CN104523592B

CN104523592B - 甲泼尼龙醋酸酯注射用自微乳制剂及其制备方法

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Publication number: CN104523592B
Application number: CN201510038626.6A
Authority: CN
Inventors: 张迎庆
Original assignee: Hubei University of Technology
Current assignee: Hubei University of Technology
Priority date: 2015-01-26
Filing date: 2015-01-26
Publication date: 2017-03-15
Anticipated expiration: 2035-01-26
Also published as: CN104523592A

Abstract

本发明涉及一种甲泼尼龙醋酸酯注射用自微乳制剂及其制备方法。本发明甲泼尼龙醋酸酯注射用自微乳制剂，包含以下质量百分数的组分：0.5%‑2.5%的甲泼尼龙醋酸酯、1%‑40%的助表面活性剂、40%‑90%的表面活性剂以及5%‑35%的油相；将上述质量百分数的组分混合混匀，搅拌至澄清，然后加入0.05‑0.1wt%的活性碳，40℃回流吸附30‑60min，然后用0.22µm微孔滤膜过滤除菌，无菌灌装，即得甲泼尼龙醋酸酯注射用自微乳制剂。临用前将甲泼尼龙醋酸酯注射用自微乳制剂加入到0.9%NaCl生理盐水或5%葡萄糖注射液中形成微乳。本发明所得甲泼尼龙醋酸酯注射用自微乳制剂透明澄清稳定，自乳化效率高，制备方法操作简单，产品质量稳定，安全可靠。

Description

甲泼尼龙醋酸酯注射用自微乳制剂及其制备方法

技术领域

本发明属于医药领域，涉及一种甲泼尼龙醋酸酯注射用自微乳制剂及其制备方法。

背景技术

甲泼尼龙是一种人工合成的不含卤素的中效糖皮质激素，具有抗炎、免疫抑制、抗过敏、抗休克等药理作用。甲泼尼龙及其酯类在临床上广泛应用于呼吸道疾病、风湿性疾病、内分泌失调、皮肤病、血液疾病、过敏状态、胃肠道疾病、神经系统疾病及器官移植等，目前主要用于脏器移植。与其它糖皮质药物相比，该类药物具有在体内可迅速达到较高的血药浓度、疗效确切，副反应轻微，病人一般可以耐受，特别是危重病人。目前国内外市售制剂有3种，分别是甲泼尼龙片、甲泼尼龙醋酸酯混悬注射液(局部注射)及注射用甲泼尼龙琥珀酸钠。甲泼尼龙醋酸酯是甲泼尼龙的醋酸酯化物，其化学名为6a-甲基泼尼松龙醋酸酯，甲泼尼龙醋酸酯为难溶性药物，存在生物利用度低、起效慢、不能静脉注射等问题，因而甲泼尼龙醋酸酯的增溶问题是其临床应用中存在的一个重要问题。现有技术是将其制备成混悬注射剂，但存在的问题是药物溶解度依然很低，分解缓慢，只能肌肉注射或关节腔注射，不能静脉注射；另外同类产品有将甲泼尼龙制备成的甲泼尼龙琥珀酸酯钠，为水溶性，可供肌注或溶于葡萄糖液静脉滴注。但甲泼尼龙醋酸酯安全性更好(甲泼尼龙醋酸酯(大鼠口服LD₅₀10g/kg)，甲泼尼龙琥珀酸酯钠(大鼠口服LD₅₀5g/kg))。因而探索解决甲泼尼龙醋酸酯的增溶问题的新技术和方法很有必要。

