BR112020014834A2

BR112020014834A2 - Peptídeos de cadeia b de relaxina lipidada modificada e seu uso terapêutico

Info

Publication number: BR112020014834A2
Application number: BR112020014834-2A
Authority: BR
Inventors: Olivier DUCLOS; Stéphane ILLIANO; Sergio Mallart; Claire MINOLETTI-HOCHEPIED; Elisabetta Bianchi; Raffaele Ingenito; Paola MAGOTTI; Alessia Santoprete
Original assignee: Sanofi
Priority date: 2018-01-31
Filing date: 2019-01-30
Publication date: 2020-12-08
Also published as: US20190233494A1; AU2019214358B2; US20210292387A1; JP2021512099A; CN111770934A; JP7295871B2; US11725036B2; MA52994A; AU2019214358A1; PH12020551118A1; CO2020008308A2; WO2019149782A1; RU2020126210A; KR20200116085A; SG11202006903WA; TW201940505A; MX2020008096A; CA3089657A1; IL276170A; TWI763972B

Abstract

a presente invenção refere-se a um peptídeo de relaxina de cadeia única biologicamente ativa tendo a seguinte fórmula (i): nter-ac-x10-e-g-r-e-x15-v-r-x18-x19-i-x21-x22-e-g-x25-s-x27-x28-x29-x30-x31-x32-x33-nh2-cter ou um sal ou solvato dos mesmos. ela também concerne uma composição farmacêutica compreendendo pelo menos um peptídeo da invenção, e o peptídeo ou a composição farmacêutica para seu uso como um medicamento.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "PEPTÍ- DEOS DE CADEIA B DE RELAXINA LIPIDADA MODIFICADA, SEU USO E COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA QUE OS COMPREENDE".

CAMPO DA INVENÇÃO

[001] A presente invenção refere-se a análogos de peptídeo da cadeia-B de Relaxina-2 capaz de ativar o receptor de RXKFP1.

[002] Em particular, a presente invenção refere-se a análogos de peptídeo da cadeia-B de Relaxina-2 lipidada capaz de ativar o receptor de RXFP1.

[003] Além disso, a presente invenção fornece composições far- macêuticas compreendendo pelo menos os referidos peptídeos, e um peptídeo ou composição farmacêutica do mesmo de acordo com a in- venção para seu uso como um medicamento, e em particular para seu uso no tratamento e/ou prevenção de várias doenças ou condições implicando receptor de RXKFP1, mais particularmente uma doença ou condição selecionada de: - o grupo que consiste em fibrose; doenças fibróticas, em particular esclerose sistêmica, esclerodermia e fibromialgia; fibrose pulmonar idiopática; doenças renais envolvendo fibrose; hipertensão pulmonar e pré-eclâmpsia; - o grupo que consiste em doenças cardíacas e vasculares, em particular, do grupo que consiste em insuficiência cardíaca aguda ou crônica, insuficiência cardíaca sistólica ou diastólica, doença de ar- téria coronariana, aterosclerose, angina microvascular e complicação cardiovascular de diabetes; e/ou - o grupo que consiste em insuficiências renais, em particu- lar, disfunção renal em cirrose; doença renal crônica e lesão renal aguda.

ANTECEDENTE DA INVENÇÃO

[004] Relaxina-2 Humana (Relaxina H2) é um hormônio peptídico

6-kDa de 53 aminoácidos. Sua estrutura consiste em duas cadeias de polipeptídeo separadas, isto é, Cadeia A de Relaxina H2 (SEQ ID NO: 100) e Cadeia B de Relaxina H2 (SEQ ID NO: 101) reticuladas por du- as ligações de dissulfeto (S-S), com uma terceira ligação intra-cadeia S-S localizada na cadeia A como segue: Cadeia A de Relaxina H2 : H-Gln-Leu-Tyr-Ser-Ala-Leu-Ala- Asn-Lys-Cys*-Cys**-His-Val-Gly-Cys*-Thr-Lys-Arg-Ser-Leu-Ala-Arg- Phe-Cys***-OH (SEQ ID NO: 100) Cadeia B de Relaxina H2 : H-Asp-Ser-Trp-Met-Glu-Glu-Val- Ile-Lys-Leu-Cys**-Gly-Arg-Glu-Leu-Val-Arg-Ala-Gln-lle-Ala-lle-Cys***- Gly-Met-Ser-Thr-Trp-Ser-OH (SEQ ID NO: 101) em que Cys*, Cys** e Cys*** indicam as ligações de dissulfeto entre Cisteínas com a mesma marcação.

[005] A Relaxina-2 é um hormônio de peptídeo de ocorrência na- tural produzido pelo corpus luteum com um pico na circulação durante o primeiro trimestre de gravidez de uma mulher. Relaxina-2 pertence à família de peptídeo similar à insulina cujos membros exercem numero- sos efeitos após ligação a diferentes tipos de receptores, classificados como receptores de peptídeo da família Relaxina (RKFPO (RXFP1, RXFP2, RXFP3, e RXFP4).

[006] RXFP1 é o principal receptor para Relaxina. RKFP1 contém um grande domínio extracelular com um único módulo de lipoproteína de baixa densidade classe A (LDLa) na terminação amino e 10 domí- nios de repetição ricos em leucina extracelular (LRRs), seguidos por 7 domínios helicoidais de transmembrana (7TM). O módulo LDLa de RXFP1 é ligado ao domínio LRR por meio de um ligante de resíduo-

32.

[007] A ativação de RKFP1 é um processo de múltiplas etapas complexo. Estudos precedentes demonstraram que Arg13, Argi7 e Ille20, do cassete de arginina (RoXRxxI/V, onde x é qualquer resíduo)

da cadeia B de Relaxina H2 se ligam a Asp231, Asp279, Glu233 e Glu277 localizados em LRR4-8 do domínio LRR de RXFP1. A ligação de ligante apenas não é suficiente para ativar o receptor. Truncação ou substituição do módulo de LDLa resulta em um receptor inativo a despeito da ligação ao domínio extracelular. Um estudo (Bruell, S. et al., Front. Endocrinol. (Lausanne) 4, 171 (2013)), trocando os módulos LDLa de RKFP1 e RXFP2 destacou o papel do ligante na ativação do receptor. As LRRs (sítio de alta afinidade) e as primeiras exoalças (sí- tios de baixa afinidade) dos domínios de transmembrana participam na ligação à Relaxina, enquanto que o módulo de LDLa é requerido para ativação do receptor envolvendo a exoalça 2 (Sethi A. et al. Nature Communications (2016)).

[008] Em algumas espécies, a Relaxina pode também ativar RXFP2, a repetição rica em leucina nativa contendo GPCR para o peptídeo 3 similar à insulina (INSL3). Isto sugere que uma reatividade cruzada potencial pode estar associada com várias atividades biológi- cas de Relaxina, embora atualmente não exista nenhuma evidência de um papel fisiológico para ativação de Relaxina apenas por RXKFP2.

[009] Recentes dados publicados mostraram que existem dife- renças entre as espécies na capacidade de agonistas para ativar RXFP1 com uma diferença específica no domínio ECL3 entre humano e roedor (Huang et al. Frontiers in Endocrinology 2015 Aug 17;6:128). Paralelamente, a atividade agonista polarizada foi descrita para alguns miméticos de cadeia única derivados de Relaxina (Hossain et al.Chem. Sci., 2016, 7, 3805). Entretanto, com base na nomenclatura IUPHAR, RXFP1 é um receptor acoplado a Gs e a via de sinalização principal de RXFP1 leva ao acúmulo de cAMP (monofosfato de adenosine cícli- ca).

[0010] Relaxina foi identificada primeiro como um hormônio de gravidez envolvido não apenas em remodelagem do útero e implante do embrião, porém também na adaptação hemodinâmica de mulher grávida. Isto inclui decréscimo de resistência vascular, aumento do débito cardíaco e aumento de GFR, uma combinação de efeito com o objetivo de melhorar a pós-carga cardíaca. Estas propriedades leva- ram ao uso de Relaxina 2 humana recombinante em diversas experi- ências clínicas no contexto de insuficiência cardíaca aguda.

[0011] Efeitos cardiovasculares benefices de Relaxina, que são atribuídos a alterações na vasculatura renal e sistêmica, também têm sido demonstrados em pacientes de insuficiência cardíaca congestive e aguda em estudos preclínicos e experiências clínicas de fase Il. Em ratos machos e fêmeas normotensivos e hipertensivos conscientes, administração intravenosa aguda e subcutânea crônica de Relaxina aumenta o débito cardíaco e complacência arterial global e reduz a resistência vascular sistêmica, sem afetar a pressão arterial média.

[0012] A Relaxina demonstrou reduzir a pressão arterial media em modelos de rato de hipertensão. As ações vasculares de Relaxina es- tendem-se à modificação de complacência da parede passiva. A infu- são de Relaxina subcutânea crônica em ratos e camundongos aumen- ta a complacência arterial em artérias renal pequena, mesentérica, uterine e carótida. Além disso, a Relaxina tem propriedades antifibróti- ca em modelos animais de fibrose cardíaca e renal.

[0013] Desse modo, a Relaxina pode beneficiar a pacientes com insuficiência cardíaca crônica reduzindo após carga e aliviando a ativi- dade cardíaca, bem como a pacientes com hipertensão pulmonar, com insuficiência cardíaca com fração de ejeção reduzida ou preservada e a pacientes com doenças fibróticas incluindo esclerose sistêmica, fi- brose pulmonar idiopática e qualquer doença renal envolvendo fibrose.

[0014] A Relaxina-2 é desse modo claramente de alto interesse terapêutico.

[0015] Não obstante, a estrutura heterodimérica complexa de H2-

Relaxina torna sua síntese química e purificação difícil, o que leva a baixas produções de produto final (Curr. Opin. Chem. Biol. 2014, 22, 47-55).

[0016] Consequentemente, existe um interesse na obtenção de peptídeos de Relaxina estáveis que possuem a capacidade da Relaxi- na ativar os receptores de RXKFP1, e mais particularmente peptídeos que retêm a atividade biológica de Relaxina, embora sendo estrutu- ralmente mais simples do que a Relaxina nativa.

[0017] Peptídeos com estruturas mais simples podem requerer sínteses menos complexas e mais eficientes do que a H2-Relaxina. Desse modo reduzindo os custos de tratamento ligado à síntese de H2-Relaxina.

[0018] Além disso, devido à sua estrutura mais simples e menor, tais peptídeos podem exibir uma captação melhorada em omparação com a Relaxina nativa, levando a uma atividade terapêutica in vivo me- lhorada.

[0019] Diversos análogos de H2-Relaxina simplificados foram des- critos na literatura. M.A. Hossain et al. (J. Biol. Chem. (2011), 43, 3755) identificaram a estrutura minima de H2-Relaxina mostrando que sua cadeia B pode ser truncada por até 6 ou 7 aminoácidos no N- terminal com perda minima de potência. As estruturas descritas nesta publicação são análogos de Relaxina de cadeia dupla que são ainda difíceis de sintetizar e não ofereem nenhuma vantage em comparação com a H2-Relaxina nativa.

[0020] Outras tentativas foram feitas para simplificar os peptídeos da família Relaxina. Recentemente, M.A. Hossain et al. em Chem. Sci. (2016),7, 3805-3819 e WO2015/157829 propuseram peptídeos agonis- tas de RKFP1 que compreendem apenas a cadeia B de H2-Relaxina B. Entretanto, como ilustrado no presente texto, os peptídeos de WO?2015/157829 apresentam uma capacidade insuficiente de ativar o receptor de RXFP1.

[0021] Existe, desse modo, uma necessidade de novos análogos de peptídeos da cadeia-B de Relaxina-2 capaz de ativar o receptor de RXFP1, em particular, tendo uma capacidade melhorada de ativar o receptor de RXFP1.

[0022] Existe também uma necessidade de novos peptídeos de Relaxina modificada tendo uma estrutura simples, em particular, uma estrutura mais simples do que os já conhecidos peptídeos de Relaxina, e que possuem uma capacidade melhorada de ativar o receptor de RXFP1.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[0023] A presente invençãotem o objetivo de attender às necessi- dades indicadas acima.

[0024] Os inventores de fato fornecem novos peptídeos de Relaxi- na modificada, e em particular peptídeos lipidados demonstrando uma capacidade significantemente melhoradapara ativar o receptor RKFP1 em comparação aos primeiros peptídeos da família Relaxina simplifi- cada propostos na técnica precedente, como demonstrado nos exem- plos a seguir.

[0025] Como descrito doravante, diversas deleções e modificações foram trazidas pelos inventores para a sequência de aminoácido de cadeia B de Relaxina nativa, levando a peptídeos mais curtos tendo propriedades melhoradas em comparação com a Relaxina native e aos peptídeos de Relaxina já propostos na técnica precedente. Em particular, os experimentos inclusos demonstram que embora peptídeo B7-33 C11.238 (SEQ ID NO: 102) e peptídeo análogo de WO?2015/157829, AcB7-33 C11.238S (SEQ ID NO: 103) e KKKK(AcB7- 29 C11.238S) (SEQ ID NO: 104) tenham uma concentração de ativação de50% (ECso) de RKFP1 de1641 nM, 929 nM e 206 nM respectivva- mente, no ensaio celular usado para selecionar os peptídeos desta invenção, os valores ECsoobtidos com os peptídeos lipidados de acor- do com a invenção vão de 36,4 nM até 0,07nNM. Além disso, a maioria dos peptídeos testados da invenção tem um valor ECsomenor ou igual a 5 nM.

[0026] Além disso, embora a técnica precedente abaixo sugira que a Cadeia B de Relaxina não possa ser truncada por mais de 7 amino- ácidos (J. Biol. Chem. (2011), 43, 3755; WO2015/157829) sem signifi- cante redução em potências, peptídeos desta invenção são truncados por 9 aminoácidos na terminação N (Nter) e ainda mostram alta ativi- dade sobre o receptor RXKFP1.

[0027] Em comparação com peptídeos agonists de RXFP1 deWO?2015/157829, peptídeos da invenção apresentam solubilidade melhorada em pH 4,5 ou pH 7,5, estabilidade plasmática ou sanguínea de rato e humana e meias-vidas in vivo melhoradas.

[0028] Estas propriedades permitirão formular os peptídeos desta invenção em faixas amplas de concentração para uso como medica- mento que reterá sua eficácia in-vivo durante um período de tempo mais longo, permitindo, por exemplo, administração uma vez ao dia pela via intravenosa ou subcutânea.

[0029] Consequentemente, um dos objetivos da presente invenção refere-se a um peptídeo tendo a seguinte fórmula (1): Nter-Ac-X109-E-G-R-E-X15-V-R=X18-X19-1-X21 -X22-E-G-X25-S-X27-X28-X29- Xsao-Xa1-X32-X33-NH2-Cter em que: Nter representa a extremidade N-terminal do peptídeo; Crer representa a extremidade C-terminal do peptídeo; Ac representa grupo acetila; X1o representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em leucina, ácido 2-amino-isobutírico (Aib), Ne-acetil-lisina (K(Ac)) e a-metil-leucina (Mel);

E representa ácido glutâmico (Glu); G representa glicina (Gly); R representa arginina (Arg); X15 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em lisina (Lys), arginina (Arg), homolisina (Hly), homoarginina (Har), ornitina (Orn), glutamina (Gln), fenilalanina (Phe) e leucina (Leu); V representa valina (Val); X18 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em alanina (Ala), ácido 2-amino-isobutírico (Aib), leucina (Leu), Ne-acetil-lisina (K(Ac)) e glutamina (Gln); X19 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em lisina (Lys), Ne-acetil-lisina (K(Ac)), citrulina (Cit), glutami- na (Gln), alanina(Ala) e ácido 2-amino-isobutírico (Aib); | representa isoleucina (lle); X21 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em ácido 2-amino-isobutírico (Aib) e alanina (Ala); X22 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em ácido 2-amino-isobutírico (Aib) e isoleucina (lle); Xos representa a seguinte estrutura: ro

É

H O em que: -* representa uma ligação covalente com a glicina prece- dendo X>25 na fórmula (1); - erepresenta uma ligação covalente com a serina seguindo

X25 na fórmula (1); e

Z representa um grupo de fórmula (II):

—[(PEGXX))(9E)cCa],

b e c independentemente representa 1, 2, 3,4 ou 5;

PEGxx independentemente representa um derivado de po- lietileno glicol selecionado do grupo que consiste em PEG2, PEG2DGA, e TTDS;

gE representa ácido gama-glutâmico; e

Ca representa um grupo C12-C>22 acila saturado linear;

S representa Serina (Ser);

X27 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em treonina (Thr), lisina (Lys), arginina (Arg) e glutamina (Gln);

X28 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em triptofano (Trp), fenilalanina (Phe), 5-fluoro-triptofano (Trp(5F)), 5-cloro-triptofano (Trp(5CI)),5-metóxi-triptofano (Trp(SOMEe)), tirosina (Tyr), 4-fluoro-fenilalanina (Pfp),I-naftilalanina (1-Nal), 2- naftilalanina (2-Nal), a-metil-triptofano (Mtr), a-metil-fenilalanina (Mph) e 5-hidróxi-triptofano (Wox);

X29 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em serina (Ser), D-serina (Dser), ácido 2-amino-isobutírico (Aib), treonina (Thr), a-metil-serina (Mse), Ne-acetil-lisina (K(Ac)) e va- lina (Val);

X3o representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em ácido 2-amino-isobutírico (Aib), a-metil-lisina (Mly), D- lisina (Dlys), lisina, homolisina (Hly), ornitina (Orn), arginina (Arg) e a- metil-arginina (Mar);

X31 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em arginina (Arg), Nw-metil-arginina (Rme), alanina (Ala), Nw,Nw'-dimetil-arginina (Rds, dimetil arginina simétrica) e citrulina

(Cit); X32 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em lisina (Lys), alanina (Ala), arginina (Arg), Ne-acetil-lisina (K(Ac)) e Ne, Ne Ne-tri-metil-lisina (Tml);e X33 representa um aminoácido selecionado de lisina (Lys), Ne-acetil-lisina (K(Ac)), leucina (Leu), arginina (Arg) e alanina (Ala); ou um sal ou solvato dos mesmos.

[0030] Em uma modalidade particular a invenção fornece um pep- tídeo tendo a fórmula (1) ou um sal farmaceuticamente aceitável ouum solvato do mesmo, em que o peptídeo é capaz de ativar o receptor de RXFP1.

[0031] Outro objeto da presente invenção é uma composição far- macêutica compreendendo pelo menos um peptídeo de acordo com a invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou solvato do mes- mo, juntamente com pelo menos um veículo farmaceuticamente acei- tável.

[0032] Outro objeto da presente invenção refere-se a um peptídeo da invenção, um sal farmaceuticamente aceitável ou solvato do mes- mo, ou uma composição farmacêutica do mesmo de acordo com a in- venção, para seu uso como um medicamento.

