开内容后将会明了，本文描述并说明的每个单独的实施方案具有分立的组件和特征，其可与任何其它若干实施方案的特征容易地分离或结合，而不脱离本发明的范围或实质。可以按所列举事件的顺序或按任何其它在逻辑上可能的顺序实施任何列举的方法。
必须指出，如本文和所附权利要求书中所用的，单数形式“一个”、“一种”和“该”包括复数项，除非上下文另有明确说明。因此，例如，提及“一个细胞”包括多个这样的细胞，并且提及“该肽”包括提及一种或多种本领域技术人员已知的肽及其等价物，例如多肽，等等。
本文所讨论的出版物仅仅提供在本申请的申请日之前的公开内容。此处没有什么可以被解释为承认本发明没有资格由于在先发明而早于这样的出版物。此外，提供的出版日期可能不同于实际的公开日期，这可能需要单独证实。
提供了用于生产延长治疗剂的半衰期的mTA的方法和组合物。这些方法和组合物在许多疾病中具有治疗用途，例如，采用与松弛素缀合的半衰期延长分子可以比单独的松弛素更加有效地治疗心血管疾病。在阅读下文更全面描述的组合物和方法的细节后，本发明的这些和其它目的、优势和特征对本领域技术人员而言将变得明显。
尽管本文已经显示和描述了本发明的优选实施方案，但是本领域技术人员将会明白，这些实施方案仅通过举例提供。在不偏离本发明的情况下，本领域技术人员现在将会想到许多变换、改变和替代。应理解，本文描述的本发明实施方案的多种替代方案可以用于实施本发明。旨在以下面的权利要求限定本发明的范围，由此涵盖在这些权利要求范围内的方法和结构及其等同物。
修饰的治疗剂(mTA)
本文公开了修饰的治疗剂(mTA)，其可包含治疗剂(TA)和一个或多个半衰期延长部分，其中该TA与所述一个或多个半衰期延长部分附接。该治疗剂可以是肽。该TA可以与所述一个或多个半衰期延长部分中的每一个共价附接。该TA可以经由治疗剂上的半胱氨酸残基与所述一个或多个半衰期延长部分附接。该修饰的治疗剂的半衰期可以长于单独该治疗剂的半衰期。半衰期延长部分可包含脂质、聚二醇区或其组合。半衰期延长部分可包含延伸重组多肽(XTEN)，该延伸重组多肽包含(i)氨基酸序列，其特征为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)、亮氨酸(L)和脯氨酸(P)残基的总和构成总氨基酸序列的大于约70％；(ii)基本非重复的氨基酸序列；(iii)具有少于约10％的α螺旋的氨基酸序列；和/或(iv)具有少于约10％的β折叠的氨基酸序列。半衰期延长部分可以与治疗剂上的半胱氨酸残基的硫原子附接。mTA的非限制性实例包括脂质缀合物(LC)和XTEN修饰的治疗剂(XTEN-mTA)。
本文公开了修饰的治疗剂(mTA)，其包含治疗剂和一个或多个半衰期延长部分，其中该治疗剂为肽，该肽经由该肽上的半胱氨酸残基与所述一个或多个半衰期延长部分中的每一个共价附接；并且所述修饰的治疗剂的半衰期长于单独该肽的半衰期。该肽可包含一个或多个氨基酸添加、缺失、置换或其组合。该半胱氨酸残基可以是该肽上的氨基酸添加或置换。该半胱氨酸残基可以是野生型肽上的氨基酸添加或置换。
本文进一步公开了修饰的治疗剂(mTA)，其包含治疗剂和一个或多个半衰期延长部分，其中该治疗剂为肽，该肽经由该肽上的半胱氨酸残基与所述一个或多个半衰期延长部分中的每一个共价附接；每个半衰期延长部分均包含脂质；并且所述修饰的治疗剂的半衰期长于单独该肽的半衰期。该肽可包含一个或多个氨基酸添加、缺失、置换或其组合。该半胱氨酸残基可以是该肽上的氨基酸添加或置换。该半胱氨酸残基可以是野生型肽上的氨基酸添加或置换。该mTA可以是LC。
本文进一步公开了修饰的治疗剂(mTA)，其包含治疗剂和一个或多个半衰期延长部分，其中该治疗剂为肽，该肽经由该肽上的半胱氨酸残基与所述一个或多个半衰期延长部分中的每一个共价附接；每个半衰期延长部分均包含脂质；所述肽选自松弛素、H1松弛素、H2松弛素、H3松弛素、人INSL3、人INSL4、人INSL6、人IGF1、人IGFII、人胰岛素、泌酸调节肽、艾塞那肽、毒蜥外泌肽-4、胰高血糖素样蛋白-1(GLP-1)、GLP-2、胰高血糖素、GLP-1R和GIPR双重激动剂、GLP-1R和GCGR双重激动剂、瘦素、betatrophin、FGF 21、GDF 11、ANGPTL3、基于肽的毒素、Moka和VM-24，或其衍生物，该衍生物为包含一个或多个氨基酸添加、缺失或置换或其组合的肽；并且所述修饰的治疗剂的半衰期长于单独该肽的半衰期。该半胱氨酸残基可以是该肽上的氨基酸添加或置换。该半胱氨酸残基可以是野生型肽上的氨基酸添加或置换。该mTA可以是LC。
本文进一步公开了修饰的治疗剂(mTA)，其包含治疗剂和一个或多个半衰期延长部分，其中该治疗剂为肽，该肽经由该肽上的半胱氨酸残基与所述一个或多个半衰期延长部分中的每一个共价附接；每个半衰期延长部分均包含脂质；所述肽选自松弛素、泌酸调节肽、艾塞那肽、毒蜥外泌肽-4、胰高血糖素样蛋白-1(GLP-1)、GLP-2、胰高血糖素、GLP-1R和GIPR双重激动剂、GLP-1R和GCGR双重激动剂、瘦素、betatrophin、FGF 21、GDF 11、ANGPTL3、毒素-550、Moka和VM-24，或其衍生物，该衍生物为包含一个或多个氨基酸添加、缺失或置换或其组合的肽；并且所述修饰的治疗剂的半衰期长于单独该肽的半衰期。该半胱氨酸残基可以是该肽上的氨基酸添加或置换。该半胱氨酸残基可以是野生型肽上的氨基酸添加或置换。该mTA可以是LC。
本文进一步公开了修饰的治疗剂(mTA)，其包含治疗剂和一个或多个半衰期延长部分，其中该治疗剂为肽，该肽经由该肽上的半胱氨酸残基与所述一个或多个半衰期延长部分中的每一个共价附接；每个半衰期延长部分均包含脂质；所述肽为松弛素或其衍生物，该衍生物为包含一个或多个氨基酸添加、缺失或置换或其组合的肽；并且所述修饰的治疗剂的半衰期长于单独该肽的半衰期。该半胱氨酸残基可以是该肽上的氨基酸添加或置换。该半胱氨酸残基可以是野生型肽上的氨基酸添加或置换。该mTA可以是LC。
本文进一步公开了修饰的治疗剂(mTA)，其包含治疗剂和一个或多个半衰期延长部分，其中该治疗剂为肽，该肽经由该肽上的半胱氨酸残基与所述一个或多个半衰期延长部分中的每一个共价附接；每个半衰期延长部分均包含脂质；所述治疗剂由包含选自SEQID NO:10-56的多肽序列的至少一部分的氨基酸序列编码；并且所述修饰的治疗剂的半衰期长于单独该肽的半衰期。该肽可包含一个或多个氨基酸添加、缺失、置换或其组合。该半胱氨酸残基可以是该肽上的氨基酸添加或置换。该半胱氨酸残基可以是野生型肽上的氨基酸添加或置换。该mTA可以是LC。
本文进一步公开了修饰的治疗剂(mTA)，其包含治疗剂和一个或多个半衰期延长部分，其中该治疗剂为肽，该肽经由该肽上的半胱氨酸残基与所述一个或多个半衰期延长部分中的每一个共价附接；每个半衰期延长部分均包含选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺、脂肪胺和脂肪醇及其衍生物的脂质；并且所述修饰的治疗剂的半衰期长于单独该肽的半衰期。该肽可包含一个或多个氨基酸添加、缺失、置换或其组合。该半胱氨酸残基可以是该肽上的氨基酸添加或置换。该半胱氨酸残基可以是野生型肽上的氨基酸添加或置换。
本文进一步公开了修饰的治疗剂(mTA)，其包含治疗剂和一个或多个半衰期延长部分，其中该治疗剂为肽，该肽经由该肽上的半胱氨酸残基与所述一个或多个半衰期延长部分中的每一个共价附接；每个半衰期延长部分均包含选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺、脂肪胺和脂肪醇及其衍生物的脂质；所述肽选自松弛素、H1松弛素、H2松弛素、H3松弛素、人INSL3、人INSL4、人INSL6、人IGF1、人IGFII、人胰岛素、泌酸调节肽、艾塞那肽、毒蜥外泌肽-4、胰高血糖素样蛋白-1(GLP-1)、GLP-2、胰高血糖素、GLP-1R和GIPR双重激动剂、GLP-1R和GCGR双重激动剂、瘦素、betatrophin、FGF 21、GDF 11、ANGPTL3、基于肽的毒素、Moka和VM-24，或其衍生物，该衍生物为包含一个或多个氨基酸添加、缺失或置换或其组合的肽；并且所述修饰的治疗剂的半衰期长于单独该肽的半衰期。该半胱氨酸残基可以是该肽上的氨基酸添加或置换。该半胱氨酸残基可以是野生型肽上的氨基酸添加或置换。
本文进一步公开了修饰的治疗剂(mTA)，其包含治疗剂和一个或多个半衰期延长部分，其中该治疗剂为肽，该肽经由该肽上的半胱氨酸残基与所述一个或多个半衰期延长部分中的每一个共价附接；每个半衰期延长部分均包含选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺、脂肪胺和脂肪醇及其衍生物的脂质；所述肽选自松弛素、泌酸调节肽、艾塞那肽、毒蜥外泌肽-4、胰高血糖素样蛋白-1(GLP-1)、GLP-2、胰高血糖素、GLP-1R和GIPR双重激动剂、GLP-1R和GCGR双重激动剂、瘦素、betatrophin、FGF21、GDF 11、ANGPTL3、毒素-550、Moka和VM-24，或其衍生物，该衍生物为包含一个或多个氨基酸添加、缺失或置换或其组合的肽；并且所述修饰的治疗剂的半衰期长于单独该肽的半衰期。该半胱氨酸残基可以是该肽上的氨基酸添加或置换。该半胱氨酸残基可以是野生型肽上的氨基酸添加或置换。
本文进一步公开了修饰的治疗剂(mTA)，其包含治疗剂和一个或多个半衰期延长部分，其中该治疗剂为肽，该肽经由该肽上的半胱氨酸残基与所述一个或多个半衰期延长部分中的每一个共价附接；每个半衰期延长部分均包含选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺、脂肪胺和脂肪醇及其衍生物的脂质；所述肽为松弛素或其衍生物，该衍生物为包含一个或多个氨基酸添加、缺失或置换或其组合的肽；并且所述修饰的治疗剂的半衰期长于单独该肽的半衰期。该半胱氨酸残基可以是该肽上的氨基酸添加或置换。该半胱氨酸残基可以是野生型肽上的氨基酸添加或置换。
本文进一步公开了修饰的治疗剂(mTA)，其包含治疗剂和一个或多个半衰期延长部分，其中该治疗剂为肽，该肽经由该肽上的半胱氨酸残基与所述一个或多个半衰期延长部分中的每一个共价附接；每个半衰期延长部分均包含聚二醇区；并且所述修饰的治疗剂的半衰期长于单独该肽的半衰期。该肽可包含一个或多个氨基酸添加、缺失、置换或其组合。该半胱氨酸残基可以是该肽上的氨基酸添加或置换。该半胱氨酸残基可以是野生型肽上的氨基酸添加或置换。
本文进一步公开了修饰的治疗剂(mTA)，其包含治疗剂和一个或多个半衰期延长部分，其中该治疗剂为肽，该肽经由该肽上的半胱氨酸残基与所述一个或多个半衰期延长部分中的每一个共价附接；每个半衰期延长部分均包含聚二醇区；所述肽选自松弛素、H1松弛素、H2松弛素、H3松弛素、人INSL3、人INSL4、人INSL6、人IGF1、人IGFII、人胰岛素、泌酸调节肽、艾塞那肽、毒蜥外泌肽-4、胰高血糖素样蛋白-1(GLP-1)、GLP-2、胰高血糖素、GLP-1R和GIPR双重激动剂、GLP-1R和GCGR双重激动剂、瘦素、betatrophin、FGF 21、GDF 11、ANGPTL3、基于肽的毒素、Moka和VM-24，或其衍生物，该衍生物为包含一个或多个氨基酸添加、缺失或置换或其组合的肽；并且所述修饰的治疗剂的半衰期长于单独该肽的半衰期。该半胱氨酸残基可以是该肽上的氨基酸添加或置换。该半胱氨酸残基可以是野生型肽上的氨基酸添加或置换。
本文进一步公开了修饰的治疗剂(mTA)，其包含治疗剂和一个或多个半衰期延长部分，其中该治疗剂为肽，该肽经由该肽上的半胱氨酸残基与所述一个或多个半衰期延长部分中的每一个共价附接；每个半衰期延长部分均包含聚二醇区；所述肽选自松弛素、泌酸调节肽、艾塞那肽、毒蜥外泌肽-4、胰高血糖素样蛋白-1(GLP-1)、GLP-2、胰高血糖素、GLP-1R和GIPR双重激动剂、GLP-1R和GCGR双重激动剂、瘦素、betatrophin、FGF 21、GDF 11、ANGPTL3、毒素-550、Moka和VM-24，或其衍生物，该衍生物为包含一个或多个氨基酸添加、缺失或置换或其组合的肽；并且所述修饰的治疗剂的半衰期长于单独该肽的半衰期。该半胱氨酸残基可以是该肽上的氨基酸添加或置换。该半胱氨酸残基可以是野生型肽上的氨基酸添加或置换。
本文进一步公开了修饰的治疗剂(mTA)，其包含治疗剂和一个或多个半衰期延长部分，其中该治疗剂为肽，该肽经由该肽上的半胱氨酸残基与所述一个或多个半衰期延长部分中的每一个共价附接；每个半衰期延长部分均包含聚二醇区；所述肽为松弛素或其衍生物，该衍生物为包含一个或多个氨基酸添加、缺失或置换或其组合的肽；并且所述修饰的治疗剂的半衰期长于单独该肽的半衰期。该半胱氨酸残基可以是该肽上的氨基酸添加或置换。该半胱氨酸残基可以是野生型肽上的氨基酸添加或置换。
本文进一步公开了修饰的治疗剂(mTA)，其包含治疗剂和一个或多个半衰期延长部分，其中该治疗剂为肽，该肽经由该肽上的半胱氨酸残基与所述一个或多个半衰期延长部分中的每一个共价附接；每个半衰期延长部分均包含聚二醇区；所述治疗剂由包含选自SEQ ID NO:10-56的多肽序列的至少一部分的氨基酸序列编码；并且所述修饰的治疗剂的半衰期长于单独该肽的半衰期。该半胱氨酸残基可以是该肽上的氨基酸添加或置换。该半胱氨酸残基可以是野生型肽上的氨基酸添加或置换。
本文进一步公开了修饰的治疗剂(mTA)，其包含治疗剂和一个或多个半衰期延长部分，其中该治疗剂为肽，该肽经由该肽上的半胱氨酸残基与所述一个或多个半衰期延长部分中的每一个共价附接；每个半衰期延长部分均包含脂质和聚二醇区；并且所述修饰的治疗剂的半衰期长于单独该肽的半衰期。所述肽可包含一个或多个氨基酸添加、缺失、置换或其组合。该半胱氨酸残基可以是该肽上的氨基酸添加或置换。该半胱氨酸残基可以是野生型肽上的氨基酸添加或置换。该mTA可以是LC。
本文进一步公开了修饰的治疗剂(mTA)，其包含治疗剂和一个或多个半衰期延长部分，其中该治疗剂为肽，该肽经由该肽上的半胱氨酸残基与所述一个或多个半衰期延长部分中的每一个共价附接；每个半衰期延长部分均包含聚二醇区和选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺、脂肪胺和脂肪醇及其衍生物的脂质；并且所述修饰的治疗剂的半衰期长于单独该肽的半衰期。该肽可包含一个或多个氨基酸添加、缺失、置换或其组合。该半胱氨酸残基可以是该肽上的氨基酸添加或置换。该半胱氨酸残基可以是野生型肽上的氨基酸添加或置换。该mTA可以是LC。
本文进一步公开了修饰的治疗剂(mTA)，其包含治疗剂和一个或多个半衰期延长部分，其中该治疗剂为肽，该肽经由该肽上的半胱氨酸残基与所述一个或多个半衰期延长部分中的每一个共价附接；每个半衰期延长部分均包含聚二醇区和选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺、脂肪胺和脂肪醇及其衍生物的脂质；所述肽选自松弛素、H1松弛素、H2松弛素、H3松弛素、人INSL3、人INSL4、人INSL6、人IGF1、人IGFII、人胰岛素、泌酸调节肽、艾塞那肽、毒蜥外泌肽-4、胰高血糖素样蛋白-1(GLP-1)、GLP-2、胰高血糖素、GLP-1R和GIPR双重激动剂、GLP-1R和GCGR双重激动剂、瘦素、betatrophin、FGF 21、GDF 11、ANGPTL3、基于肽的毒素、Moka和VM-24，或其衍生物，该衍生物为包含一个或多个氨基酸添加、缺失或置换或其组合的肽；并且所述修饰的治疗剂的半衰期长于单独该肽的半衰期。该半胱氨酸残基可以是该肽上的氨基酸添加或置换。该半胱氨酸残基可以是野生型肽上的氨基酸添加或置换。该mTA可以是LC。
本文进一步公开了修饰的治疗剂(mTA)，其包含治疗剂和一个或多个半衰期延长部分，其中该治疗剂为肽，该肽经由该肽上的半胱氨酸残基与所述一个或多个半衰期延长部分中的每一个共价附接；每个半衰期延长部分均包含聚二醇区和选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺、脂肪胺和脂肪醇及其衍生物的脂质；所述肽选自松弛素、泌酸调节肽、艾塞那肽、毒蜥外泌肽-4、胰高血糖素样蛋白-1(GLP-1)、GLP-2、胰高血糖素、GLP-1R和GIPR双重激动剂、GLP-1R和GCGR双重激动剂、瘦素、betatrophin、FGF 21、GDF 11、ANGPTL3、毒素-550、Moka和VM-24，或其衍生物，该衍生物为包含一个或多个氨基酸添加、缺失或置换或其组合的肽；并且所述修饰的治疗剂的半衰期长于单独该肽的半衰期。该半胱氨酸残基可以是该肽上的氨基酸添加或置换。该半胱氨酸残基可以是野生型肽上的氨基酸添加或置换。该mTA可以是LC。
本文进一步公开了修饰的治疗剂(mTA)，其包含治疗剂和一个或多个半衰期延长部分，其中该治疗剂为肽，该肽经由该肽上的半胱氨酸残基与所述一个或多个半衰期延长部分中的每一个共价附接；每个半衰期延长部分均包含聚二醇区和选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺、脂肪胺和脂肪醇及其衍生物的脂质；所述肽为松弛素或其衍生物，该衍生物为包含一个或多个氨基酸添加、缺失或置换或其组合的肽；并且所述修饰的治疗剂的半衰期长于单独该肽的半衰期。该半胱氨酸残基可以是该肽上的氨基酸添加或置换。该mTA可以是LC。
本文进一步公开了修饰的治疗剂(mTA)，其包含治疗剂和一个或多个半衰期延长部分，其中该治疗剂为肽，该肽经由该肽上的半胱氨酸残基与所述一个或多个半衰期延长部分中的每一个共价附接；每个半衰期延长部分均包含延伸重组多肽(XTEN)，该延伸重组多肽包含(i)氨基酸序列，其特征为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)、亮氨酸(L)和脯氨酸(P)残基的总和构成总氨基酸序列的大于约70％；(ii)基本非重复的氨基酸序列；(iii)具有少于约10％的α螺旋的氨基酸序列；和/或(iv)具有少于约10％的β折叠的氨基酸序列；并且所述修饰的治疗剂的半衰期长于单独该肽的半衰期。该肽可包含一个或多个氨基酸添加、缺失、置换或其组合。该半胱氨酸残基可以是该肽上的氨基酸添加或置换。该半胱氨酸残基可以是野生型肽上的氨基酸添加或置换。该mTA可以是XTEN修饰的治疗剂(XTEN-mTA)。
本文进一步公开了修饰的治疗剂(mTA)，其包含治疗剂和一个或多个半衰期延长部分，其中该治疗剂为肽，该肽经由该肽上的半胱氨酸残基与所述一个或多个半衰期延长部分中的每一个共价附接；每个半衰期延长部分均包含延伸重组多肽(XTEN)，该延伸重组多肽包含(i)氨基酸序列，其特征为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)、亮氨酸(L)和脯氨酸(P)残基的总和构成总氨基酸序列的大于约70％；(ii)基本非重复的氨基酸序列；(iii)具有少于约10％的α螺旋的氨基酸序列；和/或(iv)具有少于约10％的β折叠的氨基酸序列；所述肽选自松弛素、H1松弛素、H2松弛素、H3松弛素、人INSL3、人INSL4、人INSL6、人IGF1、人IGFII、人胰岛素、泌酸调节肽、艾塞那肽、毒蜥外泌肽-4、胰高血糖素样蛋白-1(GLP-1)、GLP-2、胰高血糖素、GLP-1R和GIPR双重激动剂、GLP-1R和GCGR双重激动剂、瘦素、betatrophin、FGF 21、GDF 11、ANGPTL3、基于肽的毒素、Moka和VM-24，或其衍生物，该衍生物为包含一个或多个氨基酸添加、缺失或置换或其组合的肽；并且所述修饰的治疗剂的半衰期长于单独该肽的半衰期。该半胱氨酸残基可以是该肽上的氨基酸添加或置换。该半胱氨酸残基可以是野生型肽上的氨基酸添加或置换。该mTA可以是XTEN修饰的治疗剂(XTEN-mTA)。
本文进一步公开了修饰的治疗剂(mTA)，其包含治疗剂和一个或多个半衰期延长部分，其中该治疗剂为肽，该肽经由该肽上的半胱氨酸残基与所述一个或多个半衰期延长部分中的每一个共价附接；每个半衰期延长部分均包含延伸重组多肽(XTEN)，该延伸重组多肽包含(i)氨基酸序列，其特征为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)、亮氨酸(L)和脯氨酸(P)残基的总和构成总氨基酸序列的大于约70％；(ii)基本非重复的氨基酸序列；(iii)具有少于约10％的α螺旋的氨基酸序列；和/或(iv)具有少于约10％的β折叠的氨基酸序列；所述肽选自松弛素、泌酸调节肽、艾塞那肽、毒蜥外泌肽-4、胰高血糖素样蛋白-1(GLP-1)、GLP-2、胰高血糖素、GLP-1R和GIPR双重激动剂、GLP-1R和GCGR双重激动剂、瘦素、betatrophin、FGF 21、GDF 11、ANGPTL3、毒素-550、Moka和VM-24，或其衍生物，该衍生物为包含一个或多个氨基酸添加、缺失或置换或其组合的肽；并且所述修饰的治疗剂的半衰期长于单独该肽的半衰期。该半胱氨酸残基可以是该肽上的氨基酸添加或置换。该半胱氨酸残基可以是野生型肽上的氨基酸添加或置换。该mTA可以是XTEN修饰的治疗剂(XTEN-mTA)。
本文进一步公开了修饰的治疗剂(mTA)，其包含治疗剂和一个或多个半衰期延长部分，其中该治疗剂为肽，该肽经由该肽上的半胱氨酸残基与所述一个或多个半衰期延长部分中的每一个共价附接；每个半衰期延长部分均包含延伸重组多肽(XTEN)，该延伸重组多肽包含(i)氨基酸序列，其特征为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)、亮氨酸(L)和脯氨酸(P)残基的总和构成总氨基酸序列的大于约70％；(ii)基本非重复的氨基酸序列；(iii)具有少于约10％的α螺旋的氨基酸序列；和/或(iv)具有少于约10％的β折叠的氨基酸序列；所述肽为松弛素或其衍生物，该衍生物为包含一个或多个氨基酸添加、缺失或置换或其组合的肽；并且所述修饰的治疗剂的半衰期长于单独该肽的半衰期。该半胱氨酸残基可以是该肽上的氨基酸添加或置换。该半胱氨酸残基可以是野生型肽上的氨基酸添加或置换。该mTA可以是XTEN修饰的治疗剂(XTEN-mTA)。
本文进一步公开了修饰的治疗剂(mTA)，其包含治疗剂和一个或多个半衰期延长部分，其中该治疗剂为肽，该肽经由该肽上的半胱氨酸残基与所述一个或多个半衰期延长部分中的每一个共价附接；每个半衰期延长部分均包含延伸重组多肽(XTEN)，该延伸重组多肽包含(i)氨基酸序列，其特征为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)、亮氨酸(L)和脯氨酸(P)残基的总和构成总氨基酸序列的大于约70％；(ii)基本非重复的氨基酸序列；(iii)具有少于约10％的α螺旋的氨基酸序列；和/或(iv)具有少于约10％的β折叠的氨基酸序列；所述治疗剂由包含选自SEQ ID NO:10-56的多肽序列的至少一部分的氨基酸序列编码；并且所述修饰的治疗剂的半衰期长于单独该肽的半衰期。该半胱氨酸残基可以是该肽上的氨基酸添加或置换。该半胱氨酸残基可以是野生型肽上的氨基酸添加或置换。该mTA可以是XTEN修饰的治疗剂(XTEN-mTA)。
本文公开的mTA可具有以下结构：
TA-A1-P1-X
式(II)
其中：
TA为治疗剂；
A1为连接TA和P1或X的化学基团；
P1为键或包含聚二醇；并且
X为半衰期延长部分。
式(II)的X可包含脂质。
式(II)的X可包含延伸重组多肽(XTEN)。
式(II)的mTA的P1可为键。
TA的氨基酸残基的硫或氮原子可经由式(II)的mTA中的化学键与A1连接。式(II)的mTA的A1可以选自
/>
并且
每个R1、R2、R3和R4独立地选自H、卤代、CN、–SR5、烷基、环烷基、卤代烷基、–NR5R5、-NC(O)R5、-NC(O)OR5和–OR5；
每个R5独立地为H、烷基、卤代烷基、芳基烷基、(环烷基)烷基或杂烷基；
k为1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；
p为2、3、4、5、6、7、8、9或10；并且
q为2、3、4、5、6、7、8、9或10。
式(II)的mTA的P1可包含聚二醇。该聚二醇可选自聚乙二醇、聚丙二醇、聚丁二醇或其组合。该聚二醇可以是聚乙二醇。该聚二醇可以是聚丙二醇。该聚二醇可以是聚丁二醇。
式(II)的mTA的P1可为-PEG-A2-；其中PEG为包含一个或多个聚乙二醇亚单位的化学基团；并且A2为连接PEG和X的化学基团。PEG可选自 其中m和n独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。A2可选自键、
其中X为键、NR5、S或O；
每个R1、R2、R3和R4独立地选自H、卤代、CN、–SR5、烷基、环烷基、卤代烷基、–NR5R5和–OR5；
每个R5独立地为H、烷基、卤代烷基、芳基烷基或杂烷基；
R6为OH或–NR5R5；
每个R7独立地选自H、烷基、卤代烷基、芳基烷基和杂烷基；
r为1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；并且
s为1、2、3、4或5。
式(II)的半衰期延长部分可包含脂质。该脂质可选自丙酸、丁酸、戊酸、己酸、庚酸、辛酸、壬酸、癸酸、十一烷酸、十二烷酸、十三烷酸、十四烷酸、肉豆蔻酸、十五烷酸、十六烷酸、十七烷酸、十八烷酸、十九烷酸、二十烷酸、二十一烷酸、二十二烷酸、二十三烷酸、二十四烷酸、二十五烷酸、二十六烷酸、二十七烷酸、二十八烷酸、二十九烷酸、三十烷酸、三十一烷酸、三十二烷酸、三十三烷酸、三十四烷酸、三十五烷酸和三十六烷酸。该脂质可选自丙二酸、丁二酸、戊二酸、己二酸、庚二酸、辛二酸、壬二酸、癸二酸、十一烷二酸、十二烷二酸、十三烷二酸、十四烷二酸、十五烷二酸、十六烷二酸、十七烷二酸、十八烷二酸和十九烷二酸。该脂质可选自肉豆蔻脑酸、棕榈油酸、十六碳烯酸(sapienic acid)、油酸、反油酸、异油酸、亚油酸、亚麻酸、α-亚麻酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、芥酸、二十二碳六烯酸。该脂质可选自胆固醇、7-OH胆固醇、7,25-二羟基胆固醇、胆酸、鹅脱氧胆酸、石胆酸、脱氧胆酸、甘氨胆酸、甘氨脱氧胆酸、甘氨石胆酸和甘氨鹅脱氧胆酸。式(II)的mTA的一个或多个脂质可选自胆酸、鹅脱氧胆酸、石胆酸、脱氧胆酸、甘氨胆酸、甘氨脱氧胆酸、甘氨石胆酸和甘氨鹅脱氧胆酸。式(II)的mTA的一个或多个脂质可选自α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚、α-生育三烯酚、β-生育三烯酚、γ-生育三烯酚和δ-生育三烯酚。式(II)的mTA的一个或多个脂质可选自十八烷二酸、十四烷基胺、肉豆蔻酸、二十二碳六烯酸、石胆酸酯、胆酸和棕榈酸。
本文公开的mTA可具有以下结构：
TA-A1-P1-X
式(IIa)
其中：
TA为具有半胱氨酸残基的治疗剂，其中该半胱氨酸残基与A1连接；
A1为连接TA和P1的化学基团；
P1为键或-PEG-A2-；
PEG为包含一个或多个聚乙二醇亚单位的化学基团；
A2为连接PEG和X的化学基团；并且
X为半衰期延长部分。
式(IIa)的X可包含脂质。
式(IIa)的X可包含延伸重组多肽(XTEN)。
式(IIa)的mTA的TA的半胱氨酸残基的硫原子可经由化学键与A1连接。
式(IIa)的mTA的PEG可选自：
其中
m和n独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。
在本文公开的式(IIa)的mTA的一些实施方案中，
A1选自并且
R1、R2、R3和R4独立地选自H、卤代、CN、–SR5、烷基、环烷基、卤代烷基、–NR5R5和–OR5；
R5为H、烷基、卤代烷基、芳基烷基或杂烷基；
p为2、3、4、5、6、7、8、9或10；并且
q为2、3、4、5、6、7、8、9或10。
在本文公开的式(IIa)的mTA的一些所述实施方案中，
A2选自键、
X为键、NR5或O；
R1、R2、R3和R4独立地选自H、卤代、CN、–SR5、烷基、环烷基、卤代烷基、–NR5R5和–OR5；
R5为H、烷基、卤代烷基、芳基烷基或杂烷基；
每个R7独立地选自H、烷基、卤代烷基、芳基烷基和杂烷基；
r为1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；并且
s为1、2、3、4或5。
在本文公开的式(IIa)的mTA的一些实施方案中，P1为–PEG-A2。
本文公开了生产式(II)的mTA的方法，该方法包括使TA的半胱氨酸残基与A3-P1-X反应，其中A3为用于形成A1的反应性前体。在一些实施方案中，A3为卤代乙酰胺、马来酰亚胺、苄基卤或吡啶基二硫化物。在进一步的实施方案中，A3为卤代乙酰胺。在更进一步的实施方案中，A3为溴乙酰胺。
所述修饰的治疗剂(mTA)可包含(a)一个或多个脂质，该脂质选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺和脂肪醇；和(b)一个或多个治疗剂(TA)，其中所述一个或多个脂质经由半胱氨酸残基与该一个或多个治疗剂缀合。
所述修饰的治疗剂(mTA)可包含(a)一个或多个脂质，该脂质选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺、脂肪胺和脂肪醇，及其衍生物；和(b)治疗剂(TA)，其中该TA为肽，并且所述一个或多个脂质经由该肽上的氨基酸残基与该TA缀合。该氨基酸残基可以是半胱氨酸、赖氨酸或丝氨酸。该氨基酸残基可选自半胱氨酸或赖氨酸。该氨基酸残基可以是半胱氨酸。该氨基酸残基可以是赖氨酸。该氨基酸可以是氨基酸突变。该氨基酸可以是氨基酸添加或氨基酸置换。
所述修饰的治疗剂(mTA)可包含(a)一个或多个脂质，该脂质选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺和脂肪醇；和(b)一个或多个治疗剂(TA)，其中该一个或多个TA包含松弛素肽或其衍生物。所述修饰的治疗剂(mTA)可包含(a)一个或多个脂质，该脂质选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺、脂肪胺和脂肪醇，及其衍生物；和(b)治疗剂(TA)，其中该TA包含松弛素肽或其衍生物。
所述修饰的治疗剂(mTA)可包含(a)一个或多个脂质，该脂质选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺和脂肪醇；和(b)一个或多个治疗剂(TA)，其中该一个或多个TA包含松弛素肽或其衍生物，其中所述一个或多个脂质经由半胱氨酸残基与该一个或多个治疗剂附接。所述修饰的治疗剂(mTA)可包含(a)一个或多个脂质，该脂质选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺、脂肪胺和脂肪醇，及其衍生物；和(b)治疗剂(TA)，其中该TA包含松弛素肽或其衍生物，其中所述一个或多个脂质经由该肽上的氨基酸残基与治疗剂附接。该氨基酸残基可以是半胱氨酸、赖氨酸或丝氨酸。该氨基酸残基可选自半胱氨酸或赖氨酸。该氨基酸残基可以是半胱氨酸。该氨基酸残基可以是赖氨酸。该氨基酸可以是氨基酸突变。该氨基酸可以是氨基酸添加或氨基酸置换。该氨基酸残基可以是野生型肽上的氨基酸添加或置换。
所述修饰的治疗剂(mTA)可包含与一个或多个治疗剂(TA)附接的一个或多个脂质，其中该一个或多个TA包含修饰的松弛素肽，并且其中所述修饰的松弛素肽包括具有一个或多个氨基酸突变的野生型松弛素多肽。所述修饰的治疗剂(mTA)可包含一个或多个与治疗剂(TA)附接的脂质，其中该TA包含修饰的松弛素肽，并且其中所述修饰的松弛素肽包括具有一个或多个氨基酸突变的野生型松弛素多肽。
本文公开的mTA可包含含有修饰的松弛素肽的TA。本文公开的mTA可包含一个或多个脂质，其中该一个或多个脂质可选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪酸和脂肪醇，及其衍生物。所述一个或多个脂质与修饰的松弛素肽的附接可包括共价附接。所述一个或多个脂质可经由半胱氨酸残基与修饰的松弛素肽附接。该半胱氨酸残基可以是氨基酸突变。该半胱氨酸残基可以是氨基酸添加或氨基酸置换。该半胱氨酸残基可以是野生型肽上的氨基酸添加或置换。
半衰期延长部分
本文公开了修饰的治疗剂(mTA)，其包含治疗剂和一个或多个半衰期延长部分，其中该治疗剂为肽，该肽经由该肽上的半胱氨酸残基与所述一个或多个半衰期延长部分中的每一个共价附接；并且所述修饰的治疗剂的半衰期长于单独该肽的半衰期。
所述一个或多个半衰期延长部分可包含脂质、聚二醇区或其组合。所述一个或多个半衰期延长部分可包含延伸重组多肽(XTEN)。
