CN105588905A - 一种芦荟多糖指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种芦荟多糖指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱，属于中药及其制品和功能食品、化妆品原料及其制品的指纹图谱技术领域。本发明芦荟多糖指纹图谱的构建方法包括从芦荟叶中提取芦荟多糖，将提取的芦荟多糖制备成GPC分析供试液，经凝胶渗透色谱仪分离检测，获得芦荟多糖的指纹图谱。本发明还提供了由该构建方法得到的芦荟多糖标准指纹图谱，该图谱可作为检测库拉索芦荟多糖的一种工具，用于同一产地不同批次或不同产地库拉索芦荟凝胶制品的内在质量控制。本发明供试液制备简便，GPC色谱条件容易实现，指纹图谱测定方法精密度高，重现性和稳定性好。
Description
技术领域
本发明涉及一种芦荟多糖指纹图谱的构建方法，具体涉及一种芦荟多糖的GPC指纹图谱的构建方法以及由此方法所得到的芦荟多糖标准指纹图谱，属于中药及其制品和功能食品、化妆品原料及其制品的指纹图谱技术领域。
背景技术
库拉索芦荟(AloebarbadensisMill或AloeveraL.)是百合科芦荟属植物[ChinaRuralTechnologyDevelopmentCenter,AloeIndustryCommitteeofChinaAssociationforPromotionofNon-GovernmentalSci-TechEnterprises.DevelopmentreportofaloeindustryinChina.Beijing:ChinaLabourandSocialSecurityPublishingHouse,2011.]，具有杀菌、消炎、抗辐射[SainiDK,SainiRM.EnvironToxicolPharmacol,2011,(31):427.]、抗肿瘤、抗衰老、抗内毒素、免疫调节等多种药理作用[HammanJH.Molecules,2008,(13):1599；ChoiS,ChungMH.SeminIntegrMed,2003,1(1):53；LeeEM,BaiHW,LeeSK,etal.RadiatPhysChem,2012,(2):33.]，已广泛用于药品、食品、化妆品和洗涤用品等行业[MaenthaisongR,ChaiyakunaprukN,NiruntrapornS,etal.BURNS,2007,(33):713；Dal’BeloSE,GasparLR,MaiaCamposPMBG.SkinResTechnol,2006,(12):241；任海毅，王巧娥，董银卯，等.药物评价研究,2012,35(6):431；周伟东，中国农村科技,2014,(8):56.]。然而，由于芦荟活性成分复杂，芦荟产品的质量鉴定与品质分析一直是困扰芦荟行业的难题，建立芦荟产品的质量控制与科学评价方法也一直是我国芦荟产业急需解决的关键技术问题[万金志，钟英，黄运喜，等.天然产物研究与开发,2014,26(6):970.]。
研究表明，芦荟的多重功效来源于其中多种成分的协同作用，其中最重要的是芦荟苷、芦荟大黄素等蒽醌类成分以及以乙酰化甘露聚糖为主的多糖类成分[万金志，徐新军，钟佳胜，等.今日药学,2012,22(12):753；陈国和，刘玉鑫，张新申，等.化学研究与应用,2002,14(2):133.]。芦荟蒽醌类物质主要存在于芦荟叶皮中，是芦荟药品的活性成分，其质量分析与评价方法已有很多报道[陈国和，刘玉鑫，张新申，等.化学研究与应用,2002,14(2):133；WuXF,DingWJ,ZhongJS,etal.JPharmBiomedAnal,2013,(80):94；陈金东，李蔚，李素云.色谱,2002,20(4):367；陈欣霞，张宇航，林颖，等.天然产物研究与开发,2009,21(5):817.]，而芦荟多糖主要存在于芦荟凝胶中[陈国和，刘玉鑫，张新申，等.化学研究与应用,2002,14(2):133.]，是芦荟保健食品、普通食品、化妆品、洗涤用品的主要活性成分[魏洋，王革辉.针织工业,2012,(2):46；卫生部等6部局关于含库拉索芦荟凝胶食品标识规定的公告.(2009-02-06).http://www.moh.gov.cn/mohbgt/s9506/200902/39137.shtml；甘丽萍，刘其元，吴应梅，等.安徽农学通报,2009,15(5):198；钟英，董银卯，段盛林.中国农业科技导报,2008,10(5):35.]，因此芦荟多糖的分析与检测是评价芦荟食品、化妆品和洗涤用品等非药用产品质量的主要依据。
