BR112016024494B1

BR112016024494B1 - Análogo de peptídeo e seu uso

Info

Publication number: BR112016024494B1
Application number: BR112016024494-0A
Authority: BR
Inventors: Thomas Boesen
Original assignee: Txp Pharma Gmbh
Priority date: 2014-04-22
Filing date: 2015-04-21
Publication date: 2024-02-06
Also published as: JP2020172496A; AU2015249540B2; EP3134105B1; US20150297671A1; JP2017513875A; US20220133839A1; JP7253812B2; CN106232623A; WO2015162485A1; US9950027B2; US20190030115A1; EP3838285A1; EP3134105B8; DK3134105T3; HUE052977T2; RU2016142145A; RU2016142145A3; CA2943458A1; ES2854353T3; EP3134105A1

Abstract

análogo de peptídeo e seu uso a presente invenção refere-se a análogos de peptídeo que compreendem uma ou mais sondas de aminoácidos ramificados e um peptídeo, nativo ou suas variantes.

Description

CAMPO DA INVENÇÃO

[0001] A presente invenção refere-se a sondas de aminoácidos ramificados que são adicionados a peptídeos nativos, ou variantes dos referidos peptídeos, para produzir análogos de peptídeos ou conjugados compreendendo um peptídeo e uma ou mais sondas de aminoácidos ramificados.

FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO

[0002] As proteínas e peptídeos são amplamente empregados para fins terapêuticos tanto em suas formas nativas, formas variantes quanto seus análogos. Os terapêuticos com proteínas tendem a ser específicos para seus alvos, levando a potencialmente menos efeitos colaterais, mas frequentemente com biodisponibilidade menor, baixa permeabilidade de membrana, e instabilidade metabólica, em comparação às moléculas pequenas. Drogas à nase de proteínas são geralmente referidas como 'agentes biológicos' e incluem moléculas, tais como insulina, fatores de crescimento e anticorpos projetados.

[0003] Moléculas proteicas normalmente requerem injeção; no entanto, os agentes biológicos têm sido uma classe extremamente bem sucedida de terapêuticos que incluem anticorpos para o tratamento de artrite e diversos cânceres, proteínas solúveis para diabetes, mielossupressão e anemia renal; bem como peptídeos curtos injetáveis para esclerose múltipla, cânceres, endometriose e fibromas e acromegalia.

[0004] Os peptídeos representam uma classe de moléculas que têm a especificidade e a potência de proteínas biológicas maiores, mas são mais pequenos em tamanho e mais acessíveis e mais barato de fabricar utilizando métodos químicos, assim, potencialmente combinam algumas das vantagens das proteínas com aqueles de moléculas pequenas.

[0005] Os compostos de proteína e peptídeo podem ser modificados de várias maneiras a fim de melhorar uma ou mais características do composto ou endereça um ou mais potenciais inconvenientes do composto. Por exemplo, uma sequência peptídica de estabilização pode ser adicionada ao terminal N e/ou ao terminal C de peptídeos farmacologicamente ativos, tornando-os potencialmente menos suscetíveis à degradação (WO 99/46283). Além disso, uma sonda de aminoácidos linear de 6 aminoácidos selecionada dentre Lys ou Glu adicionada ao terminal N de α-MSH aumenta potencialmente a eficácia em comparação ao peptídeo nativo (WO 07/22774). Conjugados de peptídeo-droga conhecidos incluem ainda a adição de peptídeos policatiônicos CPP (peptídeos de penetração celular) para melhorar o transporte através da bicamada lipídica da célula.

Sumário da Invenção

[0006] A presente invenção fornece análogos peptídicos compreendendo um peptídeo ou proteína, nativo ou de ocorrência natural, ou variantes biologicamente ativas dos mesmos e uma ou mais sondas de aminoácidos ramificados (abreviadas BAP aqui). A modificação de peptídeos através da adição de uma ou mais sondas de aminoácidos ramificados não foram anteriormente reveladas.

[0007] Em algumas modalidades, os análogos de peptídeos aqui fornecidos têm uma ou mais propriedades melhoradas em comparação com o peptídeo nativo. Por exemplo, em algumas modalidades, a adição de uma ou mais sondas de aminoácidos ramificadas para um peptídeo potencialmente melhora uma ou mais características de peptídeo, tal como - melhorar ou aumentar um efeito inerente ao peptídeo (incluindo, por exemplo, aumentando a atividade, afinidade e/ou eficácia de um peptídeo farmacologicamente ativo; ligação e/ou ativação melhorada de um ou mais receptores relevantes); - alterar um efeito inerente ao peptídeo (incluindo, por exemplo, um perfil de ligação de receptor modificado), ou - melhorar ou alterar um efeito externo do peptídeo (incluindo, por exemplo, estabilidade acentuada, degradação reduzida, configuração alterada e/ou solubilidade alterada).

[0008] Portanto, a presente invenção está relacionada ao análogo de peptídeo que compreende um peptídeo e uma ou mais sondas de aminoácidos ramificados, em que a referida sonda de aminoácidos ramificados compreende um primeiro resíduo de aminoácido aminoalquil, o referido primeiro resíduo de aminoácido aminoalquil sendo opcionalmente covalentemente ligado a um segundo resíduo de aminoácido aminoalquil, ou a um segundo e a um terceiro resíduo de aminoácido aminoalquil, para formar uma cadeia linear de 2 ou 3 resíduos de aminoácido aminoaquil, em que a cadeia lateral (s) de um ou mais dos referidos primeiro, os resíduos de aminoácidos amino-alquil segunda e/ou terceira são cada modificada anexando o grupo amino da cadeia lateral de uma molécula selecionada independentemente de entre o grupo que consiste em AAAq- AAA; (aa3)p-AAAq; AAAq-(aa3)p; [(aa3)-AAA]p e [AAA-(aa3)]p; em que q é um número selecionado dentre 0, 1, 2 e 3; p é um número selecionado dentre 1, 2 e 3; AAA é um resíduo de aminoácido aminoalquil; e (aa3) é um resíduo de aminoácido independentemente selecionado dentre Arg, His, Gly e Ala, em que os referidos resíduos de aminoácidos aminoalquil são opcionalmente acetilados, em que o referido primeiro resíduo de aminoácido aminoalquil é covalentemente ligado ao terminal N do referido peptídeo, covalentemente ligado ao terminal C do referido peptídeo, e/ou ligado ao grupo amino da cadeia lateral de um resíduo de aminoácido aminoalquil dentro do referido peptídeo, com a ressalva de que o referida sonda de aminoácidos ramificados consiste em 2 a 9 resíduos de aminoácidos.

[0009] A presente invenção também abrange composições farmacêuticas compreendendo os análogos de peptídeos da presente invenção, assim como os análogos da presente invenção para uso como um medicamento.

Descrição das Figuras

[0010] Figura 1: Representação esquemática da sonda de aminoácido ramificado Ac-(Ac-Lys-Lys)Lys-, mostrando-se o primeiro resíduo aminoácido amino-alquil sendo um resíduo de lisina (Lys1) ligado ao terminal N de uma sequência de peptídeo através de uma ligação de peptídeo regular, a referida primeira lisina sendo acetilada (COCH3) e a referida primeira lisina modificada ligando-se ao grupo ε-amino do referido resíduo de lisina dois resíduos de lisina adicionais em que um também é acetilado (o mais externo).

Descrição Detalhada da Invenção Análogos de peptídeos

[0011] É um aspecto da presente invenção consiste em fornecer análogos de peptídeos modificados por adição de uma ou mais sondas de aminoácidos ramificados. Os análogos peptídicos podem compreender qualquer peptídeo, polipeptídeo ou proteína, nativo ou de ocorrência natural, ou variantes ou fragmentos biologicamente ativos dos mesmos, que são modificados por adição de uma ou mais sondas de aminoácidos ramificados (abreviados por BAP aqui). Desse modo, em uma modalidade, os análogos peptídicos são conjugados compreendendo uma sequência de peptídeos e uma ou mais sondas de aminoácidos ramificados.

[0012] Os termos "análogo peptídico" e "análogo de proteína" podem ser utilizados aqui indistintamente. Os termos "peptídeo" e "proteína" podem ser utilizados aqui indistintamente. Os termos "peptídeo" e "sequência peptídica" podem ser utilizados aqui indistintamente. Os termos "sequência de peptídeo" e "sequência de aminoácidos" podem ser utilizados aqui indistintamente.

[0013] Em algumas modalidades, os análogos peptídicos fornecidos aqui têm certas propriedades melhoradas, por exemplo, em que diz respeito à afinidade de ligação e/ou ativação de um ou mais receptores. Além disso ainda, em uma outra modalidade, os análogos peptídicos fornecidos aqui são mais estáveis, tal como menos sensíveis a proteases.

[0014] É um aspecto da presente invenção consiste em fornecer um análogo de de peptídeo que compreende um peptídeo e uma ou mais sondas de aminoácido ramificado, em que o referida sonda de aminoácidos ramificados compreende um primeiro resíduo de aminoácido aminoalquil, o referido primeiro resíduo de aminoácido aminoalquil sendo opcionalmente covalentemente ligado a um segundo resíduo de aminoácido aminoalquil, ou a um segundo e a um terceiro resíduo de aminoácido aminoalquil, para formar uma cadeia linear de 2 ou 3 resíduos de aminoácido aminoaquil, em que a cadeia lateral (s) de um ou mais dos referidos primeiro, os resíduos de aminoácidos amino-alquil segunda e/ou terceira são cada modificada anexando o grupo amino da cadeia lateral de uma molécula selecionada independentemente de entre o grupo que consiste em AAAq- AAA; (aa3)p-AAAq; AAAq-(aa3)p; [(aa3)-AAA]p e [AAA-(aa3)]p; em que q é um número selecionado dentre 0, 1, 2 e 3; p é um número selecionado dentre 1, 2 e 3; AAA é um resíduo de aminoácido aminoalquil; e (aa3) é um resíduo de aminoácido independentemente selecionado dentre Arg, His, Gly e Ala, em que os referidos resíduos de aminoácidos aminoalquil são opcionalmente acetilados, em que o referido primeiro resíduo de aminoácido aminoalquil é covalentemente ligado ao terminal N do referido peptídeo, covalentemente ligado ao terminal C do referido peptídeo, e/ou ligado ao grupo amino da cadeia lateral de um resíduo de aminoácido aminoalquil dentro do referido peptídeo, com a ressalva de que o referida sonda de aminoácidos ramificados consiste em 2 a 9 resíduos de aminoácidos.

[0015] De acordo com a invenção, um resíduo de aminoácido amino- alquil sendo ligado de forma covalente a resíduos de aminoácidos amino- alquil adicionais e/ou um peptídeo em uma modalidade significa que um ligação peptídica está presente. Em uma modalidade, ligado covalentemente significa ligado covalentemente por (uma) ligação(ões) peptídica(s). Em uma modalidade, ligado covalentemente implica que (uma) ligação(ões) peptídica(s) está(ão) presente(s).

[0016] A ligação peptídica (ligação amida) é uma ligação química covalente formada entre duas moléculas quando o grupo carboxil de uma molécula reage com o grupo amino de outra molécula, causando a liberação de uma molécula de H2O. O processo geralmente ocorre entre os aminoácidos.

[0017] Os resíduos de aminoácidos amino-alquil (ou AAA) de acordo com a invenção podem ser cada um o mesmo (idêntico) ou diferente (não idêntico).

Sonda de aminoácidos ramificados Resíduo de aminoácido amino-alquil

[0018] De acordo com a presente invenção, um "resíduo de aminoácido amino-alquil" (ou AAA) é um aminoácido tendo os grupos funcionais de amina convencional (-NH2) e ácido carboxílico (-COOH) e uma cadeia lateral ligada ao primeiro (alfa-) átomo de carbono, em que a cadeia lateral compreende um grupo alquil (-CnH2n+1) e um grupo amino (NH2); em uma modalidade a cadeia lateral compreende um grupo amino-alquil (- CnH2nNH2).

[0019] Assim, um resíduo de aminoácido amino-alquil (ou AAA) é um aminoácido com uma cadeia lateral que compreende ou que consiste em um grupo amino-alquil (-CnH2nNH2), em uma modalidade denotada um grupo amino-alquil de cadeia lateral.

[0020] Em uma modalidade, o grupo alquil de cadeia lateral é derivado do grupo que consiste em metil (CH3-), etil (C2H5-), propil (C3H7-), butil (C4H9- ), pentil (C5H11-), hexil (C6H13-), heptil (C7H15-), octil (C8H17-), nonil (C9H19-), decil (C10H21-), undecill (C11H23-) e dodecil (C12H25-).

[0021] Em uma modalidade, o grupo amino de cadeia lateral (NH2) do referido resíduo de aminoácido amino-alquil é a amina de metilamina, a amina de etilamina, a amina de propilamina, a amina de n-butilamina, a amina de pentilamina, a amina de n-hexilamina, a amina de heptil-amina, a amina de octilamina, a amina de nonilamina, a amina de decilamina, a amina de undecilamina ou a amina de dodecilamina.

[0022] Em uma modalidade, o grupo de amino-alquil de cadeia lateral de acordo com a invenção é selecionado do grupo constituído por metilamina (-CH2NH2), etilamina (-C2H4NH2), propilamina (-C3H6NH2), n -butilamina (— C4H8NH2), pentilamina (-C5H10NH2), n -hexilamina (-C6H12NH2), heptilamina (— C7H14NH2), octilamina (-C8H16NH2), nonilamina (-C9H18NH2), decilamina (— C10H20NH2), undecilamina (-C11H22NH2) e dodecilamina (-C12H24NH2).

[0023] Em uma modalidade, o grupo amino de cadeia lateral (NH2) dos referidos primeiro, segundo e/ou terceiro resíduos de aminoácidos amino- alquil são, cada um, modificado anexando-se uma molécula ao mesmo.

[0024] Em uma modalidade, o grupo amino de cadeia lateral do referido resíduo de aminoácido amino-alquil é selecionado do grupo que consiste em o grupo β (beta) amino (1 metileno na cadeia lateral; metilamina); o grupo Y (gama) amino (2 metilenos na cadeia lateral, etilamina); o grupo δ (delta) amino (3 metilenos na cadeia lateral, propilamina); = ornitina o grupo ε (épsilon) amino (4 metilenos na cadeia lateral; n-butilamina); = lisina o grupo Z (zeta) amino (5 metilenos na cadeia lateral; pentilamina); o grupo n (eta) amino (6 metilenos na cadeia lateral; n-hexilamina); o grupo θ (teta) amino (7 metilenos na cadeia lateral; heptilamina); o grupo I (iota) amino (8 metilenos na cadeia lateral; octilamina); o grupo K (capa) amino (9 metilenos na cadeia lateral; nonilamina); o grupo À (lambda) amino (10 metilenos na cadeia lateral; decilamina); o grupo μ (mu) amino (11 metilenos na cadeia lateral; undecilamina); e o grupo v (nu) amino (12 metilenos na cadeia lateral; dodecilamina).

[0025] Por exemplo, o grupo ε-amino está ligado ao carbono quinto começando de (incluindo) o α-carbono, que α-carbono está ligado ao grupo carboxil (C=OOH).

[0026] Um resíduo de aminoácido amino-alquil em que a cadeia lateral é n-butilamina e o grupo amino de cadeia lateral é o grupo ε (épsilon) amino é lisina (Lys, K).

[0027] Do mesmo modo, o grupo δ amino está ligado ao quarto de carbono começando de α-carbono.

[0028] Um resíduo de aminoácido amino-alquil em que a cadeia lateral é propilamina e o grupo amino da cadeia lateral é o grupo amino δ (delta) é a ornitina (Orn).

[0029] Ornitina é formada nas células por deguanidação de arginina. Enquanto que não é utilizado em proteinogenesis in vivo é um participante em várias vias enzimáticas e parece desempenhar um papel no equilíbrio do nitrogênio in vivo, uma vez que pode ser guanidada enzimaticamente para formar arginina.

[0030] Quaisquer aminoácidos de acordo com a presente invenção podem estar na configuração L ou D. Se nada for especificado, referência à forma L-isomérica é preferencialmente significava.

[0031] Segue-se que os resíduos de aminoácidos amino-alquil da invenção, em uma modalidade, são, individualmente, na configuração L ou D. Em uma modalidade, os resíduos de aminoácidos amino-alquil estão na configuração L.

[0032] Em uma modalidade, os resíduos de aminoácidos amino-alquil da invenção são selecionados individualmente a partir do grupo que consiste em lisina e ornitina.

[0033] Em uma modalidade, os resíduos de aminoácidos amino-alquil da invenção são selecionados individualmente a partir do grupo que consiste emL-lisina, D-lisina, L-ornitina e D-ornitina.

[0034] Em uma modalidade, os resíduos de aminoácidos amino-alquil da invenção são selecionados a partir do grupo que consiste em L-lisina e L- ornitina.

[0035] Em uma modalidade, os resíduos de aminoácidos amino-alquil da invenção são selecionados a partir do grupo que consiste em L-lisina e D- lisina.

[0036] Em uma modalidade, os resíduos de aminoácidos amino-alquil da invenção são selecionados a partir do grupo que consiste em L-ornitina e D-ornitina.

[0037] Em uma modalidade, é fornecido um análogo de peptídeo que compreende um peptídeo e uma ou mais sondas de aminoácidos ramificados, em que a referida sonda de aminoácido ramificado compreende um primeiro resíduo de aminoácido selecionado da lisina e ornitina, o referido primeiro resíduo aminoácido é, de forma opcional, covalentemente ligado a um segundo, ou a um segundo e um terceiro resíduo de amino ácido selecionado dentre lisina ou ornitina, para formar uma cadeia linear de dois ou três resíduos de lisina ou ornitina, em que as cadeias laterais de um ou mais dos referidos primeiro, segundo e/ou terceiro resíduos de lisina ou ornitina são modificados por fixação ao grupo δ-amino (ornitina) ou o grupo ε-amino de uma molécula selecionada de forma independente a partir do grupo consiste em Lysq-Lys; (aa3)p-Lysq; Lysq-(aa3)p; [(aa3)-Lys]p; [Lys-(aa3)]p; Ornq-Orn; (aa3)p-Ornq; Ornq-(aa3)p; [(aa3)-Orn]p e [Orn-(aa3)]p; Ornp-Lysp; Lysp-Ornp; [Orn-Lys]p e [Lys-Orn]p; em que q é um número selecionado dentre 0, 1, 2 e 3; p é um número selecionado dentre 1, 2 e 3; e (aa3) é um resíduo de aminoácido independentemente selecionado dentre Arg, His, Gly e Ala, em que os referidos resíduos de lisina e ornitina são opcionalmente acetilados, em que os referidos resíduos de lisina e ornitina estão na configuração L- ou D-, em que o referido primeiro resíduo de lisina ou de ornitina é covalentemente ligado ao terminal N do referido peptídeo, covalentemente ligado ao terminal C do referido peptídeo, e/ou ligado ao grupo ε-amino de um resíduo de lisina ou ao grupo δ-amino de um resíduo de ornitina dentro do referido peptídeo, com a ressalva de que o referida sonda de aminoácidos ramificados consiste em 2 a 9 resíduos de aminoácidos.

[0038] Em uma modalidade, é fornecido um análogo de peptídeo que compreende um peptídeo e uma ou mais sondas de aminoácidos ramificados, em que a referida sonda de aminoácido ramificado compreende um primeiro resíduo de lisina, o referido primeiro resíduo de lisina opcionalmente é covalentemente ligado a um segundo, ou a um segundo e a um terceiro resíduo de lisina, de modo a formar uma cadeia linear de 2 ou 3 resíduos de lisina, em que a(s) cadeia(s) lateral(is) de um ou mais dos referidos primeiro, segundo e/ou terceiros resíduos de lisina são modificadas pela ligação ao grupo ε-amino a uma molécula independentemente selecionada do grupo consistindo em Lysq-Lys; (aa3)p-Lysq; Lysq-(aa3)p;[(aa3)-Lys]p; e [Lys-(aa3)]p; em que q é um número selecionado dentre 0, 1, 2 e 3; p é um número selecionado dentre 1, 2 e 3; e (aa3) é um resíduo de aminoácido independentemente selecionado dentre Arg, His, Gly e Ala, em que os referidos resíduos de lisina são opcionalmente acetilados, em que os referidos resíduos de lisina estão na configuração L- ou D-, em que o referido primeiro resíduo de lisina é covalentemente ligado ao terminal N do referido peptídeo, covalentemente ligado ao terminal C do referido peptídeo, e/ou ligado ao grupo ε-amino de um resíduo de lisina dentro do referido peptídeo, com a ressalva de que a referida sonda de aminoácidos ramificados consiste em 2 a 9 resíduos de aminoácidos.

Ramificação da sonda

[0039] Uma sonda de aminoácidos ramificados de acordo com a presente invenção em uma modalidade consiste em 2 a 9 resíduos de aminoácidos.

[0040] Numa modalidade, a sonda de aminoácido ramificado consiste em de 2 a 3 resíduos de aminoácidos, tais como de 3 a 4 resíduos de aminoácidos, por exemplo, de 4 a 5 resíduos de aminoácido, tais como de 5 a 6 resíduos de aminoácidos, por exemplo, de 6 a 7 resíduos de aminoácidos, tais como de 7 a 8 resíduos de aminoácidos, por exemplo, de 8 a 9 resíduos de aminoácidos.

[0041] Em uma modalidade, a sonda de aminoácidos ramificados consiste em 2 resíduos de aminoácidos, tal como 3 resíduos de aminoácidos, por exemplo, 4 resíduos de aminoácidos, tal como 5 resíduos de aminoácidos, por exemplo, 6 resíduos de aminoácidos, tal como 7 resíduos de aminoácidos, por exemplo, 8 resíduos de aminoácidos, tal como 9 resíduos de aminoácidos.

[0042] Em uma modalidade, a sonda de aminoácidos ramificados compreende um primeiro resíduo de aminoácido amino-alquil (também denominado AAA1), cujo primeiro resíduo de aminoácido amino-alquil está ligado a um péptido para proporcionar um análogo de péptido de acordo com a invenção.

[0043] Em uma modaldiade, o primeiro aminoácido amino-alquil de (cada) uma ou mais sondas de aminoácidos ramificados é ligado covalentemente ao terminal N do referido péptido, ligado de forma covalente ao terminal C do referido péptido e/ou ligado ao grupo amino da cadeia lateral de um resíduo de aminoácido amino-alquil no interior do referido péptido.

[0044] Em uma modalidade, o primeiro aminoácido amino-alquil da sonda de aminoácidos ramificados é acetilado.

[0045] Em uma modalidade, o referido primeiro resíduo de aminoácido amino-alquil é ligado covalentemente a um segundo resíduo de aminoácido amino-alquil para formar uma cadeia linear de 2 resíduos de aminoácidos amino-alquil.

[0046] Em uma modalidade, o segundo aminoácido amino-alquil da sonda de aminoácidos ramificados é acetilado.

[0047] Em uma modalidade, o referido primeiro resíduo de aminoácido amino-alquil está covalentemente ligado a um segundo e (covalentemente ligado) a um terceiro resíduo de aminoácido amino-alquil para formar uma cadeia linear de 3 resíduos de aminoácidos amino-alquil. Nesta configuração, deve entender-se que o primeiro resíduo de aminoácido amino-alquil pode ter o segundo e o terceiro resíduos de aminoácidos amino-alquil ambos ligados ao seu grupo amina ou ambos ligados ao seu grupo ácido carboxílico; ou pode ter o segundo amino-alquil resíduo de aminoácido ligado no seu grupo amina e o terceiro amino-alquil resíduo de aminoácido ligado no seu grupo ácido carboxílico.

[0048] Em uma modalidade, o terceiro aminoácido amino-alquil da sonda de aminoácidos ramificados é acetilado.

[0049] Os segundo e terceiro resíduos de aminoácidos amino-alquil podem ser denominado AAA2 e AAA3, respectivamente.

