CN110174478A - 酒中β-葡聚糖分子量的测定方法 - Google Patents
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Abstract
一种酒中β‑葡聚糖分子量的测定方法，涉及测量技术领域。酒中β‑葡聚糖分子量的测定方法包括以下步骤：将酒蒸干后的固形物溶解于硝酸钠水溶液，得到待测液；采用凝胶渗透色谱仪，以硝酸钠水溶液作为流动相对待测液进行检测，得到β‑葡聚糖的分子量分布范围。本申请提供的酒中β‑葡聚糖分子量的测定方法能够对酒中β‑葡聚糖的分子量进行准确的测定。
Description
技术领域
本申请涉及测量技术领域，具体而言，涉及一种酒中β-葡聚糖分子量的测定方法。
背景技术
青稞是禾本科大麦属的一种禾谷类作物，其主要生长在我国西北、西南特别是青海、甘肃等地，青稞作为藏民传统的主要农作物在我国拥有悠久的栽培和食用历史。
现代研究证明，青稞是目前世界上麦类作物中β-葡聚糖最高的作物，β-葡聚糖是青稞胚乳、糊粉层细胞壁的主要成分，据检测青稞中β-葡聚糖平均含量为6.57％，优良品种青稞25的β-葡聚糖含量可达到8.6％，是小麦平均含量的50倍。β-葡聚糖能够通过减少肠道粘膜与致癌物质的接触和间接抑制致癌维生物作用来预防结肠癌，还可以通过降血脂和降胆固醇的合成来预防心血管疾病，可以通过控制血糖防治糖尿病，β-葡聚糖还具有提高机体防御能力、调节生理节律的作用。因此，酒生产者尝试将青稞中的β-葡聚糖经过提取纯化后加入酒体制成酒以用于利用其具有的降血糖、提高免疫力等功效。
但是β-葡聚糖是以β-D-吡喃葡萄糖为基本结构单元的一类非淀粉多糖，其有两种同分异构体，包括β-(1-3)葡聚糖和β-(1-4)葡聚糖，分子量分布从几千到几百万，不同分子量的β-葡聚糖功效及药理作用均存在差别，而目前尚无对酒中β-葡聚糖分子量进行测定的研究，导致酒生产者难以控制酒中β-葡聚糖的分子量以进一步控制酒的保健效果。
发明内容
本申请的目的在于提供一种酒中β-葡聚糖分子量的测定方法，以对酒中β-葡聚糖的分子量进行准确的测定。
本申请的实施例是这样实现的：
第一方面，本申请实施例提供一种酒中β-葡聚糖分子量的测定方法，其包括以下步骤：
将酒蒸干后的固形物溶解于硝酸钠水溶液，得到待测液；
采用凝胶渗透色谱仪，以硝酸钠水溶液作为流动相对所述待测液进行检测，得到β-葡聚糖的分子量。
本申请提供的酒中β-葡聚糖分子量的测定方法是将含有β-葡聚糖的酒蒸干得到固形物，并将固形物溶解于硝酸钠水溶液得到的待测液使用凝胶渗透色谱仪进行检测，在硝酸钠水溶液作为流动相时检测得到β-葡聚糖的分子量分布范围。该酒中β-葡聚糖分子量的测定方法具有前处理方法简单、检测结果重复性好、效率高等优点，能够准确高效的检测酒中的β-葡聚糖分子量范围。
在一些可选的实施方案中，硝酸钠水溶液中硝酸钠的浓度为0.1～0.15mol/l。
上述技术方案中，通过选取浓度为0.1～0.15mol/l的硝酸钠水溶液溶解酒蒸干后的固形物制备待测液及作为流动相，能够将酒中含有的β-葡聚糖制备成液相进行测试，并避免引入杂质影响β-葡聚糖分子量测试的准确性。
在一些可选的实施方案中，采用凝胶渗透色谱仪进行检测时，流动相的流速为0.1～0.5ml/min，进样量为300～500μl，色谱柱的柱温为20～30℃。
上述技术方案中，通过设置流动相的流速为0.1～0.5ml/min，色谱柱的柱温为20～30℃，进样量为300～500μl，能够保证检测过程的稳定进行并测量得到准确的β-葡聚糖分子量。
在一些可选的实施方案中，将酒在60～80℃的水浴下蒸干得到固形物。
上述技术方案中，利用60～80℃的水浴将酒蒸干得到固形物，能够使酒中的β-葡聚糖充分的析出至固形物中以便于检测其分子量，同时也能够避免加热温度剧烈变化及温度过高破坏β-葡聚糖的分子结构，保证检测结果的准确性。
在一些可选的实施方案中，酒和硝酸钠水溶液的体积比为10～15：1～1.5。
上述技术方案中，采用适量的硝酸钠水溶液来溶解酒蒸干后得到的固形物制备待测液进行检测，能够利用硝酸钠水溶液充分的溶解固形物中的β-葡聚糖，并便于与流动相使用的硝酸钠水溶液配合进行β-葡聚糖的分子量检测，避免引入其他成分影响检测的准确性。
在一些可选的实施方案中，使用凝胶渗透色谱仪对待测液进行检测之前，使用微孔膜对待测液进行过滤。
