CN103698291B

CN103698291B - 枣花蜜掺假快速测定法

Info

Publication number: CN103698291B
Application number: CN201310734545.0A
Authority: CN
Inventors: 高磊红; 刘宝友
Original assignee: Hebei University of Science and Technology
Current assignee: Hebei University of Science and Technology
Priority date: 2013-12-27
Filing date: 2013-12-27
Publication date: 2015-11-18
Anticipated expiration: 2033-12-27
Also published as: CN103698291A

Abstract

本发明公开了一种枣花蜜掺假快速测定法，涉及利用紫外分光光度法检测技术领域。以枣花蜜中总生物碱的吸光度作为测定指标，通过以下步骤实现：（1）枣花蜜样品溶液的制备：1）枣花蜜样品中总生物碱的提取2）溶解；（2）参比溶液的制备；（3）吸光度的测定：将上述枣花蜜样品溶液和参比溶液用紫外分光光度计在枣花蜜样品溶液最大吸收波长处测定吸光度；（4）工作曲线的绘制和回归方程的计算；（5）枣花蜜样品中掺假量的计算：根据步骤（4）的回归方程和步骤（3）的枣花蜜样品溶液的吸光度，计算出枣花蜜样品中天然枣花蜜含量，从而得知枣花蜜样品的掺假量。本发明方法适用性广，操作简单，所用仪器价格便宜，测定成本低廉，适于推广应用。

Description

枣花蜜掺假快速测定法

技术领域

本发明涉及利用紫外分光光度法检测技术领域。

背景技术

蜂蜜是一种营养丰富的天然食品。食品安全国家标准GB14963-2011《蜂蜜》中对蜂蜜的定义为：蜂蜜采集植物的花蜜、分泌物或蜜露，与自身分泌物混合后，经充分酿造而成的天然甜物质。由于蜂蜜的保健作用越来越被更多的人所认识，消费者对蜂蜜的需求越来越大。在利用的驱使下，不法商贩开始制假贩假，掺假蜂蜜开始充斥市场。

蜂蜜掺假的目的是通过在天然蜂蜜中掺入价格低廉的原料而增重。这类以增重为目的的掺假物一般为大米糖浆、果葡糖浆和饴糖（俗称糖稀）等。为了达到以假乱真的效果，假蜂蜜中还可能加入了增稠剂，如淀粉糊或者纤维素，以及色素和香精。

ZL201110436704.X《蜂蜜中大米糖浆掺假鉴别快速检测方法》和ZL201110220841.X《一种大米糖浆提取物及其应用》提出了利用液相色谱-质谱的检测方法，这两项专利利用大米糖浆的特征峰或特征提取物进行检测。其不足之处在于，这两种方法只对大米糖浆的掺假有效，对其他掺假方法无效，且液相色谱-质谱仪器昂贵，运行条件苛刻，限制了这两种方法的应用。

蜂蜜的掺假检测方法不外乎使用外源性指标和内源性指标。外源性指标来自掺假物，因此只对特定掺假物有效，如上述两项专利只对大米糖浆有效；内源性指标来自蜂蜜本身的成分或性质，因为掺假物的加入使指标值改变。内源性指标因为来自蜂蜜本身，所以掺假物的不同对鉴别工作的影响小，鉴别方法的适用性广。

本发明提供的检测方法是一种枣花蜜掺假的快速测定方法，可以用于枣花蜜掺假的筛查工作。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种枣花蜜掺假快速测定法。本发明以枣花蜜中总生物碱的吸光度作为测定指标，生物碱为枣花蜜的内源性物质，所以掺假物的不同对鉴别工作的影响小，鉴别方法的适用性广。此外，本发明提供的检测方法还具有操作简单，用时短，所用仪器价格便宜，测定成本低廉，适于推广应用的特点，可以为质检部门的筛查工作提供一种快速、定量的测定方法。