目前，芦荟多糖含量的测定方法主要有分光光度法[杜海燕，孙家跃.轻工标准与质量,2004,(3):42；许芳萍，顾文秀，高燕，等.分析试验室,2007,26(12):64.]、气相色谱法[崔莉凤，王微.色谱,2003,21(1):88.]、核磁共振波谱法[BozziA,PerrinC,AustinS,etal.FoodChem,2007,(103):22.]、高效薄层色谱法[LoboR,PrabhuKS,ShirwaikarA,etal.Fitoterapia,2010,(81):231.]等。分光光度法包括苯酚-硫酸法、刚果红法[杜海燕，孙家跃.轻工标准与质量,2004,(3):42.]和茜红素法[许芳萍，顾文秀，高燕，等.分析试验室,2007,26(12):64.]，其中苯酚硫酸法的特异性、选择性差，不能有效地区别麦芽糖、淀粉、糊精等非芦荟多糖成分,而这些常被用于掺杂在芦荟制品中以替代芦荟多糖[杜海燕，孙家跃.轻工标准与质量,2004,(3):42.]；刚果红法可避免芦荟制品的常见掺假物环糊精和葡萄糖等的干扰，但不能排除麦芽糊精的干扰[杜海燕，孙家跃.轻工标准与质量,2004,(3):42.]；茜红素法[许芳萍，顾文秀，高燕，等.分析试验室,2007,26(12):64.]可避免麦芽糊精、环糊精、淀粉、蔗糖和葡萄糖等常见芦荟制品掺假物的干扰，但只能给出芦荟多糖的总量，不能提供与芦荟多糖的活性密切相关的分子量及其分布等信息。此外，气相色谱法[崔莉凤，王微.色谱,2003,21(1):88.]采用柱前衍生的方法将芦荟多糖水解为单糖，只能给出芦荟多糖的单糖组成；核磁共振波谱法[BozziA,PerrinC,AustinS,etal.FoodChem,2007,(103):22.]设备昂贵，不适合大范围推广；高效薄层色谱法[LoboR,PrabhuKS,ShirwaikarA,etal.Fitoterapia,2010,(81):231.]虽然能特异性的测定乙酰化甘露聚糖的含量，但操作繁琐，而且也不能提供与芦荟多糖的活性密切相关的分子量及其分布等信息。中药指纹图谱可全面反映中药材或注射剂的化学成分信息，是从整体相似性角度定性或定量评价中药材或注射剂质量的有效方法[国家食品药品监督管理总局.中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)).(2008-08-15).http://www.sda.gov.cn/WS01/CL0237/15768.html；李强，杜思邈，张忠亮，等.中草药,2013,44(22):3095；孙国祥，豆小文，杨兰萍，等.色谱,2013,31(5):456；游佳莉，王毓杰，张艺，等.中国中药杂志,2015,40(2):362；甘秀梅，梁志远，姜金仲，等.中药材,2015,38(2):275；王亮，张振秋，邓仕任，等.中国实验方剂学杂志,2015,21(2):80；王静，王强，唐军，等.分析试验室,2013,32(3):68；张兴旺，文怀秀，赵晓辉，等.分析试验室,2010,29(supp1):173；傅宇飞，张佩佩，潘再法，等.分析试验室,2013,32(8):103.]。鉴于芦荟凝胶具有和中药相似的整体性和模糊性，本发明专利借鉴中药指纹图谱的技术和方法，以库拉索芦荟凝胶为研究对象，建立芦荟凝胶多糖成分凝胶渗透色谱(GPC)指纹图谱的技术和方法，旨在为芦荟产品的真伪鉴别和品质评价提供参考依据。
发明内容
本发明的目的是提供一种芦荟多糖指纹图谱的构建方法，借此可将芦荟多糖指纹图谱作为芦荟食品、保健品、洗涤用品等终端产品的真伪鉴别和品质评价的主要指标之一。本发明还同时提供了芦荟多糖的标准指纹图谱。
为达到上述目的本发明采用了以下技术手段：
