CN102382155A - 一种大米糖浆提取物及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种大米糖浆提取物，具有式I所示的结构。本发明还涉及上述提取物在大米糖浆掺假蜂蜜检测中的用途。本发明进一步涉及了一种大米糖浆掺假蜂蜜的检测方法，以所述大米糖浆提取物作为靶标物质，检测出含有所述靶标物质的蜂蜜样品即为大米糖浆掺假蜂蜜。本发明所述的检测方法，以大米糖浆提取物作为鉴别物质，仅少量样品即可检出该物质，检出的正确率高。该方法操作简便，具有广泛应用价值。

Description

一种大米糖浆提取物及其用途

技术领域

本发明涉及蜂蜜的分析检测领域，具体涉及一种大米糖浆提取物及其用途，以及以所述提取物作为靶标物质的大米糖浆掺假蜂蜜的检测方法。

背景技术

蜂蜜是蜜蜂采集植物的花蜜、分泌物或蜜露，与自身分泌物结合后，经充分酿造而成的天然甜物质。由于蜂蜜具有重要的营养价值和保健作用，长期以来深受人们的喜爱。蜂蜜是极易掺假的食品。由于利益的动，近年来有些个体户及厂家，向蜂蜜中掺入糖、转化糖、果糖、葡萄糖、葡糖糖浆、果葡糖等，制造掺假蜂蜜，有些生产厂家甚至以葡萄糖、果葡糖浆、蜂蜜香精等替代原料制造蜂蜜，以天然蜂蜜的形式投放市场，坑骗消费者以获取暴利，损坏了我国天然蜂蜜的产品信誉。特别是近些年，一种新型的掺假，大米糖浆掺假，因为其与蜂蜜的C同位素接近，以及比较先进的制造工艺，去除了一些多糖，目前一些标准的检测方法，蜂蜜中高果糖淀粉糖浆测定方法-薄层色谱法与离子色谱法，以及碳-4植物糖含量测定方法-稳定碳同位比例法等鉴别蜂蜜真伪的方法无法辨别其真假。因此，急需建立一种能够准确鉴别大米糖浆掺假蜂蜜的方法。

发明内容

为克服现有大米糖浆掺假的蜂蜜难以检测的缺陷，本发明的目的是提供一种大米糖浆提取物，并根据此提取物提供一种大米糖浆掺假蜂蜜的检测方法。

本发明的技术方案之一是提供一种大米糖浆提取物，具有式I所示的结构：

上述提取物采用常见的制备型液相色谱分离即可得到。详细的制备步骤为：将大米糖浆加水溶解，得到的糖浆溶液分批经过固液萃取柱净化，再用20％的乙腈水溶液洗脱，合并洗脱液并浓缩至粘稠液体状后，再加入水溶解，采用制备型液相色谱仪，色谱柱ZorbaxSB-C18，21.2×250mm，流动相为98％水+2％乙腈(V/V)，流速15ml/min，进样量10ml，检测波长280nm，收取第7.5-10.5分钟的组分，即为目标物，经过核磁、红外、紫外及质谱等一些列鉴定，最终确定其结构式。

本发明的另一技术方案是所述式I结构的提取物在检测大米糖浆掺假蜂蜜中的用途。纯净蜂蜜经检测不含有上述物质，因此，该物质可以作为蜂蜜与大米糖浆的区别物质，进而可以作为目标物质用以检测蜂蜜是否掺杂有大米糖浆。

本发明进一步提供了一种大米糖浆掺假蜂蜜的检测方法，以所述式I结构的大米糖浆提取物作为靶标物质对蜂蜜样品进行检测，检测出含有所述靶标物质的蜂蜜样品即为大米糖浆掺假蜂蜜。

所述检测方法为液相色谱法(LC)、质谱法(MS)或液相色谱串联质谱法(LC-MS)。

所述液相色谱法采用C18色谱柱，柱温为20～40℃，流动相为乙腈水溶液或甲醇水溶液，梯度或等度洗脱，流速为0.2～1.0ml/min，检测波长为260～290nm。

所述梯度洗脱的过程为：第1～10分钟使用体积比乙腈或甲醇∶水＝1～5∶95～99洗脱；第11～15分钟使用体积比乙腈或甲醇∶水＝50～70∶30～50洗脱；第16～25分钟使用体积比乙腈或甲醇∶水＝1～5∶95～99洗脱。所述等度洗脱为使用体积比乙腈或甲醇∶水＝1～5∶95～99进行洗脱。

所述质谱法为电喷雾质谱法，雾化气温度为280～350℃，雾化气流速为6～12L/min，雾化气压力为30～50psi，鞘气温度为280～350℃，鞘气流速为8～20L/min，电离电压为4000kv，碎片电压为135v，扫描方式为全扫描，提取特征离子599，311。