所述聚二醇区可包含一个或多个聚乙二醇单元、聚丙二醇单元或聚丁二醇单元或其组合。所述聚二醇区可包含一个或多个聚乙二醇单元。所述聚二醇区可包含一个或多个聚丙二醇单元。所述聚二醇区可包含一个或多个聚丁二醇单元。
所述聚二醇区可包含10、20、30、40、50、60、70、80、90、100个或更多个聚乙二醇单元、聚丙二醇单元或聚丁二醇单元或其组合。所述聚二醇区可包含10、20、30、40、50、60、70、80、90、100个或更多个聚乙二醇单元。所述聚二醇区可包含10、20、30、40、50、60、70、80、90、100个或更多个聚丙二醇单元。所述聚二醇区可包含10、20、30、40、50、60、70、80、90、100个或更多个聚丁二醇单元。
所述聚二醇区可包含100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000个或更多个聚乙二醇单元、聚丙二醇单元或聚丁二醇单元或其组合。所述聚二醇区可包含100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000个或更多个聚乙二醇单元。所述聚二醇区可包含100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000个或更多个聚丙二醇单元。所述聚二醇区可包含100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000个或更多个聚丁二醇单元。
所述聚二醇区可包含1000、2000、3000、4000、5000、6000、7000、8000、9000、10000、11000、12000、13000、14000、15000、16000、17000、18000、19000、20000、25000、30000、35000、40000、45000、50000个或更多个聚乙二醇单元、聚丙二醇单元或聚丁二醇单元或其组合。所述聚二醇区可包含1000、2000、3000、4000、5000、6000、7000、8000、9000、10000、11000、12000、13000、14000、15000、16000、17000、18000、19000、20000、25000、30000、35000、40000、45000、50000个或更多个聚乙二醇单元。所述聚二醇区可包含1000、2000、3000、4000、5000、6000、7000、8000、9000、10000、11000、12000、13000、14000、15000、16000、17000、18000、19000、20000、25000、30000、35000、40000、45000、50000个或更多个聚丙二醇单元。所述聚二醇区可包含1000、2000、3000、4000、5000、6000、7000、8000、9000、10000、11000、12000、13000、14000、15000、16000、17000、18000、19000、20000、25000、30000、35000、40000、45000、50000个或更多个聚丁二醇单元。
所述聚二醇区可包含500-50,000道尔顿的分子量。所述聚二醇区可包含500-40,000道尔顿的分子量。所述聚二醇区可包含500-30,000道尔顿的分子量。所述聚二醇区可包含500-20,000道尔顿的分子量。所述聚二醇区可包含500、600、700、800、900、1000、2000、3000、4000、5000、6000、7000、8000、9000、10000、15000、20000、25000、30000、35000、40000或45000道尔顿或更大的分子量，包括其中的增量。
半衰期延长部分可经由TA上的半胱氨酸残基与TA附接。该附接可以经由通过TA上的半胱氨酸残基的硫原子的化学附接。半衰期延长部分可包含与TA上的半胱氨酸残基的硫原子直接附接的接头。半衰期延长部分可包含与TA上的半胱氨酸残基的硫原子共价附接的接头。
脂质缀合物(LC)
本文公开了包含与一个或多个治疗剂(TA)附接的一个或多个脂质的脂质缀合物(LC)。该脂质缀合物可包含与一个TA附接的一个或多个脂质。该脂质缀合物可进一步包含在一个或多个TA与一个或多个脂质之间的亲水性连接体(connector)。该脂质缀合物可进一步包含一个或多个聚乙二醇亚单位。所述一个或多个脂质可被聚乙二醇化。
本文公开的LC可具有以下结构：
TA-A1-P1-L
式(I)
其中：
TA为所述治疗剂；
A1为连接TA和P1或L的化学基团；
P1为键或包含聚二醇；并且
L为所述脂质。
式(I)的LC的P1可为键。
TA的氨基酸残基的硫或氮原子可经由式(I)的LC中的化学键与A1附接。式(I)的LC的A1可选自
/>
并且
每个R1、R2、R3和R4独立地选自H、卤代、CN、–SR5、烷基、环烷基、卤代烷基、–NR5R5、-NC(O)R5、-NC(O)OR5和–OR5；
每个R5独立地为H、烷基、卤代烷基、芳基烷基、(环烷基)烷基或杂烷基；
k为1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；
p为2、3、4、5、6、7、8、9或10；并且
q为2、3、4、5、6、7、8、9或10。
式(I)的LC的P1可包含聚二醇。该聚二醇可选自聚乙二醇、聚丙二醇、聚丁二醇或其组合。该聚二醇可以是聚乙二醇。该聚二醇可以是聚丙二醇。该聚二醇可以是聚丁二醇。
式(I)的LC的P1可为-PEG-A2-；其中PEG为包含一个或多个聚乙二醇亚单位的化学基团；并且A2为连接PEG和L的化学基团。PEG可选自和其中m和n独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。A2可选自键、其中X为键、NR5、S或O；
每个R1、R2、R3和R4独立地选自H、卤代、CN、–SR5、烷基、环烷基、卤代烷基、–NR5R5和–OR5；
每个R5独立地为H、烷基、卤代烷基、芳基烷基或杂烷基；
R6为OH或–NR5R5；
每个R7独立地选自H、烷基、卤代烷基、芳基烷基和杂烷基；
r为1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；并且
s为1、2、3、4或5。
式(I)的LC的一个或多个脂质可选自丙酸、丁酸、戊酸、己酸、庚酸、辛酸、壬酸、癸酸、十一烷酸、十二烷酸、十三烷酸、十四烷酸、肉豆蔻酸、十五烷酸、十六烷酸、十七烷酸、十八烷酸、十九烷酸、二十烷酸、二十一烷酸、二十二烷酸、二十三烷酸、二十四烷酸、二十五烷酸、二十六烷酸、二十七烷酸、二十八烷酸、二十九烷酸、三十烷酸、三十一烷酸、三十二烷酸、三十三烷酸、三十四烷酸、三十五烷酸和三十六烷酸。式(I)的LC的一个或多个脂质可选自丙二酸、丁二酸、戊二酸、己二酸、庚二酸、辛二酸、壬二酸、癸二酸、十一烷二酸、十二烷二酸、十三烷二酸、十四烷二酸、十五烷二酸、十六烷二酸、十七烷二酸、十八烷二酸和十九烷二酸。式(I)的LC的一个或多个脂质可选自肉豆蔻脑酸、棕榈油酸、十六碳烯酸(sapienicacid)、油酸、反油酸、异油酸、亚油酸、亚麻酸、α-亚麻酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、芥酸、二十二碳六烯酸。式(I)的LC的一个或多个脂质可选自胆固醇、7-OH胆固醇、7,25-二羟基胆固醇、胆酸、鹅脱氧胆酸、石胆酸、脱氧胆酸、甘氨胆酸、甘氨脱氧胆酸、甘氨石胆酸和甘氨鹅脱氧胆酸。式(I)的LC的一个或多个脂质可选自胆酸、鹅脱氧胆酸、石胆酸、脱氧胆酸、甘氨胆酸、甘氨脱氧胆酸、甘氨石胆酸和甘氨鹅脱氧胆酸。式(I)的LC的一个或多个脂质可选自α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚、α-生育三烯酚、β-生育三烯酚、γ-生育三烯酚和δ-生育三烯酚。式(I)的LC的一个或多个脂质可选自十八烷二酸、十四烷基胺、肉豆蔻酸、二十二碳六烯酸、石胆酸酯、胆酸和棕榈酸。
本文公开的LC可具有以下结构：
TA-A1-P1-L
式(Ia)
其中：
TA为具有半胱氨酸残基的治疗剂，其中该半胱氨酸残基与A1连接；
A1为连接TA和P1的化学基团；
P1为键或-PEG-A2-；
PEG为包含一个或多个聚乙二醇亚单位的化学基团；
A2为连接PEG和L的化学基团；并且
L为脂质。
式(Ia)的LC的TA的半胱氨酸残基的硫原子可经由化学键与A1连接。
式(Ia)的LC的PEG可选自：
其中
m和n独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。
在本文公开的式(Ia)的LC的一些实施方案中，
A1选自并且
R1、R2、R3和R4独立地选自H、卤代、CN、–SR5、烷基、环烷基、卤代烷基、–NR5R5和–OR5；
R5为H、烷基、卤代烷基、芳基烷基或杂烷基；
p为2、3、4、5、6、7、8、9或10；并且
q为2、3、4、5、6、7、8、9或10。
在本文公开的式(Ia)的LC的一些所述实施方案中，
A2选自键、
X为键、NR5或O；
R1、R2、R3和R4独立地选自H、卤代、CN、–SR5、烷基、环烷基、卤代烷基、–NR5R5和–OR5；
R5为H、烷基、卤代烷基、芳基烷基或杂烷基；
每个R7独立地选自H、烷基、卤代烷基、芳基烷基和杂烷基；
r为1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；并且
s为1、2、3、4或5。
在本文公开的式(Ia)的LC的一些实施方案中，P1为–PEG-A2。
本文公开了生产式(I)的LC的方法，该方法包括使TA的半胱氨酸残基与A3-P1-L反应，其中A3为用于形成A1的反应性前体。在一些实施方案中，A3为卤代乙酰胺、马来酰亚胺、苄基卤或吡啶基二硫化物。在进一步的实施方案中，A3为卤代乙酰胺。在更进一步的实施方案中，A3为溴乙酰胺。
所述脂质缀合物(LC)可包含(a)一个或多个脂质，该脂质选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺和脂肪醇；和(b)一个或多个治疗剂(TA)，其中所述一个或多个脂质经由半胱氨酸残基与该一个或多个治疗剂缀合。
所述脂质缀合物(LC)可包含(a)一个或多个脂质，该脂质选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺、脂肪胺和脂肪醇，及其衍生物；和(b)治疗剂(TA)，其中该TA为肽，并且所述一个或多个脂质经由该肽上的氨基酸残基与该TA缀合。该氨基酸残基可以是半胱氨酸、赖氨酸或丝氨酸。该氨基酸残基可选自半胱氨酸或赖氨酸。该氨基酸残基可以是半胱氨酸。该氨基酸残基可以是赖氨酸。该氨基酸可以是氨基酸突变。该氨基酸可以是氨基酸添加或氨基酸置换。
所述脂质缀合物(LC)可包含(a)一个或多个脂质，该脂质选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺和脂肪醇；和(b)一个或多个治疗剂(TA)，其中该一个或多个TA包含松弛素肽或其衍生物。所述脂质缀合物(LC)可包含(a)一个或多个脂质，该脂质选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺、脂肪胺和脂肪醇，及其衍生物；和(b)治疗剂(TA)，其中该TA包含松弛素肽或其衍生物。
所述脂质缀合物(LC)可包含(a)一个或多个脂质，该脂质选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺和脂肪醇；和(b)一个或多个治疗剂(TA)，其中该一个或多个TA包含松弛素肽或其衍生物，其中所述一个或多个脂质经由半胱氨酸残基与该一个或多个治疗剂附接。所述脂质缀合物(LC)可包含(a)一个或多个脂质，该脂质选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺、脂肪胺和脂肪醇，及其衍生物；和(b)治疗剂(TA)，其中该TA包含松弛素肽或其衍生物，其中所述一个或多个脂质经由该肽上的氨基酸残基与治疗剂附接。该氨基酸残基可以是半胱氨酸、赖氨酸或丝氨酸。该氨基酸残基可选自半胱氨酸或赖氨酸。该氨基酸残基可以是半胱氨酸。该氨基酸残基可以是赖氨酸。该氨基酸可以是氨基酸突变。氨基酸可以是氨基酸添加或氨基酸置换。
所述脂质缀合物(LC)可包含与一个或多个治疗剂(TA)附接的一个或多个脂质，其中该一个或多个TA包含修饰的松弛素肽，并且其中所述修饰的松弛素肽包括具有一个或多个氨基酸突变的野生型松弛素多肽。所述脂质缀合物(LC)可包含一个或多个与治疗剂(TA)附接的脂质，其中该TA包含修饰的松弛素肽，并且其中所述修饰的松弛素肽包括具有一个或多个氨基酸突变的野生型松弛素多肽。
本文公开的LC可包含含有修饰的松弛素肽的TA。本文公开的LC可包含一个或多个脂质，其中该一个或多个脂质可选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪酸和脂肪醇，及其衍生物。所述一个或多个脂质与修饰的松弛素肽的附接可包括共价附接。所述一个或多个脂质可经由半胱氨酸残基与修饰的松弛素肽附接。该半胱氨酸残基可以是氨基酸突变。该半胱氨酸残基可以是氨基酸添加或氨基酸置换。该半胱氨酸残基可以是野生型肽上的氨基酸添加或置换。
接头
本文公开的LC可进一步包含一个或多个接头。本文公开的LC可进一步包含两个或更多个接头。本文公开的LC可进一步包含三个或更多个接头。本文公开的LC可进一步包含四个或更多个接头。本文公开的LC可进一步包含五个或更多个接头。
所述一个或多个接头可使得脂质能够与治疗剂附接。该接头可使得脂质能够与另一个脂质附接。该接头可使得脂质能够与包含一个或多个聚乙二醇亚单位的化学基团附接。该接头可使得PEG能够与另一个PEG附接。该接头可使得PEG能够与治疗剂附接。该接头可使得治疗剂能够与另一个治疗剂附接。该接头可以是氨基酸。该接头可以是治疗剂的氨基酸。该接头可以是治疗剂的氨基酸突变。该接头可以是治疗剂的置换的氨基酸。该接头可以是治疗剂的氨基酸添加。该接头可以是位于肽的C-末端的氨基酸突变。该接头可以是位于肽的N-末端的氨基酸突变。该接头可以是位于肽的非末端位置的氨基酸突变。该接头可以是赖氨酸。该接头可以是半胱氨酸。该接头可以是L-半胱氨酸。该接头可以是醚或酰胺。该接头可以将PEG分子与脂质连接。
脂质衍生物
本文公开的LC可包含一个或多个脂质衍生物。可将脂质衍生物与TA附接。脂质衍生物与TA的附接可增强该TA的药代动力学性质。脂质衍生物可包括聚二醇。可对脂质衍生物进行聚乙二醇化。聚乙二醇化的脂质可包含至少一个聚乙二醇亚单位。可不对脂质衍生物进行聚乙二醇化。脂质可被广义地定义为疏水性或两亲性小分子。脂质可以是天然存在的或合成的。脂质可以是类二十烷酸、前列腺素、白三烯、血栓烷、蜡酯、辅酶A衍生物、脂肪酸肉碱、脂肪酸酰胺、乙醇胺、胆汁酸、维生素E、维生素A、维生素D、维生素K、脂溶性维生素衍生物、甘油单酯、甘油二酯、甘油三酯、磷脂、磷脂酰胆碱、甘油脂、甘油、甘油磷脂、鞘脂、糖脂、聚酮化合物、甾醇、甾醇衍生物、甾醇脂、类固醇激素、异戊烯醇脂(prenol lipid)、类胡萝卜素、脂肪酸和脂肪醇。
在一个方面，本文公开了具有A3-P1-L结构的脂质衍生物，其中：
A3为卤代乙酰胺、马来酰亚胺、苄基卤或吡啶基二硫化物。
P1为键或-PEG-A2-；
PEG为包含一个或多个聚乙二醇亚单位的化学基团；
A2为连接PEG和L的化学基团；并且
L为选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺和脂肪醇及其衍生物的脂质。
在本文描述的一些实施方案中，PEG选自：
其中
m和n独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。
在本文描述的一些实施方案中，
A2选自键、
X为键、NR5、S或O；
每个R1、R2、R3和R4独立地选自H、卤代、CN、–SR5、烷基、环烷基、卤代烷基、–NR5R5和–OR5；
每个R5独立地为H、烷基、卤代烷基、芳基烷基或杂烷基；
R6为OH或–NR5R5；
每个R7独立地选自H、烷基、卤代烷基、芳基烷基和杂烷基；
r为1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；并且
s为1、2、3、4或5。
脂质
本文公开的LC可包含一个或多个脂质。所述一个或多个脂质可以是脂肪酸。该脂肪酸(FA)可以与一个或多个治疗剂(TA)附接。脂肪酸与TA的附接可增强TA的药代动力学性质。脂肪酸可以是脂肪二酸、脂肪酰胺、脂肪胺或脂肪醇。脂肪酸可以是饱和的或不饱和的。饱和脂肪酸包括但不限于月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、花生酸。不饱和脂肪酸包括但不限于棕榈油酸、油酸、亚油酸、亚麻酸(linolenic acid)、芥酸和花生四烯酸。脂肪酸可以是短链脂肪酸、中链脂肪酸、长链脂肪酸或超长链脂肪酸。脂肪酸可以是单不饱和的或多不饱和的。脂肪酸可以是ω脂肪酸、必需脂肪酸、部分氢化的脂肪酸、顺式异构体脂肪酸或反式异构体脂肪酸。脂肪酸可以是ω-3脂肪酸、ω-6脂肪酸或ω-9脂肪酸。脂肪酸可以是二羧酸。
脂肪酸可包含约6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26个或更多个碳原子的链。脂肪酸可包含进一步含有1、2、3、4、5、6个或更多个双键的碳链。脂肪酸可以是天然存在的。脂肪酸可以不是天然存在的。脂肪酸可以是合成的。
本文公开的LC可进一步包含一个或多个脂肪酸。本文公开的LC可进一步包含两个或更多个脂肪酸。本文公开的LC可进一步包含三个或更多个脂肪酸。本文公开的LC可进一步包含四个或更多个脂肪酸。本文公开的LC可进一步包含五个或更多个脂肪酸。所述脂肪酸可以是不同的。所述脂肪酸可以是相同的。
任意LC的一个或多个脂质可选自肉豆蔻酸、二十二碳六烯酸、石胆酸酯、胆酸和棕榈酸。任意LC的一个或多个脂质可以是肉豆蔻酸。任意LC的一个或多个脂质可以是二十二碳六烯酸。任意LC的一个或多个脂质可以是石胆酸酯。任意LC的一个或多个脂质可以是胆酸。任意LC的一个或多个脂质可以是棕榈酸。
LC可包含一种或多种甾醇或甾醇衍生物。该甾醇或甾醇衍生物可选自胆固醇、7-OH胆固醇、7,25-二羟基胆固醇、胆酸、鹅脱氧胆酸、石胆酸、脱氧胆酸、甘氨胆酸、甘氨脱氧胆酸、甘氨石胆酸和甘氨鹅脱氧胆酸。
LC可包含一种或多种胆汁酸。该胆汁酸可选自胆酸、鹅脱氧胆酸、石胆酸、脱氧胆酸、甘氨胆酸、甘氨脱氧胆酸、甘氨石胆酸和甘氨鹅脱氧胆酸。
LC可包含一种或多种维生素E衍生物。该维生素E衍生物可选自α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚、α-生育三烯酚、β-生育三烯酚、γ-生育三烯酚和δ-生育三烯酚。
聚乙二醇化的脂质
本文公开的LC可包含一个或多个聚乙二醇化的脂质。该聚乙二醇化的脂质可包含至少一个聚乙二醇亚单位。脂质与一个或多个聚乙二醇亚单位之间的连接可以是直接键或接头(A2)。脂质与一个或多个聚乙二醇亚单位之间的接头的非限制性实例包括：键、 其中
X为键、NR5、S或O；
每个R1、R2、R3和R4独立地选自H、卤代、CN、–SR5、烷基、环烷基、卤代烷基、–NR5R5和–OR5；
每个R5独立地为H、烷基、卤代烷基、芳基烷基或杂烷基；
R6为OH或–NR5R5；
每个R7独立地选自H、烷基、卤代烷基、芳基烷基和杂烷基；
r为1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；并且
s为1、2、3、4或5。
聚乙二醇化的脂质可具有结构P1-L，其中P1为-PEG-A2-；PEG为包含一个或多个聚乙二醇亚单位的化学基团；A2为连接PEG和L的化学基团；并且L为脂质。PEG可选自：
其中
m和n独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。
聚乙二醇化的脂质可以通过接头与治疗剂连接。该接头可包含一个或多个酰胺部分。
XTEN修饰的治疗剂(XTEN-mTA)
本文公开了XTEN修饰的治疗剂(XTEN-mTA)，其包含(a)延伸重组多肽(XTEN)；和(b)选自松弛素、成纤维细胞生长因子21(FGF21)、瘦素、毒素-550及其类似物的治疗剂(TA)。
本文进一步公开了XTEN修饰的治疗剂(XTEN-mTA)，其包含(a)延伸重组多肽(XTEN)；和(b)包含松弛素或其类似物的治疗剂(TA)。
本文进一步公开了XTEN修饰的治疗剂(XTEN-mTA)，其包含(a)延伸重组多肽(XTEN)；和(b)包含FGF21或其类似物的治疗剂(TA)。
本文进一步公开了XTEN修饰的治疗剂(XTEN-mTA)，其包含(a)延伸重组多肽(XTEN)；和(b)包含瘦素或其类似物的治疗剂(TA)。
本文进一步公开了XTEN修饰的治疗剂(XTEN-mTA)，其包含(a)延伸重组多肽(XTEN)；和(b)包含毒素-550或其类似物的治疗剂(TA)。
本文进一步公开了XTEN修饰的治疗剂(XTEN-mTA)，其包含(a)选自松弛素、成纤维细胞生长因子21(FGF21)、瘦素、毒素-550及其类似物的治疗剂(TA)；和(b)延伸重组多肽(XTEN)，该延伸重组多肽包含(i)氨基酸序列，其特征为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)、亮氨酸(L)和脯氨酸(P)残基的总和构成总氨基酸序列的大于约70％；(ii)基本非重复的氨基酸序列；(iii)具有少于约10％的α螺旋的氨基酸序列；和/或(iv)具有少于约10％的β折叠的氨基酸序列，其中TA与XTEN附接。TA与XTEN的附接可以通过TA上的半胱氨酸残基实现。TA与XTEN的附接可以通过TA上的半胱氨酸残基的硫原子实现。
本文进一步公开了XTEN修饰的治疗剂(XTEN-mTA)，其包含(a)包含松弛素或其类似物的治疗剂(TA)；和延伸重组多肽(XTEN)，该延伸重组多肽包含(i)氨基酸序列，其特征为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)、亮氨酸(L)和脯氨酸(P)残基的总和构成总氨基酸序列的大于约70％；(ii)基本非重复的氨基酸序列；(iii)具有少于约10％的α螺旋的氨基酸序列；和/或(iv)具有少于约10％的β折叠的氨基酸序列，其中TA与XTEN附接。TA与XTEN的附接可以通过TA上的半胱氨酸残基实现。TA与XTEN的附接可以通过TA上的半胱氨酸残基的硫原子实现。
本文进一步公开了XTEN修饰的治疗剂(XTEN-mTA)，其包含(a)包含FGF21或其类似物的治疗剂(TA)；和延伸重组多肽(XTEN)，该延伸重组多肽包含(i)氨基酸序列，其特征为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)、亮氨酸(L)和脯氨酸(P)残基的总和构成总氨基酸序列的大于约70％；(ii)基本非重复的氨基酸序列；(iii)具有少于约10％的α螺旋的氨基酸序列；和/或(iv)具有少于约10％的β折叠的氨基酸序列，其中TA与XTEN附接。TA与XTEN的附接可以通过TA上的半胱氨酸残基实现。TA与XTEN的附接可以通过TA上的半胱氨酸残基的硫原子实现。
本文进一步公开了XTEN修饰的治疗剂(XTEN-mTA)，其包含(a)包含瘦素或其类似物的治疗剂(TA)；和延伸重组多肽(XTEN)，该延伸重组多肽包含(i)氨基酸序列，其特征为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)、亮氨酸(L)和脯氨酸(P)残基的总和构成总氨基酸序列的大于约70％；(ii)基本非重复的氨基酸序列；(iii)具有少于约10％的α螺旋的氨基酸序列；和/或(iv)具有少于约10％的β折叠的氨基酸序列，其中TA与XTEN附接。TA与XTEN的附接可以通过TA上的半胱氨酸残基实现。TA与XTEN的附接可以通过TA上的半胱氨酸残基的硫原子实现。
本文进一步公开了XTEN修饰的治疗剂(XTEN-mTA)，其包含(a)包含毒素-550或其类似物的治疗剂(TA)；和延伸重组多肽(XTEN)，该延伸重组多肽包含(i)氨基酸序列，其特征为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)、亮氨酸(L)和脯氨酸(P)残基的总和构成总氨基酸序列的大于约70％；(ii)基本非重复的氨基酸序列；(iii)具有少于约10％的α螺旋的氨基酸序列；和/或(iv)具有少于约10％的β折叠的氨基酸序列，其中TA与XTEN附接。TA与XTEN的附接可以通过TA上的半胱氨酸残基实现。TA与XTEN的附接可以通过TA上的半胱氨酸残基的硫原子实现。
XTEN-mTA在长度上可包含少于约2000、1800、1600、1500、1400、1300、1200、1100、1000个氨基酸。XTEN-mTA在长度上可包含少于约975、950、925、875、850、825、800、775、750、725、700、675、650、625或600个氨基酸。XTEN-mTA在长度上可包含少于约900个氨基酸。XTEN-mTA在长度上可包含少于约890个氨基酸。XTEN-mTA在长度上可包含少于约880个氨基酸。XTEN-mTA在长度上可包含少于约870个氨基酸。XTEN-mTA在长度上可包含少于约860个氨基酸。XTEN-mTA在长度上可包含少于约850个氨基酸。
XTEN-mTA的氨基酸序列可包含一个或多个天冬氨酸残基。XTEN-mTA的氨基酸序列可包含2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20个或更多个天冬氨酸残基。XTEN-mTA的氨基酸序列可包含2个或更多个天冬氨酸残基。XTEN-mTA的氨基酸序列可包含3个或更多个天冬氨酸残基。XTEN-mTA的氨基酸序列可包含4个或更多个天冬氨酸残基。
XTEN-mTA可包含一个或多个XTEN。XTEN-mTA可包含2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20个或更多个XTEN。XTEN-mTA可包含2个或更多个XTEN。XTEN-mTA可包含3个或更多个XTEN。XTEN-mTA可包含4个或更多个XTEN。
XTEN可包含含有基于或衍生自选自SEQ ID NO:66-67的氨基酸序列的10个或更多个氨基酸的氨基酸序列。XTEN可包含含有基于或衍生自选自SEQ ID NO:66-67的氨基酸序列的20、30、40、50、60、70、80、90、100、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750个或更多个氨基酸的氨基酸序列。XTEN可包含含有基于或衍生自选自SEQ ID NO:66-67的氨基酸序列的20个或更多个氨基酸的氨基酸序列。XTEN可包含含有基于或衍生自选自SEQ ID NO:66-67的氨基酸序列的30个或更多个氨基酸的氨基酸序列。XTEN可包含含有基于或衍生自选自SEQ ID NO:66-67的氨基酸序列的40个或更多个氨基酸的氨基酸序列。XTEN可包含含有基于或衍生自选自SEQ ID NO:66-67的氨基酸序列的50个或更多个氨基酸的氨基酸序列。XTEN可包含含有基于或衍生自选自SEQ ID NO:66-67的氨基酸序列的60个或更多个氨基酸的氨基酸序列。
XTEN可包含少于约400个氨基酸的氨基酸序列。XTEN可包含少于约390、380、375、370、365、360、350、340、330、320、310、300、290、280、270、260、250、240、230、220、210、200、190、180、170、160、150、140、130、120、100、90、80、70、60、50、40、30、20或10个氨基酸的氨基酸序列。XTEN可包含少于约350个氨基酸的氨基酸序列。XTEN可包含少于约300个氨基酸的氨基酸序列。XTEN可包含少于约250个氨基酸的氨基酸序列。
XTEN可包含可与选自SEQ ID NO:66-67的氨基酸序列至少约50％同源的氨基酸序列。XTEN可包含可与选自SEQ ID NO:66-67的氨基酸序列至少约55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、92％、95％、97％或99％同源的氨基酸序列。XTEN可包含可与选自SEQ ID NO:66-67的氨基酸序列至少约60％同源的氨基酸序列。XTEN可包含可与选自SEQID NO:66-67的氨基酸序列至少约70％同源的氨基酸序列。XTEN可包含可与选自SEQ IDNO:66-67的氨基酸序列至少约80％同源的氨基酸序列。
XTEN可包含这样的氨基酸序列，该氨基酸序列的特征为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)、亮氨酸(L)和脯氨酸(P)残基的总和构成总氨基酸序列的大于约75％、77％、80％、83％、85％、87％、90％、92％、95％、97％或99％。XTEN可包含这样的氨基酸序列，该氨基酸序列的特征为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)、亮氨酸(L)和脯氨酸(P)残基的总和构成总氨基酸序列的大于约75％。XTEN可包含这样的氨基酸序列，该氨基酸序列的特征为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)、亮氨酸(L)和脯氨酸(P)残基的总和构成总氨基酸序列的大于约80％。XTEN可包含这样的氨基酸序列，该氨基酸序列的特征为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)、亮氨酸(L)和脯氨酸(P)残基的总和构成总氨基酸序列的大于约85％。XTEN可包含这样的氨基酸序列，该氨基酸序列的特征为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)、亮氨酸(L)和脯氨酸(P)残基的总和构成总氨基酸序列的大于约90％。XTEN可包含这样的氨基酸序列，该氨基酸序列的特征为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)、亮氨酸(L)和脯氨酸(P)残基的总和构成总氨基酸序列的大于约95％。
XTEN可以附接至TA的N-末端、C-末端或N-和C-末端。XTEN可以附接至位于TA的N-或C-末端的半胱氨酸残基。XTEN可以化学附接至位于TA的N-或C-末端的半胱氨酸残基。XTEN可以附接至位于TA的N-或C-末端的半胱氨酸残基的硫原子。XTEN可以化学附接至位于TA的N-或C-末端的半胱氨酸残基的硫原子。XTEN可以附接至TA的内部残基。XTEN可以附接至位于TA的内部位置的半胱氨酸残基。XTEN可以化学附接至位于TA的内部位置的半胱氨酸残基。XTEN可以附接至位于TA的内部位置的半胱氨酸残基的硫原子。XTEN可以化学附接至位于TA的内部位置的半胱氨酸残基的硫原子。
XTEN-mTA可包含一个或多个TA。XTEN-mTA可包含2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20个或更多个TA。XTEN-mTA可包含2个或更多个TA。XTEN-mTA可包含3个或更多个TA。XTEN-mTA可包含4个或更多个TA。
TA可以包含含有选自SEQ ID NO:10-56的多肽序列的至少一部分的氨基酸序列。TA可包含含有基于或衍生自选自SEQ ID NO:10-56的氨基酸序列的10个或更多个氨基酸的氨基酸序列。TA可包含含有基于或衍生自选自SEQ ID NO:10-56的氨基酸序列的15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180个或更多个氨基酸的氨基酸序列。TA可包含含有基于或衍生自选自SEQ ID NO:10-56的氨基酸序列的20个或更多个氨基酸的氨基酸序列。TA可包含含有基于或衍生自选自SEQ ID NO:10-56的氨基酸序列的30个或更多个氨基酸的氨基酸序列。TA可包含含有基于或衍生自选自SEQ ID NO:10-56的氨基酸序列的50个或更多个氨基酸的氨基酸序列。TA可包含含有基于或衍生自选自SEQ ID NO:10-56的氨基酸序列的70个或更多个氨基酸的氨基酸序列。基于或衍生自选自SEQ ID NO:10-56的氨基酸序列的氨基酸可以是连续的。基于或衍生自选自SEQ ID NO:10-56的氨基酸序列的氨基酸可以是非连续的。