[0033] Consequentemente, a presente invenção também se refere a um peptídeo da invenção, um sal farmaceuticamente aceitável ou solvato do mesmo ou uma composição farmacêutica do mesmo de acordo com a invenção, para seu uso no tratamento e/ou prevenção de várias doenças ou condições implicando o receptor de RXFP1, mais particularmente no tratamento e/ou prevenção de doenças ou condições selecionadas de: - o grupo que consiste em fibrose; doenças fibróticas, em particular, esclerose sistêmica, esclerodermia e fibromialgia; fibrose pulmonar idiopática; doenças renais envolvendo fibrose; hipertensão pulmonar e pré-eclâmpsia; - o grupo que consiste em doenças cardíacas e vasculares, em particular, do grupo que consiste em insuficiência cardíaca aguda ou crônica, insuficiência cardíaca sistólica ou diastólica, doença de ar- téria coronariana, aterosclerose, angina microvascular e complicação cardiovascular de diabetes; e/ou - o grupo que consiste em insuficiências renais em particu- lar disfunção renal em cirrose, doença renal crônica e lesão renal agu- da.

[0034] Em uma modalidade, a referida doença ou condição pode ser selecionada do grupo que consiste em doenças cardíacas e vascu- lares, em particular, do grupo que consiste em insuficiência cardíaca aguda ou crônica, insuficiência cardíaca sistólica ou diastólica, doença de artéria coronariana, aterosclerose, angina microvascular e compli- cação cardiovascular de diabetes.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO Definições

[0035] Como no presente documento usado: - "Xy" usado nas fórmulas da invenção com y tendo dife- rentes valoresrepresenta um aminoácido como definido na definição das referidas fórmulas. y indica a posição do referido aminoácido na cadeia B nativa de Relaxina-2. Por exemplo, X10 representa o aminoá- cido na posição 10 da sequência de aminoácido da cadeia B nativa de Relaxina-2.

- "veículo farmaceuticamente aceitável" refere-se a um flu- ido, especialmente um líquido compreendendo um peptídeo da inven- ção, de modo que a composição farmacêutica seja fisiologicamente tolerável, isto é, possa ser administrada ao corpo do indivíduo sem to- xicidade ou desconforto indevido.

- um peptídeo "biologicamente ativo" de acordo com a in-

venção é um peptídeo capaz de ativar o receptor de RKFP1.

- Quando aplicáveis, aminoácidos nos peptídeos da inven- ção podem cada qual independentemente ser L-aminoácidos ou D- aminoácidos. Em uma modalidade particular, aminoácidos de acordo com a presente invenção são L-aminoácidos. No presente texto, se nenhuma informação é indicada com respeito à forma L ou D de um dado aminoácido, então este aminoácido é um L-aminoácido.

- Ntr e Crer são marcações convencionais usadas para in- dicar, respectivamente, a extremidade N-terminal do peptídeo e a ex- tremidade C-terminal do peptídeo da invenção.

- Um "peptídeo" ou "peptídeo de Relaxina" de acordo com a invenção é um peptídeo de cadeia B de Relaxina lipidada modificada de acordo com a presente invenção. Em particular, tal "peptídeo" ou "Peptídeo de Relaxina" significa um peptídeo que é biologicamente ativo, isto é, que exibe uma atividade biológica tipicamente associada com a Relaxina e, em particular, que é como indicado acima, capaz de ativar o receptor de RKFP1. O nível de tal atividade biológica da Rela- xina apresentado pelos peptídeos modificados de acordo com a inven- ção pode ser equivalente ou vantajosamente realçado quando compa- rado com a atividade de uma Relaxina de ocorrência natural ou native, ou mesmo quando comparado aos já descritos peptídeos de Relaxina diferentes daquele da presente invenção.

- O termo "nativo" como usado no presente texto em cone- xão com a Relaxina refere-se a moléculas de ocorrência natural ou tipo selvagem.

- "Prevenir" destina-se a significar reduzir o risco de mani- festação do fenômeno sob consideração. Esta redução pode ser total ou parcial, isto é, resulta em um grau do risco que é menor do que aquele preexistente ao uso de acordo com a invenção.

- "Tratar" destina-se a significar reduzir ou mesmo eliminar a condição ou doença indesejável sob consideração.

- "indivíduo" ou "paciente" destina-se a um mamífero hu- mano ou não humano afetado ou suscetível a ser afetado com uma condição considerada de acordo com a invenção. O referido indivíduo é em particular um Ser humano.

[0036] Os presentes inventores têm designados novos peptídeos modificados, em particular, peptídeos lipidados.

[0037] Os inventores inesperadamente descobriram que um peptí- deo menor e fortemente emendado de acordo com a invenção, isto é, sequência de aminoácidos de acordo com a invenção, tem uma ativi- dade biológica superior, em particular, uma capacidade superior de ativar o receptor de RKFP1 em comparação com uma Relaxina de ca- deia B única conhecida na técnica.

Peptídeos da invenção

[0038] Peptídeos de acordo com a invenção são caracterizados pelo fato de que eles são de fórmula (1): Nter-Ac-X10-E-G-R-E-X15-V-R-X18-X19-1|-X21-X22-E-G-X25-8S-X27-X28-X29- Xsao-Xa1-X32-X33-NH2-Cter em que: Nter representa a extremidade N-terminal do peptídeo; Crer representa a extremidade C-terminal do peptídeo; Ac representa grupo acetila; X1o representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em leucina, ácido 2-amino-isobutírio, Ne-acetil-lisina e a-metil- leucina; E representa ácido glutâmico; G representa glicina; R representa arginina; X15 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em lisina, arginina, homolisina, homoarginina, ornitina, gluta-

mina, fenilalanina e leucina; V representa valina; X18 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em alanina, ácido 2-amino-isobutírio, leucina, Ne-acetil-lisina e glutamina; X19 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em lisina, Ne-acetil-lisina, citrulina, glutamina, alanina e ácido 2-amino-isobutírio; | representa isoleucina; X21 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em ácido 2-amino-isobutírico e alanina; X22 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em ácido 2-amino-isobutírico e isoleucina; Xa5 representa a seguinte estrutura: ro

H O em que: -* representa uma ligação covalente com a glicina prece- dendo X25 na fórmula (1); - + representa uma ligação covalente com a serina seguindo Xas na fórmula (1); e Z representa um grupo de fórmula (Il): —[(PEGXX)W(gE)cCd], b e c independentemente representa 1, 2, 3,4 ou 5; PEGxx independentemente representa um derivado de po- lietileno glicol selecionado do grupo que consiste em PEG>2, PEG2DGA,

e TTDS; gE representa ácido gama-glutâmico; e Ca representa um grupo C12-C>22 acila saturado linear; S representa serina; X27 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em treonina, lisina, arginina e glutamina; X28 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em triptofano, fenilalanina, 5-fluoro-triptofano, 5-cloro- triptofano, —5-metóxi-triptofano, tirosina, 4Hfluoro-fenilalanina, 1- naftilalanina, 2-naftilalanina, a-metil-triptofano, a-metil-fenilalanina e 5- hidróxi-triptofano; X29 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em serina, D-serina, ácido 2-amino-isobutírico, treonina, a- metil-serina, Ne-acetil-lisina e valina; Xz3o representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em ácido 2-amino-isobutírio, a-metil-lisina, D-lisina, lisina, homolisina, ornitina, arginina e a-metil-arginina; X31 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em arginina, Nw-metil-arginina, alanina, Now,Nw'-dimetil- arginina e citrulina; X32 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em lisina, alanina, arginina, Ne-acetil-lisina e Ne,Ne Ne-tri- metil-lisina; X33 representa um aminoácido selecionado de lisina, Ne- acetil-lisina, leucina, arginina e alanina; ou um sal ou solvato dos mesmos.

[0039] A presente invenção também inclui sais dos peptídeos das fórmulas (1) ou (la) definidas no presente documento, em uma modali- dade sais farmaceuticamente aceitáveis, por exemplo, sais como adu- to de ácido com ácidos inorgânicos tais como ácido hidroclórico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido hidrobrômico, ácido fosfórico, ácido per- clórico ácido tiociânico e ácido bórico; ou com ácidos orgânicos tais como ácido fórmico, ácido acético, ácido trifluoroacético, ácido propiô- nico, ácido glicólico, ácido cítrico, ácido tartárico, ácido sucínico, ácido glucônico, ácido lático,ácido malônico, ácido fumárico, ácido antraní- lico, ácido benzoico, ácido cinâmico, ácido benzenossulfônico, ácido p- toluenossulfônico, ácido naftalenossulfônico e ácido sulfanílico; e sais com metais tais como metal alcalino, por exemplo, sódio, potássio, lítio, zinco, e alumínio.

[0040] Em uma modalidade os sais dos peptídeos são sais farma- ceuticamente aceitáveis, por exemplo, adutos de ácido com ácido hi- droclórico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido fórmico, ácido acético, ácido propiônico, ácido glicólico, ácido cítrico, ácido tartárico, ácido sucínico, ácido glucônico, ácido lático, ácido malônico, ácido fumárico, ácido antranílico, ácido benzoico, ácido cinâmico, ácido benzenossul- fônico, ácido p-toluenossulfônico, ácido naftalenossulfônico e ácido sulfanílico; e sais com metais tais como metal alcalino, por exemplo, sódio, potássio, lítio e zinco.

[0041] A presente invenção também inclui solvatos, em uma mo- dalidade solvatos farmaceuticamente aceitáveis, dos peptídeos das fórmulas acima (1) ou (la).

[0042] Solvatos significam complexos dos compostos da invenção ousais dos mesmos com moléculas solventes, por exemplo, moléculas solventes orgânicas e/ou água.

[0043] De acordo com uma modalidade da invenção, a invenção também inclui sal farmaceuticamente aceitável ou solvato dos peptí- deos da invenção.

[0044] Como ilustrado, um peptídeo de acordo com a invenção é uma sequência de aminoácido.

[0045] De acordo com a nomenclatura padrão de polipeptídeo (J.

Biol. Chem., 243:3552-59 (1969)) abreviações para resíduos de a- aminoácido usadas na presente invenção são como segue: tra tras [| Pp | Asp ácido aspárico ou aspariato [e seleueina — [Nan aspaagia — | [POP proina — [a en emana — [OR Aa ama |

[0046] Para aminoácidos não naturais ou modificados as seguintes abreviações são usadas:

por sua função de ácido y-carboxílico) hexanoico Trp(5OMe)

[0047] Em todas as fórmulas de acordo com a invenção, onde a sequência de aminoácido é representada pelo uso das abreviações acima mencionadas e representações de X, tais como X18, por exem- plo, a orientação esquerda e direita é na direção convencional de ami- no-terminal para carbóxi-terminal.

[0048] Consequentemente, por exemplo, com X>38 representando um aminoácido selecionado do grupo de triptofano, 5-fluoro-triptofano, B-cloro-triptofano, 5-metóxi-triptofano, tirosina, fenilalanina, 4-fluoro- fenilalanina, 1-naftilalanina, 2-naftilalanina, a-metil-triptofano, a-metil- fenilalanina e 5-hidróxi-triptofano, o N-terminal ou grupo amina do refe-

rido aminoácido é ligado ao aminoácido representado por X27 e o C- terminal ou grupo carboxila do referido aminoácido é ligado ao amino- ácido representado por X29.

[0049] Em sua extremidade N-terminal (Nter), um peptídeo da in- venção é substituído por um grupo acetila (Ac) : CH3C(O)-.

[0050] Em sua extremidade C-terminal (Crer), um peptídeo da in- venção é substituído por um grupo -NH>.

[0051] Em sua posição X25, um peptídeo da invenção compreende a seguinte estrutura: H-nº

É H O

[0052] Esta estrutura corresponde a um aminoácido lisina em que: - o átomo de alfa (a) nitrogênio(*)é ligado à parte prece- dente do peptídeo, isto é, com o grupo em Nter de X2scom base na ori- entação Nter-Cter representada nas fórmulas de acordo com a invenção, através de uma ligação covalente, em particular, através de uma liga- ção de peptídeo, isto é, com a glicina na posição 24 (X24); - oátomo de carbono do grupo carboxila (+) é ligado à par- te do peptídeo seguindo a posição X25, isto é, com o grupo em Crer de X25s com base na orientação NterCrer representada nas fórmulas de acordo com a invenção, através de uma ligação covalente, em particu- lar através de uma ligação de peptídeo, isto é, com a serina na posi- ção 26 (X26); e - O átomo de nitrogênio de sua cadeia lateral é ligada a um grupo Z.

[0053] Este grupo Z é definido como sendo de fórmula (Il):

“I(PEGXX)»(9E)-Ca],

[0054] Na fórmula (II), o — representa uma ligação covalente com o átomo de nitrogênio da cadeia lateral da estrutura de lisina em X25. b e c independentemente representam 1, 2, 3, 4 ou 5, em particular 2, 3, 4 ou 5.

[0055] Em uma modalidade particular, b representa 2, 3, 4 ou 5.

[0056] Em uma modalidade particular, c representa 2, 3 ou 4.

[0057] Em uma modalidade preferida, b representa 2, 3,4 ou 5 ec independentemente representa 2, 3 ou 4.

[0058] PEGxx nas fórmulas da invenção independentemente re- presenta um derivado de polietileno glicol selecionado do grupo que consiste em PEG2, PEG2.DGA e TTDS.

[0059] Os referidos grupos são definidos como segue: ção PEG o o. 2-[2-(2- xi)etóxilacetila bi K aminopropó- xi)etóxiletóxilpropilami no]-2-0x0-etóxilacetila o xi)etóxiletóxilpropilami no]-4-0x0-butanoíla em que, em (PEGxx), de fórmula (ll), A representa uma ligação cova- lente com o grupo(gE)ce |! representa uma ligação covalente ligando o grupo de fórmula (Il) com o átomo de nitrogênio de cadeia lateral da estrutura de lisina em Xas5.

[0060] Em uma modalidade particular, (PEGxx), representa um derivado de polietileno glicol selecionado do grupo que consiste em

(TTDS)2, (TTDS)s, (PEG2DGA)3, (PEG>2)3, (PEG2)a e (PEG>2)s.

[0061] Como precedentemente indicado, gE, que pode também ser representado como yE, gGlu ou yGlu, representa um ácido gama- glutâmico. Este aminoácido tem a seguinte estrutura: o K TA HO o em que, quando representado na fórmula (Il) como (gE)., A representa uma ligação covalente com Ca e | representa uma ligação covalente com o grupo (PEGxx)b.

Ca representa um grupo C12-C22 acila saturado linear, em particular um grupo acila saturado linear selecionado do grupo que consiste em grupo C1i2 (Lau), Cia (Myr), C15 (Penta), C1s (Palm), Ci7(Hepta), C18 (Stea), Cao (Eico) e C22 (Doco) acila. Em uma modali- dade Cx representa um grupo acila saturado linear selecionado do gru- po que consiste em grupo C12 (Lau), C14 (Myr), C15 (Penta), C16 (Palm), Ci7(Hepta) ou C13 (Stea) acila,em particular um grupo C14, C16 ou Cia acila saturado linear, e ainda mais particularmente, um grupo C16 ou C'16 acila linear.

[0062] Em uma modalidade particular, Ca representa um grupo C12 acila saturado linear. Um grupo C12 acila saturado linear da in- venção é um grupo lauroíla (também representado como "Lau" no pre- sente texto).

[0063] Em uma modalidade particular, Ca representa um grupo C14 acila saturado linear. Um grupo C14 acila saturado linear da in- venção é um grupo Miristoíla (também representado como "Myr" no presente texto).

[0064] Em uma modalidade particular, Ca representa um grupo C15 acila saturado linear. Um grupo C15 acila saturado linear da in- venção é um grupo pentadecnoíla (também representado como "Pen-

ta" no presente texto).

[0065] Em uma modalidade particular, Ca representa um grupo C16 acila saturado linear. Um grupo C16 acila saturado linear da in- venção é um grupo palmitoíla (também representado como "Palm" no presente texto).

[0066] Em uma modalidade particular, Ca representa um grupo C17 acila saturado linear. Um grupo C17 acila saturado linear da in- venção é um grupo heptadecanoíla (também representado como "Hep- ta" no presente texto).

[0067] Em outra modalidade particular, Ca representa um grupo C18 acila saturado linear. Um grupo C18 acila saturado linear da in- venção é um grupo estearoíla (também representado como "Stea" no presente texto).

[0068] Em outra modalidade particular, Ca representa um grupo C20 acila saturado linear. Um grupo C20 acila saturado linear da in- venção é um grupo Eicosanoíla (também representado como "Eico" no presente texto).

[0069] Em outra modalidade particular, Ca representa um grupo C22 acila saturado linear. Um grupo C22 acila saturado linear da in- venção é um grupo Docosanoíla (também representado como "Doco" no presente texto).

[0070] Em uma modalidade particular, Z é selecionado do grupo que consiste em-(TTDS)>-(ácido gama glutâmico)s-Palmitoíla (- (TTDS)2-(gE)3-Palm), -(TTDS)3-(ácido gama glutâmico)3-Palmitoíla (- (TTDS)3-(g9E)3-Palm), -(PEG2DGA)3-(ácido gama glutâmico)3-Palmitoíla ((PEG2DGA)3-(gE);-Palm), — -(PEG>2),-(ácido — gama — glutâmico)3- Palmitoíla (-(PEG>2)1-(gE);-Palm), -(TTDS)>-(ácido gama glutâmico) Palmitoíla (-(TTDS)>-(gE)2>-Palm), -(TTDS)>-(ácido gama glutâmico)3- Estearoíla (-(TTDS)2-(gE);-Stea), -(TTDS)3-(ácido gama glutâmico)3- Estearoíla (-(TTDS)3-(gE)3-Stea), -(PEG2DGA)3-(ácido gama glutâmi-

co)3-Estearoíla (-(PEG2DGA)3-(gE)3-Stea), -(PEG2DGA)3-(ácido gama glutâmico),-Estearoíla (-(PEG2DGA)3-(gE)1-Stea), -(PEG>2)3-(ácido ga- ma glutâmico)3-Palmitoíla (-(PEG2)3-(gE)3-Palm), -(PEG2)1-(ácido gama glutâmico)3-Estearoíla (-(PEG>2)1-(gE)3-Stea), -(PEG>2)s-(ácido gama glutâmico)s-Palmitoíla (-(PEG>2)5-(gE)3-Palm), -(PEG>2)s-(ácido gama glutâmico).-Palmitoíla (-(PEG2)s-(gE).--Palm), -(TTDS)3-(ácido gama glutâmico),-Estearoíla (-(TTDS)3-(gE).-Stea), -(TTDS)>-(ácido gama glutâmico),-Palmitoíla (-(TTDS)>-(gE).-Palm), -(TTDS)3-(ácido gama glutâmico)>-Estearoíla (-(TTDS)3-(gE)2>-Stea) e -(TTDS)>-(ácido gama glutâmico),-Estearoíla (-(TTDS)>-(gE).--Stea), em uma modalidade mais particular Z é selecionado do grupo que consiste em -(TTDS)>- (gE)3-Palm,-(TTDS)3-(gE)3-Palm, -(PEG2DGA)3-(gE)3-Palm, -(PEG>2)1- (gE);-Palm, -(TTDS)2-(gE)2-Palm, -(TTDS)2-(gE)3-Stea, -(TTDS)3-(gE)3- Stea, -(PEG>2)3-(gE)3-Palm, -(PEG2)4-(g9E)3-Stea e -(TTDS)2-(gE).-Palm, em uma modalidade especial Z é selecionado do grupo que consiste em -(TTDS)3-(gE)3-Palm, -(TTDS)>-(gE);3-Stea e -(TTDS)3-(gE)s-Stea, por exemplo, -(TTDS)3-(gE)3-Palm e -(TTDS)3-(gE)3-Stea.

