CN110187022A - 一种参倍固肠胶囊中人参皂苷Re含量的测定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种参倍固肠胶囊中人参皂苷Re含量的测定方法，包括以下步骤：步骤1）：以甲醇溶液为溶剂制备对照品溶液；步骤2）：对参倍固肠胶囊内容物进行加热回流后制备供试品溶液；步骤3）：采用高效液相色谱法测定对照品溶液和供试样品溶液中的人参皂苷Re的含量；色谱检测条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A、以水为流动相B进行梯度洗脱；流速1mL/min,检测波长203nm；进样量20μl；本发明所采取的技术方案解决了由于参倍固肠胶囊中还含有各种其他中药成份，容易对人参皂苷Re的检测造成干扰导致难以检测出参倍固肠胶囊中人参皂苷Re含量的问题。
Description
技术领域
本发明涉及药品成分检测技术领域，具体涉一种参倍固肠胶囊中人参皂苷Re含量的测定方法。
背景技术
参倍固肠胶囊是一种用于肝脾不和，泻痢腹痛，慢性非特异性溃疡性结肠炎的中成药，其成份主要包括有份主要包括有五倍子、肉豆蔻、诃子肉、乌梅、木香、苍术、茯苓、鹿角霜、人参等；其中人参的有效成分是人参皂苷Re，人参皂苷Re具有抑制中枢神经，促进DNA、RNA的合成，升高血浆皮质酮的作用，扩张血管，还有抗疲劳作用；目前虽然存在一些用HPLC检测人参皂苷Re的方法，但是由于因参倍固肠胶囊为纯中药制剂，处方中含有9味中药材，2种辅料，其他的中药成份容易对人参皂苷Re的检测造成干扰，导致难以检测出参倍固肠胶囊中人参皂苷Re含量的问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种参倍固肠胶囊中人参皂苷Re含量的测定方法，排除因参倍固肠胶囊中的其他中药成份对人参皂苷Re检测的干扰，从而解决难以准确地检测出参倍固肠胶囊中人参皂苷Re含量的问题。
为解决上述的技术问题，本发明采用以下技术方案：一种参倍固肠胶囊中人参皂苷Re含量的测定方法，包括以下步骤：
步骤1）：以甲醇溶液为溶剂制备对照品溶液；
步骤2）：对参倍固肠胶囊内容物进行加热回流后制备供试品溶液；
步骤3）：采用高效液相色谱法测定对照品溶液和供试样品溶液中的人参皂苷Re的含量；
色谱检测条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A、以水为流动相B进行梯度洗脱；流速1mL/min；检测波长203nm；进样量20μl；
进一步的，步骤1）中制备对照品溶液的具体操作为：精密称取人参皂苷Re对照品，加甲醇溶解，得到浓度为0.2mg/mL的对照品溶液；
进一步的，步骤2）的具体操作：
步骤2）的具体操作：
S1：取参倍固肠胶囊精密称取10g参倍固肠胶囊内容物，加50mL甲醇，称定重量，加热回流2小时后，放冷；
S2：再次称重，用甲醇补足减失重量，滤过，弃去初滤液，精密量取25mL续滤液于蒸发皿中，水浴上蒸干，得到残渣；
S3：将步骤S2中得到的残渣加1％氢氧化钠溶液分3次溶解并转移至分液漏斗中；
S4：用水饱和的正丁醇溶液分三次提取，合并正丁醇液；
S5：取正丁醇液，以1％氢氧化钠溶液分2次洗涤，继正丁醇饱和的水洗至中性，回收正丁醇，蒸干得到残渣；
S6：将步骤S5中得到的残渣以5ml水溶解，加入预先处理好的D101大孔吸附树脂柱，以100mL水洗脱，弃去洗脱液，继以100mL 80％乙醇洗脱，收集洗脱液，水浴蒸干，得到残渣；
S7：将步骤S6中得到的残渣加甲醇使溶解并以甲醇定容至2mL，摇匀，即得供试品溶液；
进一步的，步骤S3中共用30mL1%氢氧化钠分三次溶解转移，且每次用量依次为10mL、10mL、10mL；
进一步的，步骤S4中共用90mL水饱和的正丁醇溶液90ml分三次提取，且每次用量依次为30mL、30mL、30mL；
进一步的，步骤S5中共用100mL1%氢氧化钠溶液分两次洗涤，且每次用量依次为50mL、50mL；
进一步的，D101大孔吸附树脂柱的柱子尺寸为20mm×200mm,装D101高度约12cm；
进一步的，步骤3）中色谱检测的柱温为25℃～35℃；
进一步的，步骤3）中色谱柱理论塔板数按人参皂苷Re峰计算应≥8000；
更进一步的技术方案是步骤3）中色谱检测的洗脱方式为梯度洗脱；具体洗脱方式如表1所示。
表1 梯度洗脱方式
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
