CN113804802A - 检测环孢素药物制剂及其辅料的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种检测环孢素药物制剂的方法，包括：步骤1)：将环孢素药物制剂用稀释剂处理，以便获得环孢素药物制剂待测溶液；步骤2)：将步骤1)得到的环孢素药物制剂待测溶液进行凝胶色谱排阻法检测，其中，所述凝胶色谱排阻法检测中采用的色谱柱为至少两个水溶性GPC色谱柱串联。该方法可以有效分离聚维酮、OP‑40、聚氧乙烯氢化蓖麻油，具有稳定性好、操作简便、快捷、效率高、灵敏度好等突出优点，在聚维酮、OP‑40、聚氧乙烯氢化蓖麻油浓度较低时也可以实现有效分离，可以为进一步研究含有聚维酮、OP‑40、聚氧乙烯氢化蓖麻油中的任意两种或三种的化学品例如环孢素滴眼液中这三种物质的具体性质提供依据。

Description

检测环孢素药物制剂及其辅料的方法
技术领域
本发明涉及药物化学中的分析检测领域，具体而言，本发明涉及一种检测环孢素药物制剂及其辅料的方法。
背景技术
聚维酮，即聚乙烯吡咯烷酮(polyvinyl pyrrolidone)，简称PVP，是一种非离子型高分子化合物，PVP作为一种合成水溶性高分子化合物，具有成膜性、粘结性、吸湿性，其还具有优异的溶解性能及生理相容性，因为其既溶于水，又溶于大部分有机溶剂、毒性很低、生理相容性好，其在医药、食品、化妆品这些与人们健康密切相关的领域中备受青睐。此外，PVP有优良的生理惰性，不参与人体新陈代谢，又具有优良的生物相容性，对皮肤、粘膜、眼等不形成任何刺激。医药级PVP为国际倡导的三大药用新辅料之一，可用做片剂、颗粒剂的粘结剂、注射剂的助溶剂、胶囊的助流剂；眼药的去毒剂、延效剂、润滑剂和包衣成膜剂，液体制剂的分散剂和酶及热敏药物的稳定剂，还可用做低温保存剂。
聚氧乙烯氢化蓖麻油(也称为氢化蓖麻油聚氧酯40)可作为水不溶性药物或其它脂溶性药物的增溶剂和乳化剂用在半固体及液体制剂中。
OP-40(辛基酚聚氧乙烯醚-40)属于烷基酚聚氧乙烯醚中的一类，是一种重要的聚氧乙烯型非离子表面活性剂，主要用于生产高性能洗涤剂，是印染助剂中最常用的原料之一，其也可用作药物制剂辅料。
OP-40、聚维酮、聚氧乙烯氢化蓖麻油可作为药用辅料，然而，现有技术中并未见可以有效分离这三种物质中两个或三个的检测方法，不利于开展药物质量研究和反向研究。
因此，研发一种有效分离OP-40、聚维酮、聚氧乙烯氢化蓖麻油中至少两种的检测方法显得很有必要。
发明内容
本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本发明提供一种检测环孢素药物制剂的方法和分析检测化学品的方法，该方法可以有效分离环孢素药物制剂中辅料聚维酮、OP-40、聚氧乙烯氢化蓖麻油，若化学品中含有聚维酮、OP-40、聚氧乙烯氢化蓖麻油中的任意两种或三种，该方法也可以将该两种或三种物质有效分离，其可以为进一步研究含有聚维酮、OP-40、聚氧乙烯氢化蓖麻油中的任意两种或三种的化学品例如环孢素滴眼液中这三种物质的具体性质提供依据。本发明提供的方法具有稳定性好、操作简便、快捷、效率高、灵敏度好等突出优点，在聚维酮、OP-40、聚氧乙烯氢化蓖麻油浓度较低时也可以实现有效分离。
为此，在本发明的第一方面，本发明提供了一种检测环孢素药物制剂的方法，包括：
步骤1)：将环孢素药物制剂用稀释剂处理，以便获得环孢素药物制剂待测溶液；
步骤2)：将步骤1)得到的环孢素药物制剂待测溶液进行凝胶色谱排阻法检测，
其中，所述凝胶色谱排阻法检测中采用的色谱柱为至少两个水溶性凝胶渗透色谱(GPC)色谱柱串联。
在一个具体实施方案中，所述环孢素药物制剂包含辅料，所述辅料包括OP-40、聚维酮和聚氧乙烯氢化蓖麻油的任意两种或三种。
在一个具体实施方案中，每个所述水溶性GPC色谱柱独立地选自孔径为250埃-500埃且排阻限为80,000-400,000的水溶性GPC色谱柱，优选地，每个所述水溶性GPC色谱柱独立地选自Ultrahydrogel 250、Ultrahydrogel 500；优选地，所述凝胶色谱排阻法检测中采用的色谱柱由Ultrahydrogel 250和Ultrahydrogel 500串联组成。