[0071] Em todos estes grupos Z, o primeiro — símbolo representa a ligação covalente entre o grupo Z e átomo de nitrogênio da cadeia la- teral da estrutura lisina X25.

[0072] Consequentemente, quando o grupo Z é, por exemplo, re- presentado como sendo -(TTDS)>-(ácido gama glutâmico)3-Palmitoíla (também representado como -(TTDS)2>-(gE);-Palm), o primeiro grupo TTDS é ligado ao átomo de nitrogênio da cadeia lateral da estrutura X25. Uma ligação covalente também se liga ao segundo grupo TTDS enquanto outra ligação covalente liga este segundo grupo TTDS ao primeiro ácido gama-glutâmico (gE). Este primeiro ácido gama- glutâmico (gE) é em si ligado por meio de uma ligação covalente ao segundo ácido gama-glutâmico (gE), este segundo ácido gama- glutâmico (gE) é ligado por meio de outra ligação covalente ao terceiro ácido gama-glutâmico (gE) e este terceiro grupo de ácido gama- glutâmico (gE) é também ligado por meio de uma ligação covalente a um grupo palmitoíla (Palm).

[0073] Além disso, deve-se entender a partir do presente pedido que um grupo Z de acordo com a invenção representado, por exemplo, como -(TTDS)>-(ácido gama glutâmico)3-Palmitoíla (também represen- tado como -(TTDS)2>-(gE)3-Palm) pode também ser representado como —TTDS-TTDS-gE-gE-gE-Palm.

[0074] O mesmo aplica-se a mutatis mutandis para os outros gru- pos Z representados de acordo com a invenção.

[0075] De acordo com uma modalidade particular, um peptídeo de acordo com a invenção é de fórmula (la): Nter-Ac-L-E-G-R-E-X15-V-R-X18-X19-1|-Aib-Aib-E-G-X25-S-T-X28-X29-X30- R-X32-X33-NH2-Cter em que: Nter representa a extremidade N-terminal do peptídeo; Crer representa a extremidade C-terminal do peptídeo; Ac representa grupo acetila; L representa leucina; E representa ácido glutâmico; G representa glicina; R representa arginina; X'15 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em lisina, arginina, homolisina, glutamina, fenilalanina e leuci- na; V representa valina; X'18 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em alanina e ácido 2-amino-isobutírio; X19 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em lisina, Ne-acetil-lisina, glutamina e citrulina;

| representa isoleucina; Aib representa ácido 2-amino-isobutírio; Xa5 representa a seguinte estrutura: H-nº

É

H O em que: -* representa uma ligação covalente com a glicina prece- dendo X25 na fórmula (la); - + representa uma ligação covalente com a serina seguindo X25 na fórmula (la); e Z é selecionado do grupó que consiste em um -(TTDS)2- (gE);-Palm, -(TTDS)3-(gE)3-Palm, -(PEG2DGA)3-(gE)3-Palm, -(PEG>2)4- (g9E);-Palm, -(TTDS)2-(gE)2>-Palm, -(TTDS)2-(gE)3-Stea, -(TTDS)3-(gE)3- Stea, -(PEG2DGA)3-(gE)3-Stea, -(PEG2DGA)3-(gE)1-Stea, -(PEG>2)3- (gE)3-Palm, -(PEG2)4-(gE)3-Stea, -(PEG2)5-(gE)3-Palm, -(PEG2)5-(gE)1- Palm, -(TTDS)3-(gE)1-Stea,-(TTDS)2-(gE)1-Palm, -(TTDS)3-(gE)2-Stea e -(TTDS)2-(gE)1-Stea, em que gE representa ácido gama-glutâmico Palm representa Palmitoíla e Stea representa Estearoíla; S representa serina; T representa treonina; X>8 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em triptofano e fenilalanina; X29 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em serina, D-serina e ácido 2-amino-isobutírico;

X3o representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em ácido 2-amino-isobutírio, a-metil-lisina, D-lisina e lisina; X32 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em lisina, alanina e arginina; e X33 representa um aminoácido selecionado de lisina e Ne- acetil-lisina ; ou um sal ou solvato dos mesmos.

[0076] De acordo com uma modalidade particular, um peptídeo de acordo com a invenção tem uma sequência de aminoácido seleciona- da do grupo que consiste nas sequências de aminoácido de referência SEQ ID NO: 1-97. Em particular, um peptídeo de acordo com a inven- ção tem uma sequência de aminoácido selecionada do grupo que con- siste nas sequências de aminoácido de referência SEQ ID NO: 1-32, 34-37, 39, 42, 44, 45, 47-49, 51 e 54-97.

[0077] Em uma modalidade particular para um peptídeo tendo a seguinte fórmula (la) como descrito acima: X19 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em Ne-acetil-lisina e citrulina; Xa5 representa a seguinte estrutura:

HE

H O em que: -* representa uma ligação covalente com a glicina prece- dendo X>25 na fórmula (la); - + representa uma ligação covalente com a serina seguindo X25 na fórmula (la); e

Z é selecionado do grupo que consiste em um +TTDS)>(gE);-Palm, -(TTDS);-(gE);Palm, - (PEG2DGA);3-(gE)3-Palm, -(PEG2)4-(g9E)3-Palm, -(TTDS)2-(gE)>-Palm, - (TTDS)2>-(gE)3-Stea, -(TTDS)3-(gE)3-Stea,-(PEG2)3-(gE)3-Palm, - (PEG2)14-(gE)3-Stea e -(TTDS)2-(gE),-Palm, em que gE representa ácido gama-glutâmico Palm representa Palmitoíla e Stea representa Estearoíla; X32 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em lisina e alanina; w X33 representa Ne-acetil-lisina ou um sal ou solvato dos mesmos.

[0078] De acordo com outra modalidade, um peptídeo de acordo com a invenção tem uma sequência de aminoácido selecionada do grupo que consiste nas sequências de aminoácido de referência SEQ ID NO: 1-30.

[0079] Em uma modalidade particular, um peptídeo de acordo com a invenção de fórmula (la) é tal que: Nter representa a extremidade N-terminal do peptídeo; Crer representa a extremidade C-terminal do peptídeo; Ac representa grupo acetila; L representa leucina; E representa ácido glutâmico; G representa glicina; R representa arginina; X'15 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em lisina e homolisina; V representa valina; Xis representa alanina; X19 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em Ne-acetil-lisina e citrulina; | representa isoleucina; Aib representa ácido 2-amino-isobutírio; Xa5 representa a seguinte estrutura: H-nº

É

H O em que: -* representa uma ligação covalente com a glicina prece- dendo X25 na fórmula (la); - + representa uma ligação covalente com a serina seguindo X25 na fórmula (la); e Z é selecionado do grupo que consiste em -(TTDS)2-(gE)2- Palm,-(TTDS)2-(gE)3-Palm, -(TTDS)2-(gE).-Palm, -(TTDS)3-(gE)3-Palm, -(PEG2DGA)3-(gE)3-Palm,-(TTDS)2-(gE)3-Stea, -(TTDS)3-(gE)3-Stea e - (PEG2)4-(gE)3-Stea, em que gE representa ácido gama-glutâmico Palm representa Palmitoíla e Stea representa Estearoíla; S representa serina; T representa treonina; Xx8 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em triptofano e fenilalanina; Xao representa serina; X3o representa aminoácido selecionado do grupo que con- siste em ácido 2-amino-isobutírico e a-metil-lisina; X32 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em lisina, alanina e arginina; e X33 representa um aminoácido selecionado de lisina e Ne- acetil-lisina; ou um sal ou solvato dos mesmos.

[0080] Em uma modalidade especial, um peptídeo de acordo com a invenção de fórmula (la) é tal que: Nter representa a extremidade N-terminal do peptídeo; Crer representa a extremidade C-terminal do peptídeo; Ac representa grupo acetila; L representa leucina; E representa ácido glutâmico; G representa glicina; R representa arginina; Xisrepresenta lisina; V representa valina; Xigrepresenta alanina; Xisrepresenta Ne-acetil-lisina; | representa isoleucina; Aib representa ácido 2-amino-isobutírio; Xos representa a seguinte estrutura: ro

H O em que: -* representa uma ligação covalente com a glicina prece- dendo X>25 na fórmula (la); - erepresenta uma ligação covalente com a serina seguindo

X25 na fórmula (la); e Z é selecionado do grupo que consiste em -(TTDS)3-(gE)3- Palm, -(TTDS)2-(gE)3-Stea, -(TTDS)3-(gE)3-Stea e -(PEG>2)1-(gE)3-Stea, em que gE representa ácido gama-glutâmico Palm representa Palmitoíla e Stea representa Estearoíla; S representa serina; T representa treonina; X28 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em triptofano e fenilalanina; Xao representa serina; X3o representa aminoácido selecionado do grupo que con- siste em ácido 2-amino-isobutírico e a-metil-lisina; X32 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em lisina, alanina e arginina; e X33 representa um aminoácido selecionado de lisina e Ne- acetil-lisina; ou um sal ou solvato dos mesmos.

[0081] De acordo com uma modalidade particular, um peptídeo de acordo com a invenção é de fórmula (lb): Nter-Ac-X109-E-G-R-E-X15-V-R=X18-X19-1-X21 -X22-E-G-X25-S-X27-X28-X29- Xao-R-X32-X33-NH2-Cter em que: Nter representa a extremidade N-terminal do peptídeo; Crer representa a extremidade C-terminal do peptídeo; Ac representa grupo acetila; X1o representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em leucina, Ne-acetil-lisina e ácido 2-amino-isobutírio; E representa ácido glutâmico;

G representa glicina; R representa arginina; X15 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em lisina, arginina, homolisina, glutamina, fenilalanina e leuci- na; V representa valina; X18 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em alanina, ácido 2-amino-isobutírico e Ne-acetil-lisina; X19 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em lisina, Ne-acetil-lisina, glutamina e citrulina; | representa isoleucina; X21 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em ácido 2-amino-isobutírico e alanina; X22 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em ácido 2-amino-isobutírico e isoleucina; X2s representa a seguinte estrutura:

HE *. $.

N H Oo em que: - * representa uma ligação covalente com a glicina prece- dendo X25 na fórmula (la); - + representa uma ligação covalente com a serina seguindo X25 na fórmula (la); e Z é selecionado do grupo que consiste em a -(TTDS)>- (gE);-Palm, -(TTDS)3-(gE)3-Palm, -(PEG2DGA)3-(gE)3-Palm, -(PEG>2)1- (gE);-Palm, -(TTDS)2-(gE)2>-Palm, -(TTDS)2-(gE)3-Stea, -(TTDS)3-(gE)3-

Stea, -(PEG2DGA)3-(gE)3-Stea, -(PEG2DGA)3-(gE)1-Stea, -(PEG>2)3- (gE);-Palm, -(PEG2)4-(gE)3-Stea, -(PEG>2)5-(gE)3-Palm, -(PEG2)5-(g9E)1- Palm, -(TTDS)3-(gE)1-Stea, -(TTDS)2-(gE).-Palm, -(TTDS)3-(gE)>-Stea, -(TTDS)2>-(gE)1-Stea, -(TTDS)1-(gE);-Stea, -(TTDS)3-(gE).-Palm, - (TTDS)4-(gE)3-Palm, -(TTDS)3-(gE)3-Myr e -(TTDS)3-(gE)a-Myr em que gE representa ácido gama-glutâmico Palm representa Palmitoíla e Stea representa Estearoíla; S representa serina; X27 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em treonina, glutamina, arginina e lisina; X>28 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em triptofano, fenilalanina, B5-clorotriptofano, a-metil- fenilalanina, 4-fluoro-fenilalanina e 5-fluorotriptofano; X29 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em serina, D-serina, ácido 2-amino-isobutírico, Ne-acetil- lisina, treonina e valina; X3o representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em ácido 2-amino-isobutírio, a-metil-lisina, D-lisina, lisina, homolisina e arginina; X32 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em lisina, alanina, arginina e Ne-acetil-lisina; e X33 representa um aminoácido selecionado de lisina, Ne- acetil-lisina e arginina; ou um sal ou solvato dos mesmos.

[0082] Em particular, Z pode ser selecionado do grupo que consis- te em um -(TTDS)>-(gE);-Palm, -(TTDS)3-(gE)3-Palm, -(PEG2DGA)3- (gE);-Palm, -(PEG>2)4-(g9E)3-Palm, -(TTDS)2>-(gE)2>-Palm, -(TTDS)2- (gE)3-Stea, -(TTDS)3-(gE)3-Stea, -(PEG2DGA)3-(gE)3-Stea, -(PEG>2)3- (gE);-Palm, -(PEG2)4-(gE)3-Stea, -(PEG2)5s-(gE)3-Palm, -(TTDS)3-(gE)1-

Stea, -(TTDS)>-(gE)s-Palm, -(TTDS)2-(gE)14-Stea, -(TTDS)1-(gE)3-Stea, -(TTDS)3-(gE)s-Palm, -(TTDS)1-(gE);-Palm, -(TTDS)3-(gE);-Myr e - (TTDS)3-(gE)1-Myr.

[0083] Em uma modalidade particular da invenção, um peptídeo da invenção tem uma sequência de aminoácido selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO: 3, 6, 7, 9,10, 11, 12, 13, 20, 21, 22, 26, 28 e 30.

[0084] Em uma modalidade particular da invenção, um peptídeo da invenção tem uma sequência de aminoácido selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO: 3, 6, 7, 9-12, 20-22, 26, 28, 30-34, 45, 47-49, 51, 54-62, 64, 67-69, 71-93, 96 e 97. Como indicado acima e ilustrado nos exemplos inclusos, estes peptídeos são particularmente vantajosos pelo fato de que todos eles têm uma ECso menor ou igual a 1 nM.

[0085] Em particular, um peptídeo da invenção tem uma sequência de aminoácido selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO: 3, 6,7, 13,20,26 e 30.

[0086] Em particular, um peptídeo da invenção tem uma sequência de aminoácido selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO:3, 6, 7, 20, 26, 30-34, 45, 48, 49, 51, 54-61, 67, 71, 73, 75-79, 81, 83-92 e

97. Como ilustrado nos exemplos inclusos, os peptídeos de acordo com esta modalidade são particularmente vantajosos pelo fato de que todos eles têm uma ECso menor ou igual a 0,5 nM.

[0087] Em uma modalidade particular, um peptídeo da invenção tem uma sequência de aminoácido selecionada do grupo que consiste nas sequências de aminoácido de referência SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 e SEQ ID NO: 20, e particularmente tem a se- quência de aminoácido de referência SEQ ID NO: 3.

[0088] Um peptídeo da invenção pode ser produzido por qualquer técnica conhecida per se na técnica, tal como, sem limitação, qualquer técnica química, biológica, genética ou enzimática, sozinha ou em combinação. Conhecendo a sequência de aminoácido da sequência desejada, alguém versado na técnica pode facilmente produzir os refe- ridos polipeptídeos, por técnicas padrões para a produção de polipep- tídeos, mesmo se aminoácidos não naturais forem usados ou de acor- do com os métodos descritos no presente documento.

[0089] Por exemplo, os peptídeos da invenção podem ser sinteti- zados usando método de fase sólida bem conhecido, em particular, usando um aparato de síntese de peptídeo comercialmente disponível (tal como aquela feita por Applied Biosystems, Foster City, California, Gyros Protein technologies, Tucson, Arizona ou CEM corporation, Matthews, North Carolina) e seguindo ass instruções do fabricante.

[0090] Exemplos de métodos apropriados são ilustrados nos exemplos inclusos.

[0091] Um peptídeo da invenção pode ser marcado com pelo me- nos uma molécula ou substância detectável, em particular selecionado do grupo que consiste em enzimas, grupos protéticos, materiais fluo- rescentes, materiais luminescentes, materiais bioluminescentes e ma- teriais radioativos.

[0092] Entretanto, é importante que a referida marcação não altere ou impeça o referido peptídeo de ter sua atividade biológica de inte- resse como definido precedentemente, isto é, não impeça ou altere a capacidade do peptídeo de se ligar a, e ativar o receptor de RXKFP1.

[0093] Moléculas ou substâncias detectáveis preferidas para o su- porte de nanomaterial são aquelas que podem ser detectadas exter- namente de uma maneira não invasiva após administração in vivo.

[0094] Moléculas ou substâncias detectáveis são bem conhecidas pela pessoa versada na técnica.

[0095] Tal peptídeo marcado da invenção pode ser usado em um método diagnóstico e/ou de imageamento.

[0096] Os inventores têm além disso observado que a meia-vida, e em particular, a meia-vida in vivo dos peptídeos da invenção é signifi- cantemente superior à da Relaxina.

[0097] De fato, a Relaxina é rapidamente é rapidamente eliminada pelos rins e não pode ser usada em ambiente crônico. O hormônio re- combinante tem uma meia-vida curta in vivo (como ilustrado no maca- co e humano em B.L. Ferraiolo et al. Pharm. Res. (1991), 8, 1032 e em S.A. Chen et al. Pharm. Res. (1993), 10, 834) e requer liberação intra- venosa. A meia-vida de Relaxina é de fato tão curta que a infusão con- tinua pode ser requerido por diversas horas em um ambiente hospita- lar para sua administração a um indivíduo em necessidade da mesma, em particular, um indivíduo sofrendo de uma doença ou distúrbio agu- do, tal como, por exemplo, uma insuficiência cardíaca aguda. Substi- tuição de relaxina neste tratamento por peptídeos deRelaxina tendo uma meia-vida in vivo melhorada vantajosamente permite a substitui- ção deste tratamento restritivo por uma mais simples, tal como uma única administração diária, por exemplo, pela via intravenosa ou sub- cutânea.

[0098] Consequentemente, os peptídeos de Relaxina da invenção, que possuem a capacidade da Relaxina ativar RXKFP1, e mais particu- larmente, peptídeos que são agonistas de longa duração de RXFP1, têm o potencial de aplicações terapêuticas mais amplas incluindo insu- ficiência cardíaca aguda ou crônica. Composições e medicamentos

[0099] O presente pedido também se refere a um medicamento ou uma composição farmacêutica compreendendo pelo menos um peptí- deo da invenção como descrito acima, ou um de seu sal farmaceuti- camente aceitável ou solvato do mesmo, e pelo menos um veículo farmaceuticamente aceitável.

[00100] Pelo menos um peptídeo da invenção está presente em um medicamento ou composição farmacêutica da invenção como princípio ativo.

