KR20110027024A

KR20110027024A - 비극성 진세노사이드의 분석방법

Info

Publication number: KR20110027024A
Application number: KR1020090084927A
Authority: KR
Inventors: 홍선표; 권하정
Original assignee: 경희대학교 산학협력단
Priority date: 2009-09-09
Filing date: 2009-09-09
Publication date: 2011-03-16
Also published as: KR101118242B1

Abstract

본 발명은 홍삼, 인삼 또는 그의 가공물에 함유된 비극성 진세노사이드의 분석방법에 관한 것이다. 본 발명에 따른 비극성 진세노사이드의 분석방법은 높은 선택성과 고감도 및 우수한 재현성을 나타낼 뿐만 아니라 간편하여, 홍삼 및 관련 제품의 품질을 평가하는데 유용하게 사용될 수 있다.

홍삼, 비극성 진세노사이드, 분석방법

Description

비극성 진세노사이드의 분석방법 {Method for Analysis of Non-polar Ginsenosides}

본 발명은 비극성 진세노사이드의 분석방법에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명은 홍삼, 인삼 또는 그의 가공물에 함유된 비극성 진세노사이드를 높은 선택성과 고감도 및 우수한 재현성으로 분석하는 방법에 관한 것이다.

인삼은 파낙스 진셍(Panax ginseng) 및 동속 근연 식물의 뿌리 및 근경으로 전통 의약으로써 광범위하게 사용되어 왔으며, 그 유효 성분은 진세노사이드(ginsenoside)이다. 홍삼은 인삼을 찌고 말리는 과정을 거쳐서 제조된다. 이렇게 홍삼을 제조하는 과정에서 인삼의 극성 진세노사이드는 결합하고 있는 당이 가수분해되어 비극성 진세노사이드로 전환하게 된다. 그러므로 인삼에는 주로 극성 진세노사이드만이 존재하는 반면, 홍삼에는 극성 진세노사이드와 더불어 비극성 진세노사이드도 미량으로 존재하게 된다. 전형적인 홍삼의 특이 비극성 진세노사이드로는 진세노사이드 Rh₁(G-Rh₁), 진세노사이드 Rh₂(G-Rh₂), 진세노사이드 Rg₂(G-Rg₂), 진세노사이드 Rg₃(G-Rg₃), 진세노사이드 Rg₅(G-Rg₅), 진세노사이드 Rk₁(G- Rk₁) 등이 있으며, 이들의 구조를 도 1에 나타내었다.

비극성 진세노사이드는 일반적으로 극성 진세노사이드에 비해 우수한 약리 활성을 나타내는 경우가 많다. 예를 들어 비극성 진세노사이드에서 항암 효과 (G-Rg₃, G-Rg₅, G-Rh₂), 항산화 효과 (G-Rg₃, G-Rh₁, G-Rh₂, G-Rk₁), 신경 보호 효과 (G-Rg₂, G-Rg₃), 간보호 효과 (G-Rg₃, G-Rh₂) 등이 입증되었다. 따라서 홍삼의 품질을 평가하고 우수한 홍삼의 제조 기준을 마련하기 위해 반드시 비극성 진세노사이드의 정량법이 필요하였다.

그러나 비극성 진세노사이드는 미량으로 존재하는 물질이며, 고감도로 분석할 수 있는 방법이 없어서 그 동안 정량이 거의 이루어지지 못하였다. 인삼의 극성 진세노사이드를 분석한 예는 다양하게 보고되어 있으나, 홍삼에 미량으로 함유되어 있는 비극성 진세노사이드는 발색단이 약하여 그 동안 정량이 쉽지 않았다. 홍삼을 분석한 기존의 연구로 HPLC-증기화 광산란 검출법(evaporative light scattering detection: ELSD)이 있으며, 이 방법으로 홍삼 중 극성 및 비극성 진세노사이드의 정량을 시도하였으나, G-Rg₃를 제외한 비극성 진세노사이드는 모두 검출 한계 이하로 나타났기 때문에 사실상 정량에 성공하지는 못했다.