TA可包含少于约400个氨基酸的氨基酸序列。TA可包含少于约375、350、325、300、275、250、225、200、190、180、170、160、150、140、130、120、100、90、80、70、60、50、40、30、20或10个氨基酸的氨基酸序列。
TA可包含与选自SEQ ID NO:10-56的氨基酸序列至少约50％同源的氨基酸序列。TA可包含与选自SEQ ID NO:10-56的氨基酸序列至少约55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、92％、95％、97％或99％同源的氨基酸序列。TA可包含与选自SEQ ID NO:10-56的氨基酸序列至少约60％同源的氨基酸序列。TA可包含与选自SEQ ID NO:10-56的氨基酸序列至少约70％同源的氨基酸序列。TA可包含与选自SEQ ID NO:10-56的氨基酸序列至少约80％同源的氨基酸序列。TA可包含与选自SEQ ID NO:10-56的氨基酸序列至少约90％同源的氨基酸序列。
TA可以是松弛素或其类似物。XTEN可以附接至松弛素或其类似物的N-末端、C-末端或N-和C-末端。XTEN可以附接至位于松弛素或其类似物的N-或C-末端的半胱氨酸残基。XTEN可以化学附接至位于松弛素或其类似物的N-或C-末端的半胱氨酸残基。XTEN可以附接至位于松弛素或其类似物的N-或C-末端的半胱氨酸残基的硫原子。XTEN可以化学附接至位于松弛素或其类似物的N-或C-末端的半胱氨酸残基的硫原子。XTEN可以附接至位于松弛素或其类似物的N-或C-末端的半胱氨酸残基。XTEN可以化学附接至位于松弛素或其类似物的内部位置的半胱氨酸残基。XTEN可以附接至位于松弛素或其类似物的内部位置的半胱氨酸残基的硫原子。XTEN可以化学附接至位于松弛素或其类似物的内部位置的半胱氨酸残基的硫原子。
TA可以是FGF21或其类似物。XTEN可以附接至FGF21或其类似物的N-末端、C-末端或N-和C-末端。XTEN可以附接至位于FGF21或其类似物的N-或C-末端的半胱氨酸残基。XTEN可以化学附接至位于FGF21或其类似物的N-或C-末端的半胱氨酸残基。XTEN可以附接至位于FGF21或其类似物的N-或C-末端的半胱氨酸残基的硫原子。XTEN可以化学附接至位于FGF21或其类似物的N-或C-末端的半胱氨酸残基的硫原子。XTEN可以附接至FGF21或其类似物的内部残基。XTEN可以附接至位于FGF21或其类似物的内部位置的半胱氨酸残基。XTEN可以化学附接至位于FGF21或其类似物的内部位置的半胱氨酸残基。XTEN可以附接至位于FGF21或其类似物的内部位置的半胱氨酸残基的硫原子。XTEN可以化学附接至位于FGF21或其类似物的内部位置的半胱氨酸残基的硫原子。
TA可以是瘦素或其类似物。XTEN可以附接至瘦素或其类似物的N-末端、C-末端或N-和C-末端。XTEN可以附接至位于瘦素或其类似物的N-或C-末端的半胱氨酸残基。XTEN可以化学附接至位于瘦素或其类似物的N-或C-末端的半胱氨酸残基。XTEN可以附接至位于瘦素或其类似物的N-或C-末端的半胱氨酸残基的硫原子。XTEN可以化学附接至位于瘦素或其类似物的N-或C-末端的半胱氨酸残基的硫原子。XTEN可以附接至瘦素或其类似物的内部残基。XTEN可以附接至位于瘦素或其类似物的内部位置的半胱氨酸残基。XTEN可以化学附接至位于瘦素或其类似物的内部位置的半胱氨酸残基。XTEN可以附接至位于瘦素或其类似物的内部位置的半胱氨酸残基的硫原子。XTEN可以化学附接至位于瘦素或其类似物的内部位置的半胱氨酸残基的硫原子。
TA可以是毒素-550或其类似物。XTEN可以附接至毒素-550或其类似物的N-末端、C-末端或N-和C-末端。XTEN可以附接至位于毒素-550或其类似物的N-或C-末端的半胱氨酸残基。XTEN可以化学附接至位于毒素-550或其类似物的N-或C-末端的半胱氨酸残基。XTEN可以附接至位于毒素-550或其类似物的N-或C-末端的半胱氨酸残基的硫原子。XTEN可以化学附接至位于毒素-550或其类似物的N-或C-末端的半胱氨酸残基的硫原子。XTEN可以附接至毒素-550或其类似物的内部残基。XTEN可以附接至位于毒素-550或其类似物的内部位置的半胱氨酸残基。XTEN可以化学附接至位于毒素-550或其类似物的内部位置的半胱氨酸残基。XTEN可以附接至位于毒素-550或其类似物的内部位置的半胱氨酸残基的硫原子。XTEN可以化学附接至位于毒素-550或其类似物的内部位置的半胱氨酸残基的硫原子。
本文公开的XTEN-mTA可进一步包含一个或多个接头。本文公开的XTEN-mTA可进一步包含两个或更多个接头。本文公开的XTEN-mTA可进一步包含三个或更多个接头。本文公开的XTEN-mTA可进一步包含四个或更多个接头。本文公开的XTEN-mTA可进一步包含五个或更多个接头。
XTEN-mTA上的一个或多个接头中的每一个均可从包含卤素原子的反应性前体形成。该反应性前体可以是与XTEN附接的卤代乙酰胺。该卤代乙酰胺可位于XTEN的N-末端。该卤代乙酰胺可以是氯乙酰胺、溴乙酰胺或碘乙酰胺。
本文公开的TA可进一步包含一个或多个接头。本文公开的TA可进一步包含两个或更多个接头。本文公开的TA可进一步包含三个或更多个接头。本文公开的TA可进一步包含四个或更多个接头。本文公开的TA可进一步包含五个或更多个接头。
所述一个或多个接头可使得XTEN能够与治疗剂或另一个XTEN附接。
治疗剂(TA)
本文公开的mTA可包含一个或多个治疗剂。所述mTA可包含两个或更多个治疗剂。所述mTA可包含3、4、5、6、7个或更多个治疗剂。所述治疗剂可以是不同的。所述治疗剂可以是相同的。如本文所用的术语“治疗剂”是指调节靶蛋白质、靶肽、靶细胞或靶组织的活性的候选蛋白质或肽。调节活性可以包括提高、降低、刺激或阻止靶蛋白质、肽、细胞或组织的活性或表达。靶蛋白质或肽包括借助表达或活性而参与疾病或病症的病因学的蛋白质。TA可包含蛋白质、生物分子、化学品、毒素、药物或其任意组合的至少一部分。示例性的TA可包括但不限于激素、激酶、受体、配体、生长因子、调节蛋白质、代谢蛋白质、细胞因子、趋化因子、干扰素、磷酸酶、抗体或其任意组合的至少一部分。所述TA可以是野生型肽或包含一个或多个氨基酸添加、缺失、置换或其组合的修饰的肽。所述一个或多个氨基酸添加或置换可位于所述肽的C末端。所述一个或多个氨基酸添加或置换可位于所述肽的N末端。所述一个或多个氨基酸添加或置换可位于所述肽的N末端或C末端。所述一个或多个氨基酸添加或置换可位于所述肽的N末端和C末端两者。所述一个或多个氨基酸添加或置换可位于所述肽的非末端位置。
所述TA可以是激素。激素的实例包括但不限于肽激素、脂质和磷脂衍生的激素和一元胺。肽激素通常由氨基酸链组成。小肽激素的实例包括但不限于促甲状腺素释放激素(TRH)和血管升压素。由大量的或数百个氨基酸组成的肽可被称为蛋白质。蛋白质激素的实例包括胰岛素和生长激素。更复杂的蛋白质激素可携带碳水化合物侧链，并可被称为糖蛋白激素。黄体生成素、促卵泡激素和促甲状腺激素是糖蛋白激素的实例。脂质和磷脂衍生的激素通常衍生自脂质如亚油酸和花生四烯酸以及磷脂。蛋白质激素可包括衍生自胆固醇和类二十烷酸的类固醇激素。类固醇激素的实例是睾酮和皮质醇。类二十烷酸可包括前列腺素。一元胺可以通过芳香族氨基酸脱羧酶的作用衍生自芳香族氨基酸如苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸。所述TA可以是泌酸调节肽。所述TA可以是毒蜥外泌肽-4。所述TA可以是艾塞那肽。所述TA可以是胰高血糖素样肽(GLP-1)。所述TA可以是胰高血糖素。所述TA可以是瘦素。所述TA可以是betatrophin。
所述TA可以是松弛素肽或其衍生物。该松弛素肽可包括修饰的松弛素肽。该修饰的松弛素肽可包含含有一个或多个氨基酸突变的野生型松弛素肽的至少一部分。该松弛素肽可包含松弛素肽的A链和/或B链的至少一部分。该松弛素肽可包含一个或多个氨基酸突变。所述一个或多个氨基酸突变可包括缺失、置换、添加或其组合。所述一个或多个氨基酸突变可包括向野生型松弛素多肽中添加一个或多个氨基酸残基。所述一个或多个氨基酸突变可包括野生型松弛素多肽的一个或多个氨基酸残基的置换。所述一个或多个氨基酸突变可包括野生型松弛素多肽的一个或多个氨基酸残基的缺失。所述一个或多个氨基酸突变可包括野生型松弛素肽的A链和/或B链中的一个或多个氨基酸残基的一个或多个氨基酸置换。所述一个或多个氨基酸突变可包括野生型松弛素肽的A链中的一个或多个氨基酸残基的一个或多个氨基酸置换。在A链中的一个或多个氨基酸残基的一个或多个氨基酸置换可选自Y3C、A7C、T16C、R18C、S19C或其组合。所述一个或多个氨基酸突变可包括野生型松弛素肽的B链中的一个或多个氨基酸残基的一个或多个氨基酸置换。在B链中的一个或多个氨基酸残基的一个或多个氨基酸置换可选自D1A、S2C、M4C、S26C和S29C或其任意组合。所述一个或多个氨基酸突变可包括野生型松弛素肽的A链中的Y3C置换。所述一个或多个氨基酸突变可包括野生型松弛素肽的A链中的A7C置换。所述一个或多个氨基酸突变可包括野生型松弛素肽的A链中的T16C置换。所述一个或多个氨基酸突变可包括野生型松弛素肽的A链中的R18C置换。所述一个或多个氨基酸突变可包括野生型松弛素肽的A链中的S19C置换。所述一个或多个氨基酸突变可包括野生型松弛素肽的B链中的S2C置换。所述一个或多个氨基酸突变可包括野生型松弛素肽的B链中的D1A置换。所述一个或多个氨基酸突变可包括野生型松弛素肽的B链中的M4C置换。所述一个或多个氨基酸突变可包括野生型松弛素肽的B链中的S26C置换。所述一个或多个氨基酸突变可包括野生型松弛素肽的B链中的S29C置换。所述一个或多个氨基酸突变可包括用半胱氨酸残基置换野生型松弛素肽的一个或多个氨基酸残基。所述野生型松弛素肽的一个或多个氨基酸残基选自丙氨酸、甲硫氨酸、精氨酸、丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸。所述一个或多个氨基酸突变可包括向野生型松弛素肽添加一个或多个氨基酸残基。
所述TA可以是生长因子。生长因子可包括但不限于细胞因子和激素。生长因子的实例包括但不限于肾上腺髓质素(AM)、血管生成素(Ang)、自分泌运动因子、骨形态生成蛋白(BMP)、脑源性神经营养因子(BDNF)、表皮生长因子(EGF)、红细胞生成素(EPO)、成纤维细胞生长因子(FGF)、胶质细胞系源性神经营养因子(GDNF)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、生长分化因子-9(GDF9)、肝细胞生长因子(HGF)、肝细胞瘤衍生生长因子(HDGF)、胰岛素样生长因子(IGF)、促移行因子、肌肉生长抑制素(myostatin)(GDF-8)、神经生长因子(NGF)和其它神经营养因子、血小板衍生生长因子(PDGF)、促血小板生成素(TPO)、转化生长因子α(TGF-α)、转化生长因子β(TGF-β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和血管内皮生长因子(VEGF)。所述TA可以是成纤维细胞生长因子21(FGF21)。
所述TA可以是细胞调节蛋白质。所述TA可以是转化生长因子β超家族的细胞调节蛋白质。所述TA可以是decapentaplegic-Vg相关(DVR)的亚家族的成员。所述TA可以是激活素/抑制素亚家族的成员。所述TA可以是TGF-β亚家族的成员。所述TA可以是生长分化因子(GDF)。该GDF可以是GDF1、GDF2、GDF3、GDF5、GDF6、GFD8、GDF9、GDF10、GDF11和GDF15。所述TA可以是生长分化因子11(GDF11)。
所述TA可以是蛋白质。该蛋白质可以是分泌因子的血管生成素样家族的成员。该蛋白质可以是血管生成素样蛋白质(ANGPTL)。ANGPTL的实例包括但不限于ANGPTL1、ANGPTL2、ANGPTL3、ANGPTL4、ANGPTL5、ANGPTL6和ANGPTL7。所述TA可以是ANGPTL3。
所述TA可以包括肽，该肽选自松弛素、H1松弛素、H2松弛素、H3松弛素、人INSL3、人INSL4、人INSL6、人IGF1、人IGFII、人胰岛素、泌酸调节肽、艾塞那肽、毒蜥外泌肽-4、胰高血糖素样蛋白-1(GLP-1)、GLP-2、胰高血糖素、GLP-1R和GIPR双重激动剂、GLP-1R和GCGR双重激动剂、瘦素、betatrophin、FGF 21、GDF 11、ANGPTL3、基于肽的毒素、Moka和VM-24，及其衍生物，该衍生物为包含一个或多个氨基酸添加、缺失或置换或其组合的肽。所述TA可以包括松弛素、泌酸调节肽、艾塞那肽、毒蜥外泌肽-4、胰高血糖素样蛋白-1(GLP-1)、GLP-2、胰高血糖素、GLP-1R和GIPR双重激动剂、GLP-1R和GCGR双重激动剂、瘦素、betatrophin、FGF 21、GDF 11、ANGPTL3、基于肽的毒素、Moka或VM-24，或其衍生物，该衍生物为包含一个或多个氨基酸添加、缺失或置换或其组合的肽。所述TA可以包括泌酸调节肽、艾塞那肽、毒蜥外泌肽-4、胰高血糖素样蛋白-1(GLP-1)、GLP-2、胰高血糖素、GLP-1R和GIPR双重激动剂，或GLP-1R和GCGR双重激动剂，或其衍生物，该衍生物为包含一个或多个氨基酸添加、缺失或置换或其组合的肽。所述TA可以包括H1松弛素、H2松弛素、H3松弛素、人INSL3、人INSL4、人INSL6、人IGF1、人IGFII或人胰岛素，或其衍生物，该衍生物为包含一个或多个氨基酸添加、缺失或置换或其组合的肽。所述TA可以包括H1松弛素、H2松弛素或H3松弛素，或其衍生物，该衍生物为包含一个或多个氨基酸添加、缺失或置换或其组合的肽。所述TA可以包括人INSL3、人INSL4、人INSL6、人IGF1或人IGFII，或其衍生物，该衍生物为包含一个或多个氨基酸添加、缺失或置换或其组合的肽。所述TA可以包括肽基毒素或其衍生物，该衍生物为包含一个或多个氨基酸添加、缺失或置换或其组合的肽。所述TA可以包括毒素-550、Moka或VM-24，或其衍生物，该衍生物为包含一个或多个氨基酸添加、缺失或置换或其组合的肽。所述TA可以包括人胰岛素或其衍生物，该衍生物为包含一个或多个氨基酸添加、缺失或置换或其组合的肽。
所述TA可由基于或衍生自选自SEQ ID NO:1-9的核苷酸序列的核苷酸序列编码。所述TA可由与选自SEQ ID NO:1-9的核苷酸序列至少约50％同源的核苷酸序列编码。所述TA可由与选自SEQ ID NO:1-9的核苷酸序列至少约55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、92％、95％、97％、99％或100％同源的核苷酸序列编码。所述TA可由与选自SEQID NO:1-9的核苷酸序列至少约70％同源的核苷酸序列编码。所述TA可由与选自SEQ IDNO:1-9的核苷酸序列至少约75％同源的核苷酸序列编码。所述TA可由与选自SEQ ID NO:1-9的核苷酸序列至少约80％同源的核苷酸序列编码。所述TA可包含选自SEQ ID NO:1-9的一个或多个核苷酸序列。所述TA可包含选自SEQ ID NO:1-9的两个或更多个核苷酸序列。所述TA可包含选自SEQ ID NO:1-9的三个或更多个核苷酸序列。所述TA可包含选自SEQ ID NO:1-9的四个或更多个核苷酸序列。所述TA可包含选自SEQ ID NO:1-9的5、6、7、8或9个核苷酸序列。
所述TA可包含选自SEQ ID NO:10-56的氨基酸序列。所述TA可包含与选自SEQ IDNO:10-56的氨基酸序列至少约50％同源的氨基酸序列。所述TA可包含与选自SEQ ID NO:10-56的氨基酸序列至少约55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、92％、95％、97％、99％或100％同源的氨基酸序列。所述TA可包含与选自SEQ ID NO:10-56的氨基酸序列至少约70％同源的氨基酸序列。所述TA可包含与选自SEQ ID NO:10-56的氨基酸序列至少约75％同源的氨基酸序列。所述TA可包含与选自SEQ ID NO:10-56的氨基酸序列至少约80％同源的氨基酸序列。所述TA可包含选自SEQ ID NO:10-56的一个或多个氨基酸序列。所述TA可包含选自SEQ ID NO:10-56的两个或更多个氨基酸序列。所述TA可包含选自SEQ IDNO:10-56的三个或更多个氨基酸序列。所述TA可包含选自SEQ ID NO:10-56的四个或更多个氨基酸序列。所述TA可包含选自SEQ ID NO:10-56的5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个或更多个氨基酸序列。
所述TA可包含来自选自SEQ ID NO:10-56的氨基酸序列的20个或更多个连续的氨基酸。所述TA可包含来自选自SEQ ID NO:10-56的氨基酸序列的30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130个或更多个连续的氨基酸。
所述TA可以来自哺乳动物或非哺乳动物。所述TA可以来自人。或者，所述TA可以来自山羊、绵羊、牛、兔、猴、狗、猫或其组合。所述TA可以来自爬行动物。所述TA可以来自蛇或蜥蜴。所述TA可以来自两栖动物。所述TA可以来自蛙或蟾蜍。所述TA可以来自禽类。所述TA可以是重组的。
本文公开的TA可进一步包含一个或多个接头。本文公开的TA可进一步包含两个或更多个接头。本文公开的TA可进一步包含三个或更多个接头。本文公开的TA可进一步包含四个或更多个接头。本文公开的TA可进一步包含五个或更多个接头。
药代动力学
修饰的治疗剂正面影响药代动力学或药效学性质的机制包括但不限于，(i)阻止或缓和体内蛋白质水解降解或该治疗剂的其它降低活性的化学修饰；(ii)通过减少肾过滤、减少受体介导的清除或增加生物利用度来改善半衰期或其它药代动力学性质；(iii)降低毒性；(iv)改善溶解度；和/或(v)提高该治疗剂的生物活性和/或靶标选择性。
当与TA附接时，半衰期延长部分可增强治疗剂(TA)的一种或多种药代动力学性质。
与单独的TA相比，如通过药效学测量的，本文公开的修饰的治疗剂可使TA的一种或多种药代动力学性质增强至少约200％。与单独的TA相比，如通过药效学测量的，本文公开的修饰的治疗剂可使TA的一种或多种药代动力学性质增强至少约300％、400％、500％、600％、700％、800％、900％、1000％。与单独的TA相比，如通过药效学测量的，本文公开的修饰的治疗剂可使TA的一种或多种药代动力学性质增强至少约250％。与单独的TA相比，如通过药效学测量的，本文公开的修饰的治疗剂可使TA的一种或多种药代动力学性质增强至少约300％。与单独的TA相比，如通过药效学测量的，本文公开的修饰的治疗剂可使TA的一种或多种药代动力学性质增强至少约350％。与单独的TA相比，如通过药效学测量的，本文公开的修饰的治疗剂可使TA的一种或多种药代动力学性质增强至少约400％。与单独的TA相比，如通过药效学测量的，本文公开的修饰的治疗剂可使TA的一种或多种药代动力学性质增强至少约500％。
所述药代动力学性质可包括半衰期。所述修饰的治疗剂的半衰期与单独TA的半衰期相比可以是其至少约两倍长。本文公开的修饰的治疗剂的半衰期与单独TA的半衰期相比可以是其至少约3倍、4倍或5倍长。本文公开的修饰的治疗剂的半衰期与单独TA的半衰期相比可以是其至少约6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45或50倍长。本文公开的修饰的治疗剂的半衰期与单独TA的半衰期相比可以是其至少约5倍长。本文公开的修饰的治疗剂的半衰期与单独TA的半衰期相比可以是其至少约10倍长。
此外，与非缀合形式的治疗剂相比，修饰的治疗剂在增加可制造性和/或减少治疗剂的免疫原性方面可具有正面影响。
修饰的治疗剂可具有与单独的TA相当的活性。修饰的治疗剂可具有与单独的TA类似的活性。修饰的治疗剂可具有与单独的TA相比增加的活性。修饰的治疗剂可具有与单独的TA相比降低的活性。
一个或多个脂质与TA附接以形成LC可使LC的活性相对于单独的TA减少不大于2、3、4、5、6、7、8、9或10倍的活性。聚二醇区与TA附接以形成修饰的治疗剂可使该修饰的治疗剂的活性相对于单独的TA减少不大于2、3、4、5、6、7、8、9或10倍的活性。
治疗用途
本文进一步公开了用于治疗、缓解、抑制和/或预防一种或多种疾病和/或状况的mTA。该疾病和/或状况可以是慢性疾病或状况。或者，该疾病和/或状况可以是急性疾病或状况。该疾病或状况可以是复发性的、难治性的、加速的或处于缓解期的。该疾病或状况可影响一种或多种细胞类型。所述一种或多种疾病和/或状况可以是自身免疫性疾病、炎性疾病、心血管疾病和妊娠。可向有需要的受试者施用本文公开的mTA。
本文公开了治疗有需要的受试者的疾病或状况的方法，该方法包括向该受试者施用包含LC的组合物，其中该LC包含与治疗剂附接的脂质，其中该治疗剂是松弛素或其衍生物。所述疾病或状况可以是心血管疾病。该心血管疾病可以是急性心力衰竭。其它心血管疾病包括但不限于充血性心力衰竭、代偿性心力衰竭或失代偿性心力衰竭。所述疾病或状况可以是自身免疫性病症。该自身免疫性病症可以是硬皮病、弥漫性硬皮病或系统性硬皮病。所述疾病或状况可以是炎性疾病。该炎性疾病可以是纤维肌痛。所述疾病或状况可以是纤维化。或者，所述疾病或状况可以是妊娠。所述LC可用于治疗先兆子痫或诱发分娩。所述LC可以与一种或多种附加治疗剂一起施用。所述附加治疗剂可包括抗炎药、他汀类药物、利尿剂、β-阻断剂、血管紧张素转化酶抑制剂和血管紧张素II受体阻断剂中的一种或多种。所述附加治疗剂可以是阿司匹林。
本文进一步公开了用于治疗有需要的受试者的疾病或状况的方法，该方法包括向该受试者施用一种或多种LC，其中所述一种或多种脂质缀合物(LC)包含(a)一个或多个脂质，该脂质选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺和脂肪醇；和(b)一个或多个治疗剂(TA)，其中所述一个或多个脂质与所述一个或多个治疗剂中的至少一个半胱氨酸残基附接。所述一个或多个TA可包括松弛素。所述疾病或状况可以是心血管疾病。该心血管疾病可以是急性心力衰竭。其它心血管疾病包括但不限于充血性心力衰竭、代偿性心力衰竭或失代偿性心力衰竭。所述疾病或状况可以是自身免疫性病症。该自身免疫性病症可以是硬皮病、弥漫性硬皮病或系统性硬皮病。所述疾病或状况可以是炎性疾病。该炎性疾病可以是纤维肌痛。所述疾病或状况可以是纤维化。或者，所述疾病或状况是妊娠。所述LC可用于治疗先兆子痫或诱发分娩。所述LC可以与一种或多种附加治疗剂一起施用。所述附加治疗剂可包括抗炎药、他汀类药物、利尿剂、β-阻断剂、血管紧张素转化酶抑制剂和血管紧张素II受体阻断剂中的一种或多种。所述附加治疗剂可以是阿司匹林。
本文进一步公开了用于治疗有需要的受试者的疾病或状况的方法，该方法包括向该受试者施用一种或多种LC，其中所述一种或多种脂质缀合物(LC)包含(a)一个或多个脂质，该脂质选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺、脂肪胺和脂肪醇，及其衍生物；和(b)治疗剂(TA)，其中TA为肽，并且所述一个或多个脂质经由该肽上的氨基酸与该肽附接。所述TA可以包括松弛素。所述疾病或状况可以是心血管疾病。该心血管疾病可以是急性心力衰竭。其它心血管疾病包括但不限于充血性心力衰竭、代偿性心力衰竭或失代偿性心力衰竭。所述疾病或状况可以是自身免疫性病症。该自身免疫性病症可以是硬皮病、弥漫性硬皮病或系统性硬皮病。所述疾病或状况可以是炎性疾病。该炎性疾病可以是纤维肌痛。所述疾病或状况可以是纤维化。或者，所述疾病或状况是妊娠。所述LC可用于治疗先兆子痫或诱发分娩。所述LC可以与一种或多种附加治疗剂一起施用。所述附加治疗剂可包括抗炎药、他汀类药物、利尿剂、β-阻断剂、血管紧张素转化酶抑制剂和血管紧张素II受体阻断剂中的一种或多种。所述附加治疗剂可以是阿司匹林。
本文进一步公开了治疗有需要的受试者的疾病或状况的方法，该方法包括向该受试者施用一种或多种以下式(Ia)的脂质缀合物(LC)：TA-A1-P1-L，其中TA为治疗剂；A1为连接TA和P1的化学基团；P1为键或-PEG-A2-；PEG为包含一个或多个聚乙二醇亚单位的化学基团；A2为连接PEG和L的化学基团；并且L为脂质。所述TA可以包括松弛素。所述疾病或状况可以是心血管疾病。该心血管疾病可以是急性心力衰竭。其它心血管疾病包括但不限于充血性心力衰竭、代偿性心力衰竭或失代偿性心力衰竭。所述疾病或状况可以是自身免疫性病症。该自身免疫性病症可以是硬皮病、弥漫性硬皮病或系统性硬皮病。所述疾病或状况可以是炎性疾病。该炎性疾病可以是纤维肌痛。所述疾病或状况可以是纤维化。或者，所述疾病或状况是妊娠。所述LC可用于治疗先兆子痫或诱发分娩。所述LC可以与一种或多种附加治疗剂一起施用。所述附加治疗剂可包括抗炎药、他汀类药物、利尿剂、β-阻断剂、血管紧张素转化酶抑制剂和血管紧张素II受体阻断剂中的一种或多种。所述附加治疗剂可以是阿司匹林。
本文进一步公开了治疗有需要的受试者的疾病或状况的方法，该方法包括向该受试者施用一种或多种以下式(I)的脂质缀合物(LC)：TA-A1-P1-L，其中TA为治疗剂；A1为连接TA和P1或L的化学基团；P1为键或包含聚二醇；并且L为脂质。所述TA可以包括松弛素。所述疾病或状况可以是心血管疾病。该心血管疾病可以是急性心力衰竭。其它心血管疾病包括但不限于充血性心力衰竭、代偿性心力衰竭或失代偿性心力衰竭。所述疾病或状况可以是自身免疫性病症。该自身免疫性病症可以是硬皮病、弥漫性硬皮病或系统性硬皮病。所述疾病或状况可以是炎性疾病。该炎性疾病可以是纤维肌痛。所述疾病或状况可以是纤维化。或者，所述疾病或状况是妊娠。所述LC可用于治疗先兆子痫或诱发分娩。所述LC可以与一种或多种附加治疗剂一起施用。所述附加治疗剂可包括抗炎药、他汀类药物、利尿剂、β-阻断剂、血管紧张素转化酶抑制剂和血管紧张素II受体阻断剂中的一种或多种。所述附加治疗剂可以是阿司匹林。
本文提供了预防或治疗有需要的受试者的代谢性疾病或状况的方法，该方法包括向该受试者施用一种或多种LC，其中所述一种或多种脂质缀合物(LC)包含(a)一个或多个脂质，该脂质选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺和脂肪醇；和(b)一个或多个治疗剂(TA)，其中所述一个或多个脂质与所述一个或多个治疗剂中的一个或多个半胱氨酸残基附接。所述一个或多个TA可包括GLP-1、毒蜥外泌肽-4、艾塞那肽、泌酸调节肽、胰高血糖素、FGF21，或其衍生物。该GLP-1可以是人GLP-1。该FGF21可以是人FGF21。所述代谢性疾病或状况可以是糖尿病。所述代谢性疾病或状况可以是糖原贮积病、苯丙酮尿症、枫糖尿病、1型戊二酸血症、氨甲酰磷酸合成酶I缺乏症、尿黑酸尿症、中链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(MCADD)、急性间歇性卟啉病、Lesch-Nyhan综合征、类脂先天性肾上腺增生症、先天性肾上腺增生症、Kearns-Sayre综合征、泽尔韦格综合征(Zellwegersyndrome)、高歇氏病(Gaucher's disease)或尼曼匹克病(Niemann Pick disease)。
本文提供了预防或治疗有需要的受试者的代谢性疾病或状况的方法，该方法包括向该受试者施用一种或多种LC，其中所述一种或多种脂质缀合物(LC)包含(a)一个或多个脂质，该脂质选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺、脂肪胺和脂肪醇，及其衍生物；和(b)治疗剂(TA)，其中该TA为肽，并且所述一个或多个脂质经由该肽上的氨基酸残基与该TA附接。该TA可包括GLP-1、毒蜥外泌肽-4、艾塞那肽、泌酸调节肽、胰高血糖素、FGF21，或其衍生物。该GLP-1可以是人GLP-1。该FGF21可以是人FGF21。所述代谢性疾病或状况可以是糖尿病。所述代谢性疾病或状况可以是糖原贮积病、苯丙酮尿症、枫糖尿病、1型戊二酸血症、氨甲酰磷酸合成酶I缺乏症、尿黑酸尿症、中链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(MCADD)、急性间歇性卟啉病、Lesch-Nyhan综合征、类脂先天性肾上腺增生症、先天性肾上腺增生症、Kearns-Sayre综合征、泽尔韦格综合征、高歇氏病或尼曼匹克病。
本文提供了预防或治疗有需要的受试者的代谢性疾病或状况的方法，该方法包括向该受试者施用一种或多种以下式(Ia)的脂质缀合物(LC)：TA-A1-P1-L，其中TA为治疗剂；A1为连接TA和P1的化学基团；P1为键或-PEG-A2-；PEG为包含一个或多个聚乙二醇亚单位的化学基团；A2为连接PEG和L的化学基团；并且L为脂质。所述TA可包括GLP-1、毒蜥外泌肽-4、艾塞那肽、泌酸调节肽、胰高血糖素、FGF21，或其衍生物。该GLP-1可以是人GLP-1。该FGF21可以是人FGF21。所述一个或多个脂质可以包括一种或多种甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺和脂肪醇。所述代谢性疾病或状况可以是糖原贮积病、苯丙酮尿症、枫糖尿病、1型戊二酸血症、氨甲酰磷酸合成酶I缺乏症、尿黑酸尿症、中链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(MCADD)、急性间歇性卟啉病、Lesch-Nyhan综合征、类脂先天性肾上腺增生症、先天性肾上腺增生症、Kearns-Sayre综合征、泽尔韦格综合征、高歇氏病或尼曼匹克病。
本文提供了预防或治疗有需要的受试者的代谢性疾病或状况的方法，该方法包括向该受试者施用一种或多种以下式(I)的脂质缀合物(LC)：TA-A1-P1-L，其中TA为治疗剂；A1为连接TA和P1或L的化学基团；P1为键或包含聚二醇；并且L为脂质。所述TA可包括GLP-1、毒蜥外泌肽-4、艾塞那肽、泌酸调节肽、胰高血糖素、FGF21，或其衍生物。该GLP-1可以是人GLP-1。该FGF21可以是人FGF21。所述一个或多个脂质可以包括一种或多种甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺和脂肪醇。所述代谢性疾病或状况可以是糖原贮积病、苯丙酮尿症、枫糖尿病、1型戊二酸血症、氨甲酰磷酸合成酶I缺乏症、尿黑酸尿症、中链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(MCADD)、急性间歇性卟啉病、Lesch-Nyhan综合征、类脂先天性肾上腺增生症、先天性肾上腺增生症、Kearns-Sayre综合征、泽尔韦格综合征、高歇氏病或尼曼匹克病。
本文提供了预防或治疗有需要的受试者的中枢神经系统(CNS)病症的方法，该方法包括向该受试者施用一种或多种LC，其中所述一种或多种脂质缀合物(LC)包含(a)一个或多个脂质，该脂质选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺和脂肪醇；和(b)一个或多个治疗剂(TA)，其中所述一个或多个脂质与所述一个或多个治疗剂中的至少一个半胱氨酸残基附接。所述一个或多个TA可包括GLP-1、毒蜥外泌肽-4、艾塞那肽、泌酸调节肽、胰高血糖素，或其衍生物。该GLP-1可以是人GLP-1。所述CNS病症可以是阿尔茨海默病(AD)。其它CNS病症包括但不限于脑炎、脑膜炎、热带痉挛性轻截瘫、蛛网膜囊肿、亨廷顿病、闭锁综合征、帕金森病、妥瑞症(Tourette's)和多发性硬化。
本文提供了预防或治疗有需要的受试者的中枢神经系统(CNS)病症的方法，该方法包括向该受试者施用一种或多种LC，其中所述一种或多种脂质缀合物(LC)包含(a)一个或多个脂质，该脂质选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺、脂肪胺和脂肪醇，及其衍生物；和(b)治疗剂(TA)，其中该TA为肽，并且所述一个或多个脂质经由该肽上的氨基酸残基与该TA附接。该TA可包括GLP-1、毒蜥外泌肽-4、艾塞那肽、泌酸调节肽、胰高血糖素，或其衍生物。该GLP-1可以是人GLP-1。所述CNS病症可以是阿尔茨海默病(AD)。其它CNS病症包括但不限于脑炎、脑膜炎、热带痉挛性轻截瘫、蛛网膜囊肿、亨廷顿病、闭锁综合征、帕金森病、妥瑞症(Tourette's)和多发性硬化。