[0050] Em uma modalidade, cada referido primeiro, segundo e/ou terceiro resíduos de aminoácidos de aminoalquil é um aminoácido com um grupo aminoalquil da cadeia lateral selecionado do grupo constituído por metilamina (-CH2NH2), etilamina (-C2H4NH2), propilamina (-C3H6NH2), n- butilamina (--C4H8NH2), pentilamina (-C5H10NH2), n-hexilamina (-C6H12NH2), heptilamina (-C7H14NH2), octilamina (-C8H16NH2), nonilamina (-C9H18NH2), decilamina (-C10H20NH2), undecilamina (-C11H22NH2) e dodecilamina (- C12H24NH2).

[0051] Em uma modalidade, cada um do primeiro, segundo e/ou terceiro aminoácidos aminoalquil da sonda de aminoácidos ramificados são individualmente selecionados do grupo consistindo em L-lisina, D-lisina, L- ornitina e D-ornitina.

[0052] Em uma modalidade, cada um dos primeiro, segundo e terceiro aminoácidos amino-alquil da sonda de aminoácidos ramificados são resíduos de lisina (incluindo a L-lisina e D-lisina).

[0053] Em uma modalidade, cada um dos primeiro, segundo e terceiro aminoácidos amino-alquil da sonda de aminoácidos ramificados são acetilados (Ac-AAA) (COCH3).

[0054] Em uma modalidade, o primeiro, o primeiro e o segundo, e/ou os primeiro, segundo e terceiro resíduos de aminoácidos amino-alquil da sonda de aminoácidos ramificados são referidos como a estrutura de aminoácidos amino-alquil com a sonda de aminoácidos ramificados (AAA1, AAA1-2, AAA1-3).

[0055] Em uma modalidade, o primeiro, o segundo e o terceiro resíduo de aminoácidos amino-alquil são resíduos de lisina. Em uma modalidade, o primeiro, o primeiro e o segundo, e/ou os primeiro, segundo e terceiro resíduos de lisina da sonda de aminoácidos ramificados são referidos como a estrutura de lisina da sonda de aminoácidos ramificados (Lys1, Lys1-2, Lys1- 3).

[0056] Em uma modalidade, o primeiro resíduo de lisina, ou o segundo resíduo de lisina, ou o terceiro resíduo de lisina, ou o primeiro e o segundo resíduos de lisina, ou o primeiro e o terceiro resíduos de lisina, ou o segundo e terceiro resíduos de lisina, ou o primeiro, o segundo e o terceiro resíduo de lisina da estrutura de lisina da sonda de aminoácidos ramificados são acetilados (Ac-Lys).

[0057] Em uma modalidade, cada um dos primeiro, segundo e terceiro resíduos de lisina da sonda de aminoácidos ramificados são acetilados (Ac- Lys).

[0058] Em uma modalidade das cadeias laterais de um ou mais de cada uma dos referidos primeiro, segundo e/ou terceiro resíduos de aminoácidos amino-alquil são modificados por fixação ao grupo amino da cadeia lateral de uma molécula selecionada, independentemente, do grupo consistindo de AAAq-AAA; (aa3)p-AAAq; AAAq-(aa3)p; [(aa3)-AAA]p e [AAA- (aa3)]p; em que q é um número selecionado a partir de 0, 1, 2 e 3; p é um número selecionado a partir de 1, 2 e 3; AAA é um resíduo de aminoácido amino-alquil; e (aa3) é um resíduo de aminoácido selecionado independentemente dentre Arg, His, Gly e Ala.

[0059] Em uma modalidade, as cadeias laterias de um ou mais dos referidos primeiro, segundo e/ou terceiro resíduos de aminoácidos amino- alquil são, cada uma, modificadas anexando o grupo amino da cadeia lateral de uma molécula selecionada, independentemente, do grupo consistindo de Lysq-Lys; (aa3)p-Lysq; Lysq-(aa3)p; [(aa3)-Lys]p; [Lys-(aa3)]p; Ornq-Orn; (aa3)p-Ornq; Ornq-(aa3)p; [(aa3)-Orn]p e [Orn-(aa3)]p; Ornp-Lysp; Lysp-Ornp; [Orn-Lys]p e [Lys-Orn]p; em que q é um número selecionado dentre 0, 1, 2 e 3; p é um número selecionado dentre 1, 2 e 3; e (aa3) é um resíduo de aminoácido independentemente selecionado dentre Arg, His, Gly e Ala.

[0060] Em uma modalidade, as cadeias laterais de um ou mais dos referidos primeiro, segundo e/ou terceiros resíduos de aminoácidos amino- alquil são modificadas pela ligação ao grupo amino de cadeia lateral a uma molécula independentemente selecionada do grupo consistindo em Lysq-Lys; (aa3)p-Lysq; Lysq-(aa3)p; [(aa3)-Lys]p e [Lys-(aa3)]p; em que q é um número selecionado a partir de 0, 1, 2 e 3; p é um número selecionado a partir de 1, 2 e 3; Lys é um resíduo de lisina selecionado a partir de L-Lys e D-Lys; e (aa3) é um resíduo de aminoácido selecionado independentemente dentre Arg, His, Gly e Ala.

[0061] Em uma modalidade, as cadeias laterais de um ou mais de cada um dos referidos primeiro, segundo e/ou terceiros resíduos de lisina da estrutura de lisina são modificadas pela ligação ao grupo ε-amino da cadeia lateral de uma molécula independentemente selecionada do grupo consistindo em Lysq-Lys; (aa3)p-Lysq; Lysq-(aa3)p;[(aa3)-Lys]p; e [Lys-(aa3)]p; em que q é um número selecionado dentre 0, 1, 2 e 3; p é um número selecionado dentre 1, 2 e 3; Lys é um resíduo de lisina selecionado a partir de L-Lys e D-Lys; e (aa 3) é um resíduo de aminoácido independentemente selecionado dentre Arg, His, Gly e Ala.

[0062] Em uma modalidade, as cadeias laterais de um ou mais de cada um dos referidos primeiro, segundo e/ou terceiro resíduos de lisina da estrutura de lisina são modificadas por ligação ao grupo ε-amino da cadeia lateral de uma molécula sendo LysqLys; em que q é um número selecionado a partir de 0, 1, 2 e 3 e Lys é um resíduo de lisina selecionado a partir de L- Lys e D-Lys.

[0063] Em uma modalidade, a cadeia lateral de i) um dos referidos primeiro, segundo e/ou terceiro resíduo de aminoácidos amino-alquil, ii) dois dos referidos primeiro, segundo e/ou terceiro resíduos de aminoácidos amino-alquil, ou iii) todos os três primeiro, segundo e terceiro resíduos de aminoácidos amino-alquil são modificados por ligação do grupo amino da cadeia lateral de uma molécula, como definido neste documento.

[0064] Em uma modalidade, a cadeia lateral i) do primeiro resíduo de aminoácido amino-alquil, ii) do segundo resíduo de aminoácido amino-alquil, iii) do terceiro resíduo de aminoácido amino-alquil, iv) o primeiro e o segundo resíduos de aminoácido amino-alquil, v) o primeiro e o terceiro resíduos de aminoácidos amino-alquil, vi) o segundo e o terceiro resíduos de aminoácidos amino-alquil, ou vii) o primeiro, o segundo e o terceiro resíduos de aminoácidos amino-alquil são, cada uma, modificada por ligação do grupo amino da cadeia lateral de uma molécula, como definido neste documento.

[0065] Em uma modalidade, o primeiro resíduo de lisina, ou o segundo resíduo de lisina, ou o terceiro resíduo de lisina, ou o primeiro e o segundo resíduos de lisina, ou o primeiro e o terceiro resíduos de lisina, ou o segundo e terceiro resíduos de lisina, ou o primeiro, o segundo e o terceiro resíduos de lisina da estrutura de lisina da sonda de aminoácidos ramificados da invenção são, cada um, são modificados por ligação de uma molécula ao grupo ε-amino.

[0066] Numa modalidade, a molécula a ser ligada ao grupo ε-amino (s) de um ou mais resíduos de lisina do esqueleto de lisina da sonda de aminoácidos ramificados são selecionados independentemente a partir do grupo que consiste em LisqLis; (aa3)pLisq; Lysq- (Aa3)p; [(Aa3) Lis]p e [Lis (aa3)]p, em que q é um número selecionado a partir de 0, 1, 2 e 3; p é um número selecionado a partir de 1, 2 e 3, e (aa3) é um resíduo de aminoácido selecionado independentemente dentre Arg, His, Gly e Ala.

[0067] Segue-se que numa modalidade o primeiro resíduo de lisina, ou o segundo resíduo de lisina, ou o terceiro resíduo de lisina, ou o primeiro e o segundo resíduos de lisina, ou o primeiro e o terceiro resíduos de lisina, ou o segundo e terceiro resíduos de lisina, ou o primeiro, o segundo e o terceiro resíduos de lisina da sonda de aminoácidos ramificados são modificados anexando ao grupo ε-amino (s) de uma molécula selecionada independentemente dentre o grupo que consiste em LisqLis; (aa3)pLisq; Lisq- (Aa3)p; [(Aa3) Lis]p e [Lis (aa3)]p, em que q é um número selecionado a partir de 0, 1, 2 e 3; p é um número selecionado a partir de 1, 2 e 3, e (aa3) é um resíduo de aminoácido selecionado independentemente dentre Arg, His, Gly e Ala.

[0068] Numa modalidade particular (aa3) é um resíduo de aminoácido selecionado independentemente dentre Gly e Ala. Numa outra modalidade, (aa3) é Gly.

[0069] Numa modalidade, as moléculas a ser ligadas ao grupo amino de cadeia lateral (s) são ainda acetiladas. Numa modalidade as moléculas são selecionadas independentemente dentre o grupo consistindo em Ac- AAAq-AAA; Ac-(aa3)p-AAAq; Ac-AAAq-(aa3)p; Ac-[(aa3)-AAA]p e Ac-[AAA- (aa3)]p, e/ou AAAq-AAAs; (aa3)p-AAAq; AAAq-(aa3)p; [(aa3)-AAA]p e [AAA- (aa3)]p.

[0070] Numa modalidade as moléculas são selecionadas independentemente dentre o grupo consistindo em Ac-Ornq-Orn; Ac-(aa3)p- Ornq; Ac-Ornq-(aa3)p; Ac-[(aa3)-Orn]p; Ac-[Orn-(aa3)]p; Ac-Ornp-Lysp; Ac-Lysp- Ornp; Ac-[Orn-Lys]p e Ac-[Lys-Orn]p, e/ou Ornq-Orn; (aa3)p-Ornq; Ornq-(aa3)p; [(aa3)-Orn]p e [Orn-(aa3)]p; Ornp-Lysp; Lysp-Ornp; [Orn-Lys]p e [Lys-Orn]p.

[0071] Daqui resulta que as moléculas se encontram numa modalidade selecionada, independentemente, do grupo consistindo de Ac- Lysq-Lys; Ac-(aa3)p-Lysq; Ac-Lysq-(aa3)p; Ac-[(aa3)-Lys]p e Ac-[Lys-(aa3)]p, e/ou Lysq-Lys; (aa3)p-Lysq; Lysq-(aa3)p; [(aa3)-Lys]p e [Lys-(aa3)]p.

[0072] Numa modalidade particular, a molécula a ser ligada ao grupo (s) amino de cadeia lateral é AAAq-AAA, em que q é um número selecionado a partir de 0, 1, 2 e 3.

[0073] Segue-se que, numa modalidade, a sonda de aminoácidos ramificados consiste em resíduos de aminoácido de 2 a 9 aminoalquil. Em uma modalidade, os resíduos de aminoácidos de 2 a 9 aminoalquil são selecionados individualmente a partir do grupo que consiste em L-lisina, D- lisina, L-ornitina e D-ornitina.

[0074] Numa modalidade particular, a molécula a ser ligada ao grupo (s) amino de cadeia lateral é Lysq-Lys, em que q é um número selecionado a partir de 0, 1, 2 e 3.

[0075] Segue-se que, numa modalidade, a sonda de aminoácidos ramificados da invenção consiste em 2 a 9 resíduos de lisina selecionados a partir de Lys e de D-Lis.

[0076] Numa modalidade, a sonda de aminoácidos ramificados compreende um máximo de 1, 2, 3 ou 4 aminoácidos selecionados entre Arg, His, Gly e Ala (aa3), em que os aminoácidos restantes são resíduos de aminoácidos aminoalquil. Numa outra modalidade, a sonda de aminoácidos ramificados compreende um máximo de um resíduo 1 Arg, e/ou compreende um máximo de um resíduo 1 His, e/ou compreende um máximo de um resíduo 1 Gly, e/ou compreende um máximo de um resíduo 1 Ala.

[0077] Numa modalidade, a molécula a ser ligada ao grupo amino da cadeia lateral (s) de um ou mais dos primeiro, segundo e/ou terceiro resíduos de aminoácidos aminoalquil é selecionada a partir do grupo constituído por AAA, Ac-AAA, AAA-AAA, Ac-AAA-AAA, AAA-AAA-AAA, Ac-AAA-AAA-AAA, AAA-AAA-AAA-AAA, Ac-AAA-AAA-AAA-AAA, AAA-Gly-AAA, Ac-AAA-Gly- AAA, AAA-AAA-Gly, Ac-AAA-AAA-Gly, AAA-Gly, Ac-AAA-Gly, AAA-Ala- AAA, Ac-AAA-Ala-AAA, AAA-AAA-Ala, Ac-AAA-AAA-Ala, AAA-Ala, Ac-AAA- Ala, AAA-His-AAA, Ac-AAA-His-AAA, AAA-AAA-His, Ac-AAA-AAA-His, AAA- His, Ac-AAA-His, AAA-Arg-AAA, Ac-AAA-Arg-AAA, AAA-AAA-Arg, Ac-AAA- AAA-Arg, AAA-Arg e Ac-AAA-Arg; em que AAA é um resíduo de aminoácido aminoalquil, tal como aqui especificado (opcionalmente acetilado individualmente). Os resíduos de aminoácidos AAA, Gly, Ala, His e Arg mencionados acima podem ser cada um na confirmação L- ou D-.

[0078] Numa modalidade, a molécula a ser ligada ao grupo amino da cadeia lateral (s) de um ou mais dos primeiro, segundo e/ou terceiro resíduos de aminoácidos aminoalquil é selecionada a partir do grupo constituído por Lys, Ac-Lys, Lys-Lys, Ac-Lys-Lys, Lys-Lys-Lys, Ac-Lys-Lys-Lys, Lys-Lys-Lys- Lys, Ac-Lys-Lys-Lys-Lys, Lys-Gly-Lys, Ac-Lys-Gly-Lys, Lys-Lys-Gly, Ac-Lys- Lys-Gly, Lys-Gly, Ac-Lys-Gly, Lys-Ala-Lys, Ac-Lys-Ala-Lys, Lys-Lys-Ala, Ac- Lys-Lys-Ala, Lys-Ala, Ac-Lys-Ala, Lys-His-Lys, Ac-Lys-His-Lys, Lys-Lys-His, Ac-Lys-Lys-His, Lys-His, Ac-Lys-His, Lys-Arg-Lys, Ac-Lys-Arg-Lys, Lys-Lys- Arg, Ac-Lys-Lys-Arg, Lys-Arg e Ac-Lys-Arg.

[0079] Numa modalidade particular, a molécula a ser ligada ao grupo ε-amino (s) de um ou mais dos primeiro, segundo e/ou terceiro resíduos de lisina é selecionada a partir do grupo constituído por Lys, Ac-Lys, Lys-Lys, Ac-Lys-Lys, Lys-Lys-Lys, Ac-Lys-Lys-Lys, Lys-Lys-Lys-Lys, Ac-Lys-Lys-Lys- Lys, Lys-Gly-Lys, Ac-Lys-Gly-Lys, Lys-Lys-Gly, Ac-Lys-Lys-Gly, Lys-Gly, Ac- Lys-Gly, Lys-Ala-Lys, Ac-Lys-Ala-Lys, Lys-Lys-Ala, Ac-Lys-Lys-Ala, Lys-Ala, Ac-Lys-Ala, Lys-His-Lys, Ac-Lys-His-Lys, Lys-Lys-His, Ac-Lys-Lys-His, Lys- His, Ac-Lys-His, Lys-Arg-Lys, Ac-Lys-Arg-Lys, Lys-Lys-Arg, Ac-Lys-Lys-Arg, Lys-Arg e Ac-Lys-Arg.

[0080] Numa modalidade particular, a sonda de aminoácidos ramificados da invenção compreende ou consiste em um primeiro resíduo de lisina selecionado a partir de Lys e D-Lys, referido primeiro resíduo de lisina ser opcionalmente acetilado, em que o referido primeiro resíduo de lisina é modificado anexando ao grupo ε-amino do referido primeiro resíduo de lisina de uma molécula selecionada a partir do grupo que consiste em Lys, Ac-Lys, Lys-Lys, Ac-Lys-Lys, Lys-Lys-Lys, Ac-Lys-Lys-Lys, Lys-Lys-Lys-Lys, Ac-Lys- Lys-Lys-Lys, Lys-Gly-Lys, Ac-Lys-Gly-Lys, Lys-Lys-Gly, Ac-Lys-Lys-Gly, Lys- Gly, Ac-Lys-Gly, Lys-Ala-Lys, Ac-Lys-Ala-Lys, Lys-Lys-Ala, Ac-Lys-Lys-Ala, Lys-Ala, Ac-Lys-Ala, Lys-His-Lys, Ac-Lys-His-Lys, Lys-Lys-His, Ac-Lys-Lys- His, Lys-His, Ac-Lys-His, Lys-Arg-Lys, Ac-Lys-Arg-Lys, Lys-Lys-Arg, Ac-Lys- Lys-Arg, Lys-Arg e Ac-Lys-Arg.

[0081] Numa modalidade particular, a sonda de aminoácidos ramificados da invenção compreende ou consiste em um primeiro e um segundo resíduo de lisina, cada um deles selecionado de Lys e D-Lys, o referido primeiro e segundo resíduos de lisina sendo cada um opcionalmente acetilado, em que i) o referido primeiro resíduo de lisina, ii) o referido segundo resíduo de lisina, ou iii) o referido primeiro e segundo resíduo são cada um modificado anexando ao grupo ε-amino do referido resíduo de lisina uma molécula selecionada a partir do grupo consistindo em Lys, Ac-Lys, Lys-Lys, Ac-Lys-Lys, Lys-Lys-Lys, Ac-Lys-Lys-Lys, Lys-Lys-Lys-Lys, Ac-Lys-Lys-Lys- Lys, Lys-Gly-Lys, Ac-Lys-Gly-Lys, Lys-Lys-Gly, Ac-Lys-Lys-Gly, Lys-Gly, Ac- Lys-Gly, Lys-Ala-Lys, Ac-Lys-Ala-Lys, Lys-Lys-Ala, Ac-Lys-Lys-Ala, Lys-Ala, Ac-Lys-Ala, Lys-His-Lys, Ac-Lys-His-Lys, Lys-Lys-His, Ac-Lys-Lys-His, Lys- His, Ac-Lys-His, Lys-Arg-Lys, Ac-Lys-Arg-Lys, Lys-Lys-Arg, Ac-Lys-Lys-Arg, Lys-Arg e Ac-Lys-Arg.

[0082] Numa modalidade particular, a sonda de aminoácidos ramificados da invenção compreende ou consiste em um primeiro, um segundo e um terceiro resíduo de lisina, cada um deles selecionado a partir de Lis e D-Lis, o referido primeiro, segundo e terceiro resíduo de lisina sendo cada um opcionalmente acetilado, em que i) o referido primeiro resíduo de lisina, ii) o referido segundo resíduo de lisina, iii) o referido terceiro resíduo de lisina, iv) o referido primeiro e segundo resíduo de lisina, v) o referido primeiro e terceiro resíduo de lisina, vi) o referido segundo e terceiro resíduo de lisina, ou vii) o referido primeiro, segundo e terceiro resíduo de lisina são cada modificados anexando ao grupo ε-amino do referido resíduo de lisina uma molécula selecionada a partir do grupo consistindo em Lys, Ac-Lys, Lys- Lys, Ac-Lys-Lys, Lys-Lys-Lys, Ac-Lys-Lys-Lys, Lys-Lys-Lys-Lys, Ac-Lys-Lys- Lys-Lys, Lys-Gly-Lys, Ac-Lys-Gly-Lys, Lys-Lys-Gly, Ac-Lys-Lys-Gly, Lys-Gly, Ac-Lys-Gly, Lys-Ala-Lys, Ac-Lys-Ala-Lys, Lys-Lys-Ala, Ac-Lys-Lys-Ala, Lys- Ala, Ac-Lys-Ala, Lys-His-Lys, Ac-Lys-His-Lys, Lys-Lys-His, Ac-Lys-Lys-His, Lys-His, Ac-Lys-His, Lys-Arg-Lys, Ac-Lys-Arg-Lys, Lys-Lys-Arg, Ac-Lys-Lys- Arg, Lys-Arg e Ac-Lys-Arg.

[0083] Numa modalidade, a sonda de aminoácidos ramificados compreende ou consiste da fórmula: Ac-(Ac-Lys-Lys) Lis1- (idêntico ao Ac- (Ac-Lys-Lys)Liy-), em que Lis1 é o primeiro resíduo de lisina, que é acetilado e (Ac-Lys-Lys) é a molécula ligada ao grupo ε-amino do referido primeiro resíduo de lisina Lis1. A Figura 1 ilustra esta fórmula/estrutura.

[0084] Numa modalidade, a sonda de aminoácidos ramificados compreende ou consiste em uma fórmula selecionada a partir do grupo constituído por Ac-(Ac-Lys)Lys1-, Ac-(Ac-Lys-Lys)Lys1-, Ac-(Ac-Lys-Lys- Lys)Lys1-, Ac-(Ac-Lys-Lys-Lys-Lys)Lys1-, Ac-(Ac-Lys-Gly-Lys)Lys1-, Ac-(Ac- Lys-Lys-Gly)Lys1-, Ac-(Ac-Lys-Gly)Lys1-, Ac-(Ac-Lys-Ala-Lys)Lys1-, Ac-(Ac- Lys-Lys-Ala)Lys1-, Ac-(Ac-Lys-Ala)Lys1-, Ac-(Ac-Lys-His-Lys)Lys1-, Ac-(Ac- Lys-Lys-His)Lys1-, Ac-(Ac-Lys-His)Lys1-, Ac-(Ac-Lys-Arg-Lys)Lys1-, Ac-(Ac- Lys-Lys-Arg)Lys1-, e Ac-(Ac-Lys-Arg)Lys1-.

[0085] Mais especificamente, numa modalidade, a sonda de aminoácidos ramificados compreende ou consiste em uma fórmula selecionada a partir do grupo constituído por Ac-(Ac-Lys)Lys1-, Ac-(Ac-Lys- Lys)Lys1-, Ac-(Ac-Lys-Lys-Lys)Lys1-, Ac-(Ac-Lys-Lys-Lys-Lys)Lys1-, Ac-(Ac- Lys-Gly-Lys)Lys1-, Ac-(Ac-Lys-Lys-Gly)Lys1- e Ac-(Ac-Lys-Gly)Lys1-.

[0086] Numa modalidade, a sonda de aminoácidos ramificados compreende ou consiste da fórmula: Ac-(Ac-Lys)Lys2-Lys1-, em que Lys1 é o primeiro resíduo de lisina, que é acetilado, Lys2 é o segundo resíduo de lisina sendo ligado a Lis1 através de uma ligação peptídica, e (Ac-Lys) é a molécula ligada ao grupo ε-amino do referido primeiro resíduo de lisina Lis1.

[0087] Numa modalidade, a sonda de aminoácidos ramificados compreende ou consiste da fórmula: Ac-Lis2- (Ac-Lis)Lis1-, em que a molécula (Ac-Lis) está ligada ao grupo ε-amino do referido segundo resíduo de lisina Lis2.

[0088] Numa modalidade, a(s) sonda(s) de aminoácidos ramificados é/são selecionado(s) a partir do grupo constituído por Ac-(Ac-Lys)Lys-Lys-, (Ac-Lys)Lys-Lys-, Ac-(Lys)Lys-Lys-, (Lys)Lys-Lys-; Ac-Lys-(Ac-Lys)Lys-, Lys-(Ac-Lys)Lys-, Ac-Lys-(Lys)Lys-, Lys-(Lys)Lys-; Ac-(Ac-Lys-Lys)-Lys-, (Ac-Lys-Lys)-Lys-, Ac-(Lys-Lys)-Lys- e (Lys-Lys)-Lys-.