한편, 대한민국 특허출원 제10-2008-0014766호에는 본 발명자들에 의해 개발된 역상 고성능 액체 크로마토그래피와 펄스식 전기화학 검출기를 이용한 배당체의 분석방법이 개시되어 있다. 펄스식 전기화학 검출기(pulsed amperometric detector: PAD)는 종래에 고성능 음이온 교환 크로마토그래피법(high-performance anion-exchange chromatography: HPAEC)과 결합되어 주로 식품이나 생체 시료에 함유된 당 및 아미노산을 검출하는 용도로 사용되어 왔다. PAD는 전기화학적 검출기의 일종으로서 일정 전위를 가해 주었을 때, 금 전극에서 당과 같은 분석 물질의 산화에 의한 전류의 변화를 신호(signal)로 나타내는 검출기로, 당 및 아미노산을 피코-몰(pico-mole) 수준의 낮은 감도로 검출할 수 있다. PAD는 당을 분석하기 위해서는 사용되었으나 배당체의 분석에는 사용되지 않았는데, 그 이유는 음이온 교환 칼럼에서 당으로부터 배당체만을 선택적으로 분리해내기 어려웠기 때문이다. 따라서 상기 특허문헌에서는 PAD에 배당체를 당으로부터 분리할 수 있는 역상 분리 방법을 결합하여 배당체를 분석하였다. 상기 특허문헌에 개시된 역상 고성능 액체 크로마토그래피-펄스식 전기화학 검출법(reversed-phase high-performance liquid chromatography-pulsed amperometric detection: RP-HPLC-PAD)을 위한 시스템의 구성을 도 2를 참조로 간략히 설명하면 다음과 같다. 이동상은 역상 분리에서 사용되는 물과 유기용매의 혼합용매를 사용한다. 이 경우 당은 역상 분리 조건에서 칼럼에 머무르지 않기 때문에 분리되지 않은 상태로 통과되고, 배당체만이 선택적으로 분리된다. 시료가 역상 칼럼을 통과하여 분리된 후, 용리액은 T자형 혼합기(T-mixer)에서 수산화나트륨과 혼합된다. 이렇게 용리액이 알칼리성 조건이 되면 배당체의 당 부분의 수산화기가 음이온화되어 펄스식 전기화학 검출기에서 검출될 수 있다. 본 방법을 바탕으로 인삼 중의 극성 진세노사이드 분석을 효율적으로 성공하였다. 다만 홍삼에 미량으로 존재하는 비극성 진세노사이드의 분석법을 확립하기 위해서는 분리 조건 및 검출 환경을 보다 개선할 필요가 있었다.

본 발명자들은 효과적인 비극성 진세노사이드의 분석방법을 개발하기 위해 예의 연구 검토한 결과, 홍삼을 에틸아세테이트로 전처리하여 비극성 진세노사이드를 선택적으로 추출한 후, 추출물을 역상 고성능 액체 크로마토그래피-펄스식 전기화학 검출법으로 분석함으로써 홍삼 중의 비극성 진세노사이드를 선택적이면서도 고감도로 재현성있게 분석할 수 있음을 발견하고 본 발명을 완성하게 되었다.

따라서, 본 발명의 목적은 홍삼, 인삼 또는 그의 가공물에 함유된 미량의 비극성 진세노사이드를 높은 선택성과 고감도 및 우수한 재현성으로 분석하는 방법을 제공하는 것이다.

본 발명은 비극성 진세노사이드의 분석방법에 관한 것으로서, 본 발명의 분석방법은

(i) 시료에 함유된 비극성 진세노사이드를 물과 에틸아세테이트를 이용한 액-액 추출법(liquid-liquid extraction: LLE)에 의해 선택적으로 추출하는 단계;

(ii) 상기 단계 (i)에서 수득한 추출물을 역상 고성능 액체 크로마토그래피에 의해 분리하는 단계; 및

(iii) 분리된 시료를 염기성 용액으로 처리한 후 펄스식 전기화학 검출기로 검출하는 단계를 포함한다.