为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案是：一种枣花蜜掺假快速测定法，以枣花蜜中总生物碱的吸光度作为测定指标，通过以下步骤实现：

（1）枣花蜜样品溶液的制备：

1）枣花蜜样品中总生物碱的提取：将枣花蜜样品加水稀释配制成枣花蜜水溶液，调节pH至碱性，提取，蒸干，得到枣花蜜样品中总生物碱提取物；

2）将枣花蜜样品中总生物碱提取物用溶剂溶解，得到枣花蜜样品溶液；

（2）参比溶液的制备：

A、按步骤（1）的方法对参比物进行处理：将参比物加水稀释配制成水溶液，调节pH至碱性，提取，蒸干，得到参比物的提取物；将提取物用所述溶剂溶解，得到参比溶液；

B、或者，用所述溶剂作为参比溶液；

（3）吸光度的测定：将上述枣花蜜样品溶液和参比溶液用紫外分光光度计在枣花蜜样品溶液最大吸收波长处测定，得吸光度；

（4）工作曲线的绘制和回归方程的计算：配制天然枣花蜜含量不同的一系列天然枣花蜜和参比物的混合物，对此系列混合物按步骤（1）的方法进行处理：将混合物加水稀释配制成混合物水溶液，调节pH至碱性，提取，蒸干，得到混合物提取物；将混合物提取物用所述溶剂溶解，得到混合物提取物溶液；将该混合物提取物溶液在枣花蜜样品溶液最大吸收波长处测定吸光度，并绘制天然枣花蜜含量-吸光度工作曲线，计算得到回归方程；

（5）枣花蜜样品中掺假量的计算：根据步骤（4）的回归方程和步骤（3）的枣花蜜样品溶液的吸光度，计算出枣花蜜样品中天然枣花蜜含量，从而算出枣花蜜样品的掺假量。

优选的，枣花蜜样品溶液最大吸收波长为282nm。

优选的，步骤（1）中，1）将枣花蜜样品加水稀释配制成枣花蜜水溶液，以盐酸调节枣花蜜水溶液pH至3-4后，用氯仿提取，分液，弃去有机相后，以氢氧化钠水溶液调节pH至10-11，调节过程中有沉淀生成时，应过滤除去沉淀，之后加入氯仿充分震荡提取，分液，弃去水层，氯仿层浓缩至干，得到枣花蜜样品中总生物碱提取物；2）将枣花蜜样品中总生物碱提取物用溶剂溶解定容于10ml容量瓶中，得到枣花蜜样品溶液。

进一步优选的，步骤（1）中，1）称取50g枣花蜜样品，加入50g水，混匀，配制成质量比1:1的枣花蜜水溶液，以0.2-0.5mol/L盐酸调节枣花蜜水溶液pH至3-4后，用40-100ml氯仿提取，分液，弃去有机相后，以0.2-0.5mol/L氢氧化钠水溶液调节pH至10-11，调节过程中有沉淀生成时，应过滤除去沉淀，之后加入40-100ml氯仿充分震荡10-20min提取，分液，弃去水层，氯仿层浓缩至干，得到枣花蜜样品中总生物碱提取物；2）将枣花蜜样品中总生物碱提取物用无水乙醇溶解定容于10ml容量瓶中，得到枣花蜜样品溶液。

优选的，步骤（2）和步骤（4）中的参比物为大米糖浆、果葡糖浆、饴糖、增稠剂、色素或香精中的一种或几种。

因为蜂蜜为天然生物制品，含有生物碱，而大米糖浆、果葡糖浆和饴糖，以及增稠剂、色素和香精等常见蜂蜜掺假物为工业品，不含生物碱。枣花蜜中，生物碱含量较高，且不同产地枣花蜜中的生物碱含量基本恒定，因此本发明通过检测枣花蜜样品中总生物碱吸光度测得枣花蜜样品中天然枣花蜜的含量，从而得知枣花蜜样品的掺假程度。本发明使用内源性指标进行鉴别，对大米糖浆、果葡糖浆和饴糖增重性掺假物均适用，并可以不受增稠剂、色素和香精的影响。

