CN105717226A - 一种运用高效液相色谱检测马来酸阿法替尼异构体及主要降解杂质的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及分析化学技术领域，公开了一种运用高效液相色谱检测马来酸阿法替尼异构体及主要降解杂质的方法。该方法将马来酸阿法替尼原料药或制剂用稀释液配制成检测溶液，以键合直链淀粉?三氯苯氨基甲酸酯为固定相，采用正己烷?乙醇?有机碱溶液为流动相并进行等度洗脱，在阿法替尼吸收波长下记录HPLC谱图。本发明方法采用三氯苯氨基甲酸酯为填料的色谱柱，以正己烷?乙醇?有机碱溶液为流动相，可以定量测定马来酸阿法替尼及其制剂存在的异构体的含量，能够完全分离阿法替尼、异构体和主要杂质，峰型较好，符合中国药典的规定，有效控制马来酸阿法替尼及含马来酸阿法替尼制剂产品的质量，本发明方法专属性强，灵敏度高，准确度良好。

Description

一种运用高效液相色谱检测马来酸阿法替尼异构体及主要降解杂质的方法

技术领域

本发明涉及分析化学技术领域，具体的说是涉及一种运用高效液相色谱检测马来酸阿法替尼异构体及主要降解杂质的方法。

背景技术

马来酸阿法替尼是一种不可逆转的ErbB家族阻断剂，可以选择且有效的阻滞ErbB家族受体(EGFR，HER2[ErbB2]和ErbB4)的信号传导和阻隔与癌细胞生长和分裂相关的主要通道。用于治疗晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的一线治疗及HER2阳性的晚期乳腺癌患者(用于治疗因表皮生长因子受体(EGFR)突变的非小细胞肺癌(NSCLC)患者)。

马来酸阿法替尼化学名：4-二甲氨基-丁-2(E)-烯酸[4-(3-氯-4-氟苯胺基)-7-(四氢呋喃-3(S)-氧基)-喹唑啉-6-基]酰胺,二-2(Z)-丁烯二酸盐。CAS号为850140-73-7；分子式为C₂₄H₂₅ClFN₅O₃·2C₄H₄O₄；结构式如下：

马来酸阿法替尼结构中存在一个手性碳，具有一个对映异构体杂质，其有效成分为马来酸阿法替尼S光学构型，为了有效监控马来酸阿法替尼最终产品中R-光学构型的含量，需建立专属性强、准确度高、操作简便的马来酸阿法替尼异构体检测方法，以对产品质量进行严格控制。阿法替尼包含1个对映异构体杂质、1个顺式异构体杂质和1个主要降解杂质，结构式如下：

表1阿法替尼异构体及主要降解杂质

CN104391058A中公开了一种阿法替尼及其异构体的检测方法，该方法条件下，所采用流动相为正已烷、乙醇、甲醇和二乙胺混合溶液，并规定在混合溶剂中，正已烷、乙醇、甲醇和二乙胺的体积比为550-650：350-250：100：0.1。但是该操作方法较为复杂，并且阿法替尼顺式异构体、杂质I与阿法替尼对映异构体(表1)均不能达到有效分离，该方法专属性差，操作复杂，准确性差，对产品的质量控制是有一定风险的。因此建立一种稳定有效的分析检测方法对马来酸阿法替尼进行质量控制是非常有必要的。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于建立一种运用高效液相色谱检测马来酸阿法替尼异构体及主要降解杂质的方法，使得所述方法可以定量测定马来酸阿法替尼原料药及其制剂存在的异构体及主要降解杂质的含量(即表1中各杂质)，从而有效控制马来酸阿法替尼及含马来酸阿法替尼制剂产品的质量，专属性强。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种运用高效液相色谱检测马来酸阿法替尼异构体的方法，包括：

将待测马来酸阿法替尼原料药或其制剂用稀释液配制成检测溶液，以键合直链淀粉-三氯苯氨基甲酸酯为固定相，采用正己烷-乙醇-有机碱溶液为流动相并进行等度洗脱，在阿法替尼吸收波长下记录HPLC谱图。

针对现有检测方法无法完全分离马来酸阿法替尼异构体的缺陷，本发明采用三氯苯氨基甲酸酯为填料的色谱柱，以正己烷-乙醇-有机碱溶液为流动相，可以定量测定马来酸阿法替尼及其制剂存在的异构体的含量，能够完全分离阿法替尼和各异构体，峰型较好，符合中国药典的规定。