微乳作为一种新型的药物制剂，由油相、水相、表面活性剂和助表面活性剂在一定比例下自发形成的，它是一种透明或者半透明、粘度低下、热力学性质稳定、各向同性的液体体系。该种制剂体系的粒径较小，且分布较均匀，常为10-100nm。由于微乳液滴的粒径小于血红细胞，粘度较低，可直接注射，同时具有一定的靶向特性，可降低药物的毒性，常用于难溶性药物的注射给药。因而微乳作为药物载体，特别是在注射给药方面越来越受到医药工作者的青睐。就微乳制备方法而言，相较于高压均质或其它机械法，采用自乳化法制备微乳所需实验设备简单，操作方法方便，同时也具有粒径小、均匀稳定等优点。自微乳给药系统(self-microemulsifying drug delivery system，SMEDDS)是由油、表面活性剂和助表面活性剂或少量水组成的均一透明溶液，可作为疏水性、难吸收或易水解药物的载体，遇水后可自动形成微乳溶液。自微乳技术已被用于多种难溶药物的增溶，主要制备各种难溶药物口服自微乳制剂，因为注射剂对辅料的要求较高，而且自微乳体系中表面活性剂等辅料含量相对较高，符合工艺要求的安全低毒的辅料的选择是其难点，因而注射用自微乳制剂报道相对较少。

目前国内外均尚未见到有关甲泼尼龙醋酸酯注射用自微乳制剂及制备方法的报道。

发明内容

本发明解决的关键问题是探索增加甲泼尼龙醋酸酯的溶解性的方法，制备成可供静脉注射用制剂，提高其生物利用度，改善现有技术产品甲泼尼龙醋酸酯混悬注射液起效慢，不能用于静脉注射的缺点，拓展甲泼尼龙注射制剂新品种。本发明在现有技术的基础上，从符合注射剂的要求的安全性高，毒副作用低的注射级别的辅料中选择，确定甲泼尼龙醋酸酯自乳化制剂处方及其制备方法，本发明可将甲泼尼龙醋酸酯制备成透明澄清的遇水可无限稀释的自微乳液，临用前在生理盐水或葡萄糖溶液中稀释，将自动形成微乳溶液，可用于静脉注射给药。本发明制备所得的甲泼尼龙醋酸酯注射用自微乳制剂大大增加了主药甲泼尼龙醋酸酯的溶解度，起到了意想不到的效果。

本发明甲泼尼龙醋酸酯注射用自微乳制剂，由难溶性药物甲泼尼龙醋酸酯、油相、表面活性剂和助表面活性剂混合组成。临床应用前将其加入到0.9％NaCl生理盐水或5％葡萄糖注射液中形成微乳。

一种甲泼尼龙醋酸酯注射用自微乳制剂，包含以下质量百分数的组分：

所述的油相为注射用级别的油酸乙酯、十六酸异丙酯(IPP)、肉豆蔻酸异丙酯(IPM)中的一种或几种的混合物。

所述的表面活性剂为注射用级别的聚乙二醇12羟基硬脂酸酯15(Solutol HS15)、吐温-80、聚氧乙烯醚40氢化蓖麻油(Cremophor RH 40)、聚氧乙烯醚35蓖麻油(Cremophor ELP)、泊洛沙姆(Pluronic F68)中的一种或几种的混合物；

所述的助表面活性剂为注射用级别的聚乙二醇400(PEG-400)、聚乙二醇200(PEG-200)、无水乙醇、1,2-丙二醇中的一种或几种的混合物。

一种制备上述甲泼尼龙醋酸酯注射用自微乳制剂的方法，包括以下步骤：

(1)将上述质量百分数的组分混合均匀，搅拌至澄清，即得甲泼尼龙醋酸酯自乳化体系；

(2)向甲泼尼龙醋酸酯自乳化体系中加入0.05-0.1wt％的活性碳，40℃回流吸附30-60min，然后用0.22μm微孔滤膜过滤除菌，无菌灌装，即得甲泼尼龙醋酸酯注射用自微乳制剂。

一种甲泼尼龙醋酸酯注射用微乳的制备方法，包括以下步骤：将述的甲泼尼龙醋酸酯注射用自微乳制剂加入到0.9％NaCl生理盐水或5％葡萄糖注射液中，混合均匀，即得到甲泼尼龙醋酸酯注射用微乳。