所述检测之前可对蜂蜜样品进行预处理：每克样品溶于1～5ml水中，所得溶液用0.45μm过滤膜过滤；预处理方法还可以为：每克样品溶解于1～5ml水中，再将所得溶液转移至固液萃取柱，用体积百分比为20～30％的乙腈水溶液或甲醇水溶液洗脱，洗脱液用0.45μm过滤膜过滤。

本发明所述式I结构的大米糖浆提取物(POLY-S)，分子式为C₁₂H₁₆O₈，为一种糖的衍生物，根据结构和性质推断其为大米糖浆生产过程中产成的糖衍生物，由于大米糖浆与蜂蜜的生产过程不同，液相技术可以鉴别出纯蜂蜜中没有上述物质的色谱峰出现。另外，这种物质在质谱分析中容易生成M⁺钠以及2M⁺钠峰，质谱中会出现响应明显的特征离子599、311，因此，该物质可以作为鉴别蜂蜜是否掺有大米糖浆的靶标物质，采取常规的检测方法尤其是液相色谱、质谱或液相色谱串联质谱即可。

现有的大米糖浆掺假蜂蜜通常的掺入量大于5wt％，式I结构物质在大米糖浆中的含量明显，因此，现有的掺假蜂蜜采用本发明所述方法或本领域其它方法都可以将该物质轻易检测出，具有良好的通用性，应用范围广。

本发明所述的检测方法，以大米糖浆提取物作为鉴别物质，仅检测少量样品即可检出该物质，填补了大米糖浆掺假蜂蜜检测领域的空白，检出的正确率高，检测结果真实可靠。该方法操作简便，通用性强，具有广泛应用价值。

附图说明

图1a是实施例1大米糖浆提取物(式I)的红外光谱图；

图1b是实施例1大米糖浆提取物(式I)的紫外光谱图(纵坐标为吸光度，横坐标为波长nm)；

图2a是实施例2大米糖浆提取物的液相分析色谱图；

图2b是实施例2纯大米糖浆的液相分析色谱图；

图2c是实施例2大米糖浆掺杂蜂蜜的液相分析色谱图；

图2d是实施例2纯蜂蜜的液相分析色谱图；

图3a是实施例3纯大米糖浆的液相串联质谱分析色谱图；

图3b是实施例3纯蜂蜜的液相串联质谱分析色谱图；

图3c是实施例3大米糖浆掺杂蜂蜜的液相串联质谱分析色谱图。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1

称取1000g大米糖浆，加500ml水溶解，将糖浆溶液分批经过OASIS HLB(6ml，500mg)柱净化，每次OASIS HLB上样液30ml，样液流完后，用20％的乙腈水溶液3ml洗脱，合并所有洗脱液，在60℃浓缩至粘稠液体状后，加入50ml水溶解。

采用制备型液相色谱仪，色谱柱Zorbax SB-C18，21.2×250mm，流动相为98％水+2％乙腈(V/V)，流速15ml/min，进样量10ml，检测波长280nm，收取7.5-10.5分钟的组分，即为目标物，将收集液冷冻干燥得到冻干品，根据一般原料的浓度，1公斤大米糖浆可得到此种物质约为4mg。该物质的红外、紫外光谱图如图1a和1b所示。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm：2.38(3H，s)，3.20(1H，m)，3.42(3H，m)，3.59(2H，m)，4.53(1H，t)，5.08(2H，t)，5.28(1H，d)，5.51(1H，s)，6.79(1H，s)，7.83(1H，d)。

MS(ESI，m/z)：289(M⁺+1，100％)

实施例2

样品来源：

农业部蜂产品质量监督检验测试中心的150真实蜂蜜样品，这些样品均来自签订合同的蜂厂，并采用电子溯源技术标识，可以证实这些样品为纯正蜂蜜。6份疑似大米糖浆掺假蜂蜜：取6份真实蜂蜜，再从中任取4份与大米糖浆配置成含重量百分比5％大米糖浆的蜂蜜，采用同样的容器使其在外观上无法区分。32份大米糖浆样品，来自不同的省市大米糖浆生产厂，任取32份大米糖浆样品中的1份大米糖浆，取少量与真实蜂蜜样品配置成含重量百分比5％大米糖浆的蜂蜜。

用液相色谱仪分析，以大米糖浆提取物(式I)为靶标物质来鉴别这些样品，检测出大米糖浆提取物的为阳性，未检出的为阴性。

检测过程：

(1)样品处理方法：

方法1：称取5g样品，用10mL去离子水溶解，0.45μm过滤膜过滤待测定；

方法2：称取10g样品，用15ml去离子水溶解，将溶液转移到OASIS HLB(200mg，6ml)小柱，小柱提取提前用5ml甲醇和10ml水活化，当样液流完后，用3ml 20％的乙腈水溶液洗脱，洗脱液用0.45μm过滤膜过滤后待测定。