1、选择乙腈与水进行梯度洗脱，与等度洗脱相比，提高了色谱柱柱效，具有更好的分离度，便于人参皂苷Re峰与其他杂质峰的分离，有效提高了高效液相色谱的检测的效率；
2、通过对参倍固肠胶囊内容物采取加热回流的方式，与索氏提取方式相比，大大减少了提取时间。
3、以1％氢氧化钠溶液溶解残渣，与水溶解残渣相比，溶解更快速、溶解更完全，减少了中间损失。
4、以D101大孔吸附树脂分离纯化，能除去供试品溶液中90％以上的杂质，能够较大程度的减少其他中药成份的干扰，使得能够顺利出峰，含量检测结果具有较好的稳定性和准确性。
附图说明
图1为人参皂苷Re对照品溶液色谱图。
图2为参倍固肠胶囊供试品溶液色谱图。
图3为人参皂苷Re标准曲线图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1：步骤1）：以甲醇溶液为溶剂制备对照品溶液；
步骤2）：对参倍固肠胶囊内容物进行加热回流后制备供试品溶液；
步骤3）：采用高效液相色谱法测定对照品溶液和供试样品溶液中的人参皂苷Re的含量；
色谱检测条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A、以水为流动相B进行梯度洗脱；流速1mL/min,检测波长203nm；进样量20μl；
进一步的，步骤1）中制备对照品溶液的具体操作为：精密称取人参皂苷Re对照品，加甲醇溶解，得到浓度为0.2mg/mL的对照品溶液；
进一步的，步骤2）的具体操作：
步骤2）的具体操作：
S1：取参倍固肠胶囊精密称取10g参倍固肠胶囊内容物，加50mL甲醇，称定重量，加热回流2小时后，放冷；
S2：再次称重，用甲醇补足减失重量，滤过，弃去初滤液，精密量取25mL续滤液于蒸发皿中，水浴上蒸干，得到残渣；
S3：将步骤S2中得到的残渣加1％氢氧化钠溶液分3次溶解并转移至分液漏斗中；
S4：用水饱和的正丁醇溶液分三次提取，合并正丁醇液；
S5：取正丁醇液，以1％氢氧化钠溶液分2次洗涤，继正丁醇饱和的水洗至中性，回收正丁醇，蒸干得到残渣；
S6：将步骤S5中得到的残渣以5ml水溶解，加入预先处理好的D101大孔吸附树脂柱，以100mL水洗脱，弃去洗脱液，继以100mL 80％乙醇洗脱，收集洗脱液，水浴蒸干，得到残渣；
S7：将步骤S6中得到的残渣加甲醇使溶解并以甲醇定容至2mL，摇匀，即得供试品溶液；
进一步的，步骤S3中共用30mL1%氢氧化钠分三次溶解转移，且每次用量依次为10mL、10mL、10mL；
进一步的，步骤S4中共用90mL水饱和的正丁醇溶液90ml分三次提取，且每次用量依次为30mL、30mL、30mL；
进一步的，步骤S5中共用100mL1%氢氧化钠溶液分两次洗涤，且每次用量依次为50mL、50mL；
进一步的，D101大孔吸附树脂柱的柱子尺寸为20mm×200mm,装D101高度约12cm；
进一步的，步骤3）中色谱检测的柱温为25℃～35℃；
进一步的，步骤3）中色谱柱理论塔板数按人参皂苷Re峰计算应≥8000；
更进一步的技术方案是步骤3）中色谱检测的洗脱方式为梯度洗脱。
检测结果如图1和图2所示。其中对照品溶液所测得谱图中的峰面积1159.05725，峰高10.33409；峰宽1.6987；供试品溶液所测得谱图中的峰面积1736.33301，峰高13.91842，峰宽1.8200。
本方法系统性验证结果如下：
（1）线性考察
分别精密吸取人参皂苷Re对照品溶液（0.437776mg/ml）0.5ml、1ml、2ml、3ml、5ml到10ml容量瓶中，分取10μl进样，记录色谱，以峰面积为纵坐标，记录色谱，以峰面积为横坐标，以进样量（μg）为纵坐标作图，计算回归方程为：A=238618.08C+5183.73 (r=0.9999)，回归方程拟合过原点的直线方程为：A=240446.3135C；将一供试品溶液进样分析，所得峰面积分别代入上两式计算，相对偏差为0.35%，故可认为标准曲线过原点，回归方程截距为零。由此含量测定可采用外标一点法计算。在0.21889μg～4.37776μg之间线性关系良好。
表2 人参皂苷Re线性关系考察
（2）精密度试验
取对照品溶液0.188466mg/ml，重复进样6次，记录色谱，结果见表2及精密度图谱，RSD为0.31%，说明有良好的精密度。
表3 精密度试验
（3）重复性试验
取一样品按正文所述制备6份供试品溶液，分别进样，记录色谱，计算，结果见表3， RSD为0.80%，说明有良好的重复性。
