CN103954716A - 一种香菇多糖分子量及分子量分布测定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种香菇多糖分子量及分子量分布测定方法，其特征在于，具体步骤为：将待检测的香菇多糖加入氢氧化钠溶液溶解，加入流动相，再加入盐酸溶液调节pH值，过滤，利用GPC系统进行分离的同时使用示差折光检测器和激光光散射检测器进行检测，将激光光散射检测器检测得到的分子量数据和示差折光检测器检测得到的浓度数据通过GPC软件计算得出香菇多糖的分子量及分子量分布。本发明能够快速、准确的获得香菇多糖的分子量及分子量分布，对提高该药品的内在品质具有积极意义。
Description
技术领域
本发明涉及一种香菇多糖分子量及分子量分布测定方法，属于生物医药领域。
背景技术
香菇多糖(lentinan)是从香菇中提取具有生物活性的葡聚多糖，其由主链β-(1→3)糖苷键，并由β-(1→6)连接的葡萄糖基沿主链随机分布呈束状分支结构。香菇多糖对多种肿瘤有抑制作用，特别是对消化道类的肿瘤有显著的抑制作用，其具有剂量低，疗效好，毒副作用小等优点。
香菇多糖的分子量及分子量分布与临床抗肿瘤活性有着密切的关系。经研究发现，影响多糖生物活性具有多种因素如：分子组成、链接方式、立体构型、糖链的分支程度等等。其中，分子量的大小是多糖具备生物活性的必要条件。香菇多糖的重均分子量在40～80万道尔顿时，表现出最强的生物活性，此时香菇多糖抑制肿瘤、提高人体免疫的疗效最佳。重均分子量小于2万道尔顿基本上就没有生物活性，对抑制肿瘤的治疗无作用；然而，重均分子量大于200～300万道尔顿时，由于分子量大影响到了香菇多糖的正常溶解(香菇多糖的溶解度是随着分子量的变化而变化的，分子量小的易溶解、分子量大的难溶解)，其生物活性明显下降，更重要的是这么大分子量的香菇多糖静脉注入人体血管内，容易诱发血栓，副作用增大。因此，研究香菇多糖分子量的测定方法对控制香菇多糖内在质量具有重要意义。
目前，测定高聚物多糖分子量的方法所采用的标准物质往往与被测物质的化学结构不相同，再有标准物质分子量范围能否全覆盖被测样品分子量范围等问题。由此建立的为相对标准曲线，所测结果为相对分子量。受到上述条件的影响，所测的结果与物质的实际分子量有较大的误差。因此，需要建立一种适合工业生产的香菇多糖分子量极其分布的测定方法。GPC-LAS联用技术兼具了GPC法和激光光散射法的特点，不需要采用标准物质做出标准曲线而直接快速、准确的测得香菇多糖的重均分子量及分子量分布。
发明内容
本发明的目的是提供一种不需要采用标准物质做出标准曲线而直接快速、准确的测得香菇多糖的重均分子量及分子量分布的方法。
为了达到上述目的，本发明提供了一种香菇多糖分子量及分子量分布测定方法，其特征在于，具体步骤包括：将待检测的香菇多糖溶解后，加入流动相，调节pH值到9-10，过滤，利用GPC系统进行分离的同时使用示差折光检测器和激光光散射检测器进行检测，将激光光散射检测器检测得到的分子量数据和示差折光检测器检测得到的浓度数据通过GPC软件计算得出香菇多糖的分子量及分子量分布。
优选地，进行分离和检测时，采用的流动相为超纯水、硼酸盐缓冲溶液、硝酸钠溶液和氯化钠溶液中的至少一种，分析柱为1-4根分离范围为2,000，000～1000道尔顿的尺寸排阻色谱柱，柱温保持在20℃-40℃，流速为0.3ml/min—0.9ml/min。
更优选地，进行分离和检测时，采用的流动相为pH＝9.0～10.0的0.12M硼酸盐缓冲液。
更优选地，进行分离和检测时，采用的分析柱为二根分离范围为2,000,000—1000道尔顿的不锈钢柱串联。
更优选地，进行分离和检测时，采用的柱温为30℃。
更优选地，进行分离和检测时，采用的流速保持在0.5ml/min。
更优选地，所述的GPC系统、示差折光检测器和激光光散射检测器的仪器常数校正时采用的标准物质为PEG，验证仪器常数用的标准物质为Dextran。
优选地，所述的GPC软件为Omni Sec4.7软件。