(2)液相色谱测定条件：

戴安ULTIMATE 3000，色谱柱Agilent SDB C18，2.1×100，3.5um；柱温：30℃；流动相：甲醇+水(体积比)，梯度洗脱，第1-10分钟，甲醇∶水＝1∶99；11-15分钟，甲醇∶水＝60∶40；16-25分钟，甲醇∶水＝1∶99；流速：0.2ml/min；检测波长：280nm；进针体积：10ul；

结果分析：

两种预处理方法后检测的结果分别编号1(方法1)和2(方法2)，两份检测结果中，在150份真实样品中均未检出糖的衍生物，31份大米糖浆以及1份掺入5％大米糖浆的蜂蜜均检出，结果为阳性。6份疑似样品4份均检出，结果为阳性，检出的正确率达到100％。具体结果见表1，编号1的检测结果见图2a-2d。

表1实施例2所述蜂蜜样品的检测结果

实施例3

某蜂蜜企业送检的21原料蜂蜜样品，要求检测是否掺入大米糖浆。利用本发明的方法，以大米糖浆提取物POLY-S为靶标物质，采用串联质谱法确认这些待测样品是否掺入了大米糖浆。

(1)样品处理：

称取10g样品，用15mL去离子水溶解，将溶液转移到OASISHLB(200mg，6mL)小柱，小柱提取提前用5ml甲醇和10ml水活化，当样液流完后，用3ml 20％的乙腈水溶液洗脱，洗脱液用滤膜过滤后滤液待测定。

(2)液相色谱串联质谱测定条件：

Agilent 6460串联质谱仪，色谱柱Agilent AQ C18，2.1×100，3.5um；柱温：30℃；流动相：乙腈+水(体积比)，梯度洗脱，第1-10分钟，乙腈∶水＝1∶99；11-15分钟，乙腈∶水＝60∶40；16-25分钟，乙腈∶水＝1∶99；流速：0.2ml/min；紫外检测波长：280nm；进针体积：10ul；

质谱分析：ESI+，雾化气温度：320度，雾化气流速：6L/min；雾化气压力：40psi；鞘气温度：320度；鞘气流速：16L/min；电离电压：4000kv；碎片电压135；扫描方式：全扫描；扫描范围100-1000；提取特征离子599，311。

(3)分析结果：

21份样品中有6份检出大米糖浆阳性，用常见的TLC方法检测，只能检出其中的3份呈阳性，检出正确率比传统方法提高一倍。其中一份的检测结果见图3a-3c。

虽然上文中已经用一般性说明、具体实施方式及实验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (10)

1.一种大米糖浆提取物，其特征在于，具有式I所示的结构：

2.权利要求1所述提取物在检测大米糖浆掺假蜂蜜中的用途。

3.一种大米糖浆掺假蜂蜜的检测方法，其特征在于，以权利要求1所述大米糖浆提取物作为靶标物质对蜂蜜样品进行检测，检测出含有所述靶标物质的蜂蜜样品即为大米糖浆掺假蜂蜜。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述检测方法为液相色谱法、质谱法或液相色谱串联质谱法。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述液相色谱法采用C18色谱柱，柱温为20～40℃，流动相为乙腈水溶液或甲醇水溶液，梯度或等度洗脱，流速为0.2～1.0ml/min，检测波长为260～290nm。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述梯度洗脱的过程为：第1～10分钟使用体积比乙腈或甲醇∶水＝1～5∶95～99洗脱；第11～15分钟使用体积比乙腈或甲醇∶水＝50～70∶30～50洗脱；第16～25分钟使用体积比乙腈或甲醇∶水＝1～5∶95～99洗脱。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述等度洗脱为使用体积比乙腈或甲醇∶水＝1～5∶95～99进行洗脱。

8.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述质谱法为电喷雾质谱法，雾化气温度为280～350℃，雾化气流速为6～12L/min，雾化气压力为30～50psi，鞘气温度为280～350℃，鞘气流速为8～20L/min，电离电压为4000kv，碎片电压为135v，扫描方式为全扫描。

9.根据权利要求4-8任一项所述的方法，其特征在于，检测之前对所述蜂蜜样品进行预处理：每克样品溶于1～5ml水中，所得溶液用0.45μm过滤膜过滤。

10.根据权利要求4-8任一项所述的方法，其特征在于，检测之前对所述蜂蜜样品进行预处理：每克样品溶解于1～5ml水中，再将所得溶液转移至固液萃取柱，用体积百分比为20～30％的乙腈水溶液或甲醇水溶液洗脱，洗脱液用0.45μm过滤膜过滤。

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