一种芦荟多糖指纹图谱的构建方法，其特征在于，从芦荟叶中提取芦荟多糖，将提取的芦荟多糖制备成GPC分析供试液，经凝胶渗透色谱仪分离检测，获得芦荟多糖的指纹图谱。
在本发明中，优选的，包括如下步骤：
(1)芦荟多糖的制备
取库拉索芦荟鲜叶适量，洗净后去皮，芦荟凝胶清洗、切块，用搅拌机初步破碎后置于闪式提取器进一步匀浆处理，得凝胶匀浆液；凝胶匀浆液减压抽滤，收集滤液进行浓缩，浓缩液冷却后加入乙醇溶液，4℃冷藏过夜，离心得沉淀；待沉淀中的乙醇挥干后，放入-40℃冰箱冷冻，然后置于真空冷冻干燥机中冻干，冻干粉研磨，即得芦荟多糖；
(2)芦荟多糖GPC分析供试液的制备
精确称取步骤(1)制备的芦荟多糖适量，用NaNO3溶液溶解后，在4℃冰箱放置12h后取出，恢复至室温后用滤膜过滤，即得芦荟多糖GPC分析供试液；
(3)芦荟多糖的GPC分析
精密吸取步骤(2)制备的芦荟多糖GPC分析供试液，经凝胶渗透色谱仪分离检测；其中，将ShodexSUGARKS-805色谱柱和KS-803色谱柱串联使用，流动相为NaNO3溶液，采用等度洗脱得到芦荟多糖的指纹图谱。
在本发明中，优选的，步骤(1)中所述的浓缩为60℃旋蒸浓缩；所述的浓缩液冷却后加入乙醇溶液为浓缩液冷却后边搅拌边加入无水乙醇至其体积分数为80％；所述的离心为10000rad/min离心15min。
在本发明中，优选的，步骤(2)中所述的芦荟多糖GPC分析供试液的制备为：精确称取步骤(1)制备的芦荟多糖适量，用含质量分数为0.2‰NaN3的0.1mol/LNaNO3溶液定容到7.0mg/mL，在4℃冰箱放置12h后取出，恢复至室温后用0.22μm滤膜过滤，即得芦荟多糖GPC分析供试液。
在本发明中，优选的，步骤(3)中所述的芦荟多糖的GPC分析的条件为：色谱柱为按照ShodexSUGARKS-805色谱柱在前，KS-803色谱柱在后的顺序将两色谱柱串联使用；流动相为含质量分数为0.2‰NaN3的0.1mol/LNaNO3溶液，洗脱速度为0.8ml/min；色谱柱和凝胶渗透色谱仪的示差折光检测器的温度分别为60℃和50℃；进样量为50μL。
本发明还提供了由上述构建方法得到的芦荟多糖标准指纹图谱，其特征在于，比较同一产地不同批次或不同产地芦荟多糖样品的指纹图谱，确定共有特征峰4个，以2号峰作为参照峰，计算指纹图谱中各特征峰的相对保留时间，各特征峰的相对保留时间的相对标准偏差RSD均小于3％；即：
1号峰，平均相对保留时间为0.468，RSD为0.8～2.24％；
2号峰，平均相对保留时间为0.490，RSD为0；
3号峰，平均相对保留时间为0.508，RSD为0.01～0.02％；
4号峰，平均相对保留时间为0.523，RSD为0.02～0.06％。
与现有技术相比，本发明的有益效果体现在：
(1)本发明供试液制备简便，GPC色谱条件容易实现；
(2)本发明串联使用ShodexSUGARKS-805色谱柱和KS-803色谱柱(KS-805色谱柱在前，KS-803色谱柱在后)，保证了芦荟凝胶多糖中的4个多糖成分得到分离，且峰形对称，满足GPC指纹图谱制作的要求；
(3)本发明指纹图谱测定方法精密度高，重现性和稳定性好；
(4)本发明所建立的芦荟多糖标准指纹图谱可作为检测库拉索芦荟多糖的一种工具，用于同一产地不同批次或不同产地库拉索芦荟凝胶制品的内在质量控制。
附图说明
图1为10批次北京产芦荟凝胶多糖的GPC指纹图谱；
图2为库拉索芦荟凝胶多糖成分标准GPC指纹图谱；
图3为10个产地芦荟凝胶多糖的GPC指纹图谱。
具体实施方式
下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
本发明中所出现的缩略语的说明：
GPC凝胶渗透色谱
RSD相对标准偏差
RID示差折光检测器
实施例1北京产芦荟多糖标准指纹图谱的建立方法
1仪器、试剂与材料
1.1实验仪器
Waters2695凝胶色谱仪及Waters2414示差折光检测器(美国沃特斯公司)，数据由Empower3数据处理软件(美国沃特斯公司)和中药色谱指纹图谱相似度评价系统(国家药典委员会，2004A版)记录和处理；CP224S分析天平(德国赛多利斯有限公司)；JHBE-50T闪式提取器(河南金鼐科技发展有限公司)；RE-2000旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)；BM253榨汁机(美的集团有限公司)；BenchTop4K真空冷冻干燥机(美国Virtis公司)。