本发明所得甲泼尼龙醋酸酯注射用自微乳制剂澄清均一透明稳定，自乳化效率高，可在90秒内完全自乳化，加入到0.9％NaCl生理盐水或5％葡萄糖注射液中所形成的甲泼尼龙醋酸酯注射用微乳。透射电镜观察所形成的微乳呈圆球状，且分布均匀；pH为5.31(±0.15)，粘度为3.65(±0.15)mp.s，折光率为1.3489(±0.011)，电导率为3.01(±0.1)μs/cm，平均Zeta电位为-4.79mV；平均粒径为11.48nm。

透析袋扩散法研究甲泼尼龙醋酸酯注射用微乳体外释放行为，结果显示，其释放规律均符合Higuchi方程。

甲泼尼龙醋酸酯注射用微乳的大鼠体内药动学研究结果显示，甲泼尼龙醋酸酯注射用微乳大鼠心内给药后的最大血药浓度是171.89μg/mL，表观分布容积V为0.2509L/kg、清除率CL为0.0408mL/min·kg，药时曲线下面积AUC为684.58min·μg/mL。药动学各参数与参比制剂甲泼尼龙琥珀酸钠注射液无显著差异。

通过溶血性试验对甲泼尼龙醋酸酯注射用微乳的安全性进行初步评价，结果显示各浓度组均无溶血现象。

本发明甲泼尼龙醋酸酯注射用自微乳制剂的制备方法具有操作简单，产品质量可控性强，安全可靠的优点。

附图说明

图1为本发明制备的甲泼尼龙醋酸酯注射用微乳的透射电镜图。

图2为本发明制备的甲泼尼龙醋酸酯注射用微乳体外释放曲线图。

图3为本发明制备的甲泼尼龙醋酸酯注射用微乳与对照品甲泼尼龙琥珀酸钠注射液体内血药浓度-时间曲线图。

具体实施方式

下面结合实施例及附图对本发明做进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。实施例1

处方：

制备工艺：

将甲泼尼龙醋酸酯溶于无水乙醇中，再加入Solutol HS15和油酸乙酯，搅拌混合混匀至澄清，即得甲泼尼龙醋酸酯自乳化体系。

上述溶液中加入相当于甲泼尼龙醋酸酯自乳化体系0.05wt％的针用活性碳，40℃回流吸附30min，经0.22μm微孔滤膜过滤，无菌灌装，即得甲泼尼龙醋酸酯注射用自微乳制剂。

实施例2

处方：

制备工艺：

将甲泼尼龙醋酸酯溶于中1,2-丙二醇和Solutol HS15混合溶液，再加入IPM，搅拌混合混匀至澄清，即得甲泼尼龙醋酸酯自乳化体系。

上述溶液中加入0.08wt％的针用活性碳，40℃回流吸附45min，经0.22μm微孔滤膜过滤，无菌灌装，即得甲泼尼龙醋酸酯注射用自微乳制剂。

实施例3

处方：

制备工艺：

按上述配方将甲泼尼龙醋酸酯溶于IPM中，再加入无水乙醇和Cremophor RH 40，搅拌混合混匀至澄清，即得甲泼尼龙醋酸酯自乳化体系。

上述溶液中加入0.05wt％的针用活性碳，40℃回流吸附60min，经0.22μm微孔滤膜过滤，无菌灌装，即得甲泼尼龙醋酸酯注射用自微乳制剂。

实施例4

处方：

工艺：

将甲泼尼龙醋酸酯溶于无水乙醇和PEG400的混合溶液中，再加入Solutol HS15，Cremophor RH 40，肉豆蔻酸异丙酯(IPM)，十六酸异丙酯(IPP)和油酸乙酯，搅拌混合混匀至澄清，即得甲泼尼龙醋酸酯自乳化体系。

上述溶液中加入相当于甲泼尼龙醋酸酯自乳化体系0.1wt％的针用活性碳，40℃回流吸附50min，经0.22μm微孔滤膜过滤，无菌灌装，即得甲泼尼龙醋酸酯注射用自微乳制剂。

