CN103529154A - 一种控制生脉注射液中间体质量的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种控制生脉注射液中间体质量的方法。本发明还提供了生脉注射液中间体的检测方法。本发明发现，通过对上述各中间体进行质量控制后，只要中间体在其控制范围内，所得成品均能够符合注射液质量标准；因此，在生产过程中，按照本发明方法进行质量控制，能够在前期及时排除生产中遇到的技术问题，避免了到成品才发现不合格而返工的缺陷，为注射液的顺利生产提供了保障。
Description
技术领域
本发明涉及一种控制生脉注射液中间体质量的方法。
背景技术
生脉注射液，是由红参100g、麦冬312g、五味子156g经提取纯化制备得到的注射液，可益气养阴，复脉固脱。用于气阴两亏，脉虚欲脱的心悸、气短，四肢厥冷、汗出、脉欲绝及心肌梗塞、心源性休克、感染性休克等具有上述证候者。
上述注射液制备方法如下：以上三味，将红参切薄片或粉碎成，用90%以上乙醇浸渍后加热回流提取4～5次，每次2小时；或连续回流提取6.5小时，合并提取液，冷藏，滤过，回收乙醇至每1ml含生药0.3～0.4g，加适量活性炭，搅拌，滤液调pH值至近中性，静置，滤液浓缩至稠膏状，加入注射用水至200ml，搅匀，冷藏，滤过，加适当活性炭煮沸，滤过，滤液供配液用；五味子，必要时粉碎，用水蒸气蒸馏法收集馏液150ml，冷藏，供配液用，药渣加水煎煮两次，每次40分钟，合并煎液，滤过，滤液浓缩至稠膏状，加入乙醇进行两次醇沉，第一次使含醇量达80％，第二次使含醇量达85％，调节pH值至近中性，冷藏，滤过，回收乙醇并浓缩至稠膏状，加入注射用水至150ml，搅匀，冷藏，滤过，加适量活性碳煮沸30分钟，稍冷，过滤至澄明，供配液用；麦冬照五味子水液制备方法制成澄明的麦冬水溶液约200ml,供配液用。将上述红参水液、五味子蒸馏液、五味子水液和麦冬水液，混合，加热，静置，滤过，即得生脉水沉精滤液，再加入3～5g聚山梨酯80,混合均匀，滤过，滤液加注射用水至1000ml，调节药液pH值至7.5,滤过，灌封，灭菌，即得。
目前已有对生脉注射液成品的质量控制方法，如《生脉注射液修订标准（草案）》，它要求对生脉注射液成品中的指纹图谱、人参皂苷含量、五味子醇甲含量等进行了检测及限量。为了使得注射液成品能够满足其限定标准，在注射液的制备过程中进行中间体的检测及质量控制也十分必要。然而，由上述制备工艺可知，生脉注射液制备过程中涉及多个操作环节，若对每个中间体都进行检测，则较为耗费资金和时间；但若是仅对部分中间体进行检测，那么为了保证成品质量，应该检测哪些中间体？待检中间体的质量限定又该如何选择？
发明内容
基于上述问题，本发明的目的在于提供一种控制生脉注射液中间体质量的方法。本发明的另一目的在于提供生脉注射液中间体的检测方法。
本发明提供了一种控制生脉注射液中间体质量的方法，其特征在于：所述生脉注射液的中间体包括红参醇提液、红参水沉液、麦冬一次醇沉液、麦冬二次醇沉液、麦冬水沉过活性炭精制液、五味子一次醇沉液、五味子二次醇沉液、五味子水沉液、五味子水沉过活性炭精制液、五味子馏液、生脉水沉精滤液；
红参醇提液中，总固体含量以生药计应为12～28.5%，人参皂苷Rg1含量应为1.5～2.5mg/1g生药，人参皂苷Re含量应为0.9～1.5mg/1g生药，人参皂苷Rb1含量应为2.6～3.9mg/1g生药；
红参水沉液中，总固体含量以生药计应为10～25%；
麦冬一次醇沉液总固体含量以生药计应为7.5～14.5%，麦冬二次醇沉液总固体含量以生药计应为3～10.5%，麦冬水沉过活性炭精制液总固体含量以生药计应为1.8～9.5%。
五味子一次醇沉液中，总固体含量以生药计应为5.5～12.5%，五味子醇甲含量应为0.65～1.6mg/1g生药；
五味子二次醇沉液，总固体含量以生药计应为3～8.5%，五味子醇甲含量应为0.35～1mg/1g生药；
五味子水沉液，总固体含量以生药计应为2～6%，五味子醇甲含量应为0.25～0.6mg/1g生药；
五味子水沉过活性炭精制液中，总固体含量以生药计应为3～8%，五味子醇甲含量应为0.05～0.2mg/1g生药；
五味子馏液的微生物限度≤50CFU/1ml；
生脉水沉精滤液中，总固体含量以生药计为5～10%，五味子醇含量为0.05～0.2mg/1g生药，人参皂苷Rg1含量为1.3～2mg/1g生药，人参皂苷Re含量为0.7～1.2mg/1g生药，人参皂苷Rb1含量为2～3.5mg/1g生药，内毒素＜5EU/ml，细菌总数≤80CFU/1ml
进一步地，所述红参醇提液或红参水沉液的指纹图谱与参麦注射液成品对照指纹图谱的相似度不得低于0.90；所述参麦注射液成品对照指纹图谱如图2所示。
进一步地，所述生脉水沉精滤液的指纹图谱与生脉注射液成品指纹图谱的相似度不得低于0.85；所述生脉注射液成品指纹图谱如图4所示。