본 발명에서 시료는 홍삼, 인삼 또는 그의 가공물일 수 있다. 상기 가공물 은 인삼을 전통적인 방법 이외에 다양한 방법으로 가공하여 제조되는 효삼, 흑삼 등 뿐만 아니라, 홍삼, 인삼 등으로부터 제조되는 건강기능식품 등을 포함한다.

홍삼, 인삼 또는 그의 가공물은 분말화한 후, 물 또는 유기용매, 가장 바람직하게는 에탄올로 추출하여 사용하는 것이 바람직하다.

본 발명에서 비극성 진세노사이드는 진세노사이드 Rh₁(G-Rh₁), 진세노사이드 Rh₂(G-Rh₂), 진세노사이드 Rg₂(G-Rg₂), 진세노사이드 Rg₃(G-Rg₃), 진세노사이드 Rg₅(G-Rg₅), 진세노사이드 Rk₁(G-Rk₁) 또는 이들의 혼합물을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.

이하, 본 발명에 따른 비극성 진세노사이드의 분석방법을 상세히 설명한다.

상기 단계 (i)에서는 시료에 함유된 비극성 진세노사이드를 물과 에틸아세테이트를 이용한 액-액 추출법에 의해 선택적으로 추출한다. 보다 구체적으로는 시료를 물에 현탁한 후, 에틸아세테이트를 가하여 추출하는 것이 바람직하다.

홍삼 등에는 비극성 진세노사이드가 미량 함유되어 있는 반면, 그 이외의 극성 진세노사이드를 비롯한 사포닌 등 수많은 물질들이 존재한다. 따라서 적절한 전처리를 하지 않으면 일부 극성 진세노사이드 및 기타 성분과 겹쳐서 분석이 어려울 뿐만 아니라, 분석시간이 길어지고 칼럼의 수명이 단축된다. 상기 단계 (i)에 따르면 비극성 진세노사이드만을 선택적으로 추출할 수 있으며 회수율 또한 우수하다. 뿐만 아니라 액-액 추출법은 공정이 간편하고 시간을 절약할 수 있는 장점을 가진다.

상기 단계 (ii)에서는 상기 단계 (i)에서 수득한 추출물을 역상 고성능 액체 크로마토그래피에 의해 분리한다.

상기 단계 (i)에서 수득한 추출물은 물과 아세토니트릴의 혼합용매, 가장 바람직하게는 50% 아세토니트릴에 용해시키고 필터로 여과한 다음, 칼럼에 주입하는 것이 바람직하다.

또한, 상기 역상 고성능 액체 크로마토그래피는 C-18 칼럼을 사용하고, 물과 아세토니트릴의 혼합용매를 이동상으로 사용하는 것이 바람직하다. 상기 이동상은 30% 아세토니트릴과 80% 아세토니트릴을 92:8에서 10:90의 부피비로 기울기 용리 조건을 사용하는 것이 보다 바람직하다. 이동상의 유속은 0.2 mL/분이 바람직하다.

아울러, 칼럼 온도는 35 내지 50℃가 바람직하며, 40℃가 가장 바람직하다. 비극성 진세노사이드는 온도가 증가할수록 머무름 시간이 증가하는 반면, 방해 피크는 온도가 증가할수록 머무름 시간이 감소하기 때문에, 온도를 증가시키면 비극성 진네노사이드가 완전히 분리될 수 있다.

상기 단계 (iii)에서는 분리된 시료를 염기성 용액으로 처리한 후 펄스식 전기화학 검출기로 검출한다. 보다 구체적으로, 단계 (ii)에서 칼럼을 통과한 이동상을 T자형 혼합기(T-mixer)에서 염기성 용액, 가장 바람직하게는 수산화나트륨 용액과 혼합한 후, 펄스식 전기화학 검출기로 검출한다.

T자형 혼합기로 공급되는 염기성 용액의 유속은 0.8 mL/분이 바람직하며, 수 산화나트륨의 농도는 200 mM가 바람직하다.