[00101] Uma composição ou um medicamento da invenção está em uma forma adequada para administração mamífera.

[00102] Uma composição ou um medicamento da invenção pode ser administrado, por exemplo, oralmente, parenteralmente, intraveno- samente, retalmente, transdermicamente, topicamente ou por inala- ção. Em particular, uma composição de acordo com a invenção é ad- ministrada por via intravenosa ou subcutânea.

[00103] De acordo com uma modalidade particular, o veículo far- maceuticamente aceitável de uma composição da invenção é adequa- damente selecionado do grupo que consiste em um líquido veículo in- jetável tal como tal como água estéril para injeção; e uma solução aquosa tal como salina.

[00104] Uma composição ou um medicamento da invenção pode compreender um teor de peptídeos da invenção compreendido entre 0,01 mg/mL e 30 mg/mL, em particular entre 0,3 mg/mL e 3 mg/mL.

[00105] Um medicamento ou a composição farmacêutica da inven- ção pode compreender pelo menos um peptídeo da invenção como o único princípio ativo ou pode também compreender pelo menos um outro princípio ativo, contanto que o referido outro princípio ativo não impeça a atividade biológica do peptídeo de acordo com a invenção.

[00106] A composição farmacêutica ou um medicamento de acordo com a invenção pode também compreender pelo menos um antioxi- dante, dispersante, emulsificante, antiespoma, aromatizante, conser- vante, solubilizante e/ou colorante, contanto que estas substâncias adicionais não impeçam as propriedades biológicas dos peptídeos de acordo com a invenção.

[00107] “Composições estéreis da invenção para administração pa- renteral podem em particular ser soluções, suspensões ou emulsões aquosas ou não aquosas. Solventes ou veículos que podem ser usa- dos incluem água, propileno glicol, um polietileno glicol, óleos vegetais, em particular, óleo de oliva, ésteres orgânicos injetáveis, por exemplo, oleato de etila, ou outros solventes orgânicos adequados. Estas com- posições podem também compreender adjuvantes, em particular, agentes umectantes, agentes de tonicidade, emulsificantes, dispersan- tes e estabilizantes. A esterilização pode ser realizada de diversas maneiras, por exemplo, por filtração asséptica, incorporando agentes esterilizantes na composição, por irradiação ou por aquecimento. Eles podem também ser preparados na forma de composições sólidas esté- reis que podem ser dissolvidas no momento de uso em água estéril ou qualquer outro meio estéril injetável.

[00108] As composições para administração tópica podem ser, por exemplo, gotas ou aerossóis nasais.

[00109] Para administração subcutânea, intramuscular ou intrave- nosa, os peptídeos da invenção usados são convertidos, se desejado, com as substâncias habituais para este propósito, tais como solubili- zantes, emulsificantes ou outros excipientes, em uma solução, sus- pensão ou emulsão. Exemplos de solventes adequadas são: água, salina fisiológica ou álcoois, por exemplo, etanol, propanol, glicerol, bem como soluções de açúcar, tais como soluções de glicose ou mani- tol, ou mesmo uma mistura dos vários solventes mencionados.

[00110] Em uma modalidade particular, uma composição da inven- ção, um medicamento da invenção, ou um peptídeo da invenção, ou seu sal farmaceuticamente aceitável ou solvato do mesmo, é adminis- trado a um indivíduo pela via parenteral, e é em particular transdermi- camente, intravenosamente, subcutaneamente ou intramuscularmente, em particular, administrado intravenosamente ou subcutaneamente.

[00111] Métodos para a preparação de composições parenteral- mente administráveis são evidentes para aqueles versados na técnica,

e são, por exemplo, descritos em maiores detalhes em Remington's Pharmaceutical Science, 15º edição, Mack Publishing Company, Eas- ton, Pa..

[00112] A administração de uma composição da invenção ou de um peptídeo da invenção a um indivíduo pode ser uma administração sis- têmica ou uma administração localizada a um tecido, órgão e/ou sítio do organismo individual onde a presença de, por exemplo, uma fibro- se, é conhecida, esperada ou necessita ser determinada. Uso dos peptídeos e composições

[00113] A presente invenção refere-se a um peptídeo de acordo com a invenção, seu sal farmaceuticamente aceitável ou solvato do mesmo, de acordo com a invenção, para seu uso como um medica- mento.

[00114] Além disso, a invenção também se refere a uma composi- ção farmacêutica de acordo com a invenção para seu uso como um medicamento.

[00115] Além disso, a presente invenção refere-se a um peptídeo da invenção, seu sal farmaceuticamente aceitável ou solvato do mes- mo, ou uma composição farmacêutica da invenção para seu uso no tratamento e/ou prevenção de várias doenças ou condições implicando o receptor de RXKFP1, mais particularmente no tratamento e/ou pre- venção de doenças ou condições selecionadas de: - o grupo que consiste em fibrose; doenças fibróticas, em particular esclerose sistêmica, esclerodermia e fibromialgia; fibrose pulmonar idiopática; doenças renais envolvendo fibrose; hipertensão pulmonar e pré-eclâmpsia; - o grupo que consiste em doenças cardíacas e vasculares, em particular do grupo que consiste em insuficiência cardíaca aguda ou crônica, insuficiência cardíaca sistólica ou diastólica, doença de ar- téria coronariana, aterosclerose, angina microvascular e complicação cardiovascular de diabetes; e/ou - o grupo que consiste em insuficiências renais, em particu- lar disfunção renal em cirrose; doença renal crônica e lesão renal agu- da.

[00116] Em um aspecto, tal peptídeo, sal farmaceuticamente acei- tável ou solvato do mesmo, ou composição farmacêutica de acordo com a invenção, é administrada uma vez ao dia, em particular, pela via intravenosa ou subcutânea.

[00117] A dosagem do peptídeo, ou de seu sal farmaceuticamente aceitável ou solvato do mesmo, a ser administrado, e a frequência de administração, dependem do efeito desejado, a potência e duração de ação dos compostos usados; adicionalmente também sobre a nature- za e severidade da doença ou condição a ser tratada e sobre o sexo, idade, peso e capacidade de resposta individual do mamífero a ser tratado. Em geral, o médico determinará a dosagem apropriado como uma função da idade e peso e todos os outros fatores específicos ao indivíduo a ser tratado.

[00118] É também descrito um método para a prevenção e/ou tra- tamento em um indivíduo de uma doença ou condição implicando o receptor de Relaxina RKFP1 compreendendo administrar ao referido indivíduo pelo menos um peptídeo da invenção, um sal farmaceutica- mente aceitável ou solvato do mesmo ou uma composição farmacêuti- ca da invenção compreendendo pelo menos um peptídeo de acordo com a invenção ou uma quantidade terapeuticamente eficaz de pelo menos um peptídeo da invenção, um sal farmaceuticamente aceitável ou solvato do mesmo ou uma composição farmacêutica da invenção compreendendo pelo menos um peptídeo de acordo com a invenção.

[00119] Como precedentemente indicado, a referida doença ou condição é em particular selecionada de: - o grupo que consiste em fibrose; doenças fibróticas, em particular esclerose sistêmica, esclerodermia e fibromialgia; fibrose pulmonar idiopática; doenças renais envolvendo fibrose; hipertensão pulmonar e pré-eclâmpsia; - o grupo que consiste em doenças cardía- cas e vasculares, em particular do grupo que consiste em insuficiência cardíaca aguda ou crônica, insuficiência cardíaca sistólica ou diastóli- ca, doença de artéria coronariana, aterosclerose, angina microvascular e complicação cardiovascular de diabetes; e/ou - o grupo que consiste em insuficiências renais, em particu- lar disfunção renal em cirrose; doença renal crônica e lesão renal agu- da.

[00120] É também descrito o uso de pelo menos um peptídeo da invenção, um sal farmaceuticamente aceitável ou solvato do mesmo ou a composição farmacêutica da invenção compreendendo pelo me- nos um peptídeo de acordo com a invenção ou uma quantidade tera- peuticamente eficaz de pelo menos um peptídeo da invenção, um sal farmaceuticamente aceitável ou solvato do mesmo ou uma composi- ção farmacêutica da invenção compreendendo pelo menos um peptí- deo de acordo com a invenção para a fabricação de um medicamento para a prevenção e/ou tratamento em um indivíduo de uma doença ou condição implicando o receptor de Relaxina RXKFP1.

[00121] É também descrito o uso de pelo menos um peptídeo de acordo com a invenção, seu sal farmaceuticamente aceitável ou solva- to do mesmo, ou de uma composição farmacêutica de acordo com a invenção para o tratamento e/ou prevenção de uma doença ou condi- ção selecionada de: - o grupo que consiste em fibrose; doenças fibróticas, em particular, esclerose sistêmica, esclerodermia e fibromialgia; fibrose pulmonar idiopática; doenças renais envolvendo fibrose; hipertensão pulmonar e pré-eclâmpsia; - o grupo que consiste em doenças cardíacas e vasculares,

em particular do grupo que consiste em insuficiência cardíaca aguda ou crônica, insuficiência cardíaca sistólica ou diastólica, doença de ar- téria coronariana, aterosclerose, angina microvascular e complicação cardiovascular de diabetes; e/ou - o grupo que consiste em insuficiências renais, em particu- lar, disfunção renal em cirrose; doença renal crônica e lesão renal aguda.

[00122] A presente invenção é ilustrada pelos seguintes exemplos, mencionados puramente para os propósitos ilustrativos.

EXEMPLOS Exemplo 1: síntese dos peptídeos da invenção Material usado

[00123] Várias resinas de amida Rink foram usadas para a síntese de peptídeos de amidas de terminal C da invenção: - Resina de 4-(2' 4'-dimetoxifenil-Fmoc-aminometil)fenóxi, vendida por Chem-Impex; ou - Resina de metila de 4-(2'4'-dimetoxifenil-Fmoc- aminometil)fenóxi acetamido, vendida por Millipore Merck;

[00124] Elasforam carregadas na faixa de 0,2 a 0,4 mmol.g.

[00125] Aminoácidos naturais protegidos por Fmoc (fluorenilmeti- loxicarbonil) foram adquiridos de diferentes fontes, isto é, Protein Technologies Inc., Merck Biosciences, Novabiochem, Iris Biotech, Ba- chem, Chem-Impex International ou MATRIX Innovation.

[00126] Os seguintes aminoácidos padrão foram usados ao longo das sínteses: Fmoc-L-Ala-OH, Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-L-GIn(Trt)- OH, Fmoc-L-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-L-Glu-OtBu, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-L- lle-OH, Fmoc-L-Leu-OH, — Fmoc-L-Lys(Boc)-OH, — Fmoc-L-Met-OH, Fmoc-L-Phe-OH, Fmoc-L-Ser(tBu)-OH, Fmoc-L-Thr(tBu)-OH, Fmoc-L- Trp(Boc)-OH, Fmoc-L-Tyr(tBu)-OH e Fmoc-L-Val-OH.

[00127] Além disso, os seguintes aminoácidos especiais foram ad-

quiridos dos mesmos fornecedores como acima: Fmoc-L-hArg(Pbf)- OH, Fmoc-L-Cit-OH, Fmoc-L-Arg(Me,Pbf)-OH, Fmoc-L-hLys(Boc)-OH, Fmoc-L-Orn(Boc)-OH, Fmoc-L-Lys(Dde)-OH, Fmoc-L-Lys(ivDde)-OH, Fmoc-L-Lys(Mtt)-OH, — Fmoc-L-Lys(aloc)-OH, — Fmoc-L-Lys(Ac)-OH, Fmoc-Aib-OH, Fmoc-L-a-Me-Ser(tBu)-OH, Fmoc-L-a-Me-Lys(Boc)-OH, Fmoc-L-a-Me-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-L-a-Me-Leu-OH, Fmoc-L-Nle-OH e Fmoc-L-1-Nal-OH, Fmoc-L-2-Nal-OH Fmoc-5-Wox-OH, Fmoc-Pfp-OH, Fmoc-L-a-Me-Trp-OH, Fmoc-L-a-Me-Phe-OH. [bao | TaaDimeti-z ó-dioxocila-nex-Tlidenajetia | N,N,N' N'-tetrametilamínio) 1,1,3,3-tetrametilurônio versa

[00128] Para sintetizar os peptídeos lipidados de terminal C da in- venção, lisina ortogonalmente protegida foi usada como indicado a se- guir.

1. A. Método geral usado para sintetizar os peptídeos da invenção

[00129] Peptídeos de acordo com a invenção de sequência SEQ ID NO: 1-97 foram sintetizados com base no método representado nas Figuras 1 e 2.

[00130] 0,2 mmol! de resina de amida AM Rink foi colocado em um sintetizador de peptídeo de micro-ondas CEM Liberty Blue para montar a sequência de peptídeo total. (veja Figura 1).

[00131] A síntese total foi executada em DMF como solvente. O peptídeo foi sintetizado usando o protocolo de aquecimento padrão para escala de 0,1 a 0,2 mmol: Protocolo de aquecimento padrão: irradiação a 170 watts, 75ºC, 15 segundos, em seguida irradiação a 30 watts, 90ºC, 120 se- gundos.

[00132] A desproteção foi realizada com 20% v/v de piperidina em DMF, seguidos por 3 etapas de lavagem de DMF.

Protocolo de aquecimento para desproteção: irradiação a 170 watts, 75ºC, 15 segundos, em seguida irradiação a 30 watts,

90ºC, 50 segundos.

[00133] —Acoplamentos de aminoácido foram realizados usando 5 eq. de Fmoc-AA como soluções a 0,2 M em DMF usando 5 eq. de N,N'-di-isopropilcarbodiimida (DIC) a 0,5M e 5 eq. de (etil 2-ciano-2- (hidroximino)acetato de óxima (oxima pure"!M)) a 1 M como reagentes de acoplamento.

[00134] Para melhor produção final, cada aminoácido requereu acoplamentos duplos a 90ºC durante 120 segundos. Para ácido 2- aminoisobutírico nas posições X2>: e X», e serina na posição X29 da fórmula (1) de acordo com a invenção, um acoplamento triplo a 90ºC durante 2 minutos foi usado.

[00135] No caso de derivados de aminoácido caros, por exemplo, Fmoc-a-MetilLisina(Boc)-OH, pode ser vantajoso realizar um acopla- mento manual usando 3 eq. de aminoácido e 3 eq. de agente de aco- plamento, tais como, HATU ou HCTU em temperatura ambiente duran- te 1 a 18 horas ou usando DIC e Oxima Pure!“ com aquecimento por micro-ondas durante 120 segundos.

[00136] Na posição X25, um derivado de Fmoc-Lisina-OH transpor- tando no nitrogênio de cadeia lateral um grupo de proteção ortogonal foi usado. Desproteção seletiva permitiu modificação desta cadeia late- ral de aminoácido.

[00137] Nofinalda síntese, desproteção de Fmoc foi realizada ma- nualmente com 20% v/v de piperidina em DMF duas vezes 30 minutos em temperatura ambiente.

[00138] —Acetilação foi realizada no terminal N por tratamento com 5 a 10 eq. de anidrido acético e 5 a 10 eq. de DIEA em DMF durante 15 minutos. Em seguida, a resina contendo o peptídeo totalmente prote- gido foi lavada com DCM/DMF/DCM, 3 vezes cada e secada sob vá- cuo.

[00139] Em seguida, grupo de proteção por Ne de lisina na posição

X25 (Dde, ivDde, Aloc, ou Mtt) foi removido usando hidrazina diluída em DMF (Dde, ivDde), fenilsilano ou dimetil amino borano na presença de catalisador de paládio (0) em DCM (aloc) ou 1% de TFA em DCM (Mtt).

[00140] Em seguida, os grupos Z foram ligados ao nitrogênio de cadeia lateral da lisina X2>5s sobre suporte sólido de acordo com as se- guintes etapas:

[00141] Quando a lisina na posição X>25 for protegida sobre sua ca- deia lateral por Dde ou iv-Dde, resina-peptídeo foi transferido em uma seringa de polipropileno de 50 ml. 80 ml de uma solução de hidrazina a 5% em DMF foram percolados através da resina seguidos por lava- gem de DMF (3 vezes). A reação foi monitorada por Kaiser Test.

[00142] “Quando a lisina na posição X25 for protegida sobre sua ca- deia lateral pelo grupo alil-óxi-carbonila (aloc), resina-peptídeo foi transferido em uma seringa de polipropileno de 50 ml e inchado em diclorometano e tratado com 20 eq. de fenilsilano (PRSiH3) (ou com- plexo de borano dimetilamina ((CH3).NH.BH3) e piperidina) e 10% (mol/mol) de tetracis-(trifenilfosfina)paládio (PAd(PPh3)a) durante 2 ho- ras sob argônio. Este tratamento foi repetido até nehum peptídeo pro- tegido por aloc de partida poder ser detectado por análise de UPLC/MS após clivagem de uma parte de alíquota da resina.

[00143] Quando a reação for concluída, a resina foi lavada com di- clorometano, 1% de DIEA em DMF, 5% de dietil-ditio-carbamato em DMF, DMF, 10% de DIEA em DMF, DMF e diclorometano (3 vezes cada).

[00144] Quando a lisina na posição X>25 for protegida sobre sua ca- deia lateral pelo grupo metil-tritila (Mtt), resina-peptídeo foi transferido em uma seringa de polipropileno de 50 ml e inchado em diclorometano e tratado com 10 mL de mistura de DCM/TIS/TFA (88/5/2). Após 1 ho- ra de agitação, o solvente foi drenado, resina lavada com DCM, agita-

da com 10 ml de mistura de DCM/DIEA (90/10) e lavada diversas ve- zes com DCM.

[00145] Os grupos PEGxx do grupo Z foram introduzidos, se aplicá- veis, a um dado peptídeo da invenção, por acilação simples com 3 eq. de Fmoc-PEGxx-OH durante 18 horas com 3 eq. de DIC e 3 eq. de HOAt monitorando as reações por teste de ninidrina (Kaiser). Em se- guida, a resina foi tratada com 20% v/v de piperidina em DMF para remover grupo de proteção Fmoc (2 x 30 min) e lavada 3 vezes com DMF. O acoplamento de Fmoc-PEGxx-OH, remoção de Fmoc e eta- pas de lavagem foram repetidos x vezes (x= 0— 5).

[00146] Em seguida, Fmoc-Glu-OtBu (ácido (48)-5-terc-butóxi-4- (9H-fluoren-9-il metóxi carbonil amino)-5-oxo-pentanoico), se gE pre- sente no grupo Z do peptídeo da invenção, foi introduzido realizando acoplamento único com 3 eq. de aminoácido durante 18 horas com 3 eq. de DIC e 3 eq. de HOAt monitorando as reações por teste Kaiser.

[00147] Em seguida, a resina foi tratada com 20% v/v de piperidina em DMF para remover grupo de proteção Fmoc (2 x 30 min) e lavada 3 vezes com DMF. A remoção de etapas de acoplamento Fmoc e Fmoc-Glu-OtBu foi repetida y vezes (y= 1-5).