本文提供了预防或治疗有需要的受试者的中枢神经系统(CNS)病症的方法，该方法包括向该受试者施用一种或多种以下式(Ia)的脂质缀合物(LC)：TA-A1-P1-L，其中TA为治疗剂；A1为连接TA和P1的化学基团；P1为键或-PEG-A2-；PEG为包含一个或多个聚乙二醇亚单位的化学基团；A2为连接PEG和L的化学基团；并且L为脂质。所述一个或多个脂质可以包括一种或多种甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺和脂肪醇。所述一个或多个脂质可以包括一种或多种甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺和脂肪醇。所述TA可包括GLP-1、毒蜥外泌肽-4、艾塞那肽、泌酸调节肽、胰高血糖素，或其衍生物。该GLP-1可以是人GLP-1。所述CNS病症可以是阿尔茨海默病(AD)。其它CNS病症包括但不限于脑炎、脑膜炎、热带痉挛性轻截瘫、蛛网膜囊肿、亨廷顿病、闭锁综合征、帕金森病、妥瑞症(Tourette's)和多发性硬化。
本文提供了预防或治疗有需要的受试者的中枢神经系统(CNS)病症的方法，该方法包括向该受试者施用一种或多种以下式(I)的脂质缀合物(LC)：TA-A1-P1-L，其中TA为治疗剂；A1为连接TA和P1或L的化学基团；P1为键或包含聚二醇；并且L为脂质。所述一个或多个脂质可以包括一种或多种甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺和脂肪醇。所述一个或多个脂质可以包括一种或多种甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺或脂肪醇，或其衍生物。所述TA可包括GLP-1、毒蜥外泌肽-4、艾塞那肽、泌酸调节肽、胰高血糖素，或其衍生物。该GLP-1可以是人GLP-1。所述CNS病症可以是阿尔茨海默病(AD)。其它CNS病症包括但不限于脑炎、脑膜炎、热带痉挛性轻截瘫、蛛网膜囊肿、亨廷顿病、闭锁综合征、帕金森病、妥瑞症(Tourette's)和多发性硬化。
本文提供了预防或治疗有需要的受试者中受益于GLP-1R和/或胰高血糖素受体(GCGR)激动剂的疾病或状况的方法，该方法包括向该受试者施用一种或多种LC，其中所述一种或多种脂质缀合物(LC)包含(a)一个或多个脂质，该脂质选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺和脂肪醇；和(b)一个或多个治疗剂(TA)，其中所述一个或多个脂质与所述一个或多个治疗剂中的至少一个半胱氨酸残基附接。所述一个或多个TA可包括GLP-1、毒蜥外泌肽-4、艾塞那肽、泌酸调节肽、胰高血糖素，或其衍生物。该GLP-1可以是人GLP-1。所述疾病或状况可以是代谢性疾病或病症。所述疾病或状况可以是糖尿病。所述疾病或状况可以是肥胖症。受益于GLP-1R和/或GCGR激动剂的其它疾病和/或状况包括但不限于血脂异常、心血管疾病和脂肪肝疾病。
本文提供了预防或治疗有需要的受试者中受益于GLP-1R和/或胰高血糖素受体(GCGR)激动剂的疾病或状况的方法，该方法包括向该受试者施用一种或多种LC，其中所述一种或多种脂质缀合物(LC)包含(a)一个或多个脂质，该脂质选自甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺、脂肪胺和脂肪醇，及其衍生物；和(b)治疗剂(TA)，其中该TA为肽，并且所述一个或多个脂质经由该肽上的氨基酸残基与该TA附接。该TA可包括GLP-1、毒蜥外泌肽-4、艾塞那肽、泌酸调节肽、胰高血糖素，或其衍生物。该GLP-1可以是人GLP-1。所述疾病或状况可以是代谢性疾病或病症。所述疾病或状况可以是糖尿病。所述疾病或状况可以是肥胖症。受益于GLP-1R和/或GCGR激动剂的其它疾病和/或状况包括但不限于血脂异常、心血管疾病和脂肪肝疾病。
本文提供了预防或治疗有需要的受试者中受益于GLP-1R和/或胰高血糖素受体(GCGR)激动剂的疾病或状况的方法，该方法包括向该受试者施用一种或多种以下式(Ia)的脂质缀合物(LC)：TA-A1-P1-L，其中TA为治疗剂；A1为连接TA和P1的化学基团；P1为键或-PEG-A2-；PEG为包含一个或多个聚乙二醇亚单位的化学基团；A2为连接PEG和L的化学基团；并且L为脂质。所述一个或多个脂质可以包括一种或多种甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺和脂肪醇。所述一个或多个脂质可以包括一种或多种甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺和脂肪醇。所述TA可包括GLP-1、毒蜥外泌肽-4、艾塞那肽、泌酸调节肽、胰高血糖素，或其衍生物。该GLP-1可以是人GLP-1。所述疾病或状况可以是代谢性疾病或病症。所述疾病或状况可以是糖尿病。所述疾病或状况可以是肥胖症。受益于GLP-1R和/或GCGR激动剂的其它疾病和/或状况包括但不限于血脂异常、心血管疾病和脂肪肝疾病。
本文提供了预防或治疗有需要的受试者中受益于GLP-1R和/或胰高血糖素受体(GCGR)激动剂的疾病或状况的方法，该方法包括向该受试者施用一种或多种以下式(I)的脂质缀合物(LC)：TA-A1-P1-L，其中TA为治疗剂；A1为连接TA和P1或L的化学基团；P1为键或包含聚二醇；并且L为脂质。所述一个或多个脂质可以包括一种或多种甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺和脂肪醇，或其衍生物。所述一个或多个脂质可以包括一种或多种甾醇、甾醇衍生物、胆汁酸、维生素E衍生物、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酰胺或脂肪醇，或其衍生物。所述TA可包括GLP-1、毒蜥外泌肽-4、艾塞那肽、泌酸调节肽、胰高血糖素，或其衍生物。该GLP-1可以是人GLP-1。所述疾病或状况可以是代谢性疾病或病症。所述疾病或状况可以是糖尿病。所述疾病或状况可以是肥胖症。受益于GLP-1R和/或GCGR激动剂的其它疾病和/或状况包括但不限于血脂异常、心血管疾病和脂肪肝疾病。
本文进一步公开了用于治疗、缓解、抑制和/或预防一种或多种疾病和/或状况的mTA。所述疾病和/或状况可以是慢性疾病或状况。或者，所述疾病和/或状况可以是急性疾病或状况。所述疾病或状况可以是复发性的、难治性的、加速的或处于缓解期的。所述疾病或状况可影响一种或多种细胞类型。所述一种或多种疾病和/或状况可以是自身免疫性疾病、炎性疾病、心血管疾病和/或妊娠。所述修饰的治疗剂(mTA)可包含治疗剂和一个或多个半衰期延长部分，其中该治疗剂为肽，该肽经由该肽上的半胱氨酸残基与所述一个或多个半衰期延长部分中的每一个共价附接；并且所述修饰的治疗剂的半衰期长于单独该肽的半衰期。该mTA可包含两个或更多个半衰期延长部分。该两个或更多个半衰期延长部分可以是相同的。该两个或更多个半衰期延长部分可以是不同的。所述一个或多个半衰期延长部分中的每一个均可包含脂质、聚二醇区或其组合。所述一个或多个半衰期延长部分中的每一个均可包含脂质。所述一个或多个半衰期延长部分中的每一个均可包含聚二醇区。所述一个或多个半衰期延长部分中的每一个均可包含脂质和聚二醇区。所述一个或多个半衰期延长部分中的每一个均可包含延伸重组多肽(XTEN)，该延伸重组多肽包含(i)氨基酸序列，其特征为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)、亮氨酸(L)和脯氨酸(P)残基的总和构成总氨基酸序列的大于约70％；(ii)基本非重复的氨基酸序列；(iii)具有少于约10％的α螺旋的氨基酸序列；和/或(iv)具有少于约10％的β折叠的氨基酸序列。所述XTEN可包含这样的氨基酸序列，该氨基酸序列的特征为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)、亮氨酸(L)和脯氨酸(P)残基的总和构成总氨基酸序列的大于约75％、77％、80％、83％、85％、87％、90％、92％、95％、97％或99％。所述XTEN可包含这样的氨基酸序列，该氨基酸序列的特征为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)、亮氨酸(L)和脯氨酸(P)残基的总和构成总氨基酸序列的大于约75％、77％、80％、83％、85％、87％、90％、92％、95％、97％或99％。所述XTEN可包含选自SEQ ID NO:66-67的氨基酸序列。所述XTEN可包含与SEQ ID NO:66-67的氨基酸序列至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、83％、85％、87％、90％、93％、95％、97％或99％或更高同源的氨基酸序列。所述肽可包含一个或多个氨基酸添加、缺失或置换或其组合。所述肽可选自松弛素、H1松弛素、H2松弛素、H3松弛素、人INSL3、人INSL4、人INSL6、人IGF1、人IGFII、人胰岛素、泌酸调节肽、艾塞那肽、毒蜥外泌肽-4、胰高血糖素样蛋白-1(GLP-1)、GLP-2、胰高血糖素、GLP-1R和GIPR双重激动剂、GLP-1R和GCGR双重激动剂、瘦素、betatrophin、FGF 21、GDF 11、ANGPTL3、基于肽的毒素、Moka和VM-24，或其衍生物，该衍生物为包含一个或多个氨基酸添加、缺失或置换或其组合的肽。所述肽可选自松弛素、H1松弛素、H2松弛素、H3松弛素、人INSL3、人INSL4、人INSL6、人IGF1、人IGFII、人胰岛素、泌酸调节肽、艾塞那肽、毒蜥外泌肽-4、胰高血糖素样蛋白-1(GLP-1)、GLP-2、胰高血糖素、GLP-1R和GIPR双重激动剂、GLP-1R和GCGR双重激动剂、瘦素、betatrophin、FGF 21、GDF 11、ANGPTL3、基于肽的毒素、Moka和VM-24，或其衍生物，该衍生物为包含一个或多个氨基酸添加、缺失或置换或其组合的肽。所述肽可以是松弛素或其衍生物，该衍生物为包含一个或多个氨基酸添加、缺失或置换或其组合的肽。所述肽可由包含选自SEQ ID NO:10-56的多肽序列的至少一部分的氨基酸序列编码。所述肽可由包含基于或衍生自选自SEQ ID NO:10-56的多肽序列的10个或更多个氨基酸的氨基酸序列编码。所述肽可包含与选自SEQ ID NO:10-56的氨基酸序列至少约50％同源的氨基酸序列。所述肽可包含与选自SEQ ID NO:10-56的氨基酸序列至少80％同源的氨基酸序列。所述肽可包含一个或多个选自SEQ ID NO:10-56的氨基酸序列。所述肽可包含两个或更多个选自SEQ ID NO:10-56的氨基酸序列。所述肽可进一步包含接头。所述半胱氨酸残基可位于肽的N-末端或C-末端上。所述半胱氨酸残基可位于肽的非末端位置上。所述半胱氨酸残基可以是肽上的氨基酸添加或置换。可向有需要的受试者施用本文公开的mTA。该mTA可以是XTEN-mTA。该mTA可以是LC。
本文公开了治疗有需要的受试者的疾病或状况的方法，该方法包括向该受试者施用包含mTA的组合物，其中该mTA包括与治疗剂附接的半衰期延长部分，其中该治疗剂为松弛素或其衍生物。所述XTEN可以包含这样的氨基酸序列，其特征为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)、亮氨酸(L)和脯氨酸(P)残基的总和构成总氨基酸序列的大于约75％、77％、80％、83％、85％、87％、90％、92％、95％、97％或99％。所述XTEN可包含选自SEQ ID NO:66-67的氨基酸序列。所述XTEN可包含与SEQ ID NO:66-67的氨基酸序列至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、83％、85％、87％、90％、93％、95％、97％或99％或更高同源的氨基酸序列。所述治疗剂可进一步包含接头。所述疾病或状况可以是心血管疾病。该心血管疾病可以是急性心力衰竭。其它心血管疾病包括但不限于充血性心力衰竭、代偿性心力衰竭或失代偿性心力衰竭。所述疾病或状况可以是自身免疫性病症。该自身免疫性病症可以是硬皮病、弥漫性硬皮病或系统性硬皮病。所述疾病或状况可以是炎性疾病。该炎性疾病可以是纤维肌痛。所述疾病或状况可以是纤维化。或者，所述疾病或状况可以是妊娠。所述mTA可用于治疗先兆子痫或诱发分娩。所述mTA可以与一种或多种附加治疗剂一起施用。所述附加治疗剂可包括抗炎药、他汀类药物、利尿剂、β-阻断剂、血管紧张素转化酶抑制剂和血管紧张素II受体阻断剂中的一种或多种。所述附加治疗剂可以是阿司匹林。所述mTA可以是XTEN-mTA。
本文进一步公开了用于治疗有需要的受试者的疾病或状况的方法，该方法包括向该受试者施用一种或多种mTA，其中所述一种或多种修饰的治疗剂(mTA)包含(a)一个或多个半衰期延长部分，该半衰期延长部分包含延伸重组多肽(XTEN)，该延伸重组多肽包含(i)氨基酸序列，其特征为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)、亮氨酸(L)和脯氨酸(P)残基的总和构成总氨基酸序列的大于约70％；(ii)基本非重复的氨基酸序列；(iii)具有少于约10％的α螺旋的氨基酸序列；和/或(iv)具有少于约10％的β折叠的氨基酸序列；以及(b)治疗剂(TA)，其中所述一个或多个半衰期延长部分与所述一个或多个治疗剂中的至少一个半胱氨酸残基附接。所述TA可以包括松弛素。所述TA可包含接头。所述TA可以包括修饰的多肽。该修饰的多肽可以包括包含一个或多个突变的多肽。所述一个或多个突变可以是置换、缺失或插入。该修饰的肽可以包括与接头附接的多肽。所述疾病或状况可以是心血管疾病。该心血管疾病可以是急性心力衰竭。其它心血管疾病包括但不限于充血性心力衰竭、代偿性心力衰竭或失代偿性心力衰竭。所述疾病或状况可以是自身免疫性病症。该自身免疫性病症可以是硬皮病、弥漫性硬皮病或系统性硬皮病。所述疾病或状况可以是炎性疾病。该炎性疾病可以是纤维肌痛。所述疾病或状况可以是纤维化。或者，所述疾病或状况是妊娠。所述mTA可用于治疗先兆子痫或诱发分娩。所述mTA可以与一种或多种附加治疗剂一起施用。所述附加治疗剂可包括抗炎药、他汀类药物、利尿剂、β-阻断剂、血管紧张素转化酶抑制剂和血管紧张素II受体阻断剂中的一种或多种。所述附加治疗剂可以是阿司匹林。所述mTA可以是XTEN-mTA。
本文进一步公开了用于治疗有需要的受试者的疾病或状况的方法，该方法包括向该受试者施用一种或多种mTA，其中所述一种或多种修饰的治疗剂(mTA)包含(a)一个或多个半衰期延长部分，其中所述一个或多个半衰期延长部分包含延伸重组多肽(XTEN)，该延伸重组多肽包含(i)氨基酸序列，其特征为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)、亮氨酸(L)和脯氨酸(P)残基的总和构成总氨基酸序列的大于约70％；(ii)基本非重复的氨基酸序列；(iii)具有少于约10％的α螺旋的氨基酸序列；和/或(iv)具有少于约10％的β折叠的氨基酸序列；以及(b)治疗剂(TA)，其中TA为肽，并且所述一个或多个半衰期延长部分经由该肽上的氨基酸与该肽附接。所述XTEN可包含这样的氨基酸序列，该氨基酸序列的特征为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)、亮氨酸(L)和脯氨酸(P)残基的总和构成总氨基酸序列的大于约75％、77％、80％、83％、85％、87％、90％、92％、95％、97％或99％。所述XTEN可包含选自SEQ ID NO:66-67的氨基酸序列。所述XTEN可包含与SEQ ID NO:66-67的氨基酸序列至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、83％、85％、87％、90％、93％、95％、97％或99％或更高同源的氨基酸序列。所述TA可以包括松弛素。所述TA可进一步包含接头。所述疾病或状况可以是心血管疾病。该心血管疾病可以是急性心力衰竭。其它心血管疾病包括但不限于充血性心力衰竭、代偿性心力衰竭或失代偿性心力衰竭。所述疾病或状况可以是自身免疫性病症。该自身免疫性病症可以是硬皮病、弥漫性硬皮病或系统性硬皮病。所述疾病或状况可以是炎性疾病。该炎性疾病可以是纤维肌痛。所述疾病或状况可以是纤维化。或者，所述疾病或状况是妊娠。所述mTA可用于治疗先兆子痫或诱发分娩。所述mTA可以与一种或多种附加治疗剂一起施用。所述附加治疗剂可包括抗炎药、他汀类药物、利尿剂、β-阻断剂、血管紧张素转化酶抑制剂和血管紧张素II受体阻断剂中的一种或多种。所述附加治疗剂可以是阿司匹林。所述mTA可以是XTEN-mTA。
本文进一步公开了治疗有需要的受试者的疾病或状况的方法，该方法包括向该受试者施用一种或多种以下式(IIa)的修饰的治疗剂(mTA)：TA-A1-P1-X，其中TA为治疗剂；A1为连接TA和P1的化学基团；P1为键或-PEG-A2-；PEG为包含一个或多个聚乙二醇亚单位的化学基团；A2为连接PEG和X的化学基团；并且X为半衰期延长部分。该半衰期延长部分可以包含延伸重组多肽(XTEN)，该延伸重组多肽包含(i)氨基酸序列，其特征为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)、亮氨酸(L)和脯氨酸(P)残基的总和构成总氨基酸序列的大于约70％；(ii)基本非重复的氨基酸序列；(iii)具有少于约10％的α螺旋的氨基酸序列；和/或(iv)具有少于约10％的β折叠的氨基酸序列。所述XTEN可包含这样的氨基酸序列，该氨基酸序列的特征为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)、亮氨酸(L)和脯氨酸(P)残基的总和构成总氨基酸序列的大于约75％、77％、80％、83％、85％、87％、90％、92％、95％、97％或99％；并且P1为键。所述XTEN可包含选自SEQ ID NO:66-67的氨基酸序列。所述XTEN可包含与SEQ ID NO:66-67的氨基酸序列至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、83％、85％、87％、90％、93％、95％、97％或99％或更高同源的氨基酸序列。所述TA可以包括松弛素。所述TA可进一步包含接头。所述疾病或状况可以是心血管疾病。该心血管疾病可以是急性心力衰竭。其它心血管疾病包括但不限于充血性心力衰竭、代偿性心力衰竭或失代偿性心力衰竭。所述疾病或状况可以是自身免疫性病症。该自身免疫性病症可以是硬皮病、弥漫性硬皮病或系统性硬皮病。所述疾病或状况可以是炎性疾病。该炎性疾病可以是纤维肌痛。所述疾病或状况可以是纤维化。或者，所述疾病或状况是妊娠。所述mTA可用于治疗先兆子痫或诱发分娩。所述mTA可以与一种或多种附加治疗剂一起施用。所述附加治疗剂可包括抗炎药、他汀类药物、利尿剂、β-阻断剂、血管紧张素转化酶抑制剂和血管紧张素II受体阻断剂中的一种或多种。所述附加治疗剂可以是阿司匹林。
本文进一步公开了治疗有需要的受试者的疾病或状况的方法，该方法包括向该受试者施用一种或多种以下式(II)的修饰的治疗剂(mTA)：TA-A1-P1-X，其中TA为治疗剂；A1为连接TA和P1或X的化学基团；P1为键或包含聚二醇；并且X为半衰期延长部分。该半衰期延长部分可以包含延伸重组多肽(XTEN)，该延伸重组多肽包含(i)氨基酸序列，其特征为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)、亮氨酸(L)和脯氨酸(P)残基的总和构成总氨基酸序列的大于约70％；(ii)基本非重复的氨基酸序列；(iii)具有少于约10％的α螺旋的氨基酸序列；和/或(iv)具有少于约10％的β折叠的氨基酸序列。所述XTEN可包含这样的氨基酸序列，该氨基酸序列的特征为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)、亮氨酸(L)和脯氨酸(P)残基的总和构成总氨基酸序列的大于约75％、77％、80％、83％、85％、87％、90％、92％、95％、97％或99％；并且P1为键。所述XTEN可包含选自SEQ ID NO:66-67的氨基酸序列。所述XTEN可包含与SEQ ID NO:66-67的氨基酸序列至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、83％、85％、87％、90％、93％、95％、97％或99％或更高同源的氨基酸序列。所述TA可以包括松弛素。所述TA可进一步包含接头。所述疾病或状况可以是心血管疾病。该心血管疾病可以是急性心力衰竭。其它心血管疾病包括但不限于充血性心力衰竭、代偿性心力衰竭或失代偿性心力衰竭。所述疾病或状况可以是自身免疫性病症。该自身免疫性病症可以是硬皮病、弥漫性硬皮病或系统性硬皮病。所述疾病或状况可以是炎性疾病。该炎性疾病可以是纤维肌痛。所述疾病或状况可以是纤维化。或者，所述疾病或状况是妊娠。所述mTA可用于治疗先兆子痫或诱导分娩。所述mTA可以与一种或多种附加治疗剂一起施用。所述附加治疗剂可包括抗炎药、他汀类药物、利尿剂、β-阻断剂、血管紧张素转化酶抑制剂和血管紧张素II受体阻断剂中的一种或多种。所述附加治疗剂可以是阿司匹林。所述mTA可以是XTEN-mTA。
本文提供了预防或治疗有需要的受试者的代谢性疾病或状况的方法，该方法包括向该受试者施用一种或多种mTA，其中所述一种或多种修饰的治疗剂(mTA)包含(a)一个或多个半衰期延长部分，其中所述一个或多个半衰期延长部分包含延伸重组多肽(XTEN)，该延伸重组多肽包含(i)氨基酸序列，其特征为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)、亮氨酸(L)和脯氨酸(P)残基的总和构成总氨基酸序列的大于约70％；(ii)基本非重复的氨基酸序列；(iii)具有少于约10％的α螺旋的氨基酸序列；和/或(iv)具有少于约10％的β折叠的氨基酸序列；以及(b)一个或多个治疗剂(TA)，其中所述一个或多个半衰期延长部分与所述一个或多个治疗剂中的一个或多个半胱氨酸残基附接。所述XTEN可包含这样的氨基酸序列，该氨基酸序列的特征为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)、亮氨酸(L)和脯氨酸(P)残基的总和构成总氨基酸序列的大于约75％、77％、80％、83％、85％、87％、90％、92％、95％、97％或99％。所述XTEN可包含选自SEQ ID NO:66-67的氨基酸序列。所述XTEN可包含与SEQ ID NO:66-67的氨基酸序列至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、83％、85％、87％、90％、93％、95％、97％或99％或更高同源的氨基酸序列。所述一个或多个TA可包括GLP-1、毒蜥外泌肽-4、艾塞那肽、泌酸调节肽、胰高血糖素、FGF21，或其衍生物。该GLP-1可以是人GLP-1。该FGF21可以是人FGF21。所述一个或多个TA可进一步包含接头。所述代谢性疾病或状况可以是糖尿病。所述代谢性疾病或状况可以是糖原贮积病、苯丙酮尿症、枫糖尿病、1型戊二酸血症、氨甲酰磷酸合成酶I缺乏症、尿黑酸尿症、中链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(MCADD)、急性间歇性卟啉病、Lesch-Nyhan综合征、类脂先天性肾上腺增生症、先天性肾上腺增生症、Kearns-Sayre综合征、泽尔韦格综合征、高歇氏病或尼曼匹克病。所述mTA可以是XTEN-mTA。
本文提供了预防或治疗有需要的受试者的代谢性疾病或状况的方法，该方法包括向该受试者施用一种或多种mTA，其中所述一种或多种修饰的治疗剂(mTA)包含(a)一个或多个半衰期延长部分，其中所述一个或多个半衰期延长部分包含延伸重组多肽(XTEN)，该延伸重组多肽包含(i)氨基酸序列，其特征为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)、亮氨酸(L)和脯氨酸(P)残基的总和构成总氨基酸序列的大于约70％；(ii)基本非重复的氨基酸序列；(iii)具有少于约10％的α螺旋的氨基酸序列；和/或(iv)具有少于约10％的β折叠的氨基酸序列；以及(b)治疗剂(TA)，其中该TA为肽，并且所述一个或多个半衰期延长部分经由该肽上的氨基酸残基与该TA附接。所述XTEN可包含这样的氨基酸序列，该氨基酸序列的特征为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)、亮氨酸(L)和脯氨酸(P)残基的总和构成总氨基酸序列的大于约75％、77％、80％、83％、85％、87％、90％、92％、95％、97％或99％。所述XTEN可包含选自SEQID NO:66-67的氨基酸序列。所述XTEN可包含与SEQ ID NO:66-67的氨基酸序列至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、83％、85％、87％、90％、93％、95％、97％或99％或更高同源的氨基酸序列。所述肽可包括GLP-1、毒蜥外泌肽-4、艾塞那肽、泌酸调节肽、胰高血糖素、FGF21，或其衍生物。该GLP-1可以是人GLP-1。该FGF21可以是人FGF21。所述肽可进一步包含接头。所述代谢性疾病或状况可以是糖尿病。所述代谢性疾病或状况可以是糖原贮积病、苯丙酮尿症、枫糖尿病、1型戊二酸血症、氨甲酰磷酸合成酶I缺乏症、尿黑酸尿症、中链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(MCADD)、急性间歇性卟啉病、Lesch-Nyhan综合征、类脂先天性肾上腺增生症、先天性肾上腺增生症、Kearns-Sayre综合征、泽尔韦格综合征、高歇氏病或尼曼匹克病。所述mTA可以是XTEN-mTA。
本文提供了预防或治疗有需要的受试者的代谢性疾病或状况的方法，该方法包括向该受试者施用一种或多种以下式(IIa)的修饰的治疗剂(mTA)：TA-A1-P1-X，其中TA为治疗剂；A1为连接TA和P1的化学基团；P1为键或-PEG-A2-；PEG为包含一个或多个聚乙二醇亚单位的化学基团；A2为连接PEG和X的化学基团；并且X为半衰期延长部分。该半衰期延长部分可以包含延伸重组多肽(XTEN)，该延伸重组多肽包含(i)氨基酸序列，其特征为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)、亮氨酸(L)和脯氨酸(P)残基的总和构成总氨基酸序列的大于约70％；(ii)基本非重复的氨基酸序列；(iii)具有少于约10％的α螺旋的氨基酸序列；和/或(iv)具有少于约10％的β折叠的氨基酸序列；并且P1为键。所述TA可包括GLP-1、毒蜥外泌肽-4、艾塞那肽、泌酸调节肽、胰高血糖素、FGF21，或其衍生物。该GLP-1可以是人GLP-1。该FGF21可以是人FGF21。所述XTEN可包含这样的氨基酸序列，该氨基酸序列的特征为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)、亮氨酸(L)和脯氨酸(P)残基的总和构成总氨基酸序列的大于约75％、77％、80％、83％、85％、87％、90％、92％、95％、97％或99％。所述XTEN可包含选自SEQ ID NO:66-67的氨基酸序列。所述XTEN可包含与SEQ ID NO:66-67的氨基酸序列至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、83％、85％、87％、90％、93％、95％、97％或99％或更高同源的氨基酸序列。所述代谢性疾病或状况可以是糖尿病。所述代谢性疾病或状况可以是糖原贮积病、苯丙酮尿症、枫糖尿病、1型戊二酸血症、氨甲酰磷酸合成酶I缺乏症、尿黑酸尿症、中链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(MCADD)、急性间歇性卟啉病、Lesch-Nyhan综合征、类脂先天性肾上腺增生症、先天性肾上腺增生症、Kearns-Sayre综合征、泽尔韦格综合征、高歇氏病或尼曼匹克病。所述mTA可以是XTEN-mTA。
本文提供了预防或治疗有需要的受试者的代谢性疾病或状况的方法，该方法包括向该受试者施用一种或多种以下式(I)的修饰的治疗剂(mTA)：TA-A1-P1-X，其中TA为治疗剂；A1为连接TA和P1或X的化学基团；P1为键或包含聚二醇；并且X为半衰期延长部分。该半衰期延长部分包含延伸重组多肽(XTEN)，该延伸重组多肽包含(i)氨基酸序列，其特征为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)、亮氨酸(L)和脯氨酸(P)残基的总和构成总氨基酸序列的大于约70％；(ii)基本非重复的氨基酸序列；(iii)具有少于约10％的α螺旋的氨基酸序列；和/或(iv)具有少于约10％的β折叠的氨基酸序列。所述XTEN可包含这样的氨基酸序列，该氨基酸序列的特征为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)、亮氨酸(L)和脯氨酸(P)残基的总和构成总氨基酸序列的大于约75％、77％、80％、83％、85％、87％、90％、92％、95％、97％或99％。所述XTEN可包含选自SEQ ID NO:66-67的氨基酸序列。所述XTEN可包含与SEQ ID NO:66-67的氨基酸序列至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、83％、85％、87％、90％、93％、95％、97％或99％或更高同源的氨基酸序列。所述TA可包括GLP-1、毒蜥外泌肽-4、艾塞那肽、泌酸调节肽、胰高血糖素、FGF21，或其衍生物。该GLP-1可以是人GLP-1。该FGF21可以是人FGF21。所述代谢性疾病或状况可以是糖尿病。所述代谢性疾病或状况可以是糖原贮积病、苯丙酮尿症、枫糖尿病、1型戊二酸血症、氨甲酰磷酸合成酶I缺乏症、尿黑酸尿症、中链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(MCADD)、急性间歇性卟啉病、Lesch-Nyhan综合征、类脂先天性肾上腺增生症、先天性肾上腺增生症、Kearns-Sayre综合征、泽尔韦格综合征、高歇氏病或尼曼匹克病。所述mTA可以是XTEN-mTA。
本文提供了预防或治疗有需要的受试者的中枢神经系统(CNS)病症的方法，该方法包括向该受试者施用一种或多种mTA，其中所述一种或多种修饰的治疗剂(mTA)包含(a)一个或多个半衰期延长部分，其中所述一个或多个半衰期延长部分包含延伸重组多肽(XTEN)，该延伸重组多肽包含(i)氨基酸序列，其特征为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)、亮氨酸(L)和脯氨酸(P)残基的总和构成总氨基酸序列的大于约70％；(ii)基本非重复的氨基酸序列；(iii)具有少于约10％的α螺旋的氨基酸序列；和/或(iv)具有少于约10％的β折叠的氨基酸序列；以及(b)一个或多个治疗剂(TA)，其中所述一个或多个半衰期延长部分与所述一个或多个治疗剂中的至少一个半胱氨酸残基附接。所述XTEN可包含这样的氨基酸序列，该氨基酸序列的特征为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)、亮氨酸(L)和脯氨酸(P)残基的总和构成总氨基酸序列的大于约75％、77％、80％、83％、85％、87％、90％、92％、95％、97％或99％。所述XTEN可包含选自SEQ ID NO:66-67的氨基酸序列。所述XTEN可包含与SEQ ID NO:66-67的氨基酸序列至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、83％、85％、87％、90％、93％、95％、97％或99％或更高同源的氨基酸序列。所述一个或多个TA可包括GLP-1、毒蜥外泌肽-4、艾塞那肽、泌酸调节肽、胰高血糖素，或其衍生物。该GLP-1可以是人GLP-1。所述CNS病症可以是阿尔茨海默病(AD)。其它CNS病症包括但不限于脑炎、脑膜炎、热带痉挛性轻截瘫、蛛网膜囊肿、亨廷顿病、闭锁综合征、帕金森病、妥瑞症(Tourette's)和多发性硬化。所述mTA可以是XTEN-mTA。