以上方法能够实现药品(例如环孢素药物制剂)中含有的聚维酮、OP-40、聚氧乙烯氢化蓖麻油中的至少两种的有效分离，以对药品中含有的上述辅料的具体性质进行研究，以便开展药物质量控制和质量研究。
实现药品中含有的聚维酮、OP-40、聚氧乙烯氢化蓖麻油中的至少两种的有效分离是指当药品中含有聚维酮、OP-40、聚氧乙烯氢化蓖麻油中的两种时，能够实现这两种辅料的有效分离，当药品中含有聚维酮、OP-40、聚氧乙烯氢化蓖麻油三种辅料时，这三种辅料两两之间均能够有效分离。
在一个具体实施方案中，所述凝胶色谱排阻法检测中采用的流动相为钠盐溶液，优选为钠盐水溶液；优选地，所述钠盐选自NaNO3、NaCl中的至少之一；优选地，所述钠盐溶液中的钠盐浓度为0.01～0.2M；任选地，所述钠盐溶液的pH值控制为8.0～10.0；优选地，调节所述钠盐溶液的pH值所使用的pH调节剂为Na2HPO4。
在一个具体实施方案中，所述稀释剂为钠盐溶液，优选为钠盐水溶液；优选地，所述钠盐选自NaNO3、NaCl中的至少之一；优选地，所述钠盐溶液中的钠盐浓度为0.01～0.2M。
在一个具体实施方案中，所述凝胶色谱排阻法检测中采用的检测器包括激光散射仪和示差折光检测器。
在一个具体实施方案中，所述凝胶色谱排阻法检测中采用的流动相流速为0.5mL/min～0.7mL/min。
在一个具体实施方案中，所述凝胶色谱排阻法检测中采用的柱温为30～50摄氏度。
在一个具体实施方案中，所述步骤1)中，在所述环孢素药物制剂用所述稀释剂处理前，对所述环孢素药物制剂进行浓缩处理；优选地，所述浓缩处理包括冷冻干燥、蒸馏中的一种或两种。
在一个具体实施方案中，所述环孢素药物制剂待测溶液中OP-40的浓度为2mg/ml以上，优选为2～3mg/ml。
在一个具体实施方案中，所述环孢素药物制剂待测溶液中聚维酮的浓度为10～20mg/ml。
在一个具体实施方案中，所述环孢素药物制剂待测溶液中聚氧乙烯氢化蓖麻油的浓度为40～60mg/ml。
在本发明的第二方面，本发明提供一种分离检测化学品的方法，所述化学品包括OP-40、聚维酮和聚氧乙烯氢化蓖麻油中的两种或三种，所述方法包括：
步骤1)：将含有所述化学品的样品用稀释剂处理，以便获得待测溶液；
步骤2)：将步骤1)得到的所述待测溶液进行凝胶色谱排阻法检测，
其中，所述凝胶色谱排阻法检测中采用的色谱柱为至少两个水溶性GPC色谱柱串联。
在一个具体实施方案中，每个所述水溶性GPC色谱柱独立地选自孔径为250埃-500埃且排阻限为80,000-400,000的水溶性GPC色谱柱，优选地，每个所述水溶性GPC色谱柱独立地选自Ultrahydrogel 250、Ultrahydrogel 500；优选地，所述凝胶色谱排阻法检测中采用的色谱柱由Ultrahydrogel 250和Ultrahydrogel 500串联组成；
在一个具体实施方案中，所述凝胶色谱排阻法检测中采用的流动相为钠盐溶液，优选为钠盐水溶液；优选地，所述钠盐选自NaNO3、NaCl中的至少之一；优选地，所述钠盐溶液的浓度为0.01～0.2M；任选地，所述钠盐溶液的pH值控制为8.0～10.0；优选地，调节所述钠盐溶液的pH值所使用的pH调节剂为Na2HPO4。
在一个具体实施方案中，所述稀释剂为钠盐溶液，优选为钠盐水溶液；优选地，所述钠盐选自NaNO3、NaCl中的至少之一；优选地，所述钠盐溶液的浓度为0.01～0.2M。
在一个具体实施方案中，所述凝胶色谱排阻法检测中采用的检测器包括激光散射仪和示差折光检测器。
在一个具体实施方案中，所述凝胶色谱排阻法检测中采用的流动相流速为0.5mL/min～0.7mL/min。
在一个具体实施方案中，所述凝胶色谱排阻法检测中采用的柱温为30～50摄氏度。
在一个具体实施方案中，所述步骤1)中，在所述含有所述化学品的样品用稀释剂处理前，对所述含有所述化学品的样品进行浓缩处理；优选地，所述浓缩处理包括冷冻干燥、蒸馏中的一种或两种。
在一个具体实施方案中，所述待测溶液中OP-40的浓度为2mg/ml以上，优选为2～3mg/ml。