1.2实验试剂与材料
1.2.1化学试剂
硝酸钠、叠氮钠、无水乙醇等常用试剂均为国产分析纯；实验用纯净水为杭州娃哈哈集团有限公司瓶装水。
1.2.2芦荟新鲜叶片
库拉索芦荟鲜叶购自北京顺义，10个不同批次依次编号为S1～S10。所采库拉索芦荟鲜叶均为3年生的成熟芦荟叶片。
2芦荟鲜叶多糖的制备
取库拉索芦荟鲜叶适量，洗净后去皮，芦荟凝胶清洗、切块，用搅拌机初步破碎后置于闪式提取器进一步匀浆处理，得凝胶匀浆液；凝胶匀浆液减压抽滤，滤液收集并于60℃旋蒸浓缩，浓缩液冷却后边搅拌边加入无水乙醇至其体积分数为80％，4℃冷藏过夜，次日10000rad/min离心15min，得沉淀；待沉淀乙醇挥干后，放入-40℃冰箱冷冻，然后置于真空冷冻干燥机中冻干，冻干粉研磨，即得芦荟凝胶多糖，待分析。
3芦荟凝胶多糖GPC分析供试液的制备
精确称取待分析芦荟凝胶多糖适量，用0.1mol/LNaNO3溶液(含质量分数为0.2‰NaN3)定容到7.0mg/mL，在4℃冰箱放置12h后取出，恢复至室温后用0.22μm滤膜过滤，即得芦荟凝胶多糖GPC分析的供试品溶液。
4芦荟凝胶多糖的凝胶渗透色谱(GPC)分析
芦荟凝胶多糖成分GPC指纹图谱分析的色谱条件为：色谱柱为ShodexSUGARKS-805色谱柱和KS-803色谱柱串联使用(KS-805色谱柱在前，KS-803色谱柱在后)，0.1mol/LNaNO3溶液(含质量分数为0.2‰NaN3)以0.8ml/min的速度洗脱，色谱柱和RID温度分别为60℃和50℃，进样量：50μL。在此条件下进样分析同一产地不同批次芦荟鲜叶多糖及芦荟产品多糖，得到芦荟凝胶多糖的GPC色谱指纹图谱并计算色谱图中各峰的相对保留时间和各峰的相对峰面积。
5标准指纹图谱的建立
10批次北京产芦荟凝胶多糖的GPC指纹图谱见图1。库拉索芦荟凝胶多糖成分标准GPC指纹图谱见图2。对10批次北京产库拉索芦荟凝胶多糖的GPC色谱图进行比较，确定共有特征峰4个，并将色谱数据导入指纹图谱专用软件(中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版))得到由其共有特征峰构成的芦荟凝胶多糖的标准色谱GPC指纹图谱(见图2)。4个共有特征峰的相对保留时间(相对于图2中的2号峰的保留时间)(Rt)的相对标准偏差RSD均小于1％，相对峰面积(相对于图2中的2号峰的峰面积)的相对标准偏差RSD为1.22％～3.42％(详见表1)，2号峰对应一种特定分子量的芦荟多糖成分。
表110批次北京产库拉索芦荟凝胶多糖GPC指纹图谱共有峰的相对峰面积和相对保留时间的RSD
6指纹图谱重现性试验
分别准确称取北京产芦荟鲜叶样品5份，按照上述方法制备芦荟凝胶多糖和芦荟多糖GPC分析供试液，并在同样的上述色谱条件下进行GPC分析，分别对共有峰的相对保留时间及相对峰面积(相对于图2中的2号峰)进行统计，RSD均小于3％(详见表2)。
表2重现性实验结果(n＝5)
7指纹图谱精密度试验
以北京产库拉索芦荟鲜叶样品为供试品，按照上述方法制备芦荟凝胶多糖和芦荟多糖GPC分析供试液，并在同样的上述色谱条件下进行GPC分析，分别对共有峰的相对保留时间及相对峰面积(相对于图2中的2号峰)进行统计，它们的相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于3％。
8指纹图谱稳定性试验
以北京产库拉索芦荟鲜叶样品为供试品，按照上述方法制备芦荟凝胶多糖和芦荟多糖GPC分析供试液，并在同样的上述色谱条件下进行GPC分析，每2小时进样一次，考察24小时样品溶液稳定性，分别对共有峰的相对保留时间及相对峰面积(相对于图2中的2号峰)进行统计，RSD均小于3％。
以上试验结果显示，上述指纹图谱测定方法精密度高、稳定性和重现性好。
9库拉索芦荟凝胶多糖GPC色谱标准指纹图谱相似度评价
利用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版)”进行相似度评价，结果见表3。