其中，红参醇提液、红参水沉液或生脉水沉精滤液中人参皂苷含量和指纹图谱均采用HPLC进行检测，其色谱条件如下：
色谱柱：十八烷基硅胶键合相色谱柱；
检测波长为203nm；
流动相：以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下表进行梯度洗脱，
| 时间/分 | 流动相A/% | 流动相B/% |
| 0—30 | 0→10 | 100→90 |
| 30—45 | 10→23 | 90→77 |
| 40—50 | 23 | 77 |
| 50—85 | 23→60 | 77→40 |
| 85—95 | 60→100 | 40→0 |
优选地，色谱柱为Waters symmetry shieldTMRP18，4.6mm×250mm，5.0μm。
更进一步地，所述HPLC检测过程中，对照品溶液和供试品溶液的制备方法如下：
对照品溶液的制备：精密量取人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1对照品适量，加20%乙腈制成每1ml分别含0.1mg、0.08mg和0.2mg的混合溶液，即得；
供试品溶液的制备：精密吸取待测中间体适量，蒸干，残渣加水溶解制成每1ml相当于0.1g药材的溶液，摇匀，即得。
进一步地，总固体含量的检测方法如下：
精密量取待检液10ml，置已恒重的蒸发皿中，于水浴上蒸干后，在105℃干燥3小时，移置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量，计算即得。
进一步地，五味子醇甲的含量是通过HPLC检测的，色谱条件如下：
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；
流动相：甲醇：水=65:35；
检测波长为250nm。
更进一步地，所述五味子醇甲的HPLC检测方法中，对照品溶液和供试品溶液的制备方法如下：
对照品溶液的制备；取五味子醇甲对照品5mg，精密称定，置50ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得，浓度为每1ml含五味子甲醇0.1mg；
供试品溶液的制备：精密吸取待测中间体适量，蒸干，残渣加水溶解制成每1ml相当于0.15g药材的溶液，摇匀，即得。
本发明还提供了生脉注射液中间体的检测方法，它包括如下操作步骤：
（1）人参皂苷的含量检测采用HPLC进行，其色谱条件如下：
色谱柱：十八烷基硅胶键合相色谱柱；
检测波长为203nm；
流动相：以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下表进行梯度洗脱，
| 时间/分 | 流动相A/% | 流动相B/% |
| 0—30 | 0→10 | 100→90 |
| 30—45 | 10→23 | 90→77 |
| 40—50 | 23 | 77 |
| 50—85 | 23→60 | 77→40 |
| 85—95 | 60→100 | 40→0 |
（2）总固体含量的检测方法如下：
精密量取待检液10ml，置已恒重的蒸发皿中，于水浴上蒸干后，在105℃干燥3小时，移置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量，计算即得；
（3）五味子醇甲的含量是通过HPLC检测的，色谱条件如下：
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；
流动相：甲醇：水=65:35；
检测波长为250nm。
本发明发现，通过对上述各中间体进行质量控制后，只要中间体在其控制范围内，所得成品均能够符合注射液质量标准；因此，在生产过程中，按照本发明方法进行质量控制，能够在前期及时排除生产中遇到的技术问题，避免了到成品才发现不合格而返工的缺陷，为注射液的顺利生产提供了保障。
附图说明
图1生脉注射液制备工艺流程图
图2参麦注射液成品对照指纹图谱
图3红参醇提液指纹图谱
图4生脉注射液成品对照指纹图谱
图5生脉水沉精滤液指纹图谱
图6对比例各项指纹图谱对比，其中，生脉水沉精滤液（A），红参水沉液（B），红参醇提液（C），生脉注射液成品指纹图谱(D)
具体实施方式
生脉注射液的制备工艺请参见现有技术，如“生脉注射液修订标准（草案）”，工艺流程图见图1。
实施例1生脉注射液中红参提取中间体的质量控制
1、红参醇提液检测方法
1.1性状：本品为黄色至黄棕色澄明液体
1.2总固体：精密量取本品10ml，置已恒重的蒸发皿中，于水浴上蒸干后，在105℃干燥3小时，移置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量，计算。
1.3含量测定：照高效液相色谱法（中国药典2010年版一部附录ⅥD）测定。