在一个具体实施方案中，所述待测溶液中聚维酮的浓度为10～20mg/ml。
在一个具体实施方案中，所述待测溶液中聚氧乙烯氢化蓖麻油的浓度为40～60mg/ml。
在本发明的第三方面，本发明提供水溶性GPC色谱柱在分离检测OP-40、聚维酮和聚氧乙烯氢化蓖麻油中的两种或三种物质中的用途。利用所述水溶性GPC色谱柱可以有效地分离化学品中OP-40、聚维酮和聚氧乙烯氢化蓖麻油中的两种或三种物质，具有稳定性好、灵敏度高的优点。
在一个具体实施方案中，所述水溶性GPC色谱柱为至少两个；优选地，每个所述水溶性GPC色谱柱独立地选自孔径为250埃-500埃且排阻限为80,000-400,000的水溶性GPC色谱柱，优选地，每个所述水溶性GPC色谱柱独立地选自Ultrahydrogel 250、Ultrahydrogel500；更优选地，所述水溶性GPC色谱柱由Ultrahydrogel 250和Ultrahydrogel 500串联组成。
在一个具体实施方案中，所述分离检测采用凝胶色谱排阻法进行；优选地，所述凝胶色谱排阻法采用的流动相流速为0.5mL/min～0.7mL/min；优选地，所述凝胶色谱排阻法采用的柱温为30～50摄氏度；优选地，所述凝胶色谱排阻法采用的流动相为钠盐溶液，优选为钠盐水溶液；优选地，所述钠盐选自NaNO3、NaCl中的至少之一；优选地，所述钠盐溶液中的钠盐浓度为0.01～0.2M；任选地，所述钠盐溶液的pH值控制为8.0～10.0；优选地，调节所述钠盐溶液的pH值所使用的pH调节剂为Na2HPO4。
在一个具体实施方案中，在分离检测之前，用稀释剂对检测样品进行稀释，以便获得待测溶液，所述稀释剂为钠盐溶液，优选为钠盐水溶液；优选地，所述钠盐选自NaNO3、NaCl中的至少之一；优选地，所述钠盐溶液中的钠盐浓度为0.01～0.2M；
优选地，待测溶液中OP-40的浓度为2mg/ml以上，更优选为2～3mg/ml；
优选地，待测溶液中聚维酮的浓度为10～20mg/ml；
优选地，待测溶液中聚氧乙烯氢化蓖麻油的浓度为40～60mg/ml。
在一个具体实施方案中，分离检测中采用的检测器包括激光散射仪和示差折光检测器。
在本发明的第四方面，本发明提供水溶性GPC色谱柱在检测环孢素药物制剂中的用途。
根据本发明的实施例，环孢素药物制剂包括OP-40、聚维酮和聚氧乙烯氢化蓖麻油这三种辅料。利用所述水溶性GPC色谱柱可以有效地分离环孢素药物制剂中OP-40、聚维酮和聚氧乙烯氢化蓖麻油中的两种或三种物质，具有稳定性好、灵敏度高的优点。
在一个具体实施方案中，所述水溶性GPC色谱柱为至少两个；优选地，每个所述水溶性GPC色谱柱独立地选自孔径为250埃-500埃且排阻限为80,000-400,000的水溶性GPC色谱柱，优选地，每个所述水溶性GPC色谱柱独立地选自Ultrahydrogel 250、Ultrahydrogel500；更优选地，所述水溶性GPC色谱柱由Ultrahydrogel 250和Ultrahydrogel 500串联组成。
在一个具体实施方案中，所述检测采用凝胶色谱排阻法进行；优选地，所述凝胶色谱排阻法检测中采用的流动相流速为0.5mL/min～0.7mL/min；优选地，所述凝胶色谱排阻法检测中采用的柱温为30～50摄氏度；优选地，所述凝胶色谱排阻法采用的流动相为钠盐溶液，优选为钠盐水溶液；优选地，所述钠盐选自NaNO3、NaCl中的至少之一；优选地，所述钠盐溶液的浓度为0.01～0.2M；任选地，所述钠盐溶液的pH值控制为8.0～10.0；优选地，调节所述钠盐溶液的pH值所使用的pH调节剂为Na2HPO4。
在一个具体实施方案中，在检测之前，用稀释剂对检测样品进行稀释，以便获得待测溶液，所述稀释剂为钠盐溶液，优选为钠盐水溶液；优选地，所述钠盐选自NaNO3、NaCl中的至少之一；优选地，所述钠盐溶液中的钠盐浓度为0.01～0.2M；
优选地，待测溶液中OP-40的浓度为2mg/ml以上，优选为2～3mg/ml。
优选地，待测溶液中聚维酮的浓度为10～20mg/ml。
优选地，待测溶液中聚氧乙烯氢化蓖麻油的浓度为40～60mg/ml。