上述技术方案中，采用微孔膜对准备使用凝胶渗透色谱仪进行检测的待测液进行过滤，能够预先去除待测液中含有的灰尘杂质，避免灰尘在检测过程中产生光散色现象干扰待测液中β-葡聚糖的分子量检测，保证酒中β-葡聚糖的分子量检测的准确性。
在一些可选的实施方案中，微孔膜的孔径为0.2～0.5μm。
上述技术方案中，选取孔径为0.2～0.5μm的微孔膜对准备使用凝胶渗透色谱仪进行检测的待测液进行过滤，能够过滤可能对β-葡聚糖的分子量检测造成影响的灰尘杂质，保证测量结果的准确性。
在一些可选的实施方案中，流动相使用前使用膜进行过滤。
上述技术方案中，流动相使用前采用膜进行过滤，能够预先去除流动相中含有的灰尘和杂质，避免对待测液中β-葡聚糖的分子量检测造成影响，保证β-葡聚糖分子量检测的准确性。
在一些可选的实施方案中，膜的孔径为0.2～0.5μm。
上述技术方案中，选取孔径为0.2～0.5μm的膜对凝胶渗透色谱仪使用的流动相进行过滤，能够过滤可能对β-葡聚糖的分子量检测造成影响的杂质，保证测量结果的准确性。
具体实施方式
为使本申请实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
下面对本申请实施例的酒中β-葡聚糖分子量的测定方法进行具体说明。
本申请提供了一种酒中β-葡聚糖分子量的测定方法，其包括以下步骤：
将酒蒸干后的固形物溶解于硝酸钠水溶液，得到待测液；
采用凝胶渗透色谱仪，以硝酸钠水溶液作为流动相对待测液进行检测，得到β-葡聚糖的分子量；
其中，本申请所述的酒为含有β-葡聚糖的保健酒，具体的，该酒可以为添加了青稞提取物的保健酒。凝胶渗透色谱仪(GPC仪)可以采用安捷伦1260液相色谱系统，其包括色谱柱、进样器、泵、检测器及数据采集和处理系统，色谱柱为不锈钢材质制成且填料为特种凝胶(多孔性填料)，进样器和泵及用于将流动相以恒定速度流入色谱柱，检测器是包含有折光示差检测器和激光检测器的Wyatt检测器，数据采集和处理系统为Wyatt ASTRA7.1.3工作站。
在一些可选的实施方案中，硝酸钠水溶液中硝酸钠的浓度为0.1～0.15mol/l，其中，硝酸钠水溶液中硝酸钠的浓度可以为0.10mol/l、0.11mol/l、0.12mol/l、0.13mol/l、0.14mol/l、0.15mol/l及这些数值之间的数值。
在一些可选的实施方案中，采用凝胶渗透色谱仪检测时，流动相的流速为0.1～0.5ml/min，色谱柱的柱温为20～30℃，进样量为300～500μl；可选的，流动相的流速可以为0.1ml/min、0.2ml/min、0.3ml/min、0.4ml/min、0.5ml/min及这些数值之间的数值；可选的，柱温可以为20℃、21℃、22℃、23℃、24℃、25℃、26℃、27℃、28℃、29℃、30℃；可选的，流动相的进样量可以为300μl、350μl、400μl、450μl、500μl及这些数值之间的数值。
在一些可选的实施方案中，将酒在60～80℃的水浴下蒸干得到固形物。其中，水浴的温度还可以为60℃、65℃、70℃、75℃、80℃及上述两个水浴温度数值之间的温度。
在一些可选的实施方案中，制备待测液时，酒和硝酸钠水溶液的体积比为10～15：1～1.5。即将酒蒸干后的固形物溶解于硝酸钠水溶液时，用于蒸干制备固形物的酒的体积份数为10份、11份、12份、13份、14份、15份或这些份数之间的数值时，用于溶解固形物的硝酸钠水溶液的体积份数为1份、1.1份、1.2份、1.3份、1.4份、1.5份或这些份数之间的数值；可选的，用于溶解固形物的硝酸钠水溶液中硝酸钠的含量可以为0.10mol/L、0.11mol/L、0.12mol/L、0.13mol/L、0.14mol/L、0.15mol/L及这些数值之间的数值。
在一些可选的实施方案中，使用凝胶渗透色谱仪对待测液进行检测之前，使用微孔膜对待测液进行过滤。可选的，微孔膜的孔径为0.2～0.5μm，例如但不限于0.1μm、0.2μm、0.3μm、0.4μm、0.5μm。
在一些可选的实施方案中，流动相使用前使用膜进行过滤；可选的，膜的孔径为0.2～0.5μm，例如但不限于0.1μm、0.2μm、0.3μm、0.4μm、0.5μm。
以下结合实施例对本申请的特征和性能作进一步的详细描述。
实施例1
实施例1提供了一种酒中β-葡聚糖分子量的测定方法，其包括以下步骤：