[0089] Numa modalidade a(s) sonda(s) de aminoácidos ramificados é/são selecionado(s) a partir do grupo que consiste em Ac-(Ac-Lys)Lys-, Ac- (Lys)Lis- e (Lys)Lis-.

[0090] Numa modalidade a sonda de aminoácidos ramificados é selecionada a partir do grupo constituído por Ac-(Ac-Lys)Lys2-Lys1-, Ac-(Ac- Lys-Lys)Lys2-Lys1-, Ac-(Ac-Lys-Gly)Lys2-Lys1-, Ac-(Ac-Lys-Lys-Lys)Lys2- Lys1-, Ac-(Ac-Lys-Lys-Lys-Lys)Lys2-Lys1-, Ac-Lys2-(Ac-Lys)-Lys1-, Ac-Lys2- (Ac-Lys-Lys)-Lys1-, Ac-Lys2-(Ac-Lys-Gly)-Lys1-, Ac-Lys2-(Ac-Lys-Lys-Lys)- Lys1-, Ac-Lys2-(Ac-Lys-Lys-Lys-Lys)-Lys1-, Ac-(Ac-Lys)Lys2-(Ac-Lys-)-Lys1-, Ac-(Ac-Lys)Lys2-(Ac-Lys-Lys-)-Lys1-, e Ac-(Ac-Lys-Lys)Lys2-(Ac-Lys-Lys-)- Lys1-.

[0091] Mais especificamente, numa modalidade, a sonda de aminoácidos ramificados é selecionada a partir do grupo constituído por Ac- (Ac-Lys)Lys2-Lys1-, Ac-(Ac-Lys-Lys)Lys2-Lys1-, Ac-(Ac-Lys-Gly)Lys2-Lys1-, Ac-Lys2-(Ac-Lys)-Lys1-, Ac-Lys2-(Ac-Lys-Lys)-Lys1-, Ac-Lys2-(Ac-Lys-Gly)- Lys1-, Ac-(Ac-Lys)Lys2-(Ac-Lys-)-Lys1-, Ac-(Ac-Lys)Lys2-(Ac-Lys-Lys-)-Lys1-, e Ac-(Ac-Lys-Lys)Lys2-(Ac-Lys-Lys-)-Lys1-.

[0092] Numa modalidade, a sonda de aminoácidos ramificados é selecionada a partir do grupo constituído por Ac-Lys3- Lys2-(Ac-Lys)Lys1-, Ac- Lys3-(Ac-Lys)Lys2-Lys1-, Ac-(Ac-Lys)Lys3-Lys2-Lys1-, Ac-Lys3-(Ac-Lys)Lys2- (Ac-Lys)Lys1-, Ac-(Ac-Lys)Lys3-(Ac-Lys)Lys2-Lys1-, e Ac-(Ac-Lys)Lys3-Lys2- (Ac-Lys)Lys1-.

[0093] Numa modalidade particular, a sonda de aminoácidos ramificados é selecionada a partir do grupo constituído por Ac-(Ac-Lys)Lys1- , Ac-(Ac-Lys-Lys)Lys1-, Ac-(Ac-Lys-Lys-Lys)Lys1-, Ac-(Ac-Lys-Lys-Lys- Lys)Lys1-, Ac-(Ac-Lys-Gly-Lys)Lys1-, Ac-(Ac-Lys-Lys-Gly)Lys1-, Ac-(Ac-Lys- Gly)Lys1-, Ac-(Ac-Lys)Lys2-Lys1-, Ac-(Ac-Lys-Lys)Lys2-Lys1-, Ac-(Ac-Lys- Gly)Lys2-Lys1-, Ac-Lys2-(Ac-Lys)-Lys1-, Ac-Lys2-(Ac-Lys-Lys)-Lys1-, Ac-Lys2- (Ac-Lys-Gly)-Lys1-, Ac-(Ac-Lys)Lys2-(Ac-Lys-)-Lys1-, Ac-(Ac-Lys)Lys2-(Ac- Lys-Lys-)-Lys1-, Ac-(Ac-Lys-Lys)Lys2-(Ac-Lys-Lys-)-Lys1-, Ac-Lys3- Lys2-(Ac- Lys)Lys1-, Ac-Lys3-(Ac-Lys)Lys2-Lys1-, Ac-(Ac-Lys)Lys3-Lys2-Lys1-, Ac-Lys3- (Ac-Lys)Lys2-(Ac-Lys)Lys1-, Ac-(Ac-Lys)Lys3-(Ac-Lys)Lys2-Lys1-, e Ac-(Ac- Lys)Lys3-Lys2-(Ac-Lys)Lys1-.

[0094] Numa modalidade particular, a sonda de aminoácidos ramificados é composta por 3 resíduos de lisina (selecionados a partir de L- Lys e D-Lys).

[0095] Numa outra modalidade, a sonda de aminoácidos ramificados é composta por 2 resíduos de lisina (selecionados a partir de L-Lys e D-Lys).

[0096] Numa modalidade particular, a sonda de aminoácidos ramificados é constituída por um primeiro e um segundo resíduo de lisina selecionado a partir de Lys e D-Lys, em que um ou ambos os primeiro e segundo resíduos de lisina são modificados por fixação ao grupo ε-amino do referido primeiro resíduo de e/ou segundo resíduo de lisina selecionado a partir de Lys e D-Lys; em que cada um dos referidos resíduos de lisina são opcionalmente acetilados.

[0097] Numa modalidade particular, a sonda de aminoácidos ramificados consiste em um primeiro resíduo de lisina selecionado a partir de Lys e D-Lys, em que o referido primeiro resíduo de lisina é modificado por ligação do grupo ε-amino do referido primeiro resíduo de lisina a dois resíduos de lisina selecionados a partir de Lys e D-Lys; em que cada um dos referidos resíduos de lisina são opcionalmente acetilados.

Ligação das sondas de aminoácidos ramificados e o peptídeo

[0098] De acordo com a invenção, o primeiro resíduo de aminoácido amino-alquil de cada uma dentre a uma ou mais sondas de aminoácidos ramificados está ligado covalentemente ao terminal N de um péptido, covalentemente ligado ao terminal C de um péptido, e/ou ligado ao grupo amino da cadeia lateral de um resíduo de aminoácido amino-alquil dentro de um péptido a ser modificado de acordo com a invenção.

[0099] Ligar uma ou mais sondas de aminoácidos ramificados a um péptido produz um conjugado de péptido/sonda.

[0100] Entende-se que ligado de forma covalente ou ligado ao terminal N de um peptídeo significa que uma sonda de aminoácidos ramificados da invenção está ligada por uma ligação peptídica entre o aminoácido mais terminal N do referido peptídeo e o primeiro resíduo de aminoácido aminoalquil da sonda de aminoácidos ramificados.

[0101] Do mesmo modo, entende-se que ligado de forma covalente ou ligado ao terminal C de um peptídeo significa que uma sonda de aminoácidos ramificados da invenção está ligada por uma ligação peptídica entre o aminoácido mais terminal C do referido peptídeo e o primeiro resíduo de aminoácido aminoalquil da sonda de aminoácidos ramificados.

[0102] Além disso, entende-se que uma sonda de aminoácidos ramificados em uma modalidade está ligada ao grupo amino da cadeia lateral de um resíduo de aminoácido aminoalquil no interior da referida sequência peptídica.

[0103] Numa modalidade particular, o referido resíduo de aminoácido aminoalquil no interior da referida sequência peptídica é selecionado a partir do grupo que consiste em um resíduo de ornitina e um resíduo de lisina. Numa modalidade particular, o referido resíduo de aminoácido aminoalquil no interior da referida sequência peptídica é um resíduo de lisina.

[0104] Numa modalidade, o primeiro resíduo de aminoácido aminoalquil da sonda de aminoácidos ramificados da invenção está ligado ao grupo δ-amino de um resíduo de ornitina no interior do referido peptídeo ou o grupo ε-amino de um resíduo lisina no interior do referido peptídeo.

[0105] Numa modalidade, o primeiro resíduo de aminoácido aminoalquil da sonda de aminoácidos ramificados da invenção está ligado ao grupo ε-amino de um resíduo lisina no interior do referido peptídeo.

[0106] Entende-se que um resíduo de aminoácido aminoalquil no interior da referida sequência peptídica significa que o resíduo de aminoácido aminoalquil não faz parte da sonda de aminoácidos ramificados, por si só, mas é um resíduo que ocorre dentro da sequência de aminoácidos existente do peptídeo. O referido resíduo de aminoácido aminoalquil pode ser posicionado em qualquer posição do peptídeo, isto é, pode ser o primeiro aminoácido do peptídeo, o segundo aminoácido do peptídeo, o terceiro aminoácido do peptídeo, o quarto aminoácido do peptídeo, e assim por diante continuando até o último resíduo de aminoácido do peptídeo.

[0107] De acordo com a invenção, um análogo de peptídeo compreendendo um ou mais sondas de aminoácidos ramificados significa que o análogo de peptídeo numa modalidade compreende uma sonda de aminoácidos ramificados, tal como 2 sondas de aminoácidos ramificados, por exemplo 3 sondas de aminoácidos ramificados, tais como 4 sondas de aminoácidos ramificados, por exemplo 5 sondas de aminoácidos ramificados, tais como 6 sondas de aminoácidos ramificados, por exemplo 7 sondas de aminoácidos ramificados, tal como 8 sondas de aminoácidos ramificados, por exemplo 9 sondas de aminoácidos ramificados, tais como 10 sondas de aminoácidos ramificados.

[0108] Em princípio, o análogo de peptídeo pode compreender qualquer número de sondas de aminoácidos ramificados, desde que possa ser ligado ao peptídeo (terminal N, terminal C e/ou um ou mais resíduos de aminoácidos aminoalquil na referida sequência peptídica.

[0109] Em uma modalidade da invenção, o análogo de peptídeo da invenção compreende 1 sonda de aminoácidos ramificados.

[0110] Numa modalidade, o análogo de peptídeo compreende 1 sonda de aminoácidos ramificados, sonda de aminoácidos ramificados esta que está ligada covalentemente ao terminal N peptídeo.

[0111] Numa modalidade, o análogo de peptídeo compreende 1 sonda de aminoácidos ramificados, sonda de aminoácidos ramificados esta que está ligada covalentemente ao terminal C peptídeo.

[0112] Numa modalidade, o análogo de peptídeo compreende 1 sonda de aminoácidos ramificados, sonda de aminoácidos ramificados esta que está ligada ao grupo amino da cadeia lateral de um resíduo de aminoácido aminoalquil dentro da referida sequência peptídica.

[0113] Numa modalidade, o análogo de peptídeo compreende mais do que uma (duas ou mais) sonda de aminoácidos ramificados. Nas modalidades em que o análogo de peptídeo compreende mais do que uma sonda de aminoácidos ramificados entende-se que a mais de uma sonda de aminoácidos ramificados podem individualmente ser as mesmas (idênticas) ou diferentes (não idênticas).

[0114] Em uma modalidade da invenção, o análogo de peptídeo da invenção compreende 2 sondas de aminoácidos ramificados.

[0115] Numa modalidade, o análogo de peptídeo compreende duas sondas de aminoácidos ramificados, em que uma sonda de aminoácidos ramificados é ligada covalentemente ao terminal N do peptídeo e outra sonda de aminoácidos ramificados é ligada covalentemente ao terminal C do peptídeo.

[0116] Numa modalidade, o análogo de peptídeo compreende duas sondas de aminoácidos ramificados, em que uma sonda de aminoácidos ramificados é ligada covalentemente ao terminal N do peptídeo e outra sonda de aminoácidos ramificados está ligada ao grupo amino da cadeia lateral de um resíduo de aminoácido aminoalquil na referida sequência peptídica.

[0117] Numa modalidade, o análogo de peptídeo compreende duas sondas de aminoácidos ramificados, em que uma sonda de aminoácidos ramificados é ligada covalentemente ao terminal C do peptídeo e outra sonda de aminoácidos ramificados está ligada ao grupo amino da cadeia lateral de um resíduo de aminoácido aminoalquil na referida sequência peptídica.

[0118] Numa modalidade, o análogo de peptídeo compreende duas sondas de aminoácidos ramificados, em que cada um dos duas sondas de aminoácidos ramificados está ligado ao grupo amino da cadeia lateral de diferentes (ou separados) resíduos de aminoácidos aminoalquil na referida sequência peptídica.

[0119] Em uma modalidade da invenção, o análogo de peptídeo da invenção compreende 3 sondas de aminoácido ramificado.

[0120] Numa modalidade, o análogo de peptídeo da invenção compreende 3 sondas de aminoácidos ramificados, em que a primeiraa sonda de aminoácidos ramificados é ligada covalentemente ao terminal N peptídeo, a segunda sonda de aminoácidos ramificados é covalentemente ligada ao terminal C do peptídeo e a terceira sonda de aminoácidos ramificados é ligada ao grupo amino da cadeia lateral de um resíduo de aminoácido aminoalquil na referida sequência peptídica.

[0121] Numa modalidade, o análogo de peptídeo da invenção compreende três sondas de ácidos aminados ramificadas, em que a primeira sonda de aminoácidos ramificados é ligada covalentemente à extremidade terminal N do peptídeo, e a segunda e terceira sonda de aminoácidos ramificados são, cada uma, ligadas ao grupo amino da cadeia lateral de resíduos de aminoácidos aminoalquil diferentes dentro da referida sequência peptídica.

[0122] Numa modalidade, o análogo de peptídeo da invenção compreende três sondas de ácidos aminados ramificadas, em que a primeira sonda de aminoácidos ramificados é ligada covalentemente ao terminal C do peptídeo, e a segunda e terceira sonda de aminoácidos ramificados são, cada uma, ligadas ao grupo amino da cadeia lateral de resíduos de aminoácidos aminoalquil diferentes dentro da referida sequência peptídica.

[0123] Numa modalidade, o análogo de peptídeo da invenção compreende três sondas de ácidos aminados ramificada, em que cada uma da primeira, segunda e terceira sonda de aminoácidos ramificados estão ligadas ao grupo amino de cadeia lateral de resíduos de aminoalquil de aminoácidos diferentes no interior da referida sequência de peptídeo.

Parte peptídeo do análogo

[0124] O análogo de peptídeo de acordo com a presente invenção compreende um peptídeo e uma ou mais sondas de aminoácidos ramificados.

[0125] Numa modalidade, o peptídeo do análogo de peptídeo é qualquer peptídeo, polipeptídeo ou proteína, cujo peptídeo numa modalidade é nativo ou que ocorre naturalmente, cujo peptídeo numa modalidade é uma variante biologicamente ativa de um peptídeo que ocorre naturalmente.

[0126] Numa modalidade o referido peptídeo é um fragmento de um polipeptídeo ou proteína maior.

[0127] Numa modalidade o referido peptídeo é um fragmento terminal N compreendendo 1 a 50 da maioria dos aminoácidos terminais N da referida proteína, tais como 1-2, 2-3, 3-4, 4-5, 5-6, 6-7, 7-8, 8-9, 9-10, 10-12, 12- 14,14-16, 16-18, 18-20, 20-25, 25-30, 30-35, 35- 40, 40-45, 45-50 da maioria dos ácidos aminados terminais N da referida proteína.

[0128] Numa modalidade o referido peptídeo é um fragmento terminal C compreendendo 1 a 50 da maioria dos aminoácidos do terminal C da referida proteína, tais como 1-2, 2-3, 3-4, 4-5, 5-6, 6-7, 7-8, 8-9, 9-10, 10-12, 12-14,14-16, 16-18, 18-20, 20-25, 25-30, 30-35, 35- 40, 40-45, 45-50 da maioria dos aminoácidos do terminal C da referida proteína.

[0129] Numa modalidade o referido peptídeo é um fragmento compreendendo de 1 a 50 resíduos de aminoácidos consecutivos da referida proteína, tais como 1-2, 2-3, 3-4, 4-5, 5-6, 6-7, 7-8, 8-9, 9-10, 10-12, 1214,14-16, 16-18, 18-20, 20-25, 25-30, 30-35, 35-40, 40-45, 45 resíduos de aminoácidos consecutivos da referida proteína.

[0130] Em algumas modalidades, os análogos de peptídeos aqui fornecidos têm uma ou mais propriedades melhoradas em comparação com o peptídeo nativo.

[0131] Um peptídeo é uma única cadeia de polímero linear derivada da condensação de aminoácidos. Os peptídeos podem ser distinguidos a partir de proteínas com base no tamanho, e como um ponto de referência arbitrário pode ser entendido a conter cerca de 75 (tal como 50) ou menos resíduos de aminoácidos.

[0132] Em uma modalidade da parte peptídeo do análogo de peptídeo da presente invenção é um peptídeo possuindo (compreendendo ou consistindo em) resíduos de 2 a 100 aminoácidos, tal como de 2 a 3, por exemplo 3 a 4, tal como 4 a 5, por exemplo, 5 a 6, tal como 6 a 7, por exemplo 7 a 8, tal como 8 a 9, por exemplo 9 a 10, tal como 10 a 12, por exemplo 12 a 14, tal como 14 a 16, por exemplo 16 a 18, tal como 18 a 20, por exemplo 20 a 25, tal como 25 a 30, por exemplo 30 a 40, tal como 40 a 50, por exemplo 50 a 75, tal como 75 a 100 resíduos de aminoácidos.

[0133] Numa modalidade, o peptídeo da presente invenção é um peptídeo com menos do que 50 resíduos de aminoácido, tal como menos de 40, por exemplo, menos do que 30 resíduos de aminoácidos.

[0134] A sequência de resíduos de aminoácidos num peptídeo nativo é definida pela sequência de um gene, que é codificada no código genético. Em geral, o código genético especifica 20 aminoácidos padrão incorporados naturalmente em polipeptídeos (proteinogênicos): Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Giu, Giy, His, lie, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Tyr, Thr, Trp, Vai, e 2, que são incorporados em proteínas por mecanismos sintéticos únicos: Sec (selenocisteína, ou U) e Pyl (pirrolisina, O). Estes são todos os L- estereoisômeros.

[0135] Para além dos 22 aminoácidos padrões ou naturais, existem muitos outros aminoácidos que não ocorrem naturalmente (não proteinogênico ou não-padrão). Eles são ou não encontrados em proteínas, ou não são produzidos diretamente e de forma isolada pela maquinaria celular padrão.

[0136] Os aminoácidos não padrão são normalmente formados através da modificação de aminoácidos padrão, tais como as modificações pós-translacionais. Exemplos de resíduos de aminoácidos não naturais são Nle (Norleucina), Orn (ornitina, deguanylated Arginina), Nal (beta-2-naftil- alanina), D-Nal (beta-2-naf til-D-alanina), D-Arg, D-Trp, D-Phe e D-Val.

[0137] Quaisquer aminoácidos de acordo com a presente invenção podem estar na configuração L ou D. Se nada for especificado, referência à forma L-isomérica é preferencialmente significava.

[0138] O termo peptídeo também abrange modificações pós- translacionais introduzidas pelas reações químicas catalisadas por enzimas ou, como são conhecidos na técnica. Tais modificações pós-translacionais podem ser introduzidas antes de particionamento, se desejado. Além disso, equivalentes funcionais podem compreender modificações químicas, tais como ubiquitinação, marcação (por exemplo, com radionuclídeos, várias enzimas, etc.), peguilação (derivatização com polietilenoglicol), ou por meio da inserção (ou substituição por síntese química) de aminoácidos, tais como ornitina, que normalmente não ocorrem em proteínas humanas.

[0139] Os peptídeos com alquilações terminais N e esterificações terminais C estão também englobados na presente invenção. Os equivalentes funcionais também compreendem os conjugados glicosilados covalentes ou agregativos formados com as mesmas moléculas, incluindo dímeros ou radicais químicos não relacionados. Esses equivalentes funcionais são preparados por ligação de funcionalidades a grupos que são encontrados em um fragmento que inclui a qualquer um ou ambos de N- e terminais C, por meios conhecidos na técnica.

[0140] Em algumas modalidades, os peptídeos de acordo com a presente invenção são modificados por acetilação, tal como acetilação terminal N. Em algumas modalidades os peptídeos de acordo com a presente invenção são modificados por amidação terminal C.

[0141] Os peptídeos da presente invenção podem ser quaisquer peptídeos conhecidos para o versado na técnica como possuindo um efeito biológico. Numa modalidade a adição de uma sonda de aminoácidos ramificados com o peptídeo em causa irá influenciar o referido efeito biológico, tal como aumentar ou melhorar um efeito biológico.

[0142] Uma variante de um peptídeo da invenção é numa modalidade de um peptídeo derivado a partir do peptídeo nativo por fragmentação (por exemplo, fragmentos terminais N, os fragmentos terminais C, ou fragmentos dos mesmos a partir de dentro de um peptídeo), deleção, inserção, mutação ou substituição de um ou mais resíduos de aminoácidos (tal como uma substituição de aminoácidos conservativa ou introdução de resíduos de aminoácidos não-proteinogênicos), e/ou modulação do peptídeo, tais como por acetilação, por meio da inserção de um aminoácido na configuração D, e outras modificações conhecidas ao versado.

[0143] Numa modalidade, o análogo de peptídeo da invenção compreende uma ou mais sonda de aminoácidos ramificados e um peptídeo possuindo um efeito de imuno-modulação (um peptídeo imuno-modulador), em uma modalidade tendo um anti-inflamatório e/ou efeito pró-resolução.

[0144] Numa modalidade, o análogo de peptídeo da invenção compreende uma ou mais sonda de aminoácidos ramificados e um peptídeo possuindo um efeito metabólico.

[0145] Numa modalidade, o análogo de peptídeo da invenção compreende uma ou mais sonda de aminoácidos ramificados e um peptídeo possuindo um efeito cardiovascular.

[0146] Numa modalidade, o análogo de peptídeo da invenção compreende uma ou mais sonda de aminoácidos ramificados e um peptídeo possuindo um efeito de proteção de órgãos e/ou tecidos de proteção.

[0147] Numa modalidade, o análogo de peptídeo compreende um hormônio peptídeo, um neurotransmissor, um neuropeptídeo, um lipopeptídeo, uma enzima, um fator de crescimento, um metabologen, um fator de transcrição, um agonista de receptor, um antagonista de receptor, um ligando, ou uma proteína carreadora.

[0148] Numa modalidade, o peptídeo análogo compreende um peptídeo selecionado a partir do grupo que consiste em VIP (Peptídeo Intestinal Vasoativo; PHM27), PACAP (Peptídeo Ativador de Pituitária Adenilato Ciclase), Peptídeo PHI 27 (Peptídeo Histidina Isoleucina 27), GHRH 1-24 (Hormônio de Liberação de Hormônio de Crescimento 1 a 24), Glucagon, Secretina, precursor glicentina, GIP (peptídeo inibitório gástrico), pré-albumina ou transtirretina (TTR), peptídeo HI-27 e fator de liberação de hormônio de crescimento (GHRF ou GHRH), incretinas, peptídeo-1 semelhante a glucagon (GLP-1), GLP-1 (7-37), GLP-1 (7-33), peptídeo-2 semelhante a glucagon (GLP-2) e a exendina-4, ou variantes dos mesmos.

[0149] Numa modalidade, o análogo de peptídeo compreende um peptídeo selecionado a partir do grupo que consiste em somatotrofinas (tais como somatotropina ou hormônio de crescimento (GH)), Tirotrofinas (tais como hormônio estimulante de tiroide (TSH), Corticotrofinas (tais como hormônio adrenocorticotrópico (ACTH), e beta-endorfina), Lactotrofinas (tais como a prolactina (PRL), gonadotrofinas (tais como hormônio luteinizante (LH) e hormônio folículo-estimulante (FSH)), hormônio antidiurético (ADH ou vasopressina) oxitocina, hormônio de liberação de hormônio de crescimento (GHRH), somatostatina, hormona liberador de tirotrofina (TRH), hormônio liberador de corticotrofina (CRH) hormônio liberador de Gonadotrofina (GnRH), CREB (proteína ligante ao elemento de resposta do AMPc), tripeptídeos lácticos, Isoleucina-Prolina-Prolina (IPP) e Valina-Prolina-Prolina (VPP), e variantes dos mesmos.