本发明中采用的香菇多糖的分子量、分子式、化学结构式如下：
1、分子量测定
利用示差折光检测仪与激光光散射仪相连接(GPC—LAS)的方法来测定香菇多糖天然大分子高聚物分子量及其分布。测定分子量分布范围大多在1-200万之间。
2、分子式
经微量元素分析结果表明，分子式为(C6H10O5）n
3、化学结构式
经高碘酸氧化及Smith降解等化学反应结合光谱分析法，测定香菇多糖的一级结构式如图1所示，
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明利用示差折光检测仪与光散射检测仪相连接(GPC-LAS法)测定香菇多糖分子量及其分布，激光光散射检测器提供分子量的直接测量(无需校准曲线)；使用示差折光检测器采集测定浓度，双检测器采集的信息通过GPC软件计算出分子量及其分布信息。本发明能够快速、准确的获得香菇多糖的分子量及分子量分布，对提高该药品的内在品质具有积极意义。
本发明发现香菇多糖在水中几乎不溶解，但溶解于2％wt氢氧化钠溶液中。香菇多糖分离用GPC柱为亲水性球型高聚物为填充剂，该物质的pH耐受范围为4～12，通常在中性条件下使用。本发明在实验中发现香菇多糖在氢氧化钠溶液溶解后调节pH至中性后，其溶液稳定性差，不利于分离测定。然而pH在9～10时溶液稳定分离效果佳。
附图说明
图1为香菇多糖的一级结构式图。
图2为柱温20℃时的GPC-LAS图谱；
图3为柱温25℃时的GPC-LAS图谱；
图4为柱温30℃时的GPC-LAS图谱；
图5为柱温40℃时的GPC-LAS图谱；
图6为流速0.3ml/min时的GPC-LAS图谱；
图7为流速0.4ml/min时的GPC-LAS图谱；
图8为流速0.5ml/min时的GPC-LAS图谱；
图9为流速0.6ml/min时的GPC-LAS图谱；
图10为0.7ml/min时的GPC-LAS图谱；
图11为流速0.8ml/min时的GPC-LAS图谱；
图12为流速0.9ml/min时的GPC-LAS图谱；
图13为进样量50μl的GPC-LAS的图谱；
图14为进样量100μl的GPC-LAS的图谱；
图15为进样量150μl的GPC-LAS的图谱；
图16为进样量200μl的GPC-LAS的图谱。
具体实施方式
下面结合实施例来进一步说明本发明。本发明所述的香菇多糖采用公开号为CN101161112、专利号为ZL200610116956.3的中国专利《一种香菇多糖分离纯化的方法》实施例中记载的方法分离纯化而得。检测所用的对照品PEG、Dextran、Pulul lan均由西格玛奥德里奇公司生产。
实施例1
(1)仪器：高效凝胶渗透色谱仪为英国马尔文公司生产的OMINI工作站系统，SHIMADZU RID-10A示差折光检测器，日本岛津公司生产；SHIMADZU LC-20AD泵，日本岛津公司生产；SIL-10AF自动进样器，日本岛津公司生产；270DUAL激光光散射检测器，英国马尔文公司生产；VE7510GPC脱气机，英国马尔文公司生产。其他具有上述配件及功能的高效液相色谱仪器亦可。
(2)色谱条件：
色谱柱：色谱柱为TSK-GEL G5000PWXL凝胶柱，日本TOSOH公司生产；
流动相：以0.12M pH为9.6的硼酸盐缓冲溶液为流动相。
流速：0.5ml/min。
进样量：100μl。
精密称取待检测的香菇多糖供试品25mg，置于25ml容量瓶中，精密量取0.5mol/L氢氧化钠溶液4.0ml加入容量瓶，溶胀并振摇溶液40min，使溶解；加流动相15ml，摇匀，精密量取0.5mol/L的盐酸溶液4.0ml加入容量瓶使pH调节么9，再加流动相至容量瓶刻度，摇匀，过0.22um尼龙滤膜滤，即得供试品溶液。
吸取供试品溶液100μL，注入液相色谱仪，利用GPC系统进行分离的同时使用示差折光检测器和激光光散射检测器进行检测，omni Sec4.7软件工作站采集示差折光检测器和激光光散射检测器信号，并处理得到图谱。