아울러, 펄스식 전기화학 검출기의 전위 파장은 E1 = 0.2 V (0.00 - 0.04 초), E2 = 0 V (0.05 - 0.21 초), E3 = +0.22 V (0.22 - 0.46 초), E4 = 0 V (0.47 - 0.56 초), E5 = 2 V (0.57 - 0.58 초) 및 E6 = +0.6 V (0.59 초)가 바람직하다.

본 발명에 따른 비극성 진세노사이드의 분석방법은 높은 선택성과 고감도 및 우수한 재현성을 나타낼 뿐만 아니라 간편하여, 1) 홍삼에 함유된 미량의 비극성 진세노사이드의 정량 및 홍삼의 제조 과정 중에 진세노사이드 변화 양상 파악에 이용하고, 2) 효삼, 흑삼과 같은 가공 인삼 중의 비극성 진세노사이드의 정량에 이용하여 제조 과정에 따른 성분 변화를 비교하며, 3) 홍삼 및 관련 건강 기능 식품 중의 비극성 진세노사이드의 정량에 이용하여 품질을 평가하고, 4) 인삼 기원 식물의 종별, 부위별에 따른 성분의 파악에 활용할 수 있다.

이하, 실시예에 의해 본 발명을 보다 구체적으로 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오직 본 발명을 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 국한되지 않는다는 것은 당업자에게 있어서 자명하다.

실시예 1: 비극성 진세노사이드의 분석

홍삼 분말 50 mg을 5 mL의 에탄올에 넣어 2시간 동안 초음파 추출한 후 여과하였다. 여과액을 농축한 다음, 잔사를 1 mL의 물에 현탁한 후, 1 mL의 에틸아세 테이트(EtAc)를 가하였다. 그런 다음, 보텍스 혼합법(vortex mixing)에 의해 30초간 혼합하고, 12,000 rpm에서 5분간 원심분리하여 수층과 유기용매층을 완전히 분리하였다. 이 과정을 3회 반복하여 모은 EtAc층을 모두 증발 농축한 후 잔사를 50% 아세토니트릴(ACN)에 용해시킨 다음, 필터를 이용하여 여과하였다.

여과된 EtAc 추출물을 다음의 조건으로 HPLC에 의해 분리하였다.

- 분석용 칼럼: Unison UK-C-18 칼럼 (150 mm × 2.0 mm I.D.; 3 μm, Imtakt, Kyoto, Japan)

- 이동상: 30% ACN (용매 A)과 80% ACN (용매 B)의 기울기 용리 조건 {0-8분간 A:B (92:8)으로 등용매성 용리, 8-10분간 A:B (92:8)에서 (68:32)로 기울기 용리, 10-45분간 A:B (68:32)로 등용매성 용리, 45-50분간 A:B (68:32)에서 (10:90)으로 기울기 용리, 50-60분간 A:B (10:90)으로 용리하여 칼럼을 세척한 후, 60-70분간 A:B (92:8)로 용리하면서 칼럼을 초기 용매 조건으로 평형화}

- 이동상의 유속: 0.2 mL/분

- 칼럼 온도: 40℃

- 검체 주입량: 10 μL

그런 다음, 200 mM 수산화나트륨 용액을 유속 0.8 mL/분으로 T자형 혼합기에 공급하고, 분리된 시료를 펄스식 전기화학 검출기(ICS-3000 series Dionex; Sunnyvale, CA, USA)로 검출하였다. 펄스식 전기화학 검출기의 전위 파장은 E1 = 0.2 V (0.00 - 0.04 초), E2 = 0 V (0.05 - 0.21 초), E3 = +0.22 V (0.22 - 0.46 초), E4 = 0 V (0.47 - 0.56 초), E5 = 2 V (0.57 - 0.58 초) 및 E6 = +0.6 V (0.59 초)이었다. 분석 자료는 크로멜레온 클라이언트 프로그램(Chromeleon client program; Dionex)을 통하여 수집되었다.

상기 이동상은 진공 여과기를 통해 탈기되었으며 매일 만드는 것을 원칙으로 하였다. 칼럼 후 공급액으로 사용된 수산화나트륨 용액은 탄산염을 제거하기 위해 실험 중 헬륨 퍼지를 실시하였다.