本文提供了预防或治疗有需要的受试者的中枢神经系统(CNS)病症的方法，该方法包括向该受试者施用一种或多种mTA，其中所述一种或多种修饰的治疗剂(mTA)包含(a)一个或多个半衰期延长部分，其中所述一个或多个半衰期延长部分包含延伸重组多肽(XTEN)，该延伸重组多肽包含(i)氨基酸序列，其特征为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)、亮氨酸(L)和脯氨酸(P)残基的总和构成总氨基酸序列的大于约70％；(ii)基本非重复的氨基酸序列；(iii)具有少于约10％的α螺旋的氨基酸序列；和/或(iv)具有少于约10％的β折叠的氨基酸序列；以及(b)治疗剂(TA)，其中该TA为肽，并且所述一个或多个半衰期延长部分经由该肽上的氨基酸残基与该TA附接。所述XTEN可包含这样的氨基酸序列，该氨基酸序列的特征为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)、亮氨酸(L)和脯氨酸(P)残基的总和构成总氨基酸序列的大于约75％、77％、80％、83％、85％、87％、90％、92％、95％、97％或99％。所述XTEN可包含选自SEQ ID NO:66-67的氨基酸序列。所述XTEN可包含与SEQ ID NO:66-67的氨基酸序列至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、83％、85％、87％、90％、93％、95％、97％或99％或更高同源的氨基酸序列。所述TA可包括GLP-1、毒蜥外泌肽-4、艾塞那肽、泌酸调节肽、胰高血糖素，或其衍生物。该GLP-1可以是人GLP-1。所述CNS病症可以是阿尔茨海默病(AD)。其它CNS病症包括但不限于脑炎、脑膜炎、热带痉挛性轻截瘫、蛛网膜囊肿、亨廷顿病、闭锁综合征、帕金森病、妥瑞症(Tourette's)和多发性硬化。所述mTA可以是XTEN-mTA。
本文提供了预防或治疗有需要的受试者的中枢神经系统(CNS)病症的方法，该方法包括向该受试者施用一种或多种以下式(IIa)的修饰的治疗剂(mTA)：TA-A1-P1-X，其中TA为治疗剂；A1为连接TA和P1的化学基团；P1为键或-PEG-A2-；PEG为包含一个或多个聚乙二醇亚单位的化学基团；A2为连接PEG和X的化学基团；并且X为半衰期延长部分。该半衰期延长部分可以包含延伸重组多肽(XTEN)，该延伸重组多肽包含(i)氨基酸序列，其特征为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)、亮氨酸(L)和脯氨酸(P)残基的总和构成总氨基酸序列的大于约70％；(ii)基本非重复的氨基酸序列；(iii)具有少于约10％的α螺旋的氨基酸序列；和/或(iv)具有少于约10％的β折叠的氨基酸序列。所述XTEN可包含这样的氨基酸序列，该氨基酸序列的特征为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)、亮氨酸(L)和脯氨酸(P)残基的总和构成总氨基酸序列的大于约75％、77％、80％、83％、85％、87％、90％、92％、95％、97％或99％；并且P1为键。所述XTEN可包含选自SEQ ID NO:66-67的氨基酸序列。所述XTEN可包含与SEQ ID NO:66-67的氨基酸序列至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、83％、85％、87％、90％、93％、95％、97％或99％或更高同源的氨基酸序列。所述TA可包括GLP-1、毒蜥外泌肽-4、艾塞那肽、泌酸调节肽、胰高血糖素，或其衍生物。该GLP-1可以是人GLP-1。所述CNS病症可以是阿尔茨海默病(AD)。其它CNS病症包括但不限于脑炎、脑膜炎、热带痉挛性轻截瘫、蛛网膜囊肿、亨廷顿病、闭锁综合征、帕金森病、妥瑞症(Tourette's)和多发性硬化。所述mTA可以是XTEN-mTA。
本文提供了预防或治疗有需要的受试者的中枢神经系统(CNS)病症的方法，该方法包括向该受试者施用一种或多种以下式(II)的修饰的治疗剂(mTA)：TA-A1-P1-X，其中TA为治疗剂；A1为连接TA和P1或X的化学基团；P1为键或包含聚二醇；并且X为半衰期延长部分。该半衰期延长部分可包含延伸重组多肽(XTEN)，该延伸重组多肽包含(i)氨基酸序列，其特征为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)、亮氨酸(L)和脯氨酸(P)残基的总和构成总氨基酸序列的大于约70％；(ii)基本非重复的氨基酸序列；(iii)具有少于约10％的α螺旋的氨基酸序列；和/或(iv)具有少于约10％的β折叠的氨基酸序列。所述XTEN可包含这样的氨基酸序列，该氨基酸序列的特征为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)、亮氨酸(L)和脯氨酸(P)残基的总和构成总氨基酸序列的大于约75％、77％、80％、83％、85％、87％、90％、92％、95％、97％或99％；并且P1为键。所述XTEN可包含选自SEQ ID NO:66-67的氨基酸序列。所述XTEN可包含与SEQID NO:66-67的氨基酸序列至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、83％、85％、87％、90％、93％、95％、97％或99％或更高同源的氨基酸序列。所述TA可包括GLP-1、毒蜥外泌肽-4、艾塞那肽、泌酸调节肽、胰高血糖素，或其衍生物。该GLP-1可以是人GLP-1。所述CNS病症可以是阿尔茨海默病(AD)。其它CNS病症包括但不限于脑炎、脑膜炎、热带痉挛性轻截瘫、蛛网膜囊肿、亨廷顿病、闭锁综合征、帕金森病、妥瑞症(Tourette's)和多发性硬化。所述mTA可以是XTEN-mTA。
本文提供了预防或治疗有需要的受试者中受益于GLP-1R和/或胰高血糖素受体(GCGR)激动剂的疾病或状况的方法，该方法包括向该受试者施用一种或多种mTA，其中所述一种或多种修饰的治疗剂(mTA)包含(a)一个或多个半衰期延长部分，其中所述一个或多个半衰期延长部分包含延伸重组多肽(XTEN)，该延伸重组多肽包含(i)氨基酸序列，其特征为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)、亮氨酸(L)和脯氨酸(P)残基的总和构成总氨基酸序列的大于约70％；(ii)基本非重复的氨基酸序列；(iii)具有少于约10％的α螺旋的氨基酸序列；和/或(iv)具有少于约10％的β折叠的氨基酸序列；以及(b)一个或多个治疗剂(TA)，其中所述一个或多个半衰期延长部分与所述一个或多个治疗剂中的至少一个半胱氨酸残基附接。所述XTEN可包含这样的氨基酸序列，该氨基酸序列的特征为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)、亮氨酸(L)和脯氨酸(P)残基的总和构成总氨基酸序列的大于约75％、77％、80％、83％、85％、87％、90％、92％、95％、97％或99％。所述XTEN可包含选自SEQ ID NO:66-67的氨基酸序列。所述XTEN可包含与SEQ ID NO:66-67的氨基酸序列至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、83％、85％、87％、90％、93％、95％、97％或99％或更高同源的氨基酸序列。所述一个或多个TA可包括GLP-1、毒蜥外泌肽-4、艾塞那肽、泌酸调节肽、胰高血糖素，或其衍生物。该GLP-1可以是人GLP-1。所述疾病或状况可以是代谢性疾病或病症。所述疾病或状况可以是糖尿病。所述疾病或状况可以是肥胖症。受益于GLP-1R和/或GCGR激动剂的其它疾病和/或状况包括但不限于血脂异常、心血管疾病和脂肪肝疾病。所述mTA可以是XTEN-mTA。
本文提供了预防或治疗有需要的受试者中受益于GLP-1R和/或胰高血糖素受体(GCGR)激动剂的疾病或状况的方法，该方法包括向该受试者施用一种或多种mTA，其中所述一种或多种修饰的治疗剂(mTA)包含(a)一个或多个半衰期延长部分，其中所述一个或多个半衰期延长部分包含延伸重组多肽(XTEN)，该延伸重组多肽包含(i)氨基酸序列，其特征为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)、亮氨酸(L)和脯氨酸(P)残基的总和构成总氨基酸序列的大于约70％；(ii)基本非重复的氨基酸序列；(iii)具有少于约10％的α螺旋的氨基酸序列；和/或(iv)具有少于约10％的β折叠的氨基酸序列；以及(b)治疗剂(TA)，其中该TA为肽，并且所述一个或多个半衰期延长部分经由该肽上的氨基酸残基与该TA附接。所述XTEN可包含这样的氨基酸序列，该氨基酸序列的特征为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)、亮氨酸(L)和脯氨酸(P)残基的总和构成总氨基酸序列的大于约75％、77％、80％、83％、85％、87％、90％、92％、95％、97％或99％。所述XTEN可包含选自SEQ ID NO:66-67的氨基酸序列。所述XTEN可包含与SEQ ID NO:66-67的氨基酸序列至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、83％、85％、87％、90％、93％、95％、97％或99％或更高同源的氨基酸序列。所述TA可包括GLP-1、毒蜥外泌肽-4、艾塞那肽、泌酸调节肽、胰高血糖素，或其衍生物。该GLP-1可以是人GLP-1。所述疾病或状况可以是代谢性疾病或病症。所述疾病或状况可以是糖尿病。所述疾病或状况可以是肥胖症。受益于GLP-1R和/或GCGR激动剂的其它疾病和/或状况包括但不限于血脂异常、心血管疾病和脂肪肝疾病。所述mTA可以是XTEN-mTA。
本文提供了预防或治疗有需要的受试者中受益于GLP-1R和/或胰高血糖素受体(GCGR)激动剂的疾病或状况的方法，该方法包括向该受试者施用一种或多种以下式(IIa)的修饰的治疗剂(mTA)：TA-A1-P1-X，其中TA为治疗剂；A1为连接TA和P1的化学基团；P1为键或-PEG-A2-；PEG为包含一个或多个聚乙二醇亚单位的化学基团；A2为连接PEG和X的化学基团；并且X为半衰期延长部分。该半衰期延长部分可以包含延伸重组多肽(XTEN)，该延伸重组多肽包含(i)氨基酸序列，其特征为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)、亮氨酸(L)和脯氨酸(P)残基的总和构成总氨基酸序列的大于约70％；(ii)基本非重复的氨基酸序列；(iii)具有少于约10％的α螺旋的氨基酸序列；和/或(iv)具有少于约10％的β折叠的氨基酸序列。所述XTEN可包含这样的氨基酸序列，该氨基酸序列的特征为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)、亮氨酸(L)和脯氨酸(P)残基的总和构成总氨基酸序列的大于约75％、77％、80％、83％、85％、87％、90％、92％、95％、97％或99％；并且P1为键。所述XTEN可包含选自SEQ ID NO:66-67的氨基酸序列。所述XTEN可包含与SEQ ID NO:66-67的氨基酸序列至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、83％、85％、87％、90％、93％、95％、97％或99％或更高同源的氨基酸序列。所述TA可包括GLP-1、毒蜥外泌肽-4、艾塞那肽、泌酸调节肽、胰高血糖素，或其衍生物。该GLP-1可以是人GLP-1。所述疾病或状况可以是代谢性疾病或病症。所述疾病或状况可以是糖尿病。所述疾病或状况可以是肥胖症。受益于GLP-1R和/或GCGR激动剂的其它疾病和/或状况包括但不限于血脂异常、心血管疾病和脂肪肝疾病。所述mTA可以是XTEN-mTA。
本文提供了预防或治疗有需要的受试者中受益于GLP-1R和/或胰高血糖素受体(GCGR)激动剂的疾病或状况的方法，该方法包括向该受试者施用一种或多种以下式(I)的修饰的治疗剂(mTA)：TA-A1-P1-X，其中TA为治疗剂；A1为连接TA和P1或X的化学基团；P1为键或包含聚二醇；并且X为半衰期延长部分。该半衰期延长部分可包含延伸重组多肽(XTEN)，该延伸重组多肽包含(i)氨基酸序列，其特征为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)、亮氨酸(L)和脯氨酸(P)残基的总和构成总氨基酸序列的大于约70％；(ii)基本非重复的氨基酸序列；(iii)具有少于约10％的α螺旋的氨基酸序列；和/或(iv)具有少于约10％的β折叠的氨基酸序列。所述XTEN可包含这样的氨基酸序列，该氨基酸序列的特征为甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)、亮氨酸(L)和脯氨酸(P)残基的总和构成总氨基酸序列的大于约75％、77％、80％、83％、85％、87％、90％、92％、95％、97％或99％。所述XTEN可包含选自SEQ ID NO:66-67的氨基酸序列。所述XTEN可包含与SEQ ID NO:66-67的氨基酸序列至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、83％、85％、87％、90％、93％、95％、97％或99％或更高同源的氨基酸序列。所述TA可包括GLP-1、毒蜥外泌肽-4、艾塞那肽、泌酸调节肽、胰高血糖素，或其衍生物。该GLP-1可以是人GLP-1。所述疾病或状况可以是代谢性疾病或病症。所述疾病或状况可以是糖尿病。所述疾病或状况可以是肥胖症。受益于GLP-1R和/或GCGR激动剂的其它疾病和/或状况包括但不限于血脂异常、心血管疾病和脂肪肝疾病。所述mTA可以是XTEN-mTA。
本文进一步公开了用于治疗、缓解、抑制和/或预防一种或多种疾病和/或状况的XTEN-mTA。所述疾病和/或状况可以是慢性疾病或状况。或者，所述疾病和/或状况可以是急性疾病或状况。所述疾病或状况可以是复发性的、难治性的、加速的或处于缓解期的。所述疾病或状况可影响一种或多种细胞类型。所述一种或多种疾病和/或状况可以是自身免疫性疾病、炎性疾病、心血管疾病和妊娠。可向有需要的受试者施用本文公开的XTEN-mTA。
组合物
本文公开了包含本文公开的修饰的治疗剂的药物组合物。该组合物可包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10种或更多种修饰的治疗剂。所述修饰的治疗剂可以是不同的。或者，所述修饰的治疗剂可以是相同的或相似的。所述修饰的治疗剂可包括不同的治疗剂、不同的半衰期延长部分或其组合。所述半衰期延长部分可以是相同的或相似的。
本文进一步公开了包含本文公开的LC的药物组合物。所述组合物可包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10种或更多种LC。所述LC可以是不同的。或者，所述LC可以是相同的或相似的。所述LC可包含不同的治疗剂、不同的脂质或其组合。所述脂质可以是相同的或相似的。
本文所述的组合物可进一步包含一种或多种药学上可接受的盐、赋形剂或载体。用于本发明药物组合物中的药学上可接受的盐、赋形剂或载体包括媒介物、赋形剂、稀释剂、抗氧化剂、防腐剂、着色剂、调味剂和稀释剂、乳化剂、悬浮剂、溶剂、填充剂、膨胀剂、缓冲液、递送载体、张度剂、共溶剂、润湿剂、络合剂、缓冲剂、抗微生物剂和表面活性剂。
中性缓冲盐水或混有血清白蛋白的盐水是示例性的合适的载体。药物组合物可以包含抗氧化剂如抗坏血酸；低分子量多肽；蛋白质，如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂如EDTA；糖醇如甘露糖醇或山梨糖醇；成盐平衡离子如钠；和/或非离子型表面活性剂如吐温(Tween)、普朗尼克(pluronics)或聚乙二醇(PEG)。还举例来说，合适的张度增强剂包括碱金属卤化物(优选氯化钠或氯化钾)、甘露糖醇、山梨糖醇等。合适的防腐剂包括苯扎氯铵、硫柳汞、苯乙醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、氯己定、山梨酸等。过氧化氢也可以用作防腐剂。合适的共溶剂包括甘油、丙二醇和PEG。合适的络合剂包括咖啡因、聚乙烯吡咯烷酮、β-环糊精或羟基-丙基-β-环糊精。合适的表面活性剂或润湿剂包括失水山梨醇酯、聚山梨醇酯如聚山梨醇酯80、氨基丁三醇、卵磷脂、胆固醇、四丁酚醛(tyloxapal)等。缓冲液可以是常规缓冲液如乙酸盐、硼酸盐、柠檬酸盐、磷酸盐、碳酸氢盐或Tris-HCl。乙酸盐缓冲液可以是大约pH4-5.5，而Tris缓冲液可以是大约pH 7-8.5。另外的药剂在Remington's PharmaceuticalSciences,18th Edition,A.R.Gennaro,ed.,Mack Publishing Company,1990中阐述。
所述组合物可以是液体形式或是冻干或冷冻干燥形式，并可以包含一种或多种冻干保护剂、赋形剂、表面活性剂、高分子量结构添加剂和/或膨胀剂(参见，例如，美国专利6,685,940、6,566,329和6,372,716)。在一个实施方案中，包含冻干保护剂，其为非还原糖如蔗糖、乳糖或海藻糖。通常包含的冻干保护剂的量使得，经重建，所得制剂将是等渗的，尽管高渗或略微低渗的制剂也可能是合适的。此外，冻干保护剂的量应足以防止蛋白质在冻干时不可接受的程度的降解和/或聚集。预冻干制剂中的糖(例如，蔗糖、乳糖、海藻糖)的示例性冻干保护剂浓度为大约10mM至大约400mM。在另一个实施方案中，包含表面活性剂，例如，非离子型表面活性剂和离子型表面活性剂如聚山梨醇酯(例如，聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80)；泊洛沙姆(例如，泊洛沙姆188)；聚(乙二醇)苯基醚(例如，Triton)；十二烷基硫酸钠(SDS)；月桂基硫酸钠；辛基糖苷钠(sodium octyl glycoside)；月桂基-、肉豆蔻基-、亚油基-或硬脂基-磺基甜菜碱；月桂基-、肉豆蔻基-、亚油基-或硬脂基-肌氨酸；亚油基-、肉豆蔻基-或鲸蜡基-甜菜碱；月桂酰胺丙基-、椰油酰胺丙基(cocamidopropyl)-、亚油酰胺丙基-、肉豆蔻酰胺丙基-、棕榈酰胺丙基-或异硬脂酰胺丙基-甜菜碱(例如，月桂酰胺丙基)；肉豆蔻酰胺丙基-、棕榈酰胺丙基-或异硬脂酰胺丙基-二甲基胺；甲基椰油基牛磺酸钠或甲基油酰基(ofeyl)牛磺酸二钠；和MONAQUATTM系列(Mona Industries,Inc.,Paterson,N.J.)、聚乙二醇、聚丙二醇，和乙二醇和丙二醇的共聚物(例如，普朗尼克(Pluronics)、PF68等)。可以存在于预冻干制剂中的表面活性剂的示例量为大约0.001-0.5％。高分子量结构添加剂(例如，填充剂、粘合剂)可以包括，例如，阿拉伯胶、白蛋白、藻酸、磷酸钙(二碱式)、纤维素、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、微晶纤维素、葡聚糖、糊精、葡萄糖结合剂、蔗糖、侵填体(tylose)、预胶化淀粉、硫酸钙、直链淀粉、甘氨酸、膨润土、麦芽糖、山梨糖醇、乙基纤维素、磷酸氢二钠、磷酸二钠、焦亚硫酸二钠、聚乙烯醇、明胶、葡萄糖、瓜尔胶、液体葡萄糖、可压缩糖、硅酸镁铝、麦芽糖糊精、聚环氧乙烷、聚甲基丙烯酸酯、聚维酮、藻酸钠、黄蓍胶、微晶纤维素、淀粉和玉米醇溶蛋白。高分子量结构添加剂的示例浓度为0.1重量％至10重量％。在其它实施方案中，可以包含膨胀剂(例如，甘露糖醇、甘氨酸)。
组合物可以适合于肠胃外给药。示例性组合物适合于通过技术人员可用的任何途径注射或输注到动物中，该途径例如是关节内、皮下、静脉内、肌肉内、腹膜内、脑内(脑实质内)、脑室内、肌肉内、眼内、动脉内或病灶内途径。肠胃外制剂通常可以是无菌的、无热原的、等渗的水溶液，任选地含有药学上可接受的防腐剂。
非水性溶剂的实例是丙二醇、聚乙二醇、植物油如橄榄油和可注射有机酯如油酸乙酯。水性载体包括水、醇溶液/水溶液、乳液或悬浮液，包括盐水和缓冲的介质。肠胃外载体包括氯化钠溶液、林格氏(Ringers’)右旋糖、右旋糖和氯化钠、乳酸林格氏液或不挥发油。静脉内载体包括流体和营养补充剂、电解质补充剂，例如基于林格氏右旋糖的那些，等等。还可以存在防腐剂和其它添加剂，例如抗微生物剂、抗氧化剂、螯合剂、惰性气体等。总体上参见Remington's Pharmaceutical Science,16th Ed.,Mack Eds.,1980。
本文描述的药物组合物可以以提供产品的局部浓度(例如，团注、贮库型(depot)效果)和/或提高在特定局部环境中的稳定性或半衰期的方式配制用于控制的或持续的递送。该组合物可以包括以下成分的制剂：本文公开的LC、多肽、核酸或载体，与诸如聚乳酸、聚乙醇酸等聚合化合物的颗粒制品，以及诸如可生物降解的基质、可注射微球、微囊颗粒、微囊、可生物蚀解的颗粒珠、脂质体等试剂，和提供活性剂的控制或持续释放的可植入递送装置，其随后可以作为贮库型注射剂递送。用于配制此类持续或控制递送装置的技术是已知的，并且已经开发和使用了多种聚合物用于药物的控制释放和递送。这类聚合物一般是可生物降解的和生物相容的。聚合物水凝胶，包括通过对映体聚合物或多肽片段的复合而形成的聚合物水凝胶，以及具有温度或pH敏感性质的水凝胶，由于参与捕获生物活性蛋白剂(例如，包含超长CDR3的抗体)的温和和水性条件，可以是提供药物贮库型效果所期望的。参见，例如，WO93/15722中用于递送药物组合物的控制释放多孔聚合物微粒的描述。
用于此目的的合适的材料包括聚交酯(参见，例如美国专利3,773,919)，聚-(a-羟基羧酸)的聚合物，如聚-D-(-)-3-羟基丁酸(EP133,988A)、L-谷氨酸和γ乙基-L-谷氨酸酯的共聚物(Sidman等人,Biopolymers,22:547-556(1983))、聚(2-羟乙基-甲基丙烯酸酯)(Langer等人,J.Biomed.Mater.Res.,15:167-277(1981)，和Langer,Chem.Tech.,12:98-105(1982))、乙烯乙酸乙烯酯或聚-D(-)-3-羟基丁酸。其它可生物降解的聚合物包括聚(内酯)、聚(缩醛)、聚(原酸酯)和聚(原碳酸酯)。持续释放组合物还可以包含脂质体，其可以通过本领域已知的若干种方法中的任一种(参见，例如，Eppstein等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,82:3688-92(1985))制备。载体本身或其降解产物在靶组织内应是无毒的并且不应进一步加剧病状。这可以在目标病症的动物模型中，或者如果此类模型无法获得，则在正常动物中，通过常规筛查来确定。
用于持续释放的重组蛋白的微囊化已经使用人生长激素(rhGH)、干扰素-(rhIFN-)、白细胞介素-2和MN rgp120成功地进行。Johnson等人,Nat.Med.,2:795-799(1996)；Yasuda,Biomed.Ther.,27:1221-1223(1993)；Hora等人,Bio/Technology.8:755-758(1990)；Cleland,"Design and Production of Single Immunization VaccinesUsing Polylactide Polyglycolide Microsphere Systems,"in Vaccine Design:TheSubunit and Adjuvant Approach,Powell and Newman,eds,(Plenum Press:New York,1995),pp.439-462；WO 97/03692，WO 96/40072，WO 96/07399；和美国专利5,654,010。由于其生物相容性和宽范围的可生物降解性质，使用聚-乳酸-共-乙醇酸(PLGA)聚合物开发这些蛋白质的持续释放制剂。PLGA的降解产物乳酸和乙醇酸可以在人体内快速清除。而且，此聚合物的可降解性可以取决于其分子量和组成。Lewis,"Controlled release ofbioactive agents from lactide/glycolide polymer,"in:M.Chasin and R.Langer(Eds.),Biodegradable Polymers as Drug Delivery Systems(Marcel Dekker:NewYork,1990),pp.1-41。持续释放组合物的其它实例包括，例如，EP 58,481A，美国专利3,887,699，EP 158,277A，加拿大专利1176565，U.Sidman等人,Biopolymers 22,547[1983]，R.Langer等人,Chem.Tech.12,98[1982]，Sinha等人,J.Control.Release 90,261[2003]，Zhu等人,Nat.Biotechnol.18,24[2000]，和Dai等人,Colloids Surf B Biointerfaces41,117[2005]。
也考虑生物粘附性聚合物用于本公开内容的组合物中或与本公开内容的组合物一起使用。生物粘附性材料是能够附着到生物基底上保持延长的时间段的合成的和天然存在的材料。例如，卡波姆(Carbopol)和聚卡波非都是聚(丙烯酸)的合成交联衍生物。基于天然存在的物质的生物粘附性递送系统包括例如透明质酸，也称为乙酰透明质酸(hyaluronan)。透明质酸是由D-葡糖醛酸和N-乙酰基-葡糖胺的残基组成的天然存在的粘多糖。透明质酸见于脊椎动物的细胞外组织基质中，包括结缔组织中，以及滑液中和眼的玻璃体液和房水中。透明质酸的酯化衍生物已经用于生产用于递送的生物相容和可生物降解的微球(参见，例如，Cortivo等人,Biomaterials(1991)12:727-730；EP 517,565；WO 96/29998；Illum等人,J.Controlled Rel.(1994)29:133-141)。
可生物降解和不可生物降解的聚合物基质均可用于递送本公开内容的组合物，并且这些聚合物基质可以包含天然或合成聚合物。可生物降解的基质是优选的。释放发生所经过的时间段取决于聚合物的选择。通常，经过数小时至3到12个月的时间段的释放是最理想的。可以用于形成可生物降解的递送系统的示例性合成聚合物包括：乳酸和乙醇酸的聚合物、聚酰胺、聚碳酸酯、聚亚烷基、聚亚烷基二醇、聚环氧烷、聚对苯二甲酸亚烷基酯、聚乙烯醇、聚乙烯基醚、聚乙烯基酯、聚乙烯基卤化物、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙交酯、聚硅氧烷、聚酐、聚氨酯及其共聚物、聚(丁酸)、聚(戊酸)、烷基纤维素、羟烷基纤维素、纤维素醚、纤维素酯、硝基纤维素、丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯的聚合物、甲基纤维素、乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟丁基甲基纤维素、乙酸纤维素、丙酸纤维素、乙酸丁酸纤维素、乙酸邻苯二甲酸纤维素、羧乙基纤维素、三乙酸纤维素、硫酸纤维素钠盐、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(甲基丙烯酸乙酯)、聚(甲基丙烯酸丁酯)、聚(甲基丙烯酸异丁酯)、聚(甲基丙烯酸己酯)、聚(甲基丙烯酸异癸酯)、聚(甲基丙烯酸月桂酯)、聚(甲基丙烯酸苯酯)、聚(丙烯酸甲酯)、聚(丙烯酸异丙酯)、聚(丙烯酸异丁酯)、聚(丙烯酸十八烷基酯)、聚乙烯、聚丙烯、聚(乙二醇)、聚(环氧乙烷)、聚(对苯二甲酸乙二醇酯)、聚(乙烯醇)、聚乙酸乙烯酯、聚氯乙烯、聚苯乙烯和聚乙烯吡咯烷酮。示例性天然聚合物包括藻酸盐和其它多糖，包括葡聚糖和纤维素、胶原、其化学衍生物(化学基团如烷基、亚烷基的取代、添加，羟基化，氧化，和本领域技术人员常规进行的其它修饰)、白蛋白和其它亲水性蛋白质、玉米醇溶蛋白和其它谷醇溶蛋白和疏水性蛋白质、其共聚物和混合物。通常，这些材料通过酶水解或在体内暴露于水，通过表面或本体溶蚀而降解。聚合物任选地是水凝胶的形式(参见，例如WO 04/009664，WO 05/087201，Sawhney等人,Macromolecules,1993,26,581-587)，该水凝胶可以吸收高达其在水中的重量的大约90％，并进一步任选地与多价离子或其它聚合物交联。
递送系统还包括是脂质的非聚合物体系，该脂质包括甾醇如胆固醇、胆固醇酯和脂肪酸或中性脂肪如甘油单酯、甘油二酯和甘油三酯；水凝胶释放体系；硅橡胶体系；肽基体系；蜡涂层；使用常规粘合剂和赋形剂的压缩片剂；部分融合的植入物；等等。具体的实例包括但不限于：(a)溶蚀体系，其中产物以一种形式包含在基质中，例如在美国专利4,452,775、4,675,189和5,736,152中描述的那些，和(b)扩散体系，其中产物以受控的速率从聚合物中透过，例如在美国专利3,854,480、5,133,974和5,407,686中所描述的。包含产物的脂质体可以通过已知的方法制备，例如(DE 3,218,121；Epstein等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,82:3688-3692(1985)；Hwang等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,77:4030-4034(1980)；EP 52,322；EP 36,676；EP 88,046；EP 143,949；EP 142,641；JP 83-118008；美国专利4,485,045和4,544,545；和EP 102,324)。
可替代地，或附加地，所述组合物可以通过向患区中植入本文公开的LC、编码LC的至少一部分的核酸或包含编码LC的至少一部分的核酸的载体已经吸附或包封于其上的膜、海绵或其它合适的物质而局部施用。当使用植入装置时，该装置可以植入到任何合适的组织或器官中，并且本文公开的LC、编码LC的至少一部分的核酸或包含编码LC的至少一部分的核酸的载体的递送可以经由团注或经由连续施用或经由使用连续输注的导管通过该装置直接进行。
包含本文公开的LC、编码LC的至少一部分的核酸或包含编码LC的至少一部分的核酸的载体的药物组合物可以配制用于吸入，例如作为干粉。也可以在液化推进剂中配制吸入溶液以供气雾剂递送。在又一种制剂中，溶液可以雾化。用于肺给药的其它药物组合物包括例如在WO 94/20069中描述的那些，该申请公开了化学修饰的蛋白质的肺递送。对于肺递送，颗粒大小应适于递送至肺远侧。例如，颗粒大小可以是1μm至5μm；但是，可以使用更大的颗粒，例如，如果每个颗粒是相当多孔的话。
一些包含本文公开的LC、编码LC的至少一部分的核酸或包含编码LC的至少一部分的核酸的载体的制剂可以口服施用。以这种方式施用的制剂可以采用在固体剂型如片剂和胶囊的复合中惯常使用的载体或不采用这类载体来配制。例如，可以将胶囊设计成在胃肠道中的某点释放制剂的活性部分，这时生物利用度得到最大化且系统前降解得到最小化。可以包含另外的试剂以促进选择性结合剂的吸收。还可以使用稀释剂、调味剂、低熔点蜡、植物油、润滑剂、悬浮剂、片剂崩解剂和粘合剂。
另一种制剂可以包含与适于制造片剂的无毒赋形剂混合的有效量的抗体，该抗体包含本文公开的LC、编码LC的至少一部分的核酸或包含编码LC的至少一部分的核酸的载体。通过将片剂溶解在无菌水中，或另外的合适载体中，可以以单位剂量的形式制备溶液。合适的赋形剂包括但不限于：惰性稀释剂，如碳酸钙、碳酸钠或碳酸氢钠、乳糖或磷酸钙；或粘合剂，如淀粉、明胶或阿拉伯胶；或润滑剂，如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。
基于本公开内容和配制技术的常识，取决于拟定的给药途径、递送形式和所需剂量，可以确定合适的和/或优选的药物制剂。无论给药方式如何，可以根据患者体重、体表面积或器官大小来计算有效剂量。对于涉及本文描述的各制剂的治疗，用于确定其适当剂量的计算的进一步细化在本领域中常规进行，并且处于本领域中常规实施的任务的范围内。适当的剂量可以通过使用合适的剂量-响应数据来确定。
“药学上可接受的”是指由联邦管理机构或州政府批准或可由其批准的，或在美国药典或其它公认的药典中列出用于包括人在内的动物的。
“药学上可接受的盐”是指药学上可接受的且具有母体化合物的所需药理学活性的化合物的盐。
