CN105628797A - 艾考糊精原料药分子量及其分布测定方法 - Google Patents
艾考糊精原料药分子量及其分布测定方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105628797A CN105628797A CN201410588286.XA CN201410588286A CN105628797A CN 105628797 A CN105628797 A CN 105628797A CN 201410588286 A CN201410588286 A CN 201410588286A CN 105628797 A CN105628797 A CN 105628797A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- molecular weight
- column
- distribution
- icodextrin
- chromatographic column
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 35
- 229920002177 Icodextrin Polymers 0.000 title claims abstract description 16
- 229940016836 icodextrin Drugs 0.000 title claims abstract description 16
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 12
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 17
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 claims abstract description 12
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims abstract description 10
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 claims abstract description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 8
- 238000002356 laser light scattering Methods 0.000 claims abstract description 7
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 6
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 claims description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 3
- 230000008878 coupling Effects 0.000 claims description 3
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims description 3
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims description 3
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 claims description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 3
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 claims description 3
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 claims description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 6
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 abstract description 5
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 abstract description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 abstract description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 9
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- VVQNEPGJFQJSBK-UHFFFAOYSA-N Methyl methacrylate Chemical compound COC(=O)C(C)=C VVQNEPGJFQJSBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 5
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 5
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 5
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 5
- 230000011218 segmentation Effects 0.000 description 5
- 239000000385 dialysis solution Substances 0.000 description 4
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 1