在一个具体实施方案中，检测中采用的检测器包括激光散射仪和示差折光检测器。
本发明的有益效果在于：
本发明可以有效分离聚维酮、OP-40、聚氧乙烯氢化蓖麻油，具有稳定性好、操作简便、快捷、效率高、灵敏度好等突出优点，在聚维酮、OP-40、聚氧乙烯氢化蓖麻油浓度较低时也可以实现有效分离，可以为进一步研究含有聚维酮、OP-40、聚氧乙烯氢化蓖麻油中的任意两种或三种的化学品例如环孢素滴眼液中这三种物质的具体性质提供依据。
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
附图说明
本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：
图1显示了根据本发明的实施例1的GPC图，其中，LS指示的曲线为激光散射仪的吸收曲线，dRI指示的曲线为示差的吸收曲线；
图2显示了根据本发明的实施例2的GPC图，其中，LS指示的曲线为激光散射仪的吸收曲线，dRI指示的曲线为示差的吸收曲线；
图3显示了根据本发明的实施例3的GPC图，其中，LS指示的曲线为激光散射仪的吸收曲线，dRI指示的曲线为示差的吸收曲线；
图4显示了根据本发明的实施例4的GPC图，其中，LS指示的曲线为激光散射仪的吸收曲线，dRI指示的曲线为示差的吸收曲线；
图5显示了根据本发明的实施例5的GPC图，其中，LS指示的曲线为激光散射仪的吸收曲线，dRI指示的曲线为示差的吸收曲线；
图6显示了根据本发明的实施例6的GPC图，其中，LS指示的曲线为激光散射仪的吸收曲线，dRI指示的曲线为示差的吸收曲线；
图7显示了根据本发明的对比例1的GPC图，其中，LS指示的曲线为激光散射仪的吸收曲线，dRI指示的曲线为示差的吸收曲线；
图8显示了根据本发明的对比例3的GPC图，其中，LS指示的曲线为激光散射仪的吸收曲线，dRI指示的曲线为示差的吸收曲线；
图1-8中，Relative Scale是指相对比例。
具体实施方式
本发明提供的检测环孢素药物制剂的方法，可以依照以下方法实现：
将环孢素滴眼液冷冻干燥后，在NaNO3溶液中振荡溶解，配制成含OP-40浓度约为2.5mg/mL、聚维酮浓度约15mg/mL、聚氧乙烯氢化蓖麻油浓度约50mg/mL的溶液作为供试品溶液，
取100μL上述供试品溶液，用凝胶色谱排阻法进行检测。记录色谱图。
检测条件：
色谱柱：将Waters色谱柱Ultrahydrogel 250和Ultrahydrogel 500串联；
流动相：0.01～0.2M NaNO3水溶液(pH8.0～10.0，pH调节剂：Na2HPO4)；
柱温：30～50℃；
流速：流动相流速为0.5～0.7mL/min；
检测器：激光散射仪和示差折光检测器联用。
利用上述检测环孢素药物制剂的方法，可以在环孢素药物制剂中有效的分离关键辅料OP-40、聚维酮、聚氧乙烯氢化蓖麻油。
下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
本发明实施例中所使用的环孢素滴眼液中含1(w/v)％的聚氧乙烯氢化蓖麻油、0.05(w/v)％的OP-40、0.3(w/v)％的聚维酮，所用的Ultrahydrogel 250规格：7.8mm×300mm，Ultrahydrogel 500规格：7.5mm×300mm，检测器为DAWN(HELEOS-II)(激光散射仪)、Optilab(T-rEX)(示差折光检测器)联用。
实施例1
将10mL环孢素滴眼液冷冻干燥后，在2mL0.05M NaNO3溶液中振荡溶解；配制成含OP-40浓度为2.5mg/mL、聚维酮浓度15mg/mL、聚氧乙烯氢化蓖麻油浓度50mg/mL的溶液，作为供试品溶液，静置30min，用0.22微米微孔滤膜过滤后注入样品瓶。
取100μL上述方法所得过滤后的供试品溶液。用凝胶色谱排阻法进行检测。记录色谱图，如图1所示，完成所述环孢素滴眼液样品中辅料的分析分离。
检测条件：
色谱柱：Waters色谱柱Ultrahydrogel 250和Ultrahydrogel 500串联；
流动相：0.1M NaNO3水溶液(pH9，pH调节剂：Na2HPO4)；