作为优选，所述以键合直链淀粉-三氯苯氨基甲酸酯(别名ATPC，直链淀粉-(3-氯苯氨基甲酸酯))为填料的色谱柱可采用ID产品，规格4.6×250mm，5μm。

作为优选，所述有机碱溶液为乙二胺溶液、二乙胺溶液或三乙胺溶液。

进一步优选地，所述有机碱溶液中有机碱的体积百分比浓度为0.05-0.15％，更优选地，所述有机碱溶液中有机碱的体积百分比浓度为0.1％。

作为优选，所述流动相中正己烷、乙醇、有机碱溶液的体积比为79-81:19-21:0.05-0.15。在本发明的一些具体实施方式中，所述流动相可选择如下：

正己烷：乙醇：有机碱溶液＝79:21:0.15；

正己烷：乙醇：有机碱溶液＝80:20:0.1；

正己烷：乙醇：有机碱溶液＝81:19:0.05。

作为优选，所述梯度洗脱的流速为0.8mL/min，所述固定相的柱温为30℃，所述检测时的进样量为10μL，所述检测溶液中阿法替尼的浓度为0.5mg/mL，所述稀释液为无水乙醇。所述流速、柱温、进样量以及检测溶液中阿法替尼的含量等参数可根据实际检测中的情况进行调节，本发明所提供的优选值为参考值。

为了验证本发明能够分离出2种异构体及主要降解杂质，本发明选取马来酸阿法替尼、杂质D(阿法替尼顺式异构体)、杂质I及阿法替尼对映异构体(AFTN-R)，用无水乙醇溶解并稀释制成含阿法替尼0.5mg/ml、杂质D为2μg/ml、杂质I0.5μg/ml及AFTN-R0.5μg/ml的混合溶液，按照本发明提供的检测方法进行HPLC检测，结果显示，本发明所述方法能够有效分离阿法替尼、阿法替尼光学异构体、主要降解杂质杂质D(阿法替尼顺式异构体)与杂质I且达到良好的分离，符合中国药典的要求。而作为对比，本发明按照专利CN104391058A实施例1中记载的HPLC条件进行检测，结果显示，其无法实现阿法替尼对映异构体(AFTN-R)与主要降解杂质杂质D(阿法替尼顺式异构体)及杂质I的分离。

由以上技术方案可知，本发明方法采用键合直链淀粉-三氯苯氨基甲酸酯为填料的色谱柱，以正己烷-乙醇-有机碱溶液为流动相，可以定量测定马来酸阿法替尼及其制剂存在的异构体的含量，能够完全分离阿法替尼、异构体及主要降解杂质，峰型较好，符合中国药典的规定，有效控制马来酸阿法替尼及含马来酸阿法替尼制剂产品的质量，本发明方法专属性强，灵敏度高，准确度良好。

附图说明

图1所示为按照本发明方法检测马来酸阿法替尼与其异构体混合溶液的HPLC图谱；

图2所示为按照本发明方法检测空白溶剂的HPLC图谱；

图3所示为按照本发明方法检测马来酸阿法替尼原料药HPLC图谱；

图4所示为按照本发明方法检测马来酸阿法替尼制剂HPLC图谱；

图5所示为按照本发明方法检测马来酸阿法替尼制剂空白辅料HPLC图谱；

图6所示为按照现有专利方法检测马来酸阿法替尼与其异构体混合溶液的HPLC图谱。

具体实施方式

本发明实施例公开了一种运用高效液相色谱检测马来酸阿法替尼异构体的方法。本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的产品及方法进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

在具体实施方式中，所用各试剂、药品、试验环境等在未经特殊说明下，均来源相同和一致。

为了进一步理解本发明，下面结合实施例对本发明提供的一种运用高效液相色谱检测马来酸阿法替尼异构体的方法进行详细说明。

实施例1：马来酸阿法替尼与其异构体混合溶液的HPLC检测

仪器：岛津LC-20A高效液相色谱仪及其工作站VWD(或PDA)检测器；

色谱柱：ID，4.6×250mm，5μm；

流动相：正己烷-乙醇-二乙胺(体积比80:20:0.1)

检测波长：253nm；

流速：0.8mL/min；

进样量：10μL；

柱温：30℃；

稀释液：无水乙醇；

取马来酸阿法替尼、杂质D(阿法替尼顺式异构体)、杂质I及阿法替尼对映异构体(AFTN-R)适量，用无水乙醇溶解并稀释制成含阿法替尼0.5mg/ml、杂质D为2μg/ml、杂质I为0.5μg/ml及AFTN-R为0.5μg/ml的混合溶液。

分别取空白溶剂(稀释液)、混合溶液，按上述色谱条件进行测定，记录色谱图，结果见图1、图2。

图1中，保留时间为18.452min的色谱峰为阿法替尼色谱峰，图中各色谱峰依次为杂质D、阿法替尼对映异构体(AFTN-R)、阿法替尼、杂质I。由图中可以看出，混合溶液中AFTN-R与阿法替尼及其两个主要降解杂质杂质D、杂质I均能达到良好的分离，符合中国药典的要求。