色谱条件与系统适用性试验：用Waters symmetry shieldTMRP18（4.6mm×250mm；5.0μm）色谱柱；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下表进行梯度洗脱；检测波长为203nm。
| 时间（分） | 流动相A(%) | 流动相B（%） |
| 0—30 | 0→10 | 100→90 |
| 30—45 | 10→23 | 90→77 |
| 40—50 | 23 | 77 |
| 50—85 | 23→60 | 77→40 |
| 85—95 | 60→100 | 40→0 |
对照品溶液的制备：精密量取人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1对照品适量，加20%乙腈制成每1ml分别含0.1mg、0.08mg和0.2mg的混合溶液，即得。
供试品溶液的制备：精密吸取本品适量，蒸干，残渣加水溶解制成每1ml相当于0.1g药材的溶液，摇匀，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与本品各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。（理论塔板数按人参皂苷Re计算不低于300000，人参皂苷Rg1和Re的分离度不得低于1.8）。
1.4指纹图谱
色谱条件与系统适用性试验：同含量测定项下要求
测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定。SlopeSensitivity：5，peak width：0.05，最小峰面积为人参皂苷Rb1峰面积5%，基线积分，积分范围为8—90分钟。
本品指纹图谱与“参麦注射液成品对照指纹图谱”（见图2）比较。
2、红参水沉液
2.1性状：本品为黄色至黄棕色澄明液体
2.2总固体：精密量取本品10ml，置已恒重的蒸发皿中，于水浴上蒸干后，在105℃干燥3小时，移置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量，计算。
3、检测结果
3.1红参醇提取液
3.1.1固形物
表1
3.1.2含量测定：
表2
3.2、红参水沉过活性炭滤液
表3
4、红参提取中间体质量标准的确定
红参提取中间体有：红参醇提取液、红参醇浓缩液、红参水沉液，通过控制固形物和人参皂苷含量及指纹图谱相似度来控制红参提取的质量。含量测定方法及指纹图谱相似度的计算照参麦注射液“红参提取中间品质量标准起草”，不再做方法学确认。固形物容易波动较大，建议固形物限度以最低值-20%～最高值+20%来确定，含量测定以平均值的±20%来确定。
表4
红参醇提液的指纹图谱见图3。
实施例2生脉注射液中麦冬提取中间体的质量控制
1麦冬一次醇沉液检测方法
1.1性状：黄色至黄棕色澄明液体
1.2总固体：精密量取本品10ml，置已恒重的蒸发皿中，于水浴上蒸干后，在105℃干燥3小时，移置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量，计算。
2麦冬二次醇沉液检测方法
2.1性状：黄色至黄棕色澄明液体
2.2总固体：精密量取本品10ml，置已恒重的蒸发皿中，于水浴上蒸干后，在105℃干燥3小时，移置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量，计算。
3麦冬水沉过活性炭精制液检测方法
3.1性状：黄色至黄棕色澄明液体
3.2总固体：精密量取本品10ml，置已恒重的蒸发皿中，于水浴上蒸干后，在105℃干燥3小时，移置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量，计算。
4检测结果
4.1麦冬一次醇沉液
表5
4.2麦冬二次醇沉液（调pH值前）
表6
4.3麦冬水沉过活性炭滤液
表7
5、麦冬提取中间品质量标准确定
固形物容易波动较大，建议固形物限度以最低值-20%～最高值+20%来确定，待以后积累数据后再进行调整。
表8
实施例3生脉注射液中五味子提取中间体的质量控制
1、五味子一次醇沉液检测方法
1.1性状：红棕色澄明液体
1.2总固体：精密量取本品10ml，置已恒重的蒸发皿中，于水浴上蒸干后，在105℃干燥3小时，移置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量，计算。
1.3含量测定：照高效液相色谱法（附录ⅥD）测定。
色谱条件与系统适应性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇—水（65:35）为流动相；检测波长为250nm。理论塔板数按五味子醇甲计算应不得低于3000.