市售生物碱产品提取自天然植物体，价格昂贵，造假者一般不会采用人为添加生物碱的方法制作假蜂蜜。

本发明方法的确定：

一、枣花蜜样品中总生物碱的提取方法

将枣花蜜样品加水稀释配制成枣花蜜水溶液，因为纯枣花蜜过于黏稠，不易操作，所以在提取操作前，对枣花蜜样品进行稀释。以盐酸调节枣花蜜水溶液pH至3-4后，用氯仿提取，分液，弃去有机相后，除去枣花蜜样品中脂肪烃（蜡）及树脂类杂质。以氢氧化钠水溶液调节pH至10-11，调节过程中有沉淀生成时，应过滤除去沉淀，以除去枣花蜜样品中鞣质。之后加入氯仿充分震荡提取或者以超声辅助萃取，分液，弃去水层，氯仿层浓缩至干，得到枣花蜜样品中总生物碱提取物。

二、测定波长的确定

1、最大吸收波长

枣花蜜样品溶液用紫外可见分光光度计在200-700nm波长范围内进行扫描，在282nm处有最大吸收峰。

2、蜂蜜掺假物在最大吸收波长处的吸收

对常见蜂蜜掺假物大米糖浆、果葡糖浆和饴糖分别按步骤（1）的方法进行处理，在282nm处测定吸光度。各蜂蜜掺假物的提取物均无吸收。

蜂蜜掺假物——增稠剂选用淀粉糊和羧甲基纤维素进行考察。将淀粉糊和羧甲基纤维素溶液分别按步骤（1）的方法进行处理，在282nm处测定吸光度。淀粉糊和羧甲基纤维素溶液均无吸收。其中淀粉糊的配制作方法为：称取1.0-1.2g淀粉，用少量水润湿，量取200mL水，加热至微沸，倒入润湿的淀粉，微沸1分钟，冷却到室温即可。羧甲基纤维素溶液的配制方法为：将200ml水煮沸，然后放入1.0-2.0g羧甲基纤维素，朝一个方向慢慢搅拌，直至溶解，冷却到室温即可。

蜂蜜掺假物——色素选用焦糖色素溶液和橘子黄色素溶液进行考察。将焦糖色素溶液和橘子黄色素溶液按步骤（1）的方法进行处理，在282nm处测定吸光度，焦糖色素溶液和橘子黄色素溶液均无吸收。其中焦糖色素溶液的配制方法为：称取0.1-0.15g焦糖色素，溶解至100mL水中。橘子黄色素溶液的配制方法为：称取0.03g橘子黄色素，溶解至100mL水中。

蜂蜜掺假物——香精选用市售两种蜂蜜香精进行考察。将两种香精溶液分别按步骤（1）的方法进行处理，在282nm处测定吸光度，两种香精溶液均无吸收。其中香精溶液1的配制方法为：移取0.1mL市售蜂蜜香精原液1，溶解至100mL水中。香精溶液2的配制方法为：移取0.5mL市售蜂蜜香精原液2，溶解至100mL水中。

测定过程中，可以选用掺假物作为参比物，按步骤（1）的方法进行处理，制得参比溶液。如不能确定蜂蜜中的掺假物，可以选用疑似掺假物，或者直接使用所述溶剂作为参比溶液，因为各种蜂蜜掺假物在本发明提供的提取及测定条件下均无吸收。生物碱的提取操作可以去除枣花蜜成分对测定的干扰，以及掺假成分对测定的干扰。