实施例5

处方：

制备工艺：

将甲泼尼龙醋酸酯溶于PEG200和1,2-丙二醇的混合溶液中，再加入SolutolHS15，Cremophor RH 40，泊洛沙姆(Pluronic F68)，吐温-80，肉豆蔻酸异丙酯(IPM)和油酸乙酯，搅拌混合混匀至澄清，即得甲泼尼龙醋酸酯自乳化体系。

上述溶液中加入相当于甲泼尼龙醋酸酯自乳化体系0.05wt％的针用活性碳，40℃回流吸附60min，经0.22μm微孔滤膜过滤，无菌灌装，即得甲泼尼龙醋酸酯注射用自微乳制剂。

实施例6

处方：

制备工艺：

将甲泼尼龙醋酸酯溶于无水乙醇和PEG200的混合溶液中，再加入Solutol HS15，Cremophor ELP，吐温80和肉豆蔻酸异丙酯(IPM)，搅拌混合混匀至澄清，即得甲泼尼龙醋酸酯自乳化体系。

上述溶液中加入相当于甲泼尼龙醋酸酯自乳化体系0.1wt％的针用活性碳，40℃回流吸附40min，经0.22μm微孔滤膜过滤，无菌灌装，即得甲泼尼龙醋酸酯注射用自微乳制剂。

实施例7

处方：

制备工艺：

按上述配方将甲泼尼龙醋酸酯溶于油酸乙酯中，再加入无水乙醇，1,2-丙二醇，Solutol HS 15和Cremophor RH 40，搅拌混合混匀至澄清，即得甲泼尼龙醋酸酯自乳化体系。

上述溶液中加入相当于甲泼尼龙醋酸酯自乳化体系0.09wt％的针用活性碳，40℃回流吸附30min，经0.22μm微孔滤膜过滤，无菌灌装，即得甲泼尼龙醋酸酯注射用自微乳制剂。

实施例8

处方：

制备工艺：

将甲泼尼龙醋酸酯溶于油酸乙酯和十六酸异丙酯(IPP)混合溶液中，再加入Solutol HS15，Cremophor ELP，泊洛沙姆(Pluronic F68)，Cremophor RH 40，吐温-80和无水乙醇，搅拌混合混匀至澄清，即得甲泼尼龙醋酸酯自乳化体系。

上述溶液中加入相当于甲泼尼龙醋酸酯自乳化体系0.07wt％的针用活性碳，40℃回流吸附30min，经0.22μm微孔滤膜过滤，无菌灌装，即得甲泼尼龙醋酸酯注射用自微乳制剂。

性能试验

将实施例1制备的甲泼尼龙醋酸酯自微乳制剂进行如下实验:

包括：甲泼尼龙醋酸酯自微乳制剂的外观及类型判断，自乳化效率考察，自微乳制剂的稳定性考察，以及在生理盐水或5％葡萄糖溶液中稀释所形成的甲泼尼龙醋酸酯注射用微乳的性质考察，体外释放研究、体内药物动力学研究以及溶血性试验。并得到具体实验数据结果如下：

(1)甲泼尼龙醋酸酯自微乳制剂的外观及类型判断

肉眼观察：甲泼尼龙醋酸酯自微乳制剂为澄清透明无色液体，轻轻晃动时流动性较好。用生理盐水稀释后有淡蓝色乳光，并可无限稀释。

取适量甲泼尼龙醋酸酯自微乳制剂，在转速4000rpm下离心10min，离心后，该体系不分层，颜色、澄清度等均无变化，此体系为自乳化体系。

取适量甲泼尼龙醋酸酯自微乳制剂，同时加入适量油溶性染料苏丹红和水溶性染料亚甲基蓝，静置观察，发现苏丹红在体系中的扩散速度明显小于亚甲基蓝在该体系中的扩散速度，故判断该自乳化体系为水包油(O/W)型自乳化体系。