S11、样品前处理：取80ml含有β-葡聚糖的酒加入烧杯，将烧杯放入60℃的水浴加热蒸干得到固形物，将固形物中加入8ml的0.10mol/l硝酸钠水溶液溶解得到溶液，随后将溶液用0.22μm孔径的微孔膜过滤得到样品待测液；
S12、标品前处理：精密称取β-葡聚糖标品(分子量为10000)2mg，精密加入2ml的0.10mol/l硝酸钠水溶液溶解得到溶液，随后将溶液用0.22μm孔径的微孔膜过滤得到标品待测液；
S13、检测：将样品待测液和标品待测液分别使用凝胶渗透色谱仪(安捷伦1260液相色谱系统)进行检测，检测时的流动相为0.10mol/l硝酸钠(流动相使用前使用0.22μm孔径的膜过滤)，流速0.5ml/min，柱温20℃，进样量300μl；
S14、结果分析：采用Wyatt ASTRA7.1.3工作站对检测结果进行统计分析。
重复上述实施例1提供的酒中β-葡聚糖分子量的测定方法检测5次，分别检测得到的标品中β-葡聚糖的重均分子量为10050、10100、10200、9900、9800，酒中β-葡聚糖的重均分子量为9000、8600、8700、8900、9200。
实施例2
实施例2提供了一种酒中β-葡聚糖分子量的测定方法，其包括以下步骤：
S21、样品前处理：取100ml含有β-葡聚糖的酒加入烧杯，将烧杯放入65℃的水浴加热蒸干得到固形物，将固形物加入10ml的0.12mol/l硝酸钠水溶液溶解得到溶液，随后将溶液用0.22μm孔径的微孔膜过滤得到样品待测液；
S22、标品前处理：精密称取β-葡聚糖标品(分子量为15000)3mg，精密加入3ml的0.12mol/l硝酸钠水溶液溶解得到溶液，随后将溶液用0.22μm孔径的微孔膜过滤得到标品待测液；
S23、检测：将样品待测液和标品待测液使用凝胶渗透色谱仪(安捷伦1260液相色谱系统)进行检测，检测时的流动相为0.12mol/l硝酸钠(流动相使用前使用0.22μm孔径的膜过滤)，流速0.6ml/min，柱温25℃，进样量400μl；
S24、结果分析：采用Wyatt ASTRA7.1.3工作站对检测结果进行统计分析。
重复上述实施例2提供的酒中β-葡聚糖分子量的测定方法检测5次，分别检测得到的标品中β-葡聚糖的重均分子量为15000、14800、15200、15300、15200，酒中β-葡聚糖的重均分子量为14000、14500、14300、13900、14100。
实施例3
实施例3提供了一种酒中β-葡聚糖分子量的测定方法，其包括以下步骤：
S31、样品前处理：取120ml含有β-葡聚糖的酒加入烧杯，将烧杯放入70℃的水浴加热蒸干得到固形物，将固形物加入12ml的0.15mol/l硝酸钠水溶液溶解得到溶液，随后将溶液用0.22μm孔径的微孔膜过滤得到样品待测液；
S32、标品前处理：精密称取β-葡聚糖(分子量为20000)4mg，精密加入4ml的0.15mol/l硝酸钠水溶液溶解得到溶液，随后将溶液用0.22μm孔径的微孔膜过滤得到标品待测液；
S33、检测：将样品待测液和标品待测液采用高效凝胶渗透色谱仪进行检测(安捷伦1260液相色谱系统)进行检测，流动相为0.15mol/l硝酸钠(过0.22μm微孔滤膜)，流速0.7ml/min，柱温30℃，进样量500μl；
S34、结果分析：采用Wyatt ASTRA7.1.3工作站对检测结果进行统计分析。
重复上述实施例3提供的酒中β-葡聚糖分子量的测定方法检测5次，分别检测得到的标品中β-葡聚糖的重均分子量为20100、20200、20400、20250、19900，酒中β-葡聚糖的分子量为19600、20100、20300、19600、20400。
实施例4
实施例4提供了一种酒中β-葡聚糖分子量的测定方法，其包括以下步骤：
S41、样品前处理：取90ml含有β-葡聚糖的酒加入烧杯，将烧杯放入75℃的水浴加热蒸干得到固形物，将固形物加入9ml的0.12mol/l硝酸钠水溶液溶解得到溶液，随后将溶液用0.22μm孔径的微孔膜过滤得到样品待测液；
S42、标品前处理：精密称取β-葡聚糖(分子量为30000)5mg，精密加入5ml的0.12mol/l硝酸钠水溶液溶解得到溶液，随后将溶液用0.22μm孔径的微孔膜过滤得到标品待测液；
S43、检测：将样品待测液和标品待测液使用凝胶渗透色谱仪(安捷伦1260液相色谱系统)进行检测，检测时的流动相为0.12mol/l硝酸钠(流动相使用前使用0.22μm孔径的膜过滤)，流速0.6ml/min，柱温25℃，进样量350μl；