[0150] Numa modalidade, o peptídeo análogo compreende um peptídeo incluindo NPY relacionadas com o polipeptídeo pancreático (Neuropeptídeo Y), PYY (Peptídeo YY), APP (Polipeptídeo Pancreático Aviário) e PPY/PP (Polipeptídeo Pancreático), ou variantes dos mesmos.

[0151] Numa modalidade, o análogo de peptídeo compreende um peptídeo opioide (ou hormônio polipeptídico opiáceo/neuropeptídeo opioide), incluindo a Proopiomelanocortina (POMC) peptídeos (incluindo terminal N Peptídeo Proopiomelanocortina (NPP, ou pró-Y-MSH), Y-MSH, Corticotrofina (hormônio adrenocorticotrópico ou ACTH), α-Melanotrofina, α-MSH, Peptídeo Intermediário semelhante à Corticotrofina (CLIP), β-lipotrofina (β- LPH), Lipotrofina Gamma (Y-LPH), β-MSH, β-endorfina e [Met]Encefalina); Pentapeptídeos encefalina (Met-encefalina e Leu-encefalina), Peptídeos Prodinorfina, dinorfinas (dinorfina A, dinorfina B, α-neo-endorfina, β-neo- endorfina, e Big dinorfina), endorfinas (beta-endorfina, alfa-endorfina, gama- endorfina, α-neo-endorfina e β-neo-endorfina), Adrenorfina, Amidorfina, Leumorfina, nociceptina, Opiorfina, e Spinorfina, ou variantes das mesmas.

[0152] Numa modalidade, o análogo de peptídeo compreende um neuropeptídeo, ou um neurotransmissor, incluindo as quininas, neuropeptídeos de taquicinina (incluindo a substância P, cassinina, neuroquinina A (NKA), neuroquinina B (NKB), eledoisina e Fisalemina), bradiquinina, peptídeos relacionados a Neuromedinas/Bombesina (incluindo Neuromedina B (NMB), Neuromedina N, Neuromedina S e Neuromedina U (NMU)); Angiotensina, bombesina, peptídeo calcitonina relacionado a gene (CGRP), α-CGRP, β-CGRP, carnosina, transcrito regulado pela cocaína e anfetamina (CART), peptídeo Delta indutor do sono (SDIPS), FMRFamida, peptídeos relacionados com FMRFamida (FaRPs), galanina, peptídeos semelhantes a galanina (GALP), peptídeo liberador de gastrina (GRP), neuropeptídeo S, neuropeptídeo Y, Neurofisinas (Neurofisina I e Neurofisina II), Neurotensina, Polipeptídeo pancreático, polipeptídeo ativador da adenilato ciclase pituitária (PACAP), RVD-Hpα, hemopressina, de VGF (fator de crescimento do nervo de VGF indutível), e peptídeos derivados de VGF (TLQP-21), ou variantes dos mesmos.

[0153] Numa modalidade, o análogo de peptídeo compreende um peptídeo calcitonina, incluindo calcitonina, amilina (ou Islet Polipeptídeo Amiloide (IAPP)) e AGG01, ou variantes dos mesmos.

[0154] Em uma modalidade, o análogo do peptídeo é composto por um fator de crescimento, incluindo em uma modalidade Adrenomedulina (AM), Angiopoietina (Ang), Fator de motilidade autócrina, Proteínas morfogenéticas de osso (BMPs) (BMP1, B; MP2, BMP3, BMP4, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP10, BMP15), fator neurotrófico derivado do cérebro (BDNF), fator de crescimento epidérmico (EGF), eritropoietina (EPO), fator de crescimento fibroblástico (FGF), fator neurotrófico derivado de linha de célula Glial (GDNF), fator colônia-estimulante de granulócitos (G- CSF), fator colônia-estimulante de granulócitos macrófagos (GM-CSF), diferenciação de crescimento fator-9 (GDF9), fator de crescimento de hepatócito (HGF), fator de crescimento derivado de Hepatoma (HDGF), fatores de crescimento semelhante à insulina (IGF), IGF-1, IGF-2, Fator de estimulação de migração, Miostatina (GDF-8), neurotrofinas, neurotrofinas-3 (NT-3), neurotrofinas-4 (NT-4), fator de crescimento do nervo (NGF), fator de crescimento derivado de plaquetas (PDGF), Trombopoietina (TPO), fator de crescimento transformante alfa (TGF-α), fator de crescimento transformante beta (TGF-β), fator de necrose tumoral-alfa (TNF-α), fator de crescimento endotelial Vascular (VEGF), Wnt proteínas, Wnt1, Wnt2, Wnt2B, Wnt3, Wnt3A, Wnt4, Wnt5A, Wnt5B, Wnt6, Wnt7A, Wnt7B, Wnt8A, Wnt8B, Wnt9A, Wnt9B, Wnt10A, Wnt10B, Wnt11, Wnt16, fator de crescimento placentário (PGF) e somatotrofina bovina fetal (FBS), ou variantes dos mesmos.

[0155] Numa modalidade, o análogo de peptídeo compreende um peptídeo da insulina/IGF/família relaxina, incluindo, em uma modalidade insulina e fatores de crescimento semelhantes à insulina, IGF-1, IGF-2, proteínas de ligação a IGF, IGFBP1, IGFBP2, IGFBP3, IGFBP4, IGFBP5, IGFBP6, IGFBP7, peptídeos hormônios da família relaxina, peptídeos semelhantes a relaxina (NLR), (inSL) peptídeos semelhantes a insulina, RLN1 (relaxina 1), RLN2 (relaxina 2), RLN3 (relaxina 3), INSL3 (peptídeo 3 semelhante a insulina, peptídeo específico de células de Leydig semelhante à insulina), INSL4 (peptídeo 4 semelhante a insulina, peptídeo semelhante a insulina de placenta precoce, ELIP), INSL5 (peptídeo 5 semelhante a insulina) e INSL6 (peptídeo 6 semelhante a insulina), ou variantes dos mesmos.

[0156] Numa modalidade, o peptídeo análogo compreende um hormônio peptídeo, incluindo, em uma modalidade gastrina, gastrina-34, gastrina-17, gastrina-14, pentagastrina, hormônio da tiroide (T4), hormônio liberador de tirotrofina (TRH), vasopressina, hormônios proteínas, hormônios glicoproteínas, hormônio de crescimento (GH), insulina, LH, FSH, hormônio estimulante da tiroide (tirotropina, TSH), Angiotensina (AGT), angiotensina I, II angiotensina, angiotensina III, angiotensina IV, peptídeo natriurético atrial (ANP), NT-proBNP,

[0157] Peptídeo Natriurético Tipo B (BNP) e Peptídeo natriurético atrial (ANP), ou variantes das mesmas.

[0158] Numa modalidade, o análogo de peptídeo compreende uma proteína Anexina, incluindo uma modalidade em anexina A-I (lipocortina I) e anexina A-II (anexina II), ou variantes dos mesmos, incluindo as dos mesmos, alguns dos quais são conhecidos na técnica.

Agonista

[0159] Numa modalidade, o análogo de peptídeo da invenção compreende um agonista. O termo "agonista" no presente contexto refere-se a uma substância ou peptídeo tal como aqui definido, capaz de se ligar a, ou em algumas modalidades, capaz de se ligar a, pelo menos em alguma extensão e/ou a ativação de um receptor, ou em algumas modalidades, a ativar um receptor a pelo menos em alguma extensão.

[0160] Um agonista pode ser um agonista de vários tipos diferentes de receptores, e, assim, capaz de se ligar e/ou ativar vários tipos diferentes de receptores. O referido agonista também pode ser um agonista seletivo que só se liga e ativa um tipo de receptor. O termo "antagonista" no presente contexto refere-se a uma substância capaz de inibir o efeito de um agonista do receptor.

[0161] Agonistas totais ligam (tem afinidade para) e ativam um receptor, exibindo a sua plena eficácia nesse receptor. "Agonistas parciais" no presente contexto são os peptídeos capazes de se ligar e ativar um determinado receptor, mas tendo apenas eficácia parcial no receptor em relação a um agonista total. Os agonistas parciais podem atuar como antagonistas ao competir com um agonista completo para a ocupação do receptor e produzindo uma redução líquida na ativação do receptor em comparação com os efeitos observados com a ativação ou o agonista total sozinho.

[0162] "Agonistas seletivos" no presente contexto são os compostos que são seletivos e, por conseguinte, predominantemente ligam e ativam um tipo de receptor.

[0163] Os peptídeos de acordo com a presente invenção estão numa modalidade de um agonista capaz de se ligar e ativar, em certa medida a um ou vários receptores e podem ter afinidades de ligação diferentes e/ou a eficácia ativação do receptor diferente para diferentes receptores, em que afinidade refere-se ao número e tamanho de forças intermoleculares entre um ligando de peptídeo e o seu receptor, e o tempo de permanência do ligando no seu local de ligação ao receptor; e eficácia de ativação do receptor refere-se à capacidade do ligando de peptídeo para produzir uma resposta biológica após ligação ao receptor alvo e quantitativa da magnitude desta resposta.

[0164] Em algumas modalidades, essas diferenças de afinidade e a eficácia de ativação do receptor são determinadas por estudos de ligação/ativação do receptor que são convencionais na técnica, por exemplo, através da geração de valores EC50 e Emax para a estimulação da ligação do ligando em células que expressam um ou vários tipos de receptores, ou em tecidos que expressam os diferentes tipos de receptores. Alta afinidade significa que uma menor concentração de um composto é necessária para obter uma ligação de 50% dos receptores em relação aos peptídeos que possuem uma afinidade mais baixa; alta eficácia de ativação do receptor significa que uma concentração mais baixa do peptídeo é necessária para obter uma resposta de ativação do receptor de 50% (valor EC50 baixo), em comparação com peptídeos que possuem uma afinidade e/ou eficácia de atividade do receptor mais baixa (valor EC50 maior).

Melanocortinas

[0165] Numa modalidade, o peptídeo do análogo de peptídeo da invenção é uma melanocortina.

[0166] Em uma modalidade a melanocortina é selecionada a partir de α-MSH, Y-MSH (compreendendo Y1-MSH e Y—MSH) e β-MSH, ou variantes dos mesmos.

[0167] Em uma modalidade a melanocortina é selecionada a partir de α-MSH e Y-MSH, ou variantes dos mesmos.

[0168] Numa modalidade, uma variante de peptídeo é uma variante biologicamente ativa do peptídeo, isto é, uma variante que retém pelo menos uma função do peptídeo nativo (não variante). α-MSH Ac-Ser-Tir-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val SYSMEHFRWGKPV P01189[138-150], Pro-opiomelanocortina, Homo sapiens modificação aa: Valina amida (pos 150) Y1-MSH Tyr-Val-Met-Gly-His-Phe-Arg-Trp-Asp-Arg-Phe-Gly YVMGHFRWDRFG P01189[77-88], Pro-opiomelanocortina, Homo sapiens modificações aa: Amida fenilalanina (pos 88) Y2-MSH Tyr-Val-Met-Gly-His-Phe-Arg-Trp-Asp-Arg-Phe YVMGHFRWDRF P01189[77-87], Pro-opiomelanocortina, Homo sapiens modificações aa: Amida fenilalanina (pos 87)

[0169] É, portanto, um aspecto da presente invenção consiste em fornecer um análogo de melanocortina, compreendendo um peptídeo de melanocortina e um ou mais sondas de aminoácidos ramificados, em que a referida sonda de aminoácidos ramificados compreende um primeiro resíduo de aminoácido aminoalquil, o referido primeiro resíduo de aminoácido aminoalquil sendo opcionalmente covalentemente ligado a um segundo resíduo de aminoácido aminoalquil, ou a um segundo e a um terceiro resíduo de aminoácido aminoalquil, para formar uma cadeia linear de 2 ou 3 resíduos de aminoácido aminoaquil, em que a cadeia lateral (s) de um ou mais dos referidos primeiro, segundo e/ou terceiro resíduos de aminoácidos aminoalquil são cada um modificados anexando o grupo amino da cadeia lateral de uma molécula selecionada, independentemente, do grupo consistindo de AAAq-AAA; (aa3)p- AAAq; AAAq-(aa3)p; [(aa3)-AAA]p e [AAA-(aa3)]p; em que q é um número selecionado dentre 0, 1, 2 e 3; p é um número selecionado dentre 1, 2 e 3; AAA é um resíduo de aminoácido aminoalquil; e (aa3) é um resíduo de aminoácido independentemente selecionado dentre Arg, His, Gly e Ala, em que os referidos resíduos de aminoácidos aminoalquil são opcionalmente acetilados, em que o referido primeiro resíduo de aminoácido aminoalquil é covalentemente ligado ao terminal N do referido peptídeo melanocortina, covalentemente ligado ao terminal C do referido peptídeo melanocortina, e/ou ligado ao grupo amino da cadeia lateral de um resíduo de aminoácido aminoalquil dentro do referido peptídeo melanocortina, com a ressalva de que a referida sonda de aminoácidos ramificados consiste em 2 a 9 resíduos de aminoácidos.

[0170] Em uma modalidade com a condição de que, quando o análogo de melanocortina compreende uma sonda de aminoácidos ramificados compreendendo um ou mais resíduos de lisina, a referida sonda de aminoácidos ramificados não está ligada ao terminal N da referida melanocortina.

[0171] Em uma modalidade com a condição de que quando o peptídeo de melanocortina do análogo é α-MSH ou Y-MSH, ou variantes dos mesmos, a referida sonda de aminoácidos ramificados é não ligada ao terminal N da referida melanocortina.

[0172] Em uma modalidade com a condição de que, quando o análogo de melanocortina compreende uma sonda de aminoácidos ramificados, o qual compreende um ou mais resíduos de lisina, e o peptídeo de melanocortina do análogo é α-MSH ou Y-MSH, ou variantes dos mesmos, a referida sonda de aminoácidos ramificados é não ligada ao terminal N da referida melanocortina.

[0173] Numa modalidade, o(s) primeiro(s) resíduo(s) de aminoácido aminoalquil de uma ou mais sondas de aminoácidos ramificados não está(ão) covalentemente ligado(s) ao terminal N do referido peptídeo de melanocortina.

[0174] Numa modalidade, o(s) primeiro(s) resíduo(s) de aminoácido aminoalquil de uma ou mais sondas de aminoácidos ramificados não está(ão) covalentemente ligado(s) ao terminal N do referido peptídeo de melanocortina, desde i) os referidos análogos de melanocortina compreendem uma (1) sonda de aminoácidos ramificados, ii) a referida sonda de aminoácidos ramificados compreende um ou mais resíduos de lisina, e/ou iii) os referidos análogos de melanocortina compreendem um peptídeo de melanocortina selecionados a partir do grupo que consiste em α-MSH e Y-MSH (compreendendo YI-MSH e Y- MSH), ou variantes dos mesmos.

[0175] Numa modalidade, o referido análogo de melanocortina compreende uma sonda de aminoácidos ramificados, que está covalentemente ligado ao terminal C do referido peptídeo, ou ligada ao grupo amino da cadeia lateral de um resíduo de aminoácido aminoalquil no interior do referido peptídeo de melanocortina.

[0176] Numa modalidade, o resíduo de aminoácido aminoalquil no interior do referido peptídeo de melanocortina é um resíduo de lisina.

[0177] Numa modalidade, o resíduo de aminoácido aminoalquil no interior do referido peptídeo de melanocortina é um resíduo ornitina.

[0178] Numa modalidade, o referido análogo de melanocortina é um análogo de α-MSH e compreende uma sonda de aminoácidos ramificados ligada ao grupo ε-amino do resíduo de lisina (Lys) compreendido no peptídeo nativo α-MSH (sublinhado: Ac-Ser-Tyr- Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly- Lys-Pro-Val).

[0179] Em uma modalidade da invenção, o análogo de peptídeo de melanocortina compreende duas sondas de aminoácidos ramificados, em que i) uma sonda de aminoácidos ramificados é ligada covalentemente ao terminal N e uma outra sonda de aminoácidos ramificados é ligada covalentemente ao terminal C do peptídeo melanocortina; ii) uma sonda de aminoácidos ramificados é ligada covalentemente ao terminal N e outra sonda de aminoácidos ramificados é ligada ao grupo amino da cadeia lateral de um resíduo de aminoácido aminoalquil no interior do referido peptídeo de melanocortina; iii) uma sonda de aminoácidos ramificados é ligada covalentemente ao terminal C e outra sonda de aminoácidos ramificados está ligada ao grupo amino da cadeia lateral de um resíduo de aminoalquil de aminoácidos no interior do referido peptídeo de melanocortina; ou iv) cada uma das duas sondaa de aminoácidos ramificados estão ligadas aos grupos amino da cadeia lateral de resíduos de aminoácidos aminoalquil diferentes (ou separados) dentro do referido peptídeo de melanocortina.

[0180] Em uma modalidade da invenção, o análogo de peptídeo da invenção compreende três sondas de aminoácidos ramificados, em que cada uma dentre a primeira, segunda e terceira e sonda de aminoácidos ramificados é covalentemente ligada ao terminal N do peptídeo, covalentemente ligada ao terminal C do peptídeo ou ligada ao grupo amino da cadeia lateral de um resíduo de aminoácido aminoalquil no interior do referido peptídeo de melanocortina.

[0181] Numa modalidade o análogo de melanocortina da presente invenção compreende um peptídeo a-MSH, ou variantes dos mesmos.

[0182] Numa modalidade o análogo de melanocortina da presente invenção compreende um peptídeo Y -MSH, ou variantes dos mesmos.

[0183] Numa modalidade a análogo de melanocortina da presente invenção compreende uma ou mais sondas de aminoácidos ramificados e um peptídeo de melanocortina que possui a sequência de aminoácidos: (aai)n — Y — (aa2)m — Z em que Y é uma sequência de amino ácidos consistindo em 4 resíduos de aminoácidos contíguos selecionados a partir do grupo constituído por His- Phe-Arg-Trp; His-(D-Phe)-Arg-Trp; His-Phe-(D-Arg)-Trp; His-Phe-Arg-(D- Trp); His-(D-Phe)-Arg-(D-Trp); His-Nal-Arg-Trp e His-(D-Nal)-Arg-Trp; e em que Z é uma sequência de amino ácidos consistindo em 2 ou 3 resíduos de aminoácidos contíguos selecionados a partir do grupo constituído por Lys-Pro-Val; Lys-Pro-(D-Val); Arg-Phe-Gly; Arg-(D-Phe)-Gly; Arg-Phe e Arg-(D-Phe); e em que n é um número selecionado a partir de 0, 1, 2, 3, 4 e 5, e (aa1) de forma independente pode ser qualquer resíduo natural ou não natural de aminoácido, e em que m é 0 ou 1, e (aa2) pode ser qualquer resíduo de aminoácido natural ou não natural.

[0184] Numa modalidade o referido peptídeo de melanocortina é α- MSH ou Y-MSH ou é derivado de α-MSH ou Y-MSH.

[0185] Numa modalidade (aa1)n é uma sequência que consiste em 0 a 5 aminoácidos (n = 0, 1, 2, 3, 4, ou 5). Numa modalidade particular, (aa1)n é uma sequência que consiste em 4 ou 5 aminoácidos contíguos (n = 4 ou 5).

[0186] Em uma modalidade, (aa1)n é selecionado a partir do grupo que consiste em Ser-Tyr-Ser-Met-Glu, Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu e Ser-Ser-Ile-Ile-Ser, em que o referido terminal N Ser está opcionalmente acetilado.

[0187] Em uma modalidade, (aa1)n é selecionado a partir do grupo constituído por Ser-Tyr-Ser-Met-Glu, Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu, Ser-Ser-Ile-Ile- Ser, Ac-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu, Ac-Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu e Ac-Ser-Ser-Ile-Ile- Ser.

[0188] Em uma modalidade, (aa1)n é selecionado a partir do grupo que consiste em Tyr-Val-Met-Gly e Tyr-Val-Nle-Gly.

[0189] Numa modalidade (aa2)m é selecionado a partir do grupo que consiste em Gly e Asp. Numa modalidade (aa2)m é Gly. Numa outra modalidade (aa2)m é Asp.

[0190] Numa modalidade, Z é Lys-Pro-Val ou Lys-Pro-(D-Val). Numa outra modalidade, Z é Arg-Phe-Gly ou Arg-(D-Phe)-Gly. Em ainda outra modalidade, Z é Arg-Phe ou Arg-(D-Phe).

[0191] Numa modalidade, o aminoácido mais carboxi terminal do peptídeo melanocortina é amidado (-NH2; -CONH2). Assim, numa modalidade, Val ou (D-Val) é uma amida Valina. Numa outra modalidade, Phe ou (D-Phe) é uma amida de fenilalanina. Em ainda outra modalidade, Gly é Glicina amida.

[0192] Numa modalidade o análogo de melanocortina da presente invenção compreende uma ou mais sondas de aminoácidos ramificados e um peptídeo α-MSH que possui a sequência de aminoácidos: (aai)n — Y — (aa2)m — Z em que n é um número selecionado a partir de 0, 1, 2, 3, 4 e 5, e (aa1) de forma independente pode ser qualquer resíduo natural ou não natural de aminoácido, e em que m é 0 ou 1, e (aa2) é qualquer resíduo de aminoácido natural ou não natural. em que Y é selecionado a partir do grupo que consiste em: His-Phe- Arg-Trp; His-(D-Phe)-Arg-Trp; His-Phe-(D-Arg)-Trp; His-Phe-Arg-(D-Trp); His-(D-Phe)-Arg-(D-Trp); His-Nal-Arg-Trp e His-(D-Nal)-Arg-Trp; e em que Z é selecionado a partir do grupo que consiste em Lys-Pro-Val e Lys-Pro- (D-Val), e Val ou (D-Val) é opcionalmente amida valina.

[0193] Numa modalidade (aa1)n é selecionado a partir do grupo constituído por Ser-Tyr-Ser-Met-Glu, Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu, Ser-Ser-Ile-Ile- Ser, Ac-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu, Ac-Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu e Ac-Ser-Ser-Ile-Ile- Ser. Numa modalidade (aa2)m é Gly.

[0194] Numa modalidade, o peptídeo melanocortina é derivado de α- MSH e (aa1)n é Ser-Tyr-Ser-Met-Glu, Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu ou Ser-Ser-Ile-Ile- Ser; Y é His-Phe-Arg-Trp, Hé-(D-Phe)-Arg-Trp ou His-Phe-Arg-(D-Trp); (aa2)m é Gly e Z é Lys-Pro-Val.