柱温：设置Waters GPC柱温箱加热器为40℃；
流速：流动相流速为0.6mL/min；
分析时间：80min；
进样量：进样体积为100μL；
检测器：DAWN(HELEOS-II)、Optilab(示差折光检测器)(T-rEX)联用
图1中结果显示，聚维酮的出峰时间在16～20min，氢化蓖麻油的出峰时间在21～26min，OP-40出峰时间为27～30min。由此说明，在本实施例的条件下，OP-40、聚维酮、聚氧乙烯氢化蓖麻油得到了有效分离。
实施例2
取适量OP40至10ml容量瓶，用0.05M NaNO3溶液中振荡溶解，配制OP-40浓度为5.0mg/mL作为供试品溶液，静置30min，用0.22微米微孔滤膜过滤后注入样品瓶。
取100μL上述所得过滤后的供试品溶液，用凝胶色谱排阻法进行检测。记录色谱图，结果如图2所示，完成所述OP-40样品的检测。
检测条件：
色谱柱：Waters色谱柱Ultrahydrogel 250和Ultrahydrogel 500串联；
流动相：0.1M NaNO3水溶液(pH9，pH调节剂：Na2HPO4)；
柱温：设置Waters GPC柱温箱加热器为40℃；
流速：流动相流速为0.6mL/min；
分析时间：80min；
进样量：进样体积为100μL；
检测器：DAWN(HELEOS-II)(激光散射仪)、Optilab(T-rEX)(示差折光检测器)联用
图2中结果显示，所述OP-40样品出峰时间为27～30min，无其他上述两种检测器可以同时检测到的物质出现。
实施例3
取适量聚氧乙烯氢化蓖麻油至10ml容量瓶，用0.05M NaNO3溶液中振荡溶解，配制含聚氧乙烯氢化蓖麻油浓度为50mg/mL作为供试品溶液，静置30min，用0.22微米微孔滤膜过滤后注入样品瓶，
取100μL上述所得过滤后的供试品溶液用凝胶色谱排阻法用如下检测条件进行检测。记录色谱图，结果如图3所示。
色谱条件：
色谱柱：Waters色谱柱Ultrahydrogel 250和Ultrahydrogel 500串联；
流动相：0.1M NaNO3水溶液(pH9，pH调节剂：Na2HPO4)；
柱温：设置Waters GPC柱温箱加热器为40℃；
流速：流动相流速为0.6mL/min；
分析时间：80min；
进样量：进样体积为100μL；
检测器：联用检测器DAWN(HELEOS-II)(激光散射仪)、Optilab(T-rEX)(示差折光检测器)
图3中结果显示，氢化蓖麻油的出峰时间在21～26min。无其他上述两种检测器可以同时检测到的物质出现。
实施例4
取适量聚维酮至10ml容量瓶，用0.05M NaNO3溶液振荡溶解，配制聚维酮浓度为15mg/mL的供试品溶液，静置30min，用0.22微米微孔滤膜过滤后注入样品瓶。
取100μL上述所得过滤后的供试品溶液用凝胶色谱排阻法用如下检测条件进行检测。记录色谱图，结果如图4所示。
检测条件：
色谱柱：Waters色谱柱Ultrahydrogel 250和Ultrahydrogel 500串联；
流动相：0.1M NaNO3水溶液(pH9，pH调节剂：Na2HPO4)；
柱温：设置Waters GPC柱温箱加热器为50℃；
流速：流动相流速为0.5mL/min；
分析时间:80min；
进样量：进样体积为100μL；
检测器：联用检测器DAWN(HELEOS-II)(激光散射仪)、Optilab(T-rEX)(示差折光检测器)
图4中结果显示，聚维酮的出峰时间在16～20min。无其他上述两种检测器可以同时检测到的物质出现。
实施例5
将10mL环孢素滴眼液冷冻干燥后，在2mL0.05M NaNO3溶液中振荡溶解，配制成含OP-40浓度为2.5mg/mL、聚维酮浓度15mg/mL、聚氧乙烯氢化蓖麻油浓度50mg/mL的溶液作为供试品溶液，静置30min，用0.22微米微孔滤膜过滤后注入样品瓶。
取100μL上述所得过滤后的供试品溶液用凝胶色谱排阻法用如下检测条件进行检测。记录色谱图，结果如图5所示。
色谱条件：
色谱柱：Waters色谱柱Ultrahydrogel 250和Ultrahydrogel 500串联；