对照品溶液的制备；取五味子醇甲对照品5mg，精密称定，置50ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。（每1ml含五味子甲醇0.1mg）
供试品溶液的制备：精密吸取本品适量（2.0ml），蒸干，残渣加水溶解制成每1ml相当于0.15g药材的溶液，摇匀，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
2、五味子二次醇沉液检测方法
2.1性状：红棕色澄明液体
2.2总固体：精密量取本品10ml，置已恒重的蒸发皿中，于水浴上蒸干后，在105℃干燥3小时，移置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量，计算。
2.3含量测定：
含量测定方法照“五味子一次醇沉液”含量测定项下。
3、五味子水沉液检测方法
3.1性状：红棕色澄明液体
3.2总固体：精密量取本品10ml，置已恒重的蒸发皿中，于水浴上蒸干后，在105℃干燥3小时，移置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量，计算。
3.3含量测定方法照“五味子一次醇沉液”含量测定项下。供试品溶液的制备：精密吸取本品适量（2.0ml），加水稀释至10ml摇匀，即得。
4、五味子水沉过活性炭精制液检测方法
4.1性状：红棕色澄明液体
4.2总固体：精密量取本品10ml，置已恒重的蒸发皿中，于水浴上蒸干后，在105℃干燥3小时，移置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量，计算。
4.3含量测定：
含量测定方法照“五味子一次醇沉液”含量测定项下。供试品溶液为取样品原液。
5、五味子馏液检测方法
5.1性状：微乳浊液体
5.2微生物限度：
冷藏存放6天后，取罐内五味子馏液，依法检查（中国药典2010年版一部附录XⅢC）。
6、检测结果
6.1五味子一次醇沉（冷藏过滤液）
表9
6.2五味子二次醇沉（调pH值前）
表10
6.3、五味子水沉液（过活性炭前）
表11
6.4五味子水沉过活性炭精制液
表12
6.5五味子醇甲含量测定方法的确定
6.5.1线性范围：
6.5.1.1对照品溶液的制备：取五味子醇甲对照品5mg，精密称定，置50ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。（每1ml含五味子醇甲0.1mg）
6.5.1.2标准曲线制备：分别精密吸取上述对照品溶液20μl、15μl、10μl、5μl、2μl、1μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件,依法测定峰面积。
以五味子醇甲的进样量为横坐标,标准溶液峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,计算曲线回归方程及相关系数：
结果：回归方程为Y=2215.5X–9.8581,R2=1，表明五味子醇甲进样量在0.1～2.0μg的范围内与其峰面积呈良好线性关系。
表13：
6.5.2精密度试验：
精密吸取对照品溶液10μl，连续进样6次，依法测定，即得五味子醇甲的峰面积，结果见表：
表14
结果：五味子醇甲平均峰面积2202.1，RSD为0.02%，试验结果表明精密度良好。
6.5.3重现性试验
6.5.3.1供试品溶液的制备：精密吸取本品适量（2.0ml），蒸干，残渣加水溶解制成每1ml相当于0.15g药材的溶液，摇匀，即得供试品溶液。
6.5.3.2对照品溶液制备见“线性范围”测定项下。
6.5.3.3测定法：分别精密吸取上述溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
测定结果见下表：
表15
结果：如上表所示，5份样品的含量平均值为0.486mg/ml，RSD为0.79%，试验结果表明方法重现性良好。
6、五味子提取中间体内控质量标准：
五味子提取中间体包括：五味子水提取液、五味子一次醇沉液、五味子二次醇沉液、五味子水沉液过活性炭前、五味子水沉过活性炭后、五味子馏液，通过控制固形物和五味子醇甲的含量来控制五味子中间体的质量，因处理过程的复杂性和关键性，设置多个质量控制点。固形物容易波动较大，建议固形物限度以最低值-20%～最高值+20%来确定，五味子醇甲含量在生产过程处理中变化较大，结合成品的指标范围及制剂的安全性，建议含量测定以最低值-20%～最高值+20%来确定。五味子馏液微生物限度根据纯化水细菌总数标准，制定为50CFU/1ml，并进行微生物限度方法学验证。
表16
实施例4生脉水沉精滤液的质量控制方法
1、检测方法
1.1性状：本品为黄棕色～棕色澄明液体