[00148] Em seguida, a cadeia lateral foi lipidada usando 3 eq. de ácido Ck laurico (C12), ácido mirístico (C14), ácido pentadecanoico (C15), ácido palmítico (C16), ácido heptadecanoico (C17), ácido esteári- co (C18), ácido eicosanoico (C20) ou ácido docosanoico (C22) usando 3 eq. de DIC e 3 eq. de HOAt em NMP, usando os correspondentes clo- retos de acila e DIEA como uma base em diclorometano ou usando os correspondentes N-succinimidil ésteres e DIEA como base em DMF.

[00149] A reação foi monitorada por teste Kaiser e deixada durante a noite.

[00150] Em seguida, a resina contendo o peptídeo totalmente pro- tegido foi lavada com DCM/DMF/DCM 3 vezes cada e secada sob vá-

cuo.

1.B. Clivagem de peptídeo-resina

[00151] Após conclusão de síntese de fase sólida, o peptídeo foi clivado do suporte sólido por tratamento com reagente de clivagem B: TFA/fenol/H2O0/TIPS (87,5%/5%/5%/2,5%/ 25ml) durante 3horas. (TIPS significa tri-isopropilsilano)

[00152] Em certos casos, adição de um ditiol, tais como, 1,2-etano ditiol ou DODT (2,2'-(etilenodióxi)dietanotiol) pode ser vantajosa (por exemplo, reagente de clivagem K). A solução de TFA contendo o pep- tídeo foi filtrada e concentrada sob pressão reduzida a T < 30ºC.

[00153] O produto desejado foi precipitado com MTBE resfriado (metil terc-butil éter) ou dietil éter e centrifugado a 3000 rpm durante minutos. A pélete centrifugada foi em seguida lavada com dietil éter resfriado e centrifugada. Este processo foi repetido três vezes.

[00154] Em alguns casos pode ser necessário processar o peptídeo cru para remover subprodutos indesejados, tais como, ésteres de TFA, aduto de CO> sobre nitrogênio indol de triptofano (ácido carbâmico) e aduto de 2-t-butil-sulfaniletila sobre resíduos de metionina.

[00155] Para remover aduto de CO, sobre nitrogênio indol de tripto- fano, o peptídeo cru foi apreendido em água contendo 10 a 20% de CH3CN, 5 mg/ml e liofilizado.

[00156] Para remover aduto de 2-t-butil-sulfaniletila sobre Met, o peptídeo cru foi dissolvido (2 mg/ml) em uma solução de H2O/CH3CN (50:50 v/v) contendo 0,1% de ácido fórmico.

[00157] A mistura foi levemente agitada a 37ºC durante a noite.

[00158] Para remover ésteres de TFA, o peptídeo cru foi dissolvido (2 mg/ml) em uma solução de H2O0/CH3CN (50:50 v/v) contendo 0,1% de ácido fórmico. A mistura foi levemente agitada a 37ºC durante 1 a 4 horas.

[00159] Em ambos os casos, a solução de peptídeo cru desse mo-

do obtida foi parcialmente concentrada sob pressão reduzida e a T<30ºC e liofilizada.

1.C. Etapa de purificação

[00160] Seguindo qualquer do método acima indicado para sinteti- zar um peptídeo da invenção, referido peptídeo foi purificado antes de ser usado.

[00161] 80 mg de peptídeo foram dissolvidos em 1,5 mL de DMSO e purificados por cromatografia líquida de pressão elevada de fase re- versa (RP-HPLC). A RP-HPLC foi descrita abaixo.

[00162] Um Manipulador de Líquido GX271, 333/334 bombas, e sis- tema UV/VIS 151 Gilson foram usados.

[00163] Dois diferentes sistemas foram usados a fim de purificar os referidos peptídeos: Sistema À - Coluna Waters Delta-Pack C4 15 um 300À. 250 x20 mm; - Solução A: 0,1% de ácido trifluoroacético (TFA) em H2O; - Solução B: 0,1% de TFA em acetonitrila; - Gradiente: 15% de B durante 5 minutos; 15% de B a 50% de B em 20 min; - Taxa de vazão: 80 ml/min. Sistema B - Coluna Waters CSH C18 5 um 250 x 50 mm, ou Waters Sunfire C18 10 uM 250 x 50 mm; - Solução A = 0,1% de TFA em água; - Solução B = 0,1% de TFA em acetonitrila; - Gradiente: de 1% de B a 18% de B em 5 min; de 18% de B a 28% de B em 10 min; 28% de B durante 15 min; de 28% de Ba 48% de B em 10 min; em seguida lavagem de coluna de 48% de Ba 90% de B em 10 min; - Taxa de vazão: 150 ml/min.

[00164] O peptídeo de interesse foi eluído na janela de tempo de 35 a 40 minutos.

[00165] O gradiente foi levemente ajustado de acordo com a polari- dade de cada peptídeo como caracterizado por seu tempo de retenção sobre um sistema de UHPLC análitico.

[00166] As frações contendo o peptídeo puro foram em seguida parcialmente concentradas sob pressão reduzida a T<35ºC e liofiliza- das até peso constante.

[00167] Para certos usos (por exemplo, teste in vivo), foi vantajoso permutar o sal de TFA para o sal de acetato. Três correspondentes métodos foram usados e são descritos na seguinte parte 1.D.

1.D. Permuta de acetato (i) Permuta de acetato com TOYOPEARLGO DEAE 650 C (Tosoh Corporation)

[00168] A permuta de fon foi realizada usando uma resina de grau TOYOPEARLO DEAE 650 C (uma resina de permuta de ânion fraca).

[00169] 120 ml de resina foram lavados sequencialmente com 15 volumes de NaOH a 1 M, 5 volumes de H2O, 5 volumes de ácido acé- tico a 1,6 M, 5 volumes de ácido acético a 0,16 M e finalmente 5 volu- mes de H2O.

[00170] 41,8mg de peptídeo foram em seguida dissolvidos em 4 ml de água destilada, descarregados na resina e levemente misturados durante 2 horas.

[00171] Finalmente, o peptídeo foi coletado por eluição e lavado com água e liofilizado.

[00172] “Recuperação de Peptídeo: 35 mg (como sal de acetato por F19 NMR (400 MHz) ns 1028). (ii) Permuta de acetato com coluna Sepharose HiTrap Q HP (per- muta aniônica forte comum)

[00173] Neste segundo método, a permuta de íon foi realizada usando um HiTrap Q HP.

[00174] A coluna (volume de leito de 5 ml) foi conectada a um con- junto de bomba peristáltica a 48 (4,5 ml/min) e antes de carregar o peptídeo ela foi lavada com 50 ml (10 volumes de coluna) de H2O, 100 ml (20 volumes de coluna) de uma solução a 1 M de acetato de sódio, 150 ml! (30 volumes de coluna) de HO e com 50 ml (10 volumes de coluna) de solução a 0,16 M de ácido acético.

[00175] O peptídeo puro foi dissolvido em uma solução de ácido acético a 0,16 M a 2 mg/ml, lentamente carregado sobre a coluna e eluído a 4,5 ml/min.

[00176] A solução coletada foi liofilizada.

[00177] A eficácia de uma permuta de fon foi atestada por F19 NMR (400 MHz) ns 1028. (iii) Permuta de acetato com resina de permuta de ânion BIO RAD AG1X40

[00178] Um reator de 125 ml equipado com vidro sinterizado na ba- se foi carregado com 6,2 g de resina de permuta de ânion BIO RAD AG1X46, tamanho de malha seca de 100-—200 (forma OH).

[00179] Aresina foi agitada com 3 x 100 ml de ácido acético aquoso a 1,6 M (10% v/v) e com 3 x 50 ml de ácido acético aquoso a 0,16 M (1% v/v) sobre uma placa de agitação durante 20 minutos cada.

[00180] O peptídeo purificado como sal de TFA (100 mg) foi dissol- vido em 50 ml de água destilada e vertido sobre a resina de permuta e agitado sobre uma placa de agitação durante 120 min.

[00181] A solução aquosa foi drenada em um frasco de base re- donda de 100 ml e a resina foi lavada com 2 x 15 ml de ácido acético aquoso a 0,16 M (1% v/v).

[00182] As soluções combinadas contendo o peptídeo como sal de acetato foram liofiizadas até peso constante. Produção = 80 mg de peptídeo como sal de acetato.

[00183] A eficácia de uma permuta de (on foi atestada por F19 NMR (400 MHz, ns 1028) e/ou cromatografia iônica. Exemplo 2: Síntese ilustrativa de peptídeos da invenção especiífi- cos

2.A Carregamento de Fmoc-Lys(Ac)-OH sobre resina de amida Rink

[00184] Em um reator de 100 ml! equipado com um vidro sinterizado na base, 6 g de resina de amida AM Rink Novabiochem ou Chemlm- pex (carregamento baixo 0,47 mmol/g) foram dilatadas em 40 ml de DMF. O solvente foi drenado e 30 ml de 20% de piperidina em solução de DMF foram adicionados. Após 15 minutos de agitação, o solvente foi drenado. Isto foi repetido duas vezes para assegurar remoção de grupo de proteção Fmoc completa. A resina foi lavada com 5 x 30 ml de DMF.

[00185] Emum frasco separado, a solução contendo Fmoc-Lys(Ac)- OH (3,5 g , 8 mmol, 3 eq.), HOBT.H20 (1,3 g 8,5 mmol) em 30 ml de DMF foi preparada. Diisopropilcarbodi-imida (DIC) (1 g, 8,5 mmol) foi adicionada a esta solução e após 5 minutos a mistura resultante foi adicionada à resina. A suspensão foi agitada sobre uma placa de agi- tação durante 4 horas ou até a conclusão da reação como julgado pelo teste Kaiser (teste de Ninidrina) sobre uma parte de alíquota da resina.

[00186] O solvente foi em seguida drenado e a resina lavada 3 ve- zes com 30 ml de DMF. Resina carregada por Fmoc-Lys(Ac)-NH, foi usada imediatamente para etapas subsequentes ou armazenada úmi- da a 4 ºC até necessário.

2.B. Síntese of peptídeo tendo a SEQ ID NO: 3

[00187] A seguinte síntese foi realizada usando 5 vezes uma quan- tidade de resina obtida na etapa 2.A. correspondendo a 0,2 mmol de Fmoc-Lys(Ac)-NH>2 cada. As sínteses foram realizadas separadamente em cada batelada individual usando um sintetizador de peptídeo de micro-ondas CEM Liberty Blue para montar o segundo e terceiro resí-

duo da sequência de peptídeo (iniciando do terminal C).

[00188] A síntese de peptídeo foi realizada usando DIC a 0,5 M lóxima a 1 M em DMF.

[00189] Todos os aminoácidos foram introduzidos com acoplamen- tos duplos usando protocolo de aquecimento padrão.

[00190] A resina foi removida do sintetizador e Fmoc-a-metil- lisina(Boc)-OH (3 eq.) foi acoplado manualmente usando 3 eq. de Oxima'Y e 3 eq. de DIC com aquecimento por micro-ondas (75ºC, 15 segundos e 90ºC, 110 segundos). A conclusão da reação foi controla- da por teste Kaiser. Se positivo, DIC 3 eq. foi adicionado seguido por aquecimento por micro-ondas como acima.

[00191] “Quando acoplamento de Fmoc-a-metil-lisina(Boc)-OH for concluído, o resto da sequência de peptídeo foi montado usando um sintetizador de peptídeo de micro-ondas CEM Liberty Blue.

[00192] “Todos os aminoácidos foram introduzidos com acoplamen- tos duplos a 90ºC como acima, com a exceção de ácido amino- isobutírico na posição 21 e serina na posição 29 para os quais um acoplamento triplo a 90ºC durante 2 minutos foi realizado. Fmoc- Lys(Dde)-OH foi usado na posição 25.

[00193] No final da síntese 5, as 5 bateladas de resina foram com- binadas e transferidas em uma seringa de polipropileno de 50 ml e o peptídeo foi acetilado no terminal N com anidrido acético (944 uL, 10 mmol) em DMF (30 mL) durante 20 minutos, repetindo o ciclo duas Vezes.

[00194] Em seguida, grupo de proteção Dde sobre cadeia lateral de Lisina 25 foi removido percolando 50 mL de uma solução de hidrazina 5% p/v em DMF, seguidos por lavagem de DMFes (5 x 20 ml). A rea- ção foi monitorada por teste Kaiser e clivagem de uma parte de alíquo- ta de resina e análise de UPLC/MS.

[00195] Três unidades espaçadoras de TTDS foram introduzidas por acoplamento único realizando três vezes o seguinte procedimento: À resina, a solução de Fmoc-TTDS-OH (1,62 g, 3 mmol) em 30 mL de DMF foi adicionada seguida por HOAt (5 ml! de uma solução de 0,6 ml em DMF, 3 mmol) e DIC (1 ml, 6 mmol). A seringa foi agitada em uma mesa orbital durante 18 horas. A reação foi monitorada por teste Kai- ser. A resina foi lavada com DMF (2 x 30 mL). Em seguida, à resina, mL de 20% v/v de piperidina em DMF foram adicionados. A seringa foi agitada em uma mesa orbital durante 20 minutos. Este procedimen- to de desproteção foi repetido uma segunda vez e a resina foi lavada com DMF (2 x 30 mL) e diclorometano (3 x 30 mL).

[00196] Os três espaçadores de ácido gama-glutâmico foram intro- duzidos realizando um acoplamento duplo de cada Fmoc-Glu-OtBu. Desse modo, o seguinte procedimento foi aplicado três vezes: À resina, a solução de ácido (4S)-5-terc-butóxi-4-(9H- fluoren-9-il metóxi carbonilamino)-5-oxo-pentanoico (Fmoc-Glu-OtBu) (1,275 g, 3 mmol) em 30 mL de DMF foi adicionada seguida por HOAt (5 ml de uma solução de 0,6 ml em DMF 3 mmol) e DIC (1 ml, 6 mmol). A seringa foi agitada em uma mesa orbital durante 4 horas. À resina foi lavada com DMF (2 x 20 mL) e o acoplamento foi repetido uma segunda vez. A reação foi monitorada por teste Kaiser. A resina foi lavada com DMF (2 x 30 mL). Em seguida, à resina, 30 mL de 20% vlv de piperidina em DMF foram adicionados. A seringa foi agitada em uma mesa orbital durante 20 minutos. Este procedimento de desprote- ção foi repetido uma segunda vez e a resina foi lavada com DMF (3 x 30 mL) e diclorometano (3 x 30 mL).

[00197] Finalmente, o peptídeo foi acilado com ativação de ácido palmítico (768 mg, 3 mmol), HOAt (5 ml de uma solução a 0,6 M em DMF, 3 mmol) e DIC (1 ml, 6 mmol) em DMF (30 mL) durante 2,5 ho- ras. A resina foi lavada com DMF (2 x 30 mL) e diclorometano (3 x 30mL) e secada sob vácuo.

[00198] A clivagem do peptídeo da resina foi realizada usando uma solução de fenol (6,25 g), água (6,25 mL) e TIPS (3 mL) em TFA (QSP 125 mL) durante 2,5 horas em temperatura ambiente. A resina foi fil- trada e lavada com 2 x 30 mL TFA. Os filtrados combinados foram transferidos para um frasco de base redonda de 250 mL e parcialmen- te concentrados sob vácuo a T<30ºC e o peptídeo foi precipitado pela adição de 100 mL de MTBE resfriados e centrifugados a 3600 rpm du- rante 30 minutos.

[00199] A pélete centrifugada foi em seguida lavada com dietil éter resfriado e centrifugado. Este processo foi repetido três vezes. 4,3 g de peptídeo cru foram obtidos. O peptídeo cru foi dissolvido (10 mg/mL) em uma solução de H20/CH3CN (50:50 v/v) contendo 0,1% de ácido fórmico e a mistura foi levemente agitada a 37 ºC durante 1 ho- ra, parcialmente concentrada e liofilizada.

[00200] A purificação foi realizada usando sistema de purificação À em 10 injeções de 350 mg cada e as frações contendo peptídeo dese- jado puro foram liofilizadas. O peptídeo como sal de trifluoroacetato foi obtido como um sólido branco.

m = 428 mg (17,5%) UPLC/MS : RT : 4,98 min. (Condição analítica A), pureza de 99% (UV) Massa observada m/z (tipo de íon): 1454,5 (M+3H) ; 1091,1 (M+4H) ; 873,1 (M+5H).

2.C. Síntese de peptídeo tendo a SEQ ID NO: 7

[00201] 2 Bateladas de resina obtidas em 2.A. correspondendo a 0,2 mmol de Fmoc-Lys(Ac)-NH2 cada (0,4 mmol no total) foram pro- cessadas em paralelo seguindo o mesmo procedimento como para exemplo 2.B. Após o acoplamento do terceiro ácido (4S)-5-terc-butóxi- 4-(9H-fluoren-9-il metóxi carbonilamino)-5-o0xo-pentanoico (Fmoc-Glu- OtBu), as bateladas de resina combinadas pesando 2,6 g foram trans-

feridas para a seringa de polipropileno de 50 ml.

[00202] Em seguida, à resina, 30 mL de 20% v/v de piperidina em DMF foram adicionados. A seringa foi agitada em uma mesa orbital durante 20 minutos. Este procedimento de desproteção foi repetido uma segunda vez e a resina foi lavada com DMF (3 x 30 mL) e diclo- rometano (3 x 30 mL).

[00203] O peptídeo foi acilado adicionando a solução de cloreto de estearoíla (362 mg, 1,2 mmol) e DIPEA (0,255 ml, 1,5 mmol) em 20 ml de DCM durante 2,5 horas. A resina foi lavada com DMF (2 x 30 mL) e diclorometano (3 x 30mL) e secada sob vácuo.

[00204] A clivagem do peptídeo da resina foi realizada usando a solução de fenol (1,5 g), água (1,5 mL) e TIPS (0,6 mL) em TFA (QSP mL) durante 2,5 horas em temperatura ambiente. A resina foi filtra- da e lavada com 2 x 10 mL de TFA. Os filtrados combinados foram transferidos para um frasco de base redonda de 250 mL e parcialmen- te concentrados sob vácuo a T<30ºC. O peptídeo foi precipitado pela adição de 100 mL de MTBE resfriados e centrifugados a 3600 rom du- rante 30 minutos.

[00205] A pélete centrifugada foi em seguida lavada com dietil éter resfriado e centrifugado. Este processo foi repetido três vezes. 720 mg de peptídeo cru foram obtidos. Purificação foi realizada usando siste- ma de purificação B em 3 injeções de 240 mg cada. As frações con- tendo peptídeo desejado puro foram liofilizadas. O peptídeo como sal de trifluoroacetato foi obtido como um sólido branco.

m = 72 mg (3,6 %) UPLC/MS : RT: 5,86 min. (Condição analítica A), pureza de 98% (UV) Massa observada m/z (tipo de íon): 1463,9 (M+3H); 1098,2 (M+4H) ; 878,7 (M+5H).