流动相：0.2M NaNO3水溶液(pH8，pH调节剂：Na2HPO4)；
柱温：设置Waters GPC柱温箱加热器为30℃；
流速：流动相流速为0.7mL/min；
分析时间：80min；
进样量：进样体积为100μL；
检测器：联用检测器DAWN(HELEOS-II)(激光散射仪)、Optilab(T-rEX)(示差折光检测器)
图5中结果显示，聚维酮的出峰时间在16～20min，氢化蓖麻油的出峰时间在21～26min，OP-40出峰时间为27～30min。由此说明，在本实施例的条件下，OP-40、聚维酮、聚氧乙烯氢化蓖麻油得到了有效分离。
实施例6
将10mL环孢素滴眼液冷冻干燥后，在2mL0.05M NaNO3溶液中振荡溶解，配制成含OP-40浓度为2.5mg/mL、聚维酮浓度15mg/mL、聚氧乙烯氢化蓖麻油浓度50mg/mL的溶液作为供试品溶液，静置30min，用0.22微米微孔滤膜过滤后注入样品瓶。
取100μL上述所得过滤后的供试品溶液用凝胶色谱排阻法用如下检测条件进行检测。记录色谱图，如图6所示，完成所述环孢素滴眼液样品中辅料的分析分离。
色谱条件：
色谱柱：Waters色谱柱Ultrahydrogel 250和Ultrahydrogel 500串联；
流动相：0.01M NaNO3水溶液(pH10，pH调节剂：Na2HPO4)；
柱温：设置Waters GPC柱温箱加热器为50℃；
流速：流动相流速为0.6mL/min；
分析时间：80min；
进样量：进样体积为100μL；
检测器：联用检测器DAWN(HELEOS-II)(激光散射仪)、Optilab(T-rEX)(示差折光检测器)
图6中结果显示，聚维酮的出峰时间在16～20min，氢化蓖麻油的出峰时间在21～26min，OP-40出峰时间为27～30min。由此说明，在本实施例的条件下，OP-40、聚维酮、聚氧乙烯氢化蓖麻油得到了有效分离。
实施例7
将10mL环孢素滴眼液冷冻干燥后，在2mL0.05M NaNO3溶液中振荡溶解，配制成含OP-40浓度为2.5mg/mL、聚维酮浓度15mg/mL、聚氧乙烯氢化蓖麻油浓度50mg/mL的溶液作为供试品溶液，静置30min，用0.22微米微孔滤膜过滤后注入样品瓶。
取100μL上述所得过滤后的供试品溶液用凝胶色谱排阻法用如下检测条件进行检测。记录色谱图，完成所述环孢素滴眼液样品中辅料的分析分离。
色谱条件：
色谱柱：Waters色谱柱Ultrahydrogel 250和Ultrahydrogel 500串联；
流动相：0.1M NaCl水溶液(pH9，pH调节剂：Na2HPO4)；
柱温：设置Waters GPC柱温箱加热器为40℃；
流速：流动相流速为0.6mL/min；
分析时间：80min；
进样量：进样体积为100μL；
检测器：联用检测器DAWN(HELEOS-II)(激光散射仪)、Optilab(T-rEX)(示差折光检测器)
检测结果与实施例1一致。
对比例1
将10mL环孢素滴眼液冷冻干燥后，在2mL0.05M NaNO3溶液中振荡溶解，配制成含OP-40浓度为2.5mg/mL、聚维酮浓度15mg/mL、聚氧乙烯氢化蓖麻油浓度50mg/mL的溶液作为供试品溶液，静置30min，用0.22微米微孔滤膜过滤后注入样品瓶。
取100μL上述所得过滤后的供试品溶液用凝胶色谱排阻法用如下检测条件进行检测。记录色谱图，如图7所示，完成所述环孢素滴眼液样品中辅料的分析分离。
色谱条件：
色谱柱：Waters色谱柱Ultrahydrogel 250；
流动相：0.1M NaNO3水溶液(pH9，pH调节剂：Na2HPO4)；
柱温：设置Waters GPC柱温箱加热器为40℃；
流速：流动相流速为0.6mL/min；
分析时间：60min；
进样量：进样体积为100μL；
检测器：联用检测器DAWN(HELEOS-II)(激光散射仪)、Optilab(T-rEX)(示差折光检测器)
图7结果显示，OP-40、聚维酮、聚氧乙烯氢化蓖麻油两两无法分离，OP-40出峰时间与聚氧乙烯氢化蓖麻油、聚维酮重合。