先后检测得到柱温为20℃，25℃，30℃，40℃时的GPC图谱，如图2-5所示，其中图形以30℃较好。
实施例2
(1)仪器：高效凝胶渗透色谱仪为英国马尔文公司生产的OMINI工作站系统，SHIMADZU RID—10A示差折光检测器，日本岛津公司生产；SHIMADZU LC-20AD泵，日本岛津公司生产；SIL-10AF自动进样器，日本岛津公司生产；270DUAL激光光散射检测器，英国马尔文公司生产；VE7510GPC脱气机，英国马尔文公司生产。其他具有上述配件及功能的高效液相色谱仪器亦可。
(2)色谱条件：
色谱柱：色谱柱为TSK-GEL G5000PWXL凝胶柱，日本TOSOH公司生产；
流动相：以0.12M pH为9.6的硼酸盐缓冲溶液为流动相。
柱温：30℃。
进样量：100μl。
精密称取待检测的香菇多糖供试品25mg，置于25ml容量瓶中，精密量取0.5mol/L氢氧化钠溶液4.0ml加入容量瓶，溶胀并振摇溶液40min，使溶解；加流动相15ml，摇匀，精密量取0.5mol/L的盐酸溶液4.0ml加入容量瓶使pH调节到10，再加流动相至容量瓶刻度，摇匀，过0.22um尼龙滤膜滤，即得供试品溶液。
吸取供试品溶液100μL，注入液相色谱仪，利用GPC系统进行分离的同时使用示差折光检测器和激光光散射检测器进行检测，omni Sec4.7软件工作站采集示差折光检测器和激光光散射检测器信号，并处理得到图谱。
先后检测得到流速为0.3ml/min，0.4ml/min，0.5ml/min，0.6ml/min，0.7ml/min，0.8ml/min，0.9ml/min时的GPC图谱，如图6-10所示，图形以0.5ml/min为优。
实施例3
(1)仪器：高效凝胶渗透色谱仪为英国马尔文公司生产的OMINI工作站系统，SHIMADZU RID-10A示差折光检测器，日本岛津公司生产；SHIMADZU LC-20AD泵，日本岛津公司生产；SIL—10AF自动进样器，日本岛津公司生产；270DUAL激光光散射检测器，英国马尔文公司生产；VE7510GPC脱气机，英国马尔文公司生产。其他具有上述配件及功能的高效液相色谱仪器亦可。
(2)色谱条件：
色谱柱：色谱柱为TSK—GEL G5000PWXL凝胶柱，日本TOSOH公司生产；
流动相：以0.12M pH为9.6的硼酸盐缓冲溶液为流动相。
流速：0.5ml/min。
柱温：30℃。
精密称取待检测的香菇多糖供试品25mg，置于25ml容量瓶中，精密量取0.5mol/L氢氧化钠溶液4.0ml加入容量瓶，溶胀并振摇溶液40min，使溶解；加流动相15ml，摇匀，精密量取0.5mol/L的盐酸溶液4.0ml加入容量瓶使pH调节到9.5，再加流动相至容量瓶刻度，摇匀，过0.22um尼龙滤膜滤，即得供试品溶液。
吸取供试品溶液100μL，注入液相色谱仪，利用GPC系统进行分离的同时使用示差折光检测器和激光光散射检测器进行检测，omni Sec4.7软件工作站采集示差折光检测器和激光光散射检测器信号，并处理得到图谱。
先后检测得到进样量为50μL、100Cl、150μl、200μl的GPC的图谱，如图13—16所示，图形以0.5ml/min为优。
实施例4
(1)仪器：高效凝胶渗透色谱仪为英国马尔文公司生产的OMINI工作站系统，SHIMADZU RID-10A示差折光检测器，日本岛津公司生产；SHIMADZU LC-20AD泵，日本岛津公司生产；SIL-10AF自动进样器，日本岛津公司生产；270DUAL激光光散射检测器，英国马尔文公司生产；VE7510GPC脱气机，英国马尔文公司生产。其他具有上述配件及功能的高效液相色谱仪器亦可。
(2)色谱条件：
色谱柱：选用二根分离范围为2，000，000～1000道尔顿的不锈钢尺寸排阻色谱柱串联，所述的色谱柱为TSK—GEL G5000PWXL凝胶柱，日本TOSOH公司生产；
流动相：以0.12M pH为9.6的硼酸盐缓冲溶液为流动相。
柱温：30℃；
流速：0.5ml/min。
进样量：100μl。