2.D. Síntese de peptídeo tendo a SEQ ID NO: 6

[00206] Um lote de resina obtida em 2.A. correspondendo a 0,1 mmol de Fmoc-Lys(Ac)-NH2 foi colocada no reator de um sintetizador de peptídeo de micro-ondas CEM Liberty Blue. Síntese de peptídeo foi realizada usando DIC a 0,5 M /óxima a 1 M em DMF.

[00207] Todos os aminoácidos foram introduzidos com acoplamen- tos duplos a 90ºC como acima, com a exceção de ácido amino- isobutírico na posição 21 e serina na posição 29 para os quais um acoplamento triplo a 90ºC durante 2 minutos foi realizado. Fmoc- Lys(ivDde)-OH foi usado na posição 25.

[00208] No final da montagem de peptídeo, a resina foi transferida para uma seringa de polipropileno de 20 ml e o peptídeo foi acetilado no terminal N com anidrido acético (95 uL, 1 mmol) e DIPEA (174 uL, 1 mmol) em DMF (10 mL) durante 20 minutos, repetindo o ciclo duas Vezes.

[00209] Em seguida, grupo de proteção ivDde sobre cadeia lateral de lisina 25 foi removido agitando com 10 mL de uma solução de hi- drazina a 5% p/v em DMF durante 20 minutos quantas vezes forem necessárias até nenhum material de partida poder ser detectado após clivagem de uma parte de alíquota de resina e análise de UPLC/MS. Quando a desproteção for julgada completa, a resina será lavada com DMF (5x10ml).

[00210] Duas unidades espaçadoras de TTDS foram introduzidas por acoplamento único realizando duas vezes o seguinte procedimen- to: à resina da solução de Fmoc-TTDS-OH (163 mg, 0,3 mmol), HOAt (42 mg, 0,3 mmol) e DIC (77 uL, 0,5 mmol), 7 mL de DMF foram adici- onados. A seringa foi agitada em uma mesa orbital durante 18 horas. A reação foi monitorada por teste Kaiser. Quando necessário, um aco- plamento duplo foi realizado. A resina foi lavada com DMF (2x 10 mL). Em seguida, à resina, 10 mL de 20% v/v de piperidina em DMF foram adicionados. A seringa foi agitada em uma mesa orbital durante 20 mi-

nutos. Este procedimento de desproteção foi repetido uma segunda vez e a resina foi lavada com DMF (2 x 10 mL) e diclorometano (3 x 10 mL).

[00211] Os três espaçadores de ácido gama-glutâmico foram intro- duzidos realizando um acoplamento duplo de cada Fmoc-Glu-OtBu. Desse modo, o seguinte procedimento foi aplicado três vezes:

[00212] À resina da solução de ácido (48)-5-terc-butóxi-4-(9H- fluoren-9-il metóxi carbonilamino)-5-o0xo-pentanoico (Fmoc-Glu-OtBu) (127 mg, 0,3 mmol), HOAt (42 mg, 0,3 mmol) e DIC (77 uL, 0,5 mmol) em 7 mL de DMF. A seringa foi agitada em uma mesa orbital durante 18 horas. A reação foi monitorada por teste Kaiser. A resina foi lavada com DMF (2 x 10 mL). Em seguida, à resina, 10 mL de 20% v/v de pi- peridina em DMF foram adicionados. A seringa foi agitada em uma mesa orbital durante 20 minutos. Este procedimento de desproteção foi repetido uma segunda vez e a resina foi lavada com DMF (3 x 10 mL) e diclorometano (3 x 30 mL).

[00213] Finalmente, o peptídeo foi acilado com cloreto de estearoíla (62 mg, 0,2 mmol) e DIPEA (54 uL, 0,3 mmol) em 5 ml de DCM duran- te 2,5 horas. A resina foi lavada com DMF (2 x 30 mL) e diclorometano (3 x 30mL) e secada sob vácuo.

[00214] A clivagem do peptídeo da resina foi realizada usando uma solução de fenol (0,5 g), água (0,5 mL) e TIPS (0,2 mL) em TFA (QSP mL) durante 2,5 horas em temperatura ambiente. A resina foi filtra- da e lavada com 2 x 4 mL de TFA. Os filtrados combinados foram transferidos para um frasco de base redonda de 100 ml e parcialmente concentrados sob vácuo a T<30ºC e o peptídeo foi precipitado pela adição de 50 mL de MTBE resfriado e centrifugado a 3600 rpm durante minutos.

[00215] A pélete centrifugada foi em seguida lavada com dietil éter resfriado e centrifugado. Este processo foi repetido três vezes. 240 g de peptídeo cru foram obtidos. Purificação foi realizada usando siste- ma de purificação B e as frações contendo peptídeo desejado puro foram liofilizadas. O peptídeo como sal de trifluoroacetato foi obtido como um sólido branco.

m = 38 mg (8 %) UPLC/MS : RT : 5,40 min. (Condição analítica A), pureza de 97% (UV) Massa observada m/z (tipo de íon): 1376,1 (M+3H); 1032,0 (M+4H); 826,0 (M+5H).

2.E. Síntese de peptídeo tendo a SEQ ID NO: 20

[00216] Este composto foi obtidos seguindo o mesmo procedimento como aquele usado no exemplo 2.D exceto que três TTDS foram in- troduzidos sobre cadeia lateral de lisina 25.

[00217] Desse modo, de 250 mg de resina obtidos em 2.A. corres- pondendo a 0,1 mmol de Fmoc-Lys(Ac)-NH2, um sólido branco foi ob- tido.

m = 20 mg (4,5%) UPLC/MS : RT : 5,44 min. (Condição analítica A), pureza de 99% (UV) Massa observada m/z (tipo de íon): 2215,0 (M+2H); 1476,8 (M+3H); 1107,9 (M+4H); 886,7 (M+5H).

2.F. Síntese de peptídeo tendo a SEQ ID NO: 22

[00218] Este composto foi obtido seguindo o mesmo procedimento como aquele usado no exemplo 2.B. exceto que Fmoc-Lys(Aloc)-OH foi usado na posição 25 (X25) ao invés de Fmoc-Lys(Dde)-OH.

[00219] “Desse modo, 250 mg de resina obtidos em 2.A. correspon- dendo a 0,1 mmol de Fmoc-Lys(Ac)-NH2 foram processados como em

2.B. até a etapa de acetilação de terminal N.

[00220] O grupo Aloc sobre cadeia lateral de Lys25 foi removido adicionando à resina, sob atmosfera de argônio, uma solução de 1 ml!

(8,33 mmol) de fenil silano em 2 ml de DCM desgaseificado e uma so- lução de 10 mg (25,96 umoles) de tetracis-(trifenilfosfina) paládio em 4 ml de DCM. A resina foi agitada em uma mesa orbital durante 60 minu- tos e o meio de reação foi recolocado com reagentes frescos duas ve- zes e agitado 60 minutos cada vez.

[00221] “Quando a reação foi concluída, a resina foi lavada com di- clorometano, 1% de DIEA em DMF, 5% de dietil-ditio-carbamato em DMF, DMF, 10% de DIEA em DMF, DMF e diclorometano (3 vezes cada).

[00222] Três unidades espaçadoras de PEG2DGA foram introduzi- das por acoplamento único realizando três vezes o seguinte procedi- mento: à resina, uma solução de Fmoc-PEG2DGA-OH (170 mg, 0,3 mmol) em 8 mL de DCM foi adicionada seguida por HOAt (0,5 ml de uma solução de 0,6 ml em DMF, 0,3 mmol) e DIC (100 ul, 0,642 mmol). A seringa foi agitada em uma mesa orbital durante 18 horas. À reação foi monitorada por teste Kaiser. A resina foi lavada com DMF (2 x 10 mL). Em seguida, à resina, 10 mL de 20% v/v de piperidina em DMF foram adicionados. A seringa foi agitada em uma mesa orbital durante 20 minutos. Este procedimento de desproteção foi repetido uma segunda vez e a resina foi lavada com DMF (2 x 30 mL) e diclo- rometano (3 x 30 mL).

[00223] Os trêsespaçadores de ácido gama-glutâmico foram intro- duzidos realizando um acoplamento duplo de cada Fmoc-Glu-OtBu. Desse modo, o seguinte procedimento foi aplicado três vezes:

[00224] À resina, uma solução de ácido (48)-5-terc-butóxi-4-(9H- fluoren-9-il metóxi carbonilamino)-5-oxo-pentanoico (Fmoc-Glu-OtBu) (0,13 g, 0,3 mmol) em 8 mL de DMF foi adicionada seguida por HOAt (0,5 ml de uma solução de 0,6 ml em DMF 0,3 mmol) e DIC (0,1 ml, 0,6 mmol). A seringa foi agitada em uma mesa orbital durante 4 horas. A resina foi lavada com DMF (2 x 20 mL) e o acoplamento foi repetido uma segunda vez. A reação foi monitorada por teste Kaiser. A resina foi lavada com DMF (2 x 10 mL). Em seguida, à resina, 10 mL de 20% v/v de piperidina em DMF foram adicionados. A seringa foi agitada em uma mesa orbital durante 20 minutos. Este procedimento de desprote- ção foi repetido uma segunda vez e a resina foi lavada com DMF (3 x mL) e diclorometano (3 x 30 mL).

[00225] Finalmente, o peptídeo foi acilado com ativação de ácido palmítico (80 mg, 0,3 mmol), HOAt (0,5 ml! de uma solução a 0,6 M em DMF, 3 mmol) e DIC (0,1 ml, 6 mmol) em DMF (10 mL) durante 2,5 horas. A resina foi lavada com DMF (2 x 30 mL) e diclorometano (3 x 30 mL) e secada sob vácuo.

[00226] A clivagem do peptídeo da resina foi realizada usando uma solução de fenol (0,5 g), água (0,5 mL) e TIPS (0,25 mL) em TFA (QSP 10 mL) durante 2,5 horas em temperatura ambiente. A resina foi filtrada e lavada com 2 x 5 mL de TFA. Os filtrados combinados foram transferidos para um frasco de base redonda de 250 mL e parcialmen- te concentrados sob vácuo a T<30ºC e o peptídeo foi precipitado pela adição de 100 mL de MTBE resfriado e centrifugado a 3600 rpm duran- te 30 minutos.

[00227] A pélete centrifugada foi em seguida lavada com dietil éter resfriado e centrifugado. Este processo foi repetido três vezes. 220 mg de peptídeo cru foram obtidos.

[00228] Purificação foi realizada usando sistema de purificação B. As frações contendo peptídeo desejado puro foram liofilizadas. O pep- tídeo como sal de trifluoroacetato foi obtido como um sólido branco.

m=37 mg (8 %) UPLC/MS : RT : 4,99 min. (Condição analítica A), pureza de 99% (UV) Massa observada m/z (tipo de íon): 2205,2 (M+2H); 1470,5 (M+3H); 1103,1 (M+4H); 882,7 (M+5H).

2.G. Resultados

[00229] Os resultados obtidos com peptídeos da invenção de SEQ ID NO: 1-32, 34-37, 39, 44, 45, 47-49, 51 e 54-97 foram indicados na seguinte Tabela 1. Tabela 1 SEQ| Tempo de Massa observada Massa ID |retenção de Tipo de íon mono iso- (Condições) 1] so sm nm 7) [ans [2 [38560 [asno [10m2 [1863] [asonan) [6 [s540() [8260 | 10320 | 13761 | 20638 | 412339 |

[7] ssa s7m7 (10982 14639 | | a38656| [8 [483 | 807a | 10095 | 13457 | 20183 | 203227 [o 497) [78669 | 9833 | 13107 | 19657 | 3027,30 | [18 4736) | 8203 [10361 [13812] — [413820]

SEQ| Tempo de Massa observada Massa ID |retenção de Tipo de íon mono iso- sas (Condições) [31/5076 6865 |1107a [1768] — 41255

[55] 503(0) | 8021 [11148 [14861 — 40536 |

[56] 542() | 8761 | 10948 [14505] — | 43735)

[58] 5a8(a) | sa68 | 11833 [15775] — | arena |

[60] 534(A) 8182 | 10225 | 13630 [20440 | 40844 | [63 4984) [| 8663 [11076 [14765] — [21246 |

SEQ| Tempo de Massa observada Massa ID |retenção de Tipo de íon mono iso- sas (Condições) [66 497(a) sons [11217 14962) 46806 |

[67] a498(a) 68863 | 11078 14768] — 44255 |

[65] 505(a) | 8809 | 11008 [14675] —/ a397s|

[69] 506(a) | 8865 | 11078 14768) — 44255 |

[70] 9200) 68865 | 110ra [178] — 41256 | 78] 487) | 8665 | 10828 [12434 — | 43255 |

[75] 52860) | o524 | 11906 [15908 | — | arss7 | 79 a66() | 8785 | 10981 [14635 — | 43856 |

[80] 2806) 8088 [11235 14977) — | 46875 |

[82] 490() | 8837 | 1104a [121] — ams

[85] 498(a) | 8047 | 11186 [149008] — | as676|

[86] 5146) | 8rat | 10911 | 14544 | 21816 | 43585 |

[89] 428(A) 7324 | 8787 | 10982 | 1436,0 | 43865 | [oo 482) | 8701 | 10873 | 14405 [21742 | 43445 | [92 4200) [ 8967 [1mos [1222] — [amo]

ID |retenção de Tipo de íon mono iso- NO | UPLC Min. | M4+5H tópica (Condições) [96 424(A) | 859,0 | 10785 | 14313 [21465 | 42685 | 97) a77(a) | 6849 | 11059 | 14r42 | — | 4atrs | Condição A é a sequinte: - Coluna: Acquity Peptide CSH, C18, 130À, 2,1 x 100 mm, 1,7 um; - Temperatura de Coluna: 50 ºC; Fluxo = 0,6 ml/min; - Solvente A: 0,1% de TFA em H2O; - Solvente B: 0,1% de TFA em CH3CN; - Gradiente: de 0 a 1 min B = 2%, de 1 a 7 min B = 2% a 70%, de7a8 min B = 70% a 100% ; - Detector de UV: comprimento de onda: 220 nm; Aquisição de MS: ESI+ 200 a 3000 uma.

Condição B é a sequinte: - Coluna: Acquity BEH C18, 130À, 2,1 x 50 mm, 1,7 um - Temperatura de Coluna 60 ºC; Fluxo 0,6 ml/mn - Solvente A: 0,05% de TFA em H20 - Solvente B: 0,05% de TFA em CH3CN Gradiente: de O a 1 min B = 2%, de 1 a 16 min B = 2% a 100%, de 16 a 17 min B= 100% Detector de UV: comprimento de onda 220 nm; Aquisição de MS: ESI+ 200 a 3000 uma Condição C é a sequinte: - Coluna: ACQUITY BEH C4, 130À, 2,1 x 50 mm, 1,7 um; - Temperatura de Coluna 45 ºC; Taxa de fluxo: 0,4 ml/min; - Solvente A: 0,1% de TFA em H2O; - Solvente B: 0,05% de TFA em CH3CN

Gradiente: de O a 1 min B = 30%, de 1 a 5 min B = 30% a 50%, de 5a 6 min B = 80% Detector de UV: comprimento de onda : 220 nm ; Aquisição de MS : ESI+ 200 a 3000 uma Condição D é a sequinte: - Coluna: Acquity Peptide CSH, C18, 130Á, 2,1 x 150 mm, 1,7 um; - Temperatura de Coluna: 60 ºC; Fluxo = 0,4 ml/min; - Solvente A: 0,1% de TFA em H2O; - Solvente B: 0,1% de TFA em CH3CN; - Gradiente: de 0 a 1 min B = 2%, de 1 a 14 min B = 2% a 70%, de 14 a 16 min B =70% a 100%; - Detector de UV: comprimento de onda: 220 nm; Aquisição de MS: ESI+ 200 a 3000 uma.

[00230] Os seguintes peptídeos de acordo com a invenção podem ser preparados respectivamente como descrito acima: SEQ ID NO 33, 38, 40, 41, 43, 46, 50, 52 e 53. Exemplo 3: Análise in vitro de peptídeos da invenção sobre recep- tores de RKFP1 (ensaio OVCAR5 cAMP) A. Método

[00231] Células OVCAR5 expressando RXFP1 endógeno foram usadas para testar propriedades agonistas de RXKP1 de peptídeos da invenção, e em particular dos peptídeos de sequência SEQ ID NO: 1-

97.

[00232] Visto que RKFP1 é um GPCR acoplado a Gs, cAMP foi usado como leitura de ativação de RXFP1.

[00233] Isobutil Metil Xantina (IBMX) foi usado para inibir atividade de fosfodiesterase facilitando medições de cAMP. Tecnologia HTRF (Fluorescência Resolvida por Tempo Homogênea) foi usada para de- tectar CAMP devido a sua ótima sensibilidade.

[00234] Em síntese, OVCARS5 foram desenvolvidas em meio regular

(RPMI) contendo 10% de soro fetal de bezerro (FCS) e 1% de antibió- ticos (penicilina/estreptomicina).

[00235] Antes dos experimentos, as células foram destacadas com accutase e incubadas durante 40 minutos a 37 ºC com (3-isobutil-1- metilxantina) IBMX a 1 mM.

[00236] As células foram em seguida distribuídas em 384 placas de cavidade preta contendo aumento das concentrações dos diferentes peptídeos em um volume fxo de meio (sem FCS).

[00237] Após uma incubação durante 30 minutos a 37ºC em um incubador úmido em 5% de CO;>, a reação foi paralisada adicionando um volume fixo de uma solução contendo um tampão de lise e cAMP- D2 (cAMP marcado com o corante d2) e o anticorpo anti CAMP ligado a Európio e usada para detecção de cAMP.

[00238] A leitura do experimento foi realizada em um fluorímetro permitindo a medição de HTRF. As curvas de ativação foram geradas plotando o valor intracelular de CAMP versus log10 da concentração de composto.

[00239] A concentração de ativação a 50% (ECso) foi calculada por regressão não linear usando a equação de resposta de dose sigmoidal (inclinação variável) com software Prism 5.

[00240] Emax % foi determinado como o valor intracelular máximo de cAMP para composto teste (limite superior de CAMP vs curva de concentração) dividido pelo valor intracelular máximo de cAMP para H2-relaxina determinado pela mesma ocorrência teste multiplicada por

100.

Emax% = 100 x [CAMPteste cpa] / [CAMP H2-R1x] B. Resultados

[00241] Os resultados obtidos com peptídeos da invenção são re- presentados na seguinte Tabela 2.

Tabela 2

SEQ ID NO A o do e Ls a ess LB as ee

O E O A

A ça doe a os o o a Bo o os Bo O A A 7

SEQD NO A ao oem a | os e ss [o en LB To am o Tas am ss [oa em

[00242] Parece que os peptídeos de acordo com a invenção possu- em muitas propriedades agonistas de RXP1 de interesse, e são muito eficazes para ligar e ativar RKFP1.

[00243] Eles são, além disso, todos significantemente e inespera-

damente superiores aos peptídeos da técnica precedente quando se trata de ativar o receptor RXKFP1.

[00244] O mesmo experimento foi realizado com peptídeos da téc- nica precedente (WO2015/157829) conhecidos sob os nomes B7-33 C11,23S, AcB7-33 C11,23S e KKKK(AcB7-29 C11,23S).