此外，在与对比例1相同的条件下，除了色谱柱用Waters色谱柱Ultrahydrogel500代替Waters色谱柱Ultrahydrogel 250，进行另一对比实验，结果显示OP-40、聚维酮、聚氧乙烯氢化蓖麻油两两无法分离，OP-40出峰时间与聚氧乙烯氢化蓖麻油、聚维酮重合。
对比例2
将10mL环孢素滴眼液冷冻干燥后，在2mL0.05M NaNO3溶液中振荡溶解，配制成含OP-40浓度为2.5mg/mL、聚维酮浓度15mg/mL、聚氧乙烯氢化蓖麻油浓度50mg/mL的溶液作为供试品溶液，静置30min，用0.22微米微孔滤膜过滤后注入样品瓶。
取100μL上述所得过滤后的供试品溶液用凝胶色谱排阻法用如下检测条件进行检测。记录色谱图，完成所述环孢素滴眼液样品中辅料的分析分离。
色谱条件：
色谱柱：Waters色谱柱Ultrahydrogel 250和Ultrahydrogel 500串联；
流动相：0.1M NaNO3水溶液(pH未调节)；
柱温：设置Waters GPC柱温箱加热器为40℃；
流速：流动相流速为0.6mL/min；
分析时间：60min；
进样量：进样体积为100μL；
检测器：联用检测器DAWN(HELEOS-II)(激光散射仪)、Optilab(T-rEX)(示差折光检测器)
结果显示，采用本对比例中检测方法，OP-40、聚维酮、聚氧乙烯氢化蓖麻油两两无法分离，OP-40出峰时间与聚氧乙烯氢化蓖麻油，聚维酮重合。
对比例3
将10mL环孢素滴眼液冷冻干燥后，在2mL0.05M NaNO3溶液中振荡溶解，配制成含OP-40浓度为2.5mg/mL、聚维酮浓度15mg/mL、聚氧乙烯氢化蓖麻油浓度50mg/mL的溶液作为供试品溶液，静置30min，用0.22微米微孔滤膜过滤后注入样品瓶。
取100μL上述所得过滤后的供试品溶液用凝胶色谱排阻法用如下检测条件进行检测。记录色谱图，如图8所示，完成所述环孢素滴眼液样品中辅料的分析分离。
色谱条件：
色谱柱：Waters色谱柱Ultrahydrogel 250和Ultrahydrogel 500串联；
流动相：0.1M NaNO3水溶液(pH11，pH调节剂：Na3PO4)；
柱温：设置Waters GPC柱温箱加热器为40℃；
流速：流动相流速为0.6mL/min；
分析时间：60min；
进样量：进样体积为100μL；
检测器：联用检测器DAWN(HELEOS-II)(激光散射仪)、Optilab(T-rEX)(示差折光检测器)
图8结果显示，聚维酮的出峰时间在8～9min，OP-40、聚氧乙烯氢化蓖麻油无法分离，混合峰出峰时间在9～10min。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施方案”等的描述意指结合该实施方案描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施方案中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施方案。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施方案中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施方案以及不同实施方案的特征进行结合和组合。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施方案，可以理解的是，上述实施方案是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施方案进行变化、修改、替换和变型。

Claims (10)

1.一种检测环孢素药物制剂的方法，其特征在于，包括：
步骤1)：将环孢素药物制剂用稀释剂处理，以便获得环孢素药物制剂待测溶液；
步骤2)：将步骤1)得到的环孢素药物制剂待测溶液进行凝胶色谱排阻法检测，
其中，所述凝胶色谱排阻法检测中采用的色谱柱为至少两个水溶性GPC色谱柱串联。
2.根据权利要求1所述的检测环孢素药物制剂的方法，其特征在于，所述药物制剂包含辅料，所述辅料包括OP-40、聚维酮和聚氧乙烯氢化蓖麻油中的任意两种或三种；