1.2总固体：精密量取本品10ml，置已恒重的蒸发皿中，于水浴上蒸干后，在105℃干燥3小时，移置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量，计算。
1.3含量测定：
色谱条件与系统适用性试验：用Waters symmetry shieldTMRP18（4.6mm×250mm；5.0μm）色谱柱；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下表进行梯度洗脱；检测波长为203nm。
| 时间（分） | 流动相A（%） | 流动相B（%） |
| 0～30 | 0→10 | 100→90 |
| 30～45 | 10→23 | 90→77 |
| 40～50 | 23 | 77 |
| 50～85 | 23→60 | 77→40 |
| 85～95 | 60→100 | 40→0 |
对照品溶液的制备：取人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1和五味子醇甲对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml分别含0.10mg、0.08mg、0.20mg和0.02mg的混合溶液，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与本品各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。（理论塔板数按人参皂苷Re计算应不低于300000，人参皂苷Rg1和Re的分离度不得低于1.8）。
1.4指纹图谱
色谱条件与系统适用性试验：同含量测定项下要求
测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定。Slope Sensitivity:5,peak width:0.05，最小峰面积为人参皂苷Rb1峰面积的5%，基线积分，积分范围为8～95分钟。
暂定本品指纹图谱与“生脉注射液成品对照指纹图谱”（图4）比较。
1.5内毒素
取本品，依法检查（中国药典2010年版一部附录ⅧD）。
1.6微生物限度
依法检查（中国药典2010年版一部附录ⅩⅢC）。
2检测结果
2.1、固形物
表17
固形物容易波动较大，建议固形物限度以最低值-20%～最高值+20%来确定。
2.2、指纹图谱
生脉水沉精滤液指纹图谱见图5，与生脉注射液成品指纹图谱相似度大于85%。
3、生脉水沉精滤液内控质量标准：
表18
对比例
对某批次注射液中间体进行检测，发现中间体不符合本发明控制标准，并对其成品进行了检测，其成品也不符合质量标准，其指纹图谱参见图6。
由图6可以看出，中间体红参醇提液（C）与生脉注射液成品指纹图谱(D)均在92min左右有强吸收峰，但红参醇提液经进一步水沉精制后的水沉液（B），该处吸收峰消失，即表明该批次产品在水沉步骤中出现了技术问题，以至于水沉液质量不达标；水沉液再精制后与五味子精制液、麦冬精制液混合制备的生脉水沉精滤液（A），在指纹图谱92min左右也没有强吸收峰，最终所得产品将不符合成品质量标准。
该对比例表明，若中间体质量不在本发明限定的范围内，则最终所得的成品也将不符合标准规定，导致产品不合格。
注；生脉注射液成品指纹图谱中，保留时间75min左右的强吸收峰为五味子中化学成分，因此，在红参提取液中没有此峰出现。
本发明发现，通过对上述各中间体进行质量控制后，只要中间体在其控制范围内，所得成品均能够符合注射液质量标准；因此，在生产过程中，按照本发明方法进行质量控制，能够在前期及时排除生产中遇到的技术问题，避免了到成品才发现不合格而返工的缺陷，为注射液的顺利生产提供了保障。
Claims (10)
1.一种控制生脉注射液中间体质量的方法，其特征在于：所述生脉注射液的中间体包括红参醇提液、红参水沉液、麦冬一次醇沉液、麦冬二次醇沉液、麦冬水沉过活性炭精制液、五味子一次醇沉液、五味子二次醇沉液、五味子水沉液、五味子水沉过活性炭精制液、五味子馏液、生脉水沉精滤液；
红参醇提液中，总固体含量以生药计应为12～28.5%，人参皂苷Rg1含量应为1.5～2.5mg/1g生药，人参皂苷Re含量应为0.9～1.5mg/1g生药，人参皂苷Rb1含量应为2.6～3.9mg/1g生药；
红参水沉液中，总固体含量以生药计应为10～25%；
麦冬一次醇沉液总固体含量以生药计应为7.5～14.5%，麦冬二次醇沉液总固体含量以生药计应为3～10.5%，麦冬水沉过活性炭精制液总固体含量以生药计应为1.8～9.5%。
五味子一次醇沉液中，总固体含量以生药计应为5.5～12.5%，五味子醇甲含量应为0.65～1.6mg/1g生药；
五味子二次醇沉液，总固体含量以生药计应为3～8.5%，五味子醇甲含量应为0.35～1mg/1g生药；