表310批次北京产库拉索芦荟凝胶多糖成分相似度评价
经“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版)”软件自动匹配后生成的共有模式图谱R与10批次北京产库拉索芦荟凝胶多糖的相似度均大于0.9，符合《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)》的有关规定。同一产地不同批次的库拉索芦荟凝胶产品具有很好的批间一致性，所建立的GPC标准指纹图谱可作为检测库拉索芦荟凝胶多糖的一种工具，用于同一产地不同批次库拉索芦荟凝胶制品的内在质量控制。
实施例2不同产地芦荟多糖标准指纹图谱的建立方法
1仪器、试剂与材料
1.1实验仪器
Waters2695凝胶色谱仪及Waters2414示差折光检测器(美国沃特斯公司)，数据由Empower3数据处理软件(美国沃特斯公司)和中药色谱指纹图谱相似度评价系统(国家药典委员会，2004A版)记录和处理；CP224S分析天平(德国赛多利斯有限公司)；JHBE-50T闪式提取器(河南金鼐科技发展有限公司)；RE-2000旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)；BM253榨汁机(美的集团有限公司)；BenchTop4K真空冷冻干燥机(美国Virtis公司)。
1.2实验试剂与材料
1.2.1化学试剂
硝酸钠、叠氮钠、无水乙醇等常用试剂均为国产分析纯；实验用纯净水为杭州娃哈哈集团有限公司瓶装水。
1.2.2芦荟新鲜叶片
库拉索芦荟鲜叶购自北京、海南、陕西、云南、广东、河北、大连等全国10个不同产地依次编号为S1～S10。所采库拉索芦荟鲜叶均为3年生的成熟芦荟叶片。
2芦荟鲜叶多糖的制备
取库拉索芦荟鲜叶适量，洗净后去皮，芦荟凝胶清洗、切块，用搅拌机初步破碎后置于闪式提取器进一步匀浆处理，得凝胶匀浆液；凝胶匀浆液减压抽滤，滤液收集并于60℃旋蒸浓缩，浓缩液冷却后边搅拌边加入无水乙醇至其体积分数为80％，4℃冷藏过夜，次日10000rad/min离心15min，得沉淀；待沉淀乙醇挥干后，放入-40℃冰箱冷冻，然后置于真空冷冻干燥机中冻干，冻干粉研磨，即得芦荟凝胶多糖，待分析。
3芦荟凝胶多糖GPC分析供试液的制备
精确称取待分析芦荟凝胶多糖适量，用0.1mol/LNaNO3溶液(含质量分数为0.2‰NaN3)定容到7.0mg/mL，在4℃冰箱放置12h后取出，恢复至室温后用0.22μm滤膜过滤，即得芦荟凝胶多糖GPC分析的供试品溶液。
4芦荟凝胶多糖的凝胶渗透色谱(GPC)分析：
芦荟凝胶多糖成分GPC指纹图谱分析的色谱条件为：色谱柱为ShodexSUGARKS-805色谱柱和KS-803色谱柱串联使用(KS-805色谱柱在前，KS-803色谱柱在后)，0.1mol/LNaNO3溶液(含质量分数为0.2‰NaN3)以0.8ml/min的速度洗脱，色谱柱和RID温度分别为60℃和50℃，进样量：50μL。在此条件下进样分析不同产地芦荟鲜叶多糖及芦荟产品多糖，得到芦荟凝胶多糖的色谱指纹图谱并计算色谱图中各峰的相对保留时间及各峰的相对峰面积。
5标准指纹图谱的建立
库拉索芦荟凝胶多糖成分标准GPC指纹图谱见图2。10个产地芦荟凝胶多糖的GPC指纹图谱见图3。通过对10批次不同产地库拉索芦荟凝胶多糖的GPC色谱图进行比较，确定4个共有特征峰，并将色谱数据导入指纹图谱专用软件(中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版))得到由其共有特征峰构成的芦荟凝胶多糖的标准GPC色谱指纹图谱(图2)。共有特征峰的相对保留时间(相对于图2中的2号峰的保留时间)(Rt)的相对标准偏差RSD均小于3％，相对峰面积(相对于图2中的2号峰的峰面积)的相对标准偏差RSD为3.79％～77.64％(详见表4)，2号峰对应一种特定分子量的芦荟多糖成分。
表410个不同产地库拉索芦荟凝胶多糖成分GPC指纹图谱共有峰的相对峰面积和相对保留时间的RSD
610个不同产地库拉索芦荟凝胶多糖GPC色谱标准指纹图谱相似度评价