분자량을 확인하기 위해 JEOL AccuTOF TLC JMS-T100TD (Tokyo, Japan)를 사용하였다.

비교예 1: 추출용매에 따른 비극성 진세노사이드의 추출율 비교

14 종류의 극성 및 비극성 진세노사이드를 헥산, 에틸아세테이트 (EtAc) 또는 부탄올로 각각 3회 추출하고 각 추출율을 비교하였다.

14 가지의 진세노사이드 표준품을 각 0.1 mg 함유하고 있는 혼합물을 제조하여 1 mL의 물에 현탁한 후, 현탁액에 따로 1 mL의 헥산 (hexane), 함수 에틸아세테이트 (EtAc) 또는 함수 부탄올 (n-BuOH)을 가하였다. 그런 다음, 보텍스 혼합법(vortex mixing)에 의해 30초간 혼합하고, 12,000 rpm에서 5분간 원심분리하여 수층과 유기용매층을 완전히 분리하였다. 이 과정을 3회 반복하여 모은 유기용매층을 모두 증발 농축한 후 잔사를 50% ACN에 용해시켰다. 남은 수층도 마찬가지로 증발 농축한 후 잔사를 50% ACN에 용해시켰다. 각 시료를 실시예 1과 동일하게 RP-HPLC-PAD 방법으로 분석함으로써 수층과 유기용매층에 함유된 진세노사이드의 함량을 비교하였다. 이 방법을 통해 전체 진세노사이드 중 각 유기용매로 이행된 진세노사이드의 비율을 얻을 수 있었으며, 3 가지의 유기용매 별로 14 가지 진세노사이드의 추출율을 비교하였다. 그 결과는 도 3에 나타내었다.

도 3에서 볼 수 있듯이, 헥산으로 추출할 경우 대부분의 진세노사이드가 헥산층으로 전혀 이행되지 않았으며, 일부 비극성 진세노사이드만이 약간씩 이행되었다 (G-Rh₂: 11%, G-Rg₃: 6%, G-Rg₅: 5%). 함수 부탄올로 추출할 경우 모든 진세노사이드가 선택성 없이 부탄올층으로 이행되는 것을 확인하였으며, 모두 95% 이상의 회수율을 나타내었다. 반면 에틸아세테이트로 추출했을 경우 모든 비극성 진세노사이드가 95% 이상 이행된 반면, 극성 진세노사이드는 오직 일부만이 약간 이행된 것을 확인할 수 있었다 (G-Rf: 28%, G-Rd: 15%, G-Re: 7%). 이 중 약간 이행된 극성 진세노사이드 G-Rf, G-Rd 및 G-Re의 피크는 해당 분석 조건에서 비극성 진세노사이드의 피크와 크로마토그램 상 겹쳐지지 않으므로, 분석에 영향을 주지 않는 것을 확인할 수 있었다.

따라서 비극성 진세노사이드를 선택적으로 추출하고자 할 경우 에틸아세테이트로 분획하여 추출하는 것이 가장 적합함을 알 수 있었다.

비교예 2: 칼럼 온도에 따른 비극성 진세노사이드의 분리 비교

6년근 홍삼 주근을 이용하고 칼럼 온도를 30 ℃ 또는 40 ℃로 하여 실시예 1과 동일한 방법으로 비극성 진세노사이드를 분석하고, 그 결과를 도 4에 나타내었다.

칼럼 온도를 30 ℃로 할 경우, 크로마토그램 상 내부 표준물질인 아스트라갈로사이드(astragaloside) IV(I.S.), G-Rg₃및 G-Rh₂는 각각 방해 피크 A, B 및 C와 겹쳐서 나타나는 것을 확인할 수 있었다. 특히 방해 피크 B는 매우 크고 명확하게 나타나며 G-Rg₃와 완전히 겹쳐지기 때문에, 자칫 이 방해 피크를 G-Rg₃로 오인할 수 있다.