五味子水沉液，总固体含量以生药计应为2～6%，五味子醇甲含量应为0.25～0.6mg/1g生药；
五味子水沉过活性炭精制液中，总固体含量以生药计应为3～8%，五味子醇甲含量应为0.05～0.2mg/1g生药；
五味子馏液的微生物限度≤50CFU/1ml；
生脉水沉精滤液中，总固体含量以生药计为5～10%，五味子醇含量为0.05～0.2mg/1g生药，人参皂苷Rg1含量为1.3～2mg/1g生药，人参皂苷Re含量为0.7～1.2mg/1g生药，人参皂苷Rb1含量为2～3.5mg/1g生药，内毒素＜5EU/ml，细菌总数≤80CFU/1ml。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述红参醇提液或红参水沉液的指纹图谱与参麦注射液成品对照指纹图谱的相似度不得低于0.90；所述参麦注射液成品对照指纹图谱如图2所示。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述生脉水沉精滤液的指纹图谱与生脉注射液成品指纹图谱的相似度不得低于0.85；所述生脉注射液成品指纹图谱如图4所示。
4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于：红参醇提液、红参水沉液或生脉水沉精滤液中人参皂苷含量和指纹图谱均采用HPLC进行检测，其色谱条件如下：
色谱柱：十八烷基硅胶键合相色谱柱；
检测波长为203nm；
流动相：以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下表进行梯度洗脱，
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：色谱柱为Waters symmetryshieldTMRP18，4.6mm×250mm，5.0μm。
6.根据权利要求4或5所述的方法，其特征在于：所述红参醇提液的HPLC检测过程中，对照品溶液和供试品溶液的制备方法如下：
对照品溶液的制备：精密量取人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1对照品适量，加20%乙腈制成每1ml分别含0.1mg、0.08mg和0.2mg的混合溶液，即得；
供试品溶液的制备：精密吸取待测中间体适量，蒸干，残渣加水溶解制成每1ml相当于0.1g药材的溶液，摇匀，即得。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：总固体含量的检测方法如下：
精密量取待检液10ml，置已恒重的蒸发皿中，于水浴上蒸干后，在105℃干燥3小时，移置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量，计算即得。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：五味子醇甲的含量是通过HPLC检测的，色谱条件如下：
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；
流动相：甲醇：水=65:35；
检测波长为250nm。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：所述五味子醇甲的HPLC检测方法中，对照品溶液和供试品溶液的制备方法如下：
对照品溶液的制备；取五味子醇甲对照品5mg，精密称定，置50ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得，浓度为每1ml含五味子甲醇0.1mg；
供试品溶液的制备：精密吸取待测中间体适量，蒸干，残渣加水溶解制成每1ml相当于0.15g药材的溶液，摇匀，即得。
10.生脉注射液中间体的检测方法，其特征在于：它包括如下操作步骤：
（1）人参皂苷的含量检测采用HPLC进行，其色谱条件如下：
色谱柱：十八烷基硅胶键合相色谱柱；
检测波长为203nm；
流动相：以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下表进行梯度洗脱，
（2）总固体含量的检测方法如下：
精密量取待检液10ml，置已恒重的蒸发皿中，于水浴上蒸干后，在105℃干燥3小时，移置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量，计算即得；
（3）五味子醇甲的含量是通过HPLC检测的，色谱条件如下：
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；
流动相：甲醇：水=65:35；
检测波长为250nm。
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