(3)实验步骤：
步骤a：精密称取N知分子量的PEG(Mw22K)20mg加流动相稀释，并搅拌45min，使其溶解制成浓度为5mg/ml的PEG溶液，另取Dextran(Mw670K)，同法制成浓度为5mg/ml的Dextran溶液。
步骤b：取PEG溶液100μl，注入液相色谱仪，记录色谱图由英国马尔文公司生产的Omni Sec4.7软件处理计算。用PEG溶液获得的数据校正仪器并建立方法，取Dextran溶液100μl，注入液相色谱仪，再用Dextran的数据结果复核PEG溶液数据校正仪器的准确性，其结果应在670k±5.0％。
步骤c：精密称取待检测的香菇多糖供试品25mg，置于25ml容量瓶中，精密量取0.5mol/L氢氧化钠溶液4.0ml加入容量瓶，溶胀并振摇溶液40min，使溶解；加流动相15ml，摇匀，精密量取0.5mol/L的盐酸溶液4.0ml加入容量瓶使pH调节到9.7，再加流动相至容量瓶刻度，摇匀，过0.22um尼龙滤膜滤，即得供试品溶液。
步骤d：吸取供试品溶液100μL，注入液相色谱仪，加入到GPC系统中，利用GPC系统进行分离的同时使用示差折光检测器和激光光散射检测器进行检测，将激光光散射检测器检测得到的分子量数据和示差折光检测器检测得到的浓度数据通过omni Sec4.7软件计算得出香菇多糖的分子量及分子量分布；为考察GPC-LAS系统的重现性，将一批香菇多糖重复进样5次。其结果见表1。
表11#批香菇多糖重复5次的GPC—LAS结果比较
实施例5
(1)仪器：高效凝胶渗透色谱仪为英国马尔文公司生产的OMINI工作站系统，SHIMADZU RID—10A示差折光检测器，日本岛津公司生产；SHIMADZU LC-20AD泵，日本岛津公司生产；SIL—10AF自动进样器，日本岛津公司生产；270DUAL激光光散射检测器，英国马尔文公司生产；VE7510GPC脱气机，英国马尔文公司生产。其他具有上述配件及功能的高效液相色谱仪器亦可。
(2)色谱条件：
色谱柱：选用TSK—GEL G5000PWLX和TSK-GEL G4000PWLX凝胶柱串联；
流动相：0.12M pH为9.6的硼酸盐缓冲溶液为流动相。
柱温：30℃；
流速：0.5ml/min。
进样量：100μl。
(3)实验步骤：
步骤a：精密称取已知分子量的PEG(Mw22K)20mg加流动相稀释，并搅拌45min，使其溶解制成浓度为5mg/ml的PEG溶液，另取Dextran(Mw670K)，同法制成浓度为5mg/ml的Dextran溶液。
步骤b：取PEG溶液100μl，注入液相色谱仪，记录色谱图由英国马尔文公司生产的Omni Sec4.7软件处理计算。用PEG溶液获得的数据校正仪器并建立方法，取Dextran溶液100μl，注入液相色谱仪，再用Dextran的数据结果复核PEG溶液数据校正仪器的准确性，其结果应在670k±10.0％。
步骤c：精密称取待检测的香菇多糖供试品25mg，置于25ml容量瓶中，精密量取0.5mol/L氢氧化钠溶液4.0ml加入容量瓶，溶胀并振摇溶液40min，使溶解；加流动相15ml，摇匀，精密量取0.5mol/L的盐酸溶液4.0ml加入容量瓶使pH调节到9.3，再加流动相至容量瓶刻度，摇匀，过0.22um尼龙滤膜滤，即得供试品溶液。
步骤d：吸取供试品溶液100μL，注入液相色谱仪，加入到GPC系统中，利用GPC系统进行分离的同时使用示差折光检测器和激光光散射检测器进行检测，将激光光散射检测器检测得到的分子量数据和示差折光检测器检测得到的浓度数据通过(omni Sec4.7)软件计算得出香菇多糖的分子量及分子量分布；测定三份不同批次(批号)香菇多糖的GPC—LAS图谱，数据见表2。
表2：
实施例6
几种分子量测定方法比较如下：
一、本发明方法(6PC-LAS法)：
仪器和色谱条件与实施例2相同，检测步骤如下：
步骤a：精密称取已知分子量的PEG(Mw22K)20mg加流动相稀释，并搅拌45min，使其溶解制成浓度为5mg/ml的PEG溶液，另取Dextran(Mw670K)，同法制成浓度为5mg/ml的Dextran溶液。