- 238000011020 pilot scale process Methods 0.000 description 1
- 239000012925 reference material Substances 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明涉及医药技术领域，特别涉及艾考糊精原料药分子量及其分布测定方法，采用凝胶渗透色谱GPC-激光光散射LS-示差检测RI联用的方法进行检测，具体的步骤如下：测定时将样品制备成10mg/ml的溶液，取100μl进样测定，采用凝胶柱SB-G为保护柱，色谱柱SB-802HQ和色谱柱SB-803HQ串联，以0.2‰NaN3醋酸盐缓冲液为流动相，流速为0.5ml/min，柱温30℃，检测温度35℃；记录分子量及分子量分布。本发明GPC-激光光散射联用技术兼具了GPC法和光散射法的特点，能快速、准确地测定出高分子的重均、数均分子量，且测出的重均分子量为绝对分子量，不需要对照品校准，而实现对艾考糊精绝对分子量及其分布的准确测定。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域，特别涉及艾考糊精原料药分子量及其分布测定方法。
背景技术
腹膜透析液是保证腹膜透析顺利进行的重要元素之一。迄今为止，葡萄糖透析液仍是使用最多的腹膜透析液，在我国目前是唯一的透析液。
随着透析技术的提高，临床上不断出现新型透析液，以多聚葡萄糖为渗透剂的艾考糊精(icodextrin)透析液就是其中的一种。对水解产物进行分子量和分子量分布测定是艾考糊精原料药分析的重要工作之一。目前常用GPC法测定聚合物的分子量和分子量分布。该法所给出的是分子量相对值，且一般需采用标准对照品校准。对照品的结构与待测样品结构的近似程度直接关系到分子量测定的准确与否。
发明内容
本发明针对现有技术的不足，提供一种艾考糊精原料药分子量及其分布测定方法，不需要用对照品建立标准曲线，而实现对艾考糊精绝对分子量的准确测定。
本发明的技术方案是：
一种艾考糊精原料药分子量及其分布测定方法，采用凝胶渗透色谱GPC-激光光散射LS-示差检测RI联用的方法进行检测，具体的步骤如下：
测定时将样品制备成10mg/ml的溶液，取100μl进样测定，采用凝胶柱SB-G为保护柱，色谱柱SB-802HQ和色谱柱SB-803HQ串联，以0.2‰NaN3醋酸盐缓冲液为流动相，流速为0.5ml/min，柱温30℃，检测温度35℃；记录分子量及分子量分布。
优选的，所述0.2‰NaN3醋酸盐缓冲液的配制方法为：18.7g醋酸钠、34.5mL冰醋酸和1g叠氮化钠，加注射水使溶解定并稀释至5L。
其中，色谱柱为SB-803HQ，用多羟基甲基丙烯酸甲酯填充材料排阻分子量为100000(以普鲁兰多糖计)的色谱柱；
色谱柱为SB-802HQ，用多羟基甲基丙烯酸甲酯填充材料排阻分子量为4000(以普鲁兰多糖计)的色谱柱；
本发明的有益效果是：
GPC-激光光散射联用技术兼具了GPC法和光散射法的特点，能快速、准确地测定出高分子的重均、数均分子量，且测出的重均分子量为绝对分子量，不需要对照品校准，而实现对艾考糊精绝对分子量及其分布的准确测定。
附图说明
附图1为本发明的测定方法测定艾考糊精原料药分子量及其分布的图谱；
附图2为0.2‰NaN3溶液作为流动相的分离图谱；
附图3为醋酸盐缓冲液作流动相的分离图谱；
附图4为0.2‰NaN3醋酸盐缓冲液作流动相的分离图谱。
具体实施方式
本发明的具体实施方式如下：
实施例1：
一种艾考糊精原料药分子量及其分布测定方法，采用凝胶渗透色谱GPC-激光光散射LS-示差检测RI联用的方法进行检测，具体的步骤如下：
所使用的仪器为1、液相为Waters2695-2414
2、激光光散射仪为WyattDAWNHELEOS-Ⅱ
凝胶柱SB-G、色谱柱SB-802HQ和色谱柱SB-803HQ均为日本昭和电工株式会社所生产。
测定时将样品制备成10mg/ml的溶液，取100μl进样测定，采用凝胶柱SB-G为保护柱，色谱柱SB-802HQ和色谱柱SB-803HQ串联，以0.2‰NaN3醋酸盐缓冲液为流动相，流速为0.5ml/min，柱温30℃，检测温度35℃；所述0.2‰NaN3醋酸盐缓冲液的配制方法为：18.7g醋酸钠、34.5mL冰醋酸和1g叠氮化钠，加注射水使溶解定并稀释至5L；记录分子量及分子量分布。
以上方法检测的图谱为图1所示，检测结果如下表所示。
从上表可以看出以上各段的分子量分布情况，其中：分段1的重均分子量为1244，分为为1.2％；分段2的重均分子量为3243，分为为23.2％；分段3的重均分子量为10860，分为为50.2％；分段4的重均分子量为29270，分为为19.0％；分段5的重均分子量为13750，分为为92.4％。
实验例：实验针对流动相、流速、色谱柱的变换以及色谱柱的柱温等条件进行了一系列的条件对比实验。
实验例1：
首先分别将0.2‰NaN3溶液、醋酸盐缓冲液以及含0.2‰NaN3醋酸盐缓冲液作流动相，如图2-4所示，发现含0.2‰NaN3醋酸盐缓冲液作流动相分离效果有较好；而后又将柱温在原有30℃的条件下分别升高和降低5℃，结果发现分离柱柱温在30℃时，分离效果较佳。
实验例2：
实验中对色谱柱选择进行的对比实验。使用多羟基甲基丙烯酸甲酯填充材料排阻分子量为100000(以普鲁兰多糖计)的色谱柱SB-804HQ(1)、用多羟基甲基丙烯酸甲酯填充材料排阻分子量为100000(以普鲁兰多糖计)的色谱柱SB-803HQ(2)以及(1)和(2)串联使用，结果发现色谱柱(2)能实现样品峰和溶剂峰(小分子量峰)的较好分离，但不能达到理想的分离条件。使用多羟基甲基丙烯酸甲酯填充材料排阻分子量为4000(以普鲁兰多糖计)的色谱柱SB-802HQ(3)和色谱柱(2)串联达到了样品峰和溶剂峰(小分子量峰)理想的分离条件，故此色谱柱条件较佳。
实验例3：
实验中也对流动相的流速进行了对比，尝试了0.3ml/min、0.5ml/min和0.7ml/min3个流速，通过试验发现，3个不同的流速对同一个样品重均分子量影响较小(几乎无影响)，0.7ml/mi的流速对小分子量段的分子量分布影响较大，0.3ml/min和0.5ml/min的流速对分子量分布影响较小，但0..3ml/min的流速分析时间较长，0.5ml/min的流速分析效果较佳。
实验例4：