(2)甲泼尼龙醋酸酯自微乳的自乳化效率考察

用自乳化效率表示加水后自乳化体系形成微乳的能力。本研究用自乳化时间和透光率来表示自乳化效率。

①自乳化时间：

取甲泼尼龙醋酸酯自微乳各1g，分别加入不同量的生理盐水，稀释至浓度为1％(w/w)、2％(w/w)、3％(w/w)、4％(w/w)、5％(w/w)，磁力搅拌，速度为50rpm。观察并记录从加生理盐水到稀释至肉眼观察乳化完全的自乳化时间。

表1 不同浓度下自乳化体系的自乳化时间

由表1可知，自乳化体系的浓度越小，自乳化的时间越短。但不同浓度下自乳化的时间均较短，说明不同浓度下该体系自乳化效率均较高。

②透光率：

取甲泼尼龙醋酸酯自微乳各1g，分别加入不同量的生理盐水，稀释至浓度分别为1％(w/w)、2％(w/w)、3％(w/w)、4％(w/w)、5％(w/w)，分别在0.5min、1min、1.5min、2.0min、3.0min时各取样3mL，用紫外分光光度计在254nm处测定透光率。

当体系自乳化完全后，溶液的外观为澄清透明，透光率比较高，故当透光率停止变化时，即代表该体系已乳化完全，达到平衡过程。透光率越高即表明该溶液浊度越低，从而证明该自乳化的乳化程度越高。

表2 不同浓度下自乳化体系的紫外透光率

由表2可知，不同浓度下在90s以后透光率的变化均较小，故不同浓度的注射用微乳均在90s内自乳化完全，说明不同浓度下该体系的自乳化效率均较高。

(3)甲泼尼龙醋酸酯自微乳稳定性考察

①甲泼尼龙醋酸酯自微乳灭菌稳定性考察

取甲泼尼龙醋酸酯自微乳各1g，置西林瓶中轧盖，在121℃、0.1kpa条件下灭菌20min，高效液相色谱法测甲泼尼龙醋酸酯含量及有关物质含量，观察灭菌稳定性。

表3 甲泼尼龙醋酸酯自微乳灭菌稳定性试验结果

由表3可知，灭菌后有关物质显著升高，即高温灭菌使物质分解，产生较多杂质，说明甲泼尼龙醋酸酯自微乳不适宜用高温灭菌。

②甲泼尼龙醋酸酯自微乳影响因素实验

取甲泼尼龙醋酸酯自微乳各1g，分别置于高温40℃、60℃、湿度95％、光照4500±500lx的条件下保存。在第0天、5天、10天分别取样测定甲泼尼龙醋酸酯含量及有关物质含量。

表4 甲泼尼龙醋酸酯自微乳影响因素实验结果

由表4可知，保存5天时，温度较高会使自微乳主药甲泼尼龙醋酸酯含量下降，10天后在高温及光照下保存，药物含量均相应减少，在湿度较大的情况下，药物分解也较明显，有关物质含量增多。故甲泼尼龙醋酸酯自微乳应避光，低温保存，贮存环境湿度不宜过大。

(4)甲泼尼龙醋酸酯注射用微乳的性质考察

取甲泼尼龙醋酸酯自微乳制剂各1g，分别加入不同体积的0.9％NaCl生理盐水，稀释至浓度为1％(w/w)、5％(w/w)、10％(w/w)、15％(w/w)、20％(w/w)，搅拌均匀，自微乳体系自发形成不同浓度甲泼尼龙醋酸酯注射用微乳。

①甲泼尼龙醋酸酯自微乳制剂的稀释稳定性考察

静置观察上述稀释所得微乳溶液的稳定时间。

表5 醋酸甲泼尼龙自微乳的稀释性实验结果

由表5可知，当甲泼尼龙醋酸酯注射用微乳的浓度>5％(w/w)时，该稀释液的稳定时间<4h，即在4h以内，溶液底部浑浊，出现白色沉淀，不符合注射液的质量要求。故甲泼尼龙醋酸酯自微乳制剂在临床使用时，稀释倍数应大于20倍。