[0195] Numa modalidade o análogo de melanocortina da presente invenção compreende uma ou mais sondas de aminoácidos ramificados e um α-MSH peptídeo selecionado a partir do grupo que consiste em Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val (SEQ ID NO:1), Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-(D-Phe)-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val, Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-(D-Arg)-Trp-Gly-Lys-Pro-Val Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-(D-Trp)-Gly-Lys-Pro-Val, Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-(D-Phe)-Arg-(D-Trp)-Gly-Lys-Pro-Val, Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Nal-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val, Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-(D-Nal)-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val, Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-(D-Val), Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-(D-Phe)-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-(D-Val), Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-(D-Arg)-Trp-Gly-Lys-Pro-(D-Val), Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-(D-Trp)-Gly-Lys-Pro-(D-Val), Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-(D-Phe)-Arg-(D-Trp)-Gly-Lys-Pro-(D-Val), Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Nal-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-(D-Val), Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-(D-Nal)-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-(D-Val), Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val (SEQ ID NO:3), Ser-Tyr-Ser- Nle Glu-His-(D-Phe)-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val, Ser-Tyr-Ser- Nle Glu-His-Phe-(D-Arg)-Trp-Gly-Lys-Pro-Val Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu-His-Phe-Arg-(D-Trp)-Gly-Lys-Pro-Val, Ser-Tyr-Ser- Nle-Glu-His-(D-Phe)-Arg-(D-Trp)-Gly-Lys-Pro-Val, Ser-Tyr-Ser- Nle-Glu-His-Nal-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val, Ser-Tyr-Ser- Nle-Glu-His-(D-Nal)-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val, Ser-Tyr-Ser- Nle-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-(D-Val), Ser-Tyr-Ser- Nle-Glu-His-(D-Phe)-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-(D-Val), Ser-Tyr-Ser- Nle-Glu-His-Phe-(D-Arg)-Trp-Gly-Lys-Pro-(D-Val), Ser-Tyr-Ser- Nle Glu-His-Phe-Arg-(D-Trp)-Gly-Lys-Pro-(D-Val), Ser-Tyr-Ser- Nle-Glu-His-(D-Phe)-Arg-(D-Trp)-Gly-Lys-Pro-(D-Val), Ser-Tyr-Ser- Nle-Glu-His-Nal-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-(D-Val), Ser-Tyr-Ser- Nle-Glu-His-(D-Nal)-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-(D-Val), Ser-Ser-Ile-Ile-Ser-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val (SEQ ID NO:5), Ser-Ser-Ile-Ile-Ser-His-(D-Phe)-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val, Ser-Ser-Ile-Ile-Ser-His-Phe-(D-Arg)-Trp-Gly-Lys-Pro-Val Ser-Ser-Ile-Ile-Ser-His-Phe-Arg-(D-Trp)-Gly-Lys-Pro-Val, Ser-Ser-Ile-Ile-Ser-His-(D-Phe)-Arg-(D-Trp)-Gly-Lys-Pro-Val, Ser-Ser-Ile-Ile-Ser-His-Nal-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val, Ser-Ser-Ile-Ile-Ser-His-(D-Nal)-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val, Ser-Ser-Ile-Ile-Ser-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-(D-Val), Ser-Ser-Ile-Ile-Ser-His-(D-Phe)-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-(D-Val), Ser-Ser-Ile-Ile-Ser-His-Phe-(D-Arg)-Trp-Gly-Lys-Pro-(D-Val), Ser-Ser-Ile-Ile-Ser-His-Phe-Arg-(D-Trp)-Gly-Lys-Pro-(D-Val), Ser-Ser-Ile-Ile-Ser-His-(D-Phe)-Arg-(D-Trp)-Gly-Lys-Pro-(D-Val), Ser-Ser-Ile-Ile-Ser-His-Nal-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-(D-Val), e Ser-Ser-Ile-Ile-Ser-His-(D-Nal)-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-(D-Val), em que o mais terminal carboxi ou Val (D-Val) é opcionalmente uma amida Valina.

[0196] Numa modalidade o análogo de melanocortina da presente invenção compreende uma ou mais sondas de aminoácidos ramificados e um Y-MSH peptídeo que possui a sequência de aminoácidos: (aai)n — Y — (aa2)m — Z em que n é um número selecionado a partir de 0, 1, 2, 3, 4 e 5, e (aa1) de forma independente pode ser qualquer resíduo natural ou não natural de aminoácido, e em que m é 0 ou 1, e (aa2) é qualquer resíduo de aminoácido natural ou não natural. em que Y é selecionado a partir do grupo que consiste em: His-Phe- Arg-Trp; His-(D-Phe)-Arg-Trp; His-Phe-(D-Arg)-Trp; His-Phe-Arg-(D-Trp); His-(D-Phe)-Arg-(D-Trp); His-Nal-Arg-Trp e His-(D-Nal)-Arg-Trp; e em que Z é selecionado a partir do grupo que consiste em Arg-Phe- Gly, Arg (D-Phe) -Gly, Arg-Phe e Arg- (D-Phe); e Phe ou (D-Phe) é amida ou fenilalanina Gly é glicina amida.

[0197] Em uma modalidade, (aa1)n é selecionado a partir do grupo que consiste em Tyr-Val-Met-Gly e Tyr-Val-Nle-Gly. Numa modalidade (aa2)m é Asp.

[0198] Numa modalidade o análogo de melanocortina da presente invenção compreende uma ou mais sondas de aminoácidos ramificados e um Y1-MSH peptídeo selecionado a partir do grupo que consiste em Tyr-Val-Met-Gly-His-Phe-Arg-Trp-Asp-Arg-Phe-Gly, Tyr-Val-Met-Gly-His-(D-Phe)-Arg-Trp-Asp-Arg-Phe-Gly, Tyr-Val-Met-Gly-His-Phe-(D-Arg)-Trp-Asp-Arg-Phe-Gly, Tyr-Val-Met-Gly-His-Phe-Arg-(D-Trp)-Asp-Arg-Phe-Gly, Tyr-Val-Met-Gly-His-(D-Phe)-Arg-(D-Trp)-Asp-Arg-Phe-Gly, Tyr-Val-Met-Gly-His-Nal-Arg-Trp-Asp-Arg-Phe-Gly, Tyr-Val-Met-Gly-His-(D-Nal)-Arg-Trp-Asp-Arg-Phe-Gly, Tyr-Val-Met-Gly-His-Phe-Arg-Trp-Asp-Arg-(D-Phe)-Gly, Tyr-Val-Met-Gly-His-(D-Phe)-Arg-Trp-Asp-Arg-(D-Phe)-Gly, Tyr-Val-Met-Gly-His-Phe-(D-Arg)-Trp-Asp-Arg-(D-Phe)-Gly, Tyr-Val-Met-Gly-His-Phe-Arg-(D-Trp)-Asp-Arg-(D-Phe)-Gly, Tyr-Val-Met-Gly-His-(D-Phe)-Arg-(D-Trp)-Asp-Arg-(D-Phe)-Gly, Tyr-Val-Met-Gly-His-Nal-Arg-Trp-Asp-Arg-(D-Phe)-Gly, Tyr-Val-Met-Gly-His-(D-Nal)-Arg-Trp-Asp-Arg-(D-Phe)-Gly, Tyr-Val-Nle-Gly-His-Phe-Arg-Trp-Asp-Arg-Phe-Gly, Tyr-Val-Nle-Gly-His-(D-Phe)-Arg-Trp-Asp-Arg-Phe-Gly, Tyr-Val-Nle-Gly-His-Phe-(D-Arg)-Trp-Asp-Arg-Phe-Gly, Tyr-Val-Nle-Gly-His-Phe-Arg-(D-Trp)-Asp-Arg-Phe-Gly, Tyr-Val-Nle-Gly-His-(D-Phe)-Arg-(D-Trp)-Asp-Arg-Phe-Gly, Tyr-Val-Nle-Gly-His-Nal-Arg-Trp-Asp-Arg-Phe-Gly, Tyr-Val-Nle-Gly-His-(D-Nal)-Arg-Trp-Asp-Arg-Phe-Gly, Tyr-Val-Nle-Gly-His-Phe-Arg-Trp-Asp-Arg-(D-Phe)-Gly, Tyr-Val-Nle-Gly-His-(D-Phe)-Arg-Trp-Asp-Arg-(D-Phe)-Gly, Tyr-Val-Nle-Gly-His-Phe-(D-Arg)-Trp-Asp-Arg-(D-Phe)-Gly, Tyr-Val-Nle-Gly-His-Phe-Arg-(D-Trp)-Asp-Arg-(D-Phe)-Gly, Tyr-Val-Nle-Gly-His-(D-Phe)-Arg-(D-Trp)-Asp-Arg-(D-Phe)-Gly, Tyr-Val-Nle-Gly-His-Nal-Arg-Trp-Asp-Arg-(D-Phe)-Gly, e Tyr-Val-Nle-Gly-His-(D-Nal)-Arg-Trp-Asp-Arg-(D-Phe)-Gly, em que o mais terminal carboxi Gly é opcionalmente amida de glicina.

[0199] Numa modalidade o análogo de melanocortina da presente invenção compreende uma ou mais sondas de aminoácidos ramificados e um Y2-MSH peptídeo selecionado a partir do grupo que consiste em Tyr-Val-Met-Gly-His-Phe-Arg-Trp-Asp-Arg-Phe (SEQ ID NO:11), Tyr-Val-Met-Gly-His-(D-Phe)-Arg-Trp-Asp-Arg-Phe, Tyr-Val-Met-Gly-His-Phe-(D-Arg)-Trp-Asp-Arg-Phe, Tyr-Val-Met-Gly-His-Phe-Arg-(D-Trp)-Asp-Arg-Phe, Tyr-Val-Met-Gly-His-(D-Phe)-Arg-(D-Trp)-Asp-Arg-Phe, Tyr-Val-Met-Gly-His-Nal-Arg-Trp-Asp-Arg-Phe, Tyr-Val-Met-Gly-His-(D-Nal)-Arg-Trp-Asp-Arg-Phe, Tyr-Val-Met-Gly-His-Phe-Arg-Trp-Asp-Arg-(D-Phe), Tyr-Val-Met-Gly-His-(D-Phe)-Arg-Trp-Asp-Arg-(D-Phe), Tyr-Val-Met-Gly-His-Phe-(D-Arg)-Trp-Asp-Arg-(D-Phe), Tyr-Val-Met-Gly-His-Phe-Arg-(D-Trp)-Asp-Arg-(D-Phe), Tyr-Val-Met-Gly-His-(D-Phe)-Arg-(D-Trp)-Asp-Arg-(D-Phe), Tyr-Val-Met-Gly-His-Nal-Arg-Trp-Asp-Arg-(D-Phe), Tyr-Val-Met-Gly-His-(D-Nal)-Arg-Trp-Asp-Arg-(D-Phe), Tyr-Val-Nle-Gly-His-Phe-Arg-Trp-Asp-Arg-Phe (SEQ ID NO:13), Tyr-Val-Nle-Gly-His-(D-Phe)-Arg-Trp-Asp-Arg-Phe, Tyr-Val-Nle-Gly-His-Phe-(D-Arg)-Trp-Asp-Arg-Phe, Tyr-Val-Nle-Gly-His-Phe-Arg-(D-Trp)-Asp-Arg-Phe, Tyr-Val-Nle-Gly-His-(D-Phe)-Arg-(D-Trp)-Asp-Arg-Phe, Tyr-Val-Nle-Gly-His-Nal-Arg-Trp-Asp-Arg-Phe, Tyr-Val-Nle-Gly-His-(D-Nal)-Arg-Trp-Asp-Arg-Phe, Tyr-Val-Nle-Gly-His-Phe-Arg-Trp-Asp-Arg-(D-Phe), Tyr-Val-Nle-Gly-His-(D-Phe)-Arg-Trp-Asp-Arg-(D-Phe), Tyr-Val-Nle-Gly-His-Phe-(D-Arg)-Trp-Asp-Arg-(D-Phe), Tyr-Val-Nle-Gly-His-Phe-Arg-(D-Trp)-Asp-Arg-(D-Phe), Tyr-Val-Nle-Gly-His-(D-Phe)-Arg-(D-Trp)-Asp-Arg-(D-Phe), Tyr-Val-Nle-Gly-His-Nal-Arg-Trp-Asp-Arg-(D-Phe), e Tyr-Val-Nle-Gly-His-(D-Nal)-Arg-Trp-Asp-Arg-(D-Phe), em que o mais carboxi-terminal Phe ou (D-Phe) é opcionalmente uma amida Fenilalanina.

[0200] Numa modalidade o análogo de melanocortina da presente invenção compreende uma ou mais sondas de aminoácidos ramificados e um análogo lactama cíclico de a-MSH, em uma modalidade de uma cadeia lateral análoga de lactama cíclica de α-MSH.

[0201] Numa modalidade o análogo lactama cíclico de α-MSH é selecionado a partir do grupo constituído por Ac-Nle-ciclo[Asp-His-D-Phe- Arg-Trp-Lys] -NH2 (MT-II, Melanotan II); SHU9005, SHU9119, [DNAL (1')]- MTII, [Nal (2')]-MTII, um cíclico α-MSH(1-13) análogo lactama; uma -cadeia lateral análoga lactama cíclica de um fragmento de α-MSH; uma cíclico α- MSH (4-10) análogo lactama; MBX36; MBX37; Ac-Nle4-ciclo [Asp5, D-Phe7, Lys10] a-MSH- (4-10) -NH2; dissulfeto cíclica α-MSH (4-10) análogo; um α- MSH (4-11) análogo lactama cíclica; Ac- [Nle4, D-Orn5, Glu8]alfa-MSH4-11- NH; Ac- [Nle4, D-Orn5, D-Phe7, Glu8]alfa-MSH4-11-NH2; [N-Acetil-Cys4, D- Phe7, Cys10]-α-MSH (4-13), cíclico; ou variantes dos mesmos.

[0202] Numa modalidade o análogo de melanocortina da presente invenção compreende um ou mais sondas de aminoácidos ramificados e uma cicliza-de metal análogo de α-MSH; numa modalidade ácido 1,4,7,10- tetra-azaciclododecano-1,4,7,10-tetra-acético (DOTA) acoplado ReO- ciclizado [Cys3,4,10, -D-Phe7] -MSH3-13 (DOTA-ReCCMSH).

[0203] Numa modalidade o análogo de melanocortina da presente invenção compreende um ou mais sondas de aminoácidos ramificados e uma ponte de dissulfureto fornecendo um derivado ciclizado de α-MSH, tal como numa modalidade MBJ-06 (WO1998027113).

Aviso

[0204] Em uma modalidade particular, o análogo de peptídeo da presente invenção não compreende um α-MSH e Y-MSH como divulgado em PCT/EP2013/071935.

[0205] Numa modalidade, o presente peptídeo análogo não compreende um α-MSH e/ou um peptídeo Y-MSH, ou variantes dos mesmos.

[0206] Numa modalidade, o presente análogo de peptídeo compreende um peptídeo que não seja um α-MSH e/ou um peptídeo y-MSH, ou variantes dos mesmos.

[0207] Numa modalidade, o análogo do peptídeo não compreende um α-MSH e/ou peptídeo y-MSH com uma sonda de aminoácidos ramificados covalentemente ligado (ou ligados por uma ligação peptídica) ao aminoácido mais terminal N do referido peptídeo α-MSH e/ou y-MSH.

[0208] Numa modalidade, o análogo de peptídeo não compreende um α-MSH e/ou peptídeo y-MSH com uma sonda de aminoácidos ramificados, cujo ramificado compreende pelo menos um resíduo de lisina, em que a referida sonda de aminoácidos ramificados é ligada covalentemente ao aminoácido mais terminal N do referido α-MSH e/ou peptídeo y-MSH.

[0209] O aminocido mais terminal N de α-MSH é Ser (sublinhados: Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val.

[0210] O ácido mais amino terminal N de y-MSH é Tyr (sublinhado: Tyr-Val-Met-Gly-His-Phe-Arg-T rp-Asp-Arg-Phe (Gly)

[0211] Em uma modalidade em que o análogo de peptídeo da invenção compreende uma (1) sonda de aminoácidos ramificados, em que um ou mais (ou pelo menos um) dos resíduos de aminoácidos aminoalquil da sonda de aminoácidos ramificados é lisina, e em que o peptídeo é α-MSH e/ou y-MSH, ou variantes dos mesmos, a referida sonda de aminoácidos ramificados não está ligada ao terminal N do referido peptídeo.

[0212] Numa modalidade, o(s) primeiro(s) resíduo(s) de aminoácido de aminoalquil de uma ou mais sondas de aminoácidos ramificados não está(ão) covalentemente ligado(s) ao terminal N do referido peptídeo, desde que i) os referidos análogos de peptídeo compreendem uma (1) sonda de aminoácidos ramificados, ii) a referida sonda de aminoácidos ramificados compreende um ou mais resíduos de lisina, e/ou iii) os referidos análogos de peptídeo compreendem um peptídeo de melanocortina selecionado a partir do grupo que consiste em α-MSH e Y-MSH (compreendendo Y1-MSH e Y- MSH).

[0213] Numa modalidade, o análogo de peptídeo da presente invenção não compreende ou inclui:

[0214] Um peptídeo consistindo em 8 a 22 resíduos de aminoácidos compreendendo a sequência de aminoácidos: X - (aai)n - Y - (aa2)m - Z em que X compreende uma sonda de aminoácidos ramificados tendo um primeiro resíduo de lisina (Lys1) selecionado dentre Lys e D-Lys, o referido primeiro resíduo de lisina estando ligado por uma ligação de peptídeo a (aa1)n o referido primeiro resíduo de lisina sendo opcionalmente ligado por ligações de peptídeo para um segundo resíduo de lisina (Lys2), ou a um segundo e terceiro resíduo de lisina (Lys3), para formar uma cadeia linear de um total de 2 ou 3 resíduos de lisina selecionados a partir de Lys e de D-Lys, em que a(s) cadeia(s) lateral(is) de um ou mais de cada um dos referidos primeiro, segundo e/ou terceiros resíduos de lisina são modificadas pela ligação ao grupo ε-amino do referido um ou mais de cada um dos referidos resíduos de lisina de uma molécula independentemente selecionada do grupo consistindo em Lysq-Lys; (aa3)p-Lysq; Lysq-(aa3)p;[(aa3)- Lys]p e [Lys-(aa3)]p, em que q é um número selecionado dentre 0, 1, 2 e 3; p é um número selecionado dentre 1, 2 e 3, e (aa3) é um resíduo de aminoácido independentemente selecionado dentre Arg, His, Gly e Ala, com a ressalva de que X consiste em 2 a 9 resíduos de aminoácidos, em que Y compreende uma sequência de aminoácidos consistindo em 4 resíduos de aminoácidos contíguos selecionados a partir do grupo constituído por His-Phe-Arg-Trp (SEQ ID NO:16); His-(D-Phe)-Arg-Trp; His- Phe-(D-Arg)-Trp; His-Phe-Arg-(D-Trp); His-(D-Phe)-Arg-(D-Trp); His-Nal- Arg-Trp e His-(D-Nal)-Arg-Trp; e em que Z compreende uma sequência de aminoácidos consistindo em 2 ou 3 resíduos de aminoácidos contíguos selecionados a partir do grupo constituído por Lys-Pro-Val; Lys-Pro-(D-Val); Arg-Phe-Gly; Arg-(D-Phe)-Gly; Arg-Phe e Arg-(D-Phe); e em que n é um número selecionado a partir de 0, 1, 2, 3, 4 e 5, e (aa1) de forma independente pode ser qualquer resíduo natural ou não natural de aminoácido, e em que m é 0 ou 1, e (aa2) pode ser qualquer resíduo de aminoácido natural ou não natural.

[0215] Numa modalidade, o análogo de peptídeo da presente invenção não compreende ou inclui:

[0216] Um peptídeo consistindo em 8 a 22 resíduos de aminoácidos compreendendo a sequência de aminoácidos: X - (aai)n - Y - (aa2)m - Z em que X compreende uma sonda de aminoácidos ramificados tendo um primeiro resíduo de lisina (Lys1) selecionado dentre Lys e D-Lys, o referido primeiro resíduo de lisina estando ligado por uma ligação de peptídeo a (aa1)n o referido primeiro resíduo de lisina sendo opcionalmente ligado por ligações de peptídeo para um segundo resíduo de lisina (Lys2), ou a um segundo e terceiro resíduo de lisina (Lys3), para formar uma cadeia linear de um total de 2 ou 3 resíduos de lisina selecionados a partir de Lys e de D-Lys, em que a(s) cadeia(s) lateral(is) de um ou mais de cada um dos referidos primeiro, segundo e/ou terceiros resíduos de lisina são modificadas pela ligação ao grupo ε-amino do referido um ou mais de cada um dos referidos resíduos de lisina de uma molécula independentemente selecionada do grupo consistindo em Lysq-Lys; (aa3)p-Lysq; Lysq-(aa3)p;[(aa3)- Lys]p e [Lys-(aa3)]p, em que q é um número selecionado dentre 0, 1, 2 e 3; p é um número selecionado dentre 1, 2 e 3, e (aa3) é um resíduo de aminoácido independentemente selecionado dentre Arg, His, Gly e Ala, com a ressalva de que X consiste em 2 a 9 resíduos de aminoácidos, em que Y compreende uma sequência de aminoácidos consistindo em 4 resíduos de aminoácidos contíguos selecionados a partir do grupo constituído por His-Phe-Arg-Trp (SEQ ID NO:16); His-(D-Phe)-Arg-Trp; His- Phe-(D-Arg)-Trp; His-Phe-Arg-(D-Trp); His-(D-Phe)-Arg-(D-Trp); His-Nal- Arg-Trp e His-(D-Nal)-Arg-Trp; e em que Z compreende uma sequência de aminoácidos consistindo em 2 ou 3 resíduos de aminoácidos contíguos selecionados a partir do grupo constituído por Lys-Pro-Val; Lys-Pro-(D-Val); Arg-Phe-Gly; Arg-(D-Phe)-Gly; Arg-Phe e Arg-(D-Phe); e em que (aa1)n é selecionado a partir do grupo constituído por Ser-Tyr- Ser-Met-Glu, Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu, Ser-Ser-Ile-Ile-Ser, Tyr-Val-Met-Gly e Tyr- Val-Nle-Gly; e em que (aa2)m é selecionado a partir do grupo que consiste em Gly e Asp.

Métodos de Preparação

[0217] Os análogos de peptídeo de acordo com a presente invenção podem ser preparados por quaisquer métodos apropriados conhecidos na técnica. Assim, em algumas modalidades, o peptídeo e a sonda de aminoácidos ramificados são, cada um, preparados por técnicas de preparação de peptídeo-padrão, tais como síntese em solução ou síntese de peptídeo em fase sólida (SPPS), tais como síntese em fase sólida do tipo Merrifield.

[0218] Os análogos de peptídeo da invenção são preparadas numa modalidade por síntese em fase sólida construindo em primeiro lugar a sequência de peptídeo farmacologicamente ativa, utilizando proteção padrão bem conhecida, procedimentos de acoplamento e desproteção, depois acoplar sequencialmente sonda de aminoácidos ramificados para o peptídeo ativo de um modo semelhante ao da construção do peptídeo ativo, e finalmente clivagem de todo o análogo de peptídeo a partir do carreador. Esta estratégia origina um peptídeo, em que a sonda de aminoácidos ramificados é ligada covalentemente ao peptídeo farmacologicamente ativo no átomo de nitrogênio terminal N do peptídeo.

[0219] Numa modalidade, o nitrogênio alfa do aminoácido final da sequência de aminoácidos ramificados é revestido com acetil, utilizando técnicas padrão de acilação, antes ou depois do acoplamento da sequência de aminoácidos ramificados no peptídeo ativo.

[0220] Porções reativas no N- e terminais C, o que facilita o acoplamento do aminoácido durante a síntese, bem como os grupos funcionais reativos da cadeia lateral, pode interagir com outros grupos terminais da cadeia lateral livre ou durante a síntese e alongamento de peptídeo e influenciar negativamente o rendimento e a pureza. Grupos químicos são assim desenvolvidos que se ligam aos grupos funcionais de aminoácidos específicos e bloqueiam ou protegem o grupo funcional a partir de reações inespecíficas. Aminoácidos individuais purificados são feitos reagir com estes grupos protetores antes da síntese e, em seguida seletivamente removidos durante as etapas de síntese de peptídeos específicos. Exemplos de grupos protetores do terminal N são t-Boc e Fmoc, comumente utilizado na síntese de peptídeo em fase sólida. Os grupos protetores do terminal C são mais utilizados na síntese em fase líquida. Uma vez que a desproteção do terminal N ocorre continuamente durante a síntese de peptídeos, os regimes protetores foram estabelecidos em que os diferentes tipos de cadeia lateral de grupos protetores (benzil; Bzl ou terc- butil; tBu) são comparados com Boc ou Fmoc, respectivamente, para a desproteção otimizada.

[0221] Numa modalidade particular da invenção, quando da preparação da sonda de aminoácidos ramificados, exemplificado pelo Ac(Ac- Lys-Lys)Lys-, o grupo de proteção para Lys é Mtt, cujo aminoácido protegido é comercialmente disponível (Fmoc-Lys (Mtt)-OH; N - α - Fmoc - N - ε - 4 - metiltritil - L - lisina, CAS# 167393-62-6). Lys (Mtt) permite o revestimento Lys com acetil, uma vez que não é clivado sob as condições que clivam o Fmoc, e podem ser removido sem corte de outros grupos de proteção da cadeia lateral.