实验也进行了分子量及分子量分布测定方法的验证。
首先验证了此方法的准确度验证，采用分子量标示量为10000和20000的对照品进行验证，实验结果如下表所示。结果显示在10000-20000的分子量范围内，此方法具有很高的准确度。
准确度如下所示
另外用中试一批样品做了此方法的精密度实验，结果如下表所示，由结果可知本发明方法具有很高的重现性和精密度
重复性如下表所示：
由上表可知，本专利方法测得的重均分子量的RSD不超过5％，各分子量分布段的RSD不超过10％，因此本专利方法具有良好的重复性。
中间精密度如下表所示：
由上表可知，本专利方法测得的重均分子量的RSD不超过5％，各分子量分布段的RSD不超过10％，因此本专利方法中间精密度良好。
重复性和中间精密度比对：
由上表可知，本专利方法测得的重均分子量的RSD不超过5％，各分子量分布段的RSD不超过10％，因此本专利方法具有良好的精密度。
Claims (2)
1.一种艾考糊精原料药分子量及其分布测定方法，其特征在于，采用凝胶渗透色谱GPC-激光光散射LS-示差检测RI联用的方法进行检测，具体的步骤如下：
测定时将样品制备成10mg/ml的溶液，取100μl进样测定，采用凝胶柱SB-G为保护柱，色谱柱SB-802HQ和色谱柱SB-803HQ串联，以0.2‰NaN3醋酸盐缓冲液为流动相，流速为0.5ml/min，柱温30℃，检测温度35℃；记录分子量及分子量分布。
2.根据权利要求1所述的艾考糊精原料药分子量及其分布测定方法，其特征在于，所述0.2‰NaN3醋酸盐缓冲液的配制方法为：18.7g醋酸钠、34.5mL冰醋酸和1g叠氮化钠，加注射水使溶解定并稀释至5L。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410588286.XA CN105628797B (zh) | 2014-10-28 | 2014-10-28 | 艾考糊精原料药分子量及其分布测定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410588286.XA CN105628797B (zh) | 2014-10-28 | 2014-10-28 | 艾考糊精原料药分子量及其分布测定方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN105628797A true CN105628797A (zh) | 2016-06-01 |
| CN105628797B CN105628797B (zh) | 2017-10-03 |
Family
ID=56043931
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201410588286.XA Active CN105628797B (zh) | 2014-10-28 | 2014-10-28 | 艾考糊精原料药分子量及其分布测定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN105628797B (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113804802A (zh) * | 2021-03-29 | 2021-12-17 | 武汉武药科技有限公司 | 检测环孢素药物制剂及其辅料的方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999042489A2 (en) * | 1998-02-20 | 1999-08-26 | Waters Investments Limited | System and method for determining molecular weight and intrinsic viscosity of a polymeric distribution using gel permeation chromatography |
| CN1945313A (zh) * | 2006-11-07 | 2007-04-11 | 王冕 | 一种香菇多糖分子量与分子量分布的测定方法 |
| CN103467608A (zh) * | 2013-09-27 | 2013-12-25 | 华仁药业股份有限公司 | 艾考糊精及其制备方法 |
| CN103954716A (zh) * | 2014-04-24 | 2014-07-30 | 上海慈瑞医药科技有限公司 | 一种香菇多糖分子量及分子量分布测定方法 |
-
2014
- 2014-10-28 CN CN201410588286.XA patent/CN105628797B/zh active Active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999042489A2 (en) * | 1998-02-20 | 1999-08-26 | Waters Investments Limited | System and method for determining molecular weight and intrinsic viscosity of a polymeric distribution using gel permeation chromatography |
| CN1945313A (zh) * | 2006-11-07 | 2007-04-11 | 王冕 | 一种香菇多糖分子量与分子量分布的测定方法 |
| CN103467608A (zh) * | 2013-09-27 | 2013-12-25 | 华仁药业股份有限公司 | 艾考糊精及其制备方法 |
| CN103954716A (zh) * | 2014-04-24 | 2014-07-30 | 上海慈瑞医药科技有限公司 | 一种香菇多糖分子量及分子量分布测定方法 |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| GARCIA-LOPEZ, E等: "Determination of high and low molecular weight molecules of icodextrin in plasma and dialysate, using gel filtration chromatography, in peritoneal dialysis patients", 《PERITONEAL DIALYSIS INTERNATIONAL》 * |