利用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版)”进行相似度评价，结果见表5。
表510个不同产地库拉索芦荟凝胶多糖成分相似度评价
经“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版)”软件自动匹配后生成的共有模式图谱R与10个不同产地库拉索芦荟凝胶多糖的相似度均大于0.9，符合《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)》的有关规定。不同产地的库拉索芦荟凝胶产品具有很好的产地间一致性，所建立的GPC标准指纹图谱可作为检测库拉索芦荟凝胶多糖的一种工具，用于不同产地库拉索芦荟凝胶制品的内在质量控制。
不同产地芦荟样品的指纹图谱与标准指纹图谱相似，具有标准指纹图谱特征，同时共有峰的相对差异较大，表明具有地区特征。
Claims (6)
1.一种芦荟多糖指纹图谱的构建方法，其特征在于，从芦荟叶中提取芦荟多糖，将提取的芦荟多糖制备成GPC分析供试液，经凝胶渗透色谱仪分离检测，获得芦荟多糖的指纹图谱。
2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)芦荟多糖的制备
取库拉索芦荟鲜叶适量，洗净后去皮，芦荟凝胶清洗、切块，用搅拌机初步破碎后置于闪式提取器进一步匀浆处理，得凝胶匀浆液；凝胶匀浆液减压抽滤，收集滤液进行浓缩，浓缩液冷却后加入乙醇溶液，4℃冷藏过夜，离心得沉淀；待沉淀中的乙醇挥干后，放入-40℃冰箱冷冻，然后置于真空冷冻干燥机中冻干，冻干粉研磨，即得芦荟多糖；
(2)芦荟多糖GPC分析供试液的制备
精确称取步骤(1)制备的芦荟多糖适量，用NaNO3溶液溶解后，在4℃冰箱放置12h后取出，恢复至室温后用滤膜过滤，即得芦荟多糖GPC分析供试液；
(3)芦荟多糖的GPC分析
精密吸取步骤(2)制备的芦荟多糖GPC分析供试液，经凝胶渗透色谱仪分离检测；其中，将ShodexSUGARKS-805色谱柱和KS-803色谱柱串联使用，流动相为NaNO3溶液，采用等度洗脱得到芦荟多糖的指纹图谱。
3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，步骤(1)中所述的浓缩为60℃旋蒸浓缩；所述的浓缩液冷却后加入乙醇溶液为浓缩液冷却后边搅拌边加入无水乙醇至其体积分数为80％；所述的离心为10000rad/min离心15min。
4.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，步骤(2)中所述的芦荟多糖GPC分析供试液的制备为：精确称取步骤(1)制备的芦荟多糖适量，用含质量分数为0.2‰NaN3的0.1mol/LNaNO3溶液定容到7.0mg/mL，在4℃冰箱放置12h后取出，恢复至室温后用0.22μm滤膜过滤，即得芦荟多糖GPC分析供试液。
5.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，步骤(3)中所述的芦荟多糖的GPC分析的条件为：色谱柱为按照ShodexSUGARKS-805色谱柱在前，KS-803色谱柱在后的顺序将两色谱柱串联使用；流动相为含质量分数为0.2‰NaN3的0.1mol/LNaNO3溶液，洗脱速度为0.8ml/min；色谱柱和凝胶渗透色谱仪的示差折光检测器的温度分别为60℃和50℃；进样量为50μL。
6.根据权利要求1-5任一项所述的构建方法得到的芦荟多糖标准指纹图谱，其特征在于，比较同一产地不同批次或不同产地芦荟多糖样品的指纹图谱，确定共有特征峰4个，以2号峰作为参照峰，计算指纹图谱中各特征峰的相对保留时间，各特征峰的相对保留时间的相对标准偏差RSD均小于3％；即：
1号峰，平均相对保留时间为0.468，RSD为0.8～2.24％；
2号峰，平均相对保留时间为0.490，RSD为0；
3号峰，平均相对保留时间为0.508，RSD为0.01～0.02％；
4号峰，平均相对保留时间为0.523，RSD为0.02～0.06％。
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