步骤b：取PEG溶液100μl，注入液相色谱仪，记录色谱图由英国马尔文公司生产的Omni Sec4.7软件处理计算。用PEG溶液获得的数据校正仪器并建立方法，取Dextran溶液100μl，注入液相色谱仪，再用Dextran的数据结果复核PEG溶液数据校正仪器的准确性，其结果应在670k±5.0％。
步骤c：精密称取待检测的香菇多糖供试品25mg，置于25ml容量瓶中，精密量取0.5mol/L氢氧化钠溶液4.0ml加入容量瓶，溶胀并振摇溶液40min，使溶解；加流动相15ml，摇匀，精密量取0.5mol/L的盐酸溶液4.0ml加入容量瓶使pH调节到9.8，再加流动相至容量瓶刻度，摇匀，过0.22um尼龙滤膜滤，即得供试品溶液。
步骤d：吸取供试品溶液100μL，注入液相色谱仪，加入到GPC系统中，利用GPC系统进行分离的同时使用示差折光检测器和激光光散射检测器进行检测，将激光光散射检测器检测得到的分子量数据和示差折光检测器检测得到的浓度数据通过omni Sec4.7软件计算得出香菇多糖的分子量及分子量分布；测定结果见表3；
二、传统GPC方法采用RID—10A示差折光检测器：取重均分子量(Mw)分别为1.2、5.0、27.0、41.0、67.0、110.0万道尔顿的Dextran各10mg加流动相溶解，得到浓度为1mg/ml的溶液，分别注入GPC系统，色谱条件与本发明方法相同，数据处理绘制成分子量标准曲线。精密称定重均分子量(Mw)为41.0万道尔顿的Dextran和重均分子量(Mw)为110.0万道尔顿的Dextran各10mg分别加流动相溶解，得到浓度为1mg/ml的Dextran溶液，精密称定重均分子量(Mw)为39.3万道尔顿和重均分子量(Mw)为80.5万道尔顿的GPC标准样品Pulullan各10mg，分别加流动相溶解，得到浓度为1mg/ml的Pulullan溶液，将批号1#的香菇多糖样品作为香菇多糖供试品，精密称取待检测的香菇多糖供试品25mg，置于25ml容量瓶中，精密量取0.5mol/L氢氧化钠溶液4.0ml加入容量瓶，溶胀并振摇溶液40min，使溶解；加流动相15ml，摇匀，精密量取0.5mol/L的盐酸溶液4.0ml加入容量瓶，再加流动相至容量瓶刻度，摇匀，过0.22um尼龙滤膜滤，即得供试品溶液。将不同分子量的Dextran溶液，不同分子量的Pulullan溶液，以及香菇多糖溶液分别进行检测，测定结果见表3；
三、传统GPC方法采用RID-10A示差折光检测器：取重均分子量(Mw)分别为1.0、4.88、21.0、39.3、80.5万道尔顿的GPC标准样品Pulullan各10mg加流动相溶解，得到浓度为1mg/ml的溶液，分别注入GPC系统，色谱条件与本发明方法相同，数据处理绘制成分子量标准曲线。精密称定重均分子量(Mw)为41.0万道尔顿的Dextran和重均分子量(Mw)为110.0万道尔顿的Dextran各10mg分别加流动相溶解，得到浓度为1mg/ml的Dextran溶液，精密称定重均分子量(Mw)为39.3万道尔顿和重均分子量(Mw)为80.5万道尔顿的GPC标准样品Pulullan各10mg，分别加流动相溶解，得到浓度为1mg/ml的Pulullan溶液，将批号1#的香菇多糖样品作为供试品，精密称取待检测的香菇多糖供试品25mg，置于25ml容量瓶中，精密量取0.5mol/L氢氧化钠溶液4.0ml加入容量瓶，溶胀并振摇溶液40min，使溶解；加流动相15ml，摇匀，精密量取0.5mol/L的盐酸溶液4.0ml加入容量瓶，再加流动相至容量瓶刻度，摇匀，过0.22um尼龙滤膜滤，即得供试品溶液。将不同分子量的Dextran溶液，不同分子量的Pulullan溶液，以及香菇多糖溶液分别进行检测，
测定结果见表3；
表3