3、因为枣花蜜样品溶液在282nm处有最大吸收峰，且蜂蜜掺假物在此波长不干扰测定，所以选择282nm为测定波长进行测定。

三、不同天然枣花蜜中总生物碱的吸光度

枣花蜜均直接取自养蜂场，为天然枣花蜜。取不同地区、不同养蜂场天然枣花蜜按步骤（1）的方法进行处理，在282nm处测定吸光度，得吸光度如下表：

其中平均吸光度为0.637，相对标准偏差为0.27%。由上述数据可知，取自不同地区、不同养蜂场的天然枣花蜜中总生物碱提取物的吸光度值的偏差较小，取其平均值为天然枣花蜜中总生物碱提取物的吸光度测定值。天然枣花蜜中总生物碱的含量可以作为掺假枣花蜜中天然枣花蜜含量的测定指标。

四、工作曲线的绘制和回归方程的计算

在天然枣花蜜中加入果葡糖浆，配制成天然枣花蜜含量不同的一系列枣花蜜和果葡糖浆的混合物，分别将混合物按步骤（1）的方法进行处理，在282nm处测定吸光度，并绘制天然枣花蜜含量-吸光度工作曲线，计算回归方程。如配制天然枣花蜜含量（质量百分比）分别为20%、40%、60%、80%和100%的一系列天然枣花蜜和果葡糖浆的混合物，分别将混合物按步骤（1）的方法进行处理，在282nm处测定吸光度，并绘制工作曲线，计算回归方程，工作曲线见图1。其中，r=0.9987，线性关系良好。其他蜂蜜掺假物的工作曲线绘制方法与上述方法相同，所得曲线相近。

采用上述技术方案所产生的有益效果在于：

（1）因为蜂蜜为天然生物制品，含有生物碱，而大米糖浆、果葡糖浆和饴糖，以及增稠剂、色素和香精等常见蜂蜜掺假物为工业品，不含生物碱；枣花蜜中，生物碱含量较高，且不同产地枣花蜜中的生物碱含量基本恒定，因此本发明以枣花蜜中总生物碱的吸光度作为测定指标，通过检测枣花蜜样品中总生物碱吸光度测得枣花蜜样品中天然枣花蜜的含量，从而得知枣花蜜样品的掺假程度；生物碱为枣花蜜的内源性物质，本发明使用内源性指标进行鉴别，对大米糖浆、果葡糖浆和饴糖等增重性掺假物均适用，并可以不受增稠剂、色素和香精等掺假物的影响，鉴别方法的适用性广；

（2）本发明操作简单，用时短，所用仪器价格便宜，测定成本低廉，适于推广应用，可以为质检部门提供快速定量测定方法。

附图说明

下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明；

图1是本发明的天然枣花蜜含量-吸光度工作曲线。

具体实施方式

实施例1：自制饴糖掺假枣花蜜的测定

称取50g天然枣花蜜，加入50g饴糖（即蜂蜜掺假物），混匀，制得天然枣花蜜含量为50%的自制饴糖掺假枣花蜜。

（1）自制饴糖掺假枣花蜜样品溶液的制备：1）自制饴糖掺假枣花蜜中总生物碱的提取：称取50g上述自制饴糖掺假枣花蜜，加入50g水，混匀。以0.2mol/L盐酸调节pH至3，用60ml氯仿提取，分液，弃去有机相。以0.2mol/L氢氧化钠水溶液调节pH至10。加入100ml氯仿充分震荡10min，分液，弃去水层，氯仿层用水浴蒸干，得到总生物碱提取物。2）将上述总生物碱提取物用无水乙醇溶解定容于10ml容量瓶中，得到自制饴糖掺假枣花蜜样品溶液。

（2）参比溶液的制备：按步骤（1）的方法对饴糖进行处理，1）称取50g饴糖，加入50g水，混匀。以0.2mol/L盐酸调节pH至3，用60ml氯仿提取，分液，弃去有机相。以0.2mol/L氢氧化钠水溶液调节pH至10。加入100ml氯仿充分震荡10min，分液，弃去水层，氯仿层用水浴蒸干，得到提取物。2）将上述提取物用无水乙醇溶解定容于10ml容量瓶中，即参比溶液。