| KOHEI NISHIMURA等: "Molecular weight of polydisperse icodextrin effects its oncotic contribution to water transport", 《JOURNAL OF ARTIFICIAL ORGANS》 * |
| 伊芳等: "SEC-MALLS-RI体系测定魔芋胶分子结构特性的研究", 《安徽农业科学》 * |
| 吴扬兰等: "GPC-RI-MALLS技术测定羟乙基淀粉的分子量及分子量分布", 《重庆大学学报（自然科学版）》 * |
| 陈同强等: "凝胶渗透色谱-多角度激光散射联用技术研究红芪多糖中4个组分分子特征", 《中国中药杂志》 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113804802A (zh) * | 2021-03-29 | 2021-12-17 | 武汉武药科技有限公司 | 检测环孢素药物制剂及其辅料的方法 |
| CN113804802B (zh) * | 2021-03-29 | 2023-10-13 | 武汉武药科技有限公司 | 检测环孢素药物制剂及其辅料的方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN105628797B (zh) | 2017-10-03 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102183517B (zh) | 一种总黄酮含量测定方法 | |
| Ye et al. | Characterization of currently marketed heparin products: key tests for LMWH quality assurance | |
| CN108490091A (zh) | 一种发酵虫草菌粉及其制剂中多糖含量的检测方法 | |
| CN106645546A (zh) | 聚乙二醇电解质制剂中钠、钾、氯离子含量测定的方法 | |
| CN106568886A (zh) | 聚乙二醇电解质制剂中阴阳离子含量的测定方法 | |
| CN103954716A (zh) | 一种香菇多糖分子量及分子量分布测定方法 | |
| CN104090038B (zh) | 一种直接测定冬虫夏草产品中冬虫夏草多糖肽含量的方法 | |
| CN105388225A (zh) | 一种含胞磷胆碱钠的药物制剂中udpc的分析检测方法 | |
| CN105628797A (zh) | 艾考糊精原料药分子量及其分布测定方法 | |
| CN104345102A (zh) | 一种测定特定聚合度范围壳寡糖含量的方法 | |
| CN100580448C (zh) | 一种测定人血浆中苯妥英及其前体药物和代谢物的方法 | |
| KR20230144236A (ko) | 임팩트 폴리프로필렌 내 에틸렌-프로필렌 고무 함량 측정 방법 및 측정 장치 | |
| CN103134891A (zh) | 一种丁酸氯维地平含量和有关物质的测定方法 | |
| CN1971270A (zh) | 一种同时测定多种抗癫痫药物血药浓度的方法 | |
| CN103926350A (zh) | 康复新液制剂指纹图谱的检查方法及标准指纹图谱 | |
| CN110736796B (zh) | 一种检测肺炎球菌荚膜多糖分子量的方法 | |
| CN103235051A (zh) | 一种测定干性食品包装纸中着色剂溶剂绿7的方法 | |
| CN102875449B (zh) | 盐酸替罗非班异构体分离方法及d构型盐酸替罗非班定量方法 | |
| Fukasawa et al. | Molecular weight determination of hypromellose phthalate (HPMCP) using size exclusion chromatography with a multi-angle laser light scattering detector | |
| CN103901147A (zh) | 一种穿心莲内酯滴丸溶出度的测定方法 | |
| CN106404955A (zh) | 一种测定高粱红色素中槲皮素‑7‑葡萄糖苷含量的方法 | |
| CN114778711A (zh) | 一种磺胺多辛有关物质分析方法 | |
| Bajerski et al. | Determination of cetirizine in tablets and compounded capsules: comparative study between CE and HPLC | |
| CN112986457A (zh) | HPSEC-MALS法检测多糖并与Sepharose CL-4B法关联的方法 | |
| CN101929987B (zh) | 一种用高效液相色谱法测定瑞格列奈中间体有关物质的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20180927 Address after: 266101 No. 187 Zhuzhou Road, Laoshan District, Qingdao, Shandong. Co-patentee after: China Ren Pharmaceutical (Rizhao) Co., Ltd. Patentee after: Huaren Pharmaceutical Co., Ltd. Address before: 266000 No. 187 Zhuzhou Road, Laoshan District, Qingdao, Shandong. Patentee before: Huaren Pharmaceutical Co., Ltd. |
|
| TR01 | Transfer of patent right |