[0222] O método de preparação é, em algumas modalidades, otimizado através de métodos de rotina na técnica que podem aumentar o rendimento e/ou qualidade do peptídeo sintético assim preparado. Por exemplo, a utilização de pseudoprolina (oxazolidina) dipeptídeos no Fmoc SPPS de serina e treonina contendo peptídeos pode levar a melhorias na qualidade e produtividade de produtos brutos e pode ajudar a evitar a síntese de repetição desnecessária de sequências falhas. Estes dipeptídeos são fáceis de utilizar: simplesmente substituem um resíduo de serina ou treonina, juntamente com o resíduo de aminoácido precedente na sequência do peptídeo com o dipeptídeo pseudoprolina apropriado. A sequência nativa é regenerada na clivagem e desproteção.

[0223] Numa modalidade a sequência do peptídeo farmacologicamente ativo e a sonda de aminoácidos ramificados (ou partes da mesma) são, cada um deles, preparados separadamente, por exemplo, para a solução de síntese, síntese em fase sólida, técnicas recombinantes, ou síntese enzimática, seguido de acoplamento das (pelo menos) duas sequências através de procedimentos de condensação de segmentos bem conhecidos, quer em solução quer utilizando técnicas de fase sólida, ou uma combinação dos mesmos.

[0224] Numa modalidade, os peptídeos são preparados por métodos de DNA recombinante e a sonda de aminoácidos ramificados é preparada por síntese em fase sólida ou de solução. A conjugação do peptídeo e da sonda de aminoácidos ramificados é, em uma modalidade, levada a cabo utilizando ligação química. Esta técnica permite a montagem de segmentos de peptídeo totalmente desprotegidos de uma maneira altamente específica. Numa outra modalidade, a conjugação é realizada por formação de ligação de peptídeo, catalisada por protease, que oferece uma técnica altamente específica para combinar segmentos de peptídeo totalmente desprotegidos por meio de uma ligação de peptídeo.

[0225] Numa modalidade, o aminoácido terminal C da sonda de aminoácidos ramificados ou o aminoácido terminal C do peptídeo está ligado ao material de suporte sólido por meio de um ligante comum como o 2,4- dimetoxi-4' hidroxi-benzofenona, ácido 4-(4-hidroxi-metil-3-metoxifenoxi)- butírico, ácido 4-hidroxi-metilbenzoico, ácido 4-hidroximetil-fenoxiacético, ácido 3-(4-hidroximetilfenoxi) propiônico, ou ácido p-{(R,S)-α-[1-(9H-Fluoren- 9-il)-metoxiformamido]-2,4-dimetoxibenzil}-fenoxiacético (Ligante amida Rink).

[0226] Exemplos de materiais de suporte sólido adequados (SSM) são, por exemplo, resinas funcionalizadas, tais como poliestireno, poliacrilamida, polidimetilacrilamida, polietilenoglicol, celulose, polietileno, polietilenoglicol enxertado em poliestireno, látex, dynabeads, etc.

[0227] Os análogos de peptídeos produzidos da invenção são, em algumas modalidades, clivados a partir do material de suporte sólido por meio de um ácido tal como ácido trifluoroacético, ácido trifluorometanossulfônico, brometo de hidrogênio, cloreto de hidrogênio, fluoreto de hidrogênio, etc., opcionalmente, em combinação com um fenol, tioanisol, etc, ou o conjugado de peptídeo da invenção são, em outras modalidades, clivados do suporte sólido por meio de uma base, tal como amônia, hidrazina, um alcóxido, tal como etóxido de sódio, um hidróxido, tal como hidróxido de sódio, etc.

[0228] Em outras modalidades, os análogos de peptídeos da invenção podem ser preparados ou produzidos por técnicas recombinantes. Assim, num aspecto da presente invenção, o peptídeo é produzido pelas células hospedeiras que compreendem uma primeira sequência de ácido nucleico que codifica o análogo de peptídeo ou peptídeo associado operativamente com um segundo ácido nucleico capaz de dirigir a expressão nas referidas células hospedeiras. Em algumas modalidades a segunda sequência de ácido nucleico compreende ou consiste mesmo de um promotor que dirigirá a expressão da proteína de interesse nas referidas células. Um versado será prontamente capaz de identificar segundas sequências de ácidos nucleicos úteis (por exemplo, vetores e plasmídeos) para utilização numa dada célula hospedeira.

[0229] O processo de produção de um peptídeo recombinante em geral compreende as etapas de: fornecer uma célula hospedeira, a preparação de um construto de expressão gênica compreendendo um primeiro ácido nucleico que codifica o peptídeo ligado operativamente a um segundo ácido nucleico capaz de dirigir a expressão da referida proteína de interesse na célula hospedeira, transformando a célula hospedeira, com o construto e cultivando a célula hospedeira, assim, obtendo a expressão do peptídeo. Em uma modalidade da invenção, o peptídeo produzido por via recombinante é excretado pelas células hospedeiras. A célula hospedeira inclui qualquer célula hospedeira adequada conhecida na técnica, incluindo células procarióticas, células de leveduras, células de insetos e células de mamíferos.

[0230] Numa modalidade, o peptídeo recombinante assim produzido é isolado por qualquer método convencional e pode ser ligado através de ligação de peptídeo convencional formando química para qualquer porção de peptídeo amino ramificado adequadamente protegido. O versado será capaz de identificar as etapas de isolamento de proteínas adequadas para a purificação do peptídeo.

Métodos de Tratamento

[0231] É um aspecto fornecer análogos de peptídeos, tal como definido de acordo com a presente invenção para utilização como um medicamento.

[0232] Num outro aspecto, a presente invenção fornece métodos para tratamento, prevenção ou alívio de uma condição médica. Tais métodos de acordo com a presente invenção numa modalidade compreendem um ou mais etapas de administração ou liberação de uma quantidade eficaz de um análogo de peptídeo de acordo com a presente invenção, ou uma composição farmacêutica compreendendo um ou mais desses peptídeos, a um indivíduo em necessidade do mesmo. Numa modalidade, tais etapas de administração ou liberação de acordo com a presente invenção são simultâneas, sequenciais ou separadas.

[0233] Um indivíduo em necessidade, tal como referido aqui, está em uma modalidade individual que se beneficia da administração de um peptídeo ou composição farmacêutica de acordo com a presente invenção. Tal indivíduo em uma modalidade sofre de uma doença ou condição ou está em risco de sofrer do mesmo. O indivíduo na modalidade é qualquer ser humano, homem ou mulher, criança, de meia-idade ou velho. O distúrbio a ser tratado ou prevenido no indivíduo em uma modalidade relaciona-se à idade do indivíduo, a saúde geral do indivíduo, os medicamentos utilizados para o tratamento do indivíduo e se o indivíduo tem ou não um histórico anterior de sofrer das doenças ou distúrbios que podem ter ou ter induzido a condição no indivíduo.

[0234] Os termos "tratamento" e "tratando" conforme utilizados aqui se referem ao gerenciamento e cuidado de um paciente para o propósito de combater um estado, doença ou distúrbio. O termo pretende incluir o espectro total dos tratamentos para uma determinada condição da qual o paciente está sofrendo, tal como a administração do análogo de peptídeo com a finalidade de: reduzir ou aliviar os sintomas ou complicações; atrasar a progressão da condição, cessar parcialmente as manifestações clínica, doença ou distúrbio; curar ou eliminar o estado, doença ou distúrbio; e/ou prevenir ou reduzir o risco de contrair condição, doença ou distúrbio, em que "prevenir" ou "prevenção" é para ser entendido como se referindo ao gerenciamento e cuidado de um paciente com a finalidade de impedir o desenvolvimento de condição, doença ou distúrbio, e inclui a administração dos compostos ativos para evitar ou reduzir o risco do aparecimento dos sintomas ou complicações. O paciente a ser tratado é, preferencialmente, um mamífero, em particular, um ser humano. O tratamento de animais, tais como camundongos, ratos, cães, gatos, vacas, cavalos, ovelhas e porcos, está, no entanto, também dentro do escopo da presente invenção. Os pacientes a serem tratados de acordo com a presente invenção podem ser de várias idades, por exemplo, adultos, crianças, menores de 16 anos, crianças de idade de 6-16, crianças de idade de 2-16, crianças de idade de 2 meses a 6 anos ou menores de 2 anos meses a 5 anos.

[0235] A invenção está em uma modalidade direcionada a um análogo de peptídeo de acordo com a presente invenção para a utilização no tratamento de um estado isquêmico, uma condição inflamatória e/ou uma condição metabólica.

[0236] A invenção está em uma modalidade direcionada a um método para o tratamento de um estado isquêmico, uma condição inflamatória e/ou uma condição metabólica, o referido método compreendendo a administração de uma quantidade eficaz de um análogo de peptídeo de acordo com a presente invenção a um indivíduo em necessidade do mesmo.

Outros ingredientes ativos

[0237] Em algumas modalidades, os análogos de peptídeos da presente invenção são combinados com ou compreendem um ou mais ingredientes ativos adicionais que são entendidos como outros compostos terapêuticos ou seus derivados farmaceuticamente aceitáveis.

[0238] Os métodos para o tratamento de acordo com a presente invenção em uma modalidade, portanto, compreendem ainda uma ou mais etapas de administração de um ou mais ingredientes ativos adicionais, ou concomitantemente ou em sequência, e em quaisquer proporções adequadas.

[0239] Os métodos de tratamento de acordo com a presente invenção em uma modalidade incluem uma etapa em que a composição farmacêutica ou análogo de peptídeo, tal como definido aqui, é administrado simultaneamente, sequencialmente ou separadamente, em combinação com um ou mais ingredientes ativos adicionais.

Administração e dosagem

[0240] De acordo com a presente invenção, uma composição compreendendo um análogo de peptídeo, tal como aqui definido é uma modalidade administrada a indivíduos em necessidade do mesmo em doses farmaceuticamente eficazes ou uma quantidade terapeuticamente eficaz.

[0241] Uma quantidade terapeuticamente eficaz de um peptídeo de acordo com a presente invenção é uma modalidade em uma quantidade suficiente para curar, prevenir, reduzir o risco de, aliviar ou cessar parcialmente as manifestações clínicas de uma dada doença ou distúrbio e suas complicações. A quantidade que é eficaz para um efeito terapêutico particular dependerá da gravidade e tipo da doença, assim como peso e estado geral do sujeito. Uma quantidade adequada para realizar isto é definida como "dose terapeuticamente eficaz".

[0242] Em uma modalidade da presente invenção, a composição é administrada em doses de 1 μg/dia a 100 mg/dia; tal como de 1 μg/dia a 10 μg/dia, tal como 10 μg/dia a 100 μg/dia, tal como 100 μg/dia a 250 μg/dia, tal como 250 μg/dia a 500 μg/dia, tal como 500 μg/dia a 750 μg/dia, tal como 750 μg/dia a 1 mg/dia, tal como 1 mg/dia a 2 mg/dia, tal como 2 mg/dia a 5 mg/dia, ou tal como 5 mg/dia a 10 mg/dia, tal como 10 mg/dia a 20 mg/dia, tal como 20 mg/dia a 30 mg/dia, tal como 30 mg/dia a 40 mg/dia, tal como 40 mg/dia a 50 mg/dia, tal como 50 mg/dia a 75 mg/dia, ou tal como 75 mg/dia a 100 mg/dia.

[0243] Em uma modalidade da presente invenção, uma única dose da composição é administrada e pode compreender de 1 μg/kg de peso corporal a 100 mg/kg de peso corporal; tal como de 1 a 10 μg/kg de peso corporal, tal como 10 a 100 μg/dia, tal como 100 a 250 μg/kg de peso corporal, tal como 250 a 500 μg/kg de peso corporal, tal como 500 a 750 μg/kg de peso corporal, tal como 750 μg/kg de peso corporal a 1 mg/kg de peso corporal, tal como 1 mg/kg de peso corporal a 2 mg/kg de peso corporal, tal como 2 a 5 mg/kg de peso corporal, tal como 5 a 10 mg/kg de peso corporal, tal como 10 a 20 mg/kg de peso corporal, tal como 20 a 30 mg/kg de peso corporal, tal como 30 a 40 mg/kg de peso corporal, tal como 40 a 50 mg/kg de peso corporal, tal como 50 a 75 mg/kg de peso corporal, ou tal como 75 a 100 mg/kg de peso corporal.

[0244] Em uma modalidade, uma dose de acordo com a presente invenção é administrada uma ou várias vezes por dia, tal como de 1 a 6 vezes por dia, tal como de 1 a 5 vezes por dia, tal como de 1 a 4 vezes por dia, tal como de 1 a 3 vezes por dia, tal como de 1 a 2 vezes por dia, tal como de 2 a 4 vezes por dia, tal como de 2 a 3 vezes por dia.

Vias de administração

[0245] Será observado que a via preferida de administração dependerá do estado geral e da idade do sujeito a ser tratado, a natureza da condição a ser tratada, a localização do tecido a ser tratado no corpo e o ingrediente ativo escolhido.

Tratamento sistêmico

[0246] Em uma modalidade, a via de administração permite introduzir o análogo de peptídeo na corrente sanguínea para, finalmente, atingir os locais de ação desejados.

[0247] Em uma modalidade, as vias de administração são quaisquer vias adequadas, tais como uma via entérica (incluindo administração retal, nasal, pulmonar, bucal, sublingual, transdérmica, oral, intracisternal e intraperitoneal) e/ou uma via parentérica (incluindo subcutânea, intramuscular, intratecal, intravenosa e intradérmica).

[0248] As formas de dosagem adequadas para tal administração podem ser preparadas por técnicas convencionais.

Administração parenteral

[0249] A administração parentérica é qualquer via de administração não sendo a via oral/entérica em que o medicamento evita a degradação da primeira passagem no fígado. Por conseguinte, a administração parenteral inclui quaisquer injeções e infusões, como por exemplo, injeção de bolus ou infusão contínua, tais como administração intravenosa, administração intramuscular ou subcutânea. Além disso, a administração parenteral inclui a administração tópica e inalações.

[0250] Por conseguinte, o análogo de peptídeo ou composição está em uma modalidade administrada topicamente para atravessar qualquer membrana mucosa de um animal ao qual a substância ou o peptídeo deve ser dado, por exemplo, nariz, vagina, olho, boca, trato genital, pulmões, trato gastrintestinal, ou reto, por exemplo, mucosa do nariz ou boca e, por conseguinte, a administração parentérica também pode incluir administração bucal, sublingual, nasal, retal, vaginal e intraperitoneal, assim como administração pulmonal e brônquica por inalação ou instalação. Em algumas modalidades, o análogo de peptídeo é administrado topicamente através da pele.

[0251] Em uma modalidade, são empregadas as formas de intravenosa, subcutânea e intramuscular de administração parentérica.

Tratamento local

[0252] Em uma modalidade, o análogo de peptídeo ou composição de acordo com a invenção é utilizado como um tratamento local, isto é, é introduzido diretamente no(s) local(ais) de ação. Assim, o peptídeo pode ser aplicado na pele ou mucosa diretamente ou o peptídeo pode ser injetado no local de ação, por exemplo, no tecido doente ou para uma artéria extremidade dianteira diretamente para o tecido doente.

Formulações farmacêuticas

[0253] Em uma modalidade, os análogos de peptídeos ou seus derivados farmaceuticamente aceitáveis são administrados isoladamente ou em combinação com veículos ou excipientes farmaceuticamente aceitáveis, ou em doses únicas ou múltiplas. As composições farmacêuticas ou compostos de acordo com a invenção podem ser formulados com veículos farmaceuticamente aceitáveis ou diluentes, assim como quaisquer outros adjuvantes e excipientes conhecidos, de acordo com técnicas convencionais, tais como os descritos em Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20a Edição, Gennaro, Ed., Mack Publishing Co., Easton, PA, 2000.

[0254] O termo "derivado farmaceuticamente aceitável" no contexto presente inclui sais farmaceuticamente aceitáveis, que indicam um sal que não é prejudicial ao paciente. Tais sais incluem sais farmaceuticamente aceitáveis de adição de base ou ácido, assim como sais metálicos farmaceuticamente aceitáveis, sais de amônio e sais de amônio alquilados. Um derivado farmaceuticamente aceitável inclui, ainda, ésteres farmaceuticamente aceitáveis, pró-drogas ou outros precursores de um composto que pode ser biologicamente metabolizados no composto ativo, ou de outras formas cristalinas de um composto.

[0255] A composição farmacêutica ou a composição farmaceuticamente aceitável pode ser especificamente formulada para administração por qualquer via adequada, tal como uma via entérica, oral, retal, nasal, pulmonar, bucal, sublingual, transdérmica, intracisternal, intraperitoneal e parentérica (incluindo subcutânea, intramuscular, intratecal, intravenosa e intradérmica).

[0256] Em uma modalidade da presente invenção, as composições farmacêuticas ou os peptídeos da presente invenção são formulados para atravessar a barreira sangue-cérebro.

[0257] As composições farmacêuticas para administração oral incluem formas de dosagem sólidas tais como cápsulas duras ou moles, comprimidos, trociscos, drageias, comprimidos, pastilhas, pós e grânulos. Quando apropriado, podem ser preparadas com revestimentos tais como revestimentos entéricos ou podem ser formulados de modo a fornecer a liberação controlada do ingrediente ativo, tal como liberação sustentada ou prolongada, de acordo com métodos conhecidos na técnica. Na mesma forma de dosagem sólida dois ingredientes ativos podem ser combinados de modo a fornecer a liberação controlada de um ingrediente ativo e liberação imediata de um outro ingrediente ativo.

[0258] As formas de dosagem líquidas para administração oral incluem soluções, emulsões, suspensões aquosas ou oleosas, xaropes e elixires.

[0259] As composições farmacêuticas para administração parentérica incluem soluções estéreis aquosas e não aquosas injetáveis, dispersões, suspensões ou emulsões, assim como pós-estéreis a serem reconstituídos em soluções ou dispersões injetáveis antes da utilização estéreis. As formulações injetáveis de depósito também são consideradas como estando dentro do âmbito da presente invenção.

[0260] Outras formas de administração adequadas incluem supositórios, sprays, pomadas, cremes/loções, gels, inalantes, emplastros dérmicos, implantes, etc.

[0261] Em uma modalidade, um composto ou peptídeo para utilização de acordo com a presente invenção é geralmente utilizado como a substância livre ou como um seu derivado farmaceuticamente, tais como um éster farmaceuticamente aceitável ou como um sal deste. Exemplos desse último são: um sal de adição de ácido de um composto tendo uma funcionalidade de base livre e um sal de adição de base deste de um composto tendo uma funcionalidade de ácido livre. O termo "sal farmaceuticamente aceitável" refere-se a um sal não tóxico de um composto para utilização de acordo com a presente invenção, cujos sais são geralmente preparados fazendo reagir uma base livre com um ácido orgânico ou inorgânico adequado, ou mediante reação de um ácido com uma base orgânica ou inorgânica adequada. Quando um composto para utilização de acordo com a presente invenção contiver uma funcionalidade de base livre, tais sais serão preparados de uma maneira convencional pelo tratamento de uma solução ou suspensão do composto com um equivalente químico de um ácido farmaceuticamente aceitável. Quando um composto para utilização de acordo com a presente invenção contiver uma funcionalidade de ácido livre, tais sais serão preparados de uma maneira convencional pelo tratamento de uma solução ou suspensão do composto com um equivalente químico de uma base farmaceuticamente aceitável. Os sais fisiologicamente aceitáveis de um composto com um grupo hidroxi incluem a forma aniônica do composto em combinação com um cátion adequado, tal como sódio ou íon amônio. Outros sais que não são farmaceuticamente aceitáveis podem ser úteis na preparação dos compostos da invenção e esses formam um aspecto adicional da invenção. Os sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitáveis incluem, mas não estão limitados a sais de cloridrato, bromidrato, iodidrato, nitrato, sulfato, bissulfato, fosfato, fosfato ácido, isonicotinato, acetato, trifluoroacetate, tricloroacetato, lactato, salicilato, citrato, tartarato, pantotenato, bitartarato, ascorbato, succinato, maleato, gentisinato, fumarato, gluconato, glucaronato, sacarato, formato, benzoato, glutamato, metanossulfonato, etanossulfonato, benzenossulfonato, p-toluenossulfonato e pamoato (isto é, 1,1'-metileno-bis-(2-hidroxi-3-naftoato)).

[0262] Em uma modalidade da presente invenção, os peptídeos da presente invenção estão em formas cristalinas, por exemplo, as formas de hidratos ou formas cristalinas co-cristalizadas.

[0263] O termo "pró-droga" refere-se a peptídeos que são rapidamente transformados in vivo para render o composto progenitor das fórmulas anteriores, por exemplo, mediante hidrólise no sangue ou metabolismo nas células, tais como, por exemplo, as células dos gânglios basais. Uma discussão detalhada é fornecida em T. Higuchi e V. Stella, "Pro-drugs as Novel Delivery Systems", Vol. 14 de A.C.S. Symposium Series, e em Bioreversible Carriers in Drug Design, ed. Edward B. Roche, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987, ambos os quais são incorporados neste documento por referência. Exemplos de pró-drogas incluem ésteres não tóxicos farmaceuticamente aceitáveis dos compostos da presente invenção. Os ésteres dos compostos da presente invenção podem ser preparados de acordo com métodos convencionais de "Advanced Organic Chemistry de March, 5a Edição". M. B. Smith & J. March, John Wiley & Sons, 2001.

[0264] Em uma modalidade, para administração parentérica, soluções de peptídeos de acordo com a presente invenção em solução aquosa estéril, em propilenoglicol aquoso ou em óleo de sésamo ou de amendoim são empregados. As soluções aquosas devem ser adequadamente tamponadas se necessário e o diluente líquido tornado isotônico com, por exemplo, solução salina ou glucose suficiente. As soluções aquosas são particularmente adequadas para administração por via intravenosa, intramuscular, subcutânea e intraperitoneal. Os meios aquosos estéreis para ser empregados são todos prontamente disponíveis através das técnicas padrão conhecidas aos versados na técnica.

[0265] Os transportadores farmacêuticos adequados incluem diluentes ou enchimentos sólidos inertes, soluções aquosas estéreis e vários solventes orgânicos. Exemplos de transportadores sólidos são lactose, terra alba, sacarose, ciclodextrina, talco, gelatina, ágar, pectina, acácia, estearato de magnésio, ácido esteárico e éteres de alquil inferior de celulose. Exemplos de transportadores líquidos são xarope, óleo de amendoim, óleo de oliva, fosfolípidos, ácidos gordurosos, aminas de ácido gorduroso, polioxietileno e água. Além disso, o transportador ou diluente pode incluir qualquer material de liberação sustentado conhecido na técnica, tal como monoestearato de glicerill ou diestearato de glicerill, sozinho ou misturado com uma cera. As composições farmacêuticas formadas por combinação dos compostos de acordo com a presente invenção e dos transportadores farmaceuticamente aceitáveis são então prontamente administradas numa variedade de formas de dosagem adequadas para as vias de administração descritas. As formulações podem convenientemente ser apresentadas sob a forma de dosagem unitária através de métodos conhecidos na técnica farmacêutica.

[0266] As formulações da presente invenção adequadas para administração oral podem ser apresentadas como unidades discretas, tais como cápsulas ou comprimidos, que contêm cada uma, uma quantidade predeterminada do ingrediente ativo, e que podem incluir um excipiente adequado.

[0267] Além disso, as formulações oralmente disponíveis podem estar na forma de um pó ou grânulos, uma solução ou suspensão num líquido aquoso ou não aquoso, ou uma água de óleo-em-água ou emulsão líquida de água-em-óleo.