（3）吸光度的测定：将上述自制饴糖掺假枣花蜜样品溶液和参比溶液用紫外分光光度计在282nm波长处测定，得吸光度。

（4）工作曲线的绘制和回归方程的计算：配制天然枣花蜜含量（质量百分比）分别为20%、40%、60%、80%和100%的一系列枣花蜜和饴糖的混合物，对此系列混合物按步骤（1）的方法进行处理后，在282nm波长处测定吸光度，并绘制天然枣花蜜含量-吸光度工作曲线，计算得到回归方程：y=0.0059x+0.0806，其中x为枣花蜜样品中天然枣花蜜的质量百分比，y为吸光度。

（5）自制饴糖掺假枣花蜜样品中掺假量的计算：根据步骤（4）的回归方程y=0.0059x+0.0806和步骤（3）的自制饴糖掺假枣花蜜样品溶液的吸光度，计算出自制饴糖掺假枣花蜜样品中天然枣花蜜含量为50.6%（RSD=1.7%，n=3），从而得知自制饴糖掺假枣花蜜样品的掺假量为49.4%。

实施例2：自制大米糖浆掺假枣花蜜的测定

称取70g天然枣花蜜，加入30g大米糖浆（即蜂蜜掺假物），混匀，制得天然枣花蜜含量为70%的自制大米糖浆掺假枣花蜜。

（1）自制大米糖浆掺假枣花蜜样品溶液的制备：1）自制大米糖浆掺假枣花蜜中总生物碱的提取：称取50g上述自制大米糖浆掺假枣花蜜，加入60g水，混匀。以0.6mol/L盐酸调节pH至4，用120ml氯仿提取，分液，弃去有机相。以0.6mol/L氢氧化钠水溶液调节pH至10。加入40ml氯仿充分震荡20min，分液，弃去水层，氯仿层经旋蒸仪蒸干，得到总生物碱提取物。2）将上述总生物碱提取物用丙酮溶解定容于10ml容量瓶中，得到自制大米糖浆掺假枣花蜜样品溶液。

（2）参比溶液的制备：按步骤（1）的方法对大米糖浆进行处理后，用于分光光度法测定的参比溶液。

（3）吸光度的测定：将上述自制大米糖浆掺假枣花蜜样品溶液和参比溶液用紫外分光光度计在282nm波长处测定，得吸光度；

（4）工作曲线的绘制和回归方程的计算：配制天然枣花蜜含量（质量百分比）分别为20%、40%、60%、80%和100%的一系列枣花蜜和大米糖浆的混合物，对此系列混合物按步骤（1）的方法进行处理后，在282nm波长处测定吸光度，并绘制天然枣花蜜含量-吸光度工作曲线，计算得到回归方程：y=0.006x+0.0786，其中x为枣花蜜样品中天然枣花蜜的质量百分比，y为吸光度。

（5）自制大米糖浆掺假枣花蜜样品中掺假量的计算：根据步骤（4）的回归方程y=0.006x+0.0786和步骤（3）的自制大米糖浆掺假枣花蜜样品溶液的吸光度，计算出自制大米糖浆掺假枣花蜜样品中天然枣花蜜含量为68.9%（RSD=2.0%，n=3），从而得知自制大米糖浆掺假枣花蜜样品的掺假量为31.1%。

实施例3：自制增稠剂和色素掺假枣花蜜的测定

称取1.2g淀粉，用少量水润湿。量取200mL水，加热至微沸，倒入润湿的淀粉，微沸1分钟，冷却到室温，制得淀粉糊。称取0.1g焦糖色素，加入上述淀粉糊中，混匀，制得染色淀粉糊。