②甲泼尼龙醋酸酯注射用微乳溶液性质测定

测定所形成注射用微乳溶液的pH值、粘度、折光率、电导率、Zeta电位值。

表6 不同浓度下注射用微乳的溶液性质

由表6可知，不同浓度的注射用微乳稀释液pH变化不大，均满足注射液的要求。测得水的粘度为3.5mp.s，不同浓度的注射用微乳稀释液粘度变化较小，并且都与水接近，说明各种浓度的注射用微乳稀释液粘度都较小，注射时不至于引起疼痛，满足注射液的要求。

用纯水校正折光率为1.3337，由表6可知，不同浓度的注射用微乳折光率变化较小，并且均与纯水的折光率接近。水的电导率为0.969μs/cm。由表6可知，不同浓度的注射用微乳电导率变化较小。随着含水量的减小，Zeta电位呈逐渐下降的趋势，但规律性不明显，即自身的电排斥力对微乳的稳定性影响不大。

③甲泼尼龙醋酸酯注射用微乳的的形态观察

采用透射电镜法观察微乳粒子形态。取甲泼尼龙醋酸酯自微乳适量,用生理盐水稀释后得到浓度为2％(w/w)的甲泼尼龙醋酸酯注射用微乳，把铜网放置在蜡版上，用滴管加两滴2％(w/w)的甲泼尼龙醋酸酯注射用微乳，晾干，然后再加1滴2wt％磷钨酸(用NaOH调至pH为7.4)于蜡版上，负染30min，即将晾干的铜网倒置在染液中，用蒸馏水冲洗干净然后吸干，透射电镜观察。如图1所示，甲泼尼龙醋酸酯注射用微乳乳滴为圆球状，且乳滴大小均匀，分布较均匀。

④甲泼尼龙醋酸酯注射用微乳的粒径及其分布

取甲泼尼龙醋酸酯自微乳各1g，分别加入不同量的生理盐水，稀释至浓度为1％(w/w)、2％(w/w)、3％(w/w)、4％(w/w)、5％(w/w)，得到不同浓度的注射用微乳溶液，用Zetasizer Nano纳米粒度仪测得其粒径大约为11-12nm。

表7 不同浓度下注射用微乳的粒径

(5)甲泼尼龙醋酸酯注射用微乳体外释放研究

取1.015g甲泼尼龙醋酸酯自微乳置于10mL容量瓶中，用生理盐水稀释至刻度，混匀即得到甲泼尼龙醋酸酯注射用微乳(含甲泼尼龙醋酸酯1.5mg/mL)。

分别精密量取以上溶液1mL置于透析袋中，立即扎紧，置于100mL 37℃的释放介质中，保持100rpm的速度恒温振荡。分别于15min、20min、30min、45min、60min、90min、120min、240min、360min、480min后不在溶出杯中取出0.5mL溶液，并补充相同体积的释放介质，取出的样液用高效液相法测定药物含量，并计算药物溶液的累积释放百分率。结果见图2。

以不同的模型(零级动力学方程、一级动力学方程、weibull方程、Higuchi方程)对自微乳制剂的释放规律进行考察。

表8 自微乳制剂体外释放规律

由表8可知，醋酸甲泼尼龙注射用微乳的释放规律符合Higuchi方程。

(6)甲泼尼龙醋酸酯注射用微乳体内药物动力学研究

给药方案方法：

体重为200g左右的SD雌性大鼠，在实验前12h禁食，可饮水，采用随机分组的原则，分成3组，每组3只。心脏注射给药，股动脉取血。给药量分别为：

第一组(空白对照)：0.70mL生理盐水

第二组(参比对照)：0.70mL甲泼尼龙琥珀酸注射液(含药5.00mg)

第三组(给药组)：0.70mL醋酸甲泼尼龙注射用微乳(含药5.00mg)

样品采集方法：

分别于给药前及给药后10min、20min、30min、45min、1h、2h、4h、8h、12h股动脉取血0.3-0.5mL，置于含有抗凝剂肝素钠(10mg/mL)的离心管中，离心10min(10000rpm)，分离出血清，将血浆保存于-20℃的冰箱内待测。