优选地，每个所述水溶性GPC色谱柱独立地选自孔径为250埃-500埃且排阻限为80,000-400,000的水溶性GPC色谱柱；
优选地，每个所述水溶性GPC色谱柱独立地选自Ultrahydrogel 250或Ultrahydrogel500。
3.根据权利要求1中所述的检测环孢素药物制剂的方法，其特征在于，所述凝胶色谱排阻法检测中采用的流动相为钠盐溶液；
优选地，所述钠盐选自NaNO3、NaCl中的至少之一；
优选地，所述钠盐溶液中的钠盐浓度为0.01～0.2M；
任选地，所述钠盐溶液的pH值控制为8.0～10.0；
优选地，调节所述钠盐溶液的pH值所使用的pH调节剂为Na2HPO4。
4.根据权利要求1所述的检测环孢素药物制剂的方法，其特征在于，所述稀释剂为钠盐溶液；
优选地，所述钠盐选自NaNO3、NaCl中的至少之一；
优选地，所述钠盐溶液中的钠盐浓度为0.01～0.2M。
5.根据权利要求1所述的检测环孢素药物制剂的方法，其特征在于，所述凝胶色谱排阻法检测中采用的检测器包括激光散射仪和示差折光检测器；
任选地，所述凝胶色谱排阻法检测中采用的流动相流速为0.5mL/min～0.7mL/min；
优选地，所述凝胶色谱排阻法检测中采用的柱温为30～50摄氏度。
6.根据权利要求1所述的检测环孢素药物制剂的方法，其特征在于，所述步骤1)中，在所述环孢素药物制剂用所述稀释剂处理前，对所述环孢素药物制剂进行浓缩处理；
优选地，所述浓缩处理包括冷冻干燥、蒸馏中的一种或两种。
7.根据权利要求2所述的检测环孢素药物制剂的方法，其特征在于，所述环孢素药物制剂待测溶液中OP-40的浓度为2mg/ml以上，优选为2～3mg/ml；
任选地，所述环孢素药物制剂待测溶液中聚维酮的浓度为10～20mg/ml；
任选地，所述环孢素药物制剂待测溶液中聚氧乙烯氢化蓖麻油的浓度为40～60mg/ml。
8.一种分离检测化学品的方法，其特征在于，所述化学品中包括OP-40、聚维酮和聚氧乙烯氢化蓖麻油中的两种或三种，所述方法包括：
步骤1)：将含有所述化学品的样品用稀释剂处理，以便获得待测溶液；
步骤2)：将步骤1)得到的所述待测溶液进行凝胶色谱排阻法检测，
其中，所述凝胶色谱排阻法检测中采用的色谱柱为至少两个水溶性GPC色谱柱串联；
优选地，每个所述水溶性GPC色谱柱独立地选自孔径为250埃-500埃且排阻限为80,000-400,000的水溶性GPC色谱柱；
优选地，每个所述水溶性GPC色谱柱独立地选自Ultrahydrogel 250或Ultrahydrogel500；
任选地，所述凝胶色谱排阻法检测中采用的流动相为钠盐溶液；
优选地，所述钠盐选自NaNO3、NaCl中的至少之一；
优选地，所述钠盐溶液中的钠盐浓度为0.01～0.2M；
任选地，所述钠盐溶液的pH值控制为8.0～10.0；优选地，调节所述钠盐溶液的pH值所使用的pH调节剂为Na2HPO4；
任选地，所述稀释剂为钠盐溶液；
优选地，所述钠盐选自NaNO3、NaCl中的至少之一；
优选地，所述钠盐溶液中的钠盐浓度为0.01～0.2M；
任选地，所述凝胶色谱排阻法检测中采用的检测器包括激光散射仪和示差折光检测器；
任选地，所述凝胶色谱排阻法检测中采用的流动相流速为0.5mL/min～0.7mL/min；
优选地，所述凝胶色谱排阻法检测中采用的柱温为30～50摄氏度；
任选地，所述步骤1)中，在所述含有所述化学品的样品用稀释剂处理前，对所述含有所述化学品的样品进行浓缩处理；
优选地，所述浓缩处理包括冷冻干燥、蒸馏中的一种或两种；
任选地，所述待测溶液中OP-40的浓度为2mg/ml以上，优选为2～3mg/ml；
任选地，所述待测溶液中聚维酮的浓度为10～20mg/ml；
任选地，所述待测溶液中聚氧乙烯氢化蓖麻油的浓度为40～60mg/ml。
9.水溶性GPC色谱柱在分离检测OP-40、聚维酮和聚氧乙烯氢化蓖麻油中的两种或三种物质中的用途。
10.水溶性GPC色谱柱在检测环孢素药物制剂的用途。
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