[00245] Os seguintes resultados de ECs5o foram obtidos para estes três peptídeos. Tabela 3 CO enem | ema

[00246] “Como demonstrado acima, os peptídeos de acordo com a invenção possuem muitas propriedades agonistas de RXFP1 de inte- resse, e são muito eficazes para ativar RKFP1. Eles são, além disso, todos significantemente e inesperadamente superiores aos peptídeos da técnica precedente. Exemplo 4: Teste de solubilidade de peptídeos da invenção em tampão A. Método

[000130] Antes do teste de solubilidade de um lote de peptídeo, sua pureza de (HPLC-UV) foi determinada. Meio de estudo: Tampão de fosfato a 50 mM pH 6,5: 15,9 ml de Na2HPO, a 0,1 M (Car- lo Erba 480087) + 34,1 ml de NaH2PO, a 0,1 M (Carlo Erba 480141) + H2O MIlliQ QSP 100 ml Tampão de fosfato a 50 mM pH 7,4: 40,5 ml de Na2HPO, a 0,1 M (Car- lo Erba 480087) + 9,5 ml de NaH2PO, a 0,1 M (Carlo Erba 480141) + H2O MilliQ QSP 100 ml Tampão de acetato a 50 mM pH4,5 : 0,75 g de Ca2H3CO2Na,3H2O0

(Sigma S7545) + 0,35 ml de CH3CO2H a 100% de solução dissolvida em água Millipore, ajustados para pH com (1:1) de CH3CO>2H diluído e diluído para 250 ml com água Millipore.

[000131] Em um frasco Ependorph de 4 ml, uma amostra precisa- mente pesada de composto foi diluída em meio de estudo para obter concentração alvo de 2, 6 ou 10 mg/ml de composto puro. Os frascos de amostra foram agitados (rock “roll shaker) durante -19 horas. 300 uL de alíquotas foram filtradas através de uma placa Millipore "Solvi- nert" (0,45 um - PTFE hidrofílico). A solubilidade foi em seguida deter- minada por comparação de uma injeção de 0,2 pL do filtrado com as áreas de pico de UV obtidas com uma solução mãe do peptídeo em uma concentração de 1,2 mg/ml em DMSO (com base em % de pure- za), injetando vários volumes variando de 0,2 —2pL. Análise: pH foi medido com um micro eletrodo Condições de HPLC: Sistema Waters Acquity UPLC com detector DAD Coluna: Coluna Waters Peptide CSH C18 (130 À ; 1,7 um ; 502,1 mm) Temperatura de Coluna: 60 ºC Fluxo: 0,3 ml/min Ciclo completo (cerca de 5 uL) — fator de transbordamento 5 Lavagem fraca e forte: H20/ACN (75/25; V/IV); Lavagem de vedação: H20/I1sOH (95/5; V/V). Fase móvel: Solvente A : 0,05% de TFA em H20; Solvente B: 0,035% de TFA em CH3CN Gradiente: de 0 a 12 min B = 2% a 60%, de 12 a 14 min B= 60% a 100%. Lavagem de coluna 100% de B 1 min, equilíbrio de coluna 2% de B 2,5 min. Detector de UV: comprimento de onda: 220 nm.

B. Resultados

[000132] Os resultados de solubilidade obtidos são representados na seguinte Tabela 4. Tabela 4 solubilidade pH 4,5* solubilidade pH 7,4* * Solubilidade alvo: 10,0 mg/ml

[000133] O mesmo experimento foi realizado com peptídeos da téc- nica precedente (WO2015/157829) conhecidos sob os nomes B7-33 C11,238S, AcB7-33 C11,23S e KKK(AcB7-29 C11,238).

[000134] Os seguintes resultados de solubilidade foram obtidos para estes três peptídeos.

Tabela 5 solubilidade pH 4,5** | solubilidade pH 7,4** C11,238S) ** Solubilidade alvo: 2,0 mg/ml

[000135] Os peptídeos da invenção mostram solubilidade melhorada comparados aos compostos da técnica precedente. Esta propriedade permitiria uma faixa maior de concentração quando preparando solu- ções injetáveis, desse modo, expandindo faixas de dosagem in vivo. Exemplo 5: Teste de estabilidade de peptídeos em plasma ou sanque de rato ou humano A. Método

[00247] Antes do teste de estabilidade em plasma (ou sangue) de um lote de peptídeo, sua pureza (HPLC-UV) foi determinada. Meio de estudo: Plasma de Rato e Humano: anti-coagulante de heparina de lítio ou só- dio. Sangue de Rato e Humano: anti-coagulante de heparina de lítio ou só- dio. Solução Mãe: 100 uM de solução de composto de estudo em 50 mM de tampão de fosfato, pH 7,4.

[00248] 950 ul de plasma (ousangue) foram pré-incubados durante minutos a 37ºC. 50 ul de solução mãe de composto foram adiciona- dos. Concentração final de composto = 5 uM. Vórtice e transferência de 150 ul de plasma (ou sangue) em um Eppendorf para cada ponto do tempo. Os pontos do tempo O - 1 e - 4 h foram realizados em dupli- cate para cada espécie.

[00249] — Após incubação, 150uL de plasma (ousangue) foram extra- ídos com 600H4L de acetonitrilacontendo 1% de TFA. A referida mistura foi então submetida a vórtice e centrifugada 10 minutos a 14600 rpm. 200uL de sobrenadante foram secados sob N2. A amostra foi então reconstituída em 200 ul de H2O0/CH3;CN 98/2 + 0,1% de FA + 50ng/ml Labetalo| e analisada usando o Sistema analítico usado em estudos de solubilidade e estabilidade.

[00250] Para determinação da quantidade restante de peptídeo, as áreas de pico do composto alvo em tO e dias de cada ponto do tempo foram comparados, resultando em "% restante de peptídeo", seguindo a equação: % restante de peptídeo = [(tempo de peptídeo na área de pico) x 100]/tO0 de peptídeo na área de pico. A estabilidade foi expressa como "% restante de peptídeo". Critérios de aceitação: Os compostos testes foram considerados está- veis se a precisão foi — 15% e a recuperação foi na faixa entre 85 e 115%. B. Resultados

[00251] Os resultados de estabilidade de plasma e sangue obtidos são representados na seguinte Tabela 6. Tabela 6: Humano Rato e OB se 1 es [o e Too [67 [a 100 | oo | 100 00 | too | se os | e a e a no) Cr de e sm 1 | 6 |

Humano Rato Nesse e o Tn e ss [o [no | [2 1 [10 | ss [100 [100 | no) * Estabilidade plasmática

[00252] O mesmo experimento foi realizado com peptídeos da téc- nica precedente (WO2015/157829) conhecidos sob os nomes B7-33 C11.23S, AcB7-33, e KKKK(AcB7-29 C11.23S).

[00253] Os seguintes resultados de estabilidade plasmátia foram obtidos para estes três peptídeos. TABELA 7: Humana de Rato % restante % restante ema C11.238S)

[00254] Os peptídeos da invenção parecem ser mais estáveis em plasma e/ou sangue do que os compostos da técnica precedente. Exemplo 6: Determinação Farmacocinética (PK) de peptídeos após administração in vivo a ratos. A. Método:

[00255] Antes do teste de um lote de peptídeo, sua pureza (HPLC- UV) foi determinada. A dose foi corrigida quanto à presença de sais, solvent e pureza.

[00256] “Método de análise bioanalítica para quantificação de peptí- deos em rato:

[00257] Ratos Sprague Dawley foram dosados com o peptídeo de estudo emu ma dose de 1 mg/kg intravenosamente (i.v.) ou 3 mg/kg subcutaneamente (s.c.) como uma solução em PBS (0,2 mg/ml e 0,6 mg/ml respectivamente).

[00258] “Amostras de sangue foram coletadas após: 0,083, 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 8, 24, 48 e 72 h (via i.v.) e 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 6, 8, 10, 24, 48 e 72 h (via s.c) após aplicação.

[00259] — Amostras plasmáticas foram analisadas após a precipitação da proteína por meio de espectrometria de massa de cromatografia líquida (LC/MS).

[00260] Os parâmetros PK e meia-vida foram calculados usando Phoenix 64 (WinNonlin 6.4) - Pharsight (CertaraTM) (modelo não- compartimento). Valores abaixo do limite de quantificação (BLQ) foram substituídos por zero para os cálculos subsequentes e análise PK. B. Resultados:

[00261] Os parâmetros PK obtidos são representados na seguinte Tabela 8.

[00262] As seguintes abreviações são usadas: Te : meia-vida in vivo, tempo requerido para a concentra- ção plasmática do composto teste ser dividida por dois durante o expe- rimento PK.

CO : Concentração plasmática do composto teste extrapo- lada a ponto do tempo t=0 (via i.v.).

Cmax : concentração plasmática do composto teste máxi- mano ponto do tempo indicado (via s.c.).

Tmax : Ponto do tempo onde a Cmaxfoi atingida.

F% : biodisponibilidade s.c. vs i.v., área de dose corrigida sob a curva (AUC) via s.c. dividida por AUC i.v.

Tabela 8

SEQTD NO so 7 32 23 | 68 [6 a an es [1 8 6 Cs ss sr en e 7) [20 6513 | ao | 1 | o | so [ss 1 48 [an [20 [| 6 | es |

[00263] O mesmo experimento foi realizado com Relaxina-H2. Tabela 9 EC HeReanma | oe

[00264] Em comparação com a Relaxina-H2, peptídeos da invenção selecionados apresentam parâmetros farmacocinéticos melhorados. Em particularsua meia-vida invivoem rato, varia de 4horas a 9horas.Tais peptídeos podem então reter sua eficácia durante um pe- ríodo de tempo maior, permitindo administração uma vez ao dia pela via intravenosa ou subcutânea.

Listagem de Sequências SEQ ID NO: 1 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE- gE-gE-Palm)-S-T-W-S-Aib-R-K-K(Ac)-NH2 SEQ ID NO: 2 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE- gE-gE-Palm)-S-T-F-S-Aib-R-A-K(Ac)-NH> SEQ ID NO: 3 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE- gE-gE-Palm)-S-T-F-S-MlIy-R-A-K(Ac)-NH> SEQ ID NO: 4 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-gE-gE-gE- Palm)-S-T-W-S-Aib-R-K-K(Ac)-NH,2 SEQ ID NO: 5 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-|-Aib-Aib-E-G-K(PEG2-PEG2-PEG,7- PEG>2-gE-gE-gE-Palm)-S-T-W-S-Aib-R-K-K(Ac)-NH2 SEQ ID NO: 6 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I|-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-gE-gE-gE- Stea)-S-T-W-S-Aib-R-K-K(Ac)-NH>2 SEQ ID NO: 7 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-|-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE- gE-gE-Stea)-S-T-F-S-Mly-R-A-K(Ac)-NH2 SEQ ID NO: 8 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(PEG2-PEG2-PEG;7- PEG>2-gE-gE-gE-Palm)-S-T-F-S-MIy-R-A-K(Ac)-NH> SEQ ID NO: 9 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I|-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-gE-gE- Palm)-S-T-F-S-MIy-R-A-K(Ac)-NH2 SEQ ID NO: 10 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I|-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-gE-gE-gE-

gE-Palm)-S-T-F-S-Mly-R-A-K(Ac)-NH2 SEQ ID NO: 11 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE- gE-gE-Palm)-S-T-W-S-Mly-R-A-K(Ac)-NH2 SEQ ID NO: 12 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-Cit-|-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE- gE-Palm)-S-T-F-S-Mly-R-A-K(Ac)-NH>2 SEQ ID NO: 13 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE- gE-gE-Palm)-S-T-F-S-K-R-A-K(Ac)-NH2 SEQ ID NO: 14 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE- gE-gE-Palm)-S-T-F-Dser-K-R-A-K(Ac)-NH>2 SEQ ID NO: 15 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-|-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE- gE-gE-Palm)-S-T-F-Aib-K-R-A-K(Ac)-NH2 SEQ ID NO: 16 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I|-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-gE-gE-gE- Palm)-S-T-F-S-Dlys-R-A-K(Ac)-NH2 SEQ ID NO: 17 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-|-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-gE-gE-gE- Palm)-S-T-W-S-Dlys-R-A-K(Ac)-NH2 SEQ ID NO: 18 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I|-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-gE-gE-gE- Palm)-S-T-W-S-Dlys-R-K-K(Ac)-NH> SEQ ID NO: 19 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I|-Aib-Aib-E-G-K(PEG2-PEG2-PEG>2-gE- gE-gE-Palm)-S-T-W-S-Aib-R-K-K(Ac)-NH2 SEQ ID NO: 20 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I|-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-

gE-gE-Stea)-S-T-W-S-Aib-R-K-K(Ac)-NH2 SEQ ID NO: 21 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(PEG2-PEG2-PEG;72- PEG>2-gE-gE-gE-Stea)-S-T-W-S-Aib-R-K-K(Ac)-NH>2 SEQ ID NO: 22 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I|-Aib-Aib-E-G-K(PEG2DGA-PEG2DGA- PEG2DGA-gE-gE-gE-Palm)-S-T-F-S-MIy-R-A-K(Ac)-NH2 SEQ ID NO: 23 Ac-L-E-G-R-E-L-V-R-A-K(Ac)-I|-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE- gE-gE-Palm)-S-T-F-S-MlIy-R-A-K(Ac)-NH> SEQ ID NO: 24 Ac-L-E-G-R-E-F-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE- gE-gE-Palm)-S-T-F-S-MIy-R-A-K(Ac)-NH>2 SEQ ID NO: 25 Ac-L-E-G-R-E-Q-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE- gE-gE-Palm)-S-T-F-S-MIy-R-A-K(Ac)-NH> SEQ ID NO: 26 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I|-Aib-Aib-E-G-K(PEG2-PEG2-PEG;,- PEG>2-gE-gE-gE-Stea)-S-T-F-S-Mly-R-A-K(Ac)-NH2 SEQ ID NO: 27 Ac-L-E-G-R-E-R-V-R-A-K(Ac)-|-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE- gE-gE-Palm)-S-T-F-S-Mly-R-A-K(Ac)-NH2 SEQ ID NO: 28 Ac-L-E-G-R-E-Hly-V-R-A-K(Ac)-|-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS- gE-gE-gE-Palm)-S-T-F-S-MIy-R-A-K(Ac)-NH> SEQ ID NO: 29 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-Aib-K(Ac)-|-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS- gE-gE-gE-Palm)-S-T-F-S-Mly-R-A-K(Ac)-NH2 SEQ ID NO: 30 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I|-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-

gE-gE-Stea)-S-T-W-S-Mly-R-A-K(Ac)-NH>z SEQ ID NO: 31 Ac-L-E-G-R-E-R-V-R-A-K(Ac)-|-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE- gE-gE-Palm)-S-T-W-S-Aib-R-R-K(Ac)-NH2 SEQ ID NO: 32 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I|-Aib-Aib-E-G-K(PEG2DGA-PEG2DGA- PEG2DGA-gE-gE-gE-Stea)-S-T-F-S-Mly-R-A-K(Ac)-NH>2 SEQ ID NO: 33 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-gE-gE-gE- Palm)-S-T-F-S-MIy-R-A-K(Ac)-NH2 SEQ ID NO: 34 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-gE-gE-gE- Stea)-S-T-F-S-Mly-R-A-K(Ac)-NH,z SEQ ID NO: 35 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-|-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE- gE-gE-Palm)-S-T-W-Aib-K-R-A-K(Ac)-NH>2 SEQ ID NO: 36 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I|-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE- gE-gE-Palm)-S-T-F-S-DlIys-R-A-K(Ac)-NH>2 SEQ ID NO: 37 Ac-L-E-G-R-E-L-V-R-A-K(Ac)-I|-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE- gE-gE-Palm)-S-T-W-S-Aib-R-R-K(Ac)-NH2 SEQ ID NO: 38 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I|-Aib-Aib-E-G-K(PEG2-PEG2-PEG>2-gE- gE-gE-Palm)-S-T-F-S-MIly-R-A-K(Ac)-NH2 SEQ ID NO: 39 Ac-L-E-G-R-E-F-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE- gE-gE-Palm)-S-T-W-S-Aib-R-R-K(Ac)-NH2 SEQ ID NO: 40 Ac-L-E-G-R-E-Q-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-

gE-gE-Palm)-S-T-W-S-Aib-R-R-K(Ac)-NH>, SEQ ID NO: 41 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(PEG2DGA-PEG2DGA- PEG2DGA-gE-gE-gE-Palm)-S-T-W-S-Mly-R-A-K(Ac)-NH>2 SEQ ID NO: 42 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(PEG2-PEG2-PEG,7- PEG>2-gE-gE-gE-Palm)-S-T-W-S-MIy-R-A-K(Ac)-NH> SEQ ID NO: 43 Ac-L-E-G-R-E-Hly-V-R-A-K(Ac)-|-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS- gE-gE-gE-Stea)-S-T-W-S-Mly-R-A-K(Ac)-NH> SEQ ID NO: 44 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE- gE-gE-Palm)-S-T-W-Dser-K-R-A-K(Ac)-NH2 SEQ ID NO: 45 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-|-Aib-Aib-E-G-K(PEG2-PEG2-PEG,7- PEG2-PEG>2-gE-gE-gE-Palm)-S-T-F-S-MIy-R-A-K(Ac)-NH2 SEQ ID NO: 46 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I|-Aib-Aib-E-G-K(PEG2-PEG2-PEG;,- PEG2-PEG>2-gE-gE-gE-gE-Palm)-S-T-F-S-Mly-R-A-K(Ac)-NH>2 SEQ ID NO: 47 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE- gE-Palm)-S-T-F-S-Mly-R-A-K(Ac)-NH2 SEQ ID NO: 48 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-Q-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE- gE-Palm)-S-T-F-S-Mly-R-A-K(Ac)-NH2 SEQ ID NO: 49 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE- gE-gE-Palm)-S-T-F-S-MIy-R-A-K-NH>2 SEQ ID NO: 50 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(PEG2DGA-PEG2DGA-

PEG2DGA-gE-gE-gE-Stea)-S-T-W-S-Aib-R-K-K(Ac)-NH2 SEQ ID NO: 51 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE- gE-gE-gE-Stea)-S-T-W-S-Aib-R-K-K(Ac)-NH>2 SEQ ID NO: 52 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE- gE-Stea)-S-T-W-S-Aib-R-K-K(Ac)-NH>2 SEQ ID NO: 53 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(PEG2DGA-PEG2DGA- PEG2DGA-gE-gE-gE-gE-Stea)-S-T-W-S-Aib-R-K-K(Ac)-NH2 SEQ ID NO: 54 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-gE-gE-gE- gE-Stea)-S-T-W-S-Aib-R-K-K(Ac)-NH2 SEQIDNO: 55 Ac-L-E-G-R-E-R-V-R-A-K(Ac)-|-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE- gE-gE-Palm)-S-T-W-S-Aib-R-R-K(Ac)-NH2 SEQ ID NO: 56 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-Cit-|-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE- gE-Stea)-S-T-F-S-Mly-R-A-K(Ac)-NH2 SEQ ID NO: 57 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-|-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE- gE-gE-Palm)-S-T-W-S-Hly-R-A-K(Ac)-NH2 SEQ ID NO: 58 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS- TTDS-gE-gE-gE-Stea)-S-T-W-S-Aib-R-K-K(Ac)-NH2 SEQ ID NO: 59 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS- TTDS-gE-gE-gE-Stea)-S-T-F-S-Aib-R-K-K(Ac)-NH2 SEQ ID NO: 60 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I|-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-gE-gE-gE-

