CN105628797A - 艾考糊精原料药分子量及其分布测定方法 - Google Patents

艾考糊精原料药分子量及其分布测定方法 Download PDF

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郭进
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Abstract

本发明涉及医药技术领域，特别涉及艾考糊精原料药分子量及其分布测定方法，采用凝胶渗透色谱GPC-激光光散射LS-示差检测RI联用的方法进行检测，具体的步骤如下：测定时将样品制备成10mg/ml的溶液，取100μl进样测定，采用凝胶柱SB-G为保护柱，色谱柱SB-802HQ和色谱柱SB-803HQ串联，以0.2‰NaN3醋酸盐缓冲液为流动相，流速为0.5ml/min，柱温30℃，检测温度35℃；记录分子量及分子量分布。本发明GPC-激光光散射联用技术兼具了GPC法和光散射法的特点，能快速、准确地测定出高分子的重均、数均分子量，且测出的重均分子量为绝对分子量，不需要对照品校准，而实现对艾考糊精绝对分子量及其分布的准确测定。

Description

艾考糊精原料药分子量及其分布测定方法
技术领域
本发明涉及医药技术领域，特别涉及艾考糊精原料药分子量及其分布测定方法。
背景技术
腹膜透析液是保证腹膜透析顺利进行的重要元素之一。迄今为止，葡萄糖透析液仍是使用最多的腹膜透析液，在我国目前是唯一的透析液。
随着透析技术的提高，临床上不断出现新型透析液，以多聚葡萄糖为渗透剂的艾考糊精(icodextrin)透析液就是其中的一种。对水解产物进行分子量和分子量分布测定是艾考糊精原料药分析的重要工作之一。目前常用GPC法测定聚合物的分子量和分子量分布。该法所给出的是分子量相对值，且一般需采用标准对照品校准。对照品的结构与待测样品结构的近似程度直接关系到分子量测定的准确与否。
发明内容
本发明针对现有技术的不足，提供一种艾考糊精原料药分子量及其分布测定方法，不需要用对照品建立标准曲线，而实现对艾考糊精绝对分子量的准确测定。
本发明的技术方案是：
一种艾考糊精原料药分子量及其分布测定方法，采用凝胶渗透色谱GPC-激光光散射LS-示差检测RI联用的方法进行检测，具体的步骤如下：
测定时将样品制备成10mg/ml的溶液，取100μl进样测定，采用凝胶柱SB-G为保护柱，色谱柱SB-802HQ和色谱柱SB-803HQ串联，以0.2‰NaN3醋酸盐缓冲液为流动相，流速为0.5ml/min，柱温30℃，检测温度35℃；记录分子量及分子量分布。
优选的，所述0.2‰NaN3醋酸盐缓冲液的配制方法为：18.7g醋酸钠、34.5mL冰醋酸和1g叠氮化钠，加注射水使溶解定并稀释至5L。
其中，色谱柱为SB-803HQ，用多羟基甲基丙烯酸甲酯填充材料排阻分子量为100000(以普鲁兰多糖计)的色谱柱；
色谱柱为SB-802HQ，用多羟基甲基丙烯酸甲酯填充材料排阻分子量为4000(以普鲁兰多糖计)的色谱柱；
本发明的有益效果是：
GPC-激光光散射联用技术兼具了GPC法和光散射法的特点，能快速、准确地测定出高分子的重均、数均分子量，且测出的重均分子量为绝对分子量，不需要对照品校准，而实现对艾考糊精绝对分子量及其分布的准确测定。
附图说明
附图1为本发明的测定方法测定艾考糊精原料药分子量及其分布的图谱；
附图2为0.2‰NaN3溶液作为流动相的分离图谱；
附图3为醋酸盐缓冲液作流动相的分离图谱；
附图4为0.2‰NaN3醋酸盐缓冲液作流动相的分离图谱。
具体实施方式
本发明的具体实施方式如下：
实施例1：
一种艾考糊精原料药分子量及其分布测定方法，采用凝胶渗透色谱GPC-激光光散射LS-示差检测RI联用的方法进行检测，具体的步骤如下：
所使用的仪器为1、液相为Waters2695-2414
2、激光光散射仪为WyattDAWNHELEOS-Ⅱ
凝胶柱SB-G、色谱柱SB-802HQ和色谱柱SB-803HQ均为日本昭和电工株式会社所生产。