称取40g天然枣花蜜，加入60g染色淀粉糊（即蜂蜜掺假物），混匀，制得天然枣花蜜含量为40%的自制增稠剂和色素掺假枣花蜜。

（1）自制增稠剂和色素掺假枣花蜜样品溶液的制备：1）自制增稠剂和色素掺假枣花蜜中总生物碱的提取：称取50g上述自制增稠剂和色素掺假枣花蜜，加入50g水，混匀。以0.3mol/L盐酸调节pH至4，用40ml氯仿提取，分液，弃去有机相。以0.4mol/L氢氧化钠水溶液调节pH至11。加入80ml氯仿充分震荡20min，分液，弃去水层，氯仿层经旋蒸仪蒸干，得到总生物碱提取物。2）将上述总生物碱提取物用95%乙醇溶解定容于10ml容量瓶中，得到自制增稠剂和色素掺假枣花蜜样品溶液。

（2）参比溶液的制备：按步骤（1）的方法对染色淀粉糊进行处理后，用于分光光度法测定的参比溶液。

（3）吸光度的测定：将上述自制增稠剂和色素掺假枣花蜜样品溶液和参比溶液用紫外分光光度计在282nm波长处测定，得吸光度；

（4）工作曲线的绘制和回归方程的计算：配制天然枣花蜜含量（质量百分比）分别为20%、40%、60%、80%和100%的一系列枣花蜜和染色淀粉糊的混合物，对此系列混合物按步骤（1）的方法进行处理后，在282nm波长处测定吸光度，并绘制天然枣花蜜含量-吸光度工作曲线，计算得到回归方程：y=0.0059x+0.0866，其中x为枣花蜜样品中天然枣花蜜的质量百分比，y为吸光度。

（5）自制增稠剂和色素掺假枣花蜜样品中掺假量的计算：根据步骤（4）的回归方程y=0.0059x+0.0866和步骤（3）的自制增稠剂和色素掺假枣花蜜样品溶液的吸光度，计算出自制增稠剂和色素掺假枣花蜜样品中天然枣花蜜含量为40.7%（RSD=1.9%，n=3），从而得知自制增稠剂和色素掺假枣花蜜样品的掺假量为59.3%。

实施例4：自制增稠剂、香精和色素掺假枣花蜜的测定

将200ml水煮沸，然后放入1.5g羧甲基纤维素，朝一个方向慢慢搅拌，直至溶解，冷却到室温。向上述羧甲基纤维素溶液中加入1.5mL市售蜂蜜香精1原液，再加入0.03g橘子黄色素，混匀，制得增香染色增稠剂溶液。

称取10g天然枣花蜜，加入90g增香染色增稠剂溶液（即蜂蜜掺假物），混匀，制得天然枣花蜜含量为10%的自制增稠剂、香精和色素掺假枣花蜜。

（1）自制增稠剂、香精和色素掺假枣花蜜样品溶液的制备：1）自制增稠剂、香精和色素掺假枣花蜜中总生物碱的提取：称取50g上述自制增稠剂、香精和色素掺假枣花蜜，加入50g水，混匀。以0.3mol/L盐酸调节pH至4，用40ml氯仿提取，分液，弃去有机相。以0.4mol/L氢氧化钠水溶液调节pH至11。加入80ml氯仿充分震荡20min，分液，弃去水层，氯仿层经旋蒸仪蒸干，得到总生物碱提取物。2）将上述总生物碱提取物用丙酮溶解定容于10ml容量瓶中，得到自制增稠剂、香精和色素掺假枣花蜜样品溶液。

（2）参比溶液的制备：按步骤（1）的方法对增香染色增稠剂溶液进行处理后，用于分光光度法测定的参比溶液。

（3）吸光度的测定：将上述自制增稠剂、香精和色素掺假枣花蜜样品溶液和参比溶液用紫外分光光度计在282nm波长处测定，得吸光度；

（4）工作曲线的绘制和回归方程的计算：配制天然枣花蜜含量（质量百分比）分别为12.5%、25%、50%和100%的一系列枣花蜜和自制增香染色增稠剂溶液的混合物，对此系列混合物按步骤（1）的方法进行处理后，在282nm波长处测定吸光度，并绘制天然枣花蜜含量-吸光度工作曲线，计算得到回归方程：y=0.0058x+0.0888y，其中x为枣花蜜样品中天然枣花蜜的质量百分比，y为吸光度。