[0268] As composições destinadas para utilização oral podem ser preparadas de acordo com qualquer método conhecido, e tais composições podem conter um ou mais agentes selecionados a partir do grupo que consiste em agentes adoçantes, agentes aromatizantes, agentes corantes e agentes conservantes a fim de proporcionar preparações farmaceuticamente elegantes e saborosos. Comprimidos podem contêm os ingredientes ativos em mistura com excipientes não tóxicos farmaceuticamente aceitáveis, os quais são apropriados para a manufatura de comprimidos. Esses excipientes podem ser, por exemplo: diluentes inertes, tais como o carbonato de cálcio, carbonato de sódio, lactose, fosfato de cálcio ou fosfato de sódio; agentes de granulação e desintegração, por exemplo, amido de milho ou ácido algínico; agentes de ligação, por exemplo, amido, gelatina ou acácia, e agentes lubrificantes, por exemplo, estearato de magnésio, ácido esteárico ou talco. Os comprimidos podem ser não revestidos ou podem ser revestidos por técnicas conhecidas para retardar a desintegração e absorção no trato gastrointestinal e, desse modo, proporcionar uma ação sustentada durante um período mais longo. Por exemplo, um material de retardamento, tal como monoestearato de gliceril ou diestearato de gliceril pode ser empregado. Os mesmos também podem ser revestidos pelas técnicas descritas nas Patentes n°s US 4.356.108; 4.166.452; e 4.265.874, os conteúdos dos quais são aqui incorporados por referência, para formar comprimidos terapêuticos osmóticos para liberação controlada.

[0269] As formulações para uso oral também podem ser apresentadas como cápsulas de gelatina dura em que o ingrediente ativo é misturado com um diluente sólido inerte, por exemplo, carbonato de cálcio, fosfato de cálcio ou caulim, ou cápsulas de gelatina mole, em que o ingrediente ativo é misturado com transportador solúvel em água como polietilenoglicol ou um meio de óleo, por exemplo, óleo de amendoim, parafina líquida ou óleo de oliva.

[0270] As suspensões aquosas podem conter o composto para utilização de acordo com a presente invenção em mistura com excipientes adequados para a fabricação de suspensões aquosas. Tais excipientes são agentes de suspensão, por exemplo, carboximetilcelulose sódica, metilcelulose, hidroxipropilmetil-celulose, alginato de sódio, polivinil- pirrolidona, goma tragacana e goma de acácia; agentes de dispersão ou umectantes podem ser um fosfatídeo de ocorrência natural, tal como, lecitina, ou produtos de condensação de um óxido de alquileno com ácidos graxos, por exemplo, estearato de polioxietileno ou produtos de condensação de óxido de etileno com álcoois alifáticos de cadeia longa, por exemplo, heptadecaetileno-oxicetanol, ou produtos de condensação de óxido de etileno com ésteres parciais derivados de ácidos graxos e um hexitol tal como monoleato de polioxietileno sorbitol, ou produtos de condensação de óxido de etileno com ésteres parciais derivados de ácidos graxos e anidridos de hexitol, por exemplo, monoleato de polietileno sorbitano. As suspensões aquosas também podem conter um ou mais agentes corantes, um ou mais agentes aromatizantes e um ou mais agentes adoçantes, tais como sacarose ou sacarina.

[0271] As suspensões oleosas podem ser formuladas mediante suspensão do(s) ingrediente(s) ativo(s) em um óleo vegetal, por exemplo, óleo de arachis, óleo de oliva, óleo de gergelim ou óleo de coco, ou em óleo mineral tal como a parafina líquida. As suspensões oleosas podem conter um agente espessante, por exemplo, cera de abelha, parafina dura ou álcool cetílico. Agentes edulcorantes tais como aqueles acima definidos e agentes flavorizantes podem ser adicionados para fornecer uma preparação oral palatável. Essas composições podem ser preservadas pela adição de um antioxidante como ácido ascórbico.

[0272] Pós e grânulos dispersíveis apropriados para a preparação de uma suspensão aquosa pela adição de água fornecem o composto ativo na mistura com um agente de dispersão ou umectante, agente de suspensão e um ou mais conservantes. Os dispersantes adequados ou agentes umectantes e agentes de suspensão são exemplificados por aqueles já citados acima. Excipientes adicionais, por exemplo, edulcorantes, flavorizantes e agentes de coloração, também podem estar presentes.

[0273] As composições farmacêuticas compreendendo os peptídeos para utilização de acordo com a presente invenção também podem estar na forma de emulsões de óleo-em-água. A fase oleosa pode ser um óleo vegetal, por exemplo, óleo de oliva ou óleo de arachis ou um óleo mineral, por exemplo, parafina líquida ou misturas destes. Os agentes emulsionantes adequados podem ser gomas de ocorrência natural, por exemplo, goma de acácia ou goma de tragacanto, fosfatidos de ocorrência natural, por exemplo, soja, lecitina e ésteres ou ésteres parciais derivados de ácidos graxos e anidridos de hexitol, por exemplo, monoleato sorbitano e produtos de condensação dos referidos ésteres parciais com óxido de etileno, por exemplo, monoleato de polioxietileno sorbitano. As emulsões também podem conter agentes edulcorantes e agentes aromatizantes.

[0274] Os xaropes e elixires podem ser formulados com agentes edulcorantes, por exemplo, glicerol, propilenoglicol, sorbitol ou sacarose. Tais formulações também podem conter um demulcente, um conservante e aromatizante e corante. As composições farmacêuticas podem estar sob a forma de uma suspensão aquosa ou oleaginosa injetável estéril. Essa suspensão pode ser formulada de acordo com os métodos conhecidos usando dispersantes adequados ou agentes umectantes e agentes de suspensão descritos acima. A preparação injetável estéril também pode ser uma solução ou suspensão injetável estéril em um diluente ou solvente não tóxico aceitável por via parentérica, por exemplo, como uma solução em 1,3- butanodiol. Entre os veículos e solventes aceitáveis que podem ser empregados estão água, solução de Ringer, e solução isotônica de cloreto de sódio. Além disso, óleos fixos estéreis são convencionalmente empregados como um solvente ou meio de suspensão. Para esse efeito, qualquer óleo fixo brando pode ser empregado usando mono- ou diglicerídeos sintético. Além disso, ácidos graxos como o ácido oleico encontram utilidade na preparação de injetáveis.

[0275] As composições também podem estar na forma de supositórios para administração retal dos compostos da invenção. Essas composições também podem ser preparadas misturando-se o composto com um excipiente não irritante apropriado que seja sólido a temperaturas normais, porém líquido à temperatura retal e, portanto, derreterá no reto para liberar a droga. Tais materiais incluem, por exemplo, manteiga de cacau e polietileno glicóis.

[0276] Os peptídeos da presente invenção também podem ser administrados na forma de sistemas de entrega de lipossoma, tais como pequenas vesículas unilamelares, grandes vesículas unilamelares e vesículas multilamelares. Os lipossomas podem ser formados a partir de uma variedade de fosfolípidos, tais como, mas não limitados a colesterol, estearilamina ou fosfatidilcolinas.

[0277] Além disso, alguns peptídeos da presente invenção podem formar solvatos com água ou solventes orgânicos comuns. Tais solvatos também estão englobados dentro do escopo da invenção.

[0278] Assim, uma outra modalidade fornece uma composição farmacêutica compreendendo um peptídeo para utilização de acordo com a presente invenção ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou pró-droga do mesmo e um ou mais veículos, excipientes ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis.

[0279] A presente invenção também abrange as composições farmacêuticas compreendendo α-MSH, os análogos Y-MSH, os análogos GLP-1, os análogos GLP-2 e os análogos de terminal N de Anexina A1 da presente invenção, assim como análogos de α-MSH e y-MSH, análogos de GLP-1, análogos de GLP-2 ou os análogos de terminal N de Anexina A1 da presente invenção para uso como um medicamento.

[0280] Especificamente, α-MSH e y-MSH e análogos de α-MSH, análogos de y-MSH, análogos de GLP-1, análogos de GLP-2 e análogos de terminal N de Anexina A1, de acordo com a presente invenção são potencialmente adequados para uso no tratamento de um estado isquêmico e/ou inflamatória no tecido de um ou mais órgãos de um mamífero, em que o referido tratamento pode ser profilático, melhorador ou curativo.

[0281] As referidas condições isquêmicas interessadas podem, em uma modalidade, ser devido a ou causadas por condições subjacentes, como acidente vascular cerebral, lesão, choque séptico, hipotensão sistêmica, parada cardíaca devido a um ataque cardíaco, arritmia cardíaca, doença ateromatosa com trombose, embolia do coração ou do vaso sanguíneo de qualquer órgão, vasoespasmo, aneurisma da aorta ou aneurismas em outros órgãos, estenose coronariana, infarto do miocárdio, angina pectoris, pericardite, miocardite, mixodemia ou endocardite.

[0282] Além disso, a referida condição isquêmica e/ou inflamatória podem ser em uma modalidade associada à cirurgia, tais como cirurgia principal, em que a referida cirurgia pode incluir cirurgia cardiotorácica, cirurgia abdominal, cirurgia na aorta e/ou outros vasos sanguíneos grandes, reparação de uma ou mais válvulas cardíacas, enxerto de revascularização cardíaca do miocárdio (RM), cirurgia na raiz da aorta ou do ramo da aorta incluindo as artérias carotídeo comuns e cirurgia cardíaca combinada, como substituição de válvula(s) e revascularização do miocárdio e/ou cirurgia da raiz da aorta.

[0283] Além disso, o referido estado isquêmico e/ou inflamatório pode ser, em uma modalidade, associado ao transplante de órgãos, tais como o transplante de órgãos sólidos, incluindo transplante cardíaco, transplante de pulmão, transplante de coração e pulmão combinados, transplante de fígado e transplante de rim.

[0284] Em uma modalidade, o referido estado isquêmico e/ou inflamatório é a síndrome de resposta inflamatória sistêmica pós-cirúrgica (SRIS) ou disfunção de órgão pós-cirúrgico, incluindo falha renal pós- cirúrgico como a lesão renal aguda (LRA), neprotoxicidade e/ou insuficiência renal crônica (IRC).

[0285] Em uma modalidade, a referida condição isquêmica e/ou inflamatória é lesão de reperfusão.

[0286] Além disso, o referido estado isquêmico e/ou inflamatória podem ser uma doença inflamatória, incluindo, mas não se limitando a artropatia (doença articular), artrite reumatoide (RA), gota, doenças inflamatórias do sistema gastrointestinal e esclerose múltipla.

[0287] Para além das condições isquêmicas e/ou inflamatórias, α-MSH e Y-MSH, análogos de α-MSH, análogos de Y-MSH, análogos de GLP-1, análogos de GLP-2 e os análogos de terminal N de Anexina A1, de acordo com a presente invenção são potencialmente adequados para utilização no tratamento de uma condição metabólica incluindo diabetes mellitus Tipo 1 ou Tipo 2, condições pré-diabéticas incluindo a intolerância à glicose, obesidade, sobrepeso, síndrome metabólica, diabetes mellitus gestacional ou doença metabólica associada à síndrome de ovário policística em que o referido tratamento pode ser profilático, melhorador ou curativo.

[0288] Os peptídeos modificados de acordo com essa invenção podem ser utilizados para tratar as mesmas doenças e condições para as quais os peptídeos foram indicados. Exemplos Exemplo 1 - Síntese de análogos de peptídeo de α-MSH modificados com BAP. Análogo 1 de α-MSH: Ac-(Ac-Lys-Lys-)Lys-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys- Pro-Val-NH2 Análogo 1 de Y-MSH: Ac-(Ac-Lys-Lys-)Lys-Tyr-Val-Met-Gly-His-Phe-Arg-(D-Trp)-Asp- Arg- Phe-Gly-NH2.

[0289] Os peptídeos são fabricados utilizando o produto químico Fmoc (9-fluorenilmetiloxicarbonil). Os peptídeos são feitos utilizando uma resina de poliestireno, funcionalizada com um ligante apropriado e, em seguida, os peptídeos são fabricados utilizando um Intavis Peptide Synthesizer. Um excesso de 4 vezes de amino ácido é adicionado em relação à resina e ou HATU (hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il) -N,N,N',N'- tetrametilurónio) ou HCTU (hexafluorofosfato de 2-(6-cloro-1H-benzotriazol- 1-il)-1,1,3,3-tetrametilamínio) foi usado em um excesso de 3,95 vezes para criar o éster ativo. Juntamente com um excesso de 8 vezes de DIPEA (N,N- di-isopropiletilamina) como a base, esses reagentes catalisam a adição do aminoácido seguinte. Uma vez que o aminoácido seja acoplado (cada ciclo inclui um ciclo de acoplamento duplo para garantir acoplamento eficiente) a resina é exposta a 20% de anidrido acético para terminar ("cap-off") quaisquer cadeias peptídicas que não foram adicionadas ao aminoácido seguinte.

[0290] Os aminoácidos são dissolvidos em NMP (N-metil-2- pirrolidona) ou DMF (dimetilformamida) para lavagem. Piperidina é usada para remover o grupo Fmoc no final de cada ciclo de acoplamento que permite que o aminoácido seguinte seja adicionado.

[0291] O análogo 1 de α-MSH foi feito com Lys(MTT) no fim; o peptídeo foi acetilado, o MTT foi removido, adicionou-se Lys, adicionou-se Lys e, em seguida, adicionou acetilato novamente.

[0292] Para o análogo 1 de y-MSH a adição de um ou mais dipeptídeos de pseudoprolina (oxazolidina) durante a síntese de peptídeos contendo serina e/ou contendo resultou em melhorias na qualidade do peptídeo e um aumento no rendimento do peptídeo bruto de comprimento completo. Nesse caso, o peptídeo foi feito até a MEHF, um dipeptídeo de pseudoprolina (Fmoc-YS) foi adicionado, o próximo aminoácido "Ser" foi acoplado 3 vezes para garantir que ficou completo e o peptídeo terminado manualmente adicionando-se Lys(Mtt), acetilação e, em seguida, terminando como acima.

[0293] Em cada caso, os peptídeos foram secos utilizando MeOH (3X), DCM (3X), clivado utilizando 92% de TFA, 2% de água, 2% de tri- isopropilsilano, 2% de tioanisole e 2% de etanoditiol por 3-4h à temperatura ambiente. Os peptídeos foram precipitados em éter dietílico frio, centrifugados (2.000 RPM) e os peletes lavados 2X com éter frio. Depois de secar os peptídeos foram solubilizados em água contendo 0,1% de TFA (tampão A) e submetidos a RP-HPLC utilizando colunas de C18 (tampão B = 95% de acetonitrila/0,1% de TFA).

[0294] A pureza foi determinada por HPLC analítica e massas moleculares mono isotópicas teóricas confirmadas por MS. A integridade da sequência foi verificada por sequenciamento de CID em tandem MS/MS.

Exemplo 2: Caracterização farmacológica dos análogos de α-MSH modificado com BAP. Método:

[0295] As células de murino B16-F1 que expressam MCr1 são usadas para a determinação da afinidade de ligação para e a atividade agonista contra MC1r. As células CHO recombinantes que expressam MC3R, MC4R ou MC5r são usadas para a determinação de afinidade a ou atividade agonista contra MC3R, MC4R e MC5r, respectivamente. A afinidade de ligação é determinada em experiências conduzidas conforme descrito em procedimentos para o catálogo de estudo de ligação de radioligante n° 0644 (MC1r); n° 0447 (MC3R); n° 0420 (MC3R) e n° 0448 (MC5r) Cerep, França. Em todas as experiências os valores de Ki são calculados com base na capacidade do composto de teste de deslocar >125I-NDP-αMSH. Os artigos de teste são testados em um intervalo de concentrações de 10-13 a 10-5 M.

[0296] Para a atividade agonista contra MCRs são realizados os seguintes procedimentos: As células são incubadas com o produto de teste em concentrações a partir de 10-13 a 10-5 M. Em todos os ensaios de cAMP a acumulação é determinada após a incubação e a resposta em uma dada concentração é expressa como uma percentagem da resposta máxima de controle específico (resposta específica medida/resposta de agonista específico de controle) x 100) quando NDP-αMSH é usado como controle positivo. Os valores de EC50 (concentração que produz uma resposta específica semi-máxima) são determinados por análise de regressão não linear das curvas de concentração-resposta geradas com valores de replica média usando equação de ajuste de curva Hill (Y=D+[(A-D)/(1+(C/C5o)nH)], em que Y = resposta específica, D = resposta específica mínima, A = resposta específica máxima, C = concentração de composto e C50 = EC50 e nH = fator de inclinição). Para mais detalhes veja os protocolos específicos para protocolo de estudo Cerep n° 2147 (MC1r); n° 0959 (MC3R), n° 0699 (MC4R) e n° 1869 (MC5r). Análogos de peptídeos de teste: Análogo 1: Ac-(Ac-Lys-Lys)Lys-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp- Gly-Lys-Pro-Val-NH2 Análogo 2: Ac-(Ac-Lys-Lys)Lys-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp- Gly-Lys-Pro-(D-Val)-NH2 Análogo 3: Ac-(Ac-Lys-Lys)Lys-Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu-His-DPhe-Arg- Trp-Gly-Lys-Pro-Val-NH2 Análogo 4: Ac-(Ac-Lys-Lys)Lys-Ser-Ser-Ile-Ile-Ser-His-DPhe-Arg-Trp- Gly-Lys-Pro-Val-NH2 Peptídeo de controle: Peptídeo de controle 1 (αMSH): Ac-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg- Trp-Gly-Lys-Pro-Val-NH2 Peptídeo de controle 2 (NDP-αMSH): Ac-Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu-His- DPhe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-NH2 Resultados: Ligação de MCr relativa para controlar o peptídeo 1: Valores de EC50 (nM): Exemplo 3: Caracterização farmacológica dos análogos de Y-MSH modificado com BAP. Análogos de peptídeos de teste: Análogo 1: Ac-(Ac-Lys-Lys)Lys-Tyr-Val-Met-Gly-His-Phe-Arg-DTrp- Asp-Arg-Phe-Gly-NH2 Análogo 2: Ac-(Ac-Lys-Lys)Lys-Tyr-Val-Met-Gly-His-Phe-Arg-Trp-Asp- Arg-Phe-Gly-NH2 Análogo 3: Ac-(Ac-Lys-Lys)Lys-Tyr-Val-Met-Gly-His-DPhe-Arg-DTrp- Asp-Arg-Phe-Gly-NH2 Análogo 4: Ac-(Ac-Lys-Lys)Lys-Tyr-Val-Met-Gly-His-Phe-Arg-DTrp- Asp-Arg-DPhe-Gly-NH2 Análogo 5: Ac-(Ac-Lys-Lys)Lys-Tyr-Val-Nle-Gly-His-Phe-Arg-DTrp- Asp-Arg-Phe-Gly-NH2 Análogo 6: Ac-(Ac-Lys-Lys)Lys-Tyr-Val-Nle-Gly-His-Phe-Arg-Trp-Asp- Arg-Phe-Gly-NH2 Análogo 7: Ac-(Ac-Lys-Lys)Lys-Tyr-Val-Nle-Gly-His-DPhe-Arg-Trp- Asp-Arg-Phe-Gly-NH2 Análogo 8: Ac-(Ac-Lys-Lys)Lys-Tyr-Val-Nle-Gly-His-DPhe-Arg-DTrp- Asp-Arg-Phe-Gly-NH2 Peptídeos de controle: Peptídeo de controle 1 (y2-MSH): Ac-Tyr-Val-Met-Gly-His-Phe-Arg- Trp-Asp-Arg-Phe-Gly-NH2 Peptídeo de controle 2 (DTrp-y2-MSH): Ac-Tyr-Val-Met-Gly-His-Phe- Arg-DTrp-Asp-Arg-Phe-Gly-NH2 Resultados: Valores de Ki (nM): Afinidade c e ligação de M Cr relativa para controlar o peptídeo 1: Afinidade de ligação de MCr relativa para controlar o peptídeo 2: Afinidade de ligação de MCr em relação ao αMSH (Ac-Ser-Tyr-Ser- Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-NH2): Valores de EC50 (n M):

Exemplo 4: Síntese de peptídeos modificados com BAP

[0297] Da mesma forma a síntese de análogos de peptídeos α-MSH modificados com BAP (Exemplo 1) os peptídeos foram sintetizados utilizando o produto químico Fmoc convencional utilizando 1-hexafluorofosfato de 3- óxido de [bis(dimetilamino)metileno]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridínio (HATU) ou hexafluorofosfato de 2-(6-cloro-1H-benzotriazol-1-il)-1,1,3,3- tetrametilamínio (HCTU) como os reagentes de acoplamento com a Base de Hunig (N,N-diisopropiletilamina, DIPEA). Para a ramificação de lisina conforme descrito em mais detalhe abaixo, a combinação de lisinas ortogonalmente protegidas foram utilizadas incluindo Fmoc-Lys(MTT)-OH, Fmoc-Lys(ivDde)-OH e Fmoc-Lys(Boc)-OH.

[0298] Os peptídeos foram clivados com cocktails de clivagem padrão incluindo o ácido trifluoroacético, triisoproproilsilano e água e precipitou-se com éter arrefecido com gelo. Todos os peptídeos brutos foram purificados por cromatografia de fase reversa em colunas com funcionalidade C-18 e utilizando gradientes de acetonitrila, água desionizada e ácido trifluoroacético como tampões de corrida. A pureza foi determinada por cromatografia líquida de alta pressão e as informações de massa (MS) e sequência (tandem MS) foram obtidas utilizando um espectrômetro de massa de nanospray.

BAP ligado no terminal C da sequência

[0299] Ramificando na lisina de terminal C (método 1): N - α - Fmoc - N - ε - 4 - metiltritila - L - lisina foi adicionado à resina de amida de Rink após desproteção de piperidina. Adicionou-se a sequência restante do peptídeo alvo e a sequência de comprimento completo foi acetilada com anidrido acético. O grupo metiltritila foi, então, removido usando 1% de ácido trifluoroacético em diclorometano. Nα-Fmoc-Nε-Boc-L-lisina adicional foi, então, adicionado à cadeia lateral e acetilado quando desejado.

[0300] A ramificação em além de lisina de terminal C: analogamente para ligar BAP às lisinas na sequência dentre terminais N e C (MÉTODO 2).

BAP ligado às lisinas na sequência dentre terminais N e C

[0301] MÉTODO 2: N - α - Fmoc - N - ε - 4 - metiltritila - L - lisina foi adicionado à sequência peptídica, metitritil foi removido após a finalização da sequência e opcionalmente acetilação de terminal N. Os análogos de lisina adequadas tais como Fmoc-Lys(MTT)-OH, Fmoc-Lys(ivDde)-OH e Fmoc- Lys(Boc)-OH foram adicionados sequencialmente e desprotegido seletivamente, antes de acetilação garantir cadeia lateral apropriada e adição de acetil.

BAP ligado no terminal N da sequência

[0302] A ramificação na lisina de terminal N (MÉTODO 3): N - α - Fmoc - N - ε - 4 - metiltritila - L - lisina foi adicionada ao terminal N da sequência, Fmoc foi removido, a sequência acetilada no terminal N, assim como o grupo metiltritil foi removido. Nα-Fmoc-Nε-Boc-L-lisina adicional foi, então, adicionado à cadeia lateral e acetilado quando desejado.