S44、结果分析：采用Wyatt ASTRA7.1.3工作站对检测结果进行统计分析。
重复上述实施例4提供的酒中β-葡聚糖分子量的测定方法检测5次，分别检测得到的标品中β-葡聚糖的重均分子量为30100、29800、30300、30100、30200，酒中β-葡聚糖的分子量为29600、30100、30300、29800、30400。
实施例5
实施例5提供了一种酒中β-葡聚糖分子量的测定方法，其包括以下步骤：
S51、样品前处理：取110ml含有β-葡聚糖的酒加入烧杯，将烧杯放入80℃的水浴加热蒸干得到固形物，将固形物加入12ml的0.15mol/l硝酸钠水溶液溶解得到溶液，随后将溶液用0.25μm孔径的微孔膜过滤得到样品待测液；
S52、标品前处理：精密称取β-葡聚糖(分子量为40000)6mg，精密加入6ml的0.15mol/l硝酸钠水溶液溶解得到溶液，随后将溶液用0.25μm孔径的微孔膜过滤得到标品待测液；
S53、检测：将标品待测液和样品待测液使用凝胶渗透色谱仪(安捷伦1260液相色谱系统)进行检测，检测时的流动相为0.15mol/l硝酸钠(流动相使用前使用0.25μm孔径的膜过滤)，流速0.7ml/min，柱温30℃，进样量450μl；
S54、结果分析：采用Wyatt ASTRA7.1.3工作站对检测结果进行统计分析。
重复上述实施例5提供的酒中β-葡聚糖分子量的测定方法检测5次，分别检测得到的标品中β-葡聚糖的重均分子量为39800、39700、40100、40100、40200，酒中β-葡聚糖的分子量为39800、40100、40300、39600、40400。
综上所述，本申请提供的酒中β-葡聚糖分子量的测定方法将酒样品直接蒸干后采用作为流动相的硝酸钠溶解，并利用凝胶渗透色谱仪进行检测，能够快速准确的测定酒样品中的β-葡聚糖的分子量，不仅操作简单，检测效率高，且测定结果重复性好、偏差小。
以上所描述的实施例是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。本申请的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本申请的范围，而是仅仅表示本申请的选定实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本申请保护的范围。
Claims (9)
1.一种酒中β-葡聚糖分子量的测定方法，其特征在于，其包括以下步骤：
将酒蒸干后的固形物溶解于硝酸钠水溶液，得到待测液；
采用凝胶渗透色谱仪，以硝酸钠水溶液作为流动相对所述待测液进行检测，得到β-葡聚糖的分子量。
2.根据权利要求1所述的酒中β-葡聚糖分子量的测定方法，其特征在于，所述硝酸钠水溶液中硝酸钠的浓度为0.1～0.15mol/l。
3.根据权利要求1所述的酒中β-葡聚糖分子量的测定方法，其特征在于，采用凝胶渗透色谱仪进行检测时，所述流动相的流速为0.1～0.5ml/min，进样量为300～500μl，色谱柱的柱温为20～30℃。
4.根据权利要求1所述的酒中β-葡聚糖分子量的测定方法，其特征在于，将所述酒在60～80℃的水浴下蒸干得到所述固形物。
5.根据权利要求1所述的酒中β-葡聚糖分子量的测定方法，其特征在于，所述酒和所述硝酸钠水溶液的体积比为10～15：1～1.5。
6.根据权利要求1所述的酒中β-葡聚糖分子量的测定方法，其特征在于，使用凝胶渗透色谱仪对所述待测液进行检测之前，使用微孔膜对所述待测液进行过滤。
7.根据权利要求6所述的酒中β-葡聚糖分子量的测定方法，其特征在于，所述微孔膜的孔径为0.2～0.5μm。
8.根据权利要求1所述的酒中β-葡聚糖分子量的测定方法，其特征在于，所述流动相使用前使用膜进行过滤。
9.根据权利要求8所述的酒中β-葡聚糖分子量的测定方法，其特征在于，所述膜的孔径为0.2～0.5μm。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
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Application publication date: 20190827 |