（5）自制增稠剂、香精和色素掺假枣花蜜样品中掺假量的计算：根据步骤（4）的回归方程y=0.0058x+0.0888y和步骤（3）的自制增稠剂、香精和色素掺假枣花蜜样品溶液的吸光度，计算出自制增稠剂、香精和色素掺假枣花蜜样品中天然枣花蜜含量为10.3%（RSD=2.9%，n=3），从而得知自制增稠剂、香精和色素掺假枣花蜜样品的掺假量为89.7%。

实施例5：自制果葡糖浆掺假枣花蜜的测定

称取80g天然枣花蜜，加入20g果葡糖浆（即蜂蜜掺假物），混匀，制得天然枣花蜜含量为80%的自制果葡糖浆掺假枣花蜜。

（1）自制果葡糖浆掺假枣花蜜样品溶液的制备：1）自制果葡糖浆掺假枣花蜜中总生物碱的提取：称取50g上述自制果葡糖浆掺假枣花蜜，加入50g水，混匀。以0.2mol/L盐酸调节pH至3，用60ml氯仿提取，分液，弃去有机相。以0.2mol/L氢氧化钠水溶液调节pH至10。加入100ml氯仿充分震荡10min，分液，弃去水层，氯仿层用水浴蒸干，得到总生物碱提取物。2）将上述总生物碱提取物用无水乙醇溶解定容于10ml容量瓶中，得到自制果葡糖浆掺假枣花蜜样品溶液。

（2）参比溶液的制备：以无水乙醇为参比溶液。

（3）吸光度的测定：将上述自制果葡糖浆掺假枣花蜜样品溶液和参比溶液用紫外分光光度计在282nm波长处测定，得吸光度。

（4）工作曲线的绘制和回归方程的计算：配制天然枣花蜜含量（质量百分比）分别为20%、40%、60%、80%和100%的一系列枣花蜜和果葡糖浆的混合物，对此系列混合物按步骤（1）的方法进行处理后，在282nm波长处测定吸光度，并绘制天然枣花蜜含量-吸光度工作曲线，计算得到回归方程：y=0.0058x+0.0838，其中x为枣花蜜样品中天然枣花蜜的质量百分比，y为吸光度。

（5）自制果葡糖浆掺假枣花蜜样品中掺假量的计算：根据步骤（4）的回归方程y=0.0058x+0.0838和步骤（3）的自制果葡糖浆掺假枣花蜜样品溶液的吸光度，计算出自制果葡糖浆掺假枣花蜜样品中天然枣花蜜含量为81.7%（RSD=2.1%，n=3），从而得知自制果葡糖浆掺假枣花蜜样品的掺假量为18.3%。

实施例6：实际枣花蜜样品的测定

（1）枣花蜜样品溶液的制备：1）枣花蜜样品中总生物碱的提取：称取50g市售枣花蜜，加入50g水，混匀。以0.4mol/L盐酸调节pH至3，用100ml氯仿提取，分液，弃去有机相。以0.3mol/L氢氧化钠水溶液调节pH至10。加入120ml氯仿充分震荡15min，分液，弃去水层，氯仿层经旋蒸仪蒸干，得到总生物碱提取物。2）将上述总生物碱提取物用无水乙醇溶解定容于10ml容量瓶中，得到枣花蜜样品溶液。