实施例2：阿法替尼原料药检测

仪器：岛津LC-20A高效液相色谱仪及其工作站VWD(或PDA)检测器；

色谱柱：ID，4.6×250mm，5μm；

流动相：正己烷-乙醇-乙二胺(体积比79:21:0.15)

检测波长：253nm；

流速：0.8mL/min；

进样量：10μL；

柱温：30℃；

稀释液：无水乙醇；

分别取马来酸阿法替尼原料药适量，用无水乙醇溶解并稀释制成含阿法替尼0.5mg/ml的溶液。

取马来酸阿法替尼溶液，按上述色谱条件进行测定，记录色谱图，结果见图3。

图3中保留时间为19.725min的色谱峰为阿法替尼色谱峰，由图中可以看出，阿法替尼的光学纯度可以达到原料药的要求，本法可用于马来酸阿法替尼的质量监测。

实施例3：阿法替尼制剂检测

仪器：岛津LC-20A高效液相色谱仪及其工作站VWD(或PDA)检测器；

色谱柱：ID，4.6×250mm，5μm；

流动相：正己烷-乙醇-三乙胺(体积比81:19:0.05)

检测波长：253nm；

流速：0.8mL/min；

进样量：10μL；

柱温：30℃；

稀释液：无水乙醇；

取马来酸阿法替尼制剂细粉适量，约相当于阿法替尼25mg，置50mL量瓶中，加稀释液适量超声10min，再加稀释液定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。同法制备空白辅料溶液。

分别取空白辅料溶液及供试品溶液，按上述色谱条件进行测定，记录色谱图，结果见图4、图5。

图4中保留时间为19.032min的色谱峰为阿法替尼色谱峰，保留时间为17.585min的色谱峰为阿法替尼对映异构体(AFTN-R)色谱峰，由图中可以看出，空白辅料不干扰测定；本方法可以用于马来酸阿法替尼制剂的质量监测。

实施例4：现有方法的HPLC检测

仪器：岛津LC-20A高效液相色谱仪及其工作站VWD(或PDA)检测器

色谱柱：OZ-H，4.6×250mm，5μm；

流动相：正已烷－乙醇－甲醇－二乙胺(600：300：100：0.1)；

稀释液：正已烷－乙醇－甲醇－二乙胺(600：300：100：0.1)；

检测波长：256nm；

流速：0.7mL/min；

进样量：5μL；

柱温：30℃；

取马来酸阿法替尼、杂质D(阿法替尼顺式异构体)、杂质I及阿法替尼对映异构体(AFTN-R)适量，用无水乙醇溶解并稀释制成含阿法替尼0.5mg/ml、ZZ-D2μg/ml、杂质I0.5μg/ml及AFTN-R0.5μg/ml的混合溶液。按上述色谱条件进行测定，记录色谱图，结果见图6。

图6中阿法替尼峰的保留时间为10.389min，AFTN-R、杂质D及杂质I峰保留时间均为13.075min，可见现有专利方法无法实现阿法替尼对映异构体(AFTN-R)与主要降解杂质杂质D(阿法替尼顺式异构体)及杂质I分离。

而本发明采用的检测方法可使阿法替尼、阿法替尼对映异构体(AFTN-R)、主要降解杂质杂质D(阿法替尼顺式异构体)、杂质I四者良好分离(参见实施例1，图1)，且本发明所采用流动相为正已烷－乙醇－低级醇，三相混合等度测定的方法，操作较为简单。本发明所用方法还具有专属性强，准确度高的优点，通过该方法能快速准确地分离和测定马来酸阿法替尼及含马来酸阿法替尼制剂的对映异构体杂质。

以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。

Claims (10)

1.一种运用高效液相色谱检测马来酸阿法替尼异构体及主要降解杂质的方法，其特征在于，包括：

将待测马来酸阿法替尼原料药或其制剂用稀释液配制成检测溶液，以键合直链淀粉-三氯苯氨基甲酸酯为固定相，采用正己烷-乙醇-有机碱溶液为流动相并进行等度洗脱，在阿法替尼吸收波长下记录HPLC谱图。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述有机碱溶液为乙二胺溶液、二乙胺溶液或三乙胺溶液。

3.根据权利要求1或2所述方法，其特征在于，所述有机碱溶液中有机碱的体积百分比浓度为0.05-0.15％。

4.根据权利要求3所述方法，其特征在于，所述有机碱溶液中有机碱的体积百分比浓度为0.1％。

5.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述流动相中正己烷、乙醇、有机碱溶液的体积比为79-81:19-21:0.05-0.15。

6.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述阿法替尼的吸收波长为253nm。

7.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述等度洗脱的流速为0.8mL/min。

8.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述固定相的柱温为30℃。

9.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述检测溶液中阿法替尼的浓度为0.5mg/mL。

10.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述稀释液为无水乙醇。