[0303] A ramificação em além de lisina de terminal N: analogamente para ligar BAP às lisinas na sequência dentre terminais N e C (MÉTODO 2). Peptídeos Análogo 1 (pelo MÉTODO 1): Ac-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu- Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly-(Lys-Lys- Ac)Lys-NH2 Pureza: 99.1% MS: 546.9, 637.8, 765.2 Análogo 2 (pelo MÉTODO 1): Ac-His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu- Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly-(Lys-Lys- Ac)Lys-NH2 Pureza: 99.3% MS: 635.5, 762.4, 952.7 Análogo 3 (pelo MÉTODO 1): Ac-His-Ala-Asp-Gly-Ser-Phe-Ser-Asp-Glu-Met-Asn-Thr-Ile-Leu-Asp- Asn-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Asn-Trp-Leu-Ile-Gln-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp- (Lys-Lys-Ac)Lys-NH2 Pureza: 96.2% MS: 605.5, 706.2, 847.2, 1058.8 Análogo 4 (pelo MÉTODO 1): Ac-His-Gly-Asp-Gly-Ser-Phe-Ser-Asp-Glu-Met-Asn-Thr-Ile-Leu-Asp- Asn-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Asn-Trp-Leu-Ile-Gln-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp- (Lys-Lys-Ac)Lys-NH2 Pureza: 95.1% MS: 603.5, 703.9, 844.4, 1055.3 Análogo 5 (pelo MÉTODO 1): Ac-His-(D-Ala)-Asp-Gly-Ser-Phe-Ser-Asp-Glu-Met-Asn-Thr-Ile-Leu- Asp-Asn-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Asn-Trp-Leu-Ile-Gln-Thr-Lys-Ile-Thr- Asp-(Lys-Lys-Ac)Lys-NH2 Pureza: 96.9% MS: 706.2, 847.2, 1058.8 Análogo 6 (pelo MÉTODO 1): Ac-Ala-Met-Val-Ser-Glu-Phe-Leu-Lys-Gln-(D-Ala)-Trp-Phe-Ile-Glu- Asn-Glu-Glu-Gln-Glu-Tyr-Val-Gln-Thr-Val-Lys-Lys-(Lys-Ac)Lys-NH2 Pureza: 96,0 MS: 879,2 Análogo 7 (pelo MÉTODO 2): Ac-Ala-Met-Val-Ser-Glu-Phe-Leu-(Ac-(Lys-Ac)Lys-Lys)Lys-Gln-Ala- Trp-NH2 Pureza: 97,3 MS: 442,2, 662,9

Exemplo 5: Caracterização farmacológica dos análogos GLP-1 modificados com BAP Método:

[0304] As células CHO-K1 que expressam o receptor de GLP-1 humano cultivado em meio sem antibiótico foram separados por lavagem suave com PBS-EDTA (5 mM de EDTA), recuperado por centrifugação e ressuspenso em tampão de ensaio (KRH: 5 mM de KCl, 1,25 mM de MgSO4, 124 mM de NaCl, 25 mM de HEPES, 13,3 mM de Glicose, 1,25 mM de KH2PO4, 1,45 mM de CaCl2, 0,5 g/l de BSA).

[0305] 12 μl de células foram misturadas com 12 μl do composto de teste (dissolvidos em PBS/0,5% de BSA e finalmente diluídas a partir de uma solução de reserva de 1 mM), em concentrações crescentes em placas de 96 poços e, em seguida, incubadas durante 30 min à temperatura ambiente. A produção de cAMP foi determinada após a adição de um tampão de lise e 1 hora de incubação, mediante uso de imunoensaio competitivo utilizando anti-cAMP marcado com criptato e cAMP marcado com d2 (kit de HTRF de CisBio) com valores percentuais Delta F calculados de acordo com a especificação do fabricante. As curvas de resposta de dose foram realizadas em paralelo com os compostos de teste e os compostos de referência.

[0306] A tecnologia de HTRF é um ensaio de titulação com base em uma competição entre cAMP marcado (exógeno) e cAMP produzido pela célula após a ativação de MCr. O intervalo dinâmico do ensaio foi 3-4 vezes significando que o intervalo linear (que permite a conversão dos dados brutos para nM de cAMP) está dentro desse intervalo. A janela entre topo e fundo da curva é mais elevada (cerca de 100), o que significa que a conversão em nM de cAMP, o ensaio de janela de cAMP vai de 1 nM (basal) a cerca de 30 nM (Emax). Todas as experiências foram realizadas na presença do inibidor de fosfodiesterase IBMX não seletivo (1 mM em concentração final).

[0307] Os compostos de teste foram testados em um intervalo de concentrações de 10-14 a 10-7 M

[0308] Os dados são apresentados como valores médios. EC50 (isto é, a concentração induziu 50% da resposta máxima) e a inclinação de Hill foram determinadas por análises de melhor ajuste após a transformação logarítmica usando o software Graph Pad (versão 6.0). Peptídeo de controle: GLP-1 (7-36): H-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu- Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly-OH Resultados:

[0309] Ambos análogos 1 e 2 mostraram atividade de agonista total, quando comparado ao peptídeo de controle de GLP-1 (7-36) com valores de EC50 molar sub-nano comparáveis ao peptídeo de controle de GLP-1 (7-37). Quanto menor a inclinação de Hill indica que a atividade de agonista pode ser obtida em concentrações mais baixas do que o que seria visto com o peptídeo de controle.

Exemplo 6: Caracterização farmacológica dos análogos GLP-2 modificados com BAP Método:

[0310] As células CHO-K1 que expressam o receptor de GLP-2 humano cultivado em meio sem antibiótico foram separados por lavagem suave com PBS-EDTA (5 mM de EDTA), recuperado por centrifugação e ressuspenso em tampão de ensaio (KRH: 5 mM de KCl, 1,25 mM de MgSO4, 124 mM de NaCl, 25 mM de HEPES, 13,3 mM de Glicose, 1,25 mM de KH2PO4, 1,45 mM de CaCl2, 0,5 g/l de BSA).

[0311] 12 μl de células foram misturadas com 12 μl do composto de teste (dissolvidos em PBS/0,5% de BSA e finalmente diluídas a partir de uma solução de reserva de 1 mM), em concentrações crescentes em placas de 96 poços e, em seguida, incubadas durante 30 min à temperatura ambiente. A produção de cAMP foi determinada após a adição de um tampão de lise e 1 hora de incubação, mediante uso de imunoensaio competitivo utilizando anti-cAMP marcado com criptato e cAMP marcado com d2 (kit de HTRF de CisBio) com valores percentuais Delta F calculados de acordo com a especificação do fabricante. As curvas de resposta de dose foram realizadas em paralelo com os compostos de teste e os compostos de referência.

[0312] A tecnologia de HTRF é um ensaio de titulação com base em uma competição entre cAMP marcado (exógeno) e cAMP produzido pela célula após a ativação de MCr. O intervalo dinâmico do ensaio foi 3-4 vezes significando que o intervalo linear (que permite a conversão dos dados brutos para nM de cAMP) está dentro desse intervalo. A janela entre topo e fundo da curva é mais elevada (cerca de 100), o que significa que a conversão em nM de cAMP, o ensaio de janela de cAMP vai de 1 nM (basal) a cerca de 30 nM (Emax). Todas as experiências foram realizadas na presença do inibidor de fosfodiesterase IBMX não seletivo (1 mM em concentração final).

[0313] Os compostos de teste foram testados em um intervalo de concentrações de 10-14 a 10-7 M

[0314] Os dados são apresentados como valores médios. EC50 (isto é, a concentração induziu 50% da resposta máxima) e a inclinação de Hill foram determinadas por análises de melhor ajuste após a transformação logarítmica usando o software Graph Pad (versão 6.0). Peptídeo de controle: GLP-2 (1-34): H-His-Ala-Asp-Gly-Ser-Phe-Ser-Asp-Glu-Met-Asn-Thr-Ile-Leu-Asp- Asn-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Asn-Trp-Leu-Ile-Gln-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp- Arg-OH Resultados:

[0315] Todos os três análogos mostraram atividade agonista total, quando em comparação ao peptídeo de controle de GLP-2 (1-34) com valores de EC50 no intervalo de nM. Por conseguinte, os exemplos atuais de análogos de GLP-2 modificados com BAP são agonistas completos e potentes contra o receptor de GLP-2 humano.

Exemplo 7: Caracterização farmacológica dos fragmentos de terminal N AnxA1 modificados com BAP Método:

[0316] As células recombinantes que co-expressam apoaequirin mitocondrial e receptor de peptídeo Formil tipo 2 humano recombinante (FPR2) foram cultivadas durante 18 horas antes do teste em meio sem antibióticos foram separadas por lavagem suave com PBS-EDTA (5 mM de EDTA), recuperadas por centrifugação e re-suspensas em tampão de ensaio (F12 de DHEM/HAM com HEPES e 0,1% de protease livre BSA). As células foram então incubadas durante pelo menos 4 horas à temperatura ambiente coelenterazina h (de Molecular Probes) antes de estudos DR serem realizados.

[0317] 50 μl de suspensão de células foi injetada em 50 μl do composto de teste ou controle (solubilizado em PBS/0,5% de BSA e finalmente diluída a partir de uma solução de estoque de 1 mM), em concentrações crescentes, em placas de 96 poços e em seguida incubada durante 30 min à temperatura ambiente. A emissão de luz resultante foi gravada utilizando Hamamatsu functional drug Screening system 6000 (FDSS6000). Para padronização de emissão de luz registada entre as placas e entre os experimentos 100 μM de digitonina ou 20 μM de ATP foram adicionados a alguns dos poços.

[0318] A atividade agonista foi expressa como % da atividade máxima obtida com o composto de controle interno Trp-Lys-Tyr-Met-Val-Met

[0319] Os compostos de teste foram testados em um intervalo de concentrações de 10-11 a 10-5 M

[0320] Os dados são apresentados como valores médios. Quando possivel, EC50 (isto é, a concentração induziu 50% da resposta máxima) foi determinada por análises de melhor ajuste após a transformação logarítmica usando o software Graph Pad (versão 6.0). Peptídeo de controle 1: AnxA1 (2-26): Ac-Ala-Met-Val-Ser-Glu-Phe-Leu-Lys-Gln-Ala-Trp-Phe-Ile-Glu-Asn- Glu-Glu-Gln-Glu-Tyr-Val-Gln-Thr-Val-Lys-OH Peptídeo de controle 2: AnxA1 (2-12): Ac-Ala-Met-Val-Ser-Glu-Phe-Leu-Lys-Gln-Ala-Trp-NH2

Resultados:

[0321] Na literatura, ambos fragmentos de terminal N AnxA1 (2-12) e AnxA1 (2-26) da proteína AnxA1 são descritos como agonista ao receptor- nenhum FPR2 desses como significativamente potente, mas na configuração nem o peptídeo de controle 1 ou 2 foram capazes de induzir atividade agonista no intervalo de concentração aplicado. Em contraste com isso ambos análogo 6 e análogo 7 mostraram atividade agonista. Para o análogo 6 a atividade agonista atingiu 33% da resposta máxima observada com o composto de controle interno Trp-Lys-Tyr-Met-Val-Met. A atividade máxima correspondente do composto de controle 1 era menos de 1%. Para o análogo 7, EC50 foi determinado a 1,56 mM. A resposta agonista máxima obtida com a dose mais elevada testada foi de 85% da resposta máxima obtida com o hexapeptídeo Trp-Lis-Tir-Met-Val-Met, enquanto que a atividade máxima do peptídeo de controle foi inferior a 1%.

Claims

1. Análogo de peptídeo caracterizado pelo fato de que compreende um peptídeo e uma ou mais sondas de aminoácidos ramificados, em que a referida sonda de aminoácidos ramificados compreende um primeiro resíduo de aminoácido aminoalquil, o referido primeiro resíduo de aminoácido aminoalquil sendo opcional e covalentemente ligado a um segundo resíduo de aminoácido aminoalquil, ou a um segundo e a um terceiro resíduos de aminoácido aminoalquil, para formar uma cadeia linear de 2 ou 3 resíduos de aminoácido aminoalquil; em que a(s) cadeia(s) lateral(is) de um ou mais dos referidos primeiro, segundo e/ou terceiro resíduos de aminoácido aminoalquil são, cada uma, modificadas pela ligação ao grupo amino da cadeia lateral de uma molécula independentemente selecionada do grupo consistindo em AAAq-AAA; (aa3)p- AAAq; AAAq-(aa3)p; [(aa3)-AAA]p e [AAA-(aa3)]p; em que q é um número selecionado dentre 0, 1, 2 e 3; p é um número selecionado dentre 1, 2 e 3; AAA é um resíduo de aminoácido aminoalquil; e (aa3) é um resíduo de aminoácido independentemente selecionado dentre Arg, His, Gly e Ala; em que os referidos resíduos de aminoácidos aminoalquil são opcionalmente acetilados; em que o referido primeiro resíduo de aminoácido aminoalquil é covalentemente ligado ao terminal N do referido peptídeo, covalentemente ligado ao terminal C do referido peptídeo, e/ou ligado ao grupo amino da cadeia lateral de um resíduo de aminoácido aminoalquil dentro do referido peptídeo, com a ressalva de que a referida sonda de aminoácidos ramificados consiste em 2 a 9 resíduos de aminoácidos; e em que o referido peptídeo não é um peptídeo α-MSH e/ou um Y-MSH tendo uma sonda de aminoácidos ramificados covalentemente ligados a um aminoácido terminal N do referido peptídeo α-MSH e/ou Y-MSH.

2. Análogo de peptídeo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a sonda de aminoácidos ramificados compreende um primeiro resíduo de aminoácido aminoalquil, o referido primeiro resíduo de aminoácido aminoalquil sendo opcionalmente acetilado, em que o grupo amino da cadeia lateral do referido primeiro resíduo de aminoácido aminoalquil é modificado pela ligação de uma molécula independentemente selecionada do grupo consistindo em AAAq-AAA; (aa3)p- AAAq; AAAq-(aa3)p; [(aa3)-AAA]p e [AAA-(aa3)]p; e em que q é um número selecionado dentre 0, 1, 2 e 3; p é um número selecionado dentre 1, 2 e 3; AAA é um resíduo de aminoácido aminoalquil (opcionalmente acetilado); e (aa3) é um resíduo de aminoácido independentemente selecionado dentre Arg, His, Gly e Ala.

3. Análogo de peptídeo, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que a sonda de aminoácidos ramificados compreende um primeiro resíduo de aminoácido aminoalquil colvalentemente ligado a um segundo resíduo de aminoácido aminoalquil para formar uma cadeia linear de 2 resíduos de aminoácido aminoalquil, em que o referido primeiro resíduo de aminoácido aminoalquil é opcionalmente acetilado; em que o grupo amino da cadeia lateral do referido primeiro e/ou segundo resíduos de aminoácido aminoalquil é modificado pela ligação de uma molécula independentemente selecionada do grupo consistindo em AAAq-AAA, (aa3)p-AAAq; AAAq-(aa3)p, [(aa3)-AAA]p e [AAA-(aa3)]p; e em que q é um número selecionado dentre 0, 1, 2 e 3; p é um número selecionado dentre 1, 2 e 3; AAA é um resíduo de aminoácido aminoalquil (opcionalmente acetilado); e (aa3) é um resíduo de aminoácido independentemente selecionado dentre Arg, His, Gly e Ala.

4. Análogo de peptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que os referidos resíduos de aminoácido aminoalquil são individualmente selecionados do grupo consistindo em L-lisina, D-lisina, L-ornitina e D-ornitina.

5. Análogo de peptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que a molécula a ser ligada ao(s) referido(s) grupo(s) amino da cadeia lateral é independentemente selecionada do grupo consistindo em Lysq-Lys, (aa3)p-Lysq, Lysq-(aa3)p, [(aa3)-Lys]p, [Lys-(aa3)]p, Ornq-Orn, (aa3)p-Ornq, Ornq-(aa3)p, [(aa3)-Orn]p, [Orn-(aa3)]p, Ornp-Lysp, Lysp-Ornp, [Orn-Lys]p e [Lys-Orn]p, em que q é um número selecionado dentre 0, 1, 2 e 3; p é um número selecionado dentre 1, 2 e 3; (aa3) é um resíduo de aminoácido independentemente selecionado dentre Arg, His, Gly e Ala; e cada um dos referidos Lys, Orn e resíduos de aminoácidos (aa)3 é opcionalmente acetilado.

6. Análogo de peptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que os referidos resíduos de aminoácido aminoalquil são individualmente selecionados do grupo consistindo em L-lisina e D-lisina.

7. Análogo de peptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que a(s) sonda(s) de aminoácidos ramificados é(são) selecionada(s) do grupo consistindo em Ac- (Ac-Lys)Lys-Lys-, (Ac-Lys)Lys-Lys-, Ac-(Lys)Lys-Lys-, (Lys)Lys-Lys-, Ac- Lys-(Ac-Lys)Lys-, Lys-(Ac-Lys)Lys-, Ac-Lys-(Lys)Lys-, Lys-(Lys)Lys-, Ac-(Ac- Lys-Lys)-Lys-, (Ac-Lys-Lys)-Lys-, Ac-(Lys-Lys)-Lys- e (Lys-Lys)-Lys-.

8. Análogo de peptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que compreende 1 sonda de aminoácidos ramificados.

9. Análogo de peptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que o referido peptídeo é selecionado do grupo consistindo em β-MSH e suas variantes; um análogo lactâmico cíclico de α-MSH ou um análogo de α-MSH ciclizado com metal; VIP (peptídeo intestinal vasoativo; PHM27), PACAP (peptídeo de ativação da adenilato ciclase da pituitária), peptídeo PHI 27 (peptídeo histidina isoleucina 27), GHRH 1-24 (hormônio liberador do hormônio do crescimento 1-24), Glucagon, Secretina, precursor da glicentina, GIP (peptídeo gástrico inibidor), pré-albumina ou transtirretina (TTR), peptídeo HI-27 e fator de liberação do hormônio do crescimento (GHRF ou GHRH), incretinas, peptídeo 1 semelhante ao glucagon (GLP-1), GLP-1 (7-37), GLP-1 (7-33), peptídeo-2 semelhante ao glucagon (GLP-2), exendina-4, somatotrofinas (tais como somatotropina ou hormônio do crescimento (GH)), tirotrofinas (tais como hormônio estimulante da tireoide (TSH), corticotropinas (tais como hormônio adrenocorticotrópico (ACTH), e Beta-endorfina), Lactotrofinas (tais como Prolactina (PRL), Gonadotropinas (tais como hormônio luteinizante (LH) e hormônio folículo-estimulante (FSH)), hormônio antidiurético (ADH ou vasopressina), oxitocina, hormônio liberador do hormônio de crescimento (GHRH), somatostatina, hormônio liberador de tirotropina (TRH), hormônio liberador de corticotropina (CRH), hormônio liberador de gonadotropina (GnRH), CREB (proteína de ligação ao elemento de resposta de cAMP), Lactotripeptídeos, Isoleucina-Prolina-Prolina (IPP), Valina-Prolina-Prolina (VPP), NPY (NeuroPeptídeo Y), PYY (Peptídeo YY), APP (polipeptídeo pancreático aviário) e PPY/PP (polipeptídeo pancreático), peptídeos pró- opiomelanocortina (POMC) (incluindo peptídeo N-terminal da pró- opiomelanocortina (NPP, ou pró-Y-MSH), Y-MSH, Corticotropina (hormônio adrenocorticotrópico, ou ACTH), α-MSH, peptídeo intermediário semelhante à corticotropina (CLIP), β-Lipotropina (β-LPH), Lipotropina Gama (Y-LPH), β- MSH, β-Endorfina e [Met]Encefalina); pentapeptídeos da encefalina (Met- encefalina e Leu-encefalina), peptídeos pró-dinorfina, dinorfinas (dinorfina A, dinorfina B, α-neo-endorfina, β-neo-endorfina, e Big-dinorfina), endorfinas (beta-endorfina, Alfa-endorfina, Gama-endorfina, α-neo-endorfina e β-neo- endorfina), Adrenorfina, Amidorfina, Leumorfina, Nociceptina, Opiorfina, Spinorfina, cininas, neuropeptídeos taquicininas (incluindo substância P, cassinina, neurocinina A (NKA), neurocinina B (NKB), eledoisina e fisalaemina), bradicinina, peptídeos relacionados a neuromedinas/bombesina (incluindo Neuromedina B (NMB), Neuromedina N, Neuromedina S e Neuromedina U (NmU)); Angiotensina, Bombesina, peptídeo relacionado do gene da calcitonina (CGRP), α-CGRP, β-CGRP, Carnosina, transcrito regulado por cocaína e anfetamina (CART), peptídeo indutor de sono delta (DSIP), FMRFamida, peptídeos relacionados a FMRFamida (FaRPs), Galanina, peptídeos semelhante à galanina (GALP), peptídeo liberador de gastrina (GRP), Neuropeptídeo S, Neuropeptídeo Y, Neurofisinas (Neurofisina I e Neurofisina II), Neurotensina, polipeptídeo pancreático, peptídeo ativador da adenilato ciclase da pituitária (PACAP), RVD-Hpα, hemopressina, VGF (fator induzível do crescimento do nervo VGF), peptídeos derivados de VGF (TLQP-21), Calcitonina, Amilina (ou polipeptídeo amiloide das ilhotas (IAPP)), AGG01, Adrenomedulina (AM), Angiopoietina (Ang), fator de motilidade autócrino, proteínas morfogenéticas do osso (BMPs) (BMP1, B;MP2, BMP3, BMP4, BMP5, BMP6, BMP7, BMP8a, BMP8b, BMP10, BMP15), fator neurotrófico derivado do cérebro (BDNF), fator de crescimento epidérmico (EGF), Eritropoietina (EPO), fator de crescimento de fibroblasto (FGF), fator neurotrófico derivado da linhagem de células gliais (GDNF), fator estimulador de colônias de granulócitos (G- CSF), fator estimulador de colônias de macrófagos e granulócitos (GM-CSF), fator 9 de diferenciação de crescimento (GDF9), fator de crescimento de hepátocitos (HGF), fator de crescimento derivado de hepatoma (HDGF), fatores de crescimento semelhantes à insulina (IGF), IGF-1, IGF-2, fator estimulador de migração, Miostatina (GDF-8), neurotrofinas, Neurotrofina-3 (NT-3), Neurotrofina-4 (NT-4), fator de crescimento do nervo (NGF), fator de crescimento derivado de plaquetas (PDGF), Trombopoietina (TPO), fator alfa de transformação do crescimento (TGF-α), fator beta de transformação do crescimento (TGF-β), fator de necrose tumoral alfa (TNF-α), fator de crescimento endotelial vascular (VEGF), proteínas Wnt, Wnt1, Wnt2, Wnt2B, Wnt3, Wnt3A, Wnt4, Wnt5A, Wnt5B, Wnt6, Wnt7A, Wnt7B, Wnt8A, Wnt8B, Wnt9A, Wnt9B, Wnt10A, Wnt10B, Wnt11, Wnt16, fator de crescimento placentário (PGF), somatotrofina bovina fetal (FBS), insulina e fatores de crescimento semelhantes à insulina, IGF-1, IGF-2, proteínas de ligação a IGF, IGFBP1, IGFBP2, IGFBP3, IGFBP4, IGFBP5, IGFBP6, IGFBP7, hormônios peptídicos da família da relaxina, peptídeos semelhantes à relaxina (RLN), peptídeos semelhantes à insulina (INSL), RLN1 (relaxina 1), RLN2 (relaxina 2), RLN3 (relaxina 3), INSL3 (peptídeo 3 semelhante à insulina, peptídeo semelhante à insulina específico das células de Leydig), INSL4 (peptídeo 4 semelhante à insulina, peptídeo semelhante à insulina placentária precoce, ELIP), INSL5 (peptídeo 5 semelhante à insulina), INSL6 (peptídeo 6 semelhante à insulina), Gastrina, gastrina-34, gastrina-17, gastrina-14, pentagastrina, hormônio da tireoide (T4), hormônio liberador da tirotropina (TRH), vasopressina, hormônios proteicos, hormônios de glicoproteína, hormônio do crescimento (GH), insulina, LH, FSH, hormônio estimulador da tireoide (tirotropina, TSH), Angiotensina (AGT), Angiotensina I, Angiotensina II, Angiotensina III, Angiotensina IV, peptídeo natriurético atrial (ANP), NT-proBNP, peptídeo natriurético tipo B (BNP), peptídeo natriurético atrial (ANP), Anexina, anexina A-I (lipocortina I) e anexina A-II (anexina II), ou suas variantes.

10. Uso de um análogo de peptídeo, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de que é na fabricação de um medicamento para o tratamento de um acidente vascular cerebral, choque séptico, hipotensão sistêmica, parada cardíaca devido a um ataque cardíaco, arritmia cardíaca, doença ateromatosa com trombose, embolismo vindo do coração ou de vasos sanguíneos de qualquer órgão, vasoespasmos, aneurisma aórtico ou aneurismas em outros órgãos, estenose coronária, infarto do miocárdio, angina pectoris, pericardite, miocardite, mixodemia ou endocardite, síndrome de resposta inflamatória sistêmica pós-cirúrgica (SIRS) ou disfunção de órgão pós-cirúrgica, incluindo insuficiência renal pós-cirúrgica, tal como lesão aguda dos rins (AKI), nefrotoxicidade e/ou falência renal crônica (CRF), lesão por reperfusão, artropatia (doença das articulações), artrite reumatoide (RA), gota, esclerose múltipla, diabetes mellitus, intolerância à glicose, obesidade, sobrepeso, síndrome metabólica e diabetes mellitus gestacional.