（2）参比溶液的制备：按步骤（1）的方法对果葡糖浆进行处理后，用于分光光度法测定的参比溶液。（因不能确定掺假物，可任选掺假物，本次测定选用果葡糖浆）

（3）吸光度的测定：将上述枣花蜜样品溶液和参比溶液用紫外分光光度计在282nm波长处测定，得吸光度；

（4）工作曲线的绘制和回归方程的计算：配制天然枣花蜜含量（质量百分比）分别为20%、40%、60%、80%和100%的一系列枣花蜜和果葡糖浆的混合物，对此系列混合物按步骤（1）的方法进行处理后，在282nm波长处测定吸光度，并绘制天然枣花蜜含量-吸光度工作曲线，计算得到回归方程：y=0.0058x+0.0876，其中x为枣花蜜样品中天然枣花蜜的质量百分比，y为吸光度。

（5）枣花蜜样品中掺假量的计算：根据步骤（4）的回归方程y=0.0058x+0.0876和步骤（3）的枣花蜜样品溶液的吸光度，计算出枣花蜜样品中天然枣花蜜含量为74.7%（RSD=1.9%，n=3），从而得知枣花蜜样品的掺假量为25.3%。

Claims

1.一种枣花蜜掺假快速测定法，其特征在于：以枣花蜜中总生物碱的吸光度作为测定指标，通过以下步骤实现：

（1）枣花蜜样品溶液的制备：

1）枣花蜜样品中总生物碱的提取：将枣花蜜样品加水稀释配制成枣花蜜水溶液，以盐酸调节枣花蜜水溶液pH至3-4后，用氯仿提取，分液，弃去有机相后，以氢氧化钠水溶液调节pH至10-11，调节过程中有沉淀生成时，应过滤除去沉淀，之后加入氯仿充分震荡提取，分液，弃去水层，氯仿层浓缩至干，得到枣花蜜样品中总生物碱提取物；

（2）参比溶液的制备：

B、或者，用所述溶剂作为参比溶液；

（4）工作曲线的绘制和回归方程的计算：配制天然枣花蜜含量不同的一系列天然枣花蜜和参比物的混合物，对此系列混合物按步骤（1）的方法进行处理：将混合物加水稀释配制成混合物水溶液，调节pH至碱性，提取，蒸干，得到混合物提取物；将混合物提取物用所述溶剂溶解，得到混合物提取物溶液；将该系列提取物溶液在枣花蜜样品溶液最大吸收波长处测定吸光度，并绘制天然枣花蜜含量-吸光度工作曲线，计算得到回归方程；

（5）枣花蜜样品中掺假量的计算：根据步骤（4）的回归方程和步骤（3）的枣花蜜样品溶液的吸光度，计算出枣花蜜样品中天然枣花蜜含量，从而算出枣花蜜样品的掺假量；

所述步骤（2）和步骤（4）中的参比物为大米糖浆、果葡糖浆、饴糖、增稠剂、色素或香精中的一种或几种。

2.根据权利要求1所述的枣花蜜掺假快速测定法，其特征在于所述枣花蜜样品溶液最大吸收波长为282nm。

3.根据权利要求1所述的枣花蜜掺假快速测定法，其特征在于所述步骤（1）中，2）将枣花蜜样品中总生物碱提取物用溶剂溶解定容于10ml容量瓶中，得到枣花蜜样品溶液。

4.根据权利要求3所述的枣花蜜掺假快速测定法，其特征在于所述步骤（1）中，1）称取50g枣花蜜样品，加入50g水，混匀，配制成质量比为1:1的枣花蜜水溶液，以0.2-0.5mol/L盐酸调节枣花蜜水溶液pH至3-4后，用40-100ml氯仿提取，分液，弃去有机相后，以0.2-0.5mol/L氢氧化钠水溶液调节pH至10-11，调节过程中有沉淀生成时，应过滤除去沉淀，之后加入40-100ml氯仿充分震荡10-20min提取，分液，弃去水层，氯仿层浓缩至干，得到枣花蜜样品中总生物碱提取物；2）将枣花蜜样品中总生物碱提取物用无水乙醇溶解定容于10ml容量瓶中，得到枣花蜜样品溶液。