그러나 40 ℃의 칼럼 온도에서 분석하면 진세노사이드의 머무름 시간은 약간 증가하는 반면, 방해 피크들의 머무름 시간은 급격히 줄어들기 때문에 모든 비극성 진세노사이드를 방해 피크로부터 완전하게 분리할 수 있었다.

G-Rg₃와 겹쳐지는 피크를 규명하기 위해 분자량을 측정해 보았다. 전기분무 이온화 비행시간형 질량분석법(electrospray ionization time-of-flight mass spectrometry: ESI-TOF-MS)로 측정한 결과 [M+H]⁺분자 이온은 m/z 579.4에서 측정되었다. 대부분의 진세노사이드의 분자량이 적어도 620 이상임을 가만할 때, 이 물질은 진세노사이드가 아닌 것으로 추정된다. 또한 진세노사이드는 모두 분석 온도가 증가함에 따라 머무름 시간이 증가하였는데, 미지의 피크들은 반대의 양상을 나타내므로 물리 화학적으로 다른 물질인 것으로 추정된다.

실험예 1: 검출 감도의 측정

6 가지의 비극성 진세노사이드 표준품에 대해 1, 2, 5, 10, 25 및 50 μg/mL의 농도 범위를 설정하여 검량선(calibration curve)를 작성하였다. 이 경우 비극 성 진세노사이드 표준품의 농도 X와 피크의 면적비 Y의 상관 계수(correlation coefficient: r²)는 0.9972 - 0.9990의 범위를 나타내었다. 검출 한계 (limit of detection: LOD) 및 정량 한계 (limit of quantification: LOQ)는 각각 신호/노이즈(signal/noise: S/N) 비율이 3 및 10일 경우의 양으로 설정하였다. 각 표준품의 검출 한계 및 정량 한계를 하기 표 1에 나타내었다. 검출 감도를 비교해 볼 때 기존에 알려된 ELSD의 감도보다 750-3000배 정도 PAD의 검출 감도가 우수한 것으로 확인되었다. 따라서 기존의 HPLC-ELSD 방법으로 불가능했던 미량 분석이 RP-HPLC-PAD 방법으로는 가능한 것으로 확인되었다.

[표 1]

실험예 2: 정확도 및 정밀도 검증

6년근 홍삼 주근에서 재현성 및 회수율을 측정하여 정확도와 정밀도를 검증하였으며, 그 결과를 각각 하기 표 2 및 표 3에 나타내었다.

일중 및 일간 시험(n=5)을 실시한 결과 상대 표준 편차 (RSD)는 각각 2.79-8.34% 및 1.89-8.10%를 나타내었다. 비극성 진세노사이드의 회수율은 500 μL의 홍삼 검체에 500 μL의 비극성 진세노사이드 혼합물 (각 5, 10 및 25 μg)을 가하여 HPLC에 10 μL를 주입함으로써 각 첨가되어 검출되는 비극성 진세노사이드의 양이 50, 100 및 250 ng이 되도록 하였다. 비극성 진세노사이드 표준품에 대하여 분석 방법의 회수율을 시험(n=3)한 결과는 98.06-102.73%의 회수율 및 3.53-6.00%의 상대 표준 편차를 나타내었다. 따라서 본 발명에 따른 RP-HPLC-PAD 방법은 우수한 정확도와 정밀도를 나타내고 있음을 확인할 수 있었다.

[표 2]

[표 3]

도 1은 비극성 진세노사이드(ginsenoside) 및 아스트라갈로사이드(astragaloside) IV (내부 표준물질)의 화학식을 나타낸다.

도 2는 역상 고성능 액체 크로마토그래피-펄스식 전기화학 검출법(RP-HPLC-PAD)을 위한 시스템의 개략도이다.

도 3은 14 가지의 진세노사이드를 헥산, 에틸아세테이트 또는 n-부탄올로 3회 추출하여 얻은 추출율(extraction yield; %)을 나타낸 그래프이다.