“药学上可接受的赋形剂、载体或佐剂”是指这样的赋形剂、载体或佐剂，其可以与本发明的至少一种抗体一起施用于受试者，并且不破坏其药理学活性，并且当以足以递送治疗量的化合物的剂量施用时是无毒的。
“药学上可接受的载体”是指与本发明的至少一种抗体一起施用的稀释剂、佐剂、赋形剂或媒介物。
载体(vector)、宿主细胞和重组方法
如本文公开的TA可通过重组方法进行表达。通常，可分离编码TA的核酸并将其插入到可复制的载体中，以供进一步克隆(DNA的扩增)或表达。编码LC的DNA可通过PCR扩增来制备，并使用常规程序(例如，通过使用能够与编码LC的核苷酸特异性结合的寡核苷酸探针)进行测序。在示例性的实施方案中，对编码LC的核酸进行PCR扩增、限制性内切酶消化和凝胶纯化。可将消化的LC插入到可复制的载体中。含有消化的LC插入的可复制的载体可以转化或转导至宿主细胞中，以供进一步克隆(DNA的扩增)或表达。宿主细胞可以是原核或真核细胞。
可通过采用重叠寡核苷酸引物的PCR扩增获得编码本文公开的LC的多肽组分的多核苷酸序列。可从产生TA的细胞中分离多核苷酸序列并测序。或者，可使用核苷酸合成仪或PCR技术合成多核苷酸。一旦获得，就将编码多肽的序列插入到能够在原核和/或真核宿主中复制并表达异源多核苷酸的重组载体中。
此外，与宿主微生物相容的含有复制子和控制序列的噬菌体载体可用作与这些宿主关联的转化载体。例如，噬菌体如λGEMTM-11可用于制备重组载体，该重组载体可用于转化易感的宿主细胞如大肠杆菌LE392。
TA可在细胞内(例如，细胞质)或细胞外(例如，分泌)表达。对于细胞外表达，载体可包含能够使TA易位到细胞外部的分泌信号。
用于克隆或表达编码TA的载体的合适的宿主细胞包括原核或真核细胞。该宿主细胞可以是真核细胞。真核细胞的实例包括但不限于，人胚肾(HEK)细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、真菌、酵母、无脊椎动物细胞(例如，植物细胞和昆虫细胞)、淋巴样细胞(例如，YO、NSO、Sp20细胞)。合适的哺乳动物宿主细胞系的其它实例为用SV40转化的猴肾CV1系(COS-7)；幼仓鼠肾细胞(BHK)；小鼠塞尔托利(Sertoli)细胞；猴肾细胞(CV1)；非洲绿猴肾细胞(VERO-76)；人宫颈癌细胞(HELA)；犬肾细胞(MDCK)；布法罗大鼠(buffalo rat)肝细胞(BRL3A)；人肺细胞(W138)；人肝细胞(HepG2)；小鼠乳房肿瘤(MMT 060562)；TR1细胞；MRC 5细胞；和FS4细胞。该宿主细胞可以是原核细胞(例如，大肠杆菌)。
宿主细胞可以用含有编码TA的核苷酸的载体转化。转化的宿主细胞可以在培养基中培养。该培养基可补充有一种或多种试剂，以用于诱导启动子、选择转化体或扩增或表达编码所需序列的基因。用于转化宿主细胞的方法是本领域已知的，并且可包括电穿孔、氯化钙或聚乙二醇/DMSO。
或者，宿主细胞可以用含有编码TA的核苷酸的载体转染或转导。转染或转导的宿主细胞可以在培养基中培养。该培养基可补充有一种或多种试剂，以用于诱导启动子、选择转染或转导的细胞或表达编码所需序列的基因。
表达的TA可分泌至宿主细胞的周质，并从中回收，或转运至培养基中。从周质中回收蛋白质可包括使宿主细胞破裂。使宿主细胞破裂可包括渗压振扰、超声处理或裂解。可利用离心或过滤去除细胞碎片或整个细胞。例如，可通过亲和树脂色谱法进一步纯化TA。
或者，分泌至培养基中的TA可在其中进行分离。可从培养物中去除细胞，并将培养物上清液过滤和浓缩，以用于产生的蛋白质的进一步纯化。可使用通常已知的方法如聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和Western印迹分析进一步分离并鉴定所表达的多肽。
可通过发酵方法大量地进行TA的生产。不同的大规模分批补料发酵程序可用于重组蛋白的生产。大规模发酵具有至少1000升的容量，优选约1,000至100,000升的容量。这些发酵罐可以使用搅拌器叶轮来分配氧气和营养物，尤其是葡萄糖(一种优选的碳源/能量来源)。小规模发酵通常是指在容积容量不大于约100升，并且范围可为约1升至约100升的发酵罐中的发酵。
在发酵工艺中，通常在细胞已经在合适的条件下生长至所需的密度例如约180-220的OD550(在该阶段细胞处于早期的稳定期)后启动对蛋白质表达的诱导。根据采用的载体构建体，可以使用多种诱导物，如本领域已知的以及本文描述的。诱导之前细胞可生长较短的时间段。细胞通常诱导约12-50个小时，尽管可以使用更长或更短的诱导时间。
为了改善本文公开的TA的产率和质量，可改变各种发酵条件。例如，为了改善分泌的TA多肽的适当装配和折叠，超表达伴侣蛋白如Dsb蛋白(DsbA、DsbB、DsbC、DsbD和或DsbG)或FkpA(一种具有伴侣活性的肽基脯氨酰顺式，反式-异构酶)的附加载体可用于共转化宿主原核细胞。已经证明，伴侣蛋白有利于在细菌宿主细胞中产生的异源蛋白质的适当折叠和溶解性。
为了最小化表达的异源蛋白质(尤其是对蛋白水解敏感的那些蛋白质)的蛋白水解，某些缺乏蛋白水解酶的宿主菌株可用于本发明。例如，可对宿主细胞菌株进行修饰以在编码已知细菌蛋白酶如蛋白酶III、OmpT、DegP、Tsp、蛋白酶I、蛋白酶Mi、蛋白酶V、蛋白酶VI及其组合的基因中产生基因突变。一些缺乏大肠杆菌蛋白酶的菌株是可用的。
可以采用本领域已知的标准蛋白质纯化方法。以下程序是合适的纯化程序的示例：在免疫亲和或离子交换柱上分级分离、乙醇沉淀、反相HPLC、二氧化硅或阳离子交换树脂如DEAE上的层析、层析聚焦、SDS-PAGE、硫酸铵沉淀、羟基磷灰石层析、凝胶电泳、透析和亲和层析以及使用例如Sephadex G-75的凝胶过滤。
可以使用可商购的蛋白质浓缩过滤器，例如，Amicon或Millipore 超滤单元对TA进行浓缩。
蛋白酶抑制剂或蛋白酶抑制剂混合物可包含在任一前述步骤中以抑制TA的蛋白水解。
在一些情况下，TA或其片段一经分离便可能不具有生物活性。用于将多肽“重折叠”或转化为其三级结构和生成二硫键的不同方法可用于恢复生物活性。这样的方法包括将溶解的多肽暴露于通常在7以上的pH并且在特定浓度的离液剂的存在下。离液剂的选择非常类似于用于包涵体溶解的选择，但通常离液剂在较低浓度下使用，而不必与用于溶解的离液剂相同。重折叠/氧化溶液还可含有还原剂或特定比例的该还原剂加上其氧化形式以生成特定的氧化还原电位，以允许在蛋白质的半胱氨酸桥的形成中发生二硫键改组(disulfide shuffling)。一些常用的氧化还原电对包括半胱氨酸/胱胺、谷胱甘肽(GSH)/二硫代双GSH、氯化铜、二硫苏糖醇(DTT)/二噻烷DTT和2-巯基乙醇(bME)/二硫代-b(ME)。在许多情况下，可使用共溶剂来提高重折叠的效率，并且用于该目的的常见试剂包括甘油、各种分子量的聚乙二醇、精氨酸等。缓冲液的选择可以决定重折叠的肽的三维结构。使用包含硫酸铵的缓冲液可导致比其它类型的缓冲液更高产率的所需重折叠的肽。
药剂盒/制品
作为附加方面，本发明包括药剂盒，该药剂盒包含以促进其用于实施本发明的方法的用途的方式包装的一种或多种化合物或组合物。在一个实施方案中，这样的药剂盒包括包装在容器中的本文中描述的化合物或组合物(例如，单独的或与第二药剂组合的mTA)，具有贴附至容器上的标签或包装插页，其描述该化合物或组合物在实施该方法中的应用。合适的容器包括，例如，瓶、小瓶、注射器等。容器可以由多种材料如玻璃或塑料形成。容器可以具有无菌进入孔(例如，容器可以是静脉内溶液袋或具有可被皮下注射针刺穿的塞子的小瓶)。制品可以包含(a)其中容纳有组合物的第一容器，其中该组合物包含如本文公开的mTA；和(b)其中容纳有组合物的第二容器，其中该组合物包含其它治疗剂。本文公开的该实施方案中的制品可以进一步包含指示第一和第二组合物可以用于治疗特定病状的包装插页。可替代地，或附加地，该制品可以进一步包含第二(或第三)容器，该容器包含药学上可接受的缓冲剂，例如抑菌性注射用水(BWFI)、磷酸盐缓冲盐水、林格氏溶液和右旋糖溶液。还可以包括从商业和用户角度出发所希望的其它材料，包括其它缓冲液、稀释剂、过滤器、针和注射器。优选地，所述化合物或组合物以单位剂型包装。所述药剂盒还可以包括适于根据具体的给药途径施用组合物或实施筛查试验的装置。优选地，所述药剂盒包括描述修饰的治疗剂的组合物的应用的标签。
在某些实施方案中，包含修饰的治疗剂的组合物按照常规程序配制为适于静脉内施用至哺乳动物如人、牛、猫、犬和鼠的药物组合物。一般而言，用于静脉内给药的组合物是在无菌等渗水性缓冲液中的溶液。当需要时，该组合物还可以包含增溶剂和局部麻醉剂如利多卡因以减轻注射部位的疼痛。通常，成分分开供应或混合在一起以单位剂型供应，例如，作为在指示活性剂的量的密封容器如安瓿或小药囊(sachette)中的干冻干粉或无水浓缩物。当通过输注施用组合物时，其可以用含有无菌药物级水或盐水的输注瓶分配。当通过注射施用组合物时，可以提供无菌注射用水或盐水的安瓿以使成分可以在给药前混合。
在治疗、抑制和预防与蛋白质的异常表达和/或活性相关的疾病或病症中可能有效的本文描述的组合物的量可以通过标准临床技术确定。此外，可以任选地利用体外试验来帮助确定最佳剂量范围。将在制剂中使用的确切剂量还将取决于给药途径以及疾病或病症的严重度，并应根据医师的判断和每个患者的情况来确定。从得自体外或动物模型测试系统的剂量-响应曲线外推得出有效剂量。
定义
除非另有说明，否则如本文所使用的下列术语具有以下含义：
“氨基”指-NH2基团。
“氰基”或“腈”指-CN基团。
“羟基(Hydroxy或hydroxyl)”指-OH基团。
“硝基”指-NO2基团。
“氧代”指＝O取代基。
“肟”指＝N-OH取代基。
“硫代”指＝S取代基。
“烷基”指直链或支链的烃链基团，具有1至30个碳原子，并且通过单键与分子的其余部分连接。涵盖包含1至30个中的任何数目的碳原子的烷基。包含最多30个碳原子的烷基被称为C1-C30烷基，同样地，例如，包含最多12个碳原子的烷基为C1-C12烷基。包含其它数目的碳原子的烷基(和本文所定义的其它部分)以相似的方式表示。烷基包括但不限于C1-C30烷基、C1-C20烷基、C1-C15烷基、C1-C10烷基、C1-C8烷基、C1-C6烷基、C1-C4烷基、C1-C3烷基、C1-C2烷基、C2-C8烷基、C3-C8烷基和C4-C8烷基。代表性的烷基包括但不限于甲基、乙基、正丙基、1-甲基乙基(异丙基)、正丁基、异丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基乙基(叔丁基)、3-甲基己基、2-甲基己基、乙烯基、烯丙基、丙炔基等等。包含不饱和键的烷基包括烯基和炔基。除非在说明书中另外具体说明，烷基可任选地如下所述被取代。
“亚烷基”或“亚烷基链”是指如以上针对烷基所述的直链或支链的二价烃链。除非在说明书中另外具体说明，亚烷基可任选地如下所述被取代。
“烷氧基”指式-ORa的基团，其中Ra为如上定义的烷基。除非在说明书中另外具体说明，烷氧基可任选地如下所述被取代。
“芳基”是指由包含氢、6至30个碳原子和至少一个芳环的烃环体系衍生的基团。该芳基可为单环、双环、三环或四环环系，其可包括稠合或桥接的环系。芳基包括但不限于由醋蒽烯、苊、醋菲烯、蒽、薁、苯、荧蒽、芴、不对称引达省、对称引达省、茚满、茚、萘、非那烯、菲、七曜烯、芘和苯并菲的烃环体系衍生的芳基。除非在说明书中另外具体说明，术语“芳基”或前缀“芳”(如在“芳烷基”中)意在包括任选取代的芳基。
“环烷基”或“碳环”是指稳定的、非芳族的单环或多环碳环状环，其可包括稠合或桥接的环系，其为饱和或不饱和的。代表性的环烷基或碳环包括但不限于，具有3至15个碳原子、3至10个碳原子、3至8个碳原子、3至6个碳原子、3至5个碳原子或3至4个碳原子的环烷基。单环环烷基或碳环包括，例如，环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。多环的环烷基或碳环包括，例如，金刚烷基、降冰片基、十氢化萘基、双环[3.3.0]辛烷、双环[4.3.0]壬烷、顺式十氢化萘、反式十氢化萘、双环[2.1.1]己烷、双环[2.2.1]庚烷、双环[2.2.2]辛烷、双环[3.2.2]壬烷和双环[3.3.2]癸烷和7,7-二甲基-双环[2.2.1]庚烷基。除非在说明书中另外具体说明，环烷基或碳环基团可任选地被取代。环烷基的说明性实例包括但不限于下列部分：
□，,/> 等。
“稠合的”是指与存在的环结构稠合的本文所述的任何环结构。当稠环为杂环基环或杂芳基环时，在成为稠合的杂环基环或稠合的杂芳基环的一部分的该存在的环结构上的任何碳原子可被氮原子所替代。
“卤代”或“卤素”指溴、氯、氟或碘。
“卤代烷基”是指被如上所定义的一个或多个卤素基团取代的如上所定义的烷基，例如，三氟甲基、二氟甲基、氟甲基、三氯甲基、2,2,2-三氟乙基、1,2-二氟乙基、3-溴-2-氟丙基、1,2-二溴乙基等。除非在说明书中另外具体说明，卤代烷基可任选地被取代。
类似地，“卤代烷氧基”指式-ORa的基团，其中Ra为如上所定义的卤代烷基。除非在说明书中另外具体说明，卤代烷氧基可任选地如下所述被取代。
“杂环烷基”或“杂环基”或“杂环状环”或“杂环”是指包含2至23个碳原子和1至8个选自氮、氧、磷和硫的杂原子的稳定的3至24元非芳香族环基团。除非在说明书中另外具体说明，杂环基可为单环、双环、三环或四环环系，其可包括稠合或桥接的环系；并且杂环基中的氮、碳或硫原子可任选地被氧化；氮原子可任选地被季铵化；且杂环基可以是部分或完全饱和的。这样的杂环基的实例包括但不限于氮杂环丁基、二氧戊环基、噻吩基[1,3]二噻烷基、十氢异喹啉基、咪唑啉基、咪唑烷基、异噻唑烷基、异噁唑烷基、吗啉基、八氢吲哚基、八氢异吲哚基、2-氧代哌嗪基、2-氧代哌啶基、2-氧代吡咯烷基、噁唑烷基、哌啶基、哌嗪基、4-哌啶酮基(4-piperidonyl)、吡咯烷基、吡唑烷基、奎宁环基、噻唑烷基、四氢呋喃基、三噻烷基(trithianyl)、四氢吡喃基、硫代吗啉基(thiomorpholinyl)、硫杂吗啉基(thiamorpholinyl)、1-氧代-硫代吗啉基、1,1-二氧代-硫代吗啉基、12-冠醚-4、15-冠醚-5、18-冠醚-6、21-冠醚-7、氮杂-18-冠醚-6、二氮杂-18-冠醚-6、氮杂-21-冠醚-7和二氮杂-21-冠醚-7。除非在说明书中另外具体说明，杂环基可任选地被取代。杂环烷基也称为非芳香族杂环，其说明性实例包括：
等。术语杂环烷基还包括所有环形式的碳水化合物，包括但不限于单糖、二糖和寡糖。除非另有说明，杂环烷基在环中具有2至10个碳。应理解，当提到杂环烷基中的碳原子的数目时，在该杂环烷基中的碳原子的数目不同于构成杂环烷基(即杂环烷基环的骨架原子)的原子(包括杂原子)的总数。除非在说明书中另外具体说明，杂环烷基可任选地被取代。
如本文使用的术语“杂芳基”单独地或组合地是指含有约五个至约十二个骨架环原子的任选取代的芳香族单价基团，其中一个或多个环原子是独立地选自氧、氮、硫、磷、硅、硒和锡的杂原子，但不限于这些原子，并且条件是所述基团的环不含两个相邻的O或S原子。在环中存在两个或更多个杂原子的实施方案中，这两个或更多个杂原子可以彼此相同，或者这两个或更多个杂原子中的一些或全部可以各自与其它杂原子不同。术语杂芳基包括具有至少一个杂原子的任选取代的稠合和非稠合的杂芳基基团。术语杂芳基还包括具有五个至约十二个骨架环原子的稠合和非稠合的杂芳基，以及具有五个至约十个骨架环原子的稠合和非稠合的杂芳基。可以通过碳原子或杂原子与杂芳基键合。因此，作为非限制性的实例，咪唑(imidiazole)基团可以通过任何其碳原子(咪唑-2-基、咪唑-4-基或咪唑-5-基)或其氮原子(咪唑-1-基或咪唑-3-基)附接至母体分子。同样，杂芳基可以进一步通过任何或全部其碳原子和/或任何或全部其杂原子被取代。稠合的杂芳基基团可以含有两个至四个稠环，其中附接的环是杂芳环并且其它各个环可以是脂环的、杂环的、芳族的、杂芳族的或其任意组合。单环杂芳基的非限制性实例包括吡啶基；稠环杂芳基包括苯并咪唑基、喹啉基、吖啶基；非稠合的联杂芳基包括联吡啶基。杂芳基的其它实例包括但不限于呋喃基、噻吩基、噁唑基、吖啶基、氮杂基、吩嗪基、苯并咪唑基、苯并吲哚基、苯并呋喃基、苯并呋喃酮基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、苯并噻吩基、苯并噁二唑基、苯并二氧戊环基(benzodioxolyl)、苯并[b][1,4]二氧杂/>基、苯并二噁烷基、苯并萘并呋喃基(benzonaphthofuranyl)、苯并三唑基、苯并二氧戊环基、苯并二噁英基(benzodioxinyl)、苯并吡喃基、苯并吡喃酮基、苯并噻吩基、苯并[4,6]咪唑并[1,2-a]吡啶基、咔唑基、噌啉基、二苯并呋喃基、二苯并噻吩基、呋喃酮基、咪唑基、吲哚基、异噁唑基、异喹啉基、吲哚啉基、吲唑基、异吲哚基、吲哚啉基、异吲哚啉基、吲哚嗪基、异噻唑基、异吲哚基噁二唑基、吲唑基、萘啶基、噁二唑基、2-氧代氮杂/>基、环氧乙烷基、1-氧代吡啶基、1-氧代嘧啶基、1-氧代吡嗪基、1-氧代哒嗪基、1-苯基-1H-吡咯基、吩噻嗪基、吩噁嗪基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、吡咯基、吡嗪基、吡唑基、嘌呤基、酞嗪基、蝶啶基、喹啉基、喹唑啉基、喹喔啉基、奎宁环基、三唑基、四唑基、噻唑基、三嗪基、噻二唑基、四氢喹啉基、噻唑基和噻吩基等，及其氧化物，例如吡啶基-N-氧化物。杂芳基的说明性实例包括以下部分：
等。
上述所有基团可以是取代的或未取代的。如本文所使用的术语“取代的”意指任何上述基团(例如，烷基、亚烷基、烷氧基、芳基、环烷基、卤代烷基、杂环基和/或杂芳基)可进一步被官能化，其中至少一个氢原子被连接非氢原子取代基的键所替代。除非在说明书中具体说明，被取代的基团可包括选自以下的一个或多个取代基：氧代、氨基、-CO2H、腈、硝基、羟基、硫代氧基(thiooxy)、烷基、亚烷基、烷氧基、芳基、环烷基、杂环基、杂芳基、二烷基胺、芳基胺、烷基芳基胺、二芳基胺、三烷基铵(-N+R3)、N-氧化物、酰亚胺和烯胺；在诸如三烷基甲硅烷基、二烷基芳基甲硅烷基、烷基二芳基甲硅烷基、三芳基甲硅烷基的基团中的硅原子，全氟烷基或全氟烷氧基，例如三氟甲基或三氟甲氧基。“取代的”还意指其中一个或多个氢原子被连接杂原子的更高级的键(例如，双键或三键)所替代的任何上述基团，所述杂原子例如为在氧代、羰基、羧基和酯基团中的氧，和在诸如亚胺、肟、腙和腈的基团中的氮。例如，“取代的”包括其中一个或多个氢原子被-NH2、-NRgC(＝O)NRgRh、-NRgC(＝O)ORh、-NRgSO2Rh、-OC(＝O)NRgRh、-ORg、-SRg、-SORg、-SO2Rg、-OSO2Rg、-SO2ORg、＝NSO2Rg和-SO2NRgRh所替代的上述任何基团。在上文中，Rg和Rh相同或不同，并且独立地为氢、烷基、烷氧基、烷基氨基、硫代烷基、芳基、芳烷基、环烷基、环烷基烷基、卤代烷基、杂环基、N-杂环基、杂环基烷基、杂芳基、N-杂芳基和/或杂芳基烷基。此外，上述取代基中的每一个还可任选地被一个或多个上述取代基所取代。此外，任何上述基团均可被取代，以包括一个或多个内部氧、硫或氮原子。例如，烷基可被一个或多个内部氧原子所取代，以形成醚或聚醚基团。相似地，烷基可被一个或多个内部硫原子所取代，以形成硫醚、二硫化物等。
术语“任选的”或“任选地”意指随后描述的事件或情况可能发生或可能不发生，并且该描述包括其中所述事件或情况发生的情形和所述事件或情况不发生的情形。例如，“任选取代的烷基”意指如上所定义的“烷基”或“被取代的烷基”。此外，任选取代的基团可以是未取代的(例如，-CH2CH3)、完全取代的(例如，-CF2CF3)、单取代的(例如，-CH2CH2F)，或以在完全取代和单取代之间的任一水平被取代的(例如，-CH2CHF2、-CH2CF3、-CF2CH3、-CFHCHF2等)。本领域技术人员将会理解，对于含有一个或多个取代基的任何基团，这些基团并不旨在引入在空间上不能实现的和/或在合成上不可行的任何取代或取代模式(例如，被取代的烷基包括任选取代的环烷基，而该环烷基反过来又被定义为包括任选取代的烷基，如此可能无限循环)。因此，所述的任何取代基一般应理解为具有约1,000道尔顿，并且更典型地，高达约500道尔顿的最大分子量。
“互变异构体”是指从分子的一个原子到同一分子的另一个原子的质子转移。本文提出的化合物可作为互变异构体存在。互变异构体为通过氢原子的迁移(伴随单键和相邻双键的转换)可相互转化的化合物。在可能发生互变异构化的键合排列中，将存在互变异构体的化学平衡。考虑了本文所公开的化合物的所有互变异构形式。互变异构体的确切比例取决于若干因素，包括温度、溶剂和pH。互变异构体相互转化的一些实例包括：
本文所公开的化合物的“代谢物”是当该化合物被代谢时所形成的该化合物的衍生物。术语“活性代谢物”是指化合物被代谢时所形成的该化合物的生物活性衍生物。如本文所使用的，术语“代谢的”是指通过其使特定物质被生物体所改变的过程(包括但不限于水解反应和由酶催化的反应，如氧化反应)的总和。因此，酶可产生化合物的特定结构改变。例如，细胞色素P450催化多种氧化和还原反应，而尿苷二磷酸葡糖醛酸基转移酶催化活化的葡糖醛酸分子转移至芳香醇、脂肪族醇、羧酸、胺和游离巯基。关于代谢的其它信息可从The Pharmacological Basis of Therapeutics,第九版,McGraw-Hill(1996)中获得。本文所公开的化合物的代谢物可通过以下方法来鉴定：将化合物施用于宿主并对来自该宿主的组织样品进行分析，或将化合物与肝细胞在体外温育并对所得化合物进行分析。这两种方法都是本领域公知的。化合物的代谢物可以通过氧化过程形成，并对应于相应的含羟基化合物。化合物可被代谢成一种或多种药理活性代谢物。
如本文所用的，肽的“衍生物”是指，但不限于，允许脂质附接的修饰的肽(诸如一个或多个氨基酸残基替代或L-与D-氨基酸替代)、片段、具有一个或多个附加氨基酸的类似物、肽的复合物和/或集合体。肽的衍生物可以是相对于该肽具有至少50％同源性的同源物。肽的衍生物可以是相对于该肽具有至少60％同源性的同源物。肽的衍生物可以是相对于该肽具有至少70％同源性的同源物。肽的衍生物可以是相对于该肽具有至少80％同源性的同源物。肽的衍生物可以是相对于该肽具有至少90％同源性的同源物。
诸如“治疗”或“处理”或“缓解”或“减轻”的术语可以指：1)治愈、减缓、减轻经诊断的病理状况或病症的症状，和/或中止该病理状况或病症的进展的治疗措施；和/或2)预防和/或减缓目标病理状况或病症的发展的预防性或防范性措施。因此，需要治疗者包括已经患有该病症者；易患该病症者；以及待预防该病症者。
“氨基酸”是指天然存在的和合成的氨基酸，以及起到与天然存在的氨基酸类似的作用的氨基酸类似物和氨基酸模拟物。天然存在的氨基酸是由遗传密码编码的那些氨基酸，以及后来修饰的那些氨基酸，例如，羟脯氨酸、γ-羧基谷氨酸和O-磷酸丝氨酸。氨基酸类似物是指具有与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构(例如与氢、羧基基团、氨基基团和R基团结合的α碳)的化合物，例如高丝氨酸、正亮氨酸、甲硫氨酸亚砜、甲硫氨酸甲基锍。这样的类似物可以具有修饰的R基团(例如，正亮氨酸)或修饰的肽骨架，但保留与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构。氨基酸模拟物是指其结构不同于一般的氨基酸化学结构，但起到与天然存在的氨基酸相似的作用的化学化合物。
如本文所用的，术语“治疗剂”或“肽治疗剂”是指调节另一种蛋白质、肽、细胞或组织的活性的蛋白质或肽。调节活性可以包括增加、减少、刺激或阻止蛋白质、肽、细胞或组织的活性或表达。治疗剂可以调节参与疾病或病症的病因学的蛋白质或肽的活性。示例性的TA可包括但不限于激素、激酶、受体、配体、生长因子、调节蛋白质、代谢蛋白质、细胞因子、趋化因子、干扰素、磷酸酶、抗体或其任意组合的至少一部分。
“病症”或“疾病”是指将受益于采用本文公开的物质/分子(例如，如本文公开的mTA)或方法的治疗的状况。这包括慢性和急性病症或疾病，包括使哺乳动物易于患有所讨论的病症的那些病理状况。
“治疗”是指试图改变被治疗的个体或细胞的自然病程，并可以用于预防或在临床病理学的过程中执行的临床干预。期望的治疗效果包括预防疾病的发生或复发，缓解症状，减少疾病的任何直接或间接的病理后果，预防转移，减小疾病进展的速率，改善或缓和疾病状态，以及缓解或改善预后。
用于治疗目的的“哺乳动物”是指归类为哺乳动物的任何动物，包括人、啮齿动物(例如，小鼠和大鼠)和猴；家畜和农场动物；以及动物园、运动、实验室或玩赏动物，诸如狗、猫、牛、马、绵羊、猪、山羊、兔等。在一些实施方案中，所述哺乳动物选自人、啮齿动物或猴。
“药学上可接受的”是指由联邦管理机构或州政府批准或可由其批准的，或在美国药典或其它公认的药典中列出用于包括人在内的动物的。
“药学上可接受的盐”是指药学上可接受的且具有母体化合物的所需药理学活性的化合物的盐。
“药学上可接受的赋形剂、载体或佐剂”是指这样的赋形剂、载体或佐剂，其可以与本发明的至少一种抗体一起施用于受试者，并且不破坏其药理学活性，并且当以足以递送治疗量的化合物的剂量施用时是无毒的。
“药学上可接受的载体”是指与本发明的至少一种抗体一起施用的稀释剂、佐剂、赋形剂或媒介物。
术语“修饰的治疗剂”、“mTA”、“脂质缀合物”和“LC”可以互换使用。这些术语可以指与半衰期延长部分附接的治疗剂(TA)。
实施例
实施例1.作为具有突变S26C和S29C的CBD融合体、在链B与链A之间具有接头的重组松弛素2的构建和表达
该实验的目的在于构建和表达具有突变S26C和S29C的、在链B与链A之间具有GGGRGGR(SEQ ID NO:68)接头的重组松弛素2。
材料
用于该实验的材料包括：
pVB008松弛素2接头线性
pVB008松弛素2接头线性S26C
pVB008松弛素2接头线性S29C
如在表6中公开的SEQ ID NO:38-46的寡核苷酸储备溶液100μM。
图4描绘了pVB008松弛素2接头载体的示意图。
步骤1.装配PCR—松弛素片段的扩增
如下准备PCR反应以生成野生型或具有S26C或S29C突变的松弛素片段：
步骤2.PCR程序
通过进行以下PCR程序扩增松弛素2片段(野生型、S26C和S29C)：
94℃-2分钟，随后为20个94℃-15秒、42℃-30秒和68℃-15秒的循环
在0.8％琼脂糖凝胶上运行松弛素2片段的PCR产物。如图5所示，泳道1、6和11含有100bp分子量标记，泳道2-5分别含有S26C寡核苷酸混合物步骤1反应1-4反应物，泳道7-10分别含有S29C寡核苷酸混合物步骤1反应1-4反应物。
步骤3.松弛素2接头的扩增
如下准备PCR反应以生成松弛素2接头
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10μM引物混合物含有松弛素2正向引物(pVB008松弛素2Amp(#60)：AATCTGTATTTCCAGGGATCCGGTGGTGA＝SEQ ID NO:64)和松弛素2反向引物(松弛素2接头Amprev(#211)TGGCTAAGCTTTAGCAGAAACGAGCCAGAGAACGTTTGGTGCAACCAACGTGGC＝SEQ ID NO:65)。来自步骤2的PCR扩增的反应1混合物用于装配混合物。
通过进行以下PCR程序扩增松弛素2接头：94℃-2分钟，随后为25个94℃-15秒、52℃-15秒和68℃-60秒的循环。
在0.8％琼脂糖凝胶上运行松弛素2接头扩增的PCR产物。如图6所示，泳道1含有100分子量标记，泳道2含有S29C步骤3反应1，泳道3含有S29C步骤3反应2，泳道4含有S29C步骤3反应3。
步骤4.载体pVB008和pAC145的消化
进行载体pVB008和pAC145的限制酶切消化，以制备用于插入松弛素2接头PCR产物的载体。如下准备限制酶切消化：
20μl pVB008/pAC045
10μl 10x缓冲液#4
2μl HindIII-HF
2μl BamHI-HF
66μl H2O
限制酶切消化反应在37℃下温育1小时。
步骤5.插入片段的消化
进行松弛素2接头PCR产物(野生型、S26C和S29C)的限制酶切消化，以制备用于插入pVB008和pAC145载体内的PCR产物。如下准备限制酶切消化：
20μl全长片段
10μl 10x缓冲液#4
2μl HindIII-HF
2μl BamHI-HF
66μl H2O
限制酶切消化反应在37℃下温育1小时。
步骤6.凝胶纯化
在琼脂糖凝胶上运行消化的pVB008载体、消化的pAC145载体和松弛素2接头插入片段。如图7所示，泳道1含有1kb分子量标记，泳道2含有消化的pVB008载体，泳道3含有消化的pAC145载体，泳道4含有100bp分子量标记，泳道5含有松弛素2接头插入片段，泳道6含有松弛素2S26C接头插入片段，泳道7含有松弛素2S29C接头插入片段。根据制造商的说明书(NucleoSpin Gel and PCR Cleanup Macherey-Nagel)对消化的载体和松弛素2PCR产物进行凝胶纯化。
步骤7.连接/转化
通过如下连接反应将凝胶纯化的消化的载体(载体dg)和消化的PCR产物(松弛素2线性dg(插入片段))连接：
5μl载体dg
1μl松弛素2线性dg(插入片段)
2μl 10x缓冲液
1μl T4DNA连接酶
11μl H2O
连接反应在室温(RT)下温育1小时。
随后使用连接的产物转化NEB turbo感受态细胞，根据方案将2μl的连接反应转化至NEB turbo感受态细胞内。将转化的细胞涂布在LB/Kan板上。
挑选5个菌落并接种到5ml LB+Kan中。使细胞在37℃下生长6小时。
步骤8.用于测序的DNA的制备
根据方案使用NucleoSpin DNA Mini Prep Macherey-Nagel由各1.5ml的5种培养物制备DNA。进行DNA测序以验证松弛素2向pVB008和pAC145载体内的插入。
步骤9.松弛素肽的表达和纯化
松弛素或修饰的松弛素肽通过用编码这些肽的核苷酸载体瞬时转染自由型HEK293细胞进行表达。表达的肽分泌至培养基中，并在转染后48和96小时时收获。融合蛋白通过蛋白A/G层析(Thermo Fisher Scientific，IL)纯化，并通过SDS-PAGE凝胶进行分析。图8示出了松弛素和松弛素突变体的表达的SDS-PAGE凝胶。如图8所示，泳道1和17显示了蛋白质标准：泳道2-6分别显示了pCAC0095裂解物、洗出液1、洗出液2、洗出液4和包涵体；泳道7-11分别显示了pCAC0096裂解物、洗出液1、洗出液2、洗出液4和包涵体；泳道12-16分别显示了pCAC0097裂解物、洗出液1、洗出液2、洗出液4和包涵体。PCAC0095表示具有GGGRGG(SEQID NO:69)接头和N末端8xHis(SEQ ID NO:70)的野生型松弛素。PCAC0096表示具有GGGRGG(SEQ ID NO:69)接头和N末端8xHis(SEQ ID NO:70)的S26C松弛素。PCAC0097表示具有GGGRGG(SEQ ID NO:69)接头和N末端8xHis(SEQ ID NO:70)的S29C松弛素。如图9所示，泳道1和6显示了蛋白质标准；泳道2-5分别显示了pCAC002加样、流过物(Flowthrough)、洗出液(wash)和珠子。PCAC002表示在N末端具有CBD标签的野生型松弛素。
实施例2.测量松弛素肽的生物活性
松弛素2通过含有富含亮氨酸的重复序列的GPCR(即，LGR7(RFXR1))发信号。基于稳定表达重组LGR7的HEK293T细胞中腺苷酸环化酶活性的刺激，确定野生型松弛素肽的生物活性。使稳定的LGR7表达细胞保持在补充有200ng/ml Zeocin(Invitrogen)的Dulbecco改良Eagle培养基/F-12培养基中。通过用CRE-Luc慢病毒(Qiagen)对这些表达LGR7的HEK293T细胞进行慢病毒转导，生成环AMP响应性元件驱动的萤光素酶(CRE-Luc)报道基因系，并用嘌呤霉素(2μg/mL)选择两周。使用报道基因试验检测cAMP水平和松弛素对LGR7的激活。
试验细节：在384孔固体底部白色板中的50μL含10％FBS的Dulbecco改良Eagle培养基/F-12培养基中，以每孔5x103个细胞的密度接种表达LGR7和CRE-Luc的HEK293T细胞。将细胞在37℃下预温育过夜。一式三份添加不同浓度的松弛素肽(0.01nM至1000nM)，温育18小时，并通过添加10μL的Bright Glo(Promega)检测萤光素酶活性。在Envision(PerkinElmer)上记录发光。在非线性曲线拟合之后计算EC50(松弛素H2剂量响应曲线见图3)。选择的数据示于表2和表3中。
实施例3.聚乙二醇化的脂质(酰胺键)缀合的松弛素的合成(流程A)。
流程A.