给药后体内药动学过程结果：

将血药浓度数据用药物代谢动力学方程进行拟合处理，其药物代谢动力学过程更符合二房室模型。大鼠静脉注射甲泼尼龙醋酸酯微乳及对照品甲泼尼龙琥珀酸钠后，两种药物的体内血药浓度-时间曲线见图3。

表9 注射用微乳与对照注射剂药动学参数结果

注：A——分布相回归曲线参数

B——消除相回归曲线参数

α——药物在体内分布的表观一级混合速率常数

β——药物消除的表观一级混合速率常数

T_1/2α——在二室模型分布相的半衰期

T_1/2β——在二室模型消除相的半衰期

V——表观分布容积

K₂₁——外周室向中央室的一级转运速率常数

K₁₂——中央室向外周室的一级转运速率常数

K₁₀——从中央室消除的表观一级速率常数

AUC——药-时曲线下面积

CL——总清除率

经分析，两种制剂在体内的清除方式均与二室开放模型相似。甲泼尼龙醋酸酯注射用微乳给药后的最大血药浓度是171.89μg/mL，二室的半衰期分别为T_1/2α＝0.3716min及T_1/2β＝49.856min，表观分布容积V为0.2509L/kg、清除率CL为0.0408mL/min*kg，药时曲线下面积AUC为684.58min*μg/mL。与对照品甲泼尼龙琥珀酸钠注射液的药动学参数相比，无显著性差异。

(7)甲泼尼龙醋酸酯注射用微乳溶血性实验

取1g自微乳用0.9％NaCl生理盐水稀释得到2％(w/w)的甲泼尼龙醋酸酯注射用微乳。

取新鲜大鼠血液10-15mL，除去血红蛋白，再用10mL生理盐水冲洗3～5遍，每次用离心机离心(转速10000rpm)除去上清液，直至上清液不呈红色。按所得红细胞量用生理盐水配制成2％(w/w)的混悬液，取7只试管，1～5号管为供试组，6号管为阴性对照，7号管为阳性对照。加入各种溶液，摇匀后放置在37℃的恒温箱中观察。分别于0.5h、1h、2h、3h、5h观察管内溶液变化，并记录。

溶血性试验表明，在不同浓度下，加药组1～5管在5个小时内均无溶血现象发生，上层清液无色透明，下层红细胞与上层清液界面清晰，表明未发生溶血。6管阴性对照组未溶血，7号管阳性对照组有溶血情况。表明甲泼尼龙醋酸酯注射用微乳无溶血性。

表10 溶血性试验加样表

“－”代表不加样。

表11 溶血性试验结果

注：“－”表明未溶血，“+”表明溶血。

上面对本发明的实施方式作了详细说明，但是本发明比并不限于上述实施方式，在本领域的普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明宗旨的前提下做出各种变化。

Claims

1.一种甲泼尼龙醋酸酯注射用自微乳制剂，其特征在于，包含以下质量百分数的组分：

所述的助表面活性剂为注射用级别的聚乙二醇400、聚乙二醇200、甘油、无水乙醇、1,2-丙二醇中的一种或几种的混合物；

所述的表面活性剂为注射用级别的聚乙二醇12羟基硬脂酸酯15、吐温-80、聚氧乙烯醚40氢化蓖麻油、聚氧乙烯醚35蓖麻油、泊洛沙姆中的一种或几种的混合物；

所述的油相为注射用级别的油酸乙酯、十六酸异丙酯、肉豆蔻酸异丙酯中的一种或几种的混合物。

2.一种制备权利要求1所述的甲泼尼龙醋酸酯注射用自微乳制剂的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将权利要求1所述质量百分数的物质混合均匀，搅拌至澄清，即得甲泼尼龙醋酸酯自乳化体系；

3.一种甲泼尼龙醋酸酯注射用微乳，其特征在于，由以下制备方法制备得到：将权利要求1所述的甲泼尼龙醋酸酯注射用自微乳制剂加入到0.9％NaCl生理盐水或5％葡萄糖注射液中，混合均匀，即得到甲泼尼龙醋酸酯注射用微乳。