도 4는 6년근 홍삼 중의 비극성 진세노사이드를 (A) 30 °C 및 (B) 40 °C의 칼럼 온도에서 분석하여 얻은 크로마토그램이다(피크 1: G-Rg₂, 2: G-Rh₁, 3: G-Rg₃, 4: G-Rk₁, 5: G-Rg₅, 6: G-Rh₂, I.S.: AST IV).

Claims

(i) 시료에 함유된 비극성 진세노사이드를 물과 에틸아세테이트를 이용한 액-액 추출법(liquid-liquid extraction: LLE)에 의해 선택적으로 추출하는 단계;

(ii) 상기 단계 (i)에서 수득한 추출물을 역상 고성능 액체 크로마토그래피에 의해 분리하는 단계; 및

(iii) 분리된 시료를 염기성 용액으로 처리한 후 펄스식 전기화학 검출기로 검출하는 단계를 포함하는 비극성 진세노사이드의 분석방법.
제1항에 있어서, 시료가 홍삼, 인삼 또는 그의 가공물인 것을 특징으로 하는 분석방법.
제2항에 있어서, 홍삼, 인삼 또는 그의 가공물을 분말화한 후, 물 또는 유기용매로 추출하여 사용하는 것을 특징으로 하는 분석방법.
제1항에 있어서, 비극성 진세노사이드가 진세노사이드 Rh₁(G-Rh₁), 진세노사이드 Rh₂(G-Rh₂), 진세노사이드 Rg₂(G-Rg₂), 진세노사이드 Rg₃(G-Rg₃), 진세노사이드 Rg₅(G-Rg₅), 진세노사이드 Rk₁(G-Rk₁) 또는 이들의 혼합물인 것을 특징으로 하는 분석방법.
제1항에 있어서, 단계 (i)에서 시료를 물에 현탁한 후, 에틸아세테이트를 가하여 추출하는 것을 특징으로 하는 분석방법.
제1항에 있어서, 단계 (ii)에서 역상 고성능 액체 크로마토그래피가 C-18 칼럼을 사용하여 수행되는 것을 특징으로 하는 분석방법.
제1항에 있어서, 단계 (ii)에서 역상 고성능 액체 크로마토그래피가 물과 아세토니트릴의 혼합용매를 이동상으로 사용하여 수행되는 것을 특징으로 하는 분석방법.
제7항에 있어서, 이동상이 30% 아세토니트릴과 80% 아세토니트릴을 92:8에서 10:90의 부피비로 기울기 용리 조건을 사용하는 것을 특징으로 하는 분석방법.
제7항 또는 제8항에 있어서, 이동상의 유속이 0.2 mL/분인 것을 특징으로 하는 분석방법.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 단계 (ii)에서 역상 고성능 액체 크로마토그래피에 사용된 칼럼 온도가 35 내지 50℃인 것을 특징으로 하는 분석방법.
제10항에 있어서, 칼럼 온도가 40℃인 것을 특징으로 하는 분석방법.
제1항에 있어서, 단계 (iii)에서 단계 (ii)에서 역상 고성능 액체 크로마토그래피에 의해 칼럼을 통과한 이동상을 T자형 혼합기(T-mixer)에서 염기성 용액과 혼합하는 것을 특징으로 하는 분석방법.
제12항에 있어서, T자형 혼합기로 공급되는 염기성 용액의 유속이 0.8 mL/분인 것을 특징으로 하는 분석방법.
제1항, 제12항 또는 제13항에 있어서, 단계 (iii)에서 염기성 용액이 수산화나트륨 용액인 것을 특징으로 하는 분석방법.
제14항에 있어서, 수산화나트륨의 농도가 200 mM인 것을 특징으로 하는 분석방법.
제1항에 있어서, 단계 (iii)에서 펄스식 전기화학 검출기의 전위 파장이 E1 = 0.2 V (0.00 - 0.04 초), E2 = 0 V (0.05 - 0.21 초), E3 = +0.22 V (0.22 - 0.46 초), E4 = 0 V (0.47 - 0.56 초), E5 = 2 V (0.57 - 0.58 초) 및 E6 = +0.6 V (0.59 초)인 것을 특징으로 하는 분석방법.