(2-(2-(2-十四烷酰胺基乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(A-2-a)。
向肉豆蔻酸(0.46g，2.0mmol)在10ml无水DMF中的溶液中添加N-t-Boc-酰胺基-dPEG3-胺(0.5g，2.0mmol)，然后添加HATU(0.8g，2.1mmol)和DIEA(0.45mL，2.4mmol)。将混合物在室温下搅拌6h，并真空蒸发溶剂。将粗物质溶解在EtOAc中，用冷的1％HCl、饱和NaHCO3和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。采用在己烷中25–50％EtOAc的梯度，通过硅胶快速柱色谱法将粗物质纯化，以得到0.83g呈白色固体的所需化合物(产率90％)。m/z(ESI+)459.6(M+H)。
(2-(2-(2-((4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-二十二碳-4,7,10,13,16,19-六烯酰胺基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(A-2-b)。
使用在无水DMF(5mL)中的N-t-Boc-酰胺基-dPEG3-胺(0.25g，1.0mmol)、二十二碳六烯酸(0.33g，1.0mmol)、HATU(0.41g，1.1mmol)和DIEA(0.22mL，1.2mmol)，利用与A-2-a的程序类似的条件制备标题化合物。产率68％，棕色油。1H NMR(500MHz；CDCl3):δ0.97(t,J＝6.0Hz,3H),1.44(s,9H),2.07(t,J＝5.0Hz,2H),2.25(J＝5.0Hz,2H),2.41(dd,J＝5.0,6.5Hz,2H),2.79-2.87(m,10H),3.32(t,J＝5.5Hz,2H),3.45(dd,J＝5.0,6.0Hz,2H),3.55(t,J＝5.0Hz,4H),3.59-3.62(m,4H),4.97(s,1H),5.30-5.42(m,12H),6.03(s,1H)；m/z(ESI+)459.6(M+H)。
(2-(2-(2-((R)-4-((3R,5R,8R,9S,10S,13R,14S,17R)-3-羟基-10,13-二甲基十六氢-1H-环戊并[a]菲-17-基)戊酰胺基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(A-2-c)。
向NHS活化的石胆酸酯(0.24g，0.5mmol)在5ml无水DMF中的的溶液中添加N-t-Boc-酰胺基-dPEG3-胺(0.14g，0.55mmol)，然后添加DIEA(0.18mL，1.0mmol)。将混合物在室温下搅拌16h，并真空蒸发溶剂。将粗物质溶解在DCM中，用冷的1％HCl、饱和NaHCO3和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。采用在DCM中1-5％甲醇的梯度，通过硅胶快速柱色谱法将粗物质纯化，以得到0.48g呈白色固体的所需化合物(产率80％)。1H NMR(500MHz；CDCl3):δ0.62(s,3H),0.90-2.25(m,30H),3.31(s,2H),3.43-3.46(s,2H),3.52-3.56(m,4H),3.59-3.60(m,6H),4.94(s,1H),6.05(s,1H)；m/z(ESI+)628.6(M+H).m/z(ESI+)607.5(M+H)。
N-(2-(2-(2-(2-溴乙酰胺基)乙氧基)乙氧基)乙基)十四烷酰胺(A-3-a)
向A-2-a(0.46g，1mmol)在10ml DCM中的溶液中添加TFA(2ml，26mmol)，并将该混合物在室温下搅拌3h。浓缩反应混合物，并将粗物质冻干以获得无色油，该无色油溶解在10ml DCM中。添加溴乙酸酐(0.31g，1.2mmol)，然后添加DIEA(0.52ml，2.5mmol)，并将混合物在室温下搅拌3h。将反应混合物用DCM和EtOAc萃取，用1％HCl、饱和NaHCO3和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。采用在含有5％甲醇的石油醚中20-50％EtOAc的梯度，通过硅胶快速柱色谱法将粗物质纯化，以得到0.37g呈白色固体的所需化合物(经两个步骤的合并产率为78％)。1H NMR(500MHz；CDCl3):δ0.88(t,J＝6.5Hz,3H),1.25-1.32(m,20H),1.62(t,J＝7.5Hz,2H),2.18(t,J＝8.0Hz,2H),3.47(dd,J＝5.0,10.0Hz,2H),3.50(dd,J＝5.0,10.0Hz,2H),3.56-3.58(m,2H),3.59-3.62(m,2H),3.63(d,J＝5.5Hz,5H),3.88(s,2H),5.92-5.93(m,1H),6.94(s,1H)；7.04–7.17(m,1H)；13C NMR(100MHz；CDCl3):δ14.55,23.12,26.20,29.76,29.79,29.95,30.06,30.08,30.09,30.11,32.35,37.23,69.84,70.46,70.83(2),166.06,173.84；m/z(ESI+)480.6(M+H)。
(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-N-(2-(2-(2-(2-溴乙酰胺基)乙氧基)乙氧基)乙基)二十二碳-4,7,10,13,16,19-六烯酰胺(A-3-b)。
使用与A-3-a的程序类似的条件制备标题化合物。产率67％，棕色油。1H NMR(500MHz；CDCl3):δ0.96(t,J＝5.0Hz,3H),2.07(q,J＝7.6Hz,2H),2.23(J＝7.2Hz,2H),2.40(dd,J＝7.2,13.8Hz,2H),2.79-2.84(m,10H),3.44-3.51(m,4H),3.55-3.62(m,4H),3.63(s,4H),3.88(s,2H),5.78-5.42(m,12H),5.94(s,1H),6.92(s,1H)；m/z(ESI+)559.8(M+H)。
(R)-N-(2-(2-(2-(2-溴乙酰胺基)乙氧基)乙氧基)乙基)-4-((3R,5R,8R,9S,10S,13R,14S,17R)-3-羟基-10,13-二甲基十六氢-1H-环戊并[a]菲-17-基)戊酰胺(A-3-c)。
使用与A-3-a的程序类似的条件，用A-2-c代替A-2-a，制备标题化合物。产率87％，白色固体。1H NMR(500MHz；CDCl3):δ0.83(t,J＝4.0Hz,3H),0.85-0.94(m,6H),1.00-1.91(m,28H),3.41-3.64(m,12H),3.85-3.88(m,2H),4.86-4.94(m,1H),6.05(t,J＝7.2Hz,1H),7.04(s,1H)；m/z(ESI+)628.6(M+H)。
用脂肪酸或胆汁酸衍生的肽(A-4-a、A-4-b或A-4-c)的合成。
将Cys肽中间体(1当量)溶解在DMSO中，并与溶解在THF中的A-3-a、A-3-b或A-3-c(2当量)中的任一个反应，然后添加DIEA(3体积％)。通过HPLC–MS评估反应的完成度。通过添加TFA至最终pH为4将反应猝灭，并直接通过制备型反相HPLC进行纯化，其中使用以下洗脱液：(A)在水中的0.05％TFA，和(B)在乙腈中的0.05％TFA，以及洗脱液(B)的以下梯度：10％(1min)40–55％(10min)，流速80ml/min。将纯化的肽冻干，并通过分析HPLC和电喷雾质谱法确认结构和纯度。
实施例4.聚乙二醇化的脂质(醚键)缀合的松弛素的合成(流程B-1和B-2)。
流程B-1
将2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙醇(100mg，0.671mmol，89μL)在4.8mL乙腈/水(6:1)中的溶液用二碳酸二叔丁酯(151mg，0.691mmol)处理，然后用0.5mL 1N NaOH(水溶液)处理。在室温下搅拌45min后，真空去除有机溶剂，将残余物溶解在饱和NH4Cl(水溶液)中，并用EtOAc萃取所需的氨基甲酸酯。去除EtOAc，得到57mg(产率34％)呈无色油的2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙基氨基甲酸叔丁酯。
将2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙基氨基甲酸叔丁酯(68.5mg，0.275mmol)和甲苯磺酸肉豆蔻酯(101mg，0.275mmol)在1.4mL叔戊醇中的溶液用叔丁醇钾(61.6mg，0.550mmol)和碘化钾(4.6mg，0.028mmol)处理。加热至90℃2h后，使反应冷却至室温，用饱和NH4Cl(水溶液)猝灭，然后用EtOAc萃取并经Na2SO4干燥。浓缩并随后通过硅胶快速柱色谱法进行纯化，得到44mg(产率36％)呈无色油的2-(2-(2-(十四烷氧基)乙氧基)乙氧基)乙基氨基甲酸叔丁酯。
将2-(2-(2-(十四烷氧基)乙氧基)乙氧基)乙基氨基甲酸叔丁酯(26mg，0.058mmol)在1.2mL DCM中的溶液用0.29mL三氟乙酸处理。在室温下搅拌50min后，将混合物浓缩并重新溶解在2mL DCM中。取该溶液的1-mL等份至单独的小瓶中，使其冷却至0℃，随后装入溴乙酸酐(10.3mg，0.040mmol)和DIEA(11μL，0.063mmol)。在室温下搅拌12h后，将反应混合物通过快速柱色谱法进行纯化，以得到7.5mg(经2个步骤产率55％)呈灰白色固体的2-溴-N-(2-(2-(2-(十四烷氧基)乙氧基)乙氧基)-乙基)乙酰胺。
将Cys-肽中间体(1当量)在DMSO(4mM)中的溶液用在THF(5.4mM)和DIEA(114当量)中的2-溴-N-(2-(2-(2-(十四烷氧基)乙氧基)乙氧基)-乙基)乙酰胺(2.1当量)处理。反应完成后，将反应混合物通过制备型反相HPLC进行纯化，以得到脂质缀合物(B-1-a)。
流程B-2
2-(2-(2-(2-溴乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基氨基甲酸叔丁酯(B-2-a)。
将2-(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙醇(400mg，2.07mmol，0.33mL)在15mL乙腈/水(6:1)中的溶液用二碳酸二叔丁酯(603mg，2.77mmol)处理，然后用2.8mL 1NNaOH(水溶液)处理。在室温下搅拌45min后，真空去除有机溶剂，将残余物溶解在饱和NH4Cl(水溶液)中，并用EtOAc萃取所需的氨基甲酸酯。去除EtOAc，得到呈无色油的粗氨基甲酸酯。
将该油溶解在DCM中，并用对甲苯磺酰氯(1.18g，6.21mmol)和吡啶(0.84mL，10.4mmol)处理。在40℃下搅拌12h后，将该混合物用DCM稀释，并用1N HCl(2x 10mL)、H2O(10mL)和盐水(10mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过硅胶快速柱色谱法进行纯化，得到330mg(经2个步骤产率36％)呈无色油的甲苯磺酸酯。
将甲苯磺酸酯(203mg，0.453mmol)在3.1mL无水丙酮中的溶液用LiBr(385mg，4.53mmol)处理。在60℃下搅拌8h后，去除溶剂并将所得残余物溶解在EtOAc中。将有机混合物用水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速柱色谱法进行纯化，得到126mg(产率78％)呈无色油的标题化合物。
2-((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-(6-甲基庚烷-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氢-1H-环戊并[a]菲-3-基氧基)乙醇(B-2-b)。
将胆固醇(1.50g，3.89mmol)在4mL DCM中的溶液用对甲苯磺酰氯(1.49g，7.78mmol)、吡啶(4mL)和DMAP(94.9mg，0.780mmol)处理。在室温下搅拌12h后，将该混合物用DCM稀释，并用1N HCl(2x 5mL)、H2O(5mL)和盐水(5mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并真空浓缩。从氯仿和甲醇中重结晶，得到1.66g(产率79％)呈白色固体的甲苯磺酸酯中间体。
将装有在7.7mL 1,4-二氧杂环己烷中的甲苯磺酸酯中间体(500mg，0.926mmol)的微波小瓶用2.6mL乙二醇处理。通过微波辐射加热至160℃10min后，去除溶剂，并将残余物溶解在氯仿中，并用饱和NaHCO3(5mL)、H2O(5mL)和盐水(5mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并真空浓缩。通过使用硅胶的快速柱色谱法将粗物质纯化，得到270mg(产率68％)呈白色固体的标题化合物。
2-溴-N-(14-((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-(6-甲基庚烷-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氢-1H-环戊并[a]菲-3-基氧基)-3,6,9,12-四氧杂十四烷基)乙酰胺(B-2-c)。
将B-2-b(219mg，0.509mmol)在2.5mL THF中的溶液用氰化钠(在矿物油中的60％分散液，20.4mg，0.509mmol)处理，并搅拌30min。使混合物冷却至0℃，并用在2.5mL THF中的B-2-a(139mg，0.392mmol)处理。加热至40℃6h后，将反应用饱和NH4Cl(水溶液)猝灭，并用EtOAc萃取。通过使用硅胶的快速柱色谱法将粗物质纯化，得到101mg(产率36％)呈无色油的醚中间体。
将醚中间体(74mg，0.105mmol)在2.1mL DCM中的溶液用0.53mL TFA处理。在室温下搅拌40min后，将混合物真空浓缩并溶解在10mL DCM中。取该溶液的4-mL等份至单独的小瓶中，浓缩至1-mL体积，使其冷却至0℃，并装入溴乙酸酐(13.6mg，0.053mmol)和DIEA(15μL，0.088mmol)。在室温下搅拌12h后，通过使用硅胶的快速柱色谱法直接将反应混合物纯化，以得到12.6mg(经2个步骤，41％)呈无色油的标题化合物。
以与实施例4流程B-1的脂质缀合物B-1-a类似的方式制备脂质缀合物B-2-d。
实施例5.Br-FA1的制备。
步骤A.(2-(2-(2-十四烷酰胺基乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(1-1)。
将肉豆蔻酸(0.46g，2mmol)溶解在5mL DMF中。添加HATU(0.8g，2.1mmol)和DIPEA(0.4mL，2.2mmol)，随后添加Boc-NH-PEG2-COOH(0.5g，2mmol)。随后将反应混合物搅拌6h，并去除溶剂。用EtOAc(3x 15mL)萃取产物。将有机层依次用饱和NaHCO3、冷HCl(1M)和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速柱色谱法进行纯化，以90％的产物产率得到0.81g呈白色固体的所需化合物。ESI-MS：计算的MW 458.4；实测值459.6[M+1]+。
步骤B.N-(2-(2-(2-(2-溴乙酰胺基)乙氧基)乙氧基)乙基)十四烷酰胺(Br-FA1)。
将1-1(0.23g，0.5mmol)在DCM(10mL)中的溶液用TFA(2mL)处理2h。将混合物浓缩，随后在0℃下添加在10mL DCM中的溴乙酸酐(0.14g，0.55mmol)、DIPEA(0.17mL，1mmol)。然后将反应混合物搅拌2h，并去除溶剂。用EtOAc(3x 15mL)萃取产物。将有机层依次用饱和NaHCO3、冷HCl(1M)和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速柱色谱法进行纯化，以83％的产物产率得到0.2g呈白色固体的标题化合物。ESI-MS：计算的MW 479.5；实测值480.4[M+1]+。
实施例6.Br-FA2的固相合成。
通过将氨基酸、树脂和DIPEA(70μL，400μmol)在5mL DMF中混合并搅拌30min，将Fmoc-Lys(ivDde)-OH(60mg，100μmol)附接至2-氯三苯甲基氯树脂(Novabiochem)(100mg，80μmol)。随后将树脂用DMF(3x)、DCM(3x)洗涤，并用CH3OH/DCM/DIPEA(8:1:1)处理10min，以向未反应的三苯甲基氯位点加帽，真空干燥，并储存在干燥器中。
向该树脂(50mg，40μmol)中添加在DMF(20％，5mL)中的哌啶。将混合物摇动1min并排出。添加另外5mL的20％哌啶，并且此次将混合物摇动15min。观察到阳性茚三酮试验结果。然后如上所述洗涤树脂。
随后使用在DMF(5mL)中的偶联试剂HATU(76mg，200μmol)和DIPEA(35μL，200μmol)，用十八烷二酸单叔丁酯(AstaTech)(74mg，200μmol)处理该树脂2h，或重复该操作直至观察到阴性茚三酮试验结果。用DMF和DCM洗涤后，将树脂用在DMF(5mL，2x 5min)中的2％肼处理。观察到阳性茚三酮试验结果。然后如上所述洗涤树脂。
然后使用在DMF(5mL)中的HATU(76mg，200μmol)和DIPEA(35μL，200μmol)，用Fmoc-PEG2-丙酸(Quanta BioDesign)(80mg，200μmol)处理该树脂2h，或重复该操作直至观察到阴性茚三酮试验结果。然后如上所述洗涤树脂。然后去除保护基团并重复以上步骤。
然后将树脂用在2mL DCM中的溴乙酸酐(55mg，200μmol)和DIPEA(35μL，200μmol)处理，并搅拌30min。用DCM(3x)洗涤后，使用5mL在含10％H2O和10％三异丙基硅烷的DCM中的10％TFA从树脂上切割产物1h。切割后，减压去除TFA。将所得黄色残余物用冷乙醚洗涤若干次，并最终在氮气流下干燥为呈黄色粉末的粗产物。
将50mg粗产物溶解于高达0.5mL的在水(0.1％TFA)中的50％CH3CN中的尝试尚未成功。因此，作为替代方案，将粗肽(50mg)溶解在DMSO(0.1mL)中，并将该溶液采用50％CH3CN-水稀释至0.5mL的最终体积。过滤该溶液。将过滤的溶液上样至用在水(0.1％TFA)中的10％CH3CN(0.1％TFA)平衡的制备型HPLC柱(Phenomenex,Prep C18,300A,50x 250mm)，并将该柱用在水(0.1％TFA)中的10％CH3CN(0.1％TFA)洗脱，以从该柱中洗去DMSO。随后经1min将洗脱液的组成升到35％CH3CN-水(0.1％TFA)，并以0.5％/min的CH3CN(0.1％TFA)进入水(0.1％TFA)的速度开始线性梯度，并运行50min。在分析型反相C18柱(Phenomenex,C18,120A,4.6x 50mm)上检测洗脱的级分的纯度，并合并含有纯度>95％的产物的级分并冷冻干燥，以得到标题化合物(15mg，产率41％)。通过ESI-MS分析产物的分子量：计算的MW880.9；实测值881.3[M+1]+，882.6[M+2]+。
实施例7Br-FA3的固相合成。
通过用rink酰胺树脂代替2-氯三苯甲基氯树脂，以与Br-FA2相似的方式制备标题化合物。通过制备型HPLC进行纯化并冻干，以约45％的产物产率得到纯度大于95％的呈白色粉末的标题化合物。通过ESI-MS分析肽的分子量：计算的MW 881.0；实测值882.2[M+1]+,883.7[M+2]+。
实施例8.Br-FA4的制备。
在0℃下，将十四烷基胺(107mg，0.5mmol)在DCM(10mL)中的溶液用溴乙酸酐(0.14g，0.55mmol)、DIPEA(100μL，0.55mmol)处理。然后将反应混合物搅拌2h，并去除溶剂。用EtOAc(3x 15mL)萃取产物。将有机层依次用饱和NaHCO3、冷HCl(1M)和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速柱色谱法进行纯化，以87％的产物产率得到145mg呈白色固体的标题化合物。ESI-MS：计算的MW334.3；实测值335.6[M+1]+。
实施例9.Br-FA5的制备。
步骤A.(9,20-二氧代-3,6,13,16-四氧杂-10,19-二氮杂三十三烷基)氨基甲酸叔丁酯(1-2)。
将1-1(115mg，0.25mmol)在DCM(10mL)中的溶液用TFA(2mL)处理2h。将混合物浓缩，随后添加在5mL DMF中的Boc-NH-PEG2-酸(70mg，0.25mmol)、HATU(95mg，0.25mmol)和DIPEA(90μL，0.5mmol)。然后将反应混合物搅拌2h，并去除溶剂。用EtOAc(3x 15mL)萃取产物。将有机层依次用饱和NaHCO3、冷HCl(1M)和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速柱色谱法进行纯化，以77％的产物产率得到122mg呈白色固体的所需化合物。ESI-MS：计算的MW 617.9；实测值618.4[M+1]+。
步骤B.N-(1-溴-2,12-二氧代-6,9,16,19-四氧杂-3,13-二氮杂二十一烷-21-基)十四烷酰胺(Br-FA5)。
将1-2(122mg，0.2mmol)在DCM(10mL)中的溶液用TFA(2mL)处理2h。将混合物浓缩，随后在0℃下添加在5mL DCM中的溴乙酸酐(52mg，0.2mmol)、DIPEA(70μL，0.4mmol)。然后将反应混合物搅拌2h，并去除溶剂。用EtOAc(3x 15mL)萃取产物。将有机层依次用饱和NaHCO3、冷HCl(1M)和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过HPLC纯化，以69％的产物产率得到88mg呈白色固体的标题化合物。ESI-MS：计算的MW 638.7；实测值639.4[M+1]+。
实施例10.Br-FA6的制备。
步骤A.(2-(2-(2-十四烷酰胺基乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(1-3)。
将十八烷二酸单叔丁酯酸(0.18g，0.5mmol)溶解在5mL的DMF中。添加HATU(0.2g，0.55mmol)和DIPEA(0.1mL，0.55mmol)，随后添加Boc-NH-PEG3-NH2(0.12g，0.5mmol)。然后将反应混合物搅拌6h，并去除溶剂。用EtOAc(3x 10mL)萃取产物。将有机层依次用饱和NaHCO3、冷HCl(1M)和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速柱色谱法纯化，以87％的产物产率得到0.28g呈白色固体的(2-(2-(2-十四烷酰胺基乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯。ESI-MS：计算的MW 644.5；实测值645.5[M+1]+。
步骤B.1-溴-2,16-二氧代-6,9,12-三氧杂-3,15-二氮杂三十三烷-33-酸(Br-FA6)。
将1-3(65mg，0.1mmol)在DCM(2mL)中的溶液用TFA(4mL)处理4h。将混合物浓缩，随后在0℃下添加在5mL DCM中的溴乙酸酐(26mg，0.1mmol)、DIPEA(35μL，0.2mmol)。然后将反应混合物搅拌2h，并去除溶剂。将产物通过HPLC纯化，以70％的产物产率得到35mg呈白色固体的标题化合物。ESI-MS：计算的MW 608.3；实测值609.4[M+1]+。
实施例11.Br-FA7的固相合成。
通过分别用单Fmoc乙二胺盐酸盐和[2-[2-(Fmoc-氨基)乙氧基]乙氧基]乙酸代替Fmoc-Lys(ivDde)-OH和Fmoc-PEG2-丙酸，以与Br-FA2类似的方式制备标题化合物。通过制备型HPLC纯化并冻干，以约25％的产物产率产生纯度大于95％的呈白色粉末的标题化合物。通过ESI-MS分析肽的分子量：计算的MW 896.9；实测值898.1[M+1]+。
实施例12.Br-FA8的制备。
通过用棕榈酸代替十八烷二酸单叔丁酯，以与Br-FA2类似的方式制备标题化合物。通过制备型HPLC纯化并冻干，以约29％的产物产率产生纯度大于95％的呈白色粉末的标题化合物。通过ESI-MS分析肽的分子量：计算的MW 822.4；实测值823.6[M+1]+。
实施例13.包涵体的制备。
将表达松弛素类似物的细胞离心以产生细胞团块。将细胞团块重悬于裂解缓冲液(100mM Tris，pH 8，100mM NaCl，1％Triton-X100，2mM EDTA)中，并通过穿过在18,000psi下运行的French压力单元至少3次进行裂解，同时在每次穿过后将细胞悬浮液冷却至4℃。通过在15,000rpm、4℃下离心45min使裂解的细胞悬浮液变澄清。该团块含有完整的细胞、细胞碎片以及包涵体蛋白。因此将团块洗涤多次以将包涵体蛋白与其它物质分离，简言之，在将上清液倒出后，采用组织匀浆器将团块重悬于裂解缓冲液中并进行离心，该程序重复至少3次。为了将Triton-X 100从团块中去除，将团块用洗涤缓冲液(100mM Tris，pH 8，100mM NaCl，1％Triton-X100，2mM EDTA)洗涤至少两次；团块的洗涤通过经由匀浆化的重悬以及随后的离心来进行。然后直接将团块用于松弛素类似物的体外重折叠而无需任何进一步的纯化。
实施例14.松弛素类似物的重折叠。
将来自实施例13的细胞团块用于松弛素类似物的体外重折叠。采用氧化的/还原的谷胱甘肽进行松弛素类似物的重折叠。将包涵体溶解在8M盐酸胍(GdnHCl)中。使用40mLGdnHCl溶解从1L大肠杆菌培养物中分离的包涵体团块。在蛋白质溶解后，通过以15000rpm离心30min来沉淀不可溶的部分。然后采用分子量截止值为3,000的Amicon Ultra(FisherScientific)离心过滤单元将溶解的蛋白质浓缩至10-15mL。然后将变性的蛋白质稀释至300mL的重折叠缓冲液(440mM精氨酸，55mM Tris，pH 8.2，含有2mM GSH、10mM GSSG)中。重折叠继续进行1-2小时，并通过添加TFA至pH 2而猝灭。然后将沉淀物离心成团块，并将上清液转移至离心单元中并浓缩至2-3mg/mL。然后以设置为4.0mL/min的流速，使用PhenomenexJupiter C5柱(250×4.6mm)，通过半制备型HPLC来纯化浓缩的蛋白质混合物。通过LC-MS分析级分中的所需蛋白质，然后合并及冻干。
实施例15.脂质与松弛素的缀合。
由于观察到松弛素中的游离巯基在通常进行酶消化的情况下在碱性pH下导致混乱，因此所有的酶处理(胰蛋白酶/Cp-B或TEV蛋白酶)均在对半胱氨酸加帽后进行。将来自实施例14的冻干蛋白质溶解在0.25％TFA中。将聚乙二醇化的脂质溶解在pH 8.5的ACN乙腈/100mM NH4HCO3缓冲液(1:1)中。然后将松弛素添加至混合物中，并且反应在室温下进行2小时；通过LC-MS检查反应的进程。在反应完成后，随后将混合物冻干。
实施例16.松弛素前体向双链前体的酶促转化。
将来自实施例15的冻干粉末重悬于pH8的、含有1mM CaCl2的50mM Tris缓冲液中。将胰蛋白酶(1:100)添加至该混合物中，并将混合物在室温下温育1小时。1小时后，将羧肽酶-B(对于1mg蛋白质为10个单位)添加至混合物中，并通过LC-MS分析监控切割的进程。在完全切割后，通过添加乙酸将混合物的pH调至4。将混合物冻干并通过半制备型HPLC进行纯化。
实施例17.通过TEV蛋白酶对His-标签的切割。
将实施例16的冻干蛋白质重新溶解于含有3mM GSH:0.5mM GSSG的PBS缓冲液中。将Tev蛋白酶添加至混合物中并在室温下温育过夜。通过LC-MS分析确认标签的切割。
实施例18.毒素-550类似物的基因构建和表达。
通过聚合酶循环装配制备插入片段，其中将正向和反向引物退火以产生DNA片段，该DNA片段通过正向和反向引物进一步富集。然后用限制性消化酶(Bam I/Hind-III)消化扩增的片段。然后将制备的插入片段连接到具有PET骨架的载体内，然后通过DNA测序确认编码的DNA片段。将毒素-550构建体(pET/Txin-550)转化到大肠杆菌菌株BL21(DE3)中。在37℃、剧烈摇动(250rpm)下，将转化的大肠杆菌细胞在TB液体培养基(terrific broth)(含有50μg/ml卡那霉素)中培养至OD600nm＝1.0。为了诱导蛋白质的表达，添加IPTG储备溶液(1M)至0.5mM的最终浓度，并将细胞在26℃、250rpm摇动下连续温育24h。在第二天，通过离心(6000rpm，15min)收获细胞。
包涵体的制备
将细胞团块重悬于裂解缓冲液(100mM Tris，pH 8，100mM NaCl，1％Triton-X100，2mM EDTA)中，并通过穿过在18,000psi下运行的French压力单元至少3次进行裂解，同时在每次穿过后将细胞悬浮液冷却至4℃。通过在15,000rpm、4℃下离心45min使裂解的细胞悬浮液变澄清。该团块含有完整的细胞、细胞碎片以及包涵体蛋白。将团块洗涤多次以将包涵体蛋白与细胞的其余物质以及其它细胞碎片分离。简言之，在将上清液倒出后，采用组织匀浆器将团块重悬于裂解缓冲液中并进行离心，该程序重复至少3次。为了将Triton-X 100从团块中去除，将团块用洗涤缓冲液(100mM Tris，pH 8，100mM NaCl，1％Triton-X100，2mMEDTA)洗涤至少两次，团块的洗涤通过经由匀浆化的重悬以及随后的离心来进行。然后直接将团块用于体外重折叠而无需任何进一步的纯化。
实施例19.毒素-550类似物的重折叠。
采用氧化的/还原的谷胱甘肽进行重折叠。将包涵体(如在实施例18中的)溶解在8M盐酸胍(GdnHCl)中。使用10mL GdnHCl溶解从1L大肠杆菌培养物中分离的包涵体团块。在蛋白质溶解后，添加另外10mL的Tris-HCL缓冲液(50mM)，并通过以15000rpm离心30min来沉淀不可溶的部分。然后将溶解的上层变性蛋白质稀释至200mL的重折叠缓冲液中。用于稀释溶解的上层变性蛋白质的各种重折叠缓冲液在下表中示出：
图10示出了毒素-500肽(野生型)的二硫键模式和半胱氨酸结毒素-550肽的示例性体外折叠途径，中间的结构示出了双二硫键中间体，其中二硫键在半胱氨酸I与半胱氨酸IV之间以及在半胱氨酸II与半胱氨酸V之间形成。
采用了各种重折叠途径，除了在4小时内观察到三个二硫键的产物的2M(NH4)2SO4重折叠缓冲液之外，大多数的重折叠缓冲液条件产生作为主要产物的双二硫键中间体。所述三个二硫键的产物含有毒素-550肽，在半胱氨酸I与半胱氨酸IV之间、在半胱氨酸II与半胱氨酸V之间以及在半胱氨酸III与半胱氨酸VI之间形成二硫键。
实施例20.脂质与毒素-550的缀合。
然后将重折叠的毒素-550用PBS、2％TFA进行缓冲液更换，以在与脂质缀合之前除去过量的谷胱甘肽。将聚乙二醇化的脂质溶解在pH8.5的ACN乙腈/100mM NH4HCO3缓冲液(1:1)中。然后将毒素添加至混合物中，并且反应在室温下进行2小时；通过LC-MS检查反应的进程。在反应完成后，然后将混合物冻干并通过采用C18-phenomenex柱的RP-HPLC进行纯化。包含与毒素-550附接的脂质的脂质缀合物在图16B中作为条目11-13示出。括号表示在脂质缀合物中的半胱氨酸残基之间形成的二硫键。
实施例21.脂质与泌酸调节肽以及艾塞那肽衍生物的缀合。
采用固相肽合成法化学合成泌酸调节肽Cys38(例如，Oxm-Cys38，SEQ ID NO:24)和艾塞那肽Cys40(例如，Ex4-Cys40，SEQ ID NO:25)。将聚乙二醇化的脂质溶解在pH 8.5的ACN乙腈/100mM NH4HCO3缓冲液(1:1)中。将半胱氨酸突变体溶解在ACN乙腈/100mM NH4HCO3缓冲液中，随后添加至聚乙二醇化的脂质混合物中，并且反应在室温下进行2小时。通过LC-MS检查反应的进程。在反应完成后，然后将混合物冻干并通过采用C18-phenomenex柱的RP-HPLC进行纯化。
实施例22.XTEN与松弛素衍生物的缀合。
将冻干的蛋白质，即具有游离半胱氨酸的重折叠松弛素重悬于在水和乙腈混合物中的0.25％TFA中。添加碘乙酰化的XTEN 288或864(1.2当量；在N-末端碘乙酰化)，随后采用1M碳酸氢铵将pH调节至8.5。反应在室温下进行2小时；通过LC-MS检查反应的进程。在反应完成后，在通过阴离子交换色谱法(Mono-Q)纯化之前对混合物进行缓冲液更换。然后收集所需级分，并依照与实施例16中示例的类似的程序使该级分经历小-C-链的切割。将切割反应猝灭，并使其经受RP-HPLC，以纯化XTEN-松弛素缀合物。选择的数据在表3中示出。
表1中的下列化合物采用类似的程序制备。其它实例在图16A-B和图17中示出。
表1.