根据上述结果可以看出：本发明GPC—LAS法测定出的标准样品数值与其报告标定数值误差≤5.0％，满足GPC方法对分析检测精度的要求；传统GPC方法(Dextran校正曲线)在测定与自身相同的Dextran样品时，其测定数值与其报告标定数值误差≤5.0％，精度较高，但在测定Pulullan标准样品时结果与标准样品标定值误差大于17％；传统GPC方法(Pulullan校正曲线)存在同样的情况：在测定与自身相同的Pulullan样品时，其测定数值与其报告标定数值误差≤5.0％，精度较高，但在测定Dextran标准样品时结果与标准样品标定值误差>25％：
这些测定结果的偏差是由于这些不同的多糖对照样品与测定样品之间结构差异所造成的。高分子多糖均有较长的主链或侧链构成。由于对照品与样品的结果不同，造成的了在相同的色谱条件下，其在溶液中的主链或侧链舒展状态差异较大。同等分子量的情况下，由于溶液中舒展状态的不同造成了体积的不同。根据GPC分离原理--尺寸排阻，即样品溶液进入色谱柱后根据分子体积大小，分子量大物质的先分离流出，分子量小的后分离流出。分子量的大小确定是根据标准样品的保留时间或体积(分离时分子先后流出的时间或体积)绘制成得分子量标准曲线与检测样品来对比保留时间或体积来计算。Pulullan与Dextran两种多糖，在标定分子量相同的情况下，由于在溶液中的分子舒展状态差异，造成了体积的差异，继而在分离时产生了流出时间或体积的不同，从而造成测定结果较大的差异。再有，高分子多糖均来源于自然界，上未有化学合成品，其每一批产品均会有不同程度的微小差异，这也是批间检测结果差异较大的原因。
再有，上述的传统GPC方法(Pulullan校正曲线)在测定样品Dextran Mw110.0万道尔顿时，其自身的标准曲线覆盖范围最大为Mw80.5万道尔顿。其已经超出了绘制的分子量标准曲线的范围，此时得到的结果仅仅是GPC软件根据现有的这根标准曲线趋势推导的结果，误差之大是在情理之中的。
总之，从上述的测定结果可以发现本发明的检测方法，克服了传统GPC的这些缺点，测定结果准确可靠。香菇多糖在没有香菇多糖标准品做对照品的时候，本发明能快速、准确地测定其分子量。
Claims (8)
1.一种香菇多糖分子量及分子量分布测定方法，其特征在于，具体步骤包括：将待检测的香菇多糖溶解后，加入流动相，调节pH值到9-10，过滤，利用GPC系统进行分离的同时使用示差折光检测器和激光光散射检测器进行检测，将激光光散射检测器检测得到的分子量数据和示差折光检测器检测得到的浓度数据通过GPC软件计算得出香菇多糖的分子量及分子量分布。
2.如权利要求1所述的香菇多糖分子量及分子量分布测定方法，其特征在于，进行分离和检测时，采用的流动相为超纯水、硼酸盐缓冲溶液、硝酸钠溶液和氯化钠溶液中的至少一种，分析柱为1-4根分离范围为2,000，000～1000道尔顿的尺寸排阻色谱柱，柱温保持在20℃-40℃，流速为0.3ml/min—0.9ml/min。
3.如权利要求2所述的香菇多糖分子量及分子量分布测定方法，其特征在于，进行分离和检测时，采用的流动相为pH＝9.0～10.0的0.12M硼酸盐缓冲液。
4.如权利要求2所述的香菇多糖分子量及分子量分布测定方法，其特征在于，进行分离和检测时，采用的分析柱为二根分离范围为2,000,000-100道尔顿的不锈钢柱串联。
5.如权利要求2所述的香菇多糖分子量及分子量分布测定方法，其特征在于，进行分离和检测时，采用的柱温为30℃。
6.如权利要求2所述的香菇多糖分子量及分子量分布测定方法，其特征在于，进行分离和检测时，采用的流速保持在0.5ml/min。
7.如权利要求2所述的香菇多糖分子量及分子量分布测定方法，其特征在于，所述的GPC系统、示差折光检测器和激光光散射检测器的仪器常数校正时采用的标准物质为PEG，验证仪器常数用的标准物质为Dextran。
8.如权利要求1所述的香菇多糖分子量及分子量分布测定方法，其特征在于，所述的GPC软件为omni Sec4.7软件。
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