表4 重复性试验
（4）回收率试验
采用加样回收，精密称取已测定含量的样品2.5g（54.72μg/g），再加入人参皂苷Re对照品适量，按正文所述色谱条件测定，计算回收率，结果见表4，人参皂苷Re的回收率为96.25%，RSD为1.12%，说明本法有良好的回收率。
表5 回收率试验
（5）专属性
取参倍固肠胶囊及阴性样品按供试品溶液制备方法制备样品溶液及阴性样品溶液，按上述色谱条件，分别取对照品溶液、样品溶液、阴性样品溶液液入液相色谱仪，样品溶液色谱在对照品溶液色谱相应位置有相应的色谱峰，且阴性无干扰。
十批含量样品测定结果见表6。
根据10批样品测定值，暂定本品每粒含红参以人参皂苷Re（C48H82O18）计，不少于19μg。
尽管这里参照本发明的多个解释性实施例对本发明进行了描述，但是，应该理解，本领域技术人员可以设计出很多其他的修改和实施方式，这些修改和实施方式将落在本申请公开的原则范围和精神之内。更具体地说，在本申请公开和权利要求的范围内，可以对主题组合布局的组成部件和/或布局进行多种变型和改进。除了对组成部件和/或布局进行的变形和改进外，对于本领域技术人员来说，其他的用途也将是明显的。
Claims (10)
1.一种参倍固肠胶囊中人参皂苷Re含量的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1）：以甲醇溶液为溶剂制备对照品溶液；
步骤2）：对参倍固肠胶囊内容物进行加热回流后制备供试品溶液；
步骤3）：采用高效液相色谱法测定对照品溶液和供试样品溶液中的人参皂苷Re的含量；
色谱检测条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A、以水为流动相B进行梯度洗脱；流速1mL/min,检测波长203nm；进样量20μl。
2.根据权利要求1所述的一种参倍固肠胶囊中人参皂苷Re含量的测定方法，其特征在于：步骤1）中制备对照品溶液的具体操作为：精密称取人参皂苷Re对照品，加甲醇溶解，得到浓度为0.2mg/mL的对照品溶液。
3.根据权利要求1所述的一种参倍固肠胶囊中人参皂苷Re含量的测定方法，其特征在于：
步骤2）的具体操作：
S1：取参倍固肠胶囊精密称取10g参倍固肠胶囊内容物，加50mL甲醇，称定重量，加热回流2小时后，放冷；
S2：再次称重，用甲醇补足减失重量，滤过，弃去初滤液，精密量取25mL续滤液于蒸发皿中，水浴上蒸干，得到残渣；
S3：将步骤S2中得到的残渣加1％氢氧化钠溶液分3次溶解并转移至分液漏斗中；
S4：用水饱和的正丁醇溶液分三次提取，合并正丁醇液；
S5：取正丁醇液，以1％氢氧化钠溶液分2次洗涤，继正丁醇饱和的水洗至中性，回收正丁醇，蒸干得到残渣；
S6：将步骤S5中得到的残渣以5ml水溶解，加入预先处理好的D101大孔吸附树脂柱，以100mL水洗脱，弃去洗脱液，继以100mL 80％乙醇洗脱，收集洗脱液，水浴蒸干，得到残渣；
S7：将步骤S6中得到的残渣加甲醇使溶解并以甲醇定容至2mL，摇匀，即得供试品溶液。
4.根据权利要求3所述的一种参倍固肠胶囊中人参皂苷Re含量的测定方法，其特征在于：步骤S3中共用30mL1%氢氧化钠分三次溶解转移，且每次用量依次为10mL、10mL、10mL。
5.根据权利要求3所述的一种参倍固肠胶囊中人参皂苷Re含量的测定方法，其特征在于：步骤S4中共用90mL水饱和的正丁醇溶液90ml分三次提取，且每次用量依次为30mL、30mL、30mL。
6.根据权利要求3所述的一种参倍固肠胶囊中人参皂苷Re含量的测定方法，其特征在于：步骤S5中共用100mL1%氢氧化钠溶液分两次洗涤，且每次用量依次为50mL、50mL。
7.根据权利要求3所述的一种参倍固肠胶囊中人参皂苷Re含量的测定方法，其特征在于：D101大孔吸附树脂柱的柱子尺寸为20mm×200mm,装D101高度约12cm。
8.根据权利要求1所述的一种参倍固肠胶囊中人参皂苷Re含量的测定方法，其特征在于：步骤3）中色谱检测的柱温为25℃～35℃。
9.根据权利要求1所述的一种参倍固肠胶囊中人参皂苷Re含量的测定方法，其特征在于：步骤3）中色谱柱理论塔板数按人参皂苷Re峰计算应≥8000。
10.根据权利要求1所述的一种参倍固肠胶囊中人参皂苷Re含量的测定方法，其特征在于：步骤3）中色谱检测的洗脱方式为梯度洗脱。
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