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*X可以是Cl、I、Br、马来酰亚胺或作为肽(TA)的一部分的氨基酸；Y可以是OH或作为肽(TA)的一部分的氨基酸；Z可以是作为氨基酸(该氨基酸是肽(TA)的一部分)的一部分的S或者是作为脂质衍生物的一部分的S(以形成二硫键)。
实施例23.测量Ex4和Oxm肽的生物活性。
Ex4是一种GLP1R激动剂，而Oxm是一种GLP1R和GCGR双重激动剂。根据稳定表达GLP1R和GCGR受体的Hek293细胞中的腺苷酸环化酶活性的刺激来确定体外活性。使稳定的GCGR和GLP1R受体表达细胞保持在补充有200ng/ml Zeocin(Invitrogen)的Dulbecco改良Eagle培养基/F-12培养基中。通过用CRE-Luc慢病毒(Qiagen)对这些超表达受体的HEK293T细胞进行慢病毒转导，生成环AMP响应性元件驱动的萤光素酶(CRE-Luc)报道基因系，并用嘌呤霉素(2μg/mL)选择两周。使用报道基因试验检测cAMP水平和Ex-4或Oxm对GLP1R和GCGR的激活。
试验细节：在384孔固体底部白色板中的50μL含10％FBS的Dulbecco改良Eagle培养基/F-12培养基中，以每孔5x103个细胞的密度接种表达GLP1R和CRE-Luc的HEK293T细胞。将细胞在37℃下预温育过夜。一式三份添加不同浓度的肽(0.001nM至100nM)，温育18小时，并通过添加10μL的Bright Glo(Promega)检测萤光素酶活性。在Envision(Perkin Elmer)上记录发光。在非线性曲线拟合之后计算EC50。对于GCGR活性，采用具有GCGR和CRE-Luc的报道分子细胞系。选择的数据示于表3中。
实施例24.测量毒素肽的生物活性。
采用测量NaV 1.7电流的标准运行条件，在IonFlux HT上测定毒素-550肽。简言之，将超表达人Nav1.7(PrecisION,Millipore)的α和β-1亚基的HEK293细胞进行胰蛋白酶化，在无血清的培养基中生长，并使其在室温下摇动30分钟。将化合物以所需浓度稀释至标准细胞外林格氏溶液(ECS)中。将细胞用ECS洗涤一次，随后以4百万个细胞/mL的浓度在ECS中生长。根据标准方案设置IonFlux HT板。
根据以下电压阶跃(voltage step)方案在IonFlux上测量NaV 1.7电流：
1.将细胞保持在-90mV下持续10秒。
2.将细胞从-90mV阶跃至-120mV，持续100ms。
a.然后阶跃至-10mV持续30ms，并且
b.然后回到-90mV持续30ms。
使基线电流稳定5分钟，然后建立对照基线(仅ECS)。施加化合物20分钟，随后施加阳性对照(肽NaV1.7阻断剂)。
然后对数据进行漏减(Leak subtraction)，并如下分析所得电流：
1.对所有电流扫描进行游标减除(Cursor subtraction)(基线-峰)以确定电流(I)的幅度。
2.取每个贴片的ECS基线电流作为最大电流(Imax)。
3.对于给定的时间(例如，化合物添加后10分钟)，阻断百分比按I/Imax计算。
选择的数据在表3中示出。
实施例25.对半衰期延长的体内药代动力学(PK)研究。
采用皮下(sc)、经口(po)、静脉内(iv)给药，在小鼠中施用脂质缀合的松弛素或其它治疗剂。根据在不同时间点(例如，静脉内PK 5min、0.5h、1h、2h 4h、8h、24h、48h、96h和144h，以及皮下PK.15min、0.5h、1h、2h、4h、8h、24h、48h、96h和144h)的ms、lgr7、glp1r和/或gcgr活化确定TA的血浆水平。选择的PK数据在图11、12和15以及表2中示出。
表2.
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表3.
实施例26.急性心力衰竭模型中的药效学(PD)研究和体内功效
在确定PK后，确定适当的剂量方案，并采用皮下、经口或静脉内方式施用脂质缀合的松弛素，以评价脂质缀合的松弛素在功效模型中对血压、尿流量和/或韧带伸长的功效。还在肺和肝脏的博莱霉素诱发的纤维化模型中和/或在老年糖尿病Zucker肥胖大鼠的糖尿病创伤愈合模型中评价了脂质缀合的松弛素。
实施例27.采用小鼠耻骨间韧带生物试验的PD研究。
如Steinetz等人[Endocrinology(1960)67:102–115]所述，通过采用针对松弛素的确立已久且高特异性的小鼠耻骨间韧带生物试验，在CD1小鼠中测定松弛素类似物的生物活性。从研究中选择3-4周龄的雌性CD1处女小鼠。将动物在控制的温度(25℃)和光周期(12:12小时光–暗循环)条件下群养，并使其无限制地获得标准饮食和自来水(或指定的饮用溶液)。在治疗第1天，向小鼠皮下注射在0.1ml芝麻油中的10μg环戊丙酸雌二醇。在第8天，将小鼠分成不同的组：载体对照、野生型松弛素(溶于1％苯并红紫4B在PBS缓冲液中的悬浮液中)和松弛素类似物(溶于20mM NH4Ac缓冲液(pH 6.5)中)。野生型松弛素或松弛素类似物通过皮下注射以不同的剂量施用。在松弛素注射后不同的时间，对小鼠施以安乐死，并采用卡尺测量确定耻骨间韧带的长度。选择的数据在图13和14中示出。
实施例28.脂质缀合的松弛素在急性心力衰竭治疗中的有效性和安全性
目的：将不同剂量的脂质缀合的松弛素与安慰剂进行比较，以确定其在治疗因急性心力衰竭而住院的患者中的有效性和安全性。
研究类型：干预性
研究设计：分配：随机化的
终点分类：安全性/有效性研究
干预模型：平行分配
遮掩：双盲(受试者、照护者、研究者、结果评价者)
主要目的：治疗
主要结果评价指标：急性心力衰竭中呼吸困难的减轻[时间范围：直到第5天][指定为安全性问题：否]
次要结果评价指标：
存活和出院的天数[时间范围：直到第60天][指定为安全性问题：否]
由于心力衰竭或肾衰竭导致的CV死亡或再入院[时间范围：直到第60天][指定为安全性问题：否]
详细说明：
这是静脉内重组松弛素用于治疗因急性失代偿性心力衰竭而住院的患者的体征和症状的干预性、随机化、双盲、以安慰剂为对照的、II/III期试验。II期初步研究已完成；该试验的III期主要部分正在进行。
资格性
具有研究资格的年龄：18岁及以上
具有研究资格的性别：两者
接受健康志愿者：否
标准
入选标准：
因急性心力衰竭而住院
休息或最少用力时呼吸困难
肺充血
能够提供知情同意书
收缩压>125mmHg
限定为30-75mL/min/1.73m2的eGFR的受损肾功能
排除标准：
使用了针对急性心力衰竭的其它静脉内治疗
发烧或脓毒症
近期有重大的神经病学事件
近期有大手术
近期的急性冠脉综合征
近期使用了其它研究药物
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Claims (13)

1.一种式(I)的脂质缀合物(LC)：
TAA1P1L
式(I)
其中：
A1选自
P1为键或者-PEG-A2-；
PEG选自
A2选自
L为十四烷酸、十八烷二酸、十四烷基胺、肉豆蔻酸、硬脂酸、二十二碳六烯酸或棕榈酸；
X为键、NR5、S或O；
每个R1、R2、R3和R4独立地选自H、卤代、CN、–SR5、烷基、环烷基、卤代烷基、–NR5R5和–OR5；
每个R5独立地为H、烷基、卤代烷基、芳基烷基或杂烷基；R6为OH或–NR5R5；
每个R7独立地选自H、烷基、卤代烷基、芳基烷基和杂烷基；
m和n独立地为1、2、3或4；
r为1、2、3或4；
s为1、2、3、4或5；
p为2、3或4；且
q为2、3或4；并且
TA结构如下：
其中X2为-A1-P1-L。
2.根据权利要求1所述的LC，其中所述TA的半胱氨酸残基的硫原子经由化学键与A1连接。
3.根据权利要求1所述的LC，其中该LC选自以下：
4.一种药物组合物，其包含权利要求1-3中任一项所述的LC。
5.权利要求1-3中任一项所述的LC在制备用于治疗有需要的受试者的疾病或状况的药物中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其中所述疾病或状况为心血管病症。
7.根据权利要求5所述的应用，其中所述疾病或状况为急性心力衰竭。
8.根据权利要求5所述的应用，其中所述疾病或状况为纤维化。
9.根据权利要求5所述的应用，其中所述疾病或状况为疼痛。
10.根据权利要求9所述的应用，其中所述疼痛为神经病理性疼痛或炎性疼痛。
11.根据权利要求5所述的应用，其中所述LC与一种或多种附加治疗剂一起施用。
12.根据权利要求11所述的应用，所述一种或多种附加治疗剂选自抗炎药、他汀类药物、利尿剂、β-阻断剂、血管紧张素转化酶抑制剂、血管紧张素II受体阻断剂和其任意组合。
13.根据权利要求11所述的应用，其中所述一种或多种附加治疗剂为阿司匹林。
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CN105792851A CN105792851A (zh) 2016-07-20
CN105792851B true CN105792851B (zh) 2023-10-10

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ID=52666336

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201480062386.7A Active CN105792851B (zh) 2013-09-13 2014-09-12 修饰的治疗剂及其组合物

Country Status (10)

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US (2) US10286078B2 (zh)
EP (1) EP3043824B1 (zh)
JP (2) JP6822839B2 (zh)
KR (1) KR102302634B1 (zh)
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AU (1) AU2014318579A1 (zh)
CA (1) CA2924109A1 (zh)
ES (1) ES2927607T3 (zh)
HK (1) HK1226301A1 (zh)
WO (1) WO2015038938A1 (zh)

Families Citing this family (36)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105792851B (zh) 2013-09-13 2023-10-10 斯克利普斯研究所 修饰的治疗剂及其组合物
CN106456589B (zh) 2013-12-18 2020-07-07 斯克利普斯研究所 修饰的治疗剂、订合的肽脂质缀合物及其组合物
US10046058B2 (en) 2014-12-02 2018-08-14 Rezolute, Inc. Use of hydrophobic organic acids to increase hydrophobicity of proteins and protein conjugates
ES2784603T3 (es) 2015-06-02 2020-09-29 Novo Nordisk As Insulinas con extensiones recombinantes polares
JP2018516874A (ja) 2015-06-04 2018-06-28 アントリアバイオ インコーポレイテッドＡｎｔｒｉａｂｉｏ，Ｉｎｃ． 部位特異的タンパク質コンジュゲートの調製のためのアミンｐｅｇ化方法
US20190000928A1 (en) * 2015-06-17 2019-01-03 The California Institute For Biomedical Research Modified therapeutic agents and compositions thereof
CN106554404B (zh) * 2015-09-25 2020-11-20 博瑞生物医药（苏州）股份有限公司 艾塞那肽修饰物及其用途
MA43348A (fr) 2015-10-01 2018-08-08 Novo Nordisk As Conjugués de protéines
KR102668200B1 (ko) 2015-10-28 2024-05-23 주식회사유한양행 지속형 fgf21 융합 단백질 및 이를 포함하는 약학적 조성물
KR102670157B1 (ko) 2015-10-28 2024-05-29 주식회사유한양행 이중 작용 단백질 및 이를 포함하는 약학적 조성물
EA201891469A1 (ru) 2015-12-23 2018-12-28 Дзе Джонс Хопкинс Юниверсити Агонист длительного действия glp-1r как терапия для лечения неврологических и нейродегенеративных патологических состояний
CN109111517B (zh) * 2016-06-28 2022-12-20 江苏豪思生物科技有限公司 一种经修饰的生长分化因子及其制备方法和应用
CN106361405B (zh) * 2016-10-09 2017-07-28 上海岐华医疗科技有限公司 改进的超声外科手术系统
US10774127B2 (en) 2016-10-12 2020-09-15 University Of Copenhagen Peptide dual agonists of GIPR and GLP2R
CN110121355B (zh) 2016-11-10 2023-09-12 株式会社柳韩洋行 用于预防或治疗肝炎、肝纤维化和肝硬化的包含融合蛋白的药物组合物
CN106432471B (zh) * 2016-12-14 2019-12-03 江苏师范大学 一种新型非洲爪蟾胰高血糖素样肽-1(glp-1)缀合肽及其应用
CN108299553B (zh) * 2017-01-13 2021-07-16 博瑞生物医药（苏州）股份有限公司 胃泌酸调节素修饰物
WO2018148419A1 (en) 2017-02-08 2018-08-16 Bristol-Myers Squibb Company Modified relaxin polypeptides comprising a pharmacokinetic enhancer and uses thereof
CN108619490A (zh) * 2017-03-22 2018-10-09 天士力医药集团股份有限公司 一种长效化突变的人源成纤维生长因子的新用途
EP3600439A4 (en) * 2017-03-22 2021-01-13 The Regents of the University of California MODIFIED OLIGONUCLEOTIDES AND THEIR THERAPEUTIC USES
CN110505885A (zh) 2017-04-05 2019-11-26 诺和诺德股份有限公司 寡聚体延伸的胰岛素-Fc缀合物
US11560416B2 (en) 2017-04-21 2023-01-24 Yuhan Corporation Method for producing dual function proteins and its derivatives
US20200261543A1 (en) 2017-10-12 2020-08-20 University Of Copenhagen Combination therapy for treatment of bone disorders
WO2019085773A1 (zh) * 2017-11-06 2019-05-09 中山大学 基于胃泌酸调节素类似物glp-1r/gcgr双靶点激动剂多肽治疗特发性肺间质纤维化
BR112020014834A2 (pt) * 2018-01-31 2020-12-08 Sanofi Peptídeos de cadeia b de relaxina lipidada modificada e seu uso terapêutico
CN110568112A (zh) * 2018-06-05 2019-12-13 北京华金瑞清生物医药技术有限公司 一种直接检测艾塞那肽融合蛋白的方法
CN109836486B (zh) * 2019-01-30 2020-09-08 北京双因生物科技有限公司 成纤维生长因子21变体、其融合蛋白及其用途
CA3123325A1 (en) * 2019-03-05 2020-09-10 Sunshine Lake Pharma Co., Ltd. A polypeptide molecule and application thereof
WO2020181130A2 (en) * 2019-03-05 2020-09-10 MiRagen Therapeutics, Inc. Polynucleotide conjugates and uses thereof
EP3819307A1 (en) 2019-11-07 2021-05-12 CytoKi Pharma ApS Therapeutic derivatives of interleukin-22
CN113366024A (zh) * 2020-01-08 2021-09-07 上海翰森生物医药科技有限公司 Fgf21突变体蛋白及其融合蛋白
EP3903806A4 (en) * 2020-01-20 2022-08-10 Rudacure Corporation PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR THE TREATMENT OF DISEASES MEDIATED BY TRPV1 ACTIVITY
CN115768801A (zh) * 2020-05-08 2023-03-07 哈佛学院院长等 工程化松弛素及其使用方法
CN114075276A (zh) * 2020-08-17 2022-02-22 成都奥达生物科技有限公司 一种长效松弛素2类似物
CN114478709A (zh) * 2020-11-13 2022-05-13 成都奥达生物科技有限公司 一种长效肝炎病毒进入抑制剂
CN117677640A (zh) * 2021-07-05 2024-03-08 上海翰森生物医药科技有限公司 一种融合蛋白及其医药用途

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5863552A (en) * 1995-11-17 1999-01-26 Yue; Samuel K. Method of treating myofascial pain syndrome with relaxin
CN101568350A (zh) * 2006-10-27 2009-10-28 沈维强 脂质化干扰素及其应用
WO2010096052A1 (en) * 2009-02-19 2010-08-26 Merck Sharp & Dohme Corp. Oxyntomodulin analogs
CN103201285A (zh) * 2010-08-17 2013-07-10 阿姆布埃克斯股份有限公司 经修饰松弛素多肽及其用途
WO2013130683A2 (en) * 2012-02-27 2013-09-06 Amunix Operating Inc. Xten conjugate compositions and methods of making same

Family Cites Families (95)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3887699A (en) 1969-03-24 1975-06-03 Seymour Yolles Biodegradable polymeric article for dispensing drugs
US3854480A (en) 1969-04-01 1974-12-17 Alza Corp Drug-delivery system
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
US4263428A (en) 1978-03-24 1981-04-21 The Regents Of The University Of California Bis-anthracycline nucleic acid function inhibitors and improved method for administering the same
DE3169595D1 (en) 1980-11-10 1985-05-02 Gersonde Klaus Method of preparing lipid vesicles by ultrasonic treatment, the use of this method and apparatus for its application
PH19942A (en) 1980-11-18 1986-08-14 Sintex Inc Microencapsulation of water soluble polypeptides
US4675189A (en) 1980-11-18 1987-06-23 Syntex (U.S.A.) Inc. Microencapsulation of water soluble active polypeptides
IE52535B1 (en) 1981-02-16 1987-12-09 Ici Plc Continuous release pharmaceutical compositions
US4485045A (en) 1981-07-06 1984-11-27 Research Corporation Synthetic phosphatidyl cholines useful in forming liposomes
EP0088046B1 (de) 1982-02-17 1987-12-09 Ciba-Geigy Ag Lipide in wässriger Phase
DE3218121A1 (de) 1982-05-14 1983-11-17 Leskovar, Peter, Dr.-Ing., 8000 München Arzneimittel zur tumorbehandlung
EP0102324A3 (de) 1982-07-29 1984-11-07 Ciba-Geigy Ag Lipide und Tenside in wässriger Phase
US4452775A (en) 1982-12-03 1984-06-05 Syntex (U.S.A.) Inc. Cholesterol matrix delivery system for sustained release of macromolecules
US4544545A (en) 1983-06-20 1985-10-01 Trustees University Of Massachusetts Liposomes containing modified cholesterol for organ targeting
HUT35524A (en) 1983-08-02 1985-07-29 Hoechst Ag Process for preparing pharmaceutical compositions containing regulatory /regulative/ peptides providing for the retarded release of the active substance
DE3483949D1 (de) 1983-09-26 1991-02-21 Udo Dr Med Ehrenfeld Mittel und erzeugnis fuer die diagnose und therapie von tumoren sowie zur behandlung von schwaechen der zelligen und humoralen immunabwehr.
EP0143949B1 (en) 1983-11-01 1988-10-12 TERUMO KABUSHIKI KAISHA trading as TERUMO CORPORATION Pharmaceutical composition containing urokinase
DE3413608A1 (de) 1984-04-11 1985-10-24 Hoechst Ag, 6230 Frankfurt Implantierbare zubereitungen von regulatorischen peptiden mit gesteuerter freisetzung und verfahren zu ihrer herstellung
US5133974A (en) 1989-05-05 1992-07-28 Kv Pharmaceutical Company Extended release pharmaceutical formulations
US6565841B1 (en) 1991-03-15 2003-05-20 Amgen, Inc. Pulmonary administration of granulocyte colony stimulating factor
IT1247472B (it) 1991-05-31 1994-12-17 Fidia Spa Processo per la preparazione di microsfere contenenti componenti biologicamente attivi.
US5407686A (en) 1991-11-27 1995-04-18 Sidmak Laboratories, Inc. Sustained release composition for oral administration of active ingredient
US5470582A (en) 1992-02-07 1995-11-28 Syntex (U.S.A.) Inc. Controlled delivery of pharmaceuticals from preformed porous polymeric microparticles
DK0674506T3 (da) 1992-12-02 2001-01-08 Alkermes Inc Væksthormonholdige mikrosfærer med styret frigivelse
DE69432704T2 (de) 1993-06-21 2004-02-26 Genentech, Inc., South San Francisco Verfahren zur Herstellung von humanen Relaxin
US6011007A (en) 1993-09-17 2000-01-04 Novo Nordisk A/S Acylated insulin
ATE204882T1 (de) 1993-09-17 2001-09-15 Novo Nordisk As Acyliertes insulin
US6869930B1 (en) 1993-09-17 2005-03-22 Novo Nordisk A/S Acylated insulin
US6372716B1 (en) 1994-04-26 2002-04-16 Genetics Institute, Inc. Formulations for factor IX
ATE197398T1 (de) 1994-09-09 2000-11-11 Takeda Chemical Industries Ltd Zubereitung mit verzögerter freigabe eines metallsalz eines peptids
AU695207B2 (en) 1995-03-28 1998-08-06 Fidia Farmaceutici S.P.A. Nanospheres comprising a biocompatible polysaccharide
US5911997A (en) 1995-06-07 1999-06-15 Connetics Corporation Relaxin-like factor and methods and uses thereof
US5811395A (en) * 1995-06-07 1998-09-22 Medical University Of South Carolina Relaxin analogs and derivatives methods and uses thereof
PL184531B1 (pl) 1995-06-07 2002-11-29 Alkermes Inc Kompozycja o opóźnionym uwalnianiu ludzkiego hormonu wzrostu do wytwarzania leku do terapii
ZA965368B (en) 1995-07-14 1997-01-14 Novo Nordisk As A pharmaceutical formulation
US6685940B2 (en) 1995-07-27 2004-02-03 Genentech, Inc. Protein formulation
US5736152A (en) 1995-10-27 1998-04-07 Atrix Laboratories, Inc. Non-polymeric sustained release delivery system
US5866538A (en) 1996-06-20 1999-02-02 Novo Nordisk A/S Insulin preparations containing NaCl
US6268343B1 (en) 1996-08-30 2001-07-31 Novo Nordisk A/S Derivatives of GLP-1 analogs
US6444641B1 (en) 1997-10-24 2002-09-03 Eli Lilly Company Fatty acid-acylated insulin analogs
ZA989744B (en) 1997-10-31 2000-04-26 Lilly Co Eli Method for administering acylated insulin.
DE19822820A1 (de) * 1998-05-20 1999-11-25 Biotechnolog Forschung Gmbh Pharmazeutisches Präparat zur Wundbehandlung
US6566329B1 (en) 1999-06-28 2003-05-20 Novo Nordisk A/S Freeze-dried preparation of human growth hormone
AR033903A1 (es) 2001-05-21 2004-01-07 Inhale Therapeutic Syst Una composicion de insulina modificada quimicamente para la administracion pulmonar
US7297348B2 (en) 2002-07-19 2007-11-20 Omeros Corporation Biodegradable triblock copolymers, synthesis methods therefore, and hydrogels and biomaterials made there from
US20050176108A1 (en) 2003-03-13 2005-08-11 Young-Min Kim Physiologically active polypeptide conjugate having prolonged in vivo half-life
US7919118B2 (en) 2003-05-12 2011-04-05 Affymax, Inc. Spacer moiety for poly (ethylene glycol) modified peptide based compounds
US20060183667A1 (en) 2003-07-11 2006-08-17 Novo Nordisk A/S Stabilised insulin compositions
SI2932981T1 (sl) 2003-09-19 2021-11-30 Novo Nordisk A/S Albumin-vezavni derivati GLP-1
EP1576952A1 (en) 2004-03-18 2005-09-21 OctoPlus Technologies B.V. Hydrogel microspheres with improved release profile
US7202332B2 (en) 2004-05-27 2007-04-10 New York University Methods for preparing internally constrained peptides and peptidomimetics
WO2006066258A2 (en) 2004-12-17 2006-06-22 Neose Technologies, Inc. Lipoconjugation of peptides
TWI372629B (en) 2005-03-18 2012-09-21 Novo Nordisk As Acylated glp-1 compounds
US20080305519A1 (en) 2006-02-23 2008-12-11 Qing Lin Biochemical method for specific protein labeling
US8217145B2 (en) * 2006-03-16 2012-07-10 The Scrips Research Institute Genetically programmed expression of proteins containing the unnatural amino acid phenylselenocysteine
RU2008141280A (ru) * 2006-03-20 2010-04-27 Мерк энд Ко., Инк. (US) Агонисты рецептора нейромедина u и их применение
CA2646598C (en) 2006-03-21 2014-08-19 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Peptide-peptidase inhibitor conjugates and methods of using same
EP2636680A3 (en) 2006-05-26 2013-12-11 Amylin Pharmaceuticals, LLC Composition and methods for treatment of congestive heart failure
WO2008037735A1 (en) 2006-09-27 2008-04-03 Novo Nordisk A/S Method for making maturated insulin polypeptides
JP4616237B2 (ja) 2006-11-07 2011-01-19 日本電信電話株式会社 シリコン化合物薄膜の形成方法
JP5656407B2 (ja) 2006-12-14 2015-01-21 エイルロン セラピューティクス，インコーポレイテッド ビス−スルフヒドリル大環状化系
US7981998B2 (en) 2006-12-14 2011-07-19 Aileron Therapeutics, Inc. Bis-sulfhydryl macrocyclization systems
AU2008218116B2 (en) 2007-02-23 2012-04-05 Aileron Therapeutics, Inc. Triazole macrocycle systems
WO2008130066A1 (en) 2007-04-20 2008-10-30 Kang Choon Lee Mono modified exendin with polyethylene glycol or its derivatives and uses thereof
US20110046056A1 (en) 2007-06-20 2011-02-24 Elisabetta Bianchi Apoa-1 peptide mimetics
GB2471588A (en) 2008-02-08 2011-01-05 Aileron Therapeutics Inc Therapeutic peptidomimetic macrocycles
US20110144303A1 (en) 2008-04-08 2011-06-16 Aileron Therapeutics, Inc. Biologically Active Peptidomimetic Macrocycles
WO2009126292A2 (en) 2008-04-08 2009-10-15 Aileron Therapeutics, Inc. Biologically active peptidomimetic macrocycles
US8586707B2 (en) 2008-09-16 2013-11-19 The Research Foundation Of State University Of New York Stapled peptides and method of synthesis
EP2342221B1 (en) 2008-09-22 2018-11-07 Aileron Therapeutics, Inc. Methods for preparing purified polypeptide compositions
CA2737920A1 (en) 2008-09-22 2010-03-25 Aileron Therapeutics, Inc. Peptidomimetic macrocycles
CN102482336B (zh) 2008-09-22 2015-05-06 爱勒让治疗公司 拟肽大环化合物
AU2009316288B2 (en) 2008-11-24 2016-05-19 Aileron Therapeutics, Inc. Peptidomimetic macrocycles with improved properties
US9175047B2 (en) 2009-01-14 2015-11-03 Aileron Therapeutics, Inc. Peptidomimetic macrocycles
CN116925238A (zh) * 2009-02-03 2023-10-24 阿穆尼克斯制药公司 延伸重组多肽和包含该延伸重组多肽的组合物
WO2011039096A1 (en) 2009-09-30 2011-04-07 Glaxo Group Limited Drug fusions and conjugates with extended half life
CN102655875A (zh) 2009-10-14 2012-09-05 爱勒让治疗公司 改善的拟肽大环化合物
CN111560060A (zh) 2009-12-16 2020-08-21 诺沃—诺迪斯克有限公司 双酰化glp-1衍生物
US20110243943A1 (en) * 2010-04-02 2011-10-06 Athena Discovery, Inc. Treatment using relaxin-fusion proteins with extended in vivo half-lives
BR112013000603A2 (pt) * 2010-07-09 2016-07-05 Jv Bio Srl anticorpos conjugados com lipídios
KR101382593B1 (ko) 2010-07-21 2014-04-10 한미사이언스 주식회사 신규한 지속형 글루카곤 결합체 및 이를 포함하는 비만 예방 및 치료용 약학적 조성물
US9567386B2 (en) * 2010-08-17 2017-02-14 Ambrx, Inc. Therapeutic uses of modified relaxin polypeptides
WO2012083078A2 (en) 2010-12-15 2012-06-21 The Research Foundation Of State University Of New York Croos-linked peptides and proteins, methods of making same, and uses thereof
EA201390941A1 (ru) 2010-12-22 2013-12-30 Индиана Юниверсити Рисерч Энд Текнолоджи Корпорейшн Аналоги глюкагона, проявляющие активность на рецепторе gip
CN103402536A (zh) 2010-12-22 2013-11-20 马克迪亚生物科技公司 用gip和glp-1受体活性的基于胰高血糖素的肽来治疗代谢异常和肥胖的方法
CA2834657A1 (en) 2011-04-29 2012-11-01 Kinemed, Inc. Chemical modification of apolipoprotein mimetic peptides for the production of therapeutic agents
CN103930440A (zh) 2011-07-01 2014-07-16 拜耳知识产权有限责任公司 松弛素融合多肽及其用途
CN103649116A (zh) 2011-07-08 2014-03-19 拜耳知识产权有限责任公司 释放松弛素的融合蛋白及其用途
TWI643868B (zh) 2011-10-18 2018-12-11 艾利倫治療公司 擬肽巨環化合物
CN104144695A (zh) 2012-02-15 2014-11-12 爱勒让治疗公司 三唑交联的和硫醚交联的拟肽大环化合物
US9273093B2 (en) 2012-10-11 2016-03-01 Protagonist Therapeutics, Inc. α4β7 peptide dimer antagonists
MX2015005244A (es) 2012-11-01 2015-07-14 Aileron Therapeutics Inc Aminoacidos disustituidos y metodos de preparacion y el uso de los mismos.
CN105792851B (zh) 2013-09-13 2023-10-10 斯克利普斯研究所 修饰的治疗剂及其组合物
CN106456589B (zh) 2013-12-18 2020-07-07 斯克利普斯研究所 修饰的治疗剂、订合的肽脂质缀合物及其组合物
MA41794A (fr) 2015-03-18 2018-01-23 The California Institute For Biomedical Res Agents thérapeutiques modifiés et compositions associées

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5863552A (en) * 1995-11-17 1999-01-26 Yue; Samuel K. Method of treating myofascial pain syndrome with relaxin
CN101568350A (zh) * 2006-10-27 2009-10-28 沈维强 脂质化干扰素及其应用
WO2010096052A1 (en) * 2009-02-19 2010-08-26 Merck Sharp & Dohme Corp. Oxyntomodulin analogs
CN102573872A (zh) * 2009-02-19 2012-07-11 默沙东公司 胃泌酸调节素类似物
CN103201285A (zh) * 2010-08-17 2013-07-10 阿姆布埃克斯股份有限公司 经修饰松弛素多肽及其用途
WO2013130683A2 (en) * 2012-02-27 2013-09-06 Amunix Operating Inc. Xten conjugate compositions and methods of making same

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
刘耕陶.肝纤维化与抗肝纤维化药物.《中药药理研究与药物创新》.2006,55. *

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