Stea)-S-T-F-S-Aib-R-K-K(Ac)-NH>2 SEQ ID NO: 61 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE- gE-gE-Stea)-S-T-F-S-Aib-R-K-K(Ac)-NH2 SEQ ID NO: 62 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE- gE-gE-gE-Palm)-S-T-W-S-Aib-R-K-K(Ac)-NH2 SEQ ID NO: 63 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE- gE-gE-Palm)-S-Q-W-S-Aib-R-K-K(Ac)-NH2 SEQ ID NO: 64 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE- gE-gE-Palm)-S-R-W-S-Aib-R-K-K(Ac)-NH>2 SEQ ID NO: 65 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-K(Ac)-Q-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE- gE-gE-Palm)-S-T-W-S-Aib-R-K-K(Ac)-NH>2 SEQ ID NO: 66 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I|-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE- gE-gE-Palm)-S-T-W-K(Ac)-Aib-R-A-K(Ac)-NH>2 SEQ ID NO: 67 Ac-L-E-G-R-E-R-V-R-A-K(Ac)-|-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE- gE-gE-Palm)-S-T-W-S-Aib-R-K-K(Ac)-NH2 SEQ ID NO: 68 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE- gE-gE-Palm)-S-T-W-S-Aib-R-K(Ac)-K-NH2 SEQ ID NO: 69 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE- gE-gE-Palm)-S-T-W-S-Aib-R-K(Ac)-R-NH2 SEQ ID NO: 70 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-|-Aib-|-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE-

gE-Palm)-S-T-W-S-Aib-R-K-K(Ac)-NH> SEQ ID NO: 71 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE- gE-gE-Palm)-S-T-W-S-Aib-R-A-K-NH> SEQ ID NO: 72 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE- gE-gE-Palm)-S-T-F-Aib-R-R-A-K(Ac)-NH> SEQ ID NO: 73 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE- gE-gE-Palm)-S-K-W-S-Aib-R-A-K-NH> SEQ ID NO: 74 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-l-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-TTDS- gE-gE-gE-Palm)-S-T-W-S-Aib-R-K-K(Ac)-NH> SEQ ID NO: 75 Ac-L-E-G-R-E-R-V-R-A-K(Ac)-|-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS- TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-W-S-Aib-R-R-K(Ac)-NH, SEQ ID NO: 76 Ac-L-E-G-R-E-R-V-R-A-K(Ac)-|-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE- gE-gE-Palm)-S-T-F-S-Aib-R-R-K(Ac)-NH, SEQ ID NO: 77 AcC-L-E-G-R-E-R-V-R-A-K(Ac)-|-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS- TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-F-S-Aib-R-R-K(Ac)-NH> SEQ ID NO: 78 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS- TTDS-gE-gE-gE-Palm)-S-T-F-S-MIy-R-A-K(Ac)-NH, SEQ ID NO: 79 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE- gE-gE-Palm)-S-K-F-S-Aib-R-K-K(Ac)-NH, SEQ ID NO: 80 Ac-L-E-G-R-E-R-V-R-A-K(Ac)-|-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-

gE-gE-Palm)-S-T-Trp(5-CI)-S-Aib-R-R-K(Ac)-NH>2 SEQ ID NO: 81 Ac-K(Ac)-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-|-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS- gE-gE-gE-Palm)-S-T-F-S-MIly-R-A-K(Ac)-NH>2 SEQ ID NO: 82 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-Aib-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS- gE-gE-gE-Palm)-S-T-W-S-Aib-R-A-K(Ac)-NH2 SEQ ID NO: 83 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE- gE-gE-Palm)-S-K-W-S-Aib-R-K-K(Ac)-NH2 SEQ ID NO: 84 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-|-Aib-|l-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-gE- gE-Palm)-S-T-F-S-MIy-R-A-K(Ac)-NH2 SEQ ID NO: 85 Ac-L-E-G-R-E-R-V-R-Aib-K(Ac) | Aib Aib E G K(TTDS-TTDS-TTDS-gE- gE-gE-Palm) S TW S Aib R R K(Ac)-NH2 SEQ ID NO: 86 Ac-Aib-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-|-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE- gE-gE-Palm)-S-T-F-S-MlIy-R-A-K(Ac)-NH> SEQ ID NO: 87 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-|-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE- gE-gE-Palm)-S-T-F-S-R-R-A-K(Ac)-NH2 SEQ ID NO: 88 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE- gE-gE-Palm)-S-T-F-S-HIy-R-A-K(Ac)-NH>2 SEQ ID NO: 89 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-I-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE- gE-gE-Palm)-S-T-Mph-S-R-R-A-K(Ac)-NH> SEQ ID NO: 90 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-|-A-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE-

gE-gE-Palm)-S-T-F-S-Mly-R-A-K(Ac)-NH2 SEQ ID NO: 91 Ac-L-E-G-R-E-R-V-R-A-K(Ac)-|-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE- gE-gE-Palm)-S-T-Pfp-S-Aib-R-R-K(Ac)-NH2 SEQ ID NO: 92 Ac-L-E-G-R-E-R-V-R-A-K(Ac)-|-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE- gE-gE-Palm)-S-T-Trp(5-F)-S-Aib-R-R-K(Ac)-NH>2 SEQ ID NO: 93 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-|-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE- gE-gE-Palm)-S-T-F-T-R-R-A-K(Ac)-NH2 SEQ ID NO: 94 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-|-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE- gE-gE-Palm)-S-T-F-V-R-R-A-K(Ac)-NH>2 SEQ ID NO: 95 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-|-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE- gE-gE-Myr)-S-T-F-S-MIy-R-A-K(Ac)-NH2 SEQ ID NO: 96 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-|-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE- gE-gE-Myr)-S-T-F-S-Mly-R-A-K-NH>2 SEQ ID NO: 97 Ac-L-E-G-R-E-K-V-R-A-K(Ac)-|-Aib-Aib-E-G-K(TTDS-TTDS-TTDS-gE- gE-gE-gE-Myr)-S-T-F-S-Mly-R-A-K-NH2 SEQ ID NO: 100= Cadeia A de Relaxina-H2 H-Gln-Leu-Tyr-Ser-Ala-Leu-Ala-Asn-Lys-Cys-Cys-His-Val-Gly-Cys-Thr- Lys-Arg-Ser-Leu-Ala-Arg-Phe-Cys-OH SEQ ID NO: 101= Cadeia B de Relaxina-H2 H-Asp-Ser-Trp-Met-Glu-Glu-Val-Ile-Lys-Leu-Cys-Gly-Arg-Glu-Leu-Val- Arg-Ala-Gln-lle-Ala-lle-Cys-Gly-Met-Ser-Thr-Trp-Ser-OH SEQ ID NO: 102= SEQ ID B7-33 C11.238* H-Val-lIle-Lys-Leu-Ser-Gly-Arg-Glu-Leu-Val-Arg-Ala-Gln-lle-Ala-lle-Ser-

Gly-Met-Ser-Thr-Trp-Ser-Lys-Arg-Ser-Leu-NH>2 SEQ ID NO: 103= SEQ ID AcB7-33 C11.23S* Ac-Val-lle-Lys-Leu-Ser-Gly-Arg-Glu-Leu-Val-Arg-Ala-Gln-lle-Ala-lle- Ser-Gly-Met-Ser-Thr-Trp-Ser-Lys-Arg-Ser-Leu-NH2 SEQ ID NO: 104 = SEQ ID KKKK(AcB7-29 C11.238S)* Ac-Val-lle-Lys-Leu-Ser-Gly-Arg-Glu-Leu-Val-Arg-Ala-Gln-lle-Ala-lle- Ser-Gly-Met-Ser-Thr-Trp-Ser-Lys-Lys-Lys-Lys-NH2 *exemplos de comparação

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Peptídeo, caracterizado pelo fato de que apresenta a se- guinte fórmula (1): Nter-Ac-X10-E-G-R-E-X15-V-R-X18-X19-1-X21-X22-E-G-X25-S-X27-X28-X29- Xsao-Xa1-X32-X33-NH2-Cter em que: Nte: representa a extremidade N-terminal do peptídeo; Crer representa a extremidade C-terminal do peptídeo; Ac representa grupo acetila; X1o representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em leucina, ácido 2-amino-isobutírico, Ne-acetil-lisina e a- metil-leucina; E representa ácido glutâmico; G representa glicina; R representa arginina; X15 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em lisina, arginina, homolisina, homoarginina, ornitina, gluta- mina, fenilalanina e leucina; V representa valina; X18 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em alanina, ácido 2-amino-isobutírio, leucina, Ne-acetil-lisina e glutamina; X19 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em lisina, Ne-acetil-lisina, citrulina, glutamina, alanina e ácido 2-amino-isobutírio; | representa isoleucina; Xa representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em ácido 2-amino-isobutírico e alanina; X22 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em ácido 2-amino-isobutírico e isoleucina;

Xas representa a seguinte estrutura: H-? H o em que:

-* representa uma ligação covalente com a glicina prece- dendo X>25 na fórmula (1);

- + representa uma ligação covalente com a serina seguindo Xas na fórmula (1); e

Z representa um grupo de fórmula (Il):

—I(PEGXX)»(gE)<Ca],

b e c independentemente representa 1, 2, 3,4 ou 5;

PEGxx independentementerepresenta um derivado de poli- etileno glicol selecionado do grupo que consiste em PEG>2, PEG2DGA, e TTDS;

gE representa ácido gama-glutâmico; e

Carepresenta um grupo C12-C22 acila saturado linear;

S representa serina;

X27 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em treonina, lisina, arginina e glutamina;

X28 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em triptofano, fenilalanina, 5-fluoro-triptofano, 5-cloro- triptofano, —5-metóxi-triptofano, tirosina, 4-fluoro-fenilalanina, 1- naftilalanina, 2-naftilalanina, a-metil-triptofano, a-metil-fenilalanina e 5- hidróxi-triptofano;

X29 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em serina, D-serina, 2-amino-isobutírico acid, treonina, a-

metil-serina, Ne-acetil-lisina e valina; X3o representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em ácido 2-amino-isobutírio, a-metil-lisina, D-lisina, lisina, homolisina, ornitina, arginina e a-metil-arginina; X31 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em arginina, Now-metil-arginina, alanina, Now,Nw'-dimetil- arginina e citrulina; X32 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em lisina, alanina, arginina, Ne-acetil-lisina e Ne,Ne, Ne-tri- metil-lisina;e X33 representa um aminoácido selecionado de lisina, Ne- acetil-lisina, leucina, arginina e alanina; ou um sal ou solvato dos mesmos.

2. Peptídeo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que b representa 2, 3, 4 ou 5 e c representa 2, 3 ou 4.

3. Peptídeo de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracte- rizado pelo fato de que Ca representa um grupo acila saturado linear selecionado do grupo que consiste em grupo C12 (Lau), C14 (Myr), C15 (Penta), C16 (Palm), C17 (Hepta), C18 (Stea), Cao (Eico) e C22 (Doco) acila, em particular um grupo acila saturado linear selecionado do gru- po que consiste em C12 (Lau), C14 (Myr), C15 (Penta), C16 (Palm), C17 (Hepta) ou C16 (Stea) acila, e particularmente um grupo C16 ou C18 aci- la linear.

4, Peptídeo de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 3, caracterizado pelo fato de que apresenta a seguinte fórmu- la (lb): Nter-Ac-X109-E-G-R-E-X15-V-R=X18-X19-1-X21 -X22-E-G-X25-S-X27-X28-X29- Xao-R-X32-X33-NH2-Cter em que: Nter representa a extremidade N-terminal do peptídeo;

Crer representa a extremidade C-terminal do peptídeo; Ac representa grupo acetila; X1o representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em leucina, Ne-acetil-lisina e ácido 2-amino-isobutírio; E representa ácido glutâmico; G representa glicina; R representa arginina; X'15 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em lisina, arginina, homolisina, glutamina, fenilalanina e leuci- na; V representa valina; X18 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em alanina, ácido 2-amino-isobutírico e Ne-acetil-lisina; X19 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em lisina, Ne-acetil-lisina, glutamina e citrulina; | representa isoleucina; X21 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em ácido 2-amino-isobutírico e alanina; X22 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em ácido 2-amino-isobutírico e isoleucina; Xas representa a seguinte estrutura:

HE

H O em que: - * representa uma ligação covalente com a glicina prece- dendo X>25 na fórmula (la);

- + representa uma ligação covalente com a serina seguindo X25 na fórmula (la); e

Z é selecionado do grupo que consiste em um -(TTDS)>- (gE);-Palm, -(TTDS)3-(gE)3-Palm, -(PEG2DGA)3-(gE)3-Palm, -(PEG>2)1- (gE)3;-Palm, -(TTDS)2-(gE)2-Palm, -(TTDS)2-(gE)3-Stea, -(TTDS)3-(gE)3- Stea, -(PEG2DGA)3-(gE)3-Stea, -(PEG2DGA)3-(gE)1-Stea, -(PEG>2)3- (gE);-Palm, -(PEG2)4-(gE)3-Stea, -(PEG2)5-(gE)3-Palm, -(PEG2)5-(g9E).a- Palm, -(TTDS)3-(gE)1-Stea, -(TTDS)2-(gE).-Palm, -(TTDS)3-(gE)>-Stea, -(TTDS)>-(gE)1-Stea, -(TTDS)1-(gE)3-Stea, -(TTDS)3-(gE).--Palm, - (TTDS)4-(gE)3-Palm, -(TTDS)3-(gE)3-Myr e -(TTDS)3-(gE)a-Myr em que gE representa ácido gama-glutâmico

Palm representa Palmitoíla e

Stea representa Estearoíla;

S representa serina;

X27 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em treonina, glutamina, arginina e lisina;

X>8 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em triptofano, fenilalanina, B5-Clorotriptofano,a-Metil- fenilalanina, 4-Fluoro-fenilalanina e 5-Fluorotriptofano;

X29 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em serina, D-serina, 2-amino-isobutírico acid, Ne-acetil-lisina, treonina e valina ;

X3o representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em ácido 2-amino-isobutírio, a-metil-lisina, D-lisina, lisina, homolisina e arginina;

X32 representa um aminoácido selecionado do grupo que consiste em lisina, alanina, arginina e Ne-acetil-lisina; e

X33 representa um aminoácido selecionado de lisina, Ne- acetil-lisina e arginina ;

ou um sal ou solvato dos mesmos.

5. Peptídeo de acordo com qualquer uma das reivindica- ções | a 4, caracterizado pelo fato de que ele tem uma sequência de aminoácido selecionada do grupo que consiste nas sequências de aminoácido de referência SEQ ID NO: 1-97.

6. Peptídeo de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 5 de fórmula (lb), caracterizado pelo fato de que Z é selecio- nado do grupo que consiste em um ((TTDS)2>-(gE)3-Palm, -(TTDS)3- (gE);-Palm, -(PEG2DGA)3-(gE)3-Palm, -(PEG2)4-(gE)3-Palm, -(TTDS)2- (gE)>-Palm, (TTDS)>-(gE)3-Stea, -(TTDS)3-(gE)3-Stea, -(PEG2DGA);3- (gE)3-Stea, -(PEG>2)3-(gE)3-Palm, -(PEG>2)14-(g9E)3-Stea, -(PEG>2)5-(9E)3- Palm, -(TTDS)3-(gE)1-Stea, -(TTDS)>-(gE)a-Palm, -(TTDS)2-(gE),-Stea, -(TTDS)4-(gE);3-Stea, -(TTDS)3-(gE).-Palm, -(TTDS)1-(gE);-Palm, - (TTDS)3-(gE)3-Myr e -(TTDS)3-(gE)a4-Myr.

7. Peptídeo de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 6, caracterizado pelo fato de tem uma sequência de aminoá- cido selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO: 3, 6, 7, 9-12, 20-22, 26, 28, 30-34, 45, 47-49, 51, 54-62, 64, 67-69, 71-86, 91, 93, e

96.

8. Peptídeo de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 7, caracterizado pelo fato de que tem uma sequência de ami- noácido selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO: 3, 6, 7, 20, 26, 30-34, 45, 48, 49, 51, 54-61, 67, 71, 73, 75-79, 81, 83-92 e 97.

9. Peptídeo de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 8, caracterizado pelo fato de que tem uma sequência de ami- noácido selecionada do grupo que consiste nas sequências de amino- ácido de referência SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 e SEQ ID NO: 20.

10. Peptídeo de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 9, caracterizado pelo fato de que tem a sequência de amino- ácido de referência SEQ ID NO: 3.

7I8

11. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende pelo menos um peptídeo como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 10, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou solvato do mesmo, juntamente com pelo menos um veículo farma- ceuticamente aceitável.

12. Peptídeo de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 10, um sal farmaceuticamente aceitável ou solvato do mes- mo, ou composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de ser para uso como um medicamento.

13. Peptídeo de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 10, um sal farmaceuticamente aceitável ou solvato do mes- mo, ou composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de ser para uso no tratamento e/ou prevenção de várias doenças ou condições implicando o receptor de RKFP1.

14. Peptídeo, sal farmaceuticamente aceitável ou solvato do mesmo, ou composição farmacêutica, para seu uso de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que as doenças ou con- dições são selecionadas do grupo que consiste em fibrose; doenças fibróticas, em particular, esclerose sistêmica, esclerodermia e fibromi- algia; fibrose pulmonar idiopática; doenças renais envolvendo fibrose; hipertensão pulmonar e pré-eclâmpsia.

15. Peptídeo, sal farmaceuticamente aceitável ou solvato do mesmo, ou composição farmacêutica, para seu uso de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que as doenças ou con- dições são selecionadas do grupo que consiste em doenças cardíacas e vasculares, em particular do grupo que consiste em insuficiência cardíaca aguda ou crônica, insuficiência cardíaca sistólica ou diastóli- ca, doença de artéria coronariana, aterosclerose, angina microvascular e complicação cardiovascular de diabetes.

16. Peptídeo, sal farmaceuticamente aceitável ou solvato do mesmo, ou composição farmacêutica, para seu uso de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que as doenças ou con- dições são selecionadas do grupo que consiste em insuficiências re- nais em particular disfunção renal em cirrose; doença renal crônica e lesão renal aguda.

17. Uso de um peptídeo como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 10, ou de um sal farmaceuticamente aceitável ou solvato do mesmo, caracterizado pelo fato de ser na fabricação de uma composição farmacêutica ou medicamento para tratamento e/ou prevenção de várias doenças ou condições implicando o receptor de RXFP1.

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