测定时将样品制备成10mg/ml的溶液，取100μl进样测定，采用凝胶柱SB-G为保护柱，色谱柱SB-802HQ和色谱柱SB-803HQ串联，以0.2‰NaN3醋酸盐缓冲液为流动相，流速为0.5ml/min，柱温30℃，检测温度35℃；所述0.2‰NaN3醋酸盐缓冲液的配制方法为：18.7g醋酸钠、34.5mL冰醋酸和1g叠氮化钠，加注射水使溶解定并稀释至5L；记录分子量及分子量分布。
以上方法检测的图谱为图1所示，检测结果如下表所示。
从上表可以看出以上各段的分子量分布情况，其中：分段1的重均分子量为1244，分为为1.2％；分段2的重均分子量为3243，分为为23.2％；分段3的重均分子量为10860，分为为50.2％；分段4的重均分子量为29270，分为为19.0％；分段5的重均分子量为13750，分为为92.4％。
实验例：实验针对流动相、流速、色谱柱的变换以及色谱柱的柱温等条件进行了一系列的条件对比实验。
实验例1：
首先分别将0.2‰NaN3溶液、醋酸盐缓冲液以及含0.2‰NaN3醋酸盐缓冲液作流动相，如图2-4所示，发现含0.2‰NaN3醋酸盐缓冲液作流动相分离效果有较好；而后又将柱温在原有30℃的条件下分别升高和降低5℃，结果发现分离柱柱温在30℃时，分离效果较佳。
实验例2：
实验中对色谱柱选择进行的对比实验。使用多羟基甲基丙烯酸甲酯填充材料排阻分子量为100000(以普鲁兰多糖计)的色谱柱SB-804HQ(1)、用多羟基甲基丙烯酸甲酯填充材料排阻分子量为100000(以普鲁兰多糖计)的色谱柱SB-803HQ(2)以及(1)和(2)串联使用，结果发现色谱柱(2)能实现样品峰和溶剂峰(小分子量峰)的较好分离，但不能达到理想的分离条件。使用多羟基甲基丙烯酸甲酯填充材料排阻分子量为4000(以普鲁兰多糖计)的色谱柱SB-802HQ(3)和色谱柱(2)串联达到了样品峰和溶剂峰(小分子量峰)理想的分离条件，故此色谱柱条件较佳。
实验例3：
实验中也对流动相的流速进行了对比，尝试了0.3ml/min、0.5ml/min和0.7ml/min3个流速，通过试验发现，3个不同的流速对同一个样品重均分子量影响较小(几乎无影响)，0.7ml/mi的流速对小分子量段的分子量分布影响较大，0.3ml/min和0.5ml/min的流速对分子量分布影响较小，但0..3ml/min的流速分析时间较长，0.5ml/min的流速分析效果较佳。
实验例4：
实验也进行了分子量及分子量分布测定方法的验证。
首先验证了此方法的准确度验证，采用分子量标示量为10000和20000的对照品进行验证，实验结果如下表所示。结果显示在10000-20000的分子量范围内，此方法具有很高的准确度。
准确度如下所示
另外用中试一批样品做了此方法的精密度实验，结果如下表所示，由结果可知本发明方法具有很高的重现性和精密度
重复性如下表所示：
由上表可知，本专利方法测得的重均分子量的RSD不超过5％，各分子量分布段的RSD不超过10％，因此本专利方法具有良好的重复性。
中间精密度如下表所示：
由上表可知，本专利方法测得的重均分子量的RSD不超过5％，各分子量分布段的RSD不超过10％，因此本专利方法中间精密度良好。
重复性和中间精密度比对：
由上表可知，本专利方法测得的重均分子量的RSD不超过5％，各分子量分布段的RSD不超过10％，因此本专利方法具有良好的精密度。

Claims (2)

1.一种艾考糊精原料药分子量及其分布测定方法，其特征在于，采用凝胶渗透色谱GPC-激光光散射LS-示差检测RI联用的方法进行检测，具体的步骤如下：
测定时将样品制备成10mg/ml的溶液，取100μl进样测定，采用凝胶柱SB-G为保护柱，色谱柱SB-802HQ和色谱柱SB-803HQ串联，以0.2‰NaN3醋酸盐缓冲液为流动相，流速为0.5ml/min，柱温30℃，检测温度35℃；记录分子量及分子量分布。
2.根据权利要求1所述的艾考糊精原料药分子量及其分布测定方法，其特征在于，所述0.2‰NaN3醋酸盐缓冲液的配制方法为：18.7g醋酸钠、34.5mL冰醋酸和1g叠氮化钠，加注射水